Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инвазивность S. HYODYSENTERIAE и патоморфологические изменения в толстом отделе кишечника при дизентерии свиней

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЩЦИШ _И БИОТЕХНОЛОГИИ имени К. И. СКРЯБИНА__•

На правах рукописи

ИВАНОВ АЛЕКСАНДР ИЛЬИЧ

ШВАЗИВНОСТЬ влгоизиттив ц ПАТОМОРФОЛОГМЧЗСШ ИЗМЕНЕНИЯ В ТОЛСТОМ ОТДЕЛЕ ШШЧШКА ЯРИ ДИЗЕНТЕРИИ ОТШЕЯ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МОСКВА - 1995

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор Нояопаткин A.A.

Официальное оппоненты: - доктор ветеринарных наук, профессор

Лучко U.A.

- кандидат ветеринарных наук, доцент Минасуев Ю.И.

оедуцая организация - Всероссийский государственный научно -исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов

Защита состоится _19Э5 г.

в час на заседании диссертационного совета К 120.35.05

по ¡защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук е Московской государственно? академии ветеринарной медкцшв! к биотехнологии им.К.И.Скрябина (109472, Москва, ул.Академика Скрябина, 23; тел. 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан а^ьеА-Я . 1995 г.

' Ученый секретарь диссертационного совета Ыоныгакова З.К.

1.0БЩАЯ ХАРАКТЕРИ СШКА РАБОТИ

Актуальность темы. Одной из наиболее перспективных отраслей животноводства по - прежнему остается свиноводство. Специализация и концентрация этой отрасли привело к создании крупных промышленных комплексов и спецхозяйств, что внесло ряд существенных изменений в нозологический профиль, закономерности эпизоотического процесса и клиническое проявление инфекционных болезней.

Практика работы свиноводческих хозяйств промышленного типа как в нашей стране, так и за рубежом показывает, что большой ущерб свиноводству наносят болезни желудочного-кишечного тракта, на долю которых приходится до 75$ всех заболевших животных, а отход 5% и более (П.И.Притулин, 1975; Н.Хорошилов, 1984).

Особое место среди них занимают инфекционные гастроэнтвро-колиты, при которых многие вопросы патогенеза, дифференциальной диагностики, профилактики и лечения остается еще недостаточно изученными.В этом отношении особое внимание привлекает дизентерия свиней (ДС) ( мвувг ,1974; .к»trie ,1974; П.И.ПритулиН, 1975; Taylor ,1979; А.В.Голнков и др. ,1980; А.А.Конопаткин, 1982), приобревшая широкое распространение ( яопелш ,

Leaning ,1976) и ставшая серьезным припятствиеы в интенсивном свиноводстве.

Большинство исследователей считает основным возбудителем ДС спирохету S.hyodysmteriae (А.В.ГОЛИКОВ И Др. ,1980; В.И.Шнур, 1983; Taylor , Alexander ,1971; Harris et al .,1972;

Stanton et al ., 1991; Lysons , Kent et al .,1991$ Thomas and Sellwood 1992; Stanton ,1992).

Однако до настоящего времени нет четкого.представления о патогенезе ДС, что сдерживает разработке надежных средств профиактики и лечения.

Такое положение ставит перед ветеринарной наукой и практикой актуальную задачу изучения этиологической роли и патогенетического значения спирохет при дизентерии, поиска чустви -тельных к c'3.hyoiiysenteriae лабораторных аивотных, в качества биологической модели иммунологических, патогенетических исследований и дифференциально Я диагностики дизентерии свиней.

Цель и задачи исследований.Целью настоящей работы являлось ИЗуЧСНИв ннзазивносги ¡>.;:уг<!/:;|.т^вг1»е , и ИЗЫСКСЛКО биодоги-чоской модели среди лабораторных шизотных животных и возможности санации организма свиней от возбудителя болезни с ислсльз осажен косых лечебных средств. Для этого необходимо было решить следующие задачи:

I„Изучить клинико-здизоотологачзские особенности проявления дизентерии свинай в неблагополучных хозяйствах проышлениого типа.

2. ОСВОИТЬ МеТОДЫ ВЫДЗЛеННЯ И КУЛЬТИВИрОБаНИЯ З.ЬуоЗузиНепа«

на питательных средах,

3,Экспериментальное заражение 1сультурой Б.ьуоЗуоеогвп&о сшшей.

^Экспериментальное заражение культурой Е.'луойупвглелае лабораторных животных (белых мьшзй, белых крыс и морских свинок) для воспроизведения дизентерийного синдрома.

5. В сравнительном аспекте изучить1 патоморфологнческие изменение о толстом отделе клшзчншса у спонтанно заболевпнх дизентерией

к скспериментально зараженных з-^йувзпгапао сышаЯ

к лабораторных животных.

6.Апробировать применяешь при ДС лечебно-профилактические препараты с цель» санации организма свиней от патогешшх ссрпулин. ■ •

Научная новизна работы, Определены ¡слиннко-згшоотолог;:-чоские особенности дизентерии свиной в хозяйствах проглдмекиого типа с поточной системой, воспроизводства и откорма мвотнкх. Экспериментально подтверждено этиологическое значешю

злц-сауатинбв при ДС. Вшзрвке в сравнительном аспекте

изучены патоморфологнческие изменения толстого отдела кнпочижа у спонтанно заболевших и эксперт,гентально зараженных сшноИ и лабораторных животных с целью изыскания оптимальной биологической модели ДС.Олределена терапевтическая эффективность анти,-^азеотернйнюс. препаратов Стиамутия, трихопол) и возможность санации желудочно-кишечного тракта свиней от з.^уогуск^ондо Практическая ценность. Выявленные особенности лдкиико -опизоотологического проявления ДС в хозяйствах прошшленного типа, рекомендовано учитывать при разработке планов противоэпи -ооотичоских мероприятий. Результаты изучения яатошрфолошчосюое изменений в толстом отдало кйшчника позволяют более эффективно

»■¡пользовать их для иммунологических и патогенетических исследо -и дифференциальной диагностики ДС.На основании проведенных .^следований по теме разработаны методические рекомендации "Выделение и идентификация анаэробной микрофлоры из кишечника одоровнх и больных дизентерией свиней" (Утверждены отделением ветеринарной медицины РАСХН 07.05.1994 г.) и "Изоляция и изучения ентеропатогенных свойств з.ьуо4уз<твг1ав _ возбудителя дизентерии свиней (Утверкдены учебно-методической клинической комиссией Московской государственной академии ветеринарной медицины » биотехнологии т.К.И.Скрябина, протокол М от 21.02.1995 г и одобрены отделением ветеринарной медицины РАСХН 20,03.1995 г.).

Апробация работы.Материалы диссертационной работы доложены !:а научной конференции Московской государственной академии ветеринарной медицин« и биотехнологии им.К.И.Скрябина.

Публикации.По результатам исследований три статьи опубликованы в печати.

Объем и структура диссертеции.Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы и приложения.Работа иллюстрирована 22 таблицами, 18 рисунками. Список использованной литературы включает 162 источников, пэ них 110 иностранных авторов.

II.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1.Материалы и методы В настоящей работе представлены результаты исследований, Проведенных в 1991-1994 гг. на кафедрах эпизоотологии и патанатомии Яоск.госуд.акад. вет.медицины и биотехн. им.К.И.Скрябина, а таете з неблагополучных по ДС хозяйствах Московской области свинокомплексах "Подольский" и "Белая дача".

В райоте использованы 566 свиньи, в т.ч. 6 для экспершен -тального воспроизведения болезни, 209 яйветкых для изучения клинического проявления ДС, 52 для патоморфологических исследовшшй, 299 для кзученля терапевтической эффективности антидизентйрийных препаратов. Бактериологически исследовали 760 пробы фекалий и 113 проб слнэистоР оболочки толстых кизок на наличие серпулин. Для экспериментальной инфекции возбудителем дизентерии использовыш 45 лабораторных животик* (белых кышей, ыорских свинок, белых крыс т 15 гол).Всего исследовано 113 гистопрепарэтов толстого отдела кишечника свиней и лабораторных животных (62 ст свтюР и 51 от лабораторных животных).

- л -

Матери алой для эпизскх'ологичгского анализа служили данкыз ветеринарной отчетности, а также результаты обследования неблагополучных по ДС хозяйств.Последовательность и призмы эшиоо -тологического исследования, а также математический расчэт интенсивных и экстенсииых показателей выполнены согласно рекомендациям А.А.Глушкова и А.А.Конопаткмна (1981) "Методы исследованлл и анализа в эпизоотологии".Течение и клиническое проявление болезни изучали на больных свиньях различного возраста.Патолого-анатоыический метод диагностики включал исследование ыакроско -пических и; микроскопических изменений в толстом отделе кисечтжа больных и павших свиней и лабораторных животных.

Ввделение и культивирование возбудителя дизентерии осуцост-вляли по методике змС«г et л., (1976 а,б) и А.В.Голикова и В.В.Бондкка (1982).Для связывания свободного кислорода над питательной средой применяли кислый раствор двухвалентного хрома (А.К.Балтрашвич, Т.П.Коиаровская, 1984).

Экспериментальное заражение дизентерией проводили на шести поросятах-огъемьшах 2-х месячного возраста, полученных из хозяйства "Ледово" Московской области.В течение 15 дней всох поросят ( 9 гол )подвергали карантинировшшю, во преет которого вели-за еивотнымн ежедневное клиническое наблюдение и проводили трехкратное бактериологическое исследование фекалий на наличие возбудителя дизентерии.В последующем из них сформировали две группы: 6 гол. (опытная) и 3 гол. (контрольная). За 18-24 часов ДО введения культуры S.hyoJjrseiiterise свиней лишиш кор.», а непосредственно перед заражением mi вводили внутрдаелудочно 200 мл 5/о-ного раствора гидрокарбоиата натрия.Каждому опытному поросенку зодав&чи ежедневно на протяжении трех дней по 200 1-л материала, приготовленного путем сусиендирования в стерильном физиологическом раствореß - гемолизированных зон 2«-мого трнпти-калссоового агара (ТСА) с ростом 72-х часовой культуры возбудителя дизентерии свиней, доводя количество микробных тел в инокулмру -.емой дозе до 50x10^ единиц.Инокулят вводили внутрижелудочно с помощью зонда.Контрольным животный внутрижелудочно стерильную агаровую среду по той se схема.

За свиньями вели постоянное клиническое наблюдение в течоние 23 дней у кездой свиньи исследовали пробы фскалнй на наличие сорпулин, регистрировали прояпленкя симптомов болезни,

дважды в день измеряли температуру тела.Основными критериями, свидетельствующими о наличии ДС л мялись: а) диарея; б) выделение ^сформированных или жидких фекалий, содержащих слизь и кровь; в) кровавая диарея; г) наличие в кале серпулин с присущими для них морфологическими, тинкториальными и культуральными свойства-ни.

Для изучения особенностей выделения серпулин с фекалиями, после третьего заражения и до конца эксперимента ежедневно бращ ректальные пробы и исследовали на наличие серпулин, используя светлопольную и темнопольную микроскопии препаратов, приготовленных из культурального и нативмого материала больных и клинически здоровых животных. Терапевтическую эффективность антидизен-терий>шх препаратов (тиамутин, трихопол) и возможность санации организма свиней ДС в производственных условиях оценивали по клиническому состоянию животных после проведенных мероприятий, а также по результатам светлопольной и темнопольной микроскопии препаратов фекалий, слизистых оболочек толстого кишечника.

Лабораторных животных 6-ти недельного возраста (24 белые крысы, 24 морские свинки, 24 белые мыши) предварительно выдерживали на карантине 15 дней.Вели ежедневное клиническое наблюдение.За этот период фекали от лабораторных животных трехкратно исследовали на серпулин получили отрицательный результат, Из указанных животных сформировали две группы: I) опытная по 15 гол; 2) контрольная по 9 голов.После 24-х часовой голодной выдержки им вводили трехсуточную культуру серпулин пероралъно с помощью шприца с тупоконечным катетером в объеме 1,0 мл содержаний 90-100 млн. микробных клеток, двухкратно с интервалов 24 часа.

Основными критериями, свидетельствующими, о развитии экспериментальной инфекции являлись: депрессия, диарея, ввделения ^сформированных фекалий содержащих слизь и кровь, наличие в них серпулин с присудим им морфологическими, тинкториальнши и культуральными свойствами.

Клиническое наблюдение вели после последней инокуляции в течение 21 гчей.Ежедневно исследовали пробы фекалий темнопольной и светлопольной микроскопией на наличие серпулин.Для гистологи -ческих исследований образцы из толстого кишечника фиксировали в 10%-нсн рястеоре формалина затем заливали в парафин и готовили

срезы толщиной 5 мш их окрапивали гематоксилин-оозаном, по Грам-Вейгерту и исследовали под микроскопов. Патсморфологические исследования проведены, под руководством профессора кафедры патачатомии Моск.госуд.акад.вот.мед. и биотехк. им.К.И.Скрябина, Стрельникова А.П.

2.2.Результаты■исследований 2.2.1.Клинико-эплзоотологич^ское проявление дизентерии свиней

При зпизоотологическом обследовании стационарно неблагополучных по ДС свиноводческих комплексов "Подольский" и "Белая дача" установлено, что удельный вес гаетроэнтероколитов от общей заболеваемости свиней достигает 75%, а удельный вес ДС среди них 30 процентов. По результатам наших исследований в свинокомплексе "Подольский" ДС имеет широкое распространение и характеризуется многообразием клинического проявления.В большинстве своем, наблюдали характерные для ДС клинические признаки и патологоанатомические изменения. Наряду с типичны?/ дизентерийным с и м пт о н о к о мпл е к с с к тагске отмечали стертую "форму и бессимптомную инфекцию, которые нередко обострялись и заканчивались внезапной гибелып животных.Зпизсотологический елшгиэ показал, что в свинокомплексах."Подольский" и "Белая дача" сформи-' ровались стационарные очаги ДС, проявляшиеся эпизоотически медчен-икм нарастанием количества больных животных.Среднемесячная заболеваемость на свинокомплексе "Подольский" у свинеЯ на откорме за 19911993 гг. значительно варьирует и составляет 3,3-23,2%.Коэффициент сезонности на откорме paren 37,8£(более 3050, что свидетельствует ра сезонное проявление болезни.Заболеваемость в период сезонного родъема превышает среднюю межсезонную в 3,6 раза.

Среди поросят из групп отъема свинокомплекса."Белая дача" заболеваемость несколько ниже, среднегодовое ее значение достигает 0,1-14,8$, а в отдельные годы она повышается до 21,Коэффициент сезонности равен 28,7% (менее 30",) а индекс сезонности 1,7, что рвидетельствует об отсутствии вираженнэй сезонности.Отход животных на комплексах наблюдается в течение года у. варьирует е пределах 11,1« до 17,Воздействие всевозттнкх ¡^специфических неблагоприятных факторов на свиней способствует обостренна инфекционного и опизоо-Тического процессов.

Как показали наци исследования в промгплеккнх комплексах 'Подольский" и "Белая дача" эпизоотический процесс в стационарных . )чагах ДС протекает в форме эпизоотии со склонностью к этсотпческо-¡¡у проявлению, а его обострение сопровождается эпизоотическими бспышкамй. ■ ' •

2.2.2.Бактериологическое исследование патологического материала от больных дизентерией, свиней

Для обнаружения s.hyo'dysentorine • исследовали испражнения и соскобы со слизистой оболочки толстого отдела кишечника. Перед посевом на триптиказосоевый агар материал исследовали посредством темнопольной микроскопии и э дальнейшем использовали пробы, содержащие наибольшее количество спирохет.

В первичных культурах спирохеты росли в виде точечных, округлых прозрачных колоний с розными краями или образовывали стелящийся по поверхности среды сплошной сероватый налет пастообразной консистенции, вызывая сильный^- гемолиз.При дальнейшт пассаяах рост спирохет наблюдали в виде сплошного газона с образованием в агаре JI - гемолизированных зон.Выращенные спирохеты . были грамотрицательны, карболовым фуксином Циля в разведении 1:5 окрашивались в розово-красный цвет.При окрашивание по Романовскому-Гимза микробные клетки приобраталя розовый цвет. В препаратах из первичных культур спирохеты были крупными (14-30 х0,3-0,4) и имели 4-10 завитков.В дальнейшем при пересевах они становились короче (7-14 мкм) и йиели 2-4 крупных завитка, равномерно расположенных по длине клетки. При исследовании в темном . поле микроскопа спирохеты имели вид бпиралевидкых микроорганизмов с 2-4 изгибами и змеевидно-поступательным движением, как и в нативном материале.Результаты изучен/я культурально-морфологи-ческих и тинкториальных свойств спирохет позволили нам сделать вывод, что микроорганизмы, изолированны« на селективной питательной среде ОТ больных ДС, ОТНОСЯТСЯ К ВИДУ S.hyodysenterta«;, За период исследований из 29-ти проб патологического материала выделено 12 первичных культур 3.t>yo¡iy™«torUe.

2.3.1.Экспериментальное воспроизведение на поросптах-

отъемышах дизентерии вызываемой i.byodyuwterine

Для выявления знтеропатогенных свойств выделенных культур s.h/ady9»(itcri»e бил постаялен спыт пи экспериментальному Еоспроизведепио ДС на 6-ти пэросятах-от^емьпах с последующим изучением клинического проявления болезни и патоморфологического исследования толстого отдела кизечника.

Ка?лДого поросенка заразили путем трехкратного внутрияелу-дсчного введения 600 ил Суспензии 72-х часовой агаровой •

культуры я.ьуосуг,€гЛог1ае • содержащей 150x10® микробных клеток.Контрольным животным.( п=3) вводили внутрижелудочно стерильную агаровую среду по той же схеме.

Результаты.экспериментального воспроизведения ДС показали, что все поросята оказались чуствительны к энтеральному заражению культурой с .Ьуо ¿у я «1 о г! &е причем 2(33,3») погибли. Длительность инкубационного периода варьировала в пределах 5-13 дней и в среднем составила 8,8+1,4 дней.Клиническое проявление ДС наблюдали в течение 3-12 дней (в среднем 8,6+1,3 дней).Средняя продолжительность болезни среди погибших поросят составила 8,0+1,0 дней.

Симптомы ДС отмечали у всех животных опытной группы, однако степень их проявления и соответственно тяжесть течения болезни были неодинаковы.Первые признаки заболевания появились через 8,8+1,4 дней и харахтеризовывались, как правило, вялость» животных ухудшением или отсутствием аппетита, выделением фекалий кашицеобразной консисгевдии с включением слизи.У животного И других симптомов не отмечали и на II день болезни эти признака исчезли, а в фекалиях серпулин не обнаруживали.Более тяжело протекай инфекционный процесс у свиней и Кб у них отвечали

в течение 3-12 дней, диарею появившуюся на П-13 день после заражения, а в испражнениях обнаруживали наряду со слизью следы 'крови.Наиболее характерное проявление ДС наблюдали у ашвотних №2 н №4, болезнь сопровождалась кроваао-сллзнстой диареей, возник!ей через 6-7 дней с момента заражения и длившийся 7-9 дней до самой смерти кнвоткых.По мерс развития слизисто-геморра-гического синдрома у животных наблюдали сильное угнетение, слабость, залеживание, полный отказ от корма при сохранишейся жажде, истощение.Кал водянистой консистенции с содержанием большого количества слизи и кропи, а также слизисто-фибринозных лщьнск.

ТемнопольноЯ микроскопией ректальных проб от больных . животных опытной группы в поло зрения находили змоевидно-доижу-щиося серпулины, количество которых зависело от консистенции и состава фекалий.Ток при исследовании размягченных и жидких фекалиЯ с примесь» слизи количество серпулин варьировало от 4 до 20 клеток в поле зрения микроскопа.С появлением в испражнениях крови их количество'увеличивалось и достигало 60-85 клеток. В пробах фекалий с водянистой консистенцией и содержанием большого количества крови и слизи в поле зрения обнаруживали до §0 и

более серпулин.Контрольные поросята, получившие одинаковый коря с подопытными, но помещенные отдельно, в течение всего периода наблюдений (23 дней) оставались клиническими здоровими, серпулин в коле не обнаружили.

При бактериологическом исследовании воспаленных участков слизистой оболочки ободочной кишки получили на ТСКЛ обильный рост /5 - гемолитических культур серпулин.

Трупы павших поросят с продолжительностью болезни 7-9 дней были истоцсш, обезвожены, кожа бледная с сшшшым оттенком в области увей, живота и конечностей.При патслогоанатомическом вскрытии находили характерные дифтер;гчески-геморрагическое воспаление толстого отдела кишечника.Его содержимое было разжиженным с примесью крови, слизи и фибрина, слизистая оболочка слепой, ободочной и частично прямой кишок покрасневшая, отечная с ' наличием кровеизлняний, местами омертвевшая и покрытая светлосерым налетом.Петли ободочных киаок имели серо-красную или серо-фиолетовув окраску, серозная оболочка суха" и гранулярная, иезентериальные лимфатические узлы увеличены и поспал сиг), брьжеЯка отечная.При исследовании толстого кишечника с продод-кительностыо болезни 3 'дня, находили утолщенно слизистой оболочгсп с поверхностным наложением мунюЯ слизи, а также ее покраснение с точечным кровепзлил-м эти изменения были сильнее вирзлеени в ободочной киыхе, ссдергшисе толстсго кишечника с продолжительностью ДС 10-12 дней имело принеси слизи н крови.

При гистологическом исследовании толстого ккхечиика с продолглтельность» ДО 10-12 днеЯ отмечали клеточную инфильтрация собственной пластинки, расяирспнл кр'/пт в полости которых находили еврпулины, увеличения количества бскалоЕщикх клеток.Более сильные гнстопатологичосние изменения мы набладали в ободочной киаже павших поросят с продолжительностью ДС 7-9 дней.Отмечали случ'.шадло эпителия и геморрагическую инфнльтрздив собственной пластинки в слизистой оболочке.йюжество серпулин походили я принтах.

Таким образом, патсиорфологичсскдаги асследопалкями толстого шгаечника при экспериментальной ДС усталознли катарально-гвиоррагяческое и фибрннозно-нскротическое воспаление.

2.4.Экспериментальное заражение культурой з.ьусйу^ег.'.опао лабораторных животных 2.4.1.Заражение морских свинок

Экспериментальное заражение г.ьуо^узеглеги» проводили на 15 морских свинках 6-ти недельного возраста.

Инокулятом служила 72-Х часовая культура Е.Щго^яет-аеПае приговленная путем суспендирования в стерильном физиологическом растворе . - гемолизированных зон 255-ного триптиказосоевого агара (ТСА), с содержание« в 1,0 мл 90-100 млн.микробных клеток. Инокулят вводили перорально двухкратно с интервалом в сутки в • объеме 1,0 мл.Контрольным животным ( о = 9) вводили стерильную агаровую среду по тсй же схеме.В течение 21 дней за ними вели клиническое наблюдение, ежедневно микроскопически проверяли фекалии на наличие з.ъуоауотигив .Длительность индивиду -алъного инкубационного периода варьировала в пределах 4-15 дней и в среднем составила 8,8*1,1 дней.Дизентерийный синдром наблюдали в течение 5-17 дней (в среднем 10,6+1,2 дней).Средняя продолжительность болезни среди погябаих морских свинок составила 7,5 +1,9 дней.Результаты экспериментальной инфекции показали, что 13 (Во.сй) морских сехнок сказались чуствительными к заражение культурой З.Ьуос1у£т1сг1»в , При ЭТОМ 4 (30,"7%) ПОГИблИ. .

Выделения серпулин в фекалиях микроскопически наблюдали на следующий день после последней инокуляции и до конца экспериментального периода (21 дней), и в среднем составила 19,4+0,72 дней.Клинические признаки заражения хараитеризовывались ухуд -шением или отсутствием аппетита, взгерошенностью шерстного покрова, вялостью, диареей, фекалии были размягченные или жидкие со следами крови и слизи.Две морские свинки клинические признаки зараженности не проявили, общее состояние их оставалось в пределах физиологической нормы, серпулин с фекалиями не выделяли. От трех морских свинок с клиническими признаками заражения бактериологически выявили серпулин путем посева нагивного материала на селективную среду ТСКА (трилтиказосоевый кровяной агар).Выделенные культуры хнуолузтите характеризовы-

вались присущим им морфологическими, тинкториальньми и культу-ральныш свойствами.

Макроскопические патологические изменения в слепых кишках редко в ободочной дифференцировалось от катарального II (84,6%) до геморрагических воспалений 2 (15,4,1) случаях.

При микроскопическом исследовании гистопрепаратов и криптах слизистых оболочек, слепых кишок находили много спирохет. Отмечали утолщение слизистой оболочки, гиперплазии и служившие эпителиальных клеток.У двух морских свинок наблюдали геморрагическую инфильтрацию слизистой оболочки слеш« кишок.Во всех случаях отмечалась расширение крипт и увеличения количества бокаловидных клеток.

У инфицированных возбудителем дизентерии свиней морских свинок патологические изменения били в слепых киахах сходными с таковыми при дизентерии свиней, но пленок фибрина в каловых массах установить не удалось.Клинически кровавая диарея не развивалась.

2.4.2.Заражение белых мышей

Опыт по экспериментальному заражении з.ъ^оуот^огл»'! провели на 15 белых мигах, 6 недельного вое/зяста.Инокулятсм служила трехсуточная культура з.Ьуоаупкчопяо с о держите Я в 1,0 мл 90-100 млн.микробных клеток.Инокулят вводили перорально с интервалом в 24 часа й обьем'.. 1,0 мл.Контролышн кипстики (л = 9} стерильную агаровую среду по той ае схеме.В течение 21 дней за ними вели ежедневное клиническое наблюдение.У белых мъкей ежедневно микроскопически проверяли фекалии на наличие серпулин.

Длительность нндизидуального инкубационного периода варьировала в пределах 2-П дней и в среднем составила 6,2^3 днеЙ.ДизентериЯккЛ синдром наблюдали в течение 4-16 дней (в среднем 9,3*1,2 дней) .Средняя продолжительность болезни срэдп погибших белых мызе Я составила 6,6^0,8 дней. Результаты экспериментальной инфэкцхи показали, что все ¡¿квотные оказались чустэительными к заражение культурой злуа^гелгогме , при

этом б (40;£) белых швей пали.Выделения сергг/лкн в фекалиях наблюдали на следующий д?нъ после последней инокуляции у всех хивстных и до конца экспериментального периода (21 дней), и п среднем составила 16,5+1,4 дней.Основными критериями, еввдетель-ствущнми о развитии'экспериментальной инфекции являлись: депрессия, диарея, выделения несфор-гировантвс фскалиП содержащих слизь и кровь, наличие в них серпулин с присудим им морфологическими, тжториальными и культурольными свойствами. Зараженные мыши были явно больны.Они собирались кучками, мело

двигались, их шерстный покров потерял блеск, отмечали ухудшение или отсутствие аппетита.Наблюдали диарее с примесью слизи и крови в фекалиях.Болезнь у трех мышей сопровождалась кроваво-слизистой диареей.

При гатологоанатаннческом вепритии больных и павших белых мышей отмечали спадение слепых и ободочных кишок, катаральное воспаление у 12 (60%) и геморрагическое воспаление у 3 (20%) мышей.Гистологические изменения в слепых кипках были следующими: эрозия зпителия, отек слизистых оболочек, гиперплазия зпители -адьных клеток, сильное расширение крипт, увеличения количества бокаловидных клеток, клеточную и геморрагическую инфильтрацию собственной пластинки.Важно отметить, что в полости крипт находили серпулин.В контрольной группе мышей патомсрфологических изменений не обнаружили.

Таким образом, в данном опыте результаты заражения показали, что белые мыаи оказались очень чуствительными к заражению данным микроорганизмом.

2.4.3.Заражение белых крыс

Заражение з.ьуоЛувапег1ав проводили на 15 белых кри, 6 недельного возраста.Инокулятом служила 72-х часовая культура

зл1уодуая-лы!йе приготовленная путем суспекдирования в

стерильном физиологическом растворе - гемолизированных зон 2^-ного триптиказосоевого агара (ТСА), доводя общее количество микробных клеток в 1,0 мл до 90-100 млн.После 24-х часовой голодной выдержки культуру серпулин ввели перорально двухкратно через 24 часа в объеме 1,0 мл.Контрольным животным (п = 9) вводили стерильную агаровую среду по той же схеме.В течение 21 дней за ними вели клиническое наблюдение.Длительность индивидуального инкубационного периода варьировала в пределах 5-14 дней и в среднем составила 9,7+1,2 дней.Дизентерийный ешздрсу наблюдали в течение 6-15 дней (в среднем 10,6^1,1 дней). Средняя продолжительность болезни среди погибших белых крыс составила 13,5+1,0 дней.Результаты оксперыентальной инфекции показали, что II (73,355) белых крыс оказались чуствительными заражения культурой зл^уазпеп«.» . при этом две крысы (18,2$) погибли,Выделения серпулин 6 фекалиях микроскопически н&блйдаяи на следуедий день после последней инокуляции и до конца аксперментального периода и в среднем составил ■£0,5+0,4

дней.Клинические признаки заражения проявились ухудпениеч или ' отсутствием аппетита, взгероиенностыо верстного покрова, вялостью, диареей, фекалии били размягченное или жидкие баз примеси слизи и крови.Четыре крысы клинические признаки не проявляя, серлулин с фекалиями не выделяли. От двух крыс с клишг-'ескнми признак'ли зарадения выявили серпулин путем посева на селективной среде ТСКА.Выделенные культуры серпулин характеризовавшись присудим им морфологическими, ?инкториа!;ьным'л и кулътуралънши свойствами. При патологоанатомическом вскрытии больных и павгих крыс otuí'-чача катаральное воспаленно слепых киаок.Пря микроскопическом исследовании гистопрепатов от слепых кивок наблюдали, отек слизистых оболочек, гиперплазии эпителиальных меток, расширения кркпт в полости которых находили серпулин, слушания эпителия.

Важно отметить, что у белых крыс патоиорфэ-югичсск-хэ изменения сходные с таковым« при ДС были обнаружена только в слепых шшках, но диарея с примесью в пал** фибринозных пленок и крови ни в одном случае нэ проявилась.

2.5.Патомор£ологические изменения в толстом отдглг

ккаечкика у спонтанно больных дизентерией сгяиой

Иакроскопическк исследовали толстый кишечник от IV ссипей нести месячного возраста на 1-5 и десятые дни бслезни ДЗ.В парпыз дни болезни наблсдали катаралыю-геморрагичеепсо воспаление.На 5-10 дни болезни слизистая оболочка толст ах югаок была от?-;доР,, собрала в поперечине сиодкн и покрыта слизисто-фибр;:нсзким экссудатом сорого цвета с участками некроза.Эти изменения били слабее вырат.ти в слепых к прямых хилхах и отсутствовали в тонком отделе кигаечника.При микроскопическом исследовании соскобов слизистых оболочек толстого кгаечмкка текиополыюй микроскопией, наблвдали много серпулин (от 10 до 66 и мсе) у ободочной кишке и мсньпо з слепых и прямых к и з;к ах. Гк с т с л о ¡ • ¡ i ч е с :м <\ изменения в перяыо дни болезни характоризохададись утол^ен:'.си слизистых оболочек, распирснием крипт, полости катера . были заполнены слизьа, увеличения количества бокаловидных кяетег:, геморрагкч-зскув инф:ш.трзцяя собственной пластжатн.На 5-10 дни болезш! ДО гиператозпе лимфоидной ткани, интенсивнуи гслеточнуя гафиьтрацкв в ссноеном лимфоядныии клетками, в полости крипт находила моного спирохет, слуциванял згшголил, отмечали геморра-глчссгсую гагфиьтрацип собстсслшс.Ч пдзетшпси.Лныфатячс-скиэ

фолликулы бшш крупными, их реактивные центры хороло выражены. При татоуорфологишсаом исследовании толстого кишечника установили катаралъно-тюррагическоо и фибрннсзко-некротичзское воспаление. ...

| 2,6.Терапевтическая эффективность трихопола и тиаыутина при дизентерии свиней

Де-чебнус эффективность препаратов определяли на 299 подсвинках 4-6 месячного возраста в производственных условиях хозяйства "Подольский", у которых проявлялись клинические признаю! характерна для острого течения болезни (диарея, каловые массы пт серо-грязного до темно-красного цвета с примесь» слизи и яровм).Микроскопически в фекалиях обнаруживали серпулин, количество которых, достигало 47 и выше в поле зрения микроскопа. При внутримышечном введении тиамутина (1 опытная группа 221 гол) по схеме Г раз В день 2 дня подряд в дозе 15 мг/кг наблюдался полилй терапевтический эффект.После лечения свиней рецидива ДС не йыло в течение 35 дней (срок наблюдения).Втору» группу свиней больных ДС (II группа 68 гол) инъецировали внутримышечно трихополом (10%) в дозе 10 мг/кг I раз в день три дня подряд. У 7 подсвинков"на 2-й день лечения трихополом понос с примесью слизи и крови "не прекратился, а в фецесе обнаруживали серпулины. Посла третьего дня лечения у них регистрировали водянистый понос с примесь» слизи, но серпулин в их фецесе не обнаруживали.На 12-14 дни наблюдения в этой группе повторно заболело дизентерией Б свиней, которые были изолированы и подвергнуты лечению тиамутинры при однократно« его внутримышечном введении в Дозе 15 мг/кг, на следунций. день их общее состояние улучшилось, появился.аппетит клинические признаки ДС исчезли, при бактериоскопии фекалий серпулин не обнаружили.Сан:!рукдий аффект трихопола наблюдали в течение 12 дней (Р < 0,05), тогда как тиамутин окгаывад гюлну» санацию организма свиней от патогенных серпулин в течен е 35 дней наблюдения (Р < 0,01).В контрольной группе ( ч= 10). гшвотны* больных;ДС отмечалась 100% заболеваемость.За время опыта, пало 4 свиньи (40$). При патологоанатомическом вскритий подтвердили ДС.

ш.внвода

1.В хозяйствах проаапиеннсго типа дизентерия свиней характеризуется многообразием клинического про явл е ни я. Наряду с ткпичгаа

- 1Ь -

дизентерийным симптомокомплексоч, большая часть иивотщгх поребо-лсвает а стертой форме и виде бссстттомной ин'рекцни с нередкими обострениями и внезапной гибельв таких животных. ! 2.В свиноводческих комплексах с поточной технологией производства, дизентерия свиней имеет склонность к эпизоотическому проявлении и формировании стационар:-гьгх эпизоотических О'-гагсп с налкчиеи пироксго спирохетоносительства. Изолируете при отои спирохеты характеризуется морфологическим;!, тинкториальники и иультуроль-

1ШМИ СВОЯСТВвМИ ПРИСУЩИМИ Э.ЬуоЛулт^гио.

3.Экспериментальное заражении порсспт-отъемшей, боЛых мшей, иорСКИХ СВИНОК И белых Крт>1С культурой З.Ьуойгост'.ойео изолированной•е неблагополучных из ДС хозяйствах, вызывает клинические признаки диарея, что указывает на этиологическое значение з.ьуо<1у0клег1ао в этиопатогенезе дизентерия свиней.

4.При спонтанном зеболевании и экспериментальном воспроизведении дизентерии свиней з.ьу^уоггДогЬе У пооосят-огьеилгей патоморфологическиэ изменения в основном разбивается в толстом отдего ккпечника - в местах локализации' з-Кус^угогиеНг» Типичкьми гиетопатологаческиыи изменениям* является отек ообства-иной пгеетшпш, клеточная и геморрагическая инфильтрация слизистой оболочки, дссгсвакация эпителиальных клеток и расширение крипт, в полости которых обнаруживается серпулшш.В результате , яострунтнЕныэ изменения в толстом отделе кииечинка развивается

с вице катарально-гекоррагического и десквакативно-некротического колита. -

5.При аксперинентаяьной инфекции лабораторию: кипотиых культурой слуолуздаиги» у белых «ъпгей, белых Ир* 1С я морских евмод

паточорфологачеекие изменения развиваются преимущественно з слепой котке и характеризуются утолдениек слизистой оболочки, . расширением крипт с наличием в их просвете серпулин, клеточкой ■ инфильтрацией собственной пластинки, гиперплазией эпителиальных клотбк и появлением цветков с гшрахоишаш ге.чоррагяями и отеком, Б отличие от патологического процесса, дкзетерии у свиней, при экспериментальной инфекции культурой 3.11уос!уеея1ег1ае у .

лабораторных животных развиводтся по тнпу катародьно-геморрзги-Ч'еского воспаления. . • ■

6. Интенсивность инфекционного процесса у эксиершонтадьно зари.--ЙС1ПШХ КуЛЬТурОЙ ■ С.Ьус«5/йСЛЬе*1во ■ лабораторных жизотных . • зависит от Е>:дз зиготного, инфицкрувдаП дозы возбудителя и .чраткости эарадепйя.Прк перор&шюм введении бедим.крисгл.

морским свинкам, белым мьгаьм по 200 млн.м.к. (1,0 ил инокулята двухкратно) заболеваемость и летальность соответственно составили 73,3%, 86,655, IOCS и 18,22, 30,75?,'40 процентов. Ид лабораторных тавотных к литеральному эаражзншо культурой s,hyoi7B.»t<iri»e болр.е чусгвителыш белые ыиви и их можно рекомендовать дпя использования в качестве биологической «одели при изучении и диагностике дизентерии свиней. 7.При дизентерии свиней установлена сравнительно высокая терапевтическая эффективность тиамутина при его двухкратном внутримьпечнон введении в дозе 15 мг/кг и возможность санации данным препаратом желудочно-кишечного тракта свиней от

S.hyolyEeiUriM . .

1У. СВЕДЕНИЯ 0 ПРАКГ/ЧЕСКОгЛ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Ute. основании проведенных исследований по тема разработаны методический рекомендации:

- 1.Конопаткин A.A..Дриаева Ы.Д..Иванов А.И. Выделение и идентификация анаэробной микрофлоры из кишечника здоровых и больных дизентерией свиней (Утверждены отделением ветеринарной медицины РАС.ХН 07.05.1994 г.) М.: 1994.-32 с.

2.Изоляция И изучение энтеропатогенных свойств s.hyoctyaenteriao - возбудителя дизентерии свиней /А. А.Конопаткин, А.И.Иванов,М.Д.Дриаева,И.А.Калистратов,Э.М.Мешев,А.К.Канатов. (Утверящены учебно-методической клинической комиссией Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина, протокол £4 от 21.02.1995 г. и одобрены отделением ветеринарной медицины РАСХН 20.03.1995 г.). 2.Научные результаты диссертации используется в учебном процессе в Московской .государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина.

У.РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИО НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Результата эпизоотологического обследования в хозяйствах промышленного типа рекомендуется использовать при составлении планов профилактической и оздоровительной работа при дизентерии свиней."

Результаты сравнительного изучения патэморфологических изменений в толстом отделе кишечника свиней я лабораторных животных при экспериментальной инфекции возбудителем дизеятсряа.

позволяет рекомендовать белых ымшвй для псполъзошшип в качестве биологической модели при изучении и диагностике дизентерии свиней в научно-производственных лабораториях.

УI.СПИСОК №ЧНИХ ТРУДОВ, ОТШИКОВАНШ ПО ТШ диссертации

I.Иванов Л.И. Гистологические изменения о толстом отделе юшечниха свиней, болышх дизентерией //Ветеринар:«.-1994.-$2<— С.27-29,

Й.Дриаева М.Д. .Иванов Л.И. Исследование анаэробной микрофлор;» гагаечниха свиней при дизентерии //Вотеринарши.-1994,-VZ,-С.24-27. З.Конопаткин A.A. .Иванов Л.И. .Дриаева М.Д. Пат о м о рфо л о гмч s с г ел характеристика дизентерии свиней //Актуальные вопросы инфекционных и инвазионгасс болезней яивотиых: Сб.научн.тр./ Моск.госуд. акад.пет.медицины к биотйхн. им.К.И.Скрябина, 1994.-С.78-82.

Отпечатало на ротелркяго в Гипогра^л "РОГЭКС", тир. 100 экз., Цдсощкдл, 35.

вак.138.