Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Этиологическое значение вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых в возникновении респираторных болезней телят

На правах рукописи

г

ГОППЕ ВЛАДИМИР АЛЕКСАНДРОВИЧ

ЭТИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ВИРУСОВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА И ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ-БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ В ВОЗНИКНОВЕНИИ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология,

вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

к

Автореферат

к диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Новосибирск - 2005

Работа выполнена в ГНУ Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

старший научный сотрудник Глотов Александр Гаврилович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор

Храмцов Виктор Викторович,

Ведущая организация: Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко

заседании диссертаци , , ,.. фственном

научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН Автореферат разослан 2005 г.

кандидат ветеринарных наук, доцент

Грязин Валерий Николаевич

Защита состоится

часов на

Ученый секретарь диссертационного совета

С.К. Димов

201 is-

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. С сокращением количества крупных промышленных комплексов по откорму молодняка крупного рогатого скота (КРС) актуальным является изучение проявления вирусных болезней в племенных, товарных хозяйствах мелочного направления и др.

Среди многообразия вирусных агентов, циркулирующих среди крупного рогатого скота, вирусы инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) крупного рогатого скота занимают особое место в связи с многообразием клинических проявлений и тяжестью течения болезней, вызываемых ими (H.H. Крюков и соавт. 1984; К.П. Юров и соавт., 2001, 2003; W.D.G. Yates, 1984; D. Deregt et al., 1995; A.L.E. Lindberg, 2003).

Многие исследователи отводят первичную этиологическую роль в возникновении массовых респираторных болезней молодняка КРС этим вирусам, т.к. инфицированные ими животные становятся восприимчивыми к развитию секундарной микрофлоры и осложнению инфекционного процесса (H.H. Крюков и соавт., 1984; Е.В. Андреев, 1984; L.A. Babiuk et al., 1991; RW. Fulton et al., 2004).

ИРТ и ВД-БС КРС регистрируются во многих областях Российской Федерации и странах СНГ и причиняют значительный экономический ущерб мясному и молочному скотоводству (П.А. Красочко, 1991; П.Н. Пытапев, 1996; А.И. Салимов, 1997; О.Г. Петрова и соавт., 1999; А.Г. Высокопоясный и соавт., 2000; Н.И. Закуг-ский, 2000; В.А. Мищенко и соавт., 2001; Н.Ю. Басова, 2002; Э.А. Шегидевич и соавт., 2003; К.П. Юров и соавт, 2003).

В связи с этим изучение особенностей эпизоотической ситуации и проявления вирусных респираторных болезней КРС, в зависимости от типа хозяйства, концентрации животных, а также от вирусно-бактериальных ассоциаций, имеет большое значение при планировании оздоровительно-профилактических мероприятий (А.Г. Глотов и соавт., 2001).

Наличие латентной и персистентной формы у этих болезней значительно осложняет проведение лечебно-профилактических мероприятий, т.к. приводит к неконтролируемому распространению возбудителя во внешней среде, где немаловажную роль играют животные-вирусоносители, особенно, быки-производители (Е.А. Андреев, 1984; Г.Э. Фарботко и соавт., 1994; А.Г. Глотов, 1999; V. Bitsch, 1984; Al de Gee et al., 1996; G. Van Shchaik, 1998).

Учитывая длительную персистенцию возбудителя в организме животного и, в конечном счете, на уровне популяции крупного рогатого скота, зачастую, без проявления клинических признаков, определение вирулентности изолятов вирусов вызывает большой научно-практический интерес исследователей всего мира (М. Ackermann, 2001).

Цель и задачи исследований. Изучить распространение и особенности проявления ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области в зависимости от типа хозяйств и концентрации поголовья крупного рогатого скота и определить патоген-ность выделенных штаммов вирусов на естественно восприимчивых животных.

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области в период с 1999 по 2004 гг, установить роль вирусов в этиологии массовых респираторных болезней молодняка КРС;

2. Изучить ассоциации вирусов и бактерий, выделенных при вспышках массовых респираторных болезней в Новосибирской области.

3. В условиях контролируемых экспериментов определить патогенность штаммов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, выделенных в различные годы от больных и инфицированных животных, а также воспроизвести острую бронхопневмонию вирусно-бактериальной этиологии и изучить ее клинические проявления на телятах 4-6-месячного возраста.

Научная новизна.

1. Доказаны широкое распространение ИРТ и ВД-БС КРС на территории Новосибирской области и ведущая роль возбудителей этих болезней в этиологии массовых респираторных инфекций телят в крупных хозяйствах племенного и молочного направления. Установлена взаимосвязь между концентрацией поголовья, серопозитивностью и частотой выделения вирусов от больных животных.

2. Изучены ассоциации вирусов и бактерий, возникающие при массовых вспышках респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота и установлена преобладающая роль бактерий из рода Salmonella в качестве осложняющего агента.

3. В контролируемых опытах на серонегативных к вирусам телятах 4-6-месячного возраста доказана патогенность штаммов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, выделенных в Сибири от больных и инфицированных животных.

4. Впервые в условиях контролируемого эксперимента воспроизведена острая смешанная катаральная бронхопневмония, вызванная интраназальным введением вирусов ИРТ и ВД-БС КРС и бактерии Salmonella dublin, выделенных при вспышках массовых респираторных болезней молодняка КРС, а также из спермы инфицированных быков-производителей.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации использованы при составлении:

-Методических рекомендаций «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, пагологоанатомических изменений). Материалы рассмотрены и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 6 от 09.11.04 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 23 от 09.11.04 г.); I

- Программы по профилактике и борьбе с вирусными респираторными болезнями в Новосибирской области (2001-2005 гг.).

Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, так как дают возможность расширить научные знания относительно роли вирусов и бактерий в возникновении массовых респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота и могут быть использованы при дальнейшем изучении эпизоотологии, а также патогенеза ИРТ, ВД-БС КРС и смешанных вирусно-бактериапьных инфекций молодняка крупного рогатого скота в целях совершенствования противоэпизоотических мероприятий.

Апробация полученных результатов. Материалы исследований доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: «Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними» (Иркутск, 2001), Современные проблемы эпизоотологии (Новосибирск, 2004), Акгу-

альные вопросы ветеринарной медицины (Новосибирск, 2005), Сибирском международном ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 5 научных работ.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований использованы при разработке:

1. Методических рекомендаций: «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений). Материалы рассмотрены и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 6 от 09.11.04 г.) и подсекцией «Инфекционная патоло-

* гия животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной

медицины Россельхозакадемии (протокол № 23 от 09.11. 04 г.);

2. Программы по профилактике и борьбе с вирусными респираторными ^ болезнями крупного рогатого скота в Новосибирской области на период 20012005 гг. (утверждена начальником управления ветеринарии Новосибирской области 14. 02.01 г.), внедренной в хозяйствах Новосибирской области с экономическим эффектом 8 рублей на I рубль затрат.

Апробация полученных результатов. Материалы исследований доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: «Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними» (Иркутск, 2001), Современные проблемы эпизоотологии (Новосибирск, 2004), Актуальные вопросы ветеринарной медицины (Новосибирск, 2005), Сибирском международном ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, приложения. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 8 таблицами. Список литературы включает 273 источника, в том числе 206 зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Особенности распространения и проявления ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области в период с 1999 по 2004 гг.;

2. Материалы, доказывающие патогенность штаммов вирусов ИРТ, ВД-БС | КРС и бактерии Salmonella dublin, выделенных в ГНУ ИЭВСиДВ от больных и

инфицированных животных, для телят 4-6-месячного возраста и экспериментальные данные о клиническом проявлении смешанной острой бронхопневмо-Ь нии.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в 1999-2004 гг. в лаборатории биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН, хозяйствах Новосибирской области.

Изучение эпизоотической ситуации по ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области. Серологические и вирусологические исследования.

В связи с тем, что плановые исследования на вирусные инфекции не предусмотрены нормативной документацией, при изучении распространения ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области использовали данные серологических и

вирусологических исследований Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории и лаборатории биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВ-СиДВ. Высчитывали средний процент проб сыворотки крови, содержащих ви-руснейтрализующие антитела к вирусам, от числа поступивших из хозяйств с различной концентрацией животных, где наблюдались вспышки респираторных болезней крупного рогатого скота.

Анализу подвергли 589 экспертиз вирусологических и бактериологических исследований 3000 проб биоматериала от телят до 6-месячного возраста, 8171 пробы сыворотки крови коров-матерей, телок, телят до 12 месяцев из 25 районов и 155 хозяйств Новосибирской области, за период 1999-2004 гг Исследования проводили в хозяйствах, где не проводилась специфическая профилактика данных болезней.

Для анализа использовали результаты выделения вируса в культуре клеток, которые проводили согласно «Метолу лабораторной диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота» или «Наставлению по применению тест-системы для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации», утвержденному Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ or 15.08.01 г № 13-7-2/1551. Исследования на ВД-БС КРС проводили согласно «Методу лабораторной диагностики вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота» Для ретроспективной диагностики ИРТ и ВД-БС КРС пробы сыворотки от взрослых животных отбирали однократно, а от больных телят двукратно с интервалом 20-23 дня для установления сероконвер-сии. У животных, находящихся в опыте, пробы сыворотки отбирали по схемам, приведенным в соответствующих разделах. Пробы хранили при -20°С и исследовали одновременно.

Бактериологические и гематологические исследования проводили по общепринятым методикам. Культуры сальмонелл типировали при помощи наборов сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О и Н-агглютинирующих для экспресс-идентификации сальмонелл в реакции агглютинации на стекле (Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 30.07.84 г.). Патогенность бактерий оценивали согласно «Методическим указаниям по бактериологической диагностике сальмонеллеза животных» (рекомендованы Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 30.12.71 г.).

Штаммы вирусов, использованные для экспериментального заражения. Использовали штаммы вирусов ИРТ и ВД КРС, выделенные в ГНУ ИЭВСи ДВ СО РАСХН. Штаммы охарактеризованы и депонированы в коллекции культур микроорганизмов НИИ ККМ ГНЦ ВБ «Вектор».

Вирус ИРТ КРС: Шт. С012, № V-336; Cl 1, №V-337; Л, № V-338.

Вирус ВД-БС КРС: Цитопатогенный шт. TM, № V-340.

Бактерия Salmonella Dublin: Шт. АТ-1, № В 1030.

Экспериментальное заражение. Для проверки патогенности выделенных штаммов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС использовали телят черно-пестрой породы в возрасте 4-6 месяцев, не содержащих вируснейтрализующих антител к указанным вирусам. Всего в опытах использовали 30 голов, подобранных по принципу аналогов.

Суспензию каждого вируса вводили интраназально трем телятам в дозе 4х105'5'6ТЦЦ5о/о,1млПри помощи генератора аэрозоля БГ-2, который создает аэрозоль с медианно-массовым аэродинамическим диаметром частиц 1,1 мкм. При

этом распыление вируссодержащей суспензии вели в течение 5 минут на расстоянии 3 см от ноздрей животных.

Контрольным животным таким же способом вводили физиологический раствор или питательную среду Игла MEM. За инфицированными и контрольными животными в течение 15-25 дней проводили клинические наблюдения с ежедневной термометрией, отбором проб крови для определения изменений гематологических показателей и тампонных проб носовых выделений с целью реизоляции исходного вируса, начиная со дня до заражения.

Длительность экскреции вируса с носовыми выделениями изучали при помощи метода выделения вируса в чувствительной культуре клеток. Каждую пробу носовых выделений подвергали трехкратному титрованию в культуре клеток, высчитывая доверительный интервал.

Пробы сыворотки крови отбирали до заражения, а также через 21 день после него с целью установления сероконверсии.

Для изучения патологоанатомических признаков экспериментальных инфекций, изучения распространения возбудителей во внутренних органах и тканях в ходе опытов в каждой опытной группе подвергали диагностическому убою по одному теленку. От трупов вынужденно убитых животных отбирали пробы конъюнктивального содержимого, слизистых оболочек носа и трахеи, миндалин, надгортанного хряща, носоглотки, легочных лимфоузлов, бронхов и бронхиальной слизи, краниального и каудального отдела легких. Отобранные пробы замораживали и транспортировали в лабораторию для исследований.

Подробные методики проведения опытов изложены в соответствующих разделах собственных исследований диссертации.

Математические расчеты. Статистическую обработку проводили общепринятыми методами (И.П. Ашмарин и соавт , 1962) Достоверность результатов подтверждали с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при Р< 0,05.

Автор выражает благодарность за помощь в выполнении некоторых разделов диссертации сотрудникам Новосибирской межобластной ветлаборатории В И. Аксенову и В.Г. Тимофеевой и сотрудникам лаборатории биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ Т.И. Глотовой и A.B. Нефедченко.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Распространение ИРТ и ВД-БС КРС в хозяйствах Новосибирской области по данным серологических и вирусологических исследований

Изучение особенностей распространения вирусных болезней весьма актуально и может быть использовано в практике при планировании и разработке комплекса оздоровительно-профилактических мероприятий.

Результаты исследований показали, что в настоящее время ИРТ КРС широко распространен в Новосибирской области. Количество положительных проб сыворотки крови в среднем по области составило 61,3%.

Изучение распространения ВД-БС КРС в Новосибирской области до 2001 г. практически не проводилось, имелись лишь немногочисленные результаты диагностических исследований, проведенных в 80-х годах прошлого столетия (А.Г. Глотов и соавт., 2001). В связи с этим за основу были взяты результаты серологических исследований, проведенных в лаборатории биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ, в период с 2001 по 2004 гг. Результаты показали, что количество

проб сыворотки, содержащей вируснейтрализующие антитела к этому вирусу, составило в среднем 66,7%.

На основании проведенных исследований все районы области по уровню серо-позитивности к вирусам разделили на три категории.

За основу взяли следующую градацию:

1. Серопозитивность животных от 0 до 30%

2. Серопозитивность животных от 31 до 60%

3. Серопозитивность животных от 61 и выше

По уровню серопозитивности животных к вирусу ИРТ КРС к первой категории районов было отнесено 7, что составило 26% от числа обследованных, в категории №2 насчитывали 10 районов, что составило 38,4%, а в третьей категории - 8 районов (30%).

По уровню серопозитивности к вирусу ВД-БС к первой категории хозяйств отнесли два, что составило 9% от числа обследованных, в категории №2 насчитывали 5 хозяйств, что составило 22%, а в третьей категории -14(60%)

Полученные данные свидетельствуют о более широком распространении ВД-БС, чем ИРТ КРС, т.к. 60% обследованных хозяйств распределились в категорию №3 (средний процент проб сыворотки крови, содержащих вируснейтрализующие антитела к вирусу, составил более 66,7%).

Анализ ведения животноводства в обследованных хозяйствах показал, что при численности дойных коров до 300 голов и молочной продуктивности у них до 2000-2500 литров в год, количество положительно реагирующих животных не превышало 30%. При увеличении поголовья коров до 500 голов и выше с удоем до 4500 литров молока в год возрастает и число реагирующих на ИРТ и ВД-БС КРС животных (до 60%). В хозяйствах с поголовьем коров до 800 голов и выше со средним удоем 5500-7000 литров в год количество положительно реагирующих животных может достигать 90%. К такой категории нами отнесены высокопродуктивные хозяйства.

Вероятно, это связано с широким охватом коров искусственным осеменением, высокой молочной продуктивностью (особенно, резким ее повышением), наличием стрессовых факторов, приводящих к активизации вирусов, их пассированию на естественно восприимчивых животных, что способствует повышению вирулентных свойств.

Во многих районах Новосибирской области отмечали совместное течение этих болезней. Вспышки ИРТ и ВД-БС КРС регистрировали в 12 районах Новосибирской области на откормочных площадках молодняка КРС, в репродукторных, племенных хозяйствах с интенсивным типом ведения животноводства.

Совместное течение этих инфекций сопровождалось высоким уровнем серопозитивности животных. Анализ величин титров вируснейтрализующих антител к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС показал, что значения их существенно увеличиваются в зависимости от концентрации животных в хозяйстве. Разница между титрами антител у животных в хозяйствах с высокой и низкой серопозитивно-стью статистически достоверна (Р<0,05), разница между титрами антител у животных 1 и 2 категории и 2 и 3 категорий недостоверна (Р>0,05).

Выделение вируса ИРТ КРС в культуре клеток и обнаружение его методом молекулярной гибридизации составило не более 30-40% у телят при острых вспышках респираторных болезней с установлением сероконверсии в аналогичных пределах. Выделение вируса ВД-БС КРС в культуре клеток было положи-

тельным в 8% случаев, а выявление в ИФА - 11,7%. Сероконверсию устанавливали в 20-30%. В такой ситуации часто отмечали вариабельную картину результатов серологических исследований Отмечался заметный разброс титров антител к обоим вирусам и, зачастую, отсутствие сероконверсии. При таком типе течения этих инфекций может происходить частичное подавление иммунной реакции организма на один из возбудителей при сохранении или даже усилении значения этого возбудителя в патогенезе заболевания.

2.2.2. Особенности течения ИРТ и ВД-БС КРС в ассоциации с другими инфекционными заболеваниями по результатам серологических и вирусологических исследований

При серологическом обследовании животных из 155 хозяйств области выявили специфические антитела к вирусам ИРТ, ВД-БС и ПГ-3 КРС в 63,8 %, ИРТ, ВД-БС и возбудителям хламидиоза в 9,5 %; ИРТ, ВД-БС КРС, рота- и коро-навирусные инфекции выявляли в 23,4% случаев.

Таким образом, в племенных и товарных хозяйствах ИРТ и ВД-БС КРС у телят может протекать в ассоциации с другими инфекциями. Однако наличие диагностического прироста титров вируснейтрализующих антител чаще выявляемое у больных животных именно к этим вирусам, а также более частое выделение возбудителя от больных животных свидетельствует, на наш взгляд, об их ведущей роли в данных ассоциациях.

2.2.3. Спектр возбудителей инфекционных заболеваний, выделенных от больных телят, в неблагополучных по ИРТ КРС хозяйствах

Целью исследований было определение спектра возбудителей инфекционных заболеваний, выделенных от телят с клиническими признаками респираторных болезней, в неблагополучных по ИРТ и ВД-БС КРС хозяйствах Новосибирской области.

Анализу подвергли результаты исследований 3000 проб биоматериала от телят до 6-ти месячного возраста, полученных из хозяйств с различной степенью инфицированности вирусами ИРТ и ВД-БС КРС, а также с различной плотностью крупного рогатого скота.

Таблица 1 - Возбудители инфекционных заболеваний, выделенные от больных телят в хозяйствах Новосибирской области

п=3000

№ Наименование возбудителя, Количество Выявлено

п/ ассоциации возбудителей положительных положительных проб

п проб от числа исследованных, %

1 2 3 4

1 Вирус ИРТ КРС 900 30

2 Вирус ВД-БС КРС 352 11,7

3 Вирус парагриппа-3 280 9,3

4 Аденовирус КРС 60 2

5 Коронавирус КРС 180 6

6 Salmonella 1200 40

7 Pasteurella:

а) haemolityca 600 20

б) multocyda 400 13,3

1 2 3 4

8 Diplococcus 800 26,7

9 Staphilococcus aureus 400 13,3

10 Вирус ИРТ КРС и ВД-БС 2150 71,7

11 Вирус ИРТ КРС и ПГ-3 1800 60

12 Вирус ИРТ КРС, ВД-БС и ПГ-3 1160 38,7

13 Вирус ИРТ КРС и Pasteurella 600 20

14 Вирус ИРТ КРС и Salmonella 1800 60

15 Вирус ВД-БС и Salmonella 1200 40

16 Вирус ИРТ КРС+ВД-БС и Salmonella 1800 60

17 Вирус ИРТ КРС+ВД-БС, Diplococcus и Salmonella 1200 40

Из данных таблицы 1 видно, что количество проб, содержащих вирус ИРТ КРС в моноварианте, составляет 30%, а ВД-БС КРС - 11,7%, вируса ПГ-3 КРС 9,3%, аденовирус - 2%, коронавирус - 6%. Наиболее часто выявляли следующие ассоциации вирусов: вирус ИРТ и ВД КРС (71,7%), вирус ИРТ и ПГ-3 КРС (60%), трех вирусов - в 38,7% исследованных проб.

Чаще всего встречались следующие вирусно-бактериальные ассоциации: вирус ИРТ КРС и пастерелла 20%, вирус ИРТ КРС и сальмонелла - 60, вирус ВД-БС и сальмонелла - 40%, вирусы ИРТ КРС, ВД-БС, диплококк и сальмонелла - 40% и другие.

Высокий процент выявления вируса ИРТ КРС в ассоциации с вирусом ВД-БС КРС, свидетельствует о широком распространении этих инфекций среди восприимчивого поголовья и, возможно, ведущей роли в инфекционном процессе.

Наиболее часто в качестве осложняющего течение вирусного заболевания встречались бактерии из рода Salmonella (40%). При этом от больных телят чаще выделяли S. tiphymurium (60%) и S. dublin (40%) от общего числа положительных проб. Культуры пастереллы изолировали в 33,3% случаев, при этом они относились к видам multocida и haemolitica.

Кроме того, из проб органов респираторного тракта больных телят 1 -6 месячного возраста изолировали культуры Proteus vulgaris (34,2%) и Staphilococcus aureus (13,3%).

Патогенность изолированных бактерий в большинстве случаев была пониженной, что, вероятно, свидетельствует об их вторичной этиологической роли в развитии респираторной патологии у телят. В мелких хозяйствах первой категории чаще регистрировали респираторные болезни, вызванные бактериями в моноварианте.

Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС чаще всего выявляли в легких (37,8%), трахеальной и бронхиальной слизи (16,5%), слизистой носа (10,2%) и трахее (9,82%). Вирус ИРТ и ПГ-3 - в легких (27,39%), гортани (23,5%), трахеальной и бронхиальной слизи (12,5%). Одновременно три вируса (ИРТ, ВД-БС и ПГ-3) в легких (27,75%), гортани (19,7%), трахеальной и бронхиальной слизи (14,7%), легочных лимфоузлах (12,5%).

Вирусно-бактериальные ассоциации чаще всего выявляли в легких. Одновременно вирус ИРТ и бактерии рода Pasteurella - в 32,9%, вирус ИРТ и бактерии рода Salmonella - в 41,2%, вирус ИРТ и диплококки - в 52,5% исследованных проб. Ассоциацию вирусов ИРТ, ВД-БС и бактерий рода Salmonella - в 58% исследованных проб легких.

Известно, что на возникновение, развитие и течение респираторных болезней большое влияние оказывают хозяйственные факторы, в том числе, концентрация животных и их продуктивность (H.H. Крюков и соавт., 1984).

Анализируя влияние хозяйственных факторов на проявление вирусных инфекций, можно предположить, что интенсивность проявления респираторных болезней молодняка КРС, а также их этиологическая структура различны и зависят от концентрации поголовья в хозяйствах и его продуктивности, в частности, молочной.

В мелких хозяйствах (категория № 1) серопозитивность к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС у животных составляет 20-30%, отмечается, как правило, циркуляция одного-двух возбудителей бактериальной природы (сальмонеллы, диплококки), которые вызывают респираторные болезни молодняка КРС до 1,5-месячного возраста. В хозяйствах, насчитывающих более 500 коров, серопозитивность животных к этим вирусам может достигать 60% В такой ситуации происходит активизация вирусных агентов и их участие в возникновении и развитии респираторных болезней молодняка. От больных телят выделяются вирусы, и отмечается сероконверсия к ним Спектр бактериальных агентов возрастает и может насчитывать 4-5 и более, патогенность их варьирует от низкой до высокой. Возраст восприимчивых животных может достигать 6 месяцев.

В хозяйствах, насчитывающих 800 и более коров с высокой молочной продуктивностью, серопозитивность животных может достигать 90-100%, выделение вирусов происходит чаще, процент сероконверсии также значительно возрастает Спектр возбудителей бактериальной природы, вовлекаемых в инфекционный процесс, также значительно расширяется, патогенность их варьирует от низкой до высокой.

Результаты показывают, что спектр микроорганизмов, вызывающих патологию респираторной системы крупного рогатого скота достаточно широк. Бактериальные заболевания часто являются вторичными, но могут протекать как сопутствующие или самостоятельные. Это зависит от концентрации животных, наличия или отсутствия спецпрофилактики вирусных и бактериальных болезней, а также хозяйственных мер.

В таких случаях смешанного течения респираторных инфекций изолировать возбудители вирусной природы обычными вирусологическими методами сложно и часто их первичная этиологическая роль остается не установленной вследствие постановки диагноза на бактериальные инфекции.

В связи с этим при планировании противоэпизоотических мероприятий крайне необходимо проводить весь комплекс диагностических исследований (вирусологических, бактериологических) с целью расшифровки этиологической структуры конкретной вспышки респираторных заболеваний и выяснения этиологической роли каждого инфекционного агента.

2.2.4. Патогенность штаммов вируса ИРТ КРС для естественно восприимчивых животных

Интраназальное введение штамма «JI» на 3 сутки вызвало у телят (№№ 2221, 2232 и 2186) угнетение, повышение температуры тела до 40-42°С, сероз-но-слизистые выделения из носовой полости, слезотечение, чихание и кашель. Клинические признаки усиливались на 7-10 дни, при этом у животных отмечали затрудненное с хрипами дыхание, сухой кашель, в носовых полостях - значительное скопление слизистого экссудата.

При патологоанатомическом вскрытии трупа вынужденно убитого теленка обнаружили некротический ринит, увеличение и отечность регионарных лимфатических узлов (заглоточных, бронхиальных, легочных), гиперемию надгортанного хряща и миндалин, гиперемию и отечность слизистой оболочки трахеи и значительное скопление в ней серозно-слизистого экссудата и фибрина, очаги некроза размером до 1-2 см2. В легких регистрировали признаки острой катаральной бронхопневмонии с участками ателектазов и гепатизации верхних долей. Оставшиеся телята, инфицированные этим штаммом, выздоровели на 18 день после заражения, но значительно потеряли в весе.

Штамм «С-11» (телята №№ 5356, 5358 и 5307) вызвал аналогичные клинические признаки болезни на 2-3-й день после заражения. На вскрытии выявили аналогичные изменения во внутренних органах, но слизистая оболочка трахеи и надгортанный хрящ оставались без изменений.

На введение штамма СО-12 все телята (№№ 5242, 5264 и 5267) реагировали повышением температуры тела на 3-й день, однако клинические признаки и па-тологоанатомические изменения во внутренних органах были выражены слабее. Заболевание окончилось выздоровлением животных на 10-12-й день после заражения.

Изменений в гематологических показателях у животных, зараженных вирусом ИРТ КРС, не регистрировали.

Исходный вирус реизолировали от инфицированных телят в течение 14 дней, независимо от интенсивности проявления клинических признаков. Выделение вируса в чувствительной культуре клеток было положительным у всех животных на 2-3 дни после заражения Наивысшие титры вируса у телят, инфицированных изолятом 011, выявляли на 5 и 6 дни (6,25-6,75 ^ТЦЦ50/0>| M), а у телят, которым вводили изолят COI 2 на 5-7 дни (5,75-6,25 ^ТЦД5о/о,1ш,)- У телят, инфицированных штаммом JI, наивысшие титры вируса выявили на 7 день (6,00 IgTTJZko/o.i ш,), несмотря на то, что его введение вызвало у зараженных животных развитие наиболее тяжелых клинических признаков.

Титры вируса у животных по группам статистически не различались (Р>0,05), что говорит об отсутствии корреляции между титром реизолированно-го вируса и тяжестью проявления клинических признаков, которые он вызвал. У всех животных отмечалось снижение титров вируса к 14 дню после заражения (срок наблюдения) до 3-4,25 ^ТЦД50/0,| „л-

У контрольных животных отклонений клинических показателей от нормы не отмечали У всех вышедших из опыта телят выявили сероконверсию к вирусу ИРТ через 3 недели после заражения, титры вируснейтрализующих антител составили 5±2,021g2.

Полученные данные свидетельствуют о том, что тестированные Сибирские штаммы вируса ИРТ КРС обладают патогенностью для экспериментально инфицированных животных.

Наиболее тяжелые клинические признаки и выраженные патологоанато-мические изменения во внутренних органах вызвал респираторный штамм «Л» (некротический ринит, некротический трахеит, катаральная бронхопневмония). Штаммы, выделенные из спермы быков-производителей, вызвали: некротический ринит, катаральный трахеит, бронхопневмония (СП), ринит и трахеит средней степени (СО 12).

Вероятно, интенсивность проявления ринита и трахеита зависела от особенностей штамма. Возможно штаммы, циркулирующие среди телят, более вирулентны, чем штаммы, выделенные от латентно инфицированных быков-производителей на племпредприятиях.

Значительный интерес представляет развитие острой катаральной бронхопневмонии у теленка № 5356 и выделение из проб внутренних органов слабопатогенной бактерии Salmonella dublin. Возможно, она реактивировалась из латентного состояния на фоне изменений в эпителии слизистой оболочки верхних дыхательных путей и легких, вызванных размножением вируса, т.к. в процессе размножения он может вызывать поражение альвеолярных макрофагов, а также Т4+-лифоцитов, что приводит к блокированию клеточного звена иммунитета и реактивации секундарной микрофлоры. Наши данные согласуются с результатами исследований Woods G.T. et al. (1968а) и W.D.G. Yates (1984), описавших подобное проявление ИРТ КРС при естественной и экспериментальной инфекции.

2.2.5. Патогенность вируса ВД-БС КРС для естественно восприимчивых животных.

Интраназальное введение штамма ТМ вируса ВД-БС КРС в дозе 4х105"*ТЦД5о/о,1мл на 2-3 сутки вызвало у животных угнетение общего состояния (№№ 2125, 2126 и 2106), повышение температуры тела до 42°С, серозные выделения из носа, катаральный конъюнктивит, слезотечение, выделение вязкой слюны, чихание и кашель. На 7 день после введения суспензии вируса выделения из носовых ходов стали обильнее. Одновременно с повышением температуры тела у животных регистрировали лейкопению со снижением количества лейкоцитов до 2880-3800 кл/мм3, количество лимфоцитов увеличивалось, а нейтро-филов и эозинофилов снижалось.

У теленка № 2125 на носогубном зеркальце, которое было светлого цвета, наблюдали характерные эрозии и язвочки, не более 3-5 мм в диаметре, исчезнувшие на 10 день после инфицирования, а также кратковременную диарею (на 4-6 дни после инфицирования), каловые массы были темно-коричневого цвета со зловонным запахом. Все телята выздоровели на 12 день после заражения, но значительно потеряли в массе. От них в течение всего срока наблюдения изолировали исходный вирус, в то время как вирусологические исследования тампон-ных проб от контрольных животных были отрицательными.

Выделение вируса в чувствительной культуре клеток было положительным у всех животных на 3 день после заражения. Наивысшие титры вируса у телят, инфицированных штаммом ТМ, выявляли на 6 день (3,5-3,7 lgTLtHso/o,i мл)-Понижение титров выделяемого с носовыми секретами вируса происходило к 910 дню и затем они достигали отрицательных значений.

Полученные данные свидетельствуют о выраженной патогенности штамма TM, № V-340 для серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста, вызвавшего у них лейкопению и характерные признаки острого респираторного заболевания с кратковременной диарей.

2.2.6. Экспериментальная острая катаральная бронхопневмония телят, вызванная вирусами вирусной диареи-болезни слизистых, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и бактерией Salmonella dublin

По мнению многих исследователей, 90% пневмоний вызваны вирусами, а затем осложнены бактериями (Н Н.Крюков и соавт, 1984; К П. Юров и соавт, 2001; L.A. Babiuk et а!., 1991; R.W. Fulton et al„ 2004).

В связи с этим целью исследований было воспроизведение в условиях контролируемого эксперимента респираторной болезни у телят путем введения вирусов ВД-БС, ИРТ КРС, патогенность которых была определена в предварительных опытах, и бактерии Salmonella dublin, выделенной из легких больного теленка.

Схема опыта. 9 опытных телят, по принципу аналогов, разделили на 3 группы по 3 головы в каждой.

Телятам первой группы (№№ 2114, 2129 и 2109) первоначально ввели вирус ВД-БС КРС (шт. TM, № V-340) путем распыления его суспензии на слизистую оболочку носа непрерывно в течение 5 минут Через 5 дней им таким же способом одновременно ввели суспензии вируса ИРТ КРС (шт С-11, №V-337) и бактерии Salmonella dublin (шт. АТ-1, № В-1030 с концентрацией Ю"КОЕ/„л.).

Телятам группы 2 (№№ 2125, 2156 и 2010) аналогичным способом вводили только суспензию штамма TM, № V-340, а группы 3 (№№ 2134, 2143 и 2113) таким же способом ввели вирус ИРТ КРС (шт. CI 1, №V-337).

Трем оставшимся животным (группа 4, №№2132, 2154 и 2127) вводили стерильный физиологический раствор.

Введение штамма ТМ на 2-3 сутки вызвало у телят клинические признаки заболевания в виде угнетения общего состояния, повышения температуры тела до 42°С, серозных выделений из носа, катарального конъюнктивита, слезотечения, выделения вязкой слюны, чихания и кашля (рис. 1 и 3)

На 7 день после введения суспензии вируса ВД-БС КРС (на 2 день после введения суспензии вируса ИРТ КРС и Salmonella dublin) носовые выделения стали обильнее, а, начиная с 9 по 21 день после заражения, приобрели более густую консистенцию и зеленоватый цвет, дыхание животных стало затрудненным с хрипами. Одновременно с повышением температуры тела у всех животных регистрировали лейкопению со снижением количества лейкоцитов до 3800-2880 кл/мм3 (рис. 2 и 4).

43 - —

37

36 —--г — — —

I 2 3 4 < 6 7 8 9 10 II 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Дни опыта

Рис 1 - Температурная кривая у телят группы 1, инфицированных вирусами ВД-БС, ИРТ КРС и Salmonella dublin и контрольной группы

1 2 1 4 5 6 7 t 9 10 II 12 13 14 15 16 17 II 19 20 21 22 23 24 25 Дняып

Рис 2 - Количество лейкоцитов у телят группы 1, экспериментально инфицированных вирусами ВД-БС и ИРТ КРС и Salmonella dublin и группы 4 (контроль)

43 т

37

3* г г г- г -------

1 2 * 4 5 Ь 7 8 9 10 11 12 13 14 1$ 16 17 II 19 10 21 21 23 24 25 Дня опыт*

Рис.3 - Температурная кривая у телят опытных групп 2 и 3, инфицированных вирусами ВД-БС и ИРТ КРС

12000

I 2 1 4 5 6 7 • » I» II 12 1} 14 15 U 17 II П 20 21 22 21 24 2i Дшяиытя

Рис 4 - Количество лейкоцитов у телят групп 2 и 3, экспериментально инфицированных вирусами ВД-БС и ИРТ КРС

Вирус ВД-БС КРС (рис.5) выделяли из тампонных проб в течение 6-7 дней после его введения, начиная со 2-3 дня. Вирус ИРТ КРС выделяли из тампонных проб в течение 21 дня с момента его введения, т.е. начиная с 5 дня по 25 день с момента введения вируса ВД-БС КРС.

У телят, зараженных вирусами раздельно, наивысшие титры вируса ВД-БС достигали на 6 день (3,75 lgTTm5o/o 1 „л) после введения, а начиная с 9 дня, вирус из проб носовых выделений не реизолировали. Титры вируса ИРТ КРС достигали максимальных значений на 5 и 6 дни (6,25-6,75 lgTTm5o/o,i Мл) после инокуляции и понижались к 14 дню после заражения (срок наблюдения) до 3,25 lgTLUbo/o,i „л (рис. 6).

На вскрытии трупа вынужденно убитого теленка установили некротический ринит, увеличение регионарных лимфоузлов, скопление пенистого экссудата в трахее, острую катаральную лабарную бронхопневмонию с преимущественным поражением левой доли легкого. При бактериологических исследованиях из проб легкого изолировали культуру Salmonella dublin и дополнительно -Bacillus subtilis. Срок выздоровления оставшихся телят затянулся до 21 дня, у них отмечали значительное снижение массы тела.

Рис 5 - Длительность выделения вирусов с носовыми секретами телят опытной группы 1, инфицированных вирусами ВД-БС и ИРТ КРС и Salmonella dublin

Рис.6 - Длительность выделения вирусов ИРТ и ВД-БС КРС с носовыми секретами телят групп 2 и 3 после экспериментального заражения

Результаты вирусологических и бактериологических исследований проб внутренних органов, полученных от вынужденно убитого теленка, представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Распространение вирусов ВД-БС, ИРТ КРС и бактерии Salmonella dublin во внутренних органах и тканях экспериментально инфицированного _ _теленка____

Орган, ткань Наличие возбудителя (+;-)

Вирус ВД КРС Вирус ИРТ КРС Salmonella dublin

Слизистая носа + + -

Слизистая трахеи + + -

Миндалины + + -

Лимфатические узлы: средостенные легочные + + +

+ + +

Бронхи + + +

Легкие + + +

Оба вируса реизолировали из проб верхних и нижних отделов респираторного тракта, а Salmonella dublin из проб нижнего отделов легких, бронхов, легочных и средостенных лимфоузлов.

У животных, которым вводили только штамм ТМ, регистрировали признаки острого респираторного заболевания, сопровождавшегося угнетением общего состояния, серозными выделениями из носовых полостей, слезотечением, чиханием и лейкопенией (2880-3800 кл/мм3).

У телят, зараженных штаммом С11 вируса ИРТ КРС, развились характерные признаки острого инфекционного ринотрахеита. Вирусологические исследования тампонных проб от контрольных животных, которым вводили только физиологический раствор, были отрицательными.

Следует отметить, что клинические признаки и патологоанатомические изменения во внутренних органах убитых с диагностической целью телят были практически идентичными признакам, которые встречаются при вспышках массовых респираторных заболеваний молодняка КРС в естественных условиях.

3. ВЫВОДЫ

1 ИРТ и ВД-БС КРС широко распространены в племенных и товарных хозяйствах Новосибирской области. Серопозитивность животных к вирусу ИРТ составляла в среднем 61,3%, а к вирусу ВД-БС КРС - 66,7%. Распространение этих болезней не имело выраженной географической приуроченности. Титры вируснейтрализующих антител к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС повышались у животных с возрастом и в зависимости от величины и концентрации поголовья в хозяйстве Разница между титрами антител у животных в хозяйствах с высокой и низкой концентрацией статистически достоверна (Р<0,05).

2. По данным серологических исследований ИРТ и ВД-БС КРС в племенных и товарных хозяйствах Новосибирской области протекали в ассоциации с другими инфекционными болезнями Встречались ассоциации: ИРТ, ВД-БС, ПГ - 3 КРС (63,8 % обследованных хозяйств); ИРТ, ВД-БС КРС, хламидиоз (9,5%) и другие. Наличие диагностического прироста титров вируснейтрализующих антител, выявляемое у больных и переболевших животных к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС свидетельствовало об их ведущей роли в данных ассоциациях.

3. Выделение вируса ИРТ КРС в моноварианте в культуре клеток и обнаружение его методом молекулярной гибридизации составило не более 30-40% у

телят при острых вспышках респираторных болезней с установлением серокон-версии в аналогичных пределах. Выделение вируса ВД-БС КРС в культуре клеток было положительным в 8%, а выявление в ИФА в 11,7 случаев с установлением сероконверсии в 20-30%. В качестве осложняющего этиологического агента присутствовали бактерии рода Salmonella (40%), Pasteurella (33,3%) и Diplo-coccus (26,7%). Частота выделения и спектр инфекционных агентов повышались в зависимости от концентрации животных в хозяйстве.

4. От больных животных выделяли ассоциации вирусов: вирус ИРТ и ВД-БС КРС (71,7%), вирус ИРТ и ПГ-3 КРС (60%), три вируса одновременно в 38,7%. Вирусно-бактериальные ассоциации: вирус ИРТ КРС и бактерии рода Pasteurella- 20%, вирус ИРТ КРС и бактерии рода Salmonella- 60%, вирус ВД-БС и Salmonella - 40%, вирусы ИРТ, ВД-БС КРС, бактерии родов Diplococcus и Salmonella - 40% от числа исследованных проб биоматериала.

Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС КРС чаще выявляли в легких (37,8%), трахеальной и бронхиальной слизи (16,5%), слизистой носа (10,2%) и трахее (9,82%). Одновременно вирус ИРТ и бактерии рода Pasteurella - в 32,9%, вирус ИРТ и бактерии рода Salmonella - в 41,2%, вирус ИРТ и бактерии рода Diplococcus- в 52,5%, а ассоциацию вирусов ИРТ, ВД-БС и бактерий рода Salmonella отмечали в 58% исследованных проб легких.

5. Тестированные штаммы вируса ИРТ КРС, выделенные от животных с различными клиническими формами болезни, обладали патогенностью для се-ронегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста и тропизмом к легочной ткани. Интенсивность проявления ринита и трахеита имела штаммовую зависимость. Наибольшей вирулентностью обладали «респираторный» штамм JI и штамм СП, выделенный из спермы быка-производителя, вызвавшие некротический ринит, некротический трахеит и острую катаральную бронхопневмонию.

6. Цитопатогенный шт. ТМ вируса ВД-БС КРС обладал патогенностью для серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста, вызвав у них лейкопению и характерные признаки острого респираторного заболевания, сопровождавшегося повышением температуры тела до 42°С, серозными выделениями из носа, катаральным конъюнктивитом, слезотечением, выделением вязкой слюны, чиханием и кашлем, а также кратковременной диарей.

7. Экспериментальное заражение серонегативных к вирусам телят последовательно вирусом ВД-БС, ИРТ КРС и бактерией Salmonella dublin вызвало у них признаки острого респираторного заболевания, сопровождавшегося некротическим ринитом и острой катаральной лабарной бронхопневмонией с преимущественным поражением левой доли легких. Более длительное присутствие вируса ИРТ КРС в носовых выделениях и органах респираторного тракта, включая легкие, в более высоких концентрациях, свидетельствует о его тропизме к этим органам и более выраженных антигенных свойствах.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты исследований отражены в методических рекомендациях «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений) Материалы рассмотрены и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 6 от 09.11.04 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего

Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 23 от 09.11.04 г ), а также использованы при составлении программы по профилактике и борьбе с вирусными респираторными болезнями в Новосибирской области (2001-2005 гг.).

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Этиологические факторы, вызывающие патологию респираторной и репродуктивной систем крупного рогатого скота/Соавт.' А.Г. Глотов, Т.И Глотова, A.B. Нефедченко и др.// Современные проблемы эпизоотологии- Материалы Меж-дунар. Нач конф. (Краснообск, 30 юня 2004 г.)/РАСХН. Сиб. Отд-ние.-Новосибирск,-2004.-С.59-66.

2 Распространение вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота в Сибири и ее роль в этиологии респираторных болезней телят/Соавт : А.Г Глотов, Т.И. Глотова// Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Сиб. Междунар. Вег. Конгр./ Новосиб. Гос. Аграр Ун-т - Новосибирск - 2005.-с.121-122.

3. Изучение вирулентности изолятов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота на естественно восприимчивых животных/ Соавт.- А Г.Глотов, Т.И.Глотова// Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Сиб. Междунар. Вет. Конгр / Новосиб. Гос. Аграр. Ун-т.- Новосибирск.-2005.-с. 120-121.

4. Свойства изолятов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота/Соавт.: А.Г. Глотов, Т.И. Глотова//Ветеринария.-2005.-5.-С. 24-27.

5. Экспериментальная респираторная болезнь телят, вызванная вирусами вирусной диареи, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и бактериями Salmonella Dublin/Соавт.- Глотов А.Г., Глотова Т.И., Н.В Нефедченко и др.//Сибирский вестник сельскохозяйственной науки.-2005.-№2.-С.44-49.

Подписано в печать 05.10.2005 г. Формат 60x84 1/16. Печ. л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ № 356.

ИПЦ «Юпитер» 630501, Новосибирская область, пос. Краснообск

i

%

I

3 i

1 t

i

«M 9 5 5 5

РНБ Русский фонд

2006-4 20715

Актуальность проблемы. С ликвидацией крупных промышленных комплексов по откорму молодняка крупного рогатого скота (КРС) теряют значение и остроту проявления многие вирусные заболевания. Актуальным является изучение проявления вирусных болезней в племенных, товарных хозяйствах молочного направления, частных подворьях и др.

Среди многообразия вирусных агентов, циркулирующих среди крупного рогатого скота, вирусы инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) крупного рогатого скота занимают особое место в связи с многообразием клинических проявлений и тяжестью течения болезней, вызываемых ими (Н.Н. Крюков, 1984; К.П. Юров и соавт., 2001, 2003; W.D.G. Yates, 1984; D. Goens, 2002; A.L.E. Lindberg, 2003; RW. Fulton et al, 2004).

Многие исследователи отводят первичную этиологическую роль в возникновении массовых респираторных болезней молодняка КРС именно этим вирусам, т.к. инфицированные ими животные становятся восприимчивыми к развитию секундарной микрофлоры и осложнению инфекционного процесса, в который могут вовлекаться пастереллы, сальмонеллы, диплококки, микоплазмы и другие микроорганизмы в различных сочетаниях (Н.Н. Крюков и соавт., 1984; Е.В. Андреев, 1984; W.D.G. Yates, 1984; L.A. Babiuk et al., 1991; RW. Fulton et al., 2004).

ИРТ КРС и ВД-БС КРС регистрируется во многих областях Российской Федерации и странах СНГ, и причиняют значительный экономический ущерб мясному и молочному скотоводству (П.А. Красочко, 1991; П.Н. Пыталев, 1996; А.И. Салимов, 1997; О.Г. Петрова и соавт., 1999; А.Г. Высокопоясный и соавт., 2000; Н.И. Закутский, 2000; В.А. Мищенко и соавт., 2001; Н.Ю. Басова, 2002; Э.А. Шегидевич и соавт., 2003; К.П. Юров и соавт, 2003).

В связи с этим изучение особенностей эпизоотической ситуации и проявления вирусных респираторных болезней КРС, в зависимости от типа хозяйства, от концентрации животных, а также от вирусно-бактериальных ассоциаций, имеет большое значение при планировании оздоровительно-профилактических мероприятий (А.Г. Глотов и соавт., 2001).

Наличие латентной и персистентной формы у этих болезней существенным образом осложняет проведение лечебно-профилактических мероприятий. Феномен латенции приводит к неконтролируемому распространению возбудителя во внешней среде, где немаловажную роль играют животные-вирусоносители, особенно, быки-производители (Е.А. Андреев, 1984; Г.Э. Фарботко и соавт., 1994; А.Г. Глотов, 1999; V. Bitsch, 1984; Al'de Gee et al., 1996; G. Van Shchaik, 1998).

Учитывая длительную персистенцию возбудителя в организме животного и, в конечном счете, на уровне популяции крупного рогатого скота, зачастую, без проявления клинических признаков, определение вирулентности выделенных изолятов вирусов вызывает большой научно-практический интерес исследователей всего мира (М. Ackermann, 2001).

Цель и задачи исследований. Изучить распространение и особенности проявления ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области в зависимости от типа хозяйств и концентрации поголовья крупного рогатого скота и определить патоген-ность выделенных штаммов вирусов на естественно восприимчивых животных.

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение ИРТ и ВД-БС КРС в Новосибирской области в период с 1999 по 2004 гг, установить роль вирусов в этиологии массовых респираторных болезней мол о дняка КРС;

2. Изучить ассоциации вирусов и бактерий, выделенных при вспышках массовых респираторных болезней в Новосибирской области.

3. В условиях контролируемых экспериментов определить патогенность штаммов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, выделенных в различные годы от больных и инфицированных животных, а также воспроизвести острую бронхопневмонию вирусно-бактериальной этиологии и изучить ее клинические проявления на телятах 4-6-месячного возраста.

Научная новизна.

1. Доказаны широкое распространение ИРТ и ВД-БС КРС на территории Новосибирской области и ведущая роль возбудителей этих болезней в этиологии массовых респираторных инфекций телят в крупных хозяйствах племенного и молочного направления. Установлена взаимосвязь между концентрацией поголовья, серопозитивностью и частотой выделения вирусов от больных животных.

2. Изучены ассоциации вирусов и бактерий, возникающие при массовых вспышках респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота и установлена преобладающая роль бактерий из рода Salmonella в качестве осложняющего агента.

3. В контролируемых опытах на серонегативных к вирусам телятах 4-6-месячного возраста доказана патогенность штаммов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, выделенных в Сибири от больных и инфицированных животных.

4. Впервые в условиях контролируемого эксперимента воспроизведена острая смешанная катаральная бронхопневмония, вызванная интраназальным введением вирусов ИРТ и ВД-БС КРС и бактерии Salmonella dublin, выделенных при вспышках массовых респираторных болезней молодняка КРС, а также из спермы инфицированных быков-производителей.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации использованы при составлении:

-Методических рекомендаций «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений). Материалы рассмотрены и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 6 от 09.11.04 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 23 от 09.11.04 г.);

- Программы по профилактике и борьбе с вирусными респираторными болезнями в Новосибирской области (2001-2005 гг.).

Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, так как дают возможность расширить научные знания относительно роли вирусов и бактерий в возникновении массовых респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота и могут быть использованы при дальнейшем изучении эпизоотологии, а также патогенеза ИРТ, ВД-БС КРС и смешанных ви-русно-бактериальных инфекций молодняка крупного рогатого скота в целях совершенствования противоэпизоотических мероприятий.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований использованы при разработке:

1. Методических рекомендаций: «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений). Материалы рассмотрены и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 6 от 09.11.04 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 23 от 09.11. 04 г.);

2. Программы по профилактике и борьбе с вирусными респираторными болезнями крупного рогатого скота в Новосибирской области на период 2001-2005 гг. (утверждена начальником управления ветеринарии Новосибирской области 14.

02.01 г.), внедренной в хозяйствах Новосибирской области с экономическим эффектом 8 рублей на 1 рубль затрат.

Апробация полученных результатов. Материалы исследований доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: «Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними» (Иркутск, 2001), Современные проблемы эпизоотологии (Новосибирск, 2004), Актуальные вопросы ветеринарной медицины (Новосибирск, 2005), Сибирском международном ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, приложения. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 8 таблицами. Список литературы включает 273 источника, в том числе 206 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. ИРТ и ВД-БС КРС широко распространены в племенных и товарных хозяйствах Новосибирской области. Серопозитивность животных к вирусу ИРТ составляла в среднем 61,3%, а к вирусу ВД-БС КРС - 66,7%. Распространение этих болезней не имело выраженной географической приуроченности. Титры вируснейтрализующих антител к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС повышались у животных с возрастом и в зависимости от величины и концентрации поголовья в хозяйстве. Разница между титрами антител у животных в хозяйствах с высокой и низкой концентрацией статистически достоверна (Р<0,05).

2. По данным серологических исследований ИРТ и ВД-БС КРС в племенных и товарных хозяйствах Новосибирской области протекали в ассоциации с другими инфекционными болезнями. Встречались ассоциации: ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 КРС (63,8 % обследованных хозяйств); ИРТ, ВД-БС КРС, хла-мидиоз (9,5%) и другие. Наличие диагностического прироста титров вируснейтрализующих антител, выявляемое у больных и переболевших животных к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС свидетельствовало об их ведущей роли в данных ассоциациях.

3. Выделение вируса ИРТ КРС в моноварианте в культуре клеток и обнаружение его методом молекулярной гибридизации составило не более 3040% у телят при острых вспышках респираторных болезней с установлением сероконверсии в аналогичных пределах. Выделение вируса ВД-БС КРС в культуре клеток было положительным в 8%, а выявление в ИФА в 11,7 случаев с установлением сероконверсии в 20-30%. В качестве осложняющего этиологического агента присутствовали бактерии рода Salmonella (40%), Pasteurella (33,3%) и Diplococcus (26,7%). Частота выделения и спектр инфекционных агентов повышались в зависимости от концентрации животных в хозяйстве.

4. От больных животных выделяли ассоциации вирусов: вирус ИРТ и ВД-БС КРС (71,7%), вирус ИРТ и ПГ-3 КРС (60%), три вируса одновременно в 38,7%. Вирусно-бактериальные ассоциации: вирус ИРТ КРС и бактерии рода Pasteurella- 20%, вирус ИРТ КРС и бактерии рода Salmonella- 60%, вирус ВД-БС и Salmonella - 40%, вирусы ИРТ, ВД-БС КРС, бактерии родов Diplococcus и Salmonella - 40% от числа исследованных проб биоматериала.

Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС КРС чаще выявляли в легких (37,8%), трахеальной и бронхиальной слизи (16,5%), слизистой носа (10,2%) и трахее (9,82%). Одновременно вирус ИРТ и бактерии рода Pasteurella - в 32,9%, вирус ИРТ и бактерии рода Salmonella - в 41,2%, вирус ИРТ и бактерии рода Diplococcus- в 52,5%, а ассоциацию вирусов ИРТ, ВД-БС и бактерий рода Salmonella отмечали в 58% исследованных проб легких.

5. Тестированные штаммы вируса ИРТ КРС, выделенные от животных с различными клиническими формами болезни, обладали патогенностью для серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста и тропизмом к легочной ткани. Интенсивность проявления ринита и трахеита имела штаммовую зависимость. Наибольшей вирулентностью обладали «респираторный» штамм Л и штамм С11, выделенный из спермы быка-производителя, вызвавшие некротический ринит, некротический трахеит и острую катаральную бронхопневмонию.

6. Цитопатогенный шт. ТМ вируса ВД-БС КРС обладал патогенностью для серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста, вызвав у них лейкопению и характерные признаки острого респираторного заболевания, сопровождавшегося повышением температуры тела до 42°С, серозными выделениями из носа, катаральным конъюнктивитом, слезотечением, выделением вязкой слюны, чиханием и кашлем, а также кратковременной диарей.

7. Экспериментальное заражение серонегативных к вирусам телят последовательно вирусом ВД-БС, ИРТ КРС и бактерией Salmonella dublin вызвало у них признаки острого респираторного заболевания, сопровождавшегося некротическим ринитом и острой катаральной лабарной бронхопневмонией с преимущественным поражением левой доли легких. Более длительное присутствие вируса ИРТ КРС в носовых выделениях и органах респираторного тракта, включая легкие, в более высоких концентрациях, свидетельствует о его тропизме к этим органам и более выраженных антигенных свойствах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Результаты исследований отражены в методических рекомендациях «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений). Материалы рассмотрены и утверждены Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 6 от 09 ноября 2004 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхо-закадемии (протокол № 23 от 09 ноября 2004 г.), а также использованы при составлении программы по профилактике и борьбе с вирусными респираторными болезнями в Новосибирской области (2001-2005 гг.).

122