Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:СХЕМА ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БЦЖ И ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ БЕСКЛЕТОЧНОЙ ВАКЦИНЫ



На правях рукописи

НОВИКОВ Артем Николаевич

СХЕМА ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БЦЖ И ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ БЕСКЛЕТОЧНОЙ ВАКЦИНЫ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, »лнзоотологня, микология с миквтоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата 'ветеринарных наук

Омск - 2003

Работа выполнена в отделе туберкулеза Всероссийского научно - исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных, секторе иммунитета и специфической профилактики туберкулеза

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук.

старший научный сотрудник Пажнн Михаил Лристоклевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Трофимов Игорь Георгиевич

Ведущая организация: Уральская государственная академия ветеринарной медицины (г. Троицк)

Зашита состоится « 25 » декабря 2003 г. в « 10 » часов на заседании диссертационного совета Д.220,050,03 при институте ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета по адресу: 644007, г. Ом*-ул. Октябрьская, 92.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке вуза.

доктор медицинских наук Рудаков Николай Викторович

Ученый секретарь .

днссетггационнот совета / Н.П. Жабнн

¡.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Значительный экономический ущерб, наносимый туберкулезной иифекшей скотоводству, социальные проблемы зооантропонозно-го заболевания присолит к острой необходимости специфической защиты жилетных и охране здоровья людей. Применение вакцины БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий позволяет сократи. с|юкноздоровлс-ния ферм с меньшими затратами, однако при этом создаются определенные ' трудности (длительные постаюwнальи ые реакции па взрослом' скоте и, как следствие - использование вакцины только на новорожденных телятах). Отсутствие перманентного противотуберкулезного иммунитета в стадах крупного t рогатого скота осложняет профилактику и оздоровление ферм, а также' увеличивает материальные затраты. Псе это создает предпосылки к значительной потребности на рынке новых методов и средств для предупреждения заболеванием животных туберкулезом и с меньшими материальными затратами оздоровления неблагополучных ферм (М.А. Клебанов, 1946; В.И. Покровский и др. 1979; Л.Е. Рабухин, 1983; М.Л. Бажин, В.В. Шамов, 2000). "

Действующие нормативные акты признают тотальную замену неблагополучного по туберкулезу поголовья здоровыми животными как метод, наиболее -полно отвечающим принципам управления эпизоотическим процессом в зонах приуроченности. Однако, использование даже столь радикального чегода оздоровления в условиях стационарно неблагополучных пунктов оказалось недостаточно эффектипным (В.П. Урбан, 1973; В. iL Урбан, П.С. Уласевич, B.F-. Щу-ревский, 1980; Г.Ф. Коромыслов, 1982; A.C. Тарасов, Т.Я. Яковлева, A.C. Дон-ченко, 1986; Ю.И. Смолянннов, H.H. Кощеев, 2001).

В настоящее время применение протектнвных экологически безопасных мо-' пекулярных вакпин против инфекционных болезней является общепризнанной.'1 ' Включение в систему специфической'профилактики туберкулеза животных* , молекулярных вакцин, поствакцинальные аллергические реакции поазе введс-" .' иия которых, прекращаются через три месяца, являются актуальными. ' ^

Одной m таких вакцин является ТБЦМ, разработанная во ВНИИБТЖ (МА. Пажии, И .В. Шамов, 2000). Результаты исследований по разработке технологии изготовления препарата и испытанию его реакгогеиных и иммуногенных свойслп на лабораторных животных и молодняка крупного рогатого скота убе- * ждакгг о возможности разработки новой схемы, а затем системы специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота.

Цел), н залами исследований Цель - разработать схему специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с применением БЦЖ и туберкулезной бесклеточной вакцины на целлюлозной матрице (ТБЦМ). Для достижения цели поставлены следующие задачи: ' - изучить клеточные реакции у молодняка крупного рогатого скота на введение БЦЖ н бесклеточной вакцины ТБЦМ; * '.*

- изучить клеточные реакции у коров на введение 6е1-нлешчисШ вакцины

ТБЦМ. ранее привитых БЦЖ; WCXA^

литерзгур^

NC.

- изучить взаимосвязи в системе иммунитета молодняка крупной» рогатого скота и коров, привитых ВЦЖ и Gec клеточной вакциной ТБЦМ;

- испытал, схему специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота и определить ее протнвоэни логическую эффективность.

Научная нопщна. Впсргше разработаны условия применения туГ>еркулечной бесклеточнпй вакцины на целлюлозной матрице; в сочетании с fitptC на крупном рогатом скоте к дана оценка иммунного статуса животным на основе взаимосвязей в системе иммунитета.

Предлагаемая схема специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота позволяет создавать у жнаошых перманентный нротективный иммунитет, 'гго уменьшит сроки оздоровления ферм и снижать риск реинфск-ции в оздоровленных стадах.

Теоретическая значимость и практическая цепкость работы. Разработаны рекомендации «Методы оценки противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота, привитого БЦЖ, на основе взаимосвязей в системе иммунитета» (Утв. Ученым советом ВНИИБТЖ, протокол 14 от 28.11.2002 г. и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РЛСХН, протокол № 5 от 10 января 2003 г. .

Материалы по разработке схемы специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с использованием БЦЖ и бесклеточной вакцины ТБЦМ, рассмотрены н одобрены НТС Главного управления сельского хотяйст-ва администрации Омской области, протокол № 6 от 29.11.2002 г. Разработано временное наставление по сопетанному применению БЦЖ и туберкулезной бескл сточной вакпины на целлюлозной матрице (ТПЦМ) ири туберкулезе крупного рогатого скога (Утв. Ученым советом ВНИИБТЖ, п|ютокол №3 от 18 ноября 2003 г.1).-. .; . " : <

По результатам работы получена нриоршетая справка на изобретение «Способ оценки иммунитета» № 2003101186 от 21января .2003 г. и уведомление о положительном результате формальной экспертизы № 2003101186/14(0011S<1) от б июня 2003 г. t,

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции .Омского государственного аграрного университета (2001), заседаниях Ученого совета Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных (Омск, 2000-2003), Всероссийской научной» конференции по проблемам- хронических инфекций (Омск, 2001), Международной .научно-практической< конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулеза животных» (Москва, 7-8 октября 2003). ...

Публикации материалов исследований. По материалам лиссертацик опубликовано 6 научны* статей. . ■ '

Объем и структура диссертации. Работа изложена на. 119 страницах компьютерного набора и. включает: введение, обзор литературы, собственные исследования,, обсуждение полученных результатов, вы полы, практические прел-

ложен ия к приложение. Список литературы включает 249 источи и коп. в том числе отсчесгпеинмх и 51 -»рубежных акторов. Диссертация иллюстриро-панл 1(> >аблннями, 2 рисунками.

На защиту выносится:

1. Материалы но разработке схемы специфической профилактики туберкулеза крупнот рогатого скот с использованием БЦЖ н бесклеточной вакцины ТБЦМ,

2. М.исриалы но тушению взаимосвязей в системе иммунитета у крупного рогатого скотп, привитого противотуберкулезными вакцинами.

2. СОБСТКЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИИ 2.1. Материалы и методы

Настояния работа им пол иена в отделе туберкулеза Всероссийского научно — исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных, секторе иммунитет и специфической профилактики туберкулеза и в хозяйствах Омской области в период 2000 — 2003 гг. по заданию НИР 02.01.08. «Разработать новые методы иммунологической зашиты животных на основе применения молекулярных препаратов и методов оценки иммунологических феноменов».

Материалом для исследования служила кровь молодняка крупного рогатого скопа, и стелен, коров из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства и хозяйством, с наложенным ограничением по туберкулезу.

Для иммунизации животных использовали-БЦЖ н туберкулезную бесклеточную вактшну на целлюлозной матрице (ТБЦМ), приготовленную но методу (М.Л. Бажин, П.В. П!амо», 2000; на способ полупения вакцины ТБЦМ принято решение ФИПС на выдачу патента от 22 мая 2003 гола). Для проведения аллергических исследований использовали ППД-туберкулим для млекопитающих.

В "работе использовались методы оценки Т- и В-систем иммунитета (МЛ. Бажни с соавг., 1989): количество Т-лимфошгтов в периферической крови определяли с помощью реакции спонтанного розеткообразования (Н-рок); лимфоцитов- киллеров - реакцией непрямого глобулинового розеткообрззования (ЕЛ-рок); П-лнм||юцитов - реакцией комплементарного ■ розеткообразоваиня (БЛС-рок); им чу некомпетентные клетки, распознающие антигены микобакге-рий, с почошмо ртсткообразоаания с эритроцитами быка, адсорбировавшими ППД-туберкулин (ЕТ-рок),

Окраску мазков крови, подсчет лейкоцитов и выведение лейкоцитарной формулы проводили по общепринятым методикам.

Анализ данных, полученных в экспериментальных исследованиях, проводи-. ли с помощью корреляционного н регрессионного анализов, а также дискретно-динамического анализа, сущность которого состоит в том, что исследуемую группу животных делят по значению одного из параметров, принятого в каче-

crec Gaincimiо, на три приблизительно равные по величине группе. В I входят животные с минимальными "»качениями базисного параметра, по II - с максимальными и г III - со средними значениями. В каждой подгруппе рассчитывают среднее значение остальных (вариабельных) пара метро п. В тех случаях, когда средние значения вариабельного параметра в подгруппах с минимальными и максимальными значениями базисного параметра достоверно различаются, констатируют наличие взаимосвязей между данными базисного и вариабельного на рам строп, Взаимосвязь положительна, если при увеличении базисного параметра уровень вариабельного также увеличивается; отрицательна, если при увеличении базисного параметра уровень вариабельного снижается.

В работе использованы две подгруппы - с минимальными и максимальными значениями, так как подгруппа со средними значениям!! существенно ис отражает взаимосвязь исследуемых параметров. Для оиенкн сущсстпспносш различий между л пум я средними величинам» Мх и Му использовали (•критерий но Сп.юде1пу (В.Ю.Урбах, 196-1; Л.Т.Усовнч, И.Т.Лебедев, 1070). Предотвращенный экономический ущерб определили по методике Ю.И, Смолянмнова (1992).

2.2. Клеточные реакции у телят, припиши БЦЖ и бсгклего'ШпН пакшшой Т!»ЦМ, неблагополучной по туберкулезу ферме

В ONX СнбМИС «Соснопское» (||>ерме Садовое), неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого стога, исследовали аллергической пробой <10 телят в'позрэсте 2-4 меся цеп. Часть нереагирующихнл ППД-туберкулнн тел яг припили вакциной Г>1(Ж внутрикожно п доте I мг и 0,2 мл растворителя, другую часть телят туберкулезной беекпеточной пзкцииой на целлюлозной матрице подхожно п дозе 5, мг белка на одно животное. По результатам кожной реакции на ППД^туберкулих через 45 дней после вакцинации но* принципу аналогов сформировали,-!,группы животных (по 5 животных в каждой); 1 — привитые ТБЦМ; 2привитые ВЦЖ, которые на 45 день после иммунизации ответили кожной реакцией на ППД-туберкулнн; 3 - привитие Н1(Ж, которые ис ответили кожной реакцией на Г1Г1 Д-ту беркулин; 4 — не привитые слуЪкишс в качестве контроля. Исследования кропи тсляг всех групп проводили до иммунизании, через 15,30.55,75 н МО дней после вакцинации.

Анализ клеточного состава кровн показал, что изменения количества клеток мало отличается у животных, привитых БЦЖ и бес клеточной вакциной Т!>ЦМ. На 15 день после вакцинации в кровн телят 1 группы резко,.по отношению к Koirrpano, снизилось содержание наиболее активных иммунокомнетстпых клеток (Р < 0,05). Кроме того, резкому снижению подвержено содержание ан-тигенреактипнмх лимфоцитов во 2 (1,16*0,24; 0,3 Ь 0,009; 1» « 0,008) и 3 группах (1,1610,24; 0,22-10,06; V - 0,01). — .

Через 55 дней после вакцинации установлена тенденция к снижению количества основных нм мунокпм негентних'клеток по сравнению с контролем. Так, с высокой степенью достоверности (I* < 0,05) отмечено снижение всех иммуно-компетентпмх клеток во 2 и 3 группах, за исключением Т-лнмфопитов в 3

группе, содержание которых увеличено, однако, не достиг лег достоверною различия. Кроме того, наблюдается уменьшение числа И- и антигенрежстивнык лим<{к>н)пов и 1 »руине (I' — 0,01).

Такая же закономерность отмечена к на 75деш» после в.зкнинашн!. Тлк, содержание Т-киллеров и а нтн ген реактивных лимфоцитов со рсех группах по отношению к контролю с высокой степенью достоверности уменьшается. Кроме того, наблюдается достоверное снижение (Г < 0,05) Т- и 1)-л именито в по 2 н 3 группах по отношению к контрольной группе.

Сл ело пат елки о, вакцина БЦЖ и бескл сточная вакцина ТБЦМ вызывают им-муиологические реакции в организме животных, которые проявляются в уменьшении числа и мадун о компетентных клеток а периферической крови тсляг на 15, 55 и 75 день после вакцинации.

2,3. Опенка иммунного статуса на основе взаимосвязей п системе иммунитета у рснмму нитрованного мплодника крупного рогатого скота на благополучной по туберкулезу ферме

В Учхозе ОчГДУ (<{>ермс Камыши но), благополучной но туберкулезу крупного рогатого скота, был реиммунюирован бесклсточнои вакциной ТБЦМ молодняк крупного рогатого скопи в количестве 153 животных и вакпииой БЦЖ 20 бычков через 8-10 месяцев после прививки в раннем возрасте вакциной БЦЖ согласно Наставлению по ее применению.

Все животные перед ревакцинацией не реагировали на ПИД-тубсркулнн. Исследования живолнлх, ревакцинироваиных ТБЦМ, аллергической реакцией через 45 дней поучали, что 85,5 % жшклцих (138) ответили умеренной кожной реакцией на П ПД-ту беркул и 11 (5,03 ±0,26 мм) и через 90 дней реагировало 37,9 % животных (4,54*0,22 мм). У части животных, нерсагнруюших через 45 дней, появились реакции через 90 дней. Все "животные, ревакцинированные БЦЖ, ответили реакцией нл 11ПД-туберкулин через 45 и 90 дней.

В крови 20 телок, ревакншшрованных Б1 (Ж, определили содержание нмму-нокомпетентных клеток. Аналогично было определено содержание иммуно-компетентных клеток в крови не рсваклиннропанных и реяакнинировэнных ТБЦМ телок. : •

У молодняка. |квлктшнировпиного БЦЖ, содержа!fис Т-лимфошттои изменяется несущественно (0,76*0,09; 0,83i0,l 1; Р-0,62). Отмечено достоверное снижение числа Н-лимфоцитов и Т-лимфоцитов с хиллерной активностью; (1М),03). Наблюдается снижение числа нейтрофилов у ревзкшншровшшых БЦЖ но отношению к не ревлкцнннрованным животным (1,5210,(9; 2,0510,21; 1^0,07). = ■ ' •

Число Т-, Tí-лимфошпов, Т-киллеров и антигенреакшвных лимфоцитов у животных, рсвакнииированных ТБЦМ, по отношению к не ревзкцинировлнной группе существенному изменению не подвергается.

Проведенный анализ показывает,' что ревакцинация ТБЦМ существенно не изменяет у животных количество основных форм лимфоцитов, тогда как ревак-

цинацня 51 [Ж вызывает умен мнение '(исла В-лимфоцитов и Т-киллсроп. 11 тем не менее полученные сведения об иммунном статусе ревэкниниропанного мололи яка крупного рогатого скот не ласт возможности оценить [кзпклинатор-НЫЙ э||и|)СКТ у животных. В спязи с зтпм были исследованы корреляционные связи иммунологических параметров у животных после рсвакшшашш.

У не репакнннированных животных отмечены положительные сильные и средние корреляционные связи. У животных, ревакпнннрованнмх 1>ЦЖ, наблюдается усиление корреляционных связей, которые преимущественно характеризуются как тесные .У животных, реадкнинированкмх бес клеточной вакциной ТВЦМ, несколько слабее, чем корреляционные связи животных, ре вакцинированных BI {Ж. •

В дош-неШпем провели дискретно-динамический анализ иммунологических параметров.

Изучение (¡фрагментов иммунной системы при выявлении сочетаний параметров в большинстве случаев с высокой степенью достоверности дало поз- , мож1 гость ли<|>>))ереш(нрованпого описания иммунного статуса у животных подопытных групп. У не ревахциннровзнных животных выявлено 11 пар сочетаний: при базисноч-Т-лимфоциты с вариабельными B-лимфоциты и антиген-реактивные лимфоциты; при. базисном B-лимфоциты с вариабельными Т-лимфоцнто, Т-киллеры и антигенреактивнне лимфоциты; при базисном Т-киллеры с вариабельными В-лимфоцнты, шггигенреактииные лимфоциты и нейтрофилы; при базисном антигенреактивные лимфоциты с вариабельными Т-н В-лн\«|кишты; при базисном нейтрофилы с вариабельным В-лнм((юниты.

У животных, рспакциннрованных БЦЖ, установлено 9 пар сочетаний: нрн базисном Т-лнмфоцкты с вариабельными В-лимфонигы и Т-киллерм; при базисном В- лимфоциты с вариабельными Т-киллеры и антигенреактивные лимфоциты; при базисном «Т-киллеры с вариабельным и iT-, B-лимфоциты ианти-генреактивные лимфоциты; при базисном ангнгенреахтн&ные лимфоциты с вариабельными П-лимфоцнты и Т-киллеры; при базисном нейтрофилы сочетаний пар достоверно различающихся (Р < 0,05) не установлено. ■ *

У животных, ревакннннрованных ТБЦМ, выявлено 5 пар сочетаний: при базисном Т-лим({юцнш с вариабельными В-лимфониты и нейтрофнлы; нрн базисном I}- лимфоциты с вариабельным Т-димфошггы; при базисном Т-кнллеры с вариабельным антигенреактивные лимфоциты; при базисном« антигенреак-тивные лимфоциты с вариабельным Т-кнллсры. .

Таким образом, результаты исследований иммунной^ системы у животных, опытных групп, с использованием дискретно-динамического анализа показали, что у телят, привитых БЦЖ в раннем возрасте, к Я месячному возрасту еше сохраняется иммунитет. Ревакцинация животных БЦЖ и ТБЦМ через 8 месяцев не вызывает усиления противотуберкулезного иммунитета. :.

С целью автоматизации дискретно-динамического анализа, а также исключения субъективизма в нем, был разработан пакет программ для.ЭВМ, включающий разделение ¡исследуемых жнвотаыхна лодгруплььс минимальным и максимальным значением параметров с установкой стабильности границ базн-

са. После зтого с «омогкыо программы проводите* статистическая обработка цифрового материала в пол группах, отбор значимых сочетаний параметров по ( -критерию Стьюдснта и построение дифференцналько-прогностических таблиц. Эти таблицы позволяют оценить участие отдельных иммунокомпетеитиых клеток в противотуберкулезном иммунитете или пригодность тех или других методов для определения клеючною иммунитета. '

У ис ревакцшшропянных животных отмечено 19 значимых сочетаний параметров, Например. В-лимфоциты в качестве базисного параметра с,высокой степенью достоверности осуществляет свою функцию с лейкоцитами, Т-л им фоцитами.Т-киллерам и и анти геирезктнвными лимфоцитами н п качестве вариабельного параметра взаимосвязаны с лейкоцитами, Т-лнмфотттямк, Т-киллерамн, антнгенрелктнвными лимфошгтачи и иейтрофилами.

У животных, ревакцин крова иных БЦЖ(табл. I), установлено 13 значимых сочетаний параметров, 10 из которых совпадаете сочетаниями у не ревакцини-рованных животных, Установлено 3 С9четаиия выявленных вновь (Т-кнллёры в качестве базисного параметра осуществляют с высокой степенью достоверности свою функцию с Т-лнмфоцнтами н в качестве вариабельного взаимосвязаны с Т-л им [¡тонн та ми и а 1тгн ген реактивны ми лимфоцитами.

Таблшп 1. Дифференциально-прогностическая таблица но оценке нмчушгтетл у телок, рсваюшннропанных Е1{Ж, тыс/мкл

А'г Ып Сочетание, юризбслмшП параметр (Олшс) п (-критерий по Стмодету Вариабельный Ваше

1 НАС-рок (1-Л-рок) 20 3,59 <0.20 <0. 18

2 ПА-рок (1-ЛС-рок) 3,22 <0. м <0, 20

3 1-Т-рок (НАГ-рок) 3,01 . <0,22 <0.20

4 ПЛО-рок (1~Г-ро*) 2,95 <0, 56 <0.22

5 НТ'рок (КА-ро*) 2,91 <«,28 <0. 18

6 НАС-рок (Е-рок) 2.73 <0,54' <0. 53.

7 НТ-ро* (леПммппы) • 2.6» <0,41 <6,70

8 Лейкоттд <11ЛС-рок) 2.59 <5.67 <0.20

9 (•Л'рок (ЕТ-рок) 2.58 , <0,46 . <0,22

10 ЛеПюшпыШГ-ГОк) 2.58 < 5(92 <0.22

П П-рпк (ЯЛ-рок) 2. 57 <0.60 ¿0. 1«

12 ЕЛ-ро* ^рок) 2.35 <0.55 <0,53

13 2,28 <0. 52 <6.70 ■

Коянчеспю нчиумж-пс ЖНМ1Л1МХ 9 ' . 45%

У животных, ревакцин и ровапних ТБЦМ (табл. 2), установлено 8 значимых сочетаний параметров, б из которых совпадает с сочетаниями у не ревакцини-рованных животных и 2 сочетания выявлено'вновь (Т-лнмфоииты в качестве базисного параметра взаимосвязаны с иейтрофилами и акгигенреакгивные лимфоциты п качестве базисного параметра взаимосвязаны с Т-киллерами).

• Тнблицп 2. Днффсреиниалыю-прогппстичсская таблица по оценке иммунитет у теяок, рсса кии пиропа и и их ТСЦМ, тыс/мкл

А'» и/п Сочетание, -плрилГ-сдыил! плрлчетр <(шмс) п •-критерий по Ст полету НвриаСмь-чмй Па »«с

1 ЕЛС-рок (Н-рок) 20 3. 84 <1,31 <0.50

2' Е-|ч>х (КЛС-рон) '3.02 <0, 44 < 1,38

3 11ейгрофилы (К-рок) - < 2,77 <1.06 <0, 50

4 Л еЛ *01 и п ы {[;- ро г) 2,69 <6,63 <0,50

5 ЕЛ-рок (ЕТ-рок) 2,67 <0.82 <0,25

6 ЕТ-ро1£(ЕЛ-ро*) 2,58 <0,30 <0,88

7 ЕАС'-рок (пеймшкты) 2.47 < 1.47

8 П-рок (леПкончтм) 2. 30 <0,61 <6, 20

Ктипсстю иммунных ЖНРОТМНЧ 9 * 45 %

В дальнейшем, используя значения базисного н вариабельного параметров дн4крсрсш шалы ю- прогностических та 5л и и, оценивали каждого животного неследуемой группы по всем значимым сочетаниям параметров. Кслн показатели числа кммуиокомпстснтнмх клеток животного соотъегствуют хотя бы одному из сочетаний (базисного, вариабельного) таблицы, такиежнвтние признаются с высокой актнпностмо иммунокомпетентных клеток. В этом случае животные могут противостоять естественному заражению туберкулезом в условиях неблагополучной фермы.- Например, по таблице 1 (группа.ревакцнпнровлнных БЦЖ животных) находят сочетание параметров; базис Т-киллеры (ВЛ-рок) -<0,18 и вариабельный В-лимфоцнты (ЕЛС-рок) - <0,20. Далее по этому сочетанию находят животных,.входящих в ншервалы колебаний иммунологических параметров (таких животных 4). Аналогичным способом проводят отбор животных но всем сочетаниям параметров и определяют 9 животных (45 %), способных противостоять заболеванию в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме.

Проводя налобный анализ не ревакииннрованных и рсвакциниропзнных ТБЦМ в лж|>фсревниально-прогн оста ческой таблице по оценке иммунитета, было установлено 40 % среди не ревакииннрованных и 45 % среди реидкнини-роваиных ТБЦМ животных с высокой активностью и мму но компетентных клеток.

По результатам исследований можно заключить, что ревакцинация через 810 месяцев перфективна. Защитные функции иммунной системы не были усилены, а у отдельных животных, ревакшшированных БЦЖ,- произошло снижение активности иммунных реакций, т.е. иммунитет, созданный первой вакцинацией, оставался еще достаточно напряженным и после' повторного введения препэрзтоо репакцикагорного эффекта не произошло."

2.4 Онгнкл нммунши о сглгуся на ог(юпс пшмпспшгб иммунплошчккш параметров у жиппгных, iipiiiiiiri.iT КЦЖ

В крови .10-ти юлок в полрпстс 14-16 месяцев (перед осемснснисм) определили число нимунокочпетентпых клеток л абсолютном содержании (тыс./ мкл.), затем у 20-ти из них через б, 11 и 14 мссянсв после иммунизации вакциной

Существенно изменяется количественный состав нммунокочпетентных клеток в периферической крови животных, исследованных в разные сроки после иммунизации. Содержание количества всех иммунокомпетеитных клеток увеличено во все сроки после иммунизации Ш(Ж, за исключсннем актнгснре-актнвных лим(|юцнт08 - через 11 месяцев после иммунизации и нейтрофнпов, содержание которых уменьшено. Через 14 месяцев после иммунизации вакциной Г>ЦЖ животные были ревакцинированы Сссклеточкой вакциной ТБЦМ.

Далее были исследованы корреляционные связи иммунологических параметров у коров в разные сроки после вакцинации БЦЖ. У ннтак-тных и коров, через 6 н 11 месяцев после вакцинации БЦЖ, корреляционные связи характеризуются прсимушестленно как прямые, так и обратные слабой силы. У коров через 14 месяцев после иммунизации наблюдается усиление корреляционных связей.

Данные состояния иммунной системы у коров и нетелей были исследованы с номонн.ю дискретно-динамического анализа.

Далее на основании выявленных со степенью достоверности (Р 0,05) значимых сочетаний параметров составили с использованием компьютерной программы диф^юрснинально-прогностическую таблицу, которая даст возможность оценить степень защищенности от заболевания отдельного животного и стада в целом.

В результате анализа дифференциалы ю-прогностической таблицы по оценке иммунитета крупного рогатого скота можно заключить, что у животных через б месяцев после.вакцинации БЦЖ увеличивается количество иммунных животных (с 30% у телок перед вакцинацией до 70%). У коров через 11 и 14 месяцев после вакцинации БЦЖ наблюдается снижение числа иммунных животных (соответственно: 45 и 25%).,

Но результатам исследований можно сделать вывод, что у животных через 11 месяцев после вакцинации Ы(Ж снижается степень защищенности оттубер- , кулеза и появляется необходимость ревакцинации.

2.5. Оценка иммунного статуса на оеппве взаимосвязей иммунологических параметром у жноотных, реиммуннзнропанны« Сссклеточной

вакциной ТКЦМ

В крови 20 коров, рсвакцннированных ТБЦМ, определили число ичмуно-компетентпых клеток н кропи (тыс/мкл) через 3, б, 9 и-12 месяцев. Контролем служили 20 коров, исследованных через 14 месяцев после вакцинации БЦЖ

(живошыс пс(и.>л ревакцинацией ТБЦМ). Содержание Т-киллсров, Г- н В-лимфоцитов у животных через 3 месяца после ревакцинации но отношению к .труппе животных перед репа кии нацией достоверно увеличиваемся (соответственно; Р - 0,03; Р - 0,02; Г " 0,02).

. У коров через 6,9 и 12 месяцев после ревакцинации по отношению к не ре-вакцин иропаин мм коровам значительному изменению подвержено содержание Т-личфоцитов, Т-киллеров н В-личфоцнтов, при этом содержание Т- и В-лимфоцитов п *)тн сроки достоверно уменьшено, а содержание 'Г-киллеров увеличено (Р< 0,05), * ..... . ■ . '* < Были исследованы коррел я цнон н и с связи иммунологических параметров у коров в разные сроки после ревакцинации ТВЦМ.-

,У, коров перед ревакцинацией нре имуществе и но отмотаются прямые связи средней силы. Через 3 месяца после ревакцинации ТВЦМ установлены прямые корреляционные связи.средней к слабой силы. У животных по истечению 6-ти месяцев после ревакцинации отмечены как тесные прямые связи, так н прямые связи средней силы..Через 9 месяцев после ревакцинации у животных установлены прямые корреляционные связи средней м слабой силы. Через 12 месяцев после ревакцинации установлены как прямые средней и слабой силы, так и обратные корреляционные связи слабой силы.

В дальнейшем провели дискретно-динамический анализ иммуткмкмичсских параметров и составили дифференциально-прогностические таблицы. " ' Анализ иммунологических параметров у коров через 3 месяца после ревакцинации ТПЦМ (табл. 3), показал; что количество значимых сочетаний параметров значительно увеличивается (с <1 сочетаний параметров у коров перед ревакцинацией до 17 сочетаний), при этом 14 сочетаний выявлено вновь, 3 сочетания совпалаюг с сочетаниями у животных перед ревакцинацией ТБ11М. -* —У коров через 6 месяцев после ревакцинации ТБЦМ наблюдается дальнейшее увеличение числа'значимых сочетаний параметров (21 сочетание параметров). .Отмечено 16 сочетаний параметров, которые совпадают с сочетанием параметров у животных-перед ревакцинацией и" исследованных через 3 месяца после- ревакцинации ТВЦМ. 'Остальные 5 сочетаний параметров выявлены вновь.. ■ ■ '. ' , >•■ • . ' ■. • • '

"У коров через 9'и 12 месяцев после ревакцинации ТВЦМ' наблюдается уменьшение числа значимых сочетаний параметров. Так, установлено 9 сочетаний у коров через 9 месяцев после ревакцинации н одно у коров через 12 месяцев после ревакцинации. Необходимо отметить, что все выявленные значимые сочетания совпадают с сочетшшями параметров у животных, исследованных в предыдущие сроки после ревакцинации ТБЦМ.■- * ■

Таким образом, у крупного рогатого скота с увеличением срока после ревакцинации наблюдается уменьшение числа значимых сочетаний параметров, На основании знализа диффереициально-пропюстической таблицы можно закпю-чить. 'гто с уменьшением числа-значимых сочетаний параметров снижается . степень защищенности животных против туберкулеза.

Таблица 3. Дифференциально-прогностическая таблица ио оценке иммунитета у коров через 3 месяца после ре на кци на ни и ТБЦМ, тис/мкл

№ ii/it (Victaiiiic, . в.1риаГ«слкнмЛ нлрлметр (ftaittr) - л t-rptncpiltl по Cn-Ki;ieinv itapnífuíjm-mJÍi r.awc

1 E-рок (1;Л-рок) 20 ■1.0(1 í w»

2 E-рок (ЕЛО рок) 3, 85 > I,<»s С 2.57

3 ЕЛ-рок (íí-рок) 3. .16 >2,3t > 1.92

4 НЛС-ро1с(1':Г-рчк) 3. 25 <1.60 ■ <0.09

5 Jl t íi i» ни о ы (1 :.Л(рок) 3. 13 ¿6,32 <1.86

6 Е-рок (КТ-рок) 3, 12 <0,95 <0,09

7 ЛеНкошпы (IÍA-гок) 3.08 £7.0» SU. 96

8 ЕЛС-рок (леПмоциты) 2,83 > 3,0B >11,00

9 ЕЛО рок (ЕЛ-гок) 2.68 <1.65 <0,96

10 ЕТ-рок (Ii-poO 2,66 <0, 14 < 1,07

П ПЛС-рок (П-рок) 2,66 <1,60 <1.07

12 Jleíi ки um м (П • рок) 2.51 <7.-12 <1,07

13 E-рок (ntíiw>iiirru) 2,-15 <1.11 <11.00

14 ЕЛ-рок (J;A('-j4)i;J . 2,36 -J 1,2« < i.w» ■

15 ЕТ-рок (Е?ЛО рок > 2,24 Г- 0,20 5US6 ..

16 ЕЛ-рок (лсПюншы) 2.25 < 1.02 ■ <0,30

17 ВТ-рок <ЕЛ-рок) 2,23 <0. 12 ^<0,96 .

Количество ин чу иных Ж11К1ТНЫХ 13 64 íi

В дальнейшем, используя значения базисного и вариабельного параметров дифференциально-прогностических таблиц, оценивали каждого жнвогиого исследуемой группы по всем значимым сочетаниям параметров.

В результате анализа заключили, что у животных через 3 месяца после ревакцинации увеличивается количество иммунных животных (с 25% у коров перед ревакцинацией до 65%). У коров через 6, 9 и 12 месяцев после ревакцинации наблюдается снижение числа иммунных животных (соответственно: 60, <15 и 10%). . .' . .

По результатам исследований можно сделал, вывод, что оптимальным сроком ревакцинации ТВЦМ является 12-М месяцев после введения вакцины БЦЖ. '

2.6. Схема специфической профилактики туберкулеза жипошм«, ее нротн-позпнзоотическая эффективность

В двух хозяйствах Омской, области (ОПХ СибМИС, СПК " Поноса нжаров-ское") отработана схема специфической, профилактики.туберкулеза крупного рогатого скота с применением БЦЖ и туберкулезной бесклеточной вакцины на целлюлозной матрице (ТБЦМ)-- ... . *

По причиие туберкулеза (ОПХ СибМИС Омской области) в 1999 году пого-

ловье крупного рогатого скота было сдано на убой. Послс проведения санитарных меро1фИ(пш1 в одно из подготовленных помещений рамсстилн 144 телки в возрасте 14-16 месяцев из благополучных по туберкулезу ферм. При исследовании на туберкулез по всей группе дважды был получен три на тельный результат. Однако при исследовании через 4 месяца послс завоза из 143 телок 18 прореагировали на ППД-туберкулин. При повторном исследовании через 45 дней еще выделено б реагирующих животных. При убое в хозяйстве у 2 телок патологоанатом и чсским исследованием установлен туберкулез.

■ Дальнейшая работа по оздоровлению стада проводилась с применением вакцннопрофилактнки. После 2 исследований двойной туберкулшювой пробой и удаления последних 2 телок, реагирующих па ППД-туберкулин, животые были привиты вакциной БЦЖ.

Через б месяцев после иммунизации БЦЖ у 70% телок установлена повышенная активность иммуиокомпетептных клеток, через 11 месяцев, таких животных 45% и через 14 месяцев - только 2544. Эти результаты дали основание к проведению ревакцинации коров бесклеточной вакциной ТБЦМ.

Все животные перед ревакцинацией не реагировали на ППД-туберкулин. Исследования животных, ревакпинированных ТБЦМ, аллергической реакцией через 45 дней показали, что 85,5% животных ответили умеренной кожной реакцией (5,03*0,26 мм), через 90 дней - 37,9% животных (4,54*0,22 мм) и через 6 месяцев у коров реакций не было выявлено.

Дискретно-динамическим анализом взаимосвязей иммунологических параметров установлено, что с высокой активностью иммунокомпетеитных клеток выявлено через 3 месяца после ревакцинации 65% животных, через 0 — 60%, .через 9 - 45% и через 12 месяцев -10% коров. Результаты -mix исследований позволили провести последующую реиммунизацию коров вакциной ТБЦМ через 12 месяцев.

Нарождающихся от привитых коров телят прививают вакциной ПЦЖ в возрасте 10-20 дней, затем через 30-45 дней после вакцинации их дополнительно исследуют на туберкулез с помощью однокрапюй туберкулиновой пробы и считают больных по утолщению кожной складки на 15 мм н выше. Это позволяет в более ранние сроки выявлять больных туберкулезом телят. Из вакцинированного молодняка комплектуют отдельныё группы по полу и возрасту "и содержат обособленно. Повторное'исследование однократной туберкулиновой пробой привитого молодняка проводят через 14 месяцев, реагирующих сдают иа убой, не реагирующих телок формируют в отдельной стало (телки перед осеменением) и рсвакцинируют БЦЖ, В дальнейшем с этими животными поступают как описано ранее. *

Описанная схема вакцинопрофилактикп позволила предохранить ог заражения туберкулезом животных ni течение 3 лет (срок наблюдения).

При такой схеме иммунизации, в хозяйстве удалось сохранить от преждевременной сдачи 120 коров; от которых получено более 100 телят. По хозяйству только за один гол предотвращенный экономический ущерб составил 432

тис. рублей л пенах 2002 года. Экономический расчет сделан на основании исследований. проведенных IO.lI. Смоляиинотлм (1992).

3. ш.шодм

(. Иммунный отпет на введение БЦЖ н бес клеточной вакцины ТБЦМ у молодняка крупного )м>гатого скота неблагополучного по туберкулезу стада характеризуется резким снижением в периферической крови животных числа наиболее активных иммунекомпетентных клеток. Существенной разницы в иммунном ответе у животных на введение живых мнкобактернй вакцинного штамма БЦЖ н рафушенных ультразвуком микобактерий, им мобилизированных на неллюлозной матрице, не установлено.

2. Использован дискретно-динамический анализ (варианг регрессионного анализа) для оценки иммунного статуса, позволяющий на основе нзаимоспязей выявить тс сочетания иммунологических параметров, которые присуши только определенному состоянию иммунной системы. С целью автоматизации анализа разработана программа для ЭВМ, которая уменьшает затраты времени на проведение одного исследования в 20 раз.

3. Ревакцинация через 8 месяцев как БЦЖ, так и бес клеточной ТБЦМ молодняка крупного рогатого скота, привитого В) (Ж в возрасте 10-20-тн суток на благополучной по туберкулезу (¡¡ерме, является не эффективной. Иммунитет, созданный вакцинацией, у животных к 8-чн месячному возрасту остается напряженным. Заннпные функции иммунной системы ревакцинация не усиливает, а у отдельных животных, рсвакциннрованных БЦЖ, снижает активность иммунных реакций.

4. Животные через 45 суток после ревакцинации ТБЦМ отвечают (85,5 %) аллергической туберкулиновой реакцией (5,0.1*0,26 мм) и через 90 суток установлено реагирующих 37,9 % животных (4,5410,22 мм). У некоторых животных, нерелгнрующих через 45 дней, реакции регистрируются через 90 дней. Все животные, рснммуннзированные БЦЖ, отвечают аллергической туберкулиновой реакцией через 45 и 90 дней.

5. Изучен на основе взаимосвязей иммунологических параметров иммунный статус телок, привитых вакциной БЦЖ в возрасте 14-16 месяцев. Через 6 месяцев после иммунизации выявлено 70% животных с высокой активностью нм-мужжомпсте1ттных клеток; через 11 - таких животных 45% и через 14 месяцев 25% животных. Оптимальным сроком рсиммулизаннк животных может быть шп ер вал в 14 месяцев после введения БЦЖ.

6. Ил основе взаимосвязей в системе иммунитета изучен иммунный статус у коров, реиммуннзированных вакциной ТБЦМ, через 14 месянсп после введения БЦЖ. Через 3 месяца после ревакцинации выявлено 65% животных с высокой активностью им мунекомпетентных клеток; через б месяцев таких животных 60%; через 9 — 45% и через 12 месяцев 10%. Полученные результаты указывают на необходимость повторной рсиммунизапни бссклсточиой вакциной ТБ1ДМ.

7. Разработана "»фиктивная схема специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с использованием БЦЖ и вакцины ТПЦМ. Вакцинация защищает телок и корон от заболеваю!* туберкулезом на фермах, оздоровление которых проведено метолом пат кой замены больного скота здоровым. Здоровых животных прививают БЦЖ и через 12-14 месяцев и среагирую щи х на ППД-тубсркулнп рсиммунизируют вакциной ТПЦМ. Последующие ревакцинации коров проводят отой же вакциной ежегодно в течение 4-6 лет (срок возможной рспнфскнни). Исследования животных туберкулиновой аллергической пробой проподлг через 6 месяцев два раза в год.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИИ

; Л

.1. Рекомендации «Методы оценки : противотуберкулезного иммунитет у крупного рогатого скота, привитого ВЦЖ, на основе взаимосвязей п системе иммунитета: перспектива использования в ветеринарии», утверждены Ученым советом ВИИ1ШТЖ, протокол № 14 от 28.! Г.2001 г. и подсекцией «Инфскнн-онная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины СО РЛСХИ, протокол № 5 от 10 января 200.1 г. Методические рекомендации предлагается'использовал, в ветеринарных научно-исследовательских институтах и лабораториях проводящих исследования в области разработки 'новых методов и средств иммунологической защиты животных.

- 2. Разрабтлно временное наставление по сочсташючу применению БЦЖ и туберкулезной бесклеточной вакншш на целлюлозной матрице (ТПЦМ) при туберкулезе крупного рогатого скота (Утв. Ученым советом ВМШ1ПТЖ, протокол J&3 от 18 ноября 2003 г.).

3. Приоритетная справка ira изобретение «Способ оценки иммунитета» Кч 2003101186 от 21 января 2003 г. и уведомление о положительном результате . формальной зкенертизы Ks 2003101186/14(001154) от 6 шоня 2003 г.

4. Материалы но разработкс схемы специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с использованием БЦЖ и бссклсточной вакцины •ТБЦМ рассмотрены и одобрены 1ГГС Главного управления сельского хозяйства администрации Омской области, протокол № 6 от 29.11.2002 г.

■ - V*1 " * *

• . - СПИСОК ■ опубликованных работ по теме диссертации

■ К Содержание иммуиокомпетентных клеток у телят, привитых противотуберкулезными пакнинами /Соавт. М:А. Бажнн// Матер. Всерос. нау>1. конф. но проблемам хронических инфекций: Сб. науч. тр. ВШШБТЖ.- Омск, 2001.- С. 183-184, ■ • "

• - 2, Клсто'шгле реакции у телят неблагополучных но туберкулезу <)^срм на введение противотуберкулезных вакцин /Соавт.: М.А. Бажнн, В.Л. Шкурнн//

Инфекционная патология животных: СП. науч. тр. ШПШБТЖ.* Омск, ?001,- С, 193-197.

3. Содержание Т- п И-лнмфонкток у телят, привитых ПДЖ н бес клеточной вакциной Т1П1 ''Солит, М.Л. 1>ажин//*Гам же.-С. 203-206.

4. Протияозтпоотичсская з«|>фекгнвность вакннны 1>ЦЖ и туберкуле итй бес клеточной вакцины ТВЦ в нсбла го пол уч ни х по туберкулезу хозяйствах /Солвт. М.Л. Бажин// Научное обеспечение ЛПК Сибири, Монголки, Казахстана, Беларуси и Башкортостана: Матер, 5-ой Мсждунар. науч- практ. конф. (Абакан. 10-12 июля 2002 г.) / РАСХП. Снб, отд-нне,- Новосибирск, 2002,- С. •142-441.

5. Составление дифференциально-прогностических таблиц на основе дискретно-динамического принципа оценки иммунного статуса /Солвг.: М.А. Нажин, B.C. Власенко// Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных: Матер. Межлунар. науч. конф, посвященной 175-летию аграрной науки Снбкрн (Омск, 24-26 нюня 2003 г.): Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ,- Омск, 2003.- С. 97-107.

6. Схема специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с применением БЦЖ и бссклсточной вакцины ТБЦМ / Соавт.:*М.А. Бажин, B.C. Власенко//Там же.-С. 123-127.

Ти not рафия ОмГУПСа. М4046. к Омск, пр. Маркса, 35. Тираж 100 экз. Закат 901.

#21010