Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Новые механизмы искусственной регуляции паразито-хозяинных отношений при бруцеллезе животных

российская акадел\ия сельскохозяйственных наук

СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ СИБИРИ И ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА

НОВЫЕ МЕХАНИЗМЫ ИСКУССТВЕННОЙ РЕГУЛЯЦИИ ПАРАЗИТО-ХОЗЯИННЫХ ОТНОШЕНИЙ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ ЖИВОТНЫХ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

п 5 СА 2 2 АПР ШВ

УДК 619:616.98:579.841.93Б

На правах рукописи

КРАСИКОВ

Александр Пантелеевич

НОВОСИБИРСК 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте бруцеллеза и туберкулеза животных Сибирского отделения Российский академии сельскохозяйственных наук

11 ау чные консультанты: доктор ветеринарных наук Л.Л. Новицкий

доктор пс 1срннарных наук С.К. Димов

Официальные оппоненты: доктор ветерннарпых наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ K.M. Салмаков

доктор ветеринарных наук, профессор D.M. Чекншеа

доктор ветеринарных наук 11.Г. Трофимов

Ведущее учреждение:

Прикаспийский научно-исследовательский ветеринарный институт

Защита днсссргглиш состоится "/0" -Об 1996 г. в J_0_ часов на заседании диссертационного coneia Д. 020.23.01. про Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и 'Дальнего Востока (633128, Новосибирская область, п. Краснообск, СО РАСХН, ИЭВСиДВ)

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБСО РАСХН.

Автореферат разослан "IZ" ^^ 1996 i .

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор iseiерннарных наук

A.A. Самоловов

1.0Г.ШАН ХАРАКТЕРИСТИКА РАКОТЫ 1.1. Актуальность.

Бруцеллез продолжает оставаться одной из главных мировых медико-ветернцарных проблем.

В нашей стране реализуется широкая программа ликвидации бруцеллеза животных, при этом достигнуты значительные успехи благодаря внедрению лротивоэшгзоотической системы, разработанной на основе современных принципов управления эпизоотическим процессом (U.A. Косилов с соавг., 1978; A.A. Новицкий, 1988; С.К. Димов, 1989, 1994).

Однако в последние годы в связи с резко изменившимися социально-экономическими условиями эпизоотический процесс бруцеллеза как на территориальном, так и на популяционном уровнях стал приобретать новые закономерности, не поддающиеся расшифровке (Ю.Н. Федоров, В.В. Горшенко, 1982; В.И. Урбан, В.В. Сочнев и др., 1989; М.М. Ременцова, Т.А. Грушпна, 1989).

Рассматривая эпидемический (эпизоотический) очаг любой инфекционной болезни, в том числе и бруцеллёза, как систему паразпто-хозяинных отношений, следует отметить, что она развивается строг о по своим законам внутренней саморегуляции (В.В. Беляков, 1980; И.А. Бакулов с соавт., 1986; С И. Джупина, 1991; В.П, Урбан, 1991 и др.).

Установлено (С,К. Димов, 1989, 1994), что бруцеллез - управляемая болезнь, Управление эпизоотическим процессом бруцеллеза предусматривает комплексное всестороннее оперативное воздействие на все звенья эпизоотической цепи в целях обеспечения благополучия или создания биологического равновесия между паразитом и хозяином.

Другими словами, наряду с саморегуляцией, возможна и нскусствеш.ая регуляция паразнто-хозяинных отношений, которая должна обязательно носить характер оптимальной противозпизоотцческой системы, причем оптимизация - процесс постоянный (С.К. Димов, С.И- Джупина, 1988; И.А. Косилов, 1995).

Ведущая роль в ней при многих инфекционных болезнях, в том-числе и при бруцеллезе принадлежит специфической профилактике.

При этом для создания иммунитета к бруцеллезу у животных используют вакцины различных типов по разным схемам, каждая из которых имеет cßoii предел возможностей (Е.С. Орлов, ! 1С. Уласевич, М.М. Иванов, П.А.Триленко и др. 1971; А.И.Попов, 1971; И.Н. .Яковлев, 1972; И А; Косилов с соавт., 1978; P.M. Пашаев, 1979; K.M. Салмаков, Э.С. Плотников, 1981; Л.В. Ропаева, 1986;

A.A. Новицкий, 1988; Р.В. Петров, P.M., P.M. Хащов, П.И. Игнатов и др., 1988; К.В. Шумилов с соавт., 1989; И.П. Никифоров и др., 1993).

С учетом современных достижений стремительно развивающейся новой, науки иммунофармакологии имеется реальная перспектива оптимизации схем специфической профилактики за счет повышения напряженности иммунитета до необходимого уровня в нужные По эпизоотическим показателям сроки с помощью неспецифических средств (иммуномодуляторов).

Вместе с тем, несмотря на наличие определенного числа работ по данной проблеме (Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин, 1985; Р.В. Петров С соавт., 1974-1978, (981; P.M. Хаитов с соавт., 1976, 1981; A.M. Нажмнтдинов с соаВт., 1979-1981;

B.А. Кабанов с соавт., 1978, 1982; В.Ф. кику, 1981; Е.А. Драновская, П.Е. Игнатов, 1982; G. Renoux, М. Renoux, 1979; J. Debowy, Obinisko-Doitioradzko, 1987; A.W. Confer et al., 1985), она при бруцеллезе к началу наших исследований практически не была реализована.

Наряду с проблемой создания перманентного иммунитета, как меры искусственного воздействия на макроорганизм при оптимизации любой противо-эпизоотической системы необходимо добиваться И эффективной меры воздействия на микроорганизм.

При бруцеллезе такой традиционной мерой была и остается рациональная диагностика, "обслуживающая" специфическую профилактику за счет выявления инфицированных животных, тем самым ускоряющая процесс формирования в паразитарной системе биологического равновесия между паразитом и хозяином. Однако далеко не всех инфицированных животных можно выявить даже с помощью комплекса диагностических средств и.методов (И.А Косилов, 1992; Л.В. Дегтяренко, 1995).

В связи с этим положительную роль в качестве эффективной меры воздействия на бруцелл (паразита) могла бы сыграть с одной стороны превентивная санация макрооргаийзма с использованием антибактериальных средств, спо-

собствующая ослаблению или утрате вирулентных свойств бруцелл с дальней-щей их элиминацией, а с другой стороны активация защитных систем макроорганизма (хозяина) с помошыо иммуностимуляторов.

Однако рациональная схема такой санации в сочетании с не менее рациональными схемами диагностики и специфической профилактики к началу наших исследований отсутствовала.

1.2. Цель и задачи исследований.

Цель исследований - осуществить поиск новых механизмов искусственной регуляции паразито-хозяииных отношений при бруцеллезе животных и предложить пуги и методы их реализации в системе прогивобруцеллезных мероприятий Для повышения эффективности управления эпизоотическим процессом. На их основе разработать научные и практические рекомендации.

При этом в задачи исследований входило:

1.2.V. С позиций концепции перманентного иммунитета подвергнуть сравнительной оценке различные схемы специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота, и предложить ветеринарной практике наиболее эффективную.

1.2.2. Определить в экспериментальных и производственных условиях роль различных иммуномодуляторов в повышении уровня напряженности иммунитета и предложить рациональную схему их применения в сочетании с вакцинами, >

1.2.3. Изучить эффективность.различных протпвомнкрорных препаратов для санации организма животных от бруцелл и предложить рациональную схему их применения в комплексе прогивобруцеллезных мероприятий.

1.3. Шучнаи новизна

1.3.1. Экспериментально обоснованы с позиции концепции перманентного иммунитета рациональные схемы специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

1.3.2. Изучены новые механизмы искусственной регуляции пяразито-хозяшшых отношений при бруцеллезе животных и на их основе разработаны рациональные схемы применения иммупомодулязоров и антибактериальных препаратов в системе противобруцеллезных мероприятий.

1.4. Теоретическая и практическая значимость

1.4.1. Результаты проведенных исследований дополняют новыми научными фактами концептуальную модель управления эпизоотическим процессом бруцеллеза. Они могут быть использованы в дальнейших научных исследованиях, направленных на продолжение (пучения проблем управления эпизоотическим процессом, оптимизации протнвоэпизоотических систем при бруцеллезе многих видов животных, других инфекционных болезнях, а также в учебном процессе.

1.4.2. Доказана нротивоэпизоотическая эффективность разработанных схем применения и м м у н о м о д у ляг о р о в и антибактериальных препаратов, а также целесообразность их широкого внедрения в системе противобруЦеллезиых мероприятий.

1.5. Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложиты и обсуждены: в ГУВ МСХ РФ (1992); Департаменте ветеринарии Минсельхозпрода РФ (1995); на З-ei'i Всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биопрепаратов" (Щелково, 1987); Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза U организации медицинской помощи" (Новосибирск, 1991); региональных координационных совещаниях-семинарах исполнителей НИР по проблеме бруцеллеза с.-х. животных (Омск, 1987, 1991-1995 гг., Новочеркасск, 1989, Новосибирск, 1992); региональных научно-теоретических и практических конференциях (Троицк, 1993; Комсомольск - Кустанайской обл., 1992; Павлодар, 1992, 1993; Новосибирск, 1984, 1995); научной конференции, посвященной 70-летию Омского ветеринарного институт а (Омск, 1990).

Основные положения, выводы и Г1рактические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены координационным совещанием "О состоянии и направлениях научных исследований по проблеме бруцеллеза и туберкулеза животных (Омск, 1995) и ученым советом ВННЙБТЖ (1995).

1.6. Публикация результатов исследований.

По теме диссертации опубликовано 38 работ в сборниках научных трудов ИЭВСиДВ СО РЛСХН, ВНИИБТЖ, Омского ветеринарного института,'

РНИИ'ГиБП, материалах Всесоюзных и Республиканских научных конференции и других научных и научно-производственных изданиях.

1.7. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 361 странице машинописного текста, иллюстрирована 32 рисунком и 43 таблицами. Она состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследовании, выводов, практических предложений и приложения. Список литературы включает 636 источников, в том числе 465 отечественных и 171 иностранных. Текстовая часть диссертации составляет 284 страницы.

1.8. Внедрение результатов исследований.

Экспериментальное обоснование рациональных схем специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота нашло отражение в материалах по опыту оздоровления хозяйств Сибири от бруцеллеза крупного рогатого скота и научному его обеспечению, а также в ряде других нормативных документах, утвержденных на союзном и республиканском уровнях.

Научные данные, касающиеся новых выявленных механизмов искусственной регуляции паразито-хозяинных отношений при бруцеллезе жиротнь:х, используются в учебном процессе, на кафедре эпизоотологии института ветеринарной медицины Омского государственного агроуниверситета.

Методические рекомендации по использованию в системе противобру-целлезных мероприятий иммуномодуляторов и антибактериальных препаратов по разработанным схемам одобрены Департаментом ветеринарии и подсекцие": "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" секции отделения ветеринарной медицины РАСХН (Новосибирск, 1996) и рекомендованы для производственного испытания,' а также использования в учебном и научно-исследовательском процессах.

1.9. Основные положения, выносимые на заншгу

1.9.1. Экспериментальное обоснование рациональных схем специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

1.9.2. Новые механизмы искусственной регуляции паразито-хозяинных отношении при бруцеллезе животных и разработанные па их основе рациональные схемы применения иммуномодуляторов и аншбактернальнь'х препаратов, зна-

чительно повышающие эффективность системы противобруцеллезных мероприятии.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 1981 по 1994 г. в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока ( ИЭВСнДВ), Всероссийском научно-исследовательском Институте бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ), Кустанайской НИВС, в областных, районных лабораториях и хозяйствах Омской, Новосибирской, Тюменской, Челябинской, Иркутской областей РФ, Павлодарской и Кустанайской - Казахстана и Сыр-Дарьинской - Узбекистана.

Материалом дая проведения экспериментальных исследований послужили: мыши двух линий CC57Br/Mv (95 гол.), CC57\V/Mv 1170 гол.), крысы линии WAG/G (129 гол.), морские свинки (261. гол.), кролики породы шинщила (18 гол.), крупный рогатый скот (229 гол.). Производственные опыты и Наблюдения осуществлялись на 29-ти тысячах крупного рогатого скота В хозяйствах с разнообразной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу.

Иммунизацию, заражение опытных животных подкожным и коньюнктн-вальным методами для проверки иммунитета, а также взятие биологического материала с целью проведения бактериологических исследований, посевы на твердые (МППА, эритрит- агар) и жидкие (МППБ) среды, индикацию и идентификацию культур, п также постановку бионробь! на морских свинках осуществляли по общепринятым методикам.

Для изучения антигенной структуры бруцелл пользовались диагностическим набором, приготовленным Л.В. Дегтяренко с соавторами (ВНИИБТЖ).

В качестве заражающего агента в экспериментах использовали вирулентный штамм В. abortus 54, а в производственных условиях для оценки им-м у н о м о ду л 11 ру ю щ е й активности препаратов живую вакцину из штамма 82 В. abortus в двойной (от профилактической) дозе.

С целью повышения уровня напряженности иммунитета при бруцеллезе изучали на животных разных видов вакцинные штаммы В. abortus 19, 82,104-М, 16/4, антигенные комплексы (АК), а для повышения их иммуногенности сти-

муляторы: нилверм, левамизол, поливинишшрролидон (ПВП-11600 Д), дибазол, Ф-20, С-34, ПС-), ковпдон.

Для изучения санирующего действия на брунелл испытали антибактериальные препараты: А, БК, ß, Б-1, Б-2, Б-3, Б-4, Б-5, Бр-l, Бр-2, 82-К, рифам-гпшин,

В качестве иммунологических методов в экспериментах и производственных опытах при серологических исследованиях кров)! применяли: РБП, РА, РСК и РИГА с S- и R-антшенами, РНИФ, ИФА, РИД с ОПС-антигеном, ОФР, РИФ (В), ЦТТ (Т), РТМЛ (А). Антитела в молоке выявляли с помощью KP и ИФА. S- и R-эритроцнтарные диагностикумы готовили по методике ВНИ-ИБТЖ, которая подробно изложена в разделе собственных исследований. Для продления срока годности их подвергали лиофильному высушиванию.

РНИФ с S- л R-антигешми ставили по методике автора (А.П. Красиков, 1983), РИД и ИФА с антигенами, полученными В.М. Чекишевым с соавторами, а РСК (РДСК) с R-антигеноы,' изготовленным Л.В. Дегтяреико (ВНИИБТЖ).

Постановку ОФР осуществляли по методике БелИИИЖ (СЛ. Пшнцеико с соивт., 1985). Для оценки ОФР пользовались числовым показателем, предложенным В.А. Шритером.

B-лимфоциты определяли с помощью реакции иммунофлуоресценции (РИФ), Т-лимфоциты в цитотокс!)ческом тесте (ЦТТ), функциональную активность 'А-клеток (или макрофагов) изучали в реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМД) и опсонофагоцнтариой реакции (ОФР) с определением фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ) и фагоцитарного числа (ФЧ). При этом при постановке мерных трех реакций пользовались методическими рекомендациями, разработанными М.А. Бижнным с соавт. (1989).

Морфологические исследования биологического материала от экспериментальных живоiпых для определения механизма действия нрогивобрунел-лешых препаратов проводили по общепринятым методикам.

Ультраструкгурные изменения брунелл под действием бактерносгатнче-ских и бактерицидных доз препаратов наблюдали с помощью электронного микроскопа ЭВМ-ШОВ. Обработку исследуемою материала для шектроннои микроскопии пропилили но методу А. Ryter, И. Kelleiilieiger (J958).

Цифровые данные экспериментов обрабатывали методом статистики с использованием таблицы Стьюдеита (А.Т. Усович, П.Т. Лебедев, 1970; Е.К. Меркурьева, 1970).

Набор материалов диссертационном работы осуществляли по программе "Лексикон", распечатку текстовой части и таблиц - по программе "Quattro" на принтерах фирмы "Star" и "EPSON FX-80" (Япония).

Часть исследовании была проведена совместно с сотрудниками Института биоорганнческой химии г.Новосибирск (В.Г. Будкер, А. Соколов, Н Д. Беляев), ИЭВСиДВ (И.А. Косилов, JI.B. Дегтяренко, Ш.Р. Фаизрахманов, O.A. Колганова), Омской медицинской академии (A.B. Кононов), Омского государственного университета (A.Ç, Фисюк), Московской фармацевтической фирмы "Ковидон" (С.А. Кедик, В.И. Свсргун н др.), а также с сотрудниками ВНИИБТЖ: лабораторий биофизических методов исследования (В.И. Околе-лов, Б.И. Коган), иммунологии (В.А. Mi-роненко, О.П. Коркина), нспы1-ания лекарственных препаратов (C.B. Савицкий, В.А. Борисов, К.К. Аяиергенов), специфической профилактики бруцеллеза (В.И. Горбунов, Г.П. Ивлева, Т.Г. Попова, С.К. Русетская, С.А. Понкратой, E.ÎO Стуказова), аспирантами ВНИИБТЖ (H.H. Маскпев, B.C. Бронников, Е В. Понкратова, О.Н. Иванова, П.Д. Жуков, В.А. Циммерман), студенткой - дипломницей заочного факультета ОГ-ВИ Г.А. АхметОвой.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность научным консультантам, докторам ветеринарных Наук A.A. Новицкому и С.К. Димову, а также всем упомянутым соисполнителям за консультации, методическую и практическую помощь В проведении исследований.

2.2. Результаты исследований 2.2.1. Экспериментальное изучение различных схем специфической профилактике ируцеллет крупного рогатого скота

Исходя из позиций концепции перманентного иммунитета нами подвергнуты сравнительной оценке различные схемы применения вакцин, предлагаемые исследователями для специфической профилактики бруцеллеза крупною рогатого скота.

На первом этапе 4-х летнего опыта, проводимого на экспериментальной базе ВНИИБТЖ (в условиях, приближенных к производственным, с учетом

возраста, физиологического состояния животных - стельность, послеродовым период), установлено, чго активность перестройки организма телок на введение вакцины зависит ог штамма и дозы.

При этом наиболее выраженной специфической реактогенностью обладала вакцина из штамма 104-М, которая обусловливала синтез агглютининов Шсокого уровня уже на 7 день после иммунизации ею животных в полной дозе.

По агглштииогенним свойствам вакцина из штамма 19 оказалось на первой месте (поствамшнальные антитела сохранились до 2!0 дня у 10% животных), затем следовали: {04-М малая доза (м.д.)- до 150 диен обнаруживались антитела у 20% телок; 104-М полная доза (п.д.) - агглютинины и основном угасали на 150 день (на 180 день реагировала лишь одна голова - 5%), т.е. по срокам угасания как полная, так и малая дозы вакцины из щт. 104-М стояли примерно на одном уровне. Разница лшць в титре антител, который выще на полную дозу. На последнем месте н данном опыте находилась вакцина нз шт. 82, после введения которой агглютинины не регистрировались в сыворотке крови животных уже на 60 день.

Результаты наших исследований по реактогенностн и агглютиногенности этих вакцин согласуются с данными, полученными Е.С. Орловым, П.С. Уласе-внчем, М.М' Ивановым, Г1.А. Триленко (1971); Т.Н. Малаховой, К.В. Шумиловым, У.Э.Ниязовьш и др. (1978); Г.Г. Поповой (1978); И.'А. Косиловым (1992).

Таким образом, в начальные сроки после иммунизации (7-28 дни) преобладали гуморальные факторы иммунитета, о чем свидетельствует высокий уровень антител, улавливаемых в РА, (349±345) РНГА-S (9о39±9005) и РНГА-R (578714987), Р>0,05,

Затем, по мере угасания синтез в антител, шло нарастание клеточных факторов защиты, крторы« К 90-150-му дням достигали максимума (ФАЛ 72 - 100%; фГ? 18-28; ФЧ >,2-4,0 против ФАЛ 12-16%; ФП 3-4, ФЧ 0,16-0,95.на.7-28 дни). На основании этого можно предположит,, чн> между фагоцитозом и ищтезом антител существуют конкурентные отношения. к 210 дшо фпгоцптарпые реакции сводились к нулю, а антитела синтезировались у незначительного количества животных в низких титрах.

Необходимо подчеркнуть, что индукция антител высокого уровня на вакцину из шт. 104-М (как на полную, так и малую дозы) осуществляется в более короткий срок (7 день), тогда как на другие вакцины (шт.82 и 19) - на 14-28 дни.

На втором этапе наших исследований изучили динамику иммунного ответа после реиммунизации животных вакцинами из штаммов 19, 82 И 104-М. Установили, что повторное антигенное раздражение организма сенсибилизированных животных, независимо от дозы вакцины, способствует повышению общего уровня антител, характерных для вторичного иммунного ответа, с преобладанием высокоаффинных, имеющих наибольшее сродство к антигену, ком-плементсвязывающих и г ем агглютинирующих антител. При этом уровень антител в 10-150 раз превышал таковой при первичном иммунной ответе и к тому же достигался в более коротки» срок (до 15 дней). Затем, в отличие от первичного иммунного ответа, шло резкое снижение синтеза антител, которое уже к 180 дню достигало уровня, присущего после 210, 300 дней однократному введению вакцины.

Интересно отметить тот факт, что при реиммунизацин вакциной из шт. 82 по гомологичному фону в организме телок остается больше клеток, сохраняющих "память" об R-антНгенной структуре штамма, которые продуцируют R-антитела, ь 1,5-3 раза превышающие уровень S-антител. Ревакцинация животных через 10 месяцев является оптимальным сроком, так как к концу этого периода антитела в диагностических титрах во всех группах независимо от вакцинного штамма (19, 82, 104-М) не выявляются. В связи с этим исключается отрицательное воздействие инптирующей способности сыворотки, которое по данным некоторых авторов может осуществляться через макрофаги (А.Я. Кульберг, 1975) или прямо на иммуиокомпетентные клетки (Е. Diener, M.Feldman, 1972; L.A. Herzenberger, С. M. Metzler, 1974) в частности, активируя клетки супрессоры (Т.А. Ramchaf, 1976).

Клеточные реакции фагоцитрза также к этому периоду сводятся к нулю и не обладают "конкурентноспособностью" но отношению к гуморальным антителам. Таким образом, организм телок полностью подготовлен к повторной встрече с вакцинным штаммом. .

При изучении иммунитета обнаружена высокая устойчивость телок к подкожному заражению относительно высокой дозой (200 млн м.к.) вирулентного штамма В. abortus 54. При заражении всех животных в контрольной (не вакцинированной группе) индекс инфицированпостн не превышал 14,1%. Аналогичные результаты естественной возрастной резистентности молодых животных к бруцеллезу получены и опытах, проводимых И.А. Косиловым, А.Г. Хлысту-новым, Ю-П. Русаковым, С.К. Димовым (1992).

Наиболее оптимальными схемами иммунизации телок явились прививка их в возрасте 3-5 месяцев вакцинами из штаммов 19 и 82 в полных дозах, а ре-иммунизация через 10 месяцев (по фону вакцины из штамма 19 - малой дозой гомологичной вакцины или полной дозой штамма 82 и по фону вакцины 82 -полной дозой этого же штамма). При использовании данных схем получен иммунитет высокой напряженности у 100% животных, тогда как другие схемы предохраняли от заражения 67 н 90% телок соответственно (Табл. 2.2.1.1.).

Таблица 2.2.1.1.

Показатели иммунитета у телок, вакцинированных против бруцеллеза по разным схемам

Ла и.'и Характеристика групп. Kci.hi- чсс11ш . Срок ириаср- 4a{>ain.i ось жн-во'пшх ¡1|.(л<;лсно с ГШф!1Л1|-'inn.lillloir формой Вилелс-но культур' 1Ш Пмуп-ны\»

1 ШТЛ9+19 п.д. 10 1 iiet 2 1,3 90

2 И1Т.19+19 м.д. 10 бм 0 ■ - 0 - 100

3 шт. 19+82 п.д. 10 6 м 0 - 0 - 100

4 шт. 104-М п.д. + 104-М м.д. 10 6м 1 Нет 1 0,7 90

5 шг,104-Мм.д. +104-М ц.д. 9 . 6м 3 иет 1 2,2 67

6 шт.82'+82 П.Д. 10 6м Q - 0 - 100

7 шт.83 7 бм о - . 0 - ■ 100

а Контрольная (нитактные животные) 5 6м • 5 - нет и 14,1 0

Вместе с тем животные, привитые однократно полной дозой вакцины из штамма 82 в 15-ти месячном возрасте, в 100% случаев также противостояли заражению бруцеллезом.

Аналогичные результаты, только с применением вакцины В-)9, получены Ь. ОЬепгип (1973), который показал, что однократная прививка телок в возрас-

те 15 месяцев предохраняет от заражения 71%, тогда как животные, иммунизированные дважды по схеме В-19 +• Н-38 с интервалом в 9, месяцев противостояли заражению в 56%-тах случаев.

На третьем этапе проведения опыта изучены динамика появления, накопления и угасания поствакцинальных антител, а также напряженность иммунитета у стельных: животных после трехкратной Их вакцинации.

При этом установлено, что у первотелок, реиммунизированных через 1-2 месяца после отела, наибольшее количество животных и с более высоким уровнем антител реагировало в РА, РИГА и РСК на 7, 14, 28 дни в группах, привитых по схемам: 19 П.Д.+82 п.д.+82 П.д.; 82 П.Д.+ 82 п.д.+ 82 п.д.; 82 п.д.+82 п.д> 82 м.д.. В последующие сроки количественные и качественные показатели заметно снижались. Причем реакции у животных, реиммунизированных как полной, так и малоГ. дозами вакцины из штамма 82, в РА и РИГА в диагностических тиграх угас-ли к 90 - 120 после ревакцинации, РСК еще сохранялась до 230 дня у 13-25°Л к эров.

Некоторые отличительные особенности имеет группа животных, где малая дозч вакцины из штамма 82 применялась по отдаленному фону штамма 19. В данном случае РСК была отрицательной через 90 дней после реиммуни-защш.

У особей другой группы, где для реиммунизаций применялась только вакцина из штамма 19 (в полной для создания грундймМунитета н малой дозах для г.оследуюших реиммуйцзаций), РСК сохранялась положительной до 230 дня у 13% животных, тогда как агшгтинйЛЫ и гемагглютпнИны в диагностических титрах не регистрировались уже к 60-Му Дню.

У животных, иммунизированных полной дозой вакцины из Штамма 104-М и дважды реиммунизированных Малой дозой гомологичной вакцины, агглютинины и гемагглютинины В диагностических пгграх выявлялись До 120 дня после ревчкцинации у Н-22%, акомгшементейязывающие антитела - до 230 дня у 11% коров.

Средни» титр Я-антител в РНГА у жнвотных, также как И после первой реиммунизации вакциной из штамма 82, в основном в 1,5-3 раза превышал уровень Б-антител.

Для проверки иммунитета хонъкжктивальиый способ заражения животных штаммом 54 В. аЬогив в дозе 25 млн м.к. оказался более эффективным (ИИ в контроле 19,0), чем подкожный в дозе 200 млн м.к. (ИИ в контроле 14,1).

При этом иммунитет высокой напряженности получен у 100% животных, вакцинированных трехкратно по схемам; 1, 2, 3, 5 (Табл. 2.2.1.2.).'

Таблица 2.2.1.2.

Напряженность иммунитета у крупного рогатого скота трехкратно вакцинированною против бруцеллеза

Из п/п Схемы иммунизации КОЛ-ВО ron Заразилось ron. Выделено культур Сио-проба И.И. Иммунитет , %

1 19п+82п+82п 8 0 0 - 0 100

2 82п+82п+82п 8 0 0 - 0 100

3 82п+82п+82м В О 0 - 0 100

4 19п+82п+82м. В 1 2 - 2,2 83

5 19п+19м+19м 8 0 0 - 0 100

6 104-Мп+104-Мм +104-Мм 9 2 3 - 2,2 73

7 контроль (интактные животные) 5 5 . 14 + 19 0

Примечание: я,- полная doja; и,- лш/ия ¿та й>я пап. 81 -10 nipt), м.к., (Vi.'i чип. 19 п 104-М - 3

мт1 м.к.; бчопроби - + поюжтпелышя, -опфнцате.чьщя.

Таким образом, памп установлено,-что создать перманентный иммунитет

высокого уровня напряженности у крупного рогатого скота можно с помощью применения трех вакцинных препаратов - 19, 82 и 104-М, в полных дозах для создания грунднммунитета у телок, с последующими ревакцинациями в полных и уменьшенных дозах в оптимальные сроки. При этом наиболее рациональными схемами иммунизации являются:

1.19п.д.+ 82п.д:+82п.д.; 2.19 П-Д-+ 19 м.д.+ 19 м.д.;

3. 82 П.Д.+ .82 п.д.+ 82 м.д.;

4. 82 п.д.+ 82 п.д.+ 82 п.д.

Вместе с тем преимущество имеют 1-я и 2-я схемы, которые не осложняют контролирующую и исключают дифференциальную диагностику бруцеллеза.

Оптимальными и научно-обоснованными интервалами между первой и второй вакцинациями телок являются 10 месяцев, а для ревакцинации коров - I год.

2.2.2. Поиск новых механизмов искусственной регуляции паразито-хошттых отношений при бруцеллезе животных 2.2.2.1. Изыскание иммуиомодуляторов, повышающих напряженность противобруцеллезпого иммунитета у животных, при их сочетанием использовании с вакцинами.. Средства специфической профилактики играют важную роль в механизме

искусственной регуляции паразито-хозяннных отношений при'бруцеллезе животных. Вместе с тем с помощью вакцин не всегда удается создать иммунитет высокой напряженности у животных из-за различных отклонений в их иммунной системе, высокой вирулентности возбудителя и других факторов. Поэтому определенное значение может иметь селективная модуляция тех или иных звеньев иммунитета.

При этом следует учитывать, что при внутриклеточной способности па-разптирования бруцелл особенно важна стимуляция макрофагов И Т-клеток для повышения резистентности макроорганнзма к инфекции.

В связи с этим для повышения уровня напряженности противобруцеллез-ного иммунитета изучено в экспериментах па лабораторных животных (мышах линий СС57Вг/Му и СС57АУ/Му, кроликах, морских свинках, крысах линии \¥А<ЗЮ) 8 иммуностимуляторов: левамизол, нилверм, ПВП, дибазол, Ф-20, С-34, ПС-1, ковидон. Из них отобрано 4 наиболее эффективных и перспективных препарата (шшверм, левамизол, ПВП, ковидон), которые испытаны в трех экспериментах на крупных животных, а левамизол и ковидон также в производственных условиях'.

В опыте на Мышах установлено, что наиболее демонстративной моделью для изучения иммунитета при экспериментальном бруцеллезе являются мыши линии СС57йг/Му. При этом иммуностимуляторы ПВП, нилверм повышают напряженность иммунитета у данной линии животных, привитых вакцинами из штаммов 19 и 104-М, на 20 и 60% соответственно. В другом случае (СС57\\'/М\) нммуногенность вакцины из штамма 104-М под действием стимуляторов нил-верма, левамизолаи ПВП повысилась в 3 раза.

При изучении иммунитета нами не установлена связь между его напряженностью и синтезом гуморальных антител. В связи с ограниченным количеством исследуемого материала и сроков исследования оставался невыясненным вопрос - за счет чего же повышается напряженность иммунитета-при сочетанием

введении вакцин и иммуноспшуяятороа, Поэтому иозникла необходимость изучить влияние стимуляторов на синтез антител до заражения в динамике, а также после заражении и роль фа!они? он в формировании иммунитета. Такие исследования были проведены на кроликах.

При изучении гуморальных факторов имму нитета с помошыо РА, РСК и РИГА не отмечали увеличения уровня антител при введении вакцины со стимуляторами, а после заражения, наоборот, регистрировали снижение титров антител во всех опытных группах, т.е. антитела п данном случае не оказывали существенного влияния на напряженность иммунитета. Ответ на поставленный вопрос получили после изучения фагоцитоза. При этом установлено, что выраженный фагоцитоз имели животные, вакцинированные со стимуляторами - ле-вамнзолом,. ПС-1, ннлвермом, и умеренный - с ПВП. Средние-показатели по группам были соответственно равны -' 46-70%, 46-59%, 45-65%, 25-37%. Слабо выраженный фагоцитоз наблюдали у кроликов, вакцинированных штаммом 104-М без стимуляторов <10-20%} и контрольной группе (S-14%).

Когда же провели бактериологические исследования, то выявили, что все кролики, вакцинированные с нммуиомодуляторамн, противостояли заражению бруцеллезом. Tot да как ленцотные, привитые только вакциной, лишь в 34% случаев (ИИ=20) были иммунными при 100% заражении животных в контроле с высоким ПИ, равным 60.

D связи с этим повышение уровня напряженности иммунитета находится в прямой зависимости.от-'фагоцитарной активности лейкоцитов. При этом испытуемые и м м у I ! ом одул ято р ы вызывали активацию макрофагов.

Полученные нами результаты в этих опытах согласуются с данными Р.В. Петрова с соавт., 1978; В.А. Кабанова с соавт., 1978; В,И. Покровского с соавт., 1979; AI. Jbrahin M.S., 1978; R. Anderson etat., 1978. .

В опыте на крысах липни WAG/G повторили изучение влияния стимуляторов на синтез анппел и напряженность иммунитета при сочетанном введении с вакциной из штамма 19 В. abortus и антшенным комплексом (АК).

При этом дополнительно к ранее испытанным препаратам изучили стимуляторы; дибазол, С-34 и Ф-20. На основании результатов, полученных в данном опыте, подтвердили, что испытуемые стимуляторы не оказывают влияние на количественные' и качественные показатели синтеза гуморальных антител.

Также, как и в нервом опыте, не установлена взаимосвязь гуморальных факторов иммунитета с его напряженностью.

Из испытуемых стимуляторов нммуномодулиругощей активностью обладали препараты - Ф-20 и ПВП, которые на 10-20% соответственно повысили иммуногенность вакцииьг Из штамма 19, а ПВП с АК создали иммунитет, равный по напряженности вакцинному. Вместе с тем установлено, что высокая доза стимулятора С-34 (100 мг/кг массы) оказывала не иммуномодулируюшее, а нм-муноделресспвное действие и снизила напряженность иммунитета на 20%. Дибазол в сочетании с вакциной также снизил ее иммуногенность на 40%, кроме того он не оказывал влияние на выработку антител, тогда как, по данным К.Х. Кам шова, И.И. Алексеевой и др. (1989), в опыте на морских свинках под возденет г.нем. дибазола синтез антител начинался в более ранние сроки, а скорость гтрастания антител, по сравнению с контрольной группой, привитой только вакциной из штамма 82, была значительно ."ыше,

К сожалению, авторами не изучен иммунитет у животных, привитых как со стимуляторами, так н без них, что является основной оценкой иммуномо-дулиругощей. эффективности.

В опыте на морских свингах памп испытан новый иммуностимулятор ко-впдон в сравнении с ранее изученными. При этом в качестве вакцины применяли ниагглюгииогеиный штамм 16/4 В. abortus, который по данным П.А. Трилеико (1976), утратил в генетическом коде свойство реверсировать в S-форму бру-целл. Однако, наши предыдущие наблюдения, а также полученные результаты в данном опыте позволяют усомниться в стабильности штамма, поскольку в его антигенной структуре обнаруживаются S-компоненты,

В отличие от опыта на кроликах, в данном эксперименте получены несколько иные результаты. Так, например, испытуемые иммуномодуляторы вы--зывали кратковременную активизацию гуморальных факторов иммунитета на 21-й день после вакцинации. При этом средний уровень -.антител в группах животных, привитых вакциной с ПВП и ковндоном (2,27 ± 0,72 и 3,1 ± 0,0 соответственно), был недостоверно выше в 1,4-1,9 раз (Р > 0,05), чем у животных, привитых только вакциной (1,6 ± 0,0). Количество реагирующих кроликов в

этих группах было также в 4-5 раз выше, по сравнению с группой, иммунизированной вакциной без иммуномодуляторов.

О наличии у штамма 16/4 8-компон<Ч1тов свидетельствовало выявление адекватных антител с помощью РСК и РНГА после вакцинации.

После заражения у животных, привитых вакциной с ковидоном, фиксировали увеличение титра антител в 2 раза, по сравнению с группами животных, вакцинированных с щшвермом, ПВП и контрольной (нспривитые кролики). При этом уровень напряженности иммунитета был на 17 н 42 % соответственно выше у особей, привитых с ПВП н ровидоном, чем у животных, иммунизированных только вакциной, при заражении всех животных в контроле (интактные животные).

Доза, нилверма 5 мг/кг массы и данном случае оказала на морских'свинок цммунодепрессантное действие, понизив нимуногенность вакцины из штамма 16/4 на 33%. Б связи с этим, по-видимому, ш.шупомодулнругошне свойства стимуляторов зависят не только от дозы, но ц от вида животных и применяемых вакцинных штаммов.

Изучив в лабораторных условиях в качестве иммуностимуляторов 8 препаратор, отобрали нз инк два ранболее эффективных, доступных н экономичных - ннлверм н ПВП и испытали их в двух опытах на телятах 5-б-ти месячного возраста. Стимуляторы применялись в сочетании с вакциной цз штамма 19.

При серологических исследованиях отмечали быстрое повышение уровня антител в группах животных, вакцинированных с нммуномодуляторами на 14 - 21 день, в отличие от постепенного нарастания их у телят, кммунизйпованных только вакцнцой. При этом уровень агглютининов и гемагппотииннов у животных, привитых вакнтцюй в сочетании с нндвермом, увеличился в 1,9 раза, а с Г1ВП - соответственно в 2 и 1,6 разя, по сравнению с группой телят, которым вводили одну вакцину, Б этн же сроки выявлена и более высокая активность фагоцитов в группах, привитых с йммуномодуляторами. Так, опсонофатоцитар-ный показатель (ОФП) н опсонофягоцнтарное число (0|+»Ч) были соответственно в 1,6-},7, в 2,6-2,7 раза выше, чем у животных, пртитых вакциной без иммуностимуляторов.

По результатам бактериологических исследований культур; 1 бруцелл выделены п группах животных, привитых только вакциной, в первом опыте у од-

ного (ИИ=9,0), а во втором у двух животных (ИИ=5,4). Соответственно в первом опыте было 75, а во втором 60% иммунных животных. Тогда как все телята, вакцинированные с иммуномодуляторамп, противостояли заражению при 100%-нон инфицнрованностп животных контрольных групп с ИИ, равным 19,019,4 (Табл. 2.2.2.1.1.).

В данных опытах на крупном рогатом скоте сочетание применения стимуляторов с бруцеллезной вакциной из шт. 19 повысило ее иммуиогенность на 2540%. При этом повышение уровня напряженности иммунитета связано с активацией стимуляторами фагоцитов, что зарегистрировано в ОФР.

Таблица 2.2.2.1.1.

Характеристика групп Количество (10.Г.) Сроки (дни) Заразилось выделено к\;и.т\р ИИ % иммунных

ОПЫТ 1

1 шт. 19 +- ннлверм 5 60 0 0 0 100

2 шт. 19 + ПВП 5 60 0 0 0 100

3 шт. 19 4 ' 60 1 5 9,0 75

4 КОШ ро.ПЛШ:! (вакцину и стимуляторы ие пйодцдп) 5 60 5 13 19 0

ОПЫТ 2

1 шт. 19 + иилверм 5 60 0 0 0 Н)0

2 ШТ. 19 5 60 2 4 5,4 60

3 контрольная (нак-шшу и стимуляюры НС вводили) 5 60 5 13 19,4 0

В следующем опыте на телятах 5-6-ти месячного возраста изучали имму-номодулируюшую активность и механизм действия нового синтетического препарата ковидона при сочетанном введении его с вакциной из штамма 82. Установлено, что иммуномодулятор ковидон вызывает кратковременную активизацию синтеза антител на 7, 14-й дни После вакцинации, причем средний уровень антител в 2,5 раза выше в группе животных, привитых вакциной с ковидоном. Через 28 дней после иммунизации В сочетании с введением иммуностимулятора антитела в стандартных тестах РА и РСК не обнаруживали, т.е. ковидон не осложняет диагностику бруцеллеза.

В механизме повышения напряженности противобруцеллезного иммунитета участвуют Т- и В-клетки. При этом их уровень увеличивался после вакцинации и заражения во всех группах, но наиболее, интенсивно в группе животных, привитых вакциной с ковидоном. Так, перед зараженйей относительное и

абсолютное количество Т-лимфонитов в группе, привитой с ковидоном, было равно 66,07±2.03% п 3,80 +0,20 г/л, а после заражения - 75,80±0,80% п 5,26+0,34 г/л, соответственно (Р=0,004 и Р=0,01). В группе животных, которым вводили только вакцину, уропень Т-лимфоцитов был ниже и составил 53,75±0,25% (2,86+0,14 г/л) и 29,5+0,60"» (3,0±0,20 г/л) соответственно, где Р<0,05. Относительное и абсолютное количество В-лимфоцитов перед заражением в группе животных, иммунизированных с ковидоном, составляло 19,50±2,50% (1,70+0,30 г/л), после заражения 32,60+0,40% (3,8010,20 г/л), Р<0,05, тогда как у животных, которым вводили только вакцину, уровень В-лимфоцитов после заражения был ниже и составил 28,5+0,60% (2,0+0,20 г/л) соответственно, при Р<0,05). Важную роль в кооперации Т- и В-клеток играют А-клетки, которые выделяют медиаторы, улавливаемые в РТМЛ. Причем наибольшая функциональная активность лейкоцитов отмечалась в группе, вакцинированной с нммупомодулятором (процесс торможения миграции лейкоцитов наиболее выражен в группе животных, привитых с ковидоном, который до заражения был равен 4,0+0,89, а после заражения - 21,0±4,19, Р=0.008>.

После вторичного контакта с бруцеллами, на фоне выраженной функциональной активности лейкоцитов, реакции фагоцитоза, по сравнению с первичным контактом, снижались, Вместе с тем в группе животных, иммунизированных вакциной с ковидоном, эти показатели были также более выражены (ФА -52,0±4,3; ФП - 13,0±1,02; ФЧ - 7,0+0,21; ФИ - 9,5±0,29, Р<0,05), чем у животных, привитых только вакциной (ФА - 32,0+3,08, Р=0,07; ФП - 8,5+1,2, Р=0,02; ФЧ -3,04+0,42, Р=0,001; ФИ,- 8,5+0,09, Р=0,00|). Иммуномодулятор ковидон, дополнительно к специфическому раздражителю, стимулирует 'Г-, В- и А-клетки иммунитета, ускоряет миграцию Т- и В-лимфоцитов и их кооперацию в иммунном ответе. Под его воздействием происходит активация синтеза антител и фагоцитоза. В результате чего усиливается элиминация бруцелл из организма животных. Причем обсеменешюсть органов и тканей бруцеллами уменьшились в 2 раза, по сравнению с контрольной чрунпой.

с

Введение ковпдона с вакциной усилило активацию иммунокомпетентных клеток, что привело к повышению уровня напряженности иммунитета, индуцированного вакциной из штамма 82, 1Ш 25% (Табл. 2.2.2.1.2.).

Таблица 2.2.2.1.2.

Оценка эффективности препарата ковпдона _при изучении иммунитета у телят_

№ Группа Количество Зарази- Быделеио Р группы от % иммунных

п/н Голов лось культур контроля животных

1 шт. 82 4 2 5 0,008 50

2 шт. Н2 + ковидон 4 1 4 0,18 75

3 ковидон 3 3 14 0,19 0

4 контроль (вакцина и ковидон не вводилась) 4 4 30 _ 0

В строго контролируемом производственном опыте, проведенной на базе колхоза им. Кирова Павлодарской области, на быках в возрасте 14-15 месяцев изучали влияние препаратов левамизола и ковпдона на иммуногенность противобруцеллезнои вакцины из штамма 19, а также сравнивали между собой их иммуномодулирующую активность.

Для проверки напряженности иммунитета в условиях производства не приемлемо применение с этой цёлью вирулентных штаммов бруцелл.

Вместе с тем известно, что вгкцина из штамма 82 В. abortus обладает достаточно выраженной остаточной вирулентностью и контагиозностью, а также некоторыми отличительными от вакцины Из штамма 19 свойствами (по характеру роста, антигенной структуре, чувствительности к пенициллину м окраске колоний по методу Уайт-Внльсона), что дает возможность идентифицировать штамм 82 от 19.

В связи с этим для изучения иммуномодулирующей активности ковидо-на и левамизола через 60 дней После прививки штаммом 19, быкам в качестве "заражающего" агента вводами вакцину Из штамма 82 в двойной от профилактической дозе (200 Млрд м.к.). После инокуляции Вакцины Из штамма 19 гуморальные факторы иммунитета были наиболее выражены на 15-й день. Иммуно-модуляторы в сочетании с вакциной усчлили ее антигенность, что сопровождалось повышением уровня агглютининов и гемаплютннинов, который на 1530-й день превышал таковой в группе привитых только вакциной в 2-2,4 раза соответственно. Относительно применения левамизола наши данные согласу-

ются с результатами, полученными С.С. Chukvvu (19?2, 1985) и противоречат данным N.W. Confer et al.(1985), которые при одновременном введчиш левнми-зола и вакцины из штамма 19 ие отмечали повышения уровня антшп у бычков.

Па 60-ii день после вакцинации количественные и качествен: iue показатели серологических реакций во всех группах снижались. Вместе с тем, реакция фагоцитоза была выражена в более поздние сроки - на 30, 60 дни. Так, на ЗО-ii день ФЧ, являющееся одним из основных показателей напряженности иммунитета, в 2-3, а ОФП а 1,3-1,6 раза соответственно выше в группах жилетных, иммунизированных штаммом 19 с леваМизолом и ковидоно*, по сравнению с группой животных, привитых одной вакциной. Существенны.; различий в показаниях ФАЛ не отмечали. Через 60 дней после вакцинации ФЧ в 1,7-2,5, ОФП в 1,25-1,8 раза, а ФАЛ на 15-20% соответственно оказались выше в.группах животных, привитых с нммуномодуляторами.

При проверке степеж! напряженности иммунитета установили те же закономерности в синтезе антител. Так, на 15-й день после ввеглшя в качестве "заражающего" агента вакцинного штамма 82. количество реагирующих и уровень антител выше у животных, привитых с иммуномодуляторамп. На 30-й день показатели серологических реакций в опытной и контрольной группах снизились и была примерно на одном уровне, тогда как фагоцйтариай реакция, наоборот, в этот срок наиболее выражена.

При сравнении результатов бактериологических исследований с показателями фагоцитоза явно прослеживается то, что ФАЛ находится в прямой зависимости с уровнем напряженности иммунитета. Так, если ФАЛ в 1-й группе (шт. 19) составила 60%, во 2-й (шт. 19 + левамйзол) - 90%, в 3-й (шг.19 4 коИдоц) - 100%, то степень напряженности иммунитета соответственно йь та 70, 90 и 100%, при 'выделении у Всех контрольных животных вакцнНИото н!Ьмма 82 с ИИ, равным 19 (Табл. 2.2.2.1.З.).

Относительно эффективности сочетаниого применения с вакциной лева-мнзола наши данные совпадают с результатами Исследований, нолучсШП.г при введении левамнзола с химическими вакцйнамИ (П.Е. Игнатов, НИ. Блинов и лр., 1983; В.И. Белобаб, К.А. Кашкинбаев, В.Б. Тен, 1985).

На основании результатов исследований, полученных в даНиом опыте, нами показано, что с помощью стимуляторов ковйдойа м дейамизода в сочета

Таблица 2.2.2.1.3. Определение иммунитета у быков, вакцинированных _______со стимуляторами и без них _ • '

Группы Исследовано (гол.) Выделены культуры вакцинного штамма 82 Степень иммунной защиты

от гол. всего ИИ ' в%

1. шт. 19 10 9 5,6 70

2. шт. 19+левамизол 10 1 . 3 1,9 90

3. шт. 19+ковидо» 10 0 0 0 100

4. контрольная (викцшга и препараты не вводились) 10 К) 30 19,0 .0

цни с вакциной из штамма 19, а также с любой другой вакциной, можно в короткие сроки (60 дней) создать прогивобруцеллезный иммунитет высокой напряженности. При этом наиболее активен из них первый. Испытуемые препараты левамизол и ковидои, при введении с вакциной Из штамма 19, повысили ее иммуиогенность на 20 и 30% соответственно. Усиление напряженности проти-вобруцеллезной защиты' осуществляется .за счет активации гуморальных и клеточных факторов иммунитета. При этом между ними выявлена обратиопро-порциональная зависимость. Так, после кратковременного на 15-30 день увеличения синтеза антител, к 60-му дню наблюдается их спад и на этом фоне усиливается фагоцитоз. Степень напряженности иммунитета находится в прямой зависимости от активности леикоцптоа. Причем, для изучения иммуцомодули-руюшей активности препаратов и производственных условиях можно в качестве "заражающего" агента применять вакцину из штамма 82 в Двойной, от профилактической, дозе (200 млрд м.к.).

2,2.2.2. Изыскание штшбактершиышх препаратов, способствующих хшшиищпи бруце.и и I (¡¡ишшщи инфицированных животных Вторым важным фактором для поддержания биологического равновесия в системе паразнто-хозянпных отношений ¡шляется воздействие протчвомикроб-ными препаратами на паразита с целью ослабления или полной утраты им вирулентных свойств, с последующей его элиминацией из организма хозяина.

С этой целыо в 7-ми опытах испытано 13 препаратов на различных видах лабораторных животных, инфицированных в дозах от 50 м.к. до 10 ¡ыс. м.к. бруцелл вирулентного штамм а 54. При ном изучали дозы препаратов, интервалы и кратность между введениями.

Эффективность препаратов оценивали но степени элиминации бруцелл из организма зараженных животных. Установлено, что наибольшей эффективностью обладают препараты Л и Б, применяемые как раздельно, так ч в сочетании друг с другом и стимулятором ПС-1. Они, в зависимости от инфицирующей дозы, л 60-100% случаев освобождают организм морских спинок и мьнгей or бруцелл.

Препарат Бр-1, в зависимости от его дозы, кратности введения, способствует элиминации бруцелл у 60-75% крыс.

Бнолитичёскпй комплекс БК полностью освобождает организм Животных от возбудителя бруцеллеза.

Препарат?,i - D-2, Б-4, 82-К, рифамнишш имеют меньшую эффективность, они элиминируют ируцеллы у 20-40% зараженных животных.

Остальные препараты - Б-1, Б-3 и Б-5 оказались Ue эффективным!..

Нами показано, что лучшей моделью для получения более демонстранта пых результатов при испытании антибактериальных препаратов, также как и стимуляторов, являются мыши линии CC57Br/Mv.

Из испытанных препаратов дальнейшему изучению подвергли три наиболее эффективных и перспективных - А, Б и БК. Механизм действий препаратов Б и БК на микро и макроорганизмы известен из данных литературы, в отношении действия препарата А на бруцелпы таких данных нет. В связи с этим изучили механизм действия препарата A in vitro.

Установлено, что бактерицидное действие препарата А обусловлено наличием в его химическом строении днамидиноьой груЬНЫ. 0 растворах с концентрацией 1% и более он действует на колонии бруцелл аналогично действию трнпафлавшгё, т.е. агглютинирует культуру.

Выращенные на чашках Петри вакцинные (19, 82) и вирулентный (54) штаммы В. abortus после воздействия на них (% раствора препарата А. (экспозиция 20 мин.) подверглись коагуляции.

Также выявлено, что препарат А обладает выраженными бактерицидными свойствами по отношению к бруцеллам в концентрациях Ot 1 До 0,001% Н бак-териостатическими свойствами в концентрации 0,0001%.

Высокая активность препарата даже в малых концентрациях объясняется тем, что при. его растворений гидрокенльные ионы воздействуют па двойную

связь яэота в амидииовой группе,, что приводит к .созданию эцольной формы грепарата, которая обладает высокой проникающей способностью и, вероятно, действует на цитоплезматическую мембрану и кннетопласт ДНК микробов, раз-ру тая их. Наши предположения были подтверждены при электронноскопнчё-ском исследовании ультраструктурных изменений в клетках под воздействием различных концентраций препарата А.

Принтом 0,001%-ная его концентрация вызывает структурные изменения у 40% клеток популяции бруцелл, а 0,01%-ная - глубокие морфологические изменения у 95% клеток, носящие необратим1.!Й характер.

В опьпе па крупном рогатом скоте, искусственно зараженном 200 млн «.к. бругелл штамма 54, подтверждены высокие, санирующие свойства препаратов. При этом эффективность препаратов А и Б составила 80%, а БК - 100% (Табл. 2.2.2.2.1.).

Таблица 2-2.2.2.1.

Эффективность гфотнволшкробиых препаратор при эксперн.шштзльцом бруцеллезе крупного рогатого еиотэ

№ Схемы введен -.я, Исслед. Выделено Форма бру- }1П Степень элими-

п/п препаратов голо» брунелл, % hc.'l'i ; нации, %

1 А+А+А '

интервал 10 дней 5 20 . S 1,3 80

2 Б+Б+Б

интервал 1(\дней 5 20 R 1,3 80

3 ПК

(однократно) " 5 0 - 0 100

4 Контроль (плацебо, фи?. ¡>р) 5 100 ■ S > 0

Известно, что липосомы активно поглощаются клетками РЭС. В связи с этим было сделано предположение, что их можно применять для лечения некоторых паразитарных заболеваний, при которых микробы обитают внутри макрофагов (Gregoriadis, 1973; С, Dees, M.W. Fonlam, l.R. Taylor, R.D. Schultz, 1985; T. Heriiandez-Caselles et al., 1989; P. Nicoleti et al.,1989).

Получив положительные результаты испытания препарчтов А, Б и БК, нами тем не менее отфеделеча возможность заключения двух из них (А и Б) в состав липосом н методом пате'Морфологических исследований в опыте пи морских сшнтад изучено влияние препаратов на :.}иаиы, ткани и иммунную систему животных.

При этом показано, что липосомнын препарат А оказывает бактерицидное действие па бруцеллы, о чем свидетельствует слабо выраженные грану-лематоз. Также несомненна п его определенная токсичность на органы ¡м морских сипнок. Однако патология, индуцированная его трехкратным применением, не опасна для жизнедеятельности животного организма.

Препарат А, вводимый в составе лппосом и без них, не подавляет иммунную систему, а наоборот стимулирует ее. Причем стимулирующий эффект наиболее выражен при введении препарата вместе с нммуномодулятором, о чем свидетельствует гиперплазия Т-завнспммх зон селезенки и лимфатических узлов, а также гипертрофия периартериальных яимфоидных футляров.

Тетрахлорид, который вводили без добавления к нему других компонентов, входящих в состав препарата Б (кальция глюкопата, магния хлорида, аскорбиновой кислоты, дпметилсульфокснда, новокаина, 1,2 прошшеиглнколя, соляной кислоты) не оказывал существенного влияния на развитие инфекционного процесса. Вместе с тем он вызывал глубокие дистрофические изменения и органах и тканях морских свинок.

Тетрахлорид, также не зависимо от формы его введения (в свободном виде и в составе лшшсом) подавлял иммунную систему. При этом результаты наших исследований согласуются с данными других исследователей (И.Е. Мозгов, 1985). .

Способ транспортировки лекарственных веществ путем заключения их в липосомы снизил их токсичность и реактогенность. Однако нам не удалось создать в организме морских свинок бактерицидную концентрацию препаратов, вводя их таким способом. При этом линосомпые препараты А п тетрахлорпд на 10-25% снизили активность свободного А и комплексного препарата Б. Вместе с тем данное направление перспективное и требует дальнейшего болеб глубокого изучения в плане Индивидуальной доставки лекарственных препаратов к заданному органу.

Препарат А, вводимый подкожно со стимулятором, обладал достаточно высокой внутриклеточной проникающей способностью, эффективное- ью (степень элиминации бруцелл 75%) н иммуностимулирующими свойствами.

2.2,3. Ilj>oiitneojiuriiji;i!!ii'jtiKi!>i ярфехтиаиоащ, разри&отаиных на основе новых мехшшшои искусственной рцгулпциц парицито-холюнных отношений схем использования иимуномидулнпюров и аипшоакпири сильных прашрчпюа в системе оздоровления неблагополучных по бруцеллезу стад крупного рогатого скоща.

Положительные результаты изучении препаратов А, Б и БК при экспериментальном бруцеллезе на лабораторных и крупных животных послужили основанием для их испытания в производственных условиях в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах.

В связи с этим, с разрешения J У В МСХ РФ проведено их 'испытание- в 14-ти хозяйствах 4-х областей с различной эпизоотической ситуацией бруцеллеза. Результаты обобщенных исследований представлены в таблице 2.2.3.1.

• Таблица 2.2.3.1.

Цспцтание протнвобруцеллезных препаратов р Производственных условиях

№ п/и Хозяйства Сроки Неблагополучия (год) Нр01'алс1ШК)1га на 100 жпп-к Схема применения препаратов C|"f)K 0-}ДороЬ-ЛСШ1Я (1ОД|

1 с-з Трофимовскнй '2 12 А+А+А. К+Б+Б, Б К 1.5

2 с-з Еёрезорскин ■2 ■'■ 10 Б+Б 1

3 с-з им. Кирова ■3 35 А+А+А 1,5

4 с-з Качирский 1 ' 5 А+А+А, А+А ■ 1

S с-з Плодородный 2 32 А+А+А 1

б к-э Победа :■ 2 40 • БК 1

7 с-з СеверныГ! ■ г "7 ■ А+А 1

8 с-ч Минский (юол*гор> 7 too А+А 1,5

9 С-З Циэовский (В)ОЛЯТОр) >10 100 А+А+А, А: 2

10 К-з Заря 2 5 А+А+А,А+А <1

И с-з Яркульский 2 . : 7 ■ А+А 1

12 КП Ноэосельское 23,5 А ' '2

M АО Крутоярское 7 40 А не спдороьмно

14 • с-з Мийхски»! 7 9,5 А 2 :

В и р о и зв одеть сипом опыте на 70-ти коровах в совхозе "Трофимовскнй" • установлено, что введение больным животным противобруцеллезных препаратов А и Б через 105 дней сокращает число реагирующих в 3-5 раз, а под действием ЦК они полностью» исчезли. Активность препаратов подтверждена отсутствием роста бруцелл иа питательных средах из биологического материала от опытных и высевом вруиелл пг 60% контрольных животных. Введение коров, обработанных препаратами, в- общее стадо не вызывало всплеска серологиче-

ских реакции и абортов. Через 6-9 месяцев после прививки таких животных вакциной изштамма 82 реакции утрачивались полностью.

Применение неспецифическнх средств борьбы п общем комплекс^ оздоровительных мероприятий позволило по 18 месяцев сократить сроки снятия карантина с хозяйства.

В совхозе "Березовский" в опыте на 37 коровах изучали препарат Б. При этом также показана его активность. Тик, при бактериологическом исследовании от опытных животных бруцеллы не высевались, тогда кик в контрольной группе (препарат Б не вводили) от 40% животных выделены бруцеллы полевого штамма. Введение обработанных препаратом животных в общее стадо также не вызывало всплеска серологических реакций, абортов и рождения Мертвых плодов, а реакции угасали, как н в первом случае, через 6-9 месяцев после иммунизации вакциной из штамма 32.

В совхозе "Плодородный" при проведении опыта на 47 коровах установлено, что через 30 диен после трехкратной обработки препаратом А количество реагирующих животных сокращается в 3,3 раза.

При бактериологическом исследовании отмечали отсутствие бруцелл у опытных и выделение у всех контрольных животных t высоким НИ от 40 до 80. Коров, обработанных препаратом А, как ii в предыдущих случаях, Ввели в общее стадо, а через 60 дней вместе со всеми привили вакциной Нз штамма 82. В посТвакшшальнЫй период зафиксированы единичные случаи положительно, реагирующих животных в РСК. Среди них не обнаружено коров, которые вво-■ пили препарат. В конце года с совхоза был. снят карантин Но бруцеллезу.

Совхоз "Качирский"' считался благополучным по бруцеллезу. Вместе г тем в хозяйстве ежегодно регистрировалось 5-7% положительно реагирующих животных. Нами была выделена культура бруцелл полевого штамма Из ябортп-лода коровы. В производственном опыте па 18 коробах, реагирующих положи-. тельно по РА и РСК, применяли препарат А трехкратно, а 288 животным ском-прометнрованного поголовья препарат вводили двукратно. Черё! .10 дней после введения дополнительно выявлено 12 коров, Нз нНх 9 в высоких ТйТрйх РА. Животных изолировали и сдали на убой. При бактериологическом исследовании у опытных животных бруцеллы не высевались, тогда как в контрольной группе у 60% коров были выделены полевые штаммы бруцелл. Йсех отрицательно реати-

руюши" при -или вакциной из штамма 82. В поствакцпцальный период регистрировались единичные животные в низких титрах РА, дифференцированные по результатам исследования молока в KP, ИФА и крови в РИД с ОЛС-аиыгеном как постцакцинальные. Хозяйство было оздоровлено за один год. Вместе с тем двукратное введение препарата А скомпрометированному гго бруцеллезу поголовью выбывает положительные реакции у 4,2% животных, что, по-видимому, связано с наличием в таком стаде бактерионосителей, обработка которых препаратом приводит к шаэрушеншо бруцелл. Образующиеся при этом антигенные комплексы циркулируют п крови и стимулируют синтез антител высокого уровня.

В кслхозе "Победа" поставили опыт на 100 коровах, из которых 50% было стельными. При этом при контрольном убое до проведения опыта от одной из 4-х коров выделена культура бруцелл полевого штамма. Всем подопытным животным (90 гол.) вводили,однократно препарат БК на фоне естественного течения бр>иеллсза н иммунизации вакциной из штамма 82. Установлено, что введение препарата через 3 месяцев после прививьи животных вакциной по . "пестрому" фону (наличие поствакцинальных и реакций бруцеллезной этиологии) в первые 2-4 месяца после его введения усиливались гуморальные факторы иммунитета.

При этом число реагирующих животных в высоких титрах РА увеличивается с 31 до 93% от количества исследованных. К 6-ти месяцам после введения препарата (11 месяцев после вакцинации) реакции сохраняются в низких титрах ■ у 10% животных. Эффективность препарата доказана результатами бактериологических исечедований (отсутствие бруцйтд у опытных и высев бруцелл у 50% из . 10-ти контрольных животам*)/ Введение препарата предотвратило аборты и рождение мертворожденных у стельных животных и, как следствие, диссемина-• Ш(ю бруцедо!» окруядаощей среде, прорыв иммунитета и новую вспышку бру-цедяеза о данном хозчретве.

Совхоз "HmójCKHfi" - неблагополучный По бруцеллезу на протяжении 20-ти лет. Для графилактики бруцелдонасительства вводили препарат ¿. трех. кратно 511 корорам на 3-х фермах - Б. Красцоярка, Гузецево и Юдино, а ЬДО-м животным, реагирующим отрицательно, но имевшим контакт с больными, nj епарат вводили однократно. При этом через месяц после введения из них pea-

гировало 30 (5%), из которых К) убили для бактериологического контроля па эпизоотическую опасность таких животных. В ранние сроки (до 40-го ;т>,) после трехкратного введения количество реагирующих коров сократилось в 1.5-'' ^аза, а в более поздние сроки (90-113 дней) в 2-3 раза, со значительным снижением высокого титра чнштел в РА -400 МН н РСК - 1:20. При бактериологическом исследовании у обработанных трижды препаратом А бруцеллы не высевались. У контрольных животных выделены бруцеллы у 3-х (30%) из 10-ти, а Также у 20% от коров, которым препарат вводили однократно, что указывает на бруцелло-носительство как среди явно больного, так и у скомпроме~пров иного по бруцеллезу скота. Через (0 месяцев после прививки вакциной из штамма 82 в данном стаде реагировали единичные животные, а на 11, 12 месяцы реакции не регистрировались. Хозяйство было оздоровлено за 2 года. Эффективность применения препарата составила в Юдино - 67%, ГузеНево - 72% и п Б. Краснояр-ке - 83%.

Совхоз "Мысовскнй"; ферма Черталы (бывиий изолятор) - выявили 172 коровы с положительными реакциями, котопых изолировали от отрицателъго реагирующих животных. Препарат А вводйлй три раза реагирующим и однократно животным с отрицательными реакциями. На 40-й день После введения препарата количество животных с положительными реакциями уменьшилось только на (5%, а число реагирующих в высоких титрах 400 ME » выше в 2 раза. После однократного введения препарата в этот же срок отрицательно реагирующим, но скомпрометированным по бруцеллезу животным, выявлено дополнительно 35 коров, с которыми поступили Также, как н в первом случае, i.e. трехкратно обработали препаратом. Общее количество санированных увеличилось до 207 голов. Спустя 90 дней после трехкратной обработки коров препаратом число реагирующих уменьшилось в 2 раза, а титры антител в РА и РСК снизпись в 2.5 раза.

Ферма Мыс. При исследовании 724 корой выявили 28 положительно реагирующих, которых изолировали в Черталы, остальных, отрицательно реагирующих* привили вакциной из Штамма 82. Через 3 месяца после вам .птцпн ¿се Дойное стадо проверили по КР с молоком. Выявили 36 годов,, которых Также разместили на ферме в Черталах. Все 64 коровы были трижды обработан^! препаратом А. По истечению 7-ми месяцев после вакцинации реагировало поло-

жнтельно 158 животных, из них в РА - 400 МБ и выще 51%. Резкое увеличение числа реагирующих коров, по-видимому, было связано с провокацией вакциной латентной формы бруцеллеза и обострением инфекции, которая на фоне остаточного иммунитета ■ (через 2 года после вакцинации шт. 82), протекала без клинических признаков. Всех положительно реагирующих коров (158 юл.), из которых 70-80% имели б- 7-ми месячную стельность, изолировали от отрицательно реагирующих н трижды обработали препаратом А, а 766 животных с отрицательными реакциями, контактировавших с больными коровами обработали однократно. Через 43 дня после трехкратного применения препарата число реагирующих животных снизилось в 13 раз, а количество коров с положительными РА в высоких титрах (400 ME) уменьшилось в 9 раз. В эти же сроки у i30 животных (17%) из 766 однократно обработанных препаратом появились положительные реакции, Вновь выявленные коровы были изолированы и обработаны уже трехкратно препаратом А. Во всех случаях после введения препарата аборты не регистрировались. Для бактериологического контроля активности, препарата и определения эпизоотической безопасности санированных жи-

. вотных провели бактериологическое исследование биологического материала от 7-ми опытных и 5-ти контрольных (не санированных) животных. При этом у коров, обработанных препаратом, бруцеллы не высевались, тогда как у 40% животных из контрольной группы выделены культуры бруцелл полевого диссо-цианта.

• Показано, что трехкратное в течение месяца, введение препарата А со-

• кращает количество реагирующих на бруцеллез животных при хроническом течении В 2-3 раза, н при обострении инфекции - и 13 раз. Однократное же введе-

: час препарата отрицательно реагирующим, но контактировавшим с больными провоцирует положительные реакции у 5-20% животных, являющихся бруцел-

• поносителями, эии?оотическая опасность которых была установлена ранее на примере других хозяйств' Ç совхозе "Мииский" в производственном опыте на пункте по передержке

больно^ скота находилось 300 коров. Бруцеллез протекал остро с массовыми абортами. Двукратное введение препарата А купировало инфекцию и аборты прекратились. Через 2 месяца после санации число реагирующих животных уменьшилось в 2 раза, По анализу серологических реакций из них эпщоотиче-

ски опасными признана 4! голова (18,5%) or исследованных (300 гол.), которых сдали на убой. Все оставшееся поголовье привили вакциной из штамма 82. Через 3 и 6 месяцев провели исследование молока по КР для определения активности препаратов. При этом реагировало 5% (13 гол.) и 3% (7 гол.) соответственно. Спустя 9 месяцев после вакцинации исследовали сыворотку крози от даииых животных в РА. Выявлено 4% (10 гол.) коров с позитивными реакциями, которых сдали на убой. Через 11 месяцев после прививки реагировало в РА и РСК 3 головы (1%), которых убили в хозяйстве и провели бактериологическое исследование взятого от них патологического материала. Культуры бруцелл ие были выделены. Все оставшееся поголовье С220) реиммунизнровали внкцииой из штамма 82 по отрицательному серологическому фону.

В данном хозяйстве показано, что даже двукратное применение препарата А, в состав которого входит и иммуностимулятор, в стаде с клинической формой течения бруцеллеза прерывает аборты и в течение 1 -2-х месяцев полностью купирует распространение инфекции.

При этом противсшшзоотнческая эффективность препарата составила 81,5%. '

В колхозе им. Кирова было обработано трехкратно препаратом А с иммуностимулятором 700 коров. Из них 180 реагирующих и 520 скомпрометированных по бруцеллезу. Количество реагирующих уже через 2 месяца снизилось в 4 раза по результатам исследования крови и в 2 раза - молока. Вакцинация предварительно санированного поголовья вызывало активную иммунную перестройку организма. При этом через 8 месяцев после иммунизации arniioimnmbi сохраняются в организме лишь у 8% животных. Показана эиизоо.ическаг безопасность санированных животных. Так, на протяжении íí-мн Месяцев не отмечалось появление новых положительно реагирующих животных и абортов бруцеллезной этиологии. Сохранение положительных реакций у отдельных животных, по-видимому, связано со свойства"" иммуностимулятора и противо-микробного препарата, которые в разной степени, а зависимости от индНвнду-¡шьиых.особенностей, способствовали активации нммунной críctéMbi в борьбе с возбудителем бруцеллеза. Отсутствие положительных находок При бактериологическом исследовании у реагирующих после санацнй животных указываем На отсутствие в организме у данных особей жизнедеятельных форм бруцелл. Вме-

ere с тем в крови у них обнаруживаются антигенные детерминанты, присущие эпизоотическому штамму бруцелл, улавливаемых в РИД с ОПС-антигеном,

В колхозе "Зарл" трехкратно санировали препаратом А 23 положительно реа< ируюлшх коровы, а 625 скомпрометированных по бруцеллезу - дважды. Через 1-2 месяца после трехкратной обработки число реагирующих коров снизилось в 2,6-2,9 раза соответственно. При бактериологическом исследовании от 4 ;с из 23-х ¡„цветных культуры, бруцелл не высевались. Среди животных, дважды обработанных препаратом, через месяц дополнительно выявлено 5 коров (0,8%), которые из-за низкой продуктивности были сданы на убой. Через 2 месяца после санации все поголовье реиммунизирорали вакциной из штамма 82. Поствакцинальные антитела обнаруживались у 0,5, 0,3% животных до 170 дня. На ¡90 день и в последующие сроки после ревакцинации положительные реакции не регистрировались. Хозяйство оздоровлено за 9 месяцев. Через год после вакцинации коров реиммунизировали но "чиешму" фону вакциной из штамма 82.

В совхоз "Яркульсхин" дважды обработали препаратом А все скомпрометированное по бруцеллезу поголовье (475 коров). Через месяц после санации выявлено ) 9 коров (4%), которых сдалн на убой, остальных животных с отрицательными реакциями привили вакциной из штамма 82. Поствакцицаль-ные антитела регистрировались до 9-ти месяцев в РА и РСК у 2% животных. С ОПСгантцгеном в РИД в эти же сроки реагировали единичные животные (1-3. гол:). Через 1( месяцев реакции угасли у всех жцвртнцх. Коров рсиммунизи-' ровшш вакциной ш штамма 82, как и в первом случае, через год по отрицательному серологическому фону.

В качестве контроля взяли колхоз "Береговой", где для оздоровления от бруцеллеза применялись аналогичные мероприятие, за исключением использования протнаомнкробного препарата с иммуностимуляторам. При этом со стандартными диагиосп'кумами в РА и РСК через 8 месяцев после вакцинации реагировало 50 голой (10%), Из них в РИД с ОПС-ацтигецом - 47, через 9 месяцев - 39 а.РА, РСК и 31 голова в РИД Реакции в патологических титрах сохранялись до 12-тн месяцев (срок наблюдения) у 5% животных, дифференцированных в РИД как реакции бруцеллезной этиологии.

При исследовании молока в КР от коров, принадлежащих совхозу "Северный", через 3-5 месяцев после иммунизации вакциной из штамма 82 коров Н первотелок, а спустя 6-7 месяцев и крови нами выявлено и сдано на убой 26 коров и 8 первотелок. С целью профилактики брунеллоносительства через 9 месяцев после прививки была проведена двукратная обработка препаратом А с иммуностимулятором всего скомпрометированного стада (403 гол.).

Через 3 месяца после санации (12 месяцев после вакцинации) все животные реагировали отрицательно и вновь были реиммунизированы вакцииоь из штамма 82.

При исследовании животных через 6 месяцев после ревакцинации реагирующих в диагностических титрах не обнаружено. Применение в об1нем комплексе мер борьбы с бруцеллезом на ряду со средствами специфической профилактики (вакцины Из штаммов 19, 82 по оптимальным схемам и интервалом 1 год между реиммушшщнямп коров) ({¿специфических' средств (противо-микробный препарат с иммуностимулятором), а также своевременное удаление эпизоотически опасных животных, позволило создать в стаде иммунитет высокой напряженности и предупредить вспышку бруцеллеза.

В свежем бруцеллезном очаГе АО "Крутоярское" с выделен"ем до 40% больных животных однократное введение препарата А и иммуностимулятора оказалось ие эффективным.

В бруцеллезном очаге со сроком давности 7 лет И выделением до 23,5% больных животных (КГ1 "Новосельское") однократное применение препарата А с иммуностимулятором перед вакцинацией способствовало элиминации бру-целл из организма животных и ускорило сроки "очистки" стада от инфекции до года после прививки.

В очаге бруцеллеза с таким же сроком давности и прйзалеНТНоСтыо 9,5 (совхоз "Маякский") аналогичная однократная обработка перед вакцинацией к 11 месяцам после нее полностью освободила оргайнзм животных от инфекции.-

В двух производственных опытах па телятах 3-5-тн Месячного возраста, проведенных в хозяйствах "Низбвский" и "Минский" установлено, что препарат А с иммуностимуляторами профилакТирует формирование эпизоотического штамма и снимает феномен толерантности у тедят, рожденных от больных бруцеллезом коров. При этом наиболее оптимальной схемой их применения явяя-

ется дву. - трехкратное введение с интервалом между введениями в 7-10 дней. Вместе с тем данный вопрос требует дальнейшего более глубокого изучения. Но даже те немногочисленные материалы, полученные в данных опытах, указывают на перспективность исследований в данном направлении.

ВЫВОДЫ

1. В целях повышения эффективности управления эпизоотическим процессом бруцеллеза необходимы новые механизмы искусственной регуляции пара-зито-хозяинных отношений при бруцеллезе, обусловленные параллельным воздействием на мзкрооргпцнзм вакцинами и пмму но модуляторам и для повышения уровня напряженности иммунитета и на микроорганизм - антибактериальными препаратами по оптимальным схемам, для ослабления или полной утраты им вирулентных свойств с последующей его элиминацией из организма животных.

2. С позиции концепции перманентного иммунитета наиболее рациональными являются слемы специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота, предусматривающие на фоне первичной прививки агглютино-тенными вакцинами ( штаммы 19 и 104-М - последний более перспективен в иммунологическом отношении), реиммунйзации слабоаггдютиногеннрй (щт. 82), или агглютшгогенпымн вакцинами, но в уменьшенной дозе. При этом удается создать иммунитет высокой напряженности на фоне непродолжительной се-ропозитивирсти. Интервал ренммуннзации телок 10, а коров 12 месяцев обусловлен угасанием к Концу этого срока иммунитета на всех уровнях ( гуморальный, клеточный).

,3. На лабораторных животных и крупном рогатом скоте доказана принципиальная возможность повышать уровень напряженности иммунитета против бруцеллеза на 17 - 66% с помощью сочетанного применения иммуномодулягоров (ПС-1, левамизол нилверм, поливинилпирролидон - 11600 Д, ковидон) с вакцинами различных типов (19, 82, 104-М, 16/4, АК-химической). При эгом уровень напряженности иммунитета находится в прямой зависимости от уровня фагоцитарной активности лейкоцитов. Идеальной лабораторной моделью при бруцеллезе являются крысы линии \\'АС)/0, которые, обладая одинаковой с морскими свинками чувствительностью к возбудителю инфекции, в отличие от них менее прихотливы К кормам и более плодовиты, а их иммунологическая од-

породность' повышает достоверность и равнозначность полученных результатов.

4. Перспективным иммуномодудятором является ковпдон, в основе механизма действия которого лежит активная стимуляция Т-, Л- и умеренная В-клеток иммунитета, благодаря которой не только повышается уровень гзиря-женностн иммунитета (в разных опытах па 25-42%), но ц усиливается элиминация бруцелл из организма зараженных животных, причем обсемснеиностъ органов н тканей уменьшается в 2 раза по сравнению с контролем, а кратковременное увеличение синтеза антител не осложняет диагностику бруцеллеза.

. 5. В качестве эффективной меры воздействия на возбудителя бруцеллеза, как одно из основных звеньев эпизоотического процесса, являются препараты, обладающие в различной степени бактерицидно» активностью в отношении бруцелл. При экспериментальном бруцеллезе препараты - Б-2, Б-4, 82-К, рифайпиции, А, Бр-1, Б, БК, примененные по различным схемам в 20-100% случаев, освобождают организм мышеи, крыс, морских свинок, крупною рогатого скота от введенных Им в разных дозах бруцелл.

6. Наиболее перспективным из препаратов, обладающих бактерицидной активностью в отношении бруцелл, являются Препараты А, Б, и БК (60 - 100% эффективности в экспериментах на лабораторных животных И 80 -100% lia крупном рогатом скоте).

7. Трехкратная санация препаратами А и Б больных бруцеллезом животных в условиях производства снижает через 2-3 месяца после их введения число реагирующих в 3-5 раз, а под действием БК они полностью Исчезают. Ш протяжении 8-11 месяцев совместного содержания санированных и здоровых животных, по результатам исследований стад, в них отсутствуют положительные серологические реакции и аборты бруцеллезной этиологии. Трехкратное в течение месяца введение препарата А животным оздораплийаемых стад сокращает-количество реагирующих на бруцеллез при хроническом течении в 2-3, а при обострении инфекции в 13 раз.

8. Однократное введение препарата А животным, tie реагирующим на бруцеллез, но контактировавшим с больными, провоцирует положительные реакции у-5-20% животных, бруцеллоносительство которых доказано бактериологическим, методом исследования. Препарат профилактируёг формирование

эпизоотического штамма в оздоравлцваемых стадах, что позволяет максимально "очиртить" их от инфекции, повысить напряженность иммунитета, ускорить сроки оздоровления хозяйств, в зависимости от конкретной эпизоотической ситуации до 1-2-х дет и исключить повторные вспышки бруцеллеза в течение 3-5-И1 дет (срок наблюдения/.

9. Противоэппзоотическая эффективность препарата А с цммуномодуля-тором зависит от кратности его введения, заболеваемости животных и течения ннф.кшш. Так, при трехкратном введении препарата животным с хроническим течением инфекции она составила 67-83%, а при двукратном с острым течением инфекции и масс0вь1ми абортами - 81,5%. При этом после обработки препаратом аборты у коров прекращались и в течение 1 -2 месяцев инфекция полностью купировалась. Однокь атное введение препарата животным, находящимся в очаге бруцеллеза со сроком давности 7: лет и выделением до 40%-тов больных - не эффективно. 0 аналогичных условиях, но с выделением до 23,5%-тов больных однократная превентивная санация животных перед вакцинацией, через 12 месяцев после нее уменьшила .количество реагирующих животных до 0,5%-, а при выделении 9,5% больных однократная обработка препаратом к этому же сроку полностью освободила животных от возбудителя инфекции.

10. В двух производственных опытах на телятах 3-5-ти месячного возраста, рожденных от больных бруцеллезом коров, показана возможность снятия у них феномена толерантности с помощью противомикробного препарата А и нммуномодуляторо» нилверма или левамизола.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты Исследований по экспериментальному обоснованию рацио-• нальных схем специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота вошли в материалы по опыту оздоровления хозяйств Сибири от бруцел-•леза крупного рогатого сота и научное его обеспечение (одобрен научно-техническим советам Госагропрома СССР 06.07.88 г.), а также учтены в проекте норой инструкции по борьбе с бруцеллезом животных и наставлении по применишь вакцины из штамма 82.

Методические рекомендации и наставления по применению пронншбру-целлезных препаратов и иммуномодуляторов одобрены I У В МСХ РФ 28.02,92 г., N 22-65/147 и Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 1 ¡.05.95 г.,

N 13-6/243 для производственного испытания. Разработаны рекомендации по усовершенствованию системы противобрунеллезных мероприятии с уметом применения антибактериальных препаратов и иммуномодуляторов для кон' рет-noii эпизоотической ситуации в различных регионах РФ (Утверждены Ученым советом ВНИИБТЖ 02.11.1995 г., подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока", 1996 г.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ, ОТРАЖАЮЩИМ ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Красиков А.П., Дегтиренко Л.В. Использование РА и ГН11Ф с R-аНтигенами для диагностики животных, сенсибилизированных диссоцнирова тшми фермами бруцелл // Науч. техн. бюлл./ ИЭВСиДВ, 1980, вып. 19. С. 8-12.

2. Дспяренко Л.В., Красиков А.11. Непрямой метод «ммунофлуоресиеиции ври изучении антигенном структуры бруцелл. - Там же. С. [¿-15.

3. Красиков А.П. Эритроцитарныи бруцеллезный R-диа ностикум дляГНГА // Науч. техн. бюлл./ ИЭВСиДВ, 1981, вып. 33. С. 6-8.

4. Депяренко Л.В., Красиков А.П. Диагностическая ценность R-антигенов для РА и РИГА при бруцеллезе крупного рогатого скота. Там же. С. 9-13. .

5. Красиков А.П. Испытание R-антигенов в реакции непрямой Иммунофлуорес-ценшш и непрямой гемагглютииации // В Kit. диагностика И профилактика инфекций сельскохозяйственных животных/Сб. науч. трудов'Сйб. отд.-йне ВАСХННЛ, 1981. С. 48-49.

6. Красиков А.П., Дегтярснко Л.В. Оценка диагностической ценности R-антигенов ИЭВСиДВ при бруцеллезе // Науч. техн. бюлл./ ИЭВСиДВ, 1981, вы*. 50. С. 12-15.

7. Оценка диагностической эффективности новых препаратов при бруцеллезе и инфекционном эпидидимите баранов (ИЭБ). H.A. Косилов, Л.В. Дегтярешсо, А.П. Красиков, II.П. Передереев // Научные основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов: ( Тез. докл. 2-й Всесоюз. конф.) - М., 1981. С. ¡83-135.

8. Красиков А.П. РНГА и РНИФ в диагностике бруцеллеза животных // Профилактика и диагностика болезней животных / Сб. науч. трудов ИЭВСиДВ, СО ВАСХ-ШШ, Новосибирск, 1983. С. И0-II5.

9. Красиков А.П., ДсгтяреИко Л.В., Красикова И.А. Определение классов IgM и IgO у живо .их, сенсибилизированных R-формами бруцелл С помощью РА, РИГА и РН11Ф//Науч. техн. бюлл./ИЭВСиДВ, 1983, вып. 31. С. 3-7.

10. Красиков Д.Г1. Этиологические факторы, влияющие на реактивность телочек при иммунизации их противобруцеллезиой вакциной из штамма 19 // Науч. техн. бюлл./ ИЭВСчДВ, 1985, выи. 32. С. 45-48.

11. Красиков А.Г1. Оценка диагностической ценности S- и R-бруцеллезных эрит-роцитарных днагностикумов в РИГА // Методы диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных / Сб. науч. трудов ВШШБТЖ, ВАСХНИЛ, 1988. С, 9-12.

12. Новицкий A.A., Красиков А.П., Панкратов С.А. и др. Иммунологический ответ организма телок ца введение различных доз лротивобруцеллезных вакцин из штаммов 82, 19, 104-М. - Там же! С. 17-26.

13. Красиков А.П., Поипцкни A.A. и др. Испытание некоторых препаратов на степень элиминации бруцелл из организма животных // Профилактика и оздоровление животных от туберкулеза и бруцеллеза /.Сб. науч. тр. ИЭВСиДВ, СО ВАСХНИЛ. -Новосибирск, 1988. С, 6!г67.

14. Понкратова Е.В., Красиков А.П. Испытание ряда препаратов при экспериментальном бруцеллезе // Роль науки в интенсификации сельского хозяйства I Материалы конф., Омск, 20 апреля, 1989 г.- ВАСХНИЛ, Сиб. отд.-ние СибНИИСХ. - Новосибирск, 1990,- Ч.III.: Животноводство. С- 70-71.

15. Стуказова ЕЛО., Красиков А.П. Изучение иммунитета у животных, сенсибилизированных различными противобруцеллезными вакцинами. Там же. С. 68-70.

Í6. Красиков А.П,, Новицкий A.A. Изучение некоторых стимуляторов при бруцеллезе // Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза и туберкулеза животных. /Сб. науч. трудов ИЭВСиДВ, Сиб. отд-ние. -Новосибирск, 1988. С. 33-38.

' 17. Красиков A.ÍI. Новые подходы к проблеме профилактики и борьбы с бруцеллезом животных /Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации ыеди-' цинекой помощи больным :.( Тезисы докл. Всесоюз- конф.)-М„ 1989. С. 201.

18. Красиков AJI., ¡Бронников B.C. Влияние иммунорегуляторов на нммуногеи-. нр.сть противобруцеллезных препаратов // Бруцеллез сельскохозяйственных животных /

Сб. науч! трудов ВННИ^Ж, ВАСХНИЛ. г Омск, 1989. С. 75-78.

19. Красиков Л,П., tluMNWIimÜ A.A., Поикратов« Е.р. Испьпание ряда препаратов для санации организма животных от возбудителя бруцеллеза. -Там же. С. 78-84.

20. Красиков A,IJ„ Поикратова ß.p. Изучение иммуномодуляторов при экспериментальном бруцеллезе лабораторных Животных // Общая и частная эпизоотология инфекциойнм* болезней сельскохозяйственных животных / Сб. науч. трудов Сиб. отд-ние ИЭЬСНДВ. - Новосибирск, 199р. С. 58-61.

21. Красиков Л.П., Горбунов В.П., Поикратова Е.В. п др. О влиянии стимуляторов на иммунитет при бруцеллезе крупного рогатого скота. Таи же. С. 61-66.

22. Красиков Л,П., Понкрато&а Е.В. Испытание химических препаратов при экспериментальном бруцеллезе крыс // Эпизоотология, диагностика и профилаюш-а туберкулеза и бруцеллеза животных / Сб. .науч. тр. Сиб. отд-ние ВАСХНИЛ - Новосибирск, 1990. С. 107-110.

23. Красиков А.П., Поикратова Е.Й. Использование в качестве модели при экспериментальном бруцеллезе ннбредных линий лабораторных животных II Пути совершенствования профилактики И диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных жкнот-ных/Сб. науч. тр. ВШШБТЖ, ВАСХНИЛ.-Омск, 1990.С. 123-127.

24. Новицкий A.A., Красиков А.П., Горбунов В.И. я др. Изучение иммунитета у телок, привитых различными противобруцеллезнымн вакцинами в полных и малых дозах. Там же. С. 68-71.

25. Красиков А.П., Маскасв H.H., Палева Г.11. Иммунитет у крупного рогатого скота, ренммунизнрованного разными дозами протнвобруцеллеэных вакцин из штаммов 19, 82 и 104-М /I Методы профилактики it диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных 1С б. науч. тр. ВНИИГ.ТЖ, ВАСХНИЛ, 1991. С. 24-30.

26. Красиков А.П., Ушаков И.К., Шепсен U.C. и др. Испытание противобруцел-лезных препаратов на крупном рогатом скоте в производственных условиях II Методы профилактики и диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных/ Сб. науч. тр. ВШШБТЖ, ВАСХНИЛ, 1991. С. 80-87.

27. Красиков А.П., Ушаков U.K., Горбунов В.И. и др. Применение протнвобруцеллеэных препаратов в общем комплексе мер борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота //Сб. науч. тр./ ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние ИЭВСиДВ, Новосибирск, !991.С, 60-64.

28. Красиков А.Г!., Поикрэтйва Е.В. Применение средств НеспеЦцфической имму-нокоррекции при бруцеллезе животных. (Материалы 4-ОЙ Всесоюзной конференции "Научные основы технологии производства ветерннарных препаратов", 23-24 апреля 1991 г.) - ВНШПиБП. - М„ 199!. C.56-J8.

29. Красиков -Aitl. Использование иммуностимуляторов при бруцеллезе животных. Там же. С. 59-60,

30. Красиков А.П. Противоэпизоотическая эффективность применения антимикробных препаратов в общем комплексе мер борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота // Тез. докл. З-ей Всесоюз, конф. по эпизоотологии. Новосибирск, 24-26 сентября, 1991. С. 169-170. ' ■'. "

31. Красиков А.П., Дртпмш А.А., Понкратва Е.В. и щ>. Применение иротиво-бруцеллезных препаратов в системе специфической профилактики и оздоровления от бруцеллеза крупного рогатого скота // Сб. науч. тр./ ВАСХНИЛ, Сиб. отд.-ние ИЭВ-СиДВ, Новосибирск, 1991. С. 60-68.

32. Красиков А.П. Средства неспецифической коррекции при изучении противо-бруцеллезного.иммунитета у животных // Сб. науч. тр./ ВАСХНИЛ, ВНИНБТЖ, Новосибирск, 1992. С. 3-9.

33. Красиков А.|1. Иванова О.Н., Ллмеюви Г.А. Новые способы борьбы с бруцеллезоц крупного рогатого скота // Морфологические, био химические и клинические исследования домашних животных и пушных зверей в норме и при патологии / Сб. науч. тр. ОмГАУ, Омск, 1995. С. 52-56. •

34. Красиков Л.Н., Истова О.Н. Способы повышения напряженности иммунитета при бруцеллезе//Туберкулез и бруцеллез сельскохозяйственных животных, методы и средства диагностики и профилактики / Сб. науч. гр. ЫШИБТЖ. СО РАСХН, Новосибирск, J995. С. 15-18. ■

35. Красиков А.П. Пути повышения напряженности иммунитета и профилактика бруцеллойоснтельстаа у крупного рогатого скота // Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, профилактика И организация мероприятий по ликвидации болезней В Регионе Сибири (тезисы докл. науч. пр«к1ич. конф. Новосибирск, 12-13 июля, 1995 г. / РАСХН. Сиб. отд.-ние. ИЭВСиДВ.-Новосибирск, 1995. С. 105-106.

36. Днлюв С.К., Хлыстунов А.Г., Красиков А.П. и др. Перспективы и тенденции опэпмнзаиии системы иротивобруцеллезных меронриятий по принципу управления эпизоотическим процессом. Там же. С. 81.

37. Красиков А.П., Иванова O.I1. Влияние стимуляторов на иммуногенность противобруцеялезной вакцины из штамма 19 В. abortus И Методология мероприятий по профилактике и ликвидации'болезней сельскохозяйственных животных /Сб. науч. тр. ИЭВСиДВ, СО РДОф, Новосибирск, 1995. С; 84-88.

38. Красиков А.ГЬ, jifipn Q.lf., Коркнна O.FI. Роль Т-, В и А-клеток в механизме повышения напряженности противобруцеллезного иммунитета. Там же. С. 97-102.