Автореферат и диссертация по медицине (14.01.14) на тему:Значение антимикробных пептидов в формировании патологии полости рта у детей с атопическим дерматитом

Кулакова Елена Владимировна

ЗНАЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ В ФОРМИРОВАНИИ ПАТОЛОГИИ ПОЛОСТИ РТА У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ

14.01.14 - Стоматология (мед. науки) 14.01.08 - Педиатрия (мед. науки)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

6 ноя 2щ

Москва-2014

005554279

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО МГМСУ имени А.И. Евдокимова Минздрава России).

Научные руководители:

Елизарова Валентина Михайловна - заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор кафедры детской терапевтической стоматологии ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И.Евдокимова» Министерства здравоохранения РФ.

Пампура Александр Николаевич - доктор медицинских наук, заведующий отделением аллергологии и клинической иммунологии ОСП «Научно-исследовательского клинического института педиатрии ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения РФ.

Официальные оппоненты:

Ландинова Валерия Дмитриевна, доктор медицинских наук, профессор кафедры стоматологии детского возраста ГБОУ ДПО «Российская Медицинская Академия Последипломного Образования» Министерства здравоохранения РФ.

Лыскина Галина Афанасьевна, доктор медицинских наук, профессор кафедры детских болезней ГБОУ ВПО «Первый московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения РФ.

Ведущее учреждение:

ФГБОУ ВПО «Российский Университет Дружбы Народов» Министерства образования и науки РФ. // /^i

Защита состоится «'у U» /¿C/wZllJifl-014 г. в у^часов на заседании диссертационного совета Д 208.044.03, созданного на базе ГБОУ ВПО МГМСУ имени А.И. Евдокимова Минздрава России по адресу: 127473, Москва, ул. Долгоруковская д.4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета имени А.И. Евдокимова (127206, г. Москва, ул. Вучетича, д. 10а) и на сайте университета http: //dissov.msmsu.ru

О

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, —

доктор медицинских наук, профессор Гиоева Ю.А.

Общая характеристика работы Актуальность темы

Кариес, его осложненные формы и патология слизистой оболочки полости рта часто встречаются у детей. Доказана четкая взаимосвязь между состоянием полости рта и общим соматическим статусом ребенка. В этой связи особенно актуально выявление особенностей состояния полости рта у детей с аллергическими заболеваниями. Патогенез последних связан с многочисленными изменениями иммунного ответа, в частности, нарушениям врожденного иммунитета. Дебютом аллергии в детском возрасте является, как правило, IgE-опосредованная пищевая аллергия [Баранова A.A., Хаитова P.M.., 2001; Варламов Е.Е. и соавт., 2012; Ревякина В.А., Боровик Т.Э., 2004], которая наиболее часто проявляется атопическим дерматитом (АтД). Начало заболевания обусловлено взаимодействием предрасполагающих генов и триггерных факторов [Варламов Е.Е. и соавт., 2012].

Восприимчивость к триггерным факторам зависит от иммунного статуса больного. В физиологических реакциях организма, направленных на поддержание генетического постоянства внутренней среды, наиболее важную роль играют факторы врожденного иммунитета, а именно естественная резистентность против микроорганизмов и клеток, инфицированных внутриклеточными микробами [Цывкина Е.А., 2010]. Врожденный иммунитет - это наследственно закрепленная система защиты многоклеточных организмов от любых патогенов. Он обеспечивает распознавание и элиминацию микроорганизмов в первые часы их вторжения, выработку сигналов, обуславливающих формирование адаптивного иммунитета. У позвоночных в процессе эволюционного развития и взаимоотношений с микроорганизмами возникли многочисленные механизмы защиты от агрессивных факторов внешней среды [Будихина A.C., 2008].

У человека существует несколько уровней защиты от инфекций, среди

которых: покровные ткани (кожа и слизистые оболочки), микробицидные экзосекреты (соляная кислота желудка, бактерицидные компоненты слюны, литические пищеварительные компоненты кишечника и т.п.); реакции со стороны сосудов, направленные на создание барьера проникновению внешних факторов во внутреннюю среду (быстрый локальный отек в очаге повреждения); клетки, обладающие фагоцитарной активностью, бактерицидные пептиды сыворотки крови, тканевой жидкости или секретов - система комплемента, лизоцим, антимикробные пептиды (АМП) и др. [Баранова A.A., 2010; Балаболкин И.И., 2001; Хаитова P.M., 2002]. Факторы врожденного иммунитета включаются в защиту мгновенно после преодоления возбудителем кожных или слизистых оболочек. Их влияние продолжается в течение всего периода борьбы организма с инфекцией, но наиболее эффективно в течение первых четырех часов после внедрения микроба, когда врожденный иммунитет является практически единственным защитником организма [Цывкина Е.А., 2010]. Система врожденного иммунитета эволюционно более древняя, чем система приобретенного иммунитета. Она реагирует не на конкретные антигены, а на определенные классы антигенов, характерные для патогенных организмов (полисахариды клеточной стенки бактерий, двунитевая РНК некоторых вирусов и т.п.). Одним из малоизученных компонентов системы врожденного иммунитета являются антимикробные полипептиды (АМП) [Цывкина Е.А., 2010].

Защита эпителиальных поверхностей от микроорганизмов зависит от экспрессии АМП. При атопическом дерматите пептиды эпителия кожи, препятствуют неконтролируемому росту St. aureus. Уменьшение или отсутствие продукции, а также изменение активности антимикробных пептидов ведет к повышению чувствительности макроорганизма к микроорганизмам и к развитию заболевания [Будихина A.C., 2008; Цывкина Е.А.,2010].

Основные классы АМП экпрессируются как в ротовой полости (слюне и

эпителии), так и в эпителии кожи. Эти и другие факты обосновывают изучение роли антимикробных пептидов патологии полости рта у детей с атопическим дерматитом [Будихина A.C., 2008; Цывкина Е.А., 2010].

Цель исследования

Определить взаимосвязь состояния полости рта и концентрации антимикробных пептидов (кателицидина, а-дефензинов) в ротовой жидкости у детей с атопическим дерматитом.

Задачи исследования

1. Оценить состояние здоровья полости рта у детей с атопическим дерматитом (твердые ткани зуба, состояние пародонта).

2. Установить концентрацию антимикробных пептидов (а-дефензины, LL-37) в ротовой жидкости у детей с атопическим дерматитом.

3. Определить уровень антимикробных пептидов (а-дефензины, LL-37) в слюне у детей без атопии.

4. Выявить связь стоматологического статуса у детей с атопическим дерматитом с концентрацией антимикробных пептидов в ротовой жидкости.

Научная новизна

Впервые определена концентрация антимикробных пептидов ротовой жидкости как у детей с атопическим дерматитом, так и у детей без атопии.

Доказано, что у детей с атопическим дерматитом концентрация антимикробных пептидов ротовой жидкости снижена. Причем при

нарастании интенсивности кариозного процесса уровень 1Х-37 и а-дефензинов снижается.

Установлено, что концентрация кателицидина в слюне детей зависит от спектра сенсибилизации.

Установлена связь между уровнем кателицидина ротовой полости и состоянием пародонта у детей с атопическим дерматитом и у детей без аллергических заболеваний.

Практическая значимость работы

В результате проведенного исследования получены важные для практического здравоохранения данные о необходимости учета наличия у детей атопического дерматита и пищевой сенсибилизации с целью оказания эффективной стоматологической помощи, а также разработки методов профилактики кариеса и заболеваний пародонта (подключать антимикробные препараты для лечения заболеваний пародонта, изучение возможности стимуляции выработки эндогенных антимикробных пептидов).

Установлена концентрация антимикробных пептидов слюны у детей с санированной полостью рта, как без аллергических заболеваний, так и у детей с атопией.

Установлена концентрация антимикробных пептидов полости рта у детей с атопическим дерматитом при различной тяжести течения процесса.

Основные положения, выносимые на защиту

Представлена современная научная концепция об участии антимикробных пептидов в развитии воспалительных заболеваний полости рта у детей.

Состояние полости рта у детей зависит от концентрации антимикробных пептидов в ротовой жидкости. Наличие атопического дерматита и пищевой сенсибилизации у детей отражается в снижении уровня LL-37 в ротовой жидкости.

Интенсивность кариозного процесса у детей связана с концентрацией антимикробных пептидов ротовой жидкости. Причем, у детей без аллергических заболеваний при нарастании интенсивности кариеса отмечается увеличение уровня антимикробных пептидов, тогда как для детей с атопическим дерматитом характерна обратная ситуация.

Апробация диссертации

Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на XI Российском конгрессе «Инновационные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2012), [диплом лауреата конкурса молодых ученых]; на VIII научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы детской стоматологии и ортодонтии», посвященной 10-летию кафедры стоматологии детского возраста и ортодонтии Первого Московского Государственного Медицинского Университета имени И.М. Сеченова (Москва 2012), [1 место конкурса молодых ученых]; на XX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2013), [3 место конкурса молодых ученых]; на совместном совещании сотрудников кафедры детской терапевтической стоматологии, кафедры педиатрии ГБОУ

ВПО «МГМСУ им. А. И. Евдокимова» 30 сентября 2013 года.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедре детской терапевтической стоматологии ГБОУ ВПО «МГМСУ им. А. И. Евдокимова».

Личный вклад автора

Автором лично было проведено обследование 98 пациентов, опрос, осмотр, забор материала, изучение историй болезни пациентов, обработка, систематизация и статистическая обработка данных, подготовка основных публикаций по выполненной работе по теме диссертации.

Публикации по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ в материалах отечественных и международных конгрессов, 4 из них - в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 95 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения и выводов. Библиографический указатель включает 98 источников, в том числе 16 отечественных и 83 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 18 таблицами, 19 рисунками.

Основное содержание работы

Методология и методы исследования

Работа выполнена в период 2010 по 2013 гг. в отделении аллергологии и клинической иммунологии (заведующий отделением - д.м.н., А.Н.Пампура), научно-исследовательской лаборатории общей патологии на базе ОСП «НИКИ Педиатрии» ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава РФ. Всего обследовано 98 детей в возрасте от 6 до 18 лет, из них 36 девочек (36,7%), 62 мальчика (63,7%). Критерием включения в основную группу было наличие у ребенка атопического дерматита различной степени тяжести. Критерием исключения из исследования считали наличие у детей других аллергических заболеваний (бронхиальная астма, экзема, поллиноз), отказ пациентов от участия в исследовании.

Клиническое обследование

Всем детям было проведено общеклиническое обследование (анализ анамнестических данных, оценка клинических симптомов, клинического анализов крови, мочи, кала, биохимического исследования крови), ультразвуковые исследования органов брюшной полости и забрюшинного пространства.

Критерии диагноза и оценка степени тяжести атопического дерматита соответствовали общепринятым стандартам. Для оценки тяжести атопического дерматита использовалась полуколичественная шкала SCORAD (severity scoring of atopic dermatitis), разработанную группой ученых европейских стран (1993) [European Task Force on Atopic Dermatitis]. Данная шкала объединяет объективные (интенсивность и распространенность кожного поражения) и субъективные (интенсивность ночного кожного зуда и нарушение сна) критерии.

Всем детям было проведено аллергологическое обследование, которое включало в себя сбор и анализ аллергологического анамнеза по общепринятой схеме, кожные скарификационные пробы с различными аллергенами, определение уровня специфического IgE в сыворотке крови. Определение уровней специфических IgE к пищевым, аллергенам в сыворотке крови проводилось иммунохемилюминесцентным методом (ImmunoCap, Phadia AB, Швеция) с использованием коммерческих реактивов.

Исследование ротовой жидкости проводилось в научно-исследовательской лаборатории общей патологии (НИЛ общей патологии, руководитель лаборатории профессор, д.м.н. Сухоруков B.C.), ведущим научным сотрудником, к.м.н. Виноградовой Т.В.

Иммуноферментный анализ нативной слюны проводился на аппарате RIDER ANTHOOS 2020 с помощью набора Human LL-37 ELISA, Human HNP 13 ELISA (Hycult Biotech, Голландия). Данные наборы были впервые применены для определения уровня антимикробных полипептидов в нативной слюне. Слюна собиралась утром натощак (перед чисткой зубов) путем прямого стекания в пробирку. Количество материала 0,2 мл. Использовались пробирки SaliCap, изготовленные из полипропилена, что препятствует адгезии АМП на стенках пробирки. Собранный материал центрифугировался со скоростью 1500 об/мин в течении 15 минут. Надосадочную жидкость замораживали при температуре -70°С. По мере накопления материала был поставлен эксперимент.

Определение стоматологического статуса

Для определения стоматологического статуса использовались данные основных и дополнительных методов обследования.

Объективное обследование включало в себя: осмотр полости рта и зубов при помощи стандартного набора стоматологических инструментов. Оценивалось состояние слизистой оболочки, состояние твердых тканей зубов (наличие кариеса), тканей пародонта.

Интенсивность кариеса зубов отражает степень поражения зубов кариесом у одного индивидуума

• интенсивность кариеса зубов в период сменного прикуса: индекс КПУ+кп - сумма всех постоянных и временных зубов, пораженных кариес, пломбированных и удаленных.

• интенсивность кариеса постоянных зубов: индекс КПУ зубов - это сумма кариозных, пломбированных и удаленных зубов у одного пациента (зуб, имеющий одновременно кариозную полость и пломбу считается кариозным).

Определение гигиенического состояния полости рта проводилось с использованием упрощенного индекса гигиены полости рта, отражающего количество (толщину и площадь) и качество зубных отложений. Перед проведением исследования для обнаружения зубного налета поверхности исследуемых зубов окрашивались специальными красителями.

• Упрощенный индекс гигиены полости рта (ИГР-У) по Грин-Вермильону (OHI-S, Green J.C., Vermillion J.K., 1964) основан на

количественном изучении мягких и твердых зубных отложений. Мягкий зубной налет выявлялся путем окрашивание вестибулярной поверхности 16, 11, 26, 31 зубов и язычной поверхности 36, 46 зубов растворов Шиллера-Писарева. Наличие над - и поддесневых твердых зубных отложений определялось при помощи стоматологического зонда на язычной и вестибулярной поверхностях тех же зубов.

• Папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс PMA (Parma С., I960). Данный индекс применяется для оценки интенсивности воспалительной реакции тканей пародонта и ее количественного выражения. Определяется воспаление десны у каждого зуба в области десневого сосочка, свободной краевой десны и прикрепленной десны после окрашивания раствором Шиллера - Писарева.

Статистический анализ проведен методами непараметрической статистики. Результаты исследования обрабатывали с использованием компьютерных программ «Excel» (Microsoft) и «Statistica 8.0» (StatSoft).

Результаты собственных исследований

Всего обследовано 98 детей в возрасте от 6 до 18 лет, из них 36 девочек (36,7%), 62 мальчика (63,7%). Дети были распределены на две группы. Основную группу составили больные с атопическим дерматитом различной степени тяжести. В группу сравнения вошли дети без аллергических заболеваний. Критерием исключения из исследования считали наличие у детей других аллергических заболеваний (бронхиальная астма, экзема, поллиноз), отказ пациентов от участия в исследовании. В дальнейшем 38 детей выбыли из исследования по различным причинам: интеркуррентные заболевания, ОРВИ, прием иммуномодуляторов, неполное аллергологическое обследование, наличие хронических воспалительных заболеваний (обострение хронического тонзиллита, хронический пиелонефрит).

Таким образом, полноценный анализ был выполнен у 60 детей от 6 до 18 лет, из них 22 девочки (36,6%), 38 мальчиков (63,3 %). 38 детей страдали атопическим дерматитом различной степени тяжести.

Тяжелый атопический дерматит отмечался у 26 детей (43,3%), у 12 (20%) пациентов отмечалось среднетяжелое течение атопического дерматита. Среди больных АтД доказанная пищевая аллергия выявлялась у 28 человек, а у 10 детей гиперчувствительность к пищевым аллергенам отсутствовала.

В группу сравнения вошли 22 ребенка, у которых не выявлены аллергические заболевания, были отрицательными результаты

аллергологического скринингового исследования.

Все дети, участвующие в исследовании были распределены на три возрастные группы: 6-9 лет (31 ребенок), 10-12 лет (14 детей), 13-18 лет (15 человек). Был определен уровень антимикробных полипептидов полости рта в зависимости от возраста. Результаты представлены в таблице 1. Статистически не было выявлено зависимости между уровнем антимикробных пептидов и возрастом детей, участвующих в исследовании.

Таблица 1

Уровень антимикробных пептидов у детей различных возрастных групп

1 группа, п=31 (6-9 лет) 2группа, п=14 (10-12 лет") Згруппа, п=15 (13-18 лет) Р

1Х-37, нг/мл 0,7±0,2 0,81±0,85 0,78±0,12 1гр/2гр=0,6 1гр/3гр=0,57 2гр/3гр=0,65

НЫР1-3, нг/мл 7,01±2,29 7,45±2,3 7,4±2,6 1гр/2гр=0,71 1гр/3гр=0,69 2гр/3гр=0,76

В данном исследовании мы изучали активность двух основных антимикробных пептидов полости рта - ЬЬ-37 (кателицидинов) и НИР 1-3 (а - дефензинов).

Также на возрастные группы были разделены дети группы сравнения, и установлен уровень основных антимикробных пептидов полости рта в зависимости от возраста ребенка (таблица 2).

Статистической достоверности между возрастом и уровнем антимикробных пептидов полости рта выявлено не было. Установлена средняя концентрация ЬЬ-З 7 в слюне у детей группы сравнения - 1,2±0,8 нг/мл; средняя концентрация а-дефензинов - 7,19±2,8 нг/мл.

Таблица 2

Уровень антимикробных пептидов слюны различных возрастных групп

у детей без атопии

1 группа, п=8 (6-9 лет) 2группа, п=8 (10-12 лет) Згруппа, п=6 (13-18 лет) Р

IX-37, нг/мл 0,9±0,8 0,8±0,55 1,1±0,73 1гр/2гр=0,45 1гр/3гр=0,17 2гр/3гр=0,151

а- дефензины, нг/мл 6,9±3,19 7,34±4,3 7,13±2,9 1гр/2гр=0,101 1гр/3гр=0,9 2гр/3гр=0,73

При оценке стоматологического статуса было выявлено, что 52 из обследуемых детей имели кариес различной интенсивности, из них 34 ребенка, страдающих атопическим дерматитом различной степени тяжести,

18 детей из группы сравнения. При анализе интенсивности кариеса по индексу КПУ, КПУ + кп у детей с АтД, выявлено, что 27 детей имели кариес средней и высокой интенсивности, 7 детей - кариес низкой интенсивности.

У детей группы сравнения низкий уровень интенсивности кариеса отмечался у 5 детей. У 13 детей наблюдался высокий и средний уровень интенсивности кариеса.

Данные, полученные в результате анализа интенсивности кариеса, представлены в таблице 3.

Интактные зубы имели 8 из обследуемых детей, из них 4 ребенка с атопическим дерматитом средней степени тяжести и 4 — дети из группы сравнения. В ходе дальнейшего исследования нами были выделены две группы по степени интенсивности кариеса: в первую группу вошли дети с низкой интенсивностью кариеса и дети с природной санацией, во вторую группу - дети со средней и высокой интенсивностью кариеса. Численность групп составила 27/11 (высокая и средняя интенсивность кариеса/низкая интенсивность кариеса), у детей с атопическим дерматитом; 13/9 (высокая и средняя интенсивность кариеса/низкая интенсивность кариеса) - группа сравнения.

Дети, участвующие в исследовании были распределены на три возрастные группы: 6-9 лет (31 ребенок), 10-12 лет (14 детей), 13-18 лет (15 человек). При оценке уровня антимикробных пептидов полости рта в зависимости от возраста не было установлено достоверных различий (таблица 4).

Таблица 3

Интенсивность кариеса у детей с АтД и детей группы сравнения

6-9 лет (п=23) (Р=0,03) 10-12 лет (п=6) (р=0,037) 13-18 лет (п=9) (р=0,031)

Дети с АтД (п=38) 4,5±3,1 4,2±1,62 4,01±2,62

6-9 лет (п=8) 10-12 лет (п=8) 13-18 лет (п=6)

Дети группы сравнения (п=22) 2,83±1,62 2,57±1,34 3,02±1,89

У больных атопическим дерматитом интенсивность кариеса было достоверно выше в сравнении с детьми без аллергических заболеваний.

Таблица 4

Уровень АМП у детей различных возрастных групп вне зависимости от наличия у них аллергических заболеваний

1 группа, п=31 (6-9 лет) 2 группа, п=14 (10-12 лет) 3 группа, п=15 (13-18 лет)

ЬЬ-37, нг/мл 0,7±0,16 0,81±0,04 0,78±0,12

НИР 1-3, нг/мл 7,01±1,6 7,45±1,89 7,4±1,87

Данные о концентрации антимикробных пептидов полости рта у детей группы сравнения, в зависимости от возраста представлены в таблице 5.

Таблица 5

Уровень АМП слюны у детей без аллергических заболеваний в зависимости от возраста

1 группа, п=8 (6-9 лет) 2 группа, п=8 (10-12 лет) 3 группа, п=6 (13-18 лет)

ЬЬ-37,нг/мл 0,9±0,14 0,8±0,27 1,1 ±0,2

НИР 1-3, нг/мл 6,9±1,1 7,34±1,8 7,13±1,2

Уровень кателицидина в слюне у всех детей, участвующих в исследовании (п=60) вне зависимости от наличия у них атопического дерматита составил 0,82 ± 0, 14 нг/мл; а-дефензинов - 7,2 ± 5,1 нг/мл. Также установлена концентрация антимикробных пептидов ротовой полости у детей с атопическим дерматитом в зависимости от возраста. Результаты представлены в таблице 6.

Таблица 6

Уровень АМП слюны у детей с АтД в зависимости от возраста

1 группа, п=23 (6-9 лет) 2 группа, п=6 (10-12 лет) 3 группа, п=9 (13-18 лет)

ЬЬ-37,нг/мл 0,6±0,11 0,63±0,1 0,66±0,04

ШР1-3, нг/мл 6,3±2,14 6,1±1,98 5,8±0,24

Таким образом, взаимосвязи между возрастом детей и уровнем антимикробных пептидов полости рта не установлено, как у детей с атопическим дерматитом, так и у детей группы сравнения.

При анализе гигиенического состояния полости рта по индексу OHI-S (упрощенный индекс гигиены полости рта (ИГР-У) по Gren J.C., Vermillion J.K.), были получены следующие результаты: 44 ребенка имели удовлетворительный уровень гигиены полости рта (значение индекса 1,33,0); из них 34 ребенка, страдающих АтД средней степени тяжести; 10 детей из группы сравнения. Хорошая гигиена полости рта отмечалась у 16 детей, из них 4 ребенка с АтД различной степени тяжести, 12 детей - группы сравнения. Плохой уровень гигиены у обследуемых детей выявлен не был.

При исследовании индекса РМА выявлено, что 21 ребенок страдал гингивитом средней степени тяжести, из них 18 детей, страдающих АтД различной степени тяжести; 3 ребенка из группы сравнения. Легкая степень гингивита обнаружилась у 23 детей, из них 15 детей с АтД и 8 детей группы сравнения. Дети с гингивитом тяжелой степени в нашем исследовании отсутствовали.

Концентрация LL-37 ротовой жидкости у детей, страдающих атопическим дерматитом, составила 0,6±0,12 нг/мл, что вдвое ниже уровня этих пептидов в слюне у детей группы сравнения: (n=38, Me 0,6 нг/мл, 50 нг/мл; п =22, Me 1,2 нг/мл, соответственно). Статистически достоверно снижение концентрации кателицидина в слюне детей с атопическим дерматитом в сравнении с группой сравнения (р=0,049).

В ходе исследования ротовой жидкости, выявлено что уровень концентрации а-дефензинов у детей с АтД составил 6,24 нг/мл, что достоверно ниже установленных нами значений этих пептидов у детей группы сравнения -7,19 нг/мл.

Дети, страдающие АтД, были распределены на две группы, в зависимости от тяжести течения заболевания. Уровень концентрации LL-37 у детей с тяжелым течением атопического дерматита составил 0,7 нг/мл; при среднетяжелом течении концентрация кателицидина ниже и составила 0,6

нг/мл. При статистическом исследовании выявлено достоверно снижение уровня ЬЬ-37 в слюне у детей с тяжелым течением атопического дерматита (п=26, Ме 0,7 нг/мл, р=0,043) ; и среднетяжелым течением атопического дерматита (п=12, Ме 0,6 нг/мл, р=0,049) в сравнении с группой сравнения (п=22, Ме =1,2 нг/мл). Концентрация кателицидина в слюне у детей с тяжелым и среднетяжелым течением атопического дерматита достоверно не различалась.

Уровень а-дефензинов ротовой жидкости у детей с тяжелым (п=26, Ме 6,99 нг/мл) и среднетяжелым течением атопического дерматита (п = 12, Ме 6,28) достоверно ниже уровня а-дефензинов у детей без атопии (п=22, Ме 7,19 нг/мл). Концентрация а-дефензинов в слюне у детей с тяжелым и среднетяжелым течением атопического дерматита достоверно не различалась.

Дети, страдающие атопическим дерматитом, были распределены на две группы по признаку наличия и отсутствия пищевой сенсибилизации (таблица 7). При исследовании этих групп выявилась следующая закономерность: концентрация ЬЬ-37 в слюне у детей с пищевой сенсибилизацией значительно ниже, чем у детей без сенсибилизации (п=28, Ме 0,4 нг/мл; п= 10, Ме 0,8 нг/мл), р=0,029.

Концентрация а-дефензинов у детей с пищевой сенсибилизацией и без таковой не имела существенных различий ( п=28, Ме 6,14 нг/мл; п =10, Ме 6,37 нг/мл), р=0,8.

При оценке стоматологического статуса нами было выявлено, что 52 из обследуемых детей имели кариес различной интенсивности, из них 34 ребенка, страдающих атопическим дерматитом различной степени тяжести, 18 детей из контрольной группы. При анализе интенсивности кариеса по индексу КПУ+ кп у детей с атопическим дерматитом, выявлено, что 15 детей страдали кариесом высокой интенсивности, 12 детей имели кариес средней интенсивности, 7 детей - кариес низкой интенсивности. У 4 детей была

отмечена природная санация. Нами был определен уровень антимикробных пептидов у детей с различной интенсивностью кариеса (дети с природной санацией включены в группу к детям с низкой интенсивностью кариеса). Таким образом, уровень кателицидина слюны у детей, страдающих атопическим дерматитом, с низкой интенсивностью кариеса составил 0, 8 нг/мл; при средней интенсивности кариеса - 0,68 нг/мл; при высокой интенсивности кариеса - 0,3 нг/мл.

Таблица 7

Концентрация АМП ротовой жидкости у детей с пищевой сенсибилизацией и без таковой

Группа сравнения (п=22) Дети с пищевой сенсибилизацией (п=28) Дети без сенсибилизации (п=10)

1Х-37 (нг/мл) 1,2±0,9 0,4±0,02 * 0,8±0,07 *

НИР 1-3 (нг/мл) 7,19±2,1 6,14±1,76 6,37±1,61

* - имеется достоверная зависимость между представленными группами

При определении уровня а - дефензинов слюны у детей основной группы получены следующие результаты: при низкой интенсивности кариеса уровень а — дефензинов ротовой жидкости составил 7,4 нг/мл; при средней интенсивности кариеса - 6,1 нг/мл; при высокой интенсивности кариеса это значение составило 5,8 нг/мл.

У детей группы сравнения низкий уровень интенсивности кариеса отмечался у 5 детей. У 5 детей наблюдался высокий уровень интенсивности кариеса, средний уровень интенсивности кариеса отмечался у 8 детей.

Интактные зубы имели 4 из обследуемых детей. В группе сравнения также было проведено исследование уровня антимикробных пептидов ротовой жидкости в зависимости от интенсивности кариозного процесса. Концентрация ЬЬ-37 в слюне у детей без аллергических заболеваний при низкой интенсивности кариеса составила 0,51 нг/мл; уровень а-дефензинов в ротовой жидкости у детей той же группы составил 7,1 нг/мл. При средней интенсивности кариозного процесса эти показатели равнялись 1,1 нг/мл для кателицина и 6,9 нг/мл для а-дефензинов. В группе детей с высокой интенсивностью кариеса определены следующие значения: ЬЬ-37 -1,3 нг/мл; НИР 1-3-7,1 нг/мл.

Дети, страдающие атопическим дерматитом, с различной интенсивностью кариеса были распределены на две группы: в первую группу вошли дети с низкой интенсивностью кариеса и дети с природной санацией, во вторую группу - дети со средней и высокой интенсивностью кариеса. Численность групп составила 27/11 (высокая и средняя интенсивность кариеса/низкая интенсивность кариеса), у детей с атопическим дерматитом; 13/9 (высокая и средняя интенсивность кариеса/низкая интенсивность кариеса) - группа сравнения.

Было проведено сравнение уровня ЬЬ-37 и а-дефензинов слюны у детей с АтД в зависимости от интенсивности кариозного процесса. Выделены две группы детей с атопическим дерматитом: в первую группу включены дети с низкой интенсивностью кариеса, во вторую - со средней и высокой интенсивностью кариеса (таблица 8).

У детей со средней и высокой интенсивностью кариеса концентрация ЬЬ-37 ниже, чем у детей с низкой интенсивностью кариеса (п=27, Ме 0,5 нг/мл; п=11, Ме 0,8 нг/мл, соответственно, р=0,039) (таблица 8).

Установлено, что имеется достоверная взаимосвязь концентрации ЬЬ-37 в слюне у детей, страдающих АтД от интенсивности кариозного процесса.

Концентрация 1Х-37 слюны значительно снижается у детей со средней высокой интенсивностью кариозного процесса.

Таким образом, взаимосвязь концентрации кателицидина и интенсивности кариозного процесса зависит от наличия или отсутствия у детей атопического дерматита: уровень ЬЬ-37 у детей с АтД снижается при нарастании интенсивности кариозного процесса, тогда как у детей группы сравнения имеется обратная зависимость.

При исследовании уровня а-дефензинов у детей с атопическим дерматитом также была установлена достоверная взаимосвязь концентрации этих пептидов от интенсивности кариозного процесса. У детей со средней и высокой интенсивностью кариеса концентрация а-дефензинов достоверно ниже, чем у детей с низкой интенсивностью кариеса (п= 27, Ме 5,6 нг/мл, п= 11, Ме 7,4 нг/мл; соответственно, р=0,049) (таблица 8).

Таблица 8

Взаимосвязь концентрации антимикробных пептидов слюны у детей с АтД при различной степени интенсивности кариозного процесса

Низкая интенсивность кариеса, санация, п—11 Средняя и высокая интенсивность кариеса, п=27 Р

ЬЬ-37, нг/мл 0,8±0,14 0,5±0,03 0,039

ШГР 1-3, нг/мл 7,4±2,02 5,6±1,46 0,049

При исследовании концентрации антимикробных полипептидов ротовой жидкости у детей группы сравнения были выделены две группы: в первую группу включены дети с низкой интенсивностью кариеса и дети с природной

санацией, во вторую - со средней и высокой интенсивностью кариеса. У детей со средней и высокой интенсивностью кариеса концентрация 1Х-37 слюны выше, чем у детей с низкой интенсивностью кариеса (таблица 9).

У детей без атопии с высокой и средней интенсивностью кариеса концентрация а-дефензинов не имеет существенных различий с концентрацией этих пептидов при низкой интенсивности кариеса (таблица 9).

Таблица 9

Взаимосвязь концентрации антимикробных пептидов слюны у детей группы сравнения при различной степепи интенсивности кариозного

процесса

Низкая интенсивность кариеса, санация, п=9 Средняя и высокая интенсивность кариеса, п=13 Р

LL-37, нг/мл 0,51±0,03 1,65±0,21 0,033

HNP 1-3, нг/мл 7,1±1,48 6,8±1,14 0,67

У детей группы сравнения уровень LL-37 в слюне повышается при более интенсивном течении кариозного процесса. В то время как при наличии атопии наблюдается обратная закономерность: утяжеление аллергического процесса сопровождается более низкими концентрациями кателицидина. Возможно, что повышение уровня а-дефензинов является следствием синергизма с другими пептидами полости рта (в нашем случае, с кателицидинами), т.е. изменения уровня этих пептидов является следствием изменения уровня LL-37.

При исследовании индекса РМА 21 ребенок страдал гингивитом средней степени тяжести, из них 18 детей, страдающих АтД различной

степени тяжести; 3 ребенка из группы сравнения. Легкая степень гингивита обнаружилась у 23 детей, из них 15 детей с АтД и 8 детей без атопии. Дети с гингивитом тяжелой степени в нашем исследовании отсутствовали.

У всех детей (44 ребенка) выявлена катаральная форма гингивита легкой и средней степени тяжести.

Средний уровень кателицидина в слюне при наличии гингивита у детей с атопическим дерматитом составил 0,7+/-0,3 нг/мл; среднее значение а-дефензинов ротовой полости - 7,1+/-3,7 нг/мл.

Концентрация ЬЬ-37 в ротовой жидкости у детей с АтД при средней тяжести гингивита и у детей с атопическим дерматитом при легкой степени гингивита статистически не имела достоверных различий (п=18, Ме 0,6 нг/мл; п=15, Ме 0,8 нг/мл; соответственно, р=0,43).

При сравнении уровня кателицидина слюны детей группы сравнения и у детей с АтД, страдающих гингивитом различной степени тяжести отмечалось существенное различие (п=11, Ме 1,1 нг/мл; п=33, Ме 0,6 нг/мл, соответственно), р=0,037.

При сравнении концентрации кателицидина слюны у детей с атопическим дерматитом при наличии и отсутствии гингивита выявлена следующая закономерность: концентрация ЬЬ-37 слюны у детей с гингивитом была ниже, чем у детей без такового (п=33, Ме 0,6 нг/мл, 50% интерквартильный размах 0,14...0,8 нг/мл; п=5, Ме 0,9 нг/мл, 50% интерквартильный размах 0, 4.....1,1 нг/мл, соответственно), р=0,012.

При исследовании уровня а-дефензинов ротовой жидкости при различной степени тяжести гингивита у детей с атопическим дерматитом показаны следующие результаты: концентрация а-дефензинов в слюне при средней степени тяжести гингивита и у детей с легкой степенью тяжести гингивита не имела статистически достоверных различий (п=18, Ме 7,4 нг/мл , 50% интерквартильный размах 4,3,.. 10,0 нг/мл; п=15, Ме 7,2 нг/мл, 50 % интерквартильный размах 3,0... 10,0 нг/мл, соответственно, р=0,43).

При сравнение концентрации а-дефензинов в слюне у детей с атопическим дерматитом у детей при наличии и отсутствии гингивита получены следующие результаты (п=33, Ме 7,1 нг/мл, 50% интерквартильный размах 3,3... 10,0 нг/мл; п=5, Ме 6,9 нг/мл, 50%

интерквартильный размах 5,4.....8,9 нг/мл, соответственно, р =0,23).

Статистической достоверности не выявлено.

Также нами было проведено сравнение уровня концентрации 1Х-37 у детей группы сравнения в зависимости от наличия или отсутствия гингивита: (п=11, Ме 1,2 нг/мл; п=11, Ме 0,9 нг/мл, соответственно). Статистической достоверности не выявлено, р=0,204.

Таким образом, выявлено, что уровень кателицидина у детей с атопическим дерматитом снижен при наличии воспалительных заболеваний пародонта (в нашем случае, гингивита), тогда как концентрация а-дефензинов существенно не изменяется.

В группе сравнения нет существенных изменений в уровне антимикробных пептидов полости рта (а-дефензинов, кателицидина) в зависимости от наличия или отсутствия гингивита.

Выводы

1. У больных атопическим дерматитом интенсивность кариеса достоверно выше в сравнении с детьми без аллергических заболеваний. Степень поражаемости гингивитом у детей с атопическим дерматитом выше, чем у детей группы сравнения.

2. У всех детей, учавствующих в исследовании (60 человек), вне зависимости от наличия у них ^Е-опосредованной сенсибилизации и/или аллергических заболеваний в ротовой жидкости обнаруживаются антимикробные пептиды - кателицидин и а-дефензины. Причем концентрация антимикробных пептидов существенно не отличается у

детей в различные возрастные периоды.

3. У больных атопическим дерматитом уровень ЕХ-37 и а - дефензинов в слюне достоверно ниже, чем у детей без аллергических заболеваний.

4. Концентрация кателицидина в слюне у детей с атопическим дерматитом зависит от спектра сенсибилизации. При наличии пищевой аллергии уровень 1Х-37 в ротовой жидкости значительно снижен в сравнении с детьми без атопии. Концентрация а - дефензинов в слюне у детей с атопическим дерматитом не зависит от спектра сенсибилизации.

5. Концентрация антимикробных пептидовв слюне детей, страдающих кариесом различной интенсивности, зависит от наличия у них атопического дерматита. У детей без атопии уровень ЬЬ-37 напрямую зависит от интенсивности кариозного процесса. При высокой и средней интенсивности кариеса концентрация кателицидина выше, чем при более легком течении процесса, тогда как уровень а - дефензинов у детей группы сравнения не зависит от интенсивности кариозного процесса.

6. У детей с атопическим дерматитом концентрация кателицидина и а-дефензинов в слюне снижается при нарастании интенсивности кариеса.

7. Уровень кателицидина в слюне у детей с атопическим дерматитом снижается при наличии гингивита. Концентрация а-дефензина в ротовой жидкости у детей с атопическим дерматитом не зависит от наличия воспалительных заболеваний пародонта (гингивита).

Практические рекомендации

При разработке методов профилактики и лечения кариеса у детей необходимо учитывать выявленные закономерности. Дисфункция иммунной системы у детей с атопическим дерматитом, в особенности имеющих

пищевую аллергию, приводит к снижению выработки антимикробных пептидов, что ведет к прогрессированию кариеса. У детей с соматическим заболеваниями (в нашем случае, атопическим дерматитом) необходима большая стоматологическая настороженность. Регулярное посещение стоматологического кабинета, активная профилактика и своевременное лечения заболеваний полости рта позволит снизить уровень заболеваемости кариесом, его осложненными формами в данной группе пациентов.

Список опубликованных научных работ по теме диссертационного

исследования

1. Кулакова, Е.В. Эндогенные антимикробные пептиды - факторы неспецифической защиты организма / Е.В. Кулакова, В.М. Елизарова, А.Н. Пампура // Российский стоматологический журнал. - 2012. -№ 6. -С.42-45.

2. Кулакова, Е.В. Концентрация кателицидина слюны у детей с атопическим дерматитом / Е.В. Кулакова, В.М. Елизарова, А.Н. Пампура // Сборник трудов VIII научно - практической конференции «Актуальные вопросы детской стоматологии и ортодонтии». - 2012.- С.40 - 42.

3. Кулакова Е.В. Антимикробные пептиды - факторы неспецифической защиты организма / Е.В. Кулакова, В.М. Елизарова, А.Н. Пампура // Сборник трудов IX Всероссийской научно - практической конференции «Образование, наука и практика в стоматологии» - 2012. - 20-22 февраля - С.134-136.

4. Кулакова Е.В. Изучение уровня концентрации LL-37 слюны у детей с атопическим дерматитом при различных видах сенсибилизации организма / / Е.В. Кулакова // Научно-практический журнал « Dental Forum». - 2012. - № 3- С. 61.

5. Кулакова E.B. Роль эндогенных пептидов (кателицидина LL-37) в развитии кариеса у детей с атопическим дерматитом / Е.В. Кулакова, В.М. Елизарова, А.Н. Пампура // Научно-практический журнал « Dental Forum». -2012. - № 3- С. 59.

6. Роль эндогенных пептидов (кателицидина LL-37) в развитии кариеса у детей с атопическим дерматитом / Е.В. Кулакова, В.М. Елизарова, А.Н. Пампура, Т.В. Виноградова //Лечение и профилактика - 2013-№1(5), - С. 75 - 79.

7. LL-37 concentration in saliva in children with atopic dermatitis and sensitization / E.V. Kulakova, V.M. Elizarova, A.N. Pampura, T.V. Vinogradova, E.E. Varlamov // Oral Poster discussion OPD3. -2011.-№ 42. P.59

Список сокращений

АтД - атопический дерматит АМП - антимикробные полипептиды АЗ - аллергические заболевания НИР 1-3 -а-дефензины ЬЬ-37 - кателицидин

Подписано в печать: 08.10.2014 Тираж: 100 экз. Заказ №423 Отпечатано в РИО МГМСУ 127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20, стр. 1.