Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета

Гизингер, Оксана Анатольевна

Диссертации по медицине → Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Гизингер, Оксана Анатольевна Челябинск 2010 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.03.09

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета

На правах рукописи

Гизингер Оксана Анатольевна ВЛИЯНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА НЕЙТРОФИЛЫ И ФАКТОРЫ МУКОЗАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

Челябинск, 2010

004604951

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте иммунологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный консультант:

член-корреспондент РАМН доктор медицинских наук,

профессор Долгушин Илья Ильич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор Исаев Александр Петрович

доктор биологических наук,

профессор Имельбаева Эльвира Аркамовна

доктор биологических наук,

профессор Цейликман Вадим Эдуардович

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук «Институт иммунологии и физиологии УрО РАН», г. Екатеринбург

Защита состоится «_»_2010 года в_

часов на заседании Диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан « »_2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор Телешева Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Одним из ведущих направлений современной иммунологии является поиск средств и способов избирательного воздействия на отдельные этапы развития иммунного ответа (Покровский В.И., 1994; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Ильина Н.И., 2005; Тотолян A.A., 2007). Перспективным подходом к решению данной проблемы может являться применение физических воздействий в качестве немедикаментозных стимуляторов клеточного и гуморального звеньев иммунитета (Купин В.И.,1995; Баранов В.Н., 1998; Клебанов Г.К., 2000).

В успешном решении вопросов, связанных с эффективностью лазеротерапии, большая роль отводится рационально подобранным параметрам излучения. Однако, применяемые в эксперименте и клинической практике физиотерапевтические подходы могут оказывать на иммунную систему больных различные по силе и по направленности эффекты, что, соответственно вызывает значительные сложности в вопросах их применения. Практически отсутствует адекватное экспериментальное обоснование применяемых доз воздействия (Соловьёва В.И., 2001; Полунина Т.Е., 2002; Москвин C.B., 2005). Остаются неясными вопросы влияния лазера на нейтрофилы и факторы му-козального иммунитета при воспалительном процессе. Такое положение затрудняет развитие указанного направления иммунокоррекции и делает его достаточно актуальным для дальнейшего изучения. Моделирование иммунного ответа на действие лазерного излучения в эксперименте позволит установить пороговые значения, наиболее эффективные для их локального и системного воздействия (Ларюшин А.И.,1997; Горяйнов И.И.,1998; Каплан М.А., 1998; Золотарёва Т.А., 2000; Козель А.И., 2000). Указанные обстоятельства определили цель и направления настоящего исследования.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

На основании морфофункциональных, цитохимических, биохимических характеристик нейтрофильных гранулоцитов изучить дозозависимые эффекты лазеров низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса и оценить возможности лазеротерапии для коррекции факторов врождённого иммунитета.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Проанализировать действие различных частот, доз излучения, времени экспозиции низкоэнергетического лазерного излучения с переменной генерацией импульса на реактивность нейтрофилов донорской крови in vitro.

2. В экспериментальных исследованиях изучить влияние дозы излучения, времени экспозиции низкоэнергетического лазерного излучения с постоянной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов донорской крови.

3. Провести сравнительный анализ действия различных параметров низкоэнергетического лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на функции нейтрофилов, выделенных их донорской крови.

4. Исследовать биохимический, цитокиновый состав и выявить особенности состояния нитроксидергической системы, уровень дефенсинов супер-натантов нейтрофилов периферической крови, облучённых лазером низкой интенсивности с переменной и постоянной генерацией импульса.

5. Определить характер нарушений клеточного, гуморального звеньев иммунной системы, нитроксидергических особенностей периферической крови женщин при воспалительных заболеваниях нижнего отдела урогени-тального тракта, вызванных хламидиями, и проанализировать динамику изменений исследуемых показателей при внутрисосудистом лазерном облучении крови.

6. Изучить влияние лазера низкой интенсивности на морфологический состав и функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов в очаге воспалительной реакции при заболеваниях нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями.

7. Провести сравнительный анализ влияния локальных лазерных воздействий при постоянной и переменной генерации импульса на динамику клеточных и гуморальных факторов местной противоинфекционной защиты репродуктивного тракта.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

В экспериментальных исследованиях установлены закономерности действия различных параметров низкоинтенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на морфофункциональные, цитохимические, биохимические характеристики нейтрофильных гранулоцитов, выделенных из периферической крови доноров. Экспериментально обоснована возможность оптимизации применения лазерных воздействий за

счёт изменения параметров излучения.

Показано, что воздействие лазером низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса влияет на секреторный, бактерицидный и фагоцитарный потенциал нейтрофильных гранулоцитов. Выявлен однонаправленный характер их изменений, которые зависели от дозы излучения и времени экспозиции.

В работе дана сравнительная оценка биохимического и цитокинового состава супернатантов нейтрофилов, выделенных из периферической крови доноров, облучённых лазером низкой интенсивности с переменной и непрерывной генерацией импульса. Прослежены изменения в уровне секреции неактивированными и активированными лазерным излучением нейтрофила-ми крови доноров уровня дефенсинов, провоспалительных цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-1Р, ИЛ-8, ФНО-а), глюкозы, макроэлементов (Са2+, Мд2+). Выявлены особенности состояния нитроксидергической системы супернатантов нейтрофилов, интактных и активированных лазером низкой интенсивности. Показано, что эти изменения имеют однонаправленный характер, степень выраженности которых различна.

Проанализировано влияние внутривенного лазерного излучения на им-мунореактивность организма и определено положительное влияние данного вида излучений на динамику иммунологических, биохимических показателей, состояния нитроксидергической систем периферической крови женщин.

Проведен сравнительный анализ влияния лазерного излучения на функции нейтрофилов и факторы мукозального иммунитета в комплексной терапии урогенитального хламидиоза. Выявлен однонаправленный характер изменений факторов местной противоинфекционной защиты при локальном применении лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса, сопровождающийся нормализацией количества нейтрофилов в очаге воспаления и восстановлением их функциональной активности.

Впервые установлена высокая эффективность локального и системного лазерного воздействия при постоянной и переменной генерации импульса в комплексном лечении больных с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта, оказывающих иммуномодулирующее влияние на функциональную активность нейтрофилов в очаге воспалительной реакции.

Разработан «Способ локальной иммунокоррёкции инфекционно-воспа-лительных заболеваний урогенитального тракта женщин, вызванных микроорганизмами, передаваемыми половым путём». Приоритетная справка от 15 мая 2009 года. Заявка на изобретение № 2009117799.

ТЕРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

ственное значение в понимании проблемы регулирующего влияния лазерных воздействий на нейтрофильные грзнулоциты и факторы мукозального иммунитета в условиях in vitro и in vivo.

Практическое значение работы состоит в установлении возможности восстановления функциональной активности нейтрофилов и иммунореактив-ности организма путём системного и локального воздействия лазера низкой интенсивности. Полученные результаты открывают перспективу для проведения дальнейших испытаний использования лазеров низкой интенсивности с целью иммунокоррекции при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. В экспериментальных условиях воздействие лазером низкой интенсивности приводит к усилению функциональных возможностей нейтрофиль-ных гранулоцитов, которые проявляются в усилении их микробоцидного потенциала, выраженность данных изменений имеет дозозависимый эффект, зависящий от режима генерации импульса.

2. При исследовании in vitro действия низкоинтенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов периферической крови доноров выявлено стимулирующее влияние лазеров низкой интенсивности генерирующих излучение с длиной волны 0,63 мкм, частотой 100Гц дозой излучения 0,56 Дж/ см2, времени экспозиции 12,5 мин

3. Супернатанты нейтрофилов периферической крови доноров содержат провоспалительные цитокины (ИЛ-1а, ИЛ-1р, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а), растворимые антимикробные факторы (оксид азота, дефенсины, бактерицидный/индуцирующий протеин), глюкозу, ионы кальция, магния. Индукция нейтрофилов крови лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса приводит к усилению их секреции, степень выраженности которой зависит от режима генерации импульса и биоэффективныхдоз воздействия.

4.У пациенток с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта выявлено угнетение иммунореактивности организма, что проявляется изменениями клеточных и гуморальных факторах иммунитета, состояния нитро-ксидергической системы, нормализация которых наступала при комплексной терапии с применением внутрисосудистого лазерного облучения крови.

5. Сравнительный анализ локальной иммунокоррекции с применением лазерного излучения с переменной и постоянной генерацией импульса при воспалительных заболеваниях нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями определил однонаправленный, позитивный характер влияний данных физических воздействий на факторы местной противоин-фекционной защиты репродуктивного тракта. Наиболее выраженные изменения иммунологической активности происходили при использовании лазерного излучения с переменной генерацией импульса.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Методы системного и локального воздействия лазерным излучением

больных с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта внедрены в практику работы Государственного лечебно-профилактического учреждения здравоохранения «Челябинский областной кожно-венерологический диспансер», консультационно-диагностического центра ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия»; Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах: дерматовенерологии, аллергологии и иммунологии, микробиологии, вирусологии иммунологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертации доложены: на научной конференции «Актуальные проблемы практической медицины» (г. Челябинск 2004,2005,2006, 2007), Международном конгрессе по иммунореабилитации (г. Москва, 2005), IV конференции иммунологов Урала (г.Уфа, 2005), «Международном конгрессе по иммунореабилитации» (г.Москва, 2005), конференции, посвященной 25-летию ЦНИЛ ЧелГМА «Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека» (Челябинск, 2006), V конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006), Всероссийском форуме с международным участием им. академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г.Санкт-Пе-тербург, 2006), научно -практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (г. Челябинск, 2006), юбилейной научно-практической конференции, посвящённой 60-летию дерматологической службы области «Достижения и перспективы развития дерматовенерологии» (г. Челябинск, 2007), конференции, посвящённой 60-летию клиники ЧелГМА «Актуальные вопросы теоретической и практической медицины» (Челябинск, 2007), научно-практических конференциях Челябинской областной общественной организации врачей - лаборантов (г. Челябинск, 2005,2006, 2007, 2008), 2-м Российско-чешском медицинском форуме с международным участием (г. Челябинск, 2006), Научно-практической конференции «Магнитные поля и здоровье человека» (Курск, 2007), VII конференции иммунологов Урала (г. Ижевск, 2007), материалах VI итоговой научно-практической конференции молодых учёных (г. Челябинск, 2008), VI конференции иммунологов Урала (г. Оренбург, 2008), XIII объединённом всероссийском иммунологическом форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г.Санкт-Петербург, 2009), VII конференции иммунологов Урала «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической аллергологии и иммунологии» (г. Архангельск, 2009) Всероссийском съезде дерматовенерологов (г. Казань, 2009), Научно-практической конференции Центрального федерального округа Российской Федерации с международным участием (г.Тверь, 2009).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 44 печатных работы.

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИСЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на 354 страницах машинописного текста, со-

держит 71 таблицу и 12 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Библиография включает в себя 395 литературных источников, в том числе 270 отечественных и 125 зарубежных

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальный этап исследования

В соответствии с задачами были исследованы функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов (НГ) донорской крови при действии на них, в условиях in vitro, лазерного излучения с различными дозами. Для получения нейтрофилов использовали 15,0 мл гепаринизированной (10-15 ЕД/ мл гепарина фирмы «Гедеон- Рихтер», Hungery) периферической крови, которую с целью осаждения эритроцитов отстаивали в стерильной пробирке с добавлением 10% раствора желатина в соотношении 10:1 при температуре + 37 еС в течение минут. Нейтрофилы выделяли из лейкоцитарной взвеси в двойном градиенте плотности стерильных растворов фиколла-верографина (Parmacia,Sweden,Spofa, CSSR). Плотность верхнего слоя градиента составляла 1.075-1.077, а нижнего 1.093-1.095 (Wong L., 1975). Объём каждого градиента равнялся 1,5 мл. Количество нейтрофилов доводили до концентрации 5 х106 клеток\мл.

Было изучено два вида низкоинтенсивного лазерного излучения (постоянная и переменная генерацию импульса). При облучении нейтрофилов использовалй лазерный излучатель «Мустанг-2000». Воздействие на нейтрофилы проводили в кювете со светопоглощающими стенками таким образом, чтобы мощность лазерного излучения, на уровне дна кюветы, измеренная с помощью дозиметра («Анод», Россия), соответствовала выбранным дозам. Доза облучения, рассчитанная с учётом частоты следования импульса от 20 до 2500Гц, мощности излучения, диаметра светового пятна лежала в интервале значений 0,0018-1,1 Дж\см2. Используемые режимы чаще всего применяются в экспериментальной и клинической практике (Александрова О.Ю., 2003). Для проведения эксперимента нейтрофилы облучали при постоянной длине волны 0,63 мкм. Световое поле для облучения взвеси НГ конфигурировали таким образом, чтобы в любой точке зоны облучения значение отклонения плотности светового потока было не более чем на 10%, что обеспечивало практически одинаковые условия для равномерного облучения суспензии НГ. Равномерность распределения светового потока производили при помощи люксметра («Mastech» модель М S6610) в отн. ед (Люкс). Для исследования влияния ЛО с переменной генерацией импульса были выбраны следующие частоты: 20 Гц, 100 Гц, 500 Гц, 2500 Гц, которые подбирали таким образом, чтобы обеспечить равные дозовые нагрузки при всех режимах воздействия при проведении эксперимента.

Функциональную активность интактных и облучённых лазером низкой

интенсивности нейтрофилов определяли по способности клеток к поглощению частиц латекса, лизосомальной активности (Фрейдлин И.С., 1984), показателям НСТ-теста (Маянский А.Н., Виксман М.Е., 1979).

Выделение секреторных продуктов полиморфноядерных лейкоцитов, выделенных из крови здоровых доноров и стимулированных лазерным излучением низкой интенсивности, проводили с помощью метода, разработанного И.И. Долгушиным и A.B. Зурочкой (Долгушин И.И., Зурочка A.B., 1992).

С целью подробного исследования продуктов секреции интактных и облучённых нейтрофилов мы определяли их биохимический и цитокиновый состав. При изучении биохимического состава продуктов секреции полиморфноядерных лейкоцитов мы исследовали содержание глюкозы, макроэлементов (Ca2*, Mg2+), продуктов метаболизма оксида азота, содержания НАДФ-ок-сидазы в нейтрофилах. Количественное определение глюкозы осуществляли с помощью набора «Глюкоза-ФКД» на биохимическом анализаторе Roki (Оль-векс диагностикум, Санкт-Петербург). Содержание кальция и магния в су-пернатантах нейтрофилов проводили унифицированным калориметрическим методом на биохимическом анализаторе Roki (Ольвекс диагностикум, Санкт-Петербург). Определение оксида азота, нитратов, нитритов в суперна-тантах нейтрофилов, проводилось фотометрическим способом (Емченко И.Л. ссоавт., 1994 г.), в модификации Э.Н. Коробейниковой (2002 г). Определение активности фермента НАДФН-оксидазы в нейтрофилах было исследовано спектрофотометрическим способом на спектрофотометре Shimadzu (Япония).

При оценке цитокинового состава супернатантов нейтрофилов определяли наличие в них следующих провоспалительных цитокинов: ИЛ-1а, ИЛ-Iß, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а. С этой целью использовали соответствующие тест-системы ООО «Цитокин»(г. Санкт-Петербург), основанные на "сендвич-мето-де" твёрдофазного ИФА с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента (Кетлинский С.А., Калинина K.M., 1998). Определение дефенсинов, бактерицидного белка BPI в сыворотке супернатантах интактных и активированных НИЛИ нейтрофилов определяли с помощью набора реактивов «HNP1-3» (HyCult biotechnology», Нидерланды) с использованием метода основанного на двухсайтовом твердофазном ИФА.

Исследование влияния лазерного излучения на функции нейтрофилов и факторы мукозального иммунитета репродуктивного тракта ir¡ vivo

За период с 2005 по 2008 год нами проведено открытое, краткосрочное, простое, "слепое" рандомизированное исследование влияния лазеротерапии на состояние клеточных и гуморальных факторов местной и системной противоинфекционной защиты у 80 здоровых и 386 женщин с заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, находившимся на обследовании и лечении в Государственном лечебно-профилактическом учреждении здравоохранения «Челябинский областной кожно-венерологический диспансер», консультативно-диагностическом центре ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия». План исследования соответствовал

положениям Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (BMA) последнего пересмотра (г. Эдинбург, Шотландия, 2000 г.), с учётом разъясняющего примечания п.29, одобренного Генеральной ассамблеей BMA (Вашингтон, 2002) и был одобрен этическим комитетом ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Возраст 80 здоровых женщин составил 26,5±0,95, средний возраст инфицированных женщин - 27,2 ±2,08 лет. 386 женщин с монохламидийной и хламидийно-микоплазменной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта сопоставимые по возрасту, гинекологическому анамнезу, отсутствию соматической патологии, однонаправленным изменениям системного и локального иммунного статуса были разделены согласно принципу адаптивной рандомизации следующим образом: Первую группу больных составили 100 женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта. Обнаружение ДНК возбудителей выполнялась с использованием метода по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием диагностических тест-систем ООО «Литех», г. Москва. Диагноз ставился врачом-дерматовенерологом в соответствии с международной статистической классификацией болезней МКБ-10 (2000). Всем женщинам с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта поводилась базисная терапия согласно методическим рекомендациям по диагностике и лечению наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путём («Методические материалы по диагностике и лечению наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путём; протоколы ведения больных» ГУ ЦНИКВИ МЗ РФ; Москва; 2008). Схема лечения включала антибактериальную, десенсебили-зирующую терапию, протеолитические ферменты, местно антисептики.

Пациенткам второй группы, состоящей из 100 женщин,'наряду с базисной была местно применена лазеротерапия с использованием аппарата «МУ-СТАНГ-2000» (режим постоянной генерации импульса). Длина волны излучения 0,632 мкм, постоянный режим генерации импульса, время облучения 10 минут. Курс лечения составил 10 ежедневных процедур

В третью группу вошли 106 женщин, которым в комплексе с базисной терапией были предложены локальные физиотерапевтические процедуры с применением НИЛИ с переменной генерацией импульса аппаратом «МУСТАНГ - 2000» . Аппарат имеет Сертификат соответствия Госстандарта Рос-' сии, выданной Органом по сертификации ИМН ВНИИИМТ и соответствует ГОСТ Р50444-92, ГОСТ Р50267.0-92(МЭК 601-1-88), ГОСТ Р500267.0.2-95(МЭК601-1-2-93), ГОСТ Р50723-07. Сеансы лазерного излучения проводились в амбулаторных условиях, в специально оборудованном кабинете согласно «Санитарным нормам и правилам устройства и эксплуатации лазеров» № 5804-91. Положение больной при проведении локальной лазеротерапии - лёжа в гинекологическом кресле или на кушетке на спине, ноги согнуты в тазобедренных суставах и разведены (Александрова О.Ю., 2003). Процедура локальной лазеротерапии проводилась при помощи специальной разовой насадки, которая рассеивала исходящее из терминала аппара-

та лазерное излучение во все стороны. Длина волны излучения 0,632 мкм, переменный режим генерации импульса время облучения 10 минут.

Курс лечения составил 10 процедур и занимал один межменструальный промежуток. Лечение с применением низкоинтенсивного лазерного излучения осуществлялось согласно методическим рекомендациям УГМАДО г. Челябинска (2000г.), использование лазеротерапии при лечении хламидийной инфекции нижнего отдела репродуктивного тракта рекомендовано МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского (2000г.). Методики использования лазеротерапии сертифицированы Роспотребнадзором и предложены к включению в комплекс лечебных мероприятий при лечении инфекционно- воспалительных заболеваниях урогенитального тракта, вызванных ИППП; ГОСТ Р50444-04, ГОСТ Р50267.0-04(МЭК 601-1-88), ГОСТ Р500267.0.2-95(МЭК601-1-2-04), ГОСТ Р60725-04 выданной Органом по сертификации ИМИ ВНИИИМТ.

В отдельную группу вошли 80 женщин, которым наряду с базисным лечением, было проведено внутрисосудистое лазерное облучение крови (БЛОК) аппаратом «МУЛАТ». Положение больной при проведении лазеротерапии - лёжа на кушетке, на спине. Процедура лазеротерапии проводилась при помощи одноразовых стерильных световодов с иглой (КИВЛ-01(ОС-2), путем венопункции в локтевую или подключичную вену вводят иглу тонким стерильным световодом ОС-2 (НПЛЦ «Техника», г. Москва), через кото-рый происходит облучение протекающей крови. Длина волны излучения 0,632 мкм, мощность излучения 1мВт, постоянный режим генерации импульса время облучения 40 минут. Курс лечения составил 7 ежедневных процедур (Руководство по использованию аппарата «МУЛАТ», 2008).

Все исследования проводились на основании информированного добровольного письменного согласия обследуемых. Критерии включения: наличие хламидийной инфекции нижнего отдела репродуктивного тракта женщин. Критерии исключения: наличие тяжёлой соматической патологии (ИБС, стенокардии, гипертонической болезни, острых и обострение хронических заболеваний, онкозаболеваний, аутоиммунной патологии), гормональных нарушений, беременности, лактации, наличии сопутствующих венерических заболеваний, ВИЧ инфекции, других инфекций, передающихся половым путём, включая па-пилломавирусную, герпетическую, цитомегаловирусную инфекции, несогласие пациенток на участие в исследовании.

Комплексное обследование больных с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта включало сбор анамнеза, осмотр, комплекс инструментальных методов исследования, включающих ультразвуковое исследование половых органов осуществлялось на ультразвуковом сканере А1ока 350-680, цитологическое исследование мазков с экзо- и эндоцервик-са; биопсию шейки матки с последующим гистологическим исследованием полученного материала (Прилепская В.Н., Кондриков Н.И. и соавт., 2000), кольпоскопию с оценкой состояния слизистой оболочки нижней трети церви-кального канала,

Бактериологическое исследование на наличие гонококков и трихомо-над, проводилось согласно методическим рекомендациям МЗ РФ «О совер-

шенствовании контроля за заболеваниями, передающимися половым путем» (Приказ МЗ РФ № 286 от 07.12,93 г.). Культуральной диагностике предшествовало бактериоскопическое исследование материала из заднего свода влагалища и цервикального канала. Микроскопии подвергались окрашенные по Граму и метиленовым синим мазки. Определение грибов рода Candida проходило с использованием среды Сабуро и 5 % кровяного агара. Диагностическим повышенным титром грибов рода Candida была концентрация 103 КОЕ/мл и выше.

Оценка локального и системного иммунного статуса, была проведена до начала лечения и на его заключительном этапе. Материалом для исследования служили периферическая кровь и цервикальный секрет.

При иммунологическом обследовании в периферической крови определяли общее количество лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, содержание лимфоцитов, несущих рецепторы CD3, CD4, CD8, CD16, CD25, CD34, CD95, CD HLA-DR у здоровых и женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта по методике имунофенотипирования в модификации C.B. Сибиряка и соавт.(1997) с использованием моноклональных антител серии ИКО: анти- CD3, анти- CD4, анти- CD8, анти- CD 16, анти- CD25, анти-CD34, анти- С095,анти- CD HLA-DR («Медбиоспектр», Москва). Функциональную активность нейтрофилов слизи и периферической крови изучали по способности клеток к поглощению частиц латекса, лизосомальной активности (Фрейдлин И.С., 1984), показателям НСТ-теста (Маянский А.Н., Виксман М.Е., 1979).

Определение содержания цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-1Р, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а, ИФН-у), концентрацию Ig A, Ig M, Ig G, дефенсинов, белка BPI сыворотки крови и в цервикапьном секрете проводилось с использованием соответствующих тест-систем для иммуноферментного анализа (ООО «Цитокин» г. Санкт-Петербург; ООО «Стибиум», г. Санкт-Петербург; ООО «Вектор-Бест», г. Новосибирск; «Hycult biotechnology», Нидерланды). Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов в периферической крови и цервикальном секрете устанавливали с помощью метода, предложенного В. Гашковой с соавт. (1978).Уровень общей гемолилитической активности комплемента (СН50) определяли методом титрования по 50% гемолизу. Содержание компонентов комплемента в сыворотке крови определяли методом молекулярного титрования (Красильников А.П.,1984). Содержание оксида азота и его метаболитов в сыворотке крови и цервикальном секрете определяли фотометрическим способом (Емченко Н.Л. с соавт., 1994 г), в модификации Э.Н. Коробей-никовой (2002 г). Исследование липидного спектра крови: общий холестерин (ОХС), холестерин липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП), холестерин липопротеинов высокой плотности (ХС ЛПВП), триглицериды (ТГ) проводилось ферментным способом на автоматическом биохимическом анализаторе «Cobas intesra 400 plus» (Швецария). Вычисление уровня ХС ЛПНП проводилось по формуле W. Freidwald (1972): ХС ЛПНП=ОХС-ТГ/2,2- ХС ЛПВП

Данные, обработанные методами вариационной статистики, выражали в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки. О достоверности

различий средних величин судили с помощью непараметрических критериев: Манна-Уитни (U), Колмогорова-Смирнова (KS). Статистические процедуры, используемые для анализа качественных признаков, включали построение таблиц сопряженности и вычисление точного критерия Фишера (односторонний вариант) При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони (Гпанц С., 2004; Сергиенко В.И., 2000). Результаты исследования обрабатывались на ПЭВМ с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows», полученные данные выражали в Международной системе единиц (Липперт Г., 2002).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Этап исследования in vitro

Для решения поставленной цели, в экспериментальной модели было изучено влияние низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на нейтро-филы, выделенные из периферической крови доноров, и их секреторные продукты. Выбор донорских нейтрофилов в качестве клеток мишеней ЛО (лазерного облучения) был обусловлен с одной стороны, их полифункциональной ролью в поддержании защитной реакции организма, а с другой, доступностью, и, в определённом смысле простотой исследования отдельных показателей их функциональной активности (Прозорова С.Г., 1998; ЧичукТ.В.,1999; Юдина О.М., 2007). В соответствии с поставленной задачей, была исследована функциональная активность нейтрофилов донорской крови при действии на них, в условиях in vitro, различных доз лазерного излучения (ЛО), биохимический состав супернатантов интактных и облучённых лазером нейтрофилов.

Было изучено два режима низкоинтенсивного лазерного излучения (постоянная и переменная генерацию импульса). Для проведения экспериментальных исследований был использован лазерный излучатель «МУСТАНГ-2000» (НПЛЦ «Техника», г. Москва). В серии опытов, в аналогичных условиях выделенные из крови доноров нейтрофилы подвергали лазерному облучению суспензию, температура взвеси нейтрофилов составила 37"С. Для проведения ЛО нейтрофилов в силиконизированную кювету со светоизолиро-ванными стенками вносился 1 мл раствора Хенкса, содержащего 105 нейтрофилов. Клетки облучали сверху при постоянной длине волны 0,63 мкм, поскольку по данным С.В Москвина (2004) длина волны 0,63 мкм соответствует на ионном уровне зоне адсорбции основных метаболитов НГ в световом спектре излучения лазера (Ben-Her Е., 1993). Доза облучения взвеси нейтрофилов, рассчитанная с учётом частоты следования импульса от 20 до 2500Гц лежала в интервале значений 0,0018-1,1Дж\см2. Время экспозиции 5-ти кратно увеличивалось - 30 сек, 2,5 мин, 12,5 мин. Интактные нейтрофилы подвергали темновой инкубации при аналогичных условиях, но без ЛО.

Для исследования функциональной активности НГ интактных и облучённых лазером с постоянной и переменной генерацией импульса, биохимических особенностей супернатантов нейтрофилов были использованы иммунологические методы: определение лизосомальной фагоцитарной, активности

нейтрофилов no НСТ-тесту, и биохимические методы - исследование активности НАДФ-оксидазы нейтрофилов, цитокинового профиля, содержания макроэлементов и глюкозы в супернатантах нейтрофилов.

Анализ дозозависимых эффектов действия ЛО с переменной генерацией импульса показал стимулирующее влияние излучений при длине волны 0,63 мкм, частоте 100 Гц, и дозой воздействия 0,56 Дж/см2. При данных параметрах нами отмечено максимальное усиление факторов кислородзависи-мой микробоцидной системы и фагоцитарной активности НГ. Лизосомальная активность нейтрофилов в ответ на стимуляцию лазером при повышении дозы излучения с от 0,0018 Дж/см2 до 0,56 Дж/см2снижалась; наблюдаемый процесс связан с тем, что активированные лазером нейтрофилы частично или полностью утрачивая свои гранулы, подвергаются дегрануляции или экзоци-тозу, что не противоречит данным А.И. Козеля и Г.К. Попова по данной проблеме (Козель А.И., Попов Г.К., 2000) (таблица 1).

Поскольку наряду с ЛО при переменных воздействиях также используются излучения с постоянной генерацией импульса, следующей задачей исследования было изучение влияния дозы, времени экспозиции лазерного излучения с постоянной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов донорской крови.

По мнению С.В.Москвина данный вид излучения обладает не менее высокой селективностью действия на биологические объекты, чем НИЛИ с переменной генерацией импульса (Москвин C.B., 2000). Условия выделения и дизайн проведения эксперимента были аналогичны модели, использованной нами при исследовании влияния излучения с переменной генерацией импульса.

Исследование in vitro различных параметров ЛО с постоянной генерацией импульса позволил выявить оптимальную дозу, при которой зарегистрировано максимальное усиление функциональной активность НГ. Такими параметрами являются доза излучения 1,1 Дж/см2, время экспозиции 12,5мин (20-кратное увеличение времени экспозиции от первоначального) (таблица2).

Анализ полученных результатов показал, что при импульсном режиме излучения доза, необходимая для максимальной активации клетки (0,056Дж\см2) ниже значений, позволяющей достичь аналогичного эффекта при ЛО с постоянной генерацией импульса (Дж/см2). Тем не менее, изменения функциональной активности клеток имели одинаковую динамику, направленную в сторону усиления активности нейтрофила, независимо от режима следования импульса. Результаты наших исследований коррелируют с мнением И.И. Горяйнова (Горяйнов И.И.,1998), о том, что действие кванта света на разных режимах излучения имеет сходное биостимулирующее действие на клетку, т. е истинная природа фотоакцепторов квантов света оказывается не имеющей решающего значения, ибо их количество и многообразие вполне может уравнивать (усреднять) вторичные эффекты лазерных воздействий.

Наиболее значительные изменения зарегистрированы нами при анализе влияния НИЛИ с переменной и постоянной генерацией импульса на процессы внутриклеточной бактерицидности НГ. Можно предположить, что это

Таблица 1.

Сравнительный анализ дозозависимого влияния НИЛИ с переменной генерацией импульса с частотой 100Гц, при длине волны 0,63 мкм, экспозиции 12,5 мин. на функциональную активность нейтрофипов

периферической крови доноров(М±т)

Показатели Дозы облучения в Дж/см'

0,018 0,036 0,072 0,14 0,28 0.56 1,1

Показатель люминесценции лизосом, у.е 451.3t14.57* 294.3112.51*,** 224.3111.54*,** 224.6111.59*,** 195.6111.51*,** 156.6111.52*,** 206.6111.50*,**

Активность лизосом, % 95.21t1.25* 68.2111.25*,** 442111.12*,** 60.211.16*,** 49.211.12*,** 38.211.13*,** 78.211.12*,**

НСТ- спонтанная, % 43.88±1.59* 53,5511.44*,** 61.111.41',** 67.1i1.24*,** 72.111.34*,** 96.111.42*,** 30.111.41*,**

НСТ- спонтанная, у.е I3.48t0.05* 0.6510.05*,** 0.7810.02*,** 0.8210.01*,** 0.8810.01*,** 0.98Ю.01*,** 0.50Ю.01*,**

НСТ-индуциро-ванная, % 67.8611.45* 73.86l1.42*,** 74.8611.32*,** 83.8611.31*,** 93.8611.31*,** 99.8611.22*,** 43.8611.23*,**

НСТ-индуциро-ванная, у.е 0.7910.03* 0.8210.03*,** 0.7510.02*,** 0.8110.01*,** 0.8810.01*,** 0.9610.01*,** 0.52±0.01*,**

Функциональный резерв нейтрофипов 2.49±0.13* 1.3010.13*,** 1.1810.11*,** 1.1510.11*,** 1.251011*,** 1.110.12*,** 1.43Ю.12*,**

Активность фа-гоцитоза.% 64.1911.54* 75.1911.53*,** 65.19t1.32Y* 89.1911.21*,** 94.1911.30*,** 93.1911.31*,** 44.1311.31*,**

Интенсивность фагоцитоза 2.1610,11* 3.1310.12*,** 3.6210.11*,** 3.6610.15*,** 3.8110.10*,** 4.0110.13*,** 1.6210.14*,**

Примечание: * - достоверность различий показателей по отношению к неактивированным нейтрофилам, ** - достоверность различий показателей разных групп, использован критерий Мана-Уитни

Таблица 2

Сравнительный анализ дозозависимого влияния НИЛИ с постоянной генерацией импульса при длине волны 0,63 мкм, экспозиции 12,5 мин. на функциональную активность нейтрофилов периферической крови

доноров(М±т)

Показатели Дрзы облучения в Дж/см''

0,018 0,036 0,072 0,14 0,28 0,56 1,1

Показатель люминесценции лизосом.у.е 300.2112.12* 259.2l10.14V* 249.211222*,** 230.2110.21*,** 229.2111.16*,** 201.2111.04*,** 181.2113.02*,**

Активность лизосом,% 90.111.02* 79.1i1.03*,** 72.111.01*,** 69.111.03*,** 63.011.03*,** 56.111.04*,** 48.011.03*,**

нст- слонганнзя, % 35.6±1.22* 42.6±1.22*,** 44.6±1.22*,** 54.5911.22*,** 64.5911.22*,** 885911.22*,** 98.611.22*,**

нст- спонгаиная, у.е 0.39Ю.01* 0.47Ю.03*,** 0.5810.03*,** 0.6210.04*,** 0.6910.03*,** 0.7610.04*,** 0.8910.01*,**

НСТ- индуцированная, % ' . ■58.1 ±1.41* 69.111.44*,** 79.1±1.41 *,** 82.1311.42*,** 89.1311.43*,** 95.1311.44*,** 99.1311.41*,**

нст- индуцированная, у.е ' 0.57 ±0.03* 0.7Э±0.01*,** 0.8810.02*,** 0.9110.02*,** 0.9410.03*,** 0.9610.01*,** 0.93Ю.03*,**

Функциональный резерв нейтрофилов 2.27Ю.11* 1.6510.10*,** 1.79±0.11*,** 1.7910.13*,** 1.4110.12*,** 1.1010.14*,** 1.02Ю.11*,**

Активность фагоцигоза,% 54.811.21* 66.8±1.20*,** 72.84:1.21*,** 80.811.23*,** 86.8±1.20*,** 95/811.24*,** 98.811.22*,**

Интенсивность фагоцитоза 1.78Ю.09* 2.110.09*,** 2,3140:09*," 2.5110.09*,** 2.5510.09*,** 2.6510.09*,** 2.75Ю.09*,**

данный процесс связан со стимуляцией лазерным излучением активности, локализованных в гранулах цитоплазмы НГ ферментов гексозомонофосфат-ного шунта, в частности НАДФН-оксидазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, отвечающей за редукцию НСТ (Маянский А.Н., 2006).

Для изучения правильности нашего предположения проведено измерение активности фермента НАДФН-оксидазы, которой принадлежит ключевая роль в развитии респираторного взрыва, поскольку данный фермент осуществляет транспорт электронов от НАДФ цитозоля к молекулярному кислороду, а НИЛИ может являться физическим стимулятором выработки данного фермента (таблица 3).

Результаты исследований подтверждают наше предположение о том, что

Таблица 3

Влияние лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на выработку НАДФН-оксидазы нейтрофилами, выделенными из

крови доноров (М±т)

Доза лазерного излучения Дж\см2 Скорость НАЦФН-оксидазной реакции пмоль/мин х10ьклеток

Неа ктм вир ова нн ые • нейтрофилы Нейтрофилы, активированные ЛО с постоянной генерацией импульса Нейтрофилы, активированные ЛО с переменной генерацией импульса

0,018 1.0310.16 1.93 ±0.18*,*" 2.13±0.12*,**

0,036 1.80±0.11 2.81+0.11*,*** 3.08 ±0.21*,**

0,072 2.72±0.25 3.75±0.25*,*** 4.07 ±0.15*,**

0,14 3.01±0.31 3.79+0.31*,*** 4.17±0.30*,**

0,28 4.11±0.15 5.31+0.15*,*** 5.99±0.10*,**

0,56 4.51 ±0.13 5.29±0.23*,*** 6.21 ±0.19*,**

1,1 4.61 ±0.33 5.91+0.13*,*** 6.95+0.10*,**

Примечание: * - достоверность различий показателей по отношению к неактивированным нейтрофилам, ** - достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучёнными с постоянной генерацией импульса, *** - достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучёнными с переменной генерацией импульса С учетом поправки Бонферрони критический уровень р составил 0,003.11-критерий Мана- Уитни.

НИЛИ стимулирует выработку локализованных в гранулах цитоплазмы нейт-рофилов фермента - НАДФН оксидазы, поскольку нами зарегистрировано достоверное усиление выработки данного фермента более выраженное при облучении взвеси НГ с лазером с переменной генерацией импульса.

Для изучения секреторной функции нейтрофилов был проанализирован цитокиновый состав (таблица 4), содержание высокомолекулярных пеп-тидов-дефенсинов и бактерицидного протеина ВР1 (таблица 5), биохимический состав супернатантов нейтрофилов (таблица 6). В результате проведён-

ных исследований нами было выявлено, что нейтрофилы, полученные из периферической крови доноров и инкубированные в термостате в течение 30 мин. при температуре 37°С в растворе Хенкса выделяют глюкозу, метаболиты азота, ионы кальция, магния, ИЛ-1а, ИЛ-Iß, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а. Появление этих продуктов в супернатантах неактивированных нейтрофилов обусловлено, возможно, секреторной дегрануляцией клеток, происходящей при инкубации нейтрофилов не в физиологических условиях in vitro. Поэтому термин "неактивированные нейтрофилы" мы можем принимать лишь условно, как выделенные без индуктора секреции клеток, т.е. без лазерного излучения. Уровни изучаемых цитокинов в супернатантах неактивированных нейтрофилов доноров достоверно отличались от содержания в секреторных продуктах, выделенных после активации нейтрофилов лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса. Эти изменения имели однонаправленный характер, степень выраженности которых была различной.

Таблица 4

Содержание цитокинов в супернатантах нейтрофилов неактивированных и активированных лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса (М±т)

Цитокины Супернэта нты неактивированных нейтрофилов Параметры излучения

Супернатанты нейтрофилов активированные ЛО с постоянной генерал ей импульса Супернатанты нейтрофилов активированных ЛО с переменной генерацией импульса

ИЛ-1а, пг/мл 51.42Ю.29 59.83±0.54*, *** 62.43±4.41*,**

ИЛ-lß, пг/мл 14,28±0.12 20.36±0.87* ,*** 24.47±12.21*, **

РАИЛ-1,пг/мл 99.36±2.42 99.67±1.92 100.98±2.10*

ИЛ-8, пг/мл 44.4811.39 69.8±1.88*, *** 136.8121.71*, "

ФНО-а, пг/мл Z21±0.45 4.24±0.75*, *** 6.31±0.33*, **

Примечание: '-достоверность различий показателей по отношению к неактивированным нейтрофилам, " - достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучёнными с постоянной генерацией импульса, *** - достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучёнными с переменной генерацией импульса С учетом поправки Бонферрони критический уровень р составил 0,003. и-критерий Мана- Уитни.

Анализ цитокинового состава показал достоверно более высокое содержание провослалительных цитокинов ИЛ-1а, ИЛ-1р, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а в супернатантах нейтрофилов крови доноров, облучённых лазером с переменной генерацией импульса (таблица 4). Возможно, данный вид излучений является стимулирующим фактором, приводящим к достоверно, по сравнению с неактивированными и активированными НИЛИ с постоянной генерацией импульса НГ доноров более выраженной секреции преформированных цитокинов. По-

Таблица 5

Содержание дефенсинов и белка BPI в супернатантах нейтрофилов неактивированных и активированных лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса (М±т)

Пептидные продукты нейтрофилов Супернатанты не акги вированных нейтрофилов Параметры излучения

Супернатанты нейтрофилов активированные ЛО с постоянной генерацией импульса Супернатанты нейтрофилов активированных ЛО с переменной генерацией импульса

Дефенсины, пг/мл 4.47±0.95 4.78±0.59*, *** 6.47Ю.45*,**

BPI, пг/мл 0.67±0.20 0.75+0.22*,*" 0.99±0.33*,**

Таблица 6

Биохимический состав в супернатантах нейтрофилов неактивированных и активированных лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса

Компоненты Супернатанты неа кти вир ов анн ых нейтрофилов Параметры излучения

Нитраты, мкмоль/л - 15.21±3.43 31.11 ±7,23*, *** 39.19+7,26*,"

Нитриты, мкмоль/л 43.1 ±5.17 82.38±22,83*, *** 99.38±22.11*,**

Общее содержание метаболитов оксида азота, мкмоль/л 28.31±8.35 137.9±35,24*, *** 166.9±34.29*,**

Са2* моль/л 0.22 ±0.01 . 0.52±0.02*, *** 0.70±0.04*,**

Мд,г+ моль/л 0.98 ±0.02 0.58±0,04*, *** 0.48 ±0.03*,**

Общее содержание глюкозы мкмоль/л 4.95±0,05 3.25 ±0.05*, *** 2.01 ±0.02*,**

Примечание: см. выше.

мимо этого, в секреторных продуктах нейтрофилов были обнаружены высокомолекулярные пептиды, обладающие иммунотропной активностью-дефенси-ны и бактерицидный/индуцированный протеин ВР1 (таблица 5).

Результаты исследования биохимического состава секреторных продуктов неактивированных и стимулированных лазерным излучением нейтрофилов показали следующее (таблица 6). Продукты метаболизма оксида азота (N0) присутствовали как в супернатантах нейтрофилов интактных, так активированных ЛО НГ. Содержание метаболитов азота в супернатантах облучённых лазером нейтрофилов увеличилось в 3,7 раза по сравнению с содержанием продуктов метаболизма оксида азота с супернатантах интактных НГ. Более чем на 50% увеличилось содержание нитратов и нитритов в секреторных продуктах нейтрофилов, облучённых лазером низкой интенсивности.

Возможно, повышение содержания N0 при воздействии НИЛИ происходит за счёт усиления окислительно-восстановительных процессов, в том числе ускорения реакции окисления аргинина ферментом ЫО-синтазой, результатом которой и является образование оксида азота (Артюхов В.Г., 2005). Выделяющийся в межклеточное пространство N0 является реакционно-способным соединением с широким спектром биологического, в том числе, бактерицидного действия (Захарова М.А., 2003).

Активация нейтрофилов лазером низкой интенсивности с постоянной генерацией импульса выявила рост уровня секреции ионов Са2+, в супернатантах нейтрофилов более чем в 3 раза по сравнению с неактивированными нейтрофилами доноров. Возможной причиной увеличения концентрации ионов Са2+, после стимуляции НГ лазерным излучением является быстрый выход из органел- кальциосом в цитозоль большого количества ионов Са2+, в результате чего мы наблюдаем рост в супернатантах ионов кальция ^(озэтап Н., 1999). Зарегистрированное снижение концентрации ионов Мд2+ возможно, происходят в результате его расходования на процессы активации процессов метаболизма, а именно катаболизма в клетке (Эллиот В., 2000). Сравнительный анализ биохимического, цитокинового состава супернатантов нейтрофилов облучённых лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса показал, что, несмотря на различный количественный состав секреторных продуктов, полученных в результате активации клетки лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса, данные изменения имели однонаправленный характер.

Наиболее значимые изменения показателей зарегистрированы при воздействии лазером с переменной генерацией импульса. Полученные нами данные о составе супернатантов нестимулированных и стимулированных

нейтрофилов, в целом, совпадают с результатами исследования А.В. Чукиче-ва (1996), И.Е.Третьяковой (2003). Зарегистрированное нами усиление функциональных возможностей нейтрофилов и продуктов их секреции с учётом биоэффективных доз воздействия лазерным излучением низкой интенсивности послужило основанием для проведения объективного исследования иммунотропных эффектов воздействий лазерного излучения низкой интенсивности в практике.

Этап исследования иммунотропных эффектов лазеров низкой интенсивности ¡n vivo

На современном этапе возможны 2 пути реализации эффектов действия лазеров низкой интенсивности: эффекты, обусловленные их локальным и системным применением в терапевтических целях. Исходя из возможностей применения лазеров красного спектра излучения в терапевтической практике, представляло огромный интерес изучение их возможностей для устранения иммунологических дисфункций. В связи с вышеизложенными обстоятельствами, следующим этапом наших исследований стало изучение влияния лазерного излучения на клеточные и гуморальные факторы системного иммунитета, состояние нитроксидергической системы, липидного профиля периферической крови при проведении внутрисосудистого лазерного облучения крови (ВЛОК) у женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта.

У пациенток с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидиями были выявлены сдвиги во всех изучаемых звеньях иммунной системы, характерные для хронического воспалительного процесса: лейкоцитоз, нейтрофилия с уменьшением абсолютного количества нейтрофилов, лимфоцитоз с изменением субпопуляци-онного состава, выраженном в снижении процента лейкоцитов, несущих CD3, CD 4, CD 16; CD 20 рецепторы, повышении С08+лимфоцитов, снижения CD 95+кпеток, иммунорегуляторного индекса (CD 4+/CD8+), активности нейтрофилов по НСТ-тесту угнетения фагоцитарной функции и функционального резерва нейтрофилов, усилении лизосомальной активности, повышении концентрации lg A, lg М, lg G в сыворотке крови, снижения уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), содержания С1-СЗ компонентов комплемента, СН 50, уровня ИЛ-1а, ИЛ-ip, ФНО-а, ИФН-у, дефенсинов, бактерицидного протеина BPI, при повышении концентрации ИЛ-8. В соответствии с рекомендациями лечению урогенитального хламидиоза внутрисосудистое лазерное облучение крови (ВЛОК) может быть использовано в комплексе лечебных мероприятий.

Нами проведена оценка эффективности использования ВЛОК для коррекции выявленных иммунологических дисфункций. Исследование иммунологических показателей крови проведено до начала терапии и на следующий день после её завершения базисной терапии. Контрольную группу составили здоровые женщины без хламидийной инфекции нижнего отдела репродуктивного тракта (таблица 7).

Таблица 7

Иммунологические показатели периферической крови у женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта до и после терапии с применением БЛОК

Показатели Здоровые женщины До лечения Женщины с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта

Базисная терапия Базисная терапия+ БЛОК

1 2 3 4 5

Количество лейкоцитов,хЮ"/л 5.59 ±0.10 9.01 ±0.30* 8.91 ± 0,22*,**** 6.01 ±0.12**,***

Количество лимфоцитов,% 29.21 ± 1.02 35.61 ±1,10* 38.51 ± 1,02 * **** 39.51 ±1,07**,***

Количество имфоцитов,х10"/л 1.94 ±0,12 2,13 ±0,16* 2.19 ± 0,12*,**** 1.98 ±0,12**,***

Количество нейтрофилов,% 68.90 ± 1,13 52.90 ± 1.11* 61.90 ± 1.12*,**** 69.90 ±1.09**,***

Количество нейтрофилов, х 10эАп 3.78 ±0,25 2,26 ±0,15* 3.44 ± 0.25*,**** 3.84 ±0,25**,***

Лизосомальная активность нейтрофилов, % 91.55 ±1,12 97.52± 1.10* 95.52 ± 1.16*,**** 92.50 ±1.14**,***

Лизосомальная активность нейтрофилов, у.е. 324.0 ±15,01 349.05 ±19,10* 371.10±16,03*,",**** 321.09 ± 15,01**,***

НСТ-тест спонтанный, % 46.91 ± 1.72 37.9 ±1.94* 42.9 ± 1.23*,**** 47.91 ± 1.72**,***

НСТ-тест спонтанный, у.е. 0.58 ±0.05 • 0.50 ±0,03* 0.54 ± 0,02*,**** 0.59 +0.05**,***

НСТ-тест активированный, % 57.44 ± 1.23 50.41± 1.77* 53.41 ± 1,75*,**** 58.47 ± 1.22**,***

НСТ-тест активированный, У.е. 0.83 ±0.04 0.68 ± 0.03* 0.78 ± 0.02*,**** 0.88 ±0.04**,***

ФРН - 1.94± 0.46 1.70 ± 0,41* 1.86 ± 0,42*,**** 1.98± 0.46**,***

Активность фагоцитоза нейтрофилов, % 46.51 ±1.24 35.51 ± 1.22* 42,51 ± 1,26*,**,**** 47.51 ±1,20**,***

Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, у.е. 1.72+0,06 1.52 ±0,08* 1.62 + 0,07*,**** 1.84± 0,06**,***

Продолжение таблицы 7

СОЗ, % 27.92 ± 1,94 18.12 ±1.94* 24.12 ± 1.94*,**** 28.12 ±1.94**,***

СОЗ, абс. 0.50 ± 0,08 0.45 ± 0.08* 0,42 ±0,01*,**** 0,53 ± 0.08**,***

С04, % 30.81 ± 1,22 21.89 ±1.73* 29,19 ±1,13*,**,**** 31,81 ± 1.22**,***

С04, абс. 0.45 ± 0,02 0.37 ± 0,06* 0.43 ± 0,06*,**** 0,47 ± 0,02**,***

С 08, % 21.14 ± 1,16 24.14 ±1,23* 21.14 ± 1,20*,**** 22,14 ±1,16**,***

С08, абс. 0.41 ± 0,02 0,44 ± 0,05* 0.42 ±0,01*,**** 0,41 ± 0,02**,***

С04/С08 1,95 ±0,06 0.97 ±0,06* 1.19 ±0,08*,**** 1,97 ±0,06*,***

С016, % 13.68 ±0,27 12.03 ±0,70* 13.63 ±0,17*,**** 13,88 ±0,27**,***

С016, абс. 0.21 ± 0,05 0,22 ± 0,03* 0.24 ±0,01*,**** 0,23 ± 0,05**,***

С020, % 13,86 ±0,88 10.61 ±0,79* 11,81 ± 0,99*,**** 13.92 ±0.88**,***

С020, аба 0.22 ±0,03 0,19 ±0,03* 0,21 ± 0,23*,**** 0.22 ± 0.03**,***

СЮ5, % 21.69 ±1,98 14,69 ±2,10* 17.69 ±2,16*,**,**** 22,69 ± 1.98**,***

С095, аба 0.34 ±0,06 0,28 ± 0,06* 0.33 ±0,06*,*"* 0.35 ± 0.06*,***

С1, эф.мол /мл 99.93±6.01 91.2±8.01* 90.2±7.01*,**** 100.21±6.06 **,***

С2, эф.мол /мл 84.40±4.46 83.99±4.53* 83.21 ±4.50*,**** 84.42±4.42**,***

СЗ, эф.мол /мл 96.81±3.12 88.8±3.62* 82.11±2.41*,**** 96.8±3.12**,***

С4, эф.мол /мл 80.21±3.34 78.2±3.81* 72.22±3.54*,**** 80.2±3.34**,***

С5, эф.мап /мл 88.52±4.25 87.5±3.11* 86.52±2.6*,**** 88.5±4.25**,***

СН-50, у .е. 63.22±6.15 69.22±6.62* 56.22±7.61 *,**** 6316.15**,***

ЦИК 69.44±9.46 39±8.44* 49.13±8.03*,**** 69±9.46**,***

1д А, (/л 2.32 ±0,12 2.80 ±0,09* 2.49 ±0.10*,**** 2,92 ±0,12**,***

!д М, г/л 1.19 ± 0.14 | 1,23 ±0,08* 1.10 ±0.11*,**** 1,19 ±0.14**,***

!д Э, г/л 9.16 ±0.29 9.51 ± 0,38* . 9.36 ± 0.25*,**** 9,16 ±0.29**,***

Примечание: В таблице приведены различия между сравниваемыми группами. * ~ достоверность различий показателей по отношению к показателям здоровых женщин; ** - достоверность различий показателей по отношению к показателям женщин до лечения; "'-достоверность различий показателей по отношению к показателям женщин, пролеченных по базисной схеме; **** - достоверность различий показателей по отношению к показателям женщин, пролеченных по схеме базисная терапия + ВЛОК.

Результаты исследований показали, что применение БЛОК в комплексе с базисной терапией приводило к нормализации исследуемых показателей на момент окончания лечения, чего не происходило при использовании только базисной схемы. К моменту завершения лечения с применением БЛОК зарегистрировано: восстановление количественного и субпопуляционного состава лейкоцитов, нормализации межклеточных взаимоотношений субпопуляций Т-лимфоцитов, что приводило к увеличению количества иммуноком-петентных клеток в крови, нормализация роста поглотительной способности нейтрофилов по тесту с латексом, восстановление биоцидной функции этих клеток по НСТ-тесту, функционального резерва, лизосомальной активности, содержания в сыворотке крови 1дА, 1д М, 1д в, ЦИК.

Дисбаланс системы цитокинов, дефенсинов сыворотки крови женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта, выраженный в снижении содержания ИЛ-1а, ИЛ-1Р, ИФН-у, повышении ИЛ-8 в процессе комплексной терапии с применением БЛОК был ликвидирован полностью, однако при использовании только базисного способа лечения дисфункции в продукции цитокинов и дефенсинов устранены не были (таблица 8).

Таблица 8

Содержание цитокинов, дефенсинов в сыворотке крови у женщин хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта до и после терапии с применением БЛОК

Базисная терапия Базисная терапия* БЛОК

ИЛ-13, пг/мл 29.90±3.41 16.93 ±3.62* 23.96±1.33*,**** 27.91 ±3.12**,***

ИЛ-1а, пг/мл 45.61±4.56 35.63±3.95* 40.64±2.53*, **,**** 50.63±4.51**,***

РАИЛ-1, пг/мл 24.49iS.64 29.64±6.69* 26.44±4.34*,**** 25.48±3.69**,***

ИЛ-8, пг/мл 26.36±4.24 96.66±4.41* 76.13±2.33*,**** 27.41 ±6.52**,***

ИФН-у, пг/мл 0.90 ¿0.12 0.38±0.13* 0.66±0.11 *,",**** 0.93±0.14**,***

Дефенсины, нг/мл 4.4740.95 2.78±0.55* 6.47 ±0.25*,**** 4.98±0.35 **,***

ВР1,нг/мл 0.97 ±0.32 0.55±0.25* 0.52±0.24*,**** 0.79±0.31 **,***

Сравнительный анализ динамики иммунологических показателей женщин леченых по базисной схеме, и с применением БЛОК показал, однонаправленный характер изменений их значений при данных способах терапии, направленных в сторону восстановления показателей, однако степень нормализации данных факторов была более выраженной в группе пациенток, получавших комплексную терапию с применением БЛОК.

После установленного иммуномодулирующего влияния внутрисосудис-той лазеротерапии на показатели системного иммунитета было интересно изучить содержание оксида азота сыворотки крови женщин с хламидийной инфекцией и установить влияние внутрисосудистой лазеротерапии на их динамику (рисунок 1).

Оксид азота, мкМоль/п

»»Здоровые н До лечения - Базисная юрапия а Базисная терапия »БЛОК

Рисунок 1. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на продукцию оксида азота сыворотки крови женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта до и после внутрисосудистой лазеротерапии

Одним из приоритетных направлений стало определение оксида азота в сыворотке крови, поскольку (-NO) -природный свободный радикал, выполняющий в организме несколько функций, две из которых особенно важны для понимания системного действия лазерного излучения. Во-первых, NO-пред-шественник, выделяемого клетками эндотелия стенок кровеносных сосудов фактора расслабления (EDRF- Endothelium Derivated Relaxity Factor), фактора вызывающего вазодилатацию микрососудов, что и определяет, по-видимому, появление различных положительных эффектов лазерного излучения. Во-вторых, N0 выделяется фагоцитами и выполняет роль защитного средства против патогенов (Проскуряков С.Я.,2000) Учитывая значение N0 в регуляции фагоцитарной активности, изучение его содержания под действием системной лазеротерапии даёт возможность расширить поиск возможностей немедикаментозной коррекции процессов фагоцитоза при локальных и системных воспалительных процессах.

Установлено, что средний уровень оксида азота, регистрируемый у пациенток с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта, оказался статистически достоверно ниже по сравнению с аналогичными показателями неинфицированных женщин, что согласуется с работами коллектива исследователей ЧелГМА по изучению нитроксидергических процессов при воспалительных заболеваниях урогенитального тракта. В частности, М.А. Захаровой с соавт. (2001), было доказано достоверное снижение уровня оксида азота у женщин с ХИ органов малого таза. На наш взгляд изменение

содержания N0 может быть обусловлено значительным уменьшением пула аминокислоты L-аргинина, являющееся предшественником антипатогенной защиты при внедрении С. trachomatis в организм (Маеда X., 1998; Проскуряков С.Я., 2000). К моменту завершения внутривенной лазеротерапии у пациенток с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта восстанавливались показатели нитроксидергической системы периферической крови. Возможно, повышение содержания N0 в сыворотке крови при воздействии БЛОК также происходит за счёт усиления окислительно-восстановительных процессов, в том числе ускорения реакции окисления аргинина гем-содержащим ферментом NO-синтазой, результатом которой и является образование оксида азота. Кроме того, фермент NO-синтаза зкспрессируется под воздействием ФНО-а, и зарегистрированное нами повышение его содержания, возможно, косвенно способствовало, ускорению синтеза этого фермента и, соответственно, влияло на процесс усиления выработки оксида азота при БЛОК.

Поскольку имеющиеся единичные работы содержат разноречивую информацию о влиянии БЛОК на липидный обмен представлялось важным изучить липидный профиль женщин с хламидйной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта и оценить возможность коррекции выявленных липидотранспортных дисфункций с помощью внутривенной лазеротерапии (Шилин Д.Е., 2003; Кутлубаева Э.Р., 2008). Для определения показателей ли-пидного спектра плазмы крови у больных венозную кровь забирали в одноразовые пробирки до и после курса терапии (в утренние часы натощак).

Результаты липидного профиля женщин с инфекционно воспалительными заболеваниями урогенитального тракта, вызванными хламИдиями, представлены в таблице 9.

Как видно из данных, представленных в таблице 9, внутрисосудистое лазерное облучение крови стимулирует образование качественных и количественных сдвигов в спектре липидов сыворотки крови, включающей нормализацию уровня холестерина, повышению Хс ЛПВН (на10%), снижению ХсЛПНП (на 8%), ЛПОНП (на 11%) (р<0,003, р=0,0012). Рост доли фосфоли-пидов, важнейших структурно-функциональных компонентов клеточных мембран, точнее, восполнение его фонда, следует отнести к позитивным фото-индуцированным изменениям приспособительного и компенсаторного характера. Возможно, при внутривенном действии НИЛИ лазерное излучение подавляет накопление свободных жирных кислот, обладающих мембранно-деструктивным действием, что может приводить к активизации биосинтетических процессов, приводящих к увеличению содержания суммарных фосфо-липидов. В этой связи становиться очевидным, что лазерное излучение, способствуя нормализации липиднога обмена, стимулирует сдвиги в спектре липидов, которые сопряжены с изменениями физико-химического потенциала биомембран, и, вероятно, носят приспособительный характер, позволяющий частично нивелировать негативные последствия, вызванные понижением суммарного уровня фосфолипидов сыворотки крови. Динамика изменения содержания различных липидов в сыворотке крови является отражени-

Таблица 9

Показатели периферической крови у женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта до и после терапии с применением внутрисосудистой лазеротерапии

Показатели Здоровые женщины До , лечения Женщины с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта

Базисная терапия Базисная терапия+ БЛОК

Холестерин, мМоль/л 4.75±0,05 4.81±0.05* 4.85±0,05*,**** 4.63±0.05* ,**,***

Триглицериды, мМоль\п 0.96±0,02 0.95±0.02* 0.93±0,02*,**** 0.96±0,02*,***

ХсЛПВН, мМаль/л 1.34±0,06 1.37±0.04* 1.39±0,03*,**** 1,36+0,02*.**,***

ХсЛПНП, мМэль/л 2.68±0,05 2.75±0.05* 2.73±0,05*,**** 2.69±0,05*,***

ЛПОНП, мМоль/л 0.42±0,01 0.43±0.01* 0.33±0,01*,**** 0.43±0,01*,**,***

ЛПНП+ЛПОНП,г/л 2.88±0,01 3.01±0.01* 2.21+0,01*,**** 2.98±0,01 *,**,***

К-атерогенности 2.24+0,03 2.26±0.05* 2.28±0,05*,**** 2.25Ю,03*,**,***

Примечание: В таблице приведены различия мемеду сравниваемыми группами. * - достоверность различий показателей по отношению к показателям здоровых женщин; ** - достоверность различий показателей по отношению к показателям женщин до лечения; *** - достоверность различий показателей по отношению к показателям женщин, пролеченных по базисной схеме; **"- достоверность различий показателей по отношению к показателям женщин, пролеченных по схеме базисная терапия + БЛОК.

ем высокой активности фосфолипаз и фотоиндуцированном запуске гидролитических процессов в сыворотке крови. Полученные в исследовании результаты свидетельствуют о положительном влиянии НИЛИ на показатели липиднопо спектра сыворотки крови и позволяют рассматривать внутрисосу-дистое облучение крови как эффективный метод в комплексном реабилитационном лечении больных с местными воспалительными реакциями.

Таким образом, данные представленные при анализе иммунологических и биохимических показателей до и после системной лазеротерапии показали возможность влияния данного вида излучений на отдельные этапы воспалительной реакции. Открытым остаётся вопрос о генерализации эффекта лазерного излучения при внутрисосудистом облучении крови. На наш взгляд генерализацию эффектов ВЛОК можно объяснить с позиции "тригерных" воздействий. Пусковой или "тригерный" эффект, по нашему мнению, происходит, в основном, за счёт передачи воздействий через жидкие среды биообъекта, в нашем случае кровь, а также за счёт передачи энергии в клетке в виде АТФ при фоторегуляции и поглощении фотоакцепторами НГ квантов света. Суть концепции генерализации эффектов ЛО заключается в следующем: энергия низкоинтенсивных лазеров мала для адаптационной реакции

всего организма, поэтому при БЛОК активизируются процессы местной или клеточной саморегуляции, которые и становятся "триггером" для запуска адаптивных реакций всего организма.

Нормализация иммунологических и биохимических показателей под влиянием системной инвазивной лазеротерапии даёт основания для проведения исследований по оценке локального, неинвазивного применения лазера низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса для коррекции дисфункций факторов мукозального иммунитета женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями. В соответствии с поставленной задачей был проведён сравнительный анализ динамики иммунологических факторов цервикаль-ного секрета при терапевтическом, локальном воздействии in vivo лазерным излучением с учётом биоэффективных параметров воздействия. Облучение воспалительного очага проводилось с помощью терапевтического аппарата "МУСТАНГ-2000", генерирующего лазерное излучение с постоянной или переменной генерацией импульса в соответствии с требованиями Роспотреб-надзора РФ в сочетании с базисной терапией урогенитального хламидиоза на основании "Методических рекомендаций по диагностике и лечению заболеваний, передающихся половым путём" (ЦНИИКВИ, г. Москва, 2007). .

Получение представления о роли нейтрофилов и факторов мукозального иммунитета при воспалительном процессе нижнего отдела репродуктивного тракта возможно при проведении исследования непосредственно из очага воспалительной реакции- шейки матки, месте наибольшей иммунологической активности нижнего отдела репродуктивного тракта и частой локализации С. trachomatis (Рюмин Д.В., 1999; Телешева Л.Ф., 2000).

У женщин с урогенитальным хламидиозом выявлена дисфункция клеточных факторов местной противоинфекционной защиты выраженная в увеличении количества лейкоцитов в цервикальном секрете, повышении процента жизнеспособных нейтрофилов, усилении лизосомальной активности, кисло-родозависимого метаболизма по НСТ-тесту, снижении функционального резерва нейтрофилов, угнетении активности и интенсивности фагоцитоза нейт-.рофильных гранулоцйтов цервикальной слизи.

Выявленный дисбаланс в состоянии клеточных факторов местной антимикробной защиты может служить основанием для включения в комплексную терапию хламидийной инфекции локального воздействия лазерным излучением низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса, как возможного средства повышения местной неспецифической защиты при воспалительных заболеваниях нижнего отдела репродуктивного тракта, в том числе, вызванных хламидиями (Брагина Е.Е., 2001; Стругацкий В.М., 2002).

Теоретическими предпосылками к использованию предложенного метода послужили работы, выполненные в Челябинском государственном институте лазерной хирургии Южно-уральского научного центра РАМН (2000-2006) и разработки Государственного научного центра лазерной медицины при президенте РФ МЗ РФ г. Москва (2000), которые свидетельствуют о влиянии

Таблица 10

Состояние клеточных факторов цервикального секрета у женщин с хламидийной инфекцией при различных

способах терапии.

Погазагеги ЗдорсЕье п=80 Бззж п=100 Базс+ЛОспфгмэмй гшерацигй иип/льсап=105 Базгс+ЛЭс пхгсяжэй гежрвц«! шульса,п=100

Допе-сня Поэтелеетя Дол&ежя Поспапечэ-М! Долееьмя Посте леченда

Лейтиых109Л &4Г:Ю.40 1155Ш,Э9* 923Щ27* 116Щ& бзаюзо** 10111037" 7.88Й30*,***

Лейкщы яииеатхпб-ньц(г6с)х1С? 3871028 7.41 ¿034* 5.9ЭД17* 7,61 ±0,50* 392Ю24*** 7.38±ОЭО* 3,97±010*

ЛеРкцпы жнестаэб-нье,% ®2Ъ2.79 62.4311,55* 6ЦИ223* 635241,70* 5В.13ь263™ 64,42±1,40" 6024260*

Лизагмагьнай ааув-нооънзйгрофткв,% 182411.42 6501±23Г Э0£±1,12Г 6В,1СИ2,ЗГ 186711.30** 65,971290' 30 «±1,40*,*«

Люоосмагьная а<г№-носпьнейфофпсв.уе. 29.4242.56 155521220* 45,4312,12',"* 14551±2201* 37.42ь2ЯГ* 147,52±23Ш* 29803233"*

Акгушосль фагоцтоза Н€йтр0филрц% 5344±171 37311,71* , 47,12±1,74* 35121171* 322111.74*** 477±1,06* 34,0811,50*;*л

Ингекзснхгь фагсциго-занвйроф1пов 225Й.16 1.573003* 1.9ЭД74* 150Ю08* 22911.12"* 1.52±1,97* 2.ЭСИ1.70-

НСТ-тесг01Снганнай,% 23.724:1.42 49331201* 33,7211,33"," 49,7±2Д 29.7211.4СГ** 51,47±1,11* 320111,10™

НСТ-теаспснгдаььйуе. 033*002 0753004* ожюогг 0773004* 035ЮР2*** 379±1,32* азашсв*,**

НСТ-теа шд^цир®э+ ньй,% 52521133 62В212С21 512211,9СГ," 638И2.С6* 535211,90** 64,46±107* 5004:1Д)-

НСТ-тесг щд^цирован-ньцу.е аеашоз 1,073005* 1094005* 07Ш)ДГ' 1.124005* 0663009***

ФЖ 210Ю.16 1,заю,1сг 1.4Ш,16*,** 142Ю,10* 2.17:40,16*** 13710,10* 1.97Ю16**

Примечание: сравнения между группами проведены по критерию Мана-Уитни; *р<0,003 по отношению к показателям в группе здоровых; **р<0,003 по отношению к показателям до лечения; ***р<0,003 по отношению к показателям группы Базис+ЛО' с переменной генерацией импульса после лечения по отношению к группе женщин получивших базисную терапию; А р<0,003 -достоверность по отношению к показателям после лечения в группе Базис+ЛО с переменной генерацией импульса по отношению к показателям Базис+ЛО с постоянной генерацией импульса

лазерного изучения на все составляющие патологического процесса (органный, тканевой, клеточный) и способности физических факторов усиливать иммунные реакции на системном и локальном уровнях.

Сравнительный анализ локального действия лазера с переменной и постоянной генерацией импульса выявил больший иммунологический эффект воздействий ПО с переменной генерацией импульса. У больных, пролеченных лазером с постоянной генерацией импульса, определялось снижение абсолютного и относительного количества нейтрофилов, их лизосомальной активности, интенсивности люминесценции лизосом нейтрофилов цервикаль-ного секрета, увеличение интенсивности спонтанного восстановления НСТ, нормализация функционального резерва этих клеток. У пациенток, пролеченных с использованием лазера с переменной генерацией импульса, помимо вышеуказанных изменений, определялось усиление поглотительных способностей и фагоцитарного числа нейтрофилов. К моменту завершения лечения с применением лазерного излучения с переменной генерацией импульса отмечено полное восстановление факторов колонизационной устойчивости цервикального секрета (таблица 10).

Сопоставление динамики изменения иммунологических факторов при воздействии различных типов лазерного излучения, можно отметить следующее: после терапии с использованием НИЛИ с переменной генерацией импульса, были зарегистрированы более значимые изменения факторов врождённого иммунитета репродуктивного тракта по сравнению показателями, полученными после применения, как базисной терапии, так и терапии с применением НИЛИ с постоянной генерацией импульса. Достоверные позитивные изменения свойств НГ при лазерных воздействиях с различными режимами генерации импульса имели одинаковую направленность и заключались в усилении функционального ответа нейтрофилов цервикального секрета. Данные однонаправленные эффекты лазеротерапии мы можем объяснить включением однотипных процессов регуляции, на клеточном уровне, обеспечивающих адекватный ответ в пределах гомеостатического регулирования.

Основным результатом местного действия лазерных излучений с постоянной и переменной генерацией импульса следует считать усиление функциональной активности нейтрофилов в воспалительном очаге, которое, по мнению А.Н. Маянского (1999) следует признать одним из интегральных показателей критериев действенности стимулирующей, в частности иммунопотен-циирующей терапии.

Далее проводилось исследование гуморальных факторов местной про-тивоинфекционной защиты женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта, включающее в себя: оценку содержания в секрете ЙЛ-1а, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а, ИФН-у, 1дА, 1дМ, 1дО, компонентов комплемента С1-С5, содержания дефенсинов, метаболитов оксида азота (таблица 11).

В цервикальном секрете было зарегистрировано: повышение 1д А, 1д в снижение уровня провоспалительных цитокинов, дефенсинов, ВР1, повышение содержания ИЛ-8, снижении содержания С1-С5 компонентов комплемента цервикального секрета, СН50, возможно, связанное с тем, что присут-

Таблица 11

Состояние гуморальных факторов цервикального секрета у женщин с хламидийной инфекции при различных

способах терапии.

Показатели Здоровье Базис Базис+ЛО с переменной генерацией импульса Ба зи с+ЛО с постоя нн ой генера^ей импульса

До течения Посгв лечения До лечения После лечения До лечения После лечения

ИЛ-8, пг/мл 40.39±1.10 110.38 ±3,37* 54.40±121*,** 124.81±3.37* 3947±1.19**,*** 12722±3.30* 52.3+1.96*,'**,л

ИФН-У,П!?МЛ 0.30±0.03 0.12±0,01* 0.19±0,03*,* 0.14Ю.01* 0.39 ±0,02**,*** 0.13±0,001* 0.24±0,03**л

ИЛ-1а, пг/мл 33.31¿0.21 14.17±1.32* 22,81 ±221*,** 14,16±1.52* 23.52±219**,*" 15.19±1.05* 33.01±211*,**л

РАИП-1, пг/мл 111.04±5.09 11262±4.43* 101.2+5.12* 112.57±5.48* 111.1016.12*-,*** 112.63±5.35* 111.2116.27 **л

ФНО-а, пг/мл 292±1.03 1.13±0.91* 2.12±0.54*,** 1.18+0,51* 2.82±1.01**,*** 1.14±0,97* 2.74±1,00**л

Дефензины,пг/мп 104.47±0.95 9278±0.55* 93.87±0.45*,** 92.98±0.65* 106.47Ю.35**,*** 278±0.25* 103.87±0.55**

ВР1,пг/мл 0.69±0.12 0.44±0.02* 0.31+0,07*,** 0.53±0.10* 0.88Й.12**,*** 0.47 ±0,09* 0.41 ±0.07*,**

1д Дг/л 0.67 ±0.08 1.99 + 0.20* 0.91 ±0,03*,** 1.81 ±0.20* 0.65 ± 0,06**,*** 207 ±0,20* 0.58± 0.10**л

1д М,г/л 0.24 ± 0.03 0.23±0.15 0.27 +0,02 0.30± 0.15* 0,32 ± 0,01 0,24 ±0,15* 0.28 ±0.02

1дС,г/л 3.28 ±0,3 5.10 ±0.78* 4.91 ±021*,** 4.85 ±0.78* 3.03 ±0,1**,*** 4.98 ±0.78* 3.55 ±0.12**л

С1, эф.мал/мл 43.54±0,41 40.13d0.21* 40.63Й.28* 40,00±0.17* 43,54±0,41 **,*** 39.9910.37* 43.04±0.46**л

С2, эф. мол/мл 29.53±0,32 23.30±0.30* 23.70±0.36* 23.13±024* 29,53±0.32 **,*** 23.1QiO.22* 29.Ш0.22"*

СЗ, эф. мол/мл 36.18±1,03 33.02+0.44* 33.8210,41* 32.99±0.50* 36.18±1.03 **,*** 33.1210.70* 36.28±1.04*м

С4, эф. мол/мл ~' 17.06±0.89 18.25+0.69 18,05 ±0,79 17.99±0.09 18.10±0.70**,*** 18.12± 0.64 18.4310.54*«

С5, эф. мол /мл 25.77±0,09 26.18+0.70* 26,68±0,73* 26.28±0.45* 25.77±1.09 **,*** 26.78±0.60* 25.67±0.07**л

СН-50 47.6810.43 39.23±0.37* 39.43Ю.47* 39.8810.1 7* 47.68±0.43 **,*** 38.23±0,39* 47.62±0.31 **л

Примечание: сравнения между группами проведены по критерию Мана-Уитни; *р<0,003 по отношению к показателям в группе здоровых; **р<0,003 по отношению к показателям до лечения; ***р<0,003 по отношению к показателям группы Базис+ЛО с переменной генерацией импульса после лечения по отношению к группе женщин получивших базисную терапию; л р<0,003 -достоверность по отношению к показателям после лечения в группе Базис+ЛО с переменной генерацией импульса по отношению к показателям Базис+ЛО с постоянной генерацией импульса

ствие патогена приводит к непрерывной активации системы комплемента (Holers V.M., 1996).

К моменту завершения терапии у пациенток зарегистрировано восстановление показателей IgA. При оценке концентрации lg G в цервикальной слизи, установлено, что его уровень, повышенный до начала лечения 4.85+0.78 г/л, полностью нормализовался после лазеротерапии с переменной генерацией импульса и составил 3,03±0,1 г/л, с постоянной генерацией импульса оставался повышенным-3.55+0.12, при базисной терапии его значения не отличались от показателей до лечения. Достоверных различий по содержанию lg М в цер-викальном секрете женщин до и после терапии во всех группах сравнения не выявлено.

Терапия с привлечением лазерного воздействия с постоянной и переменной генерациями импульса способствовала нормализации содержания ИЛ-1а, ИЛ-10, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а, ИФН-у, дефензинов и BPI, компонентов С1-С5 комплемента, содержания IgG в цервикапьном секрете. При использовании базисной терапии отмечены тенденции к нормализации исследуемых показателей. Таким образом, лазерное излучение низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса, оказывая биостимулирующее действие на мембраны иммунокомпетентных клеток, возможно, приводит к усилению индукции медиаторов клеточного иммунитета, запускающих каскад иммунных реакций (Бартенева С.Н., 1996).

При рассмотрении результатов динамического иммунологического исследования гуморальных факторов местной противоинфекционной защиты репродуктивного тракта при действии терапевтических лазеров было выявлено однонаправленное влияние, выраженное в нормализации исследуемых показателей при использовании различных типов терапии: опосредованное восстановление показателей гуморального звена, угнетённых вследствие влияния на мукозальные иммунные факторы С. trachomatis.

Подводя итог проведённых исследований, необходимо отметить, что локальная и системная иммунокоррекция при воспалительных заболеваниях уро-генитального тракта, основанная на стимулирующем действии низкоинтенсивного лазерного излучения, является эффективным средством комплексной терапии, поскольку способствует восстановлению локального и системного иммунного статуса, ликвидации дисбаланса зффекторных возможностей нейт-рофилов в очаге воспалительной реакции, нормализации факторов колонизационной резистентности репродуктивного тракта, чем самым способствует скорейшей элиминации патогена под действием этиотропной терапии.

Всё вышеизложенное позволяет говорить о новом направлении в имму-нокоррекции-физической иммуномодуляции, значительным преимуществом которой является рациональный подход к решению вопросов иммунологических дисфункций, заключающаяся в возможности селективного воздействия лазером низкой интенсивности на различные субпопуляции иммунокомпетентных клеток, в т.ч. и на НГ, доступность проведения, отсутствие побочных эффектов при адекватных лечебных режимах и относительная дешевизна, что делает перспективным дальнейшее развитие данного направления иммуноко-

рекции и открывает широкие возможности применения терапевтических лазеров в клинической практике

ВЫВОДЫ

1. В экспериментальных условиях воздействие низкоинтенсивным лазерным излучением (длина волны 0,632мкм) с переменной генерацией импульса оказывает разнообразное по точкам приложения, направлению и степени выраженности влияние на функциональный статус нейтрофилов, зависящее от условий эксперимента, степени действия лазерного излучения, времени экспозиции. Частота 100 Гц, время экспозиции лазерного излучения 12,5 мин, доза облучения 0,56Дж/см2 приводит к снижению активности лизосом, повышению био-цидного потенциала, активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов.

2. Облучение in vitro нейтрофилов крови здоровых доноров низкоинтенсивным лазером с постоянной генерацией импупьса при длине волны 0,632 мкм, времени экспозиции 12,5 мин, дозе облучения 1,1 Дж/см2 приводит к усилению спонтанной и индуцированной НСТ-редуцирующей активности, увеличению функционального резерва и фагоцитарного потенциала данных клеток при снижении лизосомапьной активности гранулоцитов.

3. Действие низкоинтенсивнога лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса приводит к однонаправленным изменениям функциональных характеристик облучённых лазером нейтрофилов, выраженных в изменении их функциональной активности. При этом доза необходимая для максимальной активации нейтрофила при переменной генерации импульса составила 0,56 Дж/см2, что вдвое ниже дозы, необходимой для получения аналогичных стимулирующих эффектов при лазерном воздействии с постоянной генерацией импульса.

4. Культивирование интактных нейтрофилов in vitro сопровождается выделением провоспалительных цитокинов (ИЛ-1сх, ИЛ-1р, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а), растворимых антимикробных факторов (оксида азота, дефенсинов, бактерицидного/индуцирующего протеина), глюкозы, ионов кальция, магния. Индукция нейтрофилов крови лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса приводит к секреции биологически активных продуктов одинакового состава: увеличивается содержание провоспалительных цитокинов, бактерицидного/индуцирующего протеина, ионов кальция, снижается уровень глюкозы, ионов магния. При использовании в качестве индуктора низкоинтенсивного лазерного излучения с переменной генерацией импульса, то степень выраженности секреции исследуемых биологических веществ нейтрофилами выше по сравнению с лазерным излучением с постоянной генерацией импульса.

5. У больных с воспалительными заболеваниями нижнего отдела уроге-нитального тракта, вызванного хпамидийной инфекцией регистрируется изменения клеточных и гуморальных факторов иммунной системы: лейкоцитоз, лимфоцитоз с уменьшением количества CD3+, CD4+, CD20+, С016+-лейкоци-тов, снижение иммунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+), повышение CD8+, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, уменьшению активности

нейтрофилов по НСТ-тесту при снижении их функционального резерва, повышении индекса люминесценции лизосом нейтрофилов, повышение содержания 1дА, 1дв, 1дМ, снижение компонентов комплемента С1-С5, повышения количества циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови, снижения уровня противовоспалительных цитокинов, дефенсинов, содержания оксида азота, сдвиги липидной компоненты сыворотки крови, выраженной в снижении уровня холестерина, триглицеридов, холестерина липопротеидов низкой и высокой плотности, характерные для локальной воспалительной реакции.

6. Применение внутрисосудистого лазерного облучения крови в комплексе с базисной антибиотикотерапией приводит к нормализации иммунологических и биохимических показателей крови: снижению абсолютного и относительного числа лейкоцитов, восстановления количества и рецепторного пейзажа лимфоцитов, снижению лизосомальной активности, активности нейтрофилов по НСТ-тесту, снижении содержания 1д А, 1д в, 1д М и повышения С1-С5 компонентов комплемента, повышении концентрации ИЛ-1а, ИЛ-1 (3, ФНО-а, дефенсинов, ВР1 и снижении ИЛ-8. У пациенток с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями, пролеченных без использования лазеротерапевтических воздействий дисфункция биохимических и иммунологических показателей периферической крови после проведённого лечения сохранялась.

7. Локальное действие лазером низкой интенсивности в комплексной терапии пациенток с хламидиозом нижнего отдела репродуктивного тракта стимулирует функциональную активность фагоцитов в очаге воспалительной реакции, что проявляется в: нормализации абсолютного и относительного количества нейтрофилов, восстановлении их лизосомальной активности и интенсивности люминесценции лизосом, увеличении интенсивности спонтанного восстановления НСТ нейтрофилов, повышении функционального резерва этих клеток, усиление поглотительных способностей и фагоцитарного числа нейтрофилов цервикального секрета,

8. Динамика показателей гуморальных факторов цервикального женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидийной инфекцией, под влиянием лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса имеет однонаправленный характер, выраженная в нормализации продукции 1д в, 1д А, продукции С1-С5 компонентов комплемента, общей гемолитической активности, нормализации продукции цитокинов и дефензинов.

9. Использование лазерного излучения с переменной генерацией импульса с целью нормализации факторов местной противоинфекционной защиты женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями приводит к более быстрым позитивным изменениям факторов мукозального иммунитета репродуктивного тракта, направленных в сторону их нормализации по сравнению с применением лазерного излучения с постоянной генерацией импульса и базисных методов терапии.

10. Разработанные методы локальной иммунокоррекции с учётом биоэффективных доз воздействия 0,56Дж\см2 для импульсного режима и 1,1 Дж\см2

для режима с постоянной генерацией излучения открывают перспективу для проведения дальнейших испытаний по использованию лазерного излучения в терапевтической практике с целью коррекции дисфункций факторов врождённого иммунитета при их системном и локальном применении.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гизингер, O.A. Влияние лазерного излучения на нейтрофилы цер-викального секрета приурогенитальном хламидиозе / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников, О.И. Летяева II Рос. журн. кож. и венерич. болезней. - 2005. - № 1. - С. 50-53.

2. Гизингер, O.A. Влияние препарата бестим на клеточные факторы местного иммунитета у женщин с кандидозной инфекцией / O.A. Гизингер, М.Б. Овденко //Аллергология и иммунология. - 2005. - Т.6, № 2. - С. 190. - Тезисы II Российской конференции по иммунотерапии и иммунореабилитологии.

3. Гизингер, O.A. Использование лазеротерапии в комплексном лечении хламидийного цервицита / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников // Вестн. ЮУрГУ. - 2005. - № 5, - С. 163-167. - (Сер. "Образование, здравоохранение, физическая культура". Вып.5, Т. 1).

4. Гизингер, O.A. Система лровоспалительных цитокинов у женщин с урогенитальным трихомониазом / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин И Мед. иммунология. - 2005. - Т.7, № 5-6. - С. 601-604.

5. Гизингер, O.A. Уровни лровоспалительных цитокинов в цервикапьном секрете женщин с хламидийной инфекцией до и после терапии низкоиненсив-ным лазером / O.A. Гизингер // Актуальные вопросы дерматовенерологии: материалы регион, науч.-практ. конф. дерматовенерологов, акушеров-гинекологов, урологов. - Челябинск, 2005. - С. 53-54.

6. Гизингер, O.A. Факторы местного иммунитета репродуктивной системы у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, И.И.Долгушин, О.И. Летяева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2005. - № 4. - С. 65-69.

7. Гизингер, O.A. Действие низкоинтенсивного лазера на факторы местного иммунитета у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин IIВопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. физ. культуры. - 2006. -№ 5. - С. 20-23.

8. Гизингер, O.A. Изменение содержания провоспапительных цитокинов в цервикальном секрете женщин с хламидийной инфекцией до и после терапии низкоинтенсивным лазером "Урал-ИМ" / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин //Достижения и перспективы развития дерматовенерологии: материалы юбилейной науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию дерматовенерол. службы Челяб. обл. -Челябинск, 2006. - С. 67.

9. Гизингер, O.A. Иммунологические и микробиологические аспекты действия низкоинтенсивного лазера на факторы местного иммунитета репродуктивного .тракта женщин с хламидийной инфекцией I O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, Л.Ф.Телешева II Журн. микробиологии, эпидемиологии и

иммунобиологии. - 2006. - № 4. - С. 105-109.

10. Гизингер, O.A. Низкоинтенсивный лазер в комплексной терапии уроге-нитальных инфекций у женщин / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин // Достижения и перспективы развития дерматовенерологии: материалы юбилейной науч.-пракг. конф., посвящ 60-летию дерматовенерол. службы Челяб. обл. - Челябинск, 2006. - С. 57.

11. Гизингер, O.A. Оценка клинико-иммунологической эффективности терапии хламидийного цервицита с применением низкоинтенсивного лазерного излучения / O.A. Гизингер, В.В.Панченко // Достижения и перспективы развития дерматовенеролигии: материалы юбилейной науч.-практ. конф., посвящ 60-летию дерматовенерол. службы Челяб. обл. - Челябинск, 2006. - С. 68-70.

12. Гизингер, O.A. Реакция нейтрофилов цервикального секрета у женщине хламидийной инфекцией на низкоинтенсивное лазерное излучение / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, В.В. Панченко, Н.В. Ермакова// 1-й Российско-чешский медицинский форум: сб. материалов. - Челябинск, 2006. - С.142-144.

13. Гизингер, O.A. Система провоспалительных цитокинов в церви-кальном секрете у женщин с урогенитальным хламидиозом I O.A. Гизингер, И.И. Долгушин II Цитокины и воспаление. - 2006. - Т. 5, № 4. - С. 13-16.

14. Гизингер, O.A. Сравнительная оценка влияния лазеротерапии на иммунологические факторы местного иммунитета у женщин с герпесвирусной инфекцией /O.A. Гизингер, К.В. Никушина //Достижения и перспективы развития дерматовенерологии: материалы юбилейной науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию дерматовенерол. службы Челяб. обл. - Челябинск, 2006. - С. 92-93.

15. Гизингер, O.A. Использование лазеротерапии в комплексном лечении хламидийного цервицита / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин // Иммунология Урала. - 2007. - №1 (6). - С.120. - Материалы VI конференции иммунологов Урала.

16. Гизингер, O.A. Оценка иммунологической эффективности терапии хламидийного цервицита с применением лазера низкой интенсивности / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, Л.Ф. Телешева. - М., 2007. - 5 с. - Деп. в ГЦНМБ 23.10.2007, №-Д.27807.

17. Гизингер, O.A. Состояние функциональной активности нейтрофилов цервикального секрета у женщин с хламидийной инфекцией после терапии низкоинтенсивным лазером / O.A. Гизингер, О.И. Летяева// Иммунология Урала. - 2007. - №1 (6). - С.119. - Материалы VI конференции иммунологов Урала.

18. Гизингер, O.A. Аспекты действия низкоинтенсивного лазерного излучения на иммунологические факторы цервикального и вагинального секретов у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, К.Г. Ишпахтина // Рос. иммунол. журн. - 2008. - Т. 2(11), № 2-3. - С. 248. - Материалы объединенного иммунологического форума.

19. Гизингер, O.A. Влияние низкоинтенсивного гелий-неонового лазера на функции нейтрофилов цервикального канала и влагалища у женщин с канди-дозной инфекцией / O.A. Гизингер, К.Г. Ишпахтина, К.В. Никушшна II Рос. иммунол. журн. - 2008. - Т. 2 (11), № 2-3. - С. 248-249. - Материалы объединенного иммунологического форума.

20. Гизингер, O.A. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения

на иммунологическую реактивность организма I O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, К.Г. Ишпахтина II Вестн. новых мед. технологий. - 2008. - Т. 15, № 2. -С. 95-97.

21. Гизингер, O.A. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы цервикального секрета у женщин с микоплазменной инфекцией I O.A. Гизингер, И.И. Долгушин II Вопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. физкультуры. - 2008. - № 4. - С. 29-31.

22. Гизингер, O.A. Изучение содержания рецептора индукции апопто-3a-CD-95 [Fas/APO-1] на нейтрофилах секретов репродуктивного тракта у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, К.Г. Ишпахтина II Вестн. новых мед. технологий. - 2008. - Т. 14, № 3. - С. 118-119.

23. Гизингер, O.A. Низкоинтенсивный лазер в коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов пациентов с цервицитом хламидийной этиологии в эксперименте / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин II Иммунология. -2008. -Т.29, № 6. - С. 346-349.

24. Гизингер, O.A. Низкоинтенсивный лазер в коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов пациентов с цервицитом хламидийной этиологии в эксперименте in vitro / O.A. Гизингер, K.B. Никушкина, E.B. Плеханова И Материалы VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2008. - С. 43-51.

25. Гизингер, O.A. Роль низкоинтенсивного лазерного излучения в коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, К.Г. Ишпахтина // Вестн. новых мед. технологий. -

2008.-Т. 14, №3.-С.116-118.

26. Гизингер, O.A. Содержание рецептора индукции апоптоза-СО-95 на нейтрофилах цервикального и вагинального секретов у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, К.В. Никушкина, Е.В. Плеханова //Материалы VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2008. - С. 51-56.

27. Гизингер, O.A. Влияние лавомакса на функции нейтрофилов цервикального канала у женщин с хламидийной инфекцией / O.A. Гизингер, О.И. Летяева // III Всероссийский конгресс дерматовенерологов: тез. науч. работ. -Казань, 2009. - С. 76.

28. Гизингер, O.A. Влияние лазера низкой интенсивности на количество нейтрофильных внеклеточных ловушек при различном временном воздействии / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, В.А. Маркова // Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения: тр. науч. сессии, посвящ. 65-летию ЧелГМА. - Челябинск, 2009. - С.14-15.

29. Гизингер, O.A. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы периферической крови доноров в условиях эксперимента / O.A. Гизингер, К.Г. Ишпахтина, О.Л. Колесников II Иммунология. -

2009. - Т.ЗО, № 5. - С. 263-267.

30. Гизингер, O.A. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения с пе-

ременной генерацией импульса на процесс формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек / O.A. Гизингер, В.А.Маркова, А.И.Рыжкова//Материалы LX1II итоговой межвузовской научной студенческой конференции с международным участием, посвященной 65-летию челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 64.

31. Гизингер, O.A. Влияние продолжительности воздействия лазера низкой интенсивности с постоянной генерацией импульса на процесс формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, В.А. Маркова // Материалы VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 75-77.

32. Гизингер, O.A. Гелий-неоновый лазер с переменной генерацией импульса в коррекции дисфункции нейтрофильных гранулоцитов in vitro / O.A. Гизингер // Материалы VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 28-33.

33. Гизингер, O.A. Изменение динамики содержания цитокинов под воздействием лазера низкой интенсивности / O.A. Гизингер, М.А. Полетаева, Е.В. Максимова II Иммунология. - 2009. - Т.ЗО, № 3. - С. 176-180.

34. Гизингер, O.A. Изучение процесса формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек под воздействием лазера низкой интенсивности / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, К.Г. Ишпахтина, В.А. Маркова II Мед. иммунология. - 2009. - Т.11, № 4-5. - С. 406-407.

35. Гизингер, O.A. Клинико-иммунологические аспекты действия препарата "Сафоцид" при лечении урогенитальных инфекций / O.A. Гизингер, В.А. Маркова // Материалы VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 39-46.

36. Гизингер, O.A. Клинико-микробиологическая оценка эффективности препарата "Сафоцид" при лечении хламидийной инфекции нижнего отдела репродуктивного тракта / O.A. Гизингер, О.И. Летяева // Материалы VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 34-39.

37. Гизингер, O.A. Методы изучения бактерицидное™ нейтрофильных гранулоцитов по формированию нейтрофильных ловушек / O.A. Гизингер, В.А. Маркова, А.И. Рыжкова // Материалы LXIII итоговой межвузовской научной студенческой конференции с международным участием, посвящённой 65-летию челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 65,

38. Гизингер, O.A. Мониторинг функционально-метаболического статуса нейтрофилов под действием низкоинтенсивного лазерного излучения ИК-диа-пазона / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин II Научно-практическая конференция центрального федерального округа Российской федерации с международным участием "Инновации и информационные технологии в диагностической, лечебно-профилактической и учебной работе клиник": материалы конф. - Тверь,

2009. - С.296-297.

39. Гизингер, O.A. Оценка количества нейтрофильных внеклеточных ловушек у здоровых доноров разного пола, формирующихся под воздействием лазера низкой интенсивности / O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, В.А. Маркова II Вестн. урал. мед. акад. науки. - 2009. - № 2\1(24). - С.246-247.

40. Гизингер, O.A. Состояние микробиоценоза после применения имму-нимодулятора лавомакс у женщин с микоплазменной инфекцией : тез. науч. работ / O.A. Гизингер, О.И. Летяева II III Всероссийский конгресс дерматовенерологов. - Казань, 2009. - С.87.

41. Гизингер, O.A. Уровень провоспалительных цитокинов в церви-кал ьном секрете у женщин с хламидийной инфекцией до и после терапии низкоинтенсивным лазером с переменной генерацией импульса У O.A. Гизингер, И.И. Долгушин, К.Г. Ишпахтина, В.А. Маркова II Мед. иммунология. - 2009. - Т.11, № 4-5. - С. 312-313.

42. Гизингер, O.A. Функционально-метаболический статус нейтрофилов под воздействием лазерного излучения ИК-диапазона (850нм) /O.A. Гизингер, К.Г. Ишпахтина, О.Л. Колесников//Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения: тр. науч. сессии, посвящ. 65-летию ЧелГМА. - Челябинск, 2009. - С.11.

43. Гизингер, O.A. Цитокиновый профиль вагинального секрета женщин с урогенитальным микоплазмозом / O.A. Гизингер, К.В. Никушкина, Е.А. Мезенцева, К.Г. Ишпахтина, О.Б. Прокопьева //Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения: тр. науч. сессии, посвящ. 65-летию ЧелГМА. - Челябинск, 2009. - С.9-10.

44. Гизингер, O.A. Эффективность различных методов иммунокоррекции в терапии урогенитальных инфекций / O.A. Гизингер, К.Г. Ишпахтина II Материалы LXIII итоговой межвузовской научной студенческой конференции с международным участием, посвящённой 65-летию челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск, 2009. - С. 66.

На правах рукописи

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

Челябинск, 2010

Отпечатано в типографии BNL. Подписано в печать 06.05.10 г. Формат 60x84 Vie. Гарнитура Arial Суг. Бумага офсетная. Печать на ризографе. Объем 2 усл. п.л. Тираж 100 экз.

Оглавление диссертации Гизингер, Оксана Анатольевна :: 2010 :: Челябинск

Список сокращений.

Введение.

ГЛАВА 1 Иммунологические нарушения у пациентов с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта и современные способы их коррекции с помощью никонгенсивного лазерного излучения.

1.1 Роль нейтрофильных гранулоцитов в обеспечении противоинфекционной защиты организма.

12 Влияние низкоингенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на нейтрофилы крови и слизистых оболочек репродуктивного тракта.

13 Изучение иммунокорригирующих свойств лазерного излучения в аспекте «доза-эффект» в клинической практике и экспериментальных исследованиях.

1.4 Современные возможности местного и системного применения низкоинтенсивного лазерного излучения в терапии воспалительных заболеваний

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

2.1 Экспериментальные методы исследований.

2.2 Характеристика аппаратов, генерирующих лазерное излучение.

23 Методы обследования больных.

2.4 Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. Влияние лазерного излучения красного диапазона с постоянной и переменной генерацией импульса на нейтрофилы периферической крови доноров в условиях эксперимента.

3.1 Анализ действия частоты излучения, дозы излучения, времени воздействия низкоэнергетического лазерного излучения с переменной генерацией импульса на реактивность нешрофилов донорской крови в in vitro.

32 Изучение влияния дозы излучения, времени экспозиции низкоэнергетического лазерного излучения с постоянной генерацией импульса на функциональную акшвносгьнейтрофилов крови доноров.

33 Исследование динамики рецепторов апоптоза нейтрофилов CD 95+ периферической крови доноров под воздействием низкоинтенсивного лазера с постоянной и переменной генерацией импульса.

3.4 Исследование дегрануляционной способности и заинтересованности Са~ каналов нейтрофилов в процессе экзоцитоза лизосомальных гранул под действием лазерного излучения низкой интенсивности.

ГЛАВА 4 Биохимические особенности супернатанпгов нейтрофилов периферической крови доноров облучённых лазером низкой интенсивности с переменной и непрерывной генерацией импульса.

4.1 Оценка цитокинового состава супернатангов донорских нейтрофилов, облучённых лазером низкой интенсивности, в условиях эксперимента.

4.2 Исследование уровня дефенсинов супернатангов нейтрофилов, активированных лазером низкой интенсивности.

43 Особенности состояния нитроксидергической системы в супернатантах нейтрофилов, интаюных и активированных лазером низкой интенсивности.

4.4 Содержание глюкозы, Mg~ Са" в супернатантах нейтрофилов облучённых лазером низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса.

ГЛАВА 5 Изучение влияния системной иммунокоррскции с помощью внутрисосудистого воздействия лазерным излучением на иммунологические и биохимические показатели периферической крови женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидиями.

5.1 Оценка состава и функциональной активности лейкоцитов периферической крови у больных с урогенитальным хламидиозом до и после внутрисосудистой лазеротерапии.

52 Изучение влияния системной лазеротерапии на цитокиновый профиль крови женщин с хламидиозом.

53 Анализ содержания пептидных продуктов нейтрофилов периферической крови женщин, с воспалительными заболеваниями урогенитального тракш, вызванных хламидийной инфекцией, пролеченных с использованием внутрисосудистой лазеротерапии.

5.4 Исследование влияния системной лазеротерапии на показатели гуморальных факторов и нитроксидершческой системы периферической крови женщин с хламидийной инфекцией до и после терапии с использованием лазерного излучения.

5.5 Влияние лазера красного спектра излучения на уровень липидов крови женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта.

ГЛАВА 6 Сравнительная характеристика активности нейтроф ильных гранулоцитов цервикальнош секрета женщин с хламидиозом до и после локального воздействия лазером низкой интенсивности.

6.1 Изучение клеточного состава и функциональной активности нейтрофилов цервикального секрета у женщин с цервицишм хламидийной этиологии.

6.2 Оценка влияния локальной иммунокоррекции лазером низкой нтенсивности с постоянной генерацией импульса на функциональные свойства нейгрофильных гранулоцитов цервикального секрета женщин с хламидиозом.

63 Исследование функциональных свойств нейгрофильных гранулоцитов цервикального секрета при местном действии лазера низкой интенсивности с переменной генерацией импульса.

6.4 Динамика экспрессии поверхностных рецепторов апоптоза на нейтрофилах цервикального секрета до и после воздействия лазером низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса. влияния лазерного излучения низкой интенсивности ьных факторов местного иммунитета репродукгивш шамидийной инфекцией. шьных факторов местного иммунитета репродуктивного йным цервицигом до и после лазеротерапии с постоят

Введение диссертации по теме "Клиническая иммунология, аллергология", Гизингер, Оксана Анатольевна, автореферат

Одним из ведущих направлений современной иммунологии является поиск средств и способов избирательного воздействия на отдельные этапы развития иммунного ответа [76,152, 164]. Перспективным подходом к решению данной проблемы может являться применение физических воздействий в качестве немедикаментозных стимуляторов клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Одним из таких методов может быть использование низкоинтенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса. Эффекты низкоинтенсивного лазерного излучения обусловлены поглощением квантов света, что модифицирует конформацию белковых молекул мембран нейтрофилов, которые являются одними из основных эффекторов воспалительной реакции организма человека клетками, играющими важнейшую роль в поддержании иммунного гомеостаза и наиболее активно воспринимающими лазерное излучение за счёт фотоакцепторных свойств ферментов, и приводит к изменению метаболических процессов и активности клетки [27,204,212,237,295]. По данным исследований, проводимых за последнее десятилетие, показано, что терапевтический лазер оказывает корригирующее влияние на дефектные функции нейтрофилов, активизируя их фагоцитарную активность, снимая блокаду ответа на дополнительную стимуляцию, повышая способность клеток к реализации резервных возможностей [114,186].

Успехи современной иммунологии позволили "установить нарушения функционирования иммунной системы, которым в последнее время отводится ведущая роль в патогенезе различных патологических состояний [24,27,81, 188, 242,273].Течение многих патологических процессов сопровождается дестабилизацией иммунного статуса с развитием иммунной недостаточности [79,164,182,252,253], которая приводит к снижению эффективности проводимой традиционной терапии, способствует активизации условно-патогенной микрофлоры, смене возбудителя, что в свою очередь приводит к затяжному течению болезни, осложнениям [135,153, 204,253]. Поэтому, восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием успеха комплексной терапии различных патологических состояний. В связи с этим понятен значительный интерес к использованию различных средств, способных целенаправленно влиять на иммунный ответ организма [17,180,198,270]. В связи с этим изучение иммунологических расстройств на системном и местном уровнях является перспективным направлением диагностики, позволяющее расширить представление о механизмах развития и течения воспалительных заболеваний и проводить лечебные мероприятия с использованием физиотерапевтических воздействий, в том числе локальной и системной лазеротерапии.

Для исследования факторов неспецифической резистентности при воспалительных заболеваниях обязательным условием является изучение клеток из воспалительного очага, которыми в большинстве случаев являются нейтрофилы [80,81,160]. В связи с этим большинство авторов отводит главную роль системе нейтрофильных гранулоцитов, которые являются основными эффекторными клетками врождённого иммунитета. На сегодняшний день вопрос об их участии в регуляции иммунного и других звеньев гомеостаза является предметом пристального изучения исследователей [42-52, 65, 85,120, 153, 221, 266, 344, 420, 421, 426-429]. Функциональные свойства нейтрофилов достаточно точно отражают вторичные иммунологические изменения при многих неспецифических воспалительных заболеваниях и соответственно могут служить показателем наличия или динамики нарушений в системе иммунитета [80,160,161,187,190].

Клинические и экспериментальные исследования, проведённые в последнее десятилетие, свидетельствуют о возможности модуляции иммунных реакций организма при воздействии на него таких физических факторов, как лазерное излучение. В стратегическом плане заслуживает внимание изучение потенциала физиотерапевтических лечебных воздействий и оценка их влияния на факторы врождённого иммунитета с учётом выбора рациональных параметров воздействий [43-45,177,179]. Использование низкоинтенсивного лазерного излучения стало в последние годы одним из широко распространённых способов комплексной терапии воспалительных заболеваний [43-45,57,74,88,93,393,371]. В настоящее время принято считать, что низкоинтенсивное лазерное излучение весьма эффективно при различных патологических процессах, в том числе для коррекции локальной и системной иммунной недостаточности. [19,25,47,92]. В медицинской практике наиболее часто применяется НИЛИ красного и инфракрасного (ИК) диапазонов [4,18,42,124,126,130]. В успешном решении вопросов связанных с эффективностью лазеротерапии, большая роль отводится рационально подобранным параметрам излучения. Однако применяемые в эксперименте и клинической практике физиотерапевтические подходы могут оказывать на иммунную систему больных различные эффекты не только по силе, но и по направленности, что, соответственно вызывает значительные сложности в вопросах их применения. Моделирование иммунного ответа на действие лазерного излучения в эксперименте позволит выявить оптимальные параметры действия лазеров, но и установить пороговые значения, наиболее эффективные для локального и системного воздействия [4,18,42,124,126,130].

В связи с этим, изучение влияния лазерного излучения на функциональное состояние иммунной системы, факторов мукозального иммунитета является важным аспектом, требующим глубокого изучения с применением клинико-иммунологических и экспериментальных методов исследования, тем более что основные механизмы, посредством которых реализуется иммуномодулирующий эффект лазерного излучения находится в стадии изучения: Практически отсутствует адекватное экспериментальное обоснование применяемых доз воздействия [32,46,74,97]. Остаются неясными вопросы влияния лазера на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета при воспалительном процессе. Такое положение затрудняет развитие указанного направления иммунокоррекции и делает его достаточно актуальным для дальнейшего изучения. Указанные обстоятельства определили цель и направления настоящего исследования.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. В экспериментальных исследованиях исследовать влияние дозы излучения, времени экспозиции низкоэнергетического лазерного излучения с постоянной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов донорской крови.

3. Провести сравнительный анализ действия различных параметров низкоэнергетического лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на секреторную, фагоцитарную и бактерицидную реактивность нейтрофилов, выделенных их донорской крови.

4. Исследовать биохимический, цитокиновый состав и выявить особенности состояния нитроксидергической системы, уровень дефенсинов супернатантов нейтрофилов периферической крови, облучённых лазером низкой интенсивности с переменной и постоянной генерацией импульса.

5. Определить характер нарушений клеточного, гуморального звеньев иммунной нитроксидергической системы периферической крови женщин при воспалительных заболеваниях урогенитального тракта, вызванных хламидиями и проанализировать динамику изменений показателей данных систем при внутрисосудистом лазерном облучении.

6. Изучить влияние лазера низкой интенсивности на морфологический состав и функциональную активность клеток в очаге воспалительной реакции при заболеваниях нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Экспериментально обоснована возможность оптимизации применения лазерных воздействий за счёт изменения параметров излучения.

В работе дана сравнительная оценка биохимического и цитокинового состава супернатантов нейтрофилов, выделенных из периферической крови доноров, облучённых лазером низкой интенсивности с переменной и непрерывной генерацией импульса. Прослежены изменения в уровне секреции неактивированными и активированными лазерным излучением нейтрофилами крови доноров уровня дефенсинов, провоспалительных цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-1(3, ИЛ-8, ФНО-а), глюкозы, макроэлементов (Са , М£ ~ ). Выявлены особенности состояния нитроксидергической системы супернатантов нейтрофилов, интактных и активированных лазером низкой интенсивности. Показано, что эти изменения имеют однонаправленный характер, степень выраженности которых различна.

Проанализировано влияние внутривенного лазерного излучения на иммунореактивность организма и определено положительное влияние данного вида излучений на динамику иммунологических, биохимических показателей, состояния нитроксидергической систем периферической крови женщин.

Разработан «Способ локальной иммунокоррекции инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта женщин, вызванных микроорганизмами, передаваемыми половым путём». Приоритетная справка от 15 мая 2009 года. Заявка на изобретение № 2009117799

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Полученные данные о влиянии различных режимов лазерного излучения низкой интенсивности на морфофункциональные, цитохимические, биохимические характеристики нейтрофильных гранулоцитов, биохимическом составе особенностях состояния нитроксидергической, прооксидантной систем супернатантов нейтрофилов периферической крови доноров облучённых лазером низкой интенсивности с переменной и постоянной генерацией импульса имеют существенное значение в понимании проблемы регулирующего влияния лазерных воздействий на нейтрофильные гранулоциты и факторы мукозального иммунитета в условиях in vitro и in vivo.

Впервые проведён систематический сравнительный анализ действия различных режимов лазерного излучения на морфофункциональные, характеристики нейтрофильных гранулоцитов и экспериментально установлена возможность повышения функциональной активности нейтрофилов путём воздействия лазера низкой интенсивности. Обоснована возможность оптимизации методики применения лазеротерапии за счет изменения параметров излучения.

Практическое значение работы состоит в установлении возможности восстановления функциональной активности нейтрофилов и иммунореактивности организма путём системного и локального воздействия лазера низкой интенсивности с постоянной и переменной генерацией импульса. Полученные результаты открывают перспективу для проведения дальнейших испытаний использования лазеров низкой интенсивности с целью иммунокоррекции при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. В экспериментальных условиях воздействие лазером низкой интенсивности приводит к усилению функциональных возможностей нейтрофильных гранулоцитов, которые проявляются в усилении их микробоцидного потенциала, выраженность данных изменений имеет дозозависимый эффект, зависящий от режима генерации импульса.

2. При исследовании in vitro действия низкоинтенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов периферической крови доноров выявлено стимулирующее влияние лазеров низкой интенсивности генерирующих излучение с длиной волны 0,632 мкм, частотой 100Гц дозой излучения 0,56 Дж/см~, времени экспозиции 12,5 мин

3. Супернатанты нейтрофилов периферической крови доноров содержат провоспалительные цитокины (ИЛ-1а, ИЛ-1(3, РАИЛ1, ИЛ-8, ФНО-а), растворимые антимикробные факторы (оксид азота, дефенсины, бактерицидный/индуцирующий протеин), глюкозу, ионы кальция, магния. Индукция нейтрофилов крови лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса приводит к усилению их секреции, степень выраженности которой зависит от режима генерации импульса и биоэффективных доз воздействия.

4.У пациенток с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта выявлено угнетение иммунореактивности организма, что проявляется изменениями клеточных и гуморальных факторах иммунитета, состояния нитроксидергической системы, нормализация которых наступала при комплексной терапии с применением внутрисосудистого лазерного облучения крови.

5.Сравнительный анализ локальной иммунокоррекции при воспалительных заболеваниях нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями лазером низкой интенсивности определил однонаправленный, позитивный характер его влияний на факторы местной противоинфекционной защиты репродуктивного тракта; Наиболее выраженные изменения иммунологической активности происходили при использовании излучений с переменной генерацией импульса.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Методы системного и локального воздействия лазерным излучением больных с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта внедрены в практику работы Государственного лечебно-профилактического учреждения здравоохранения «Челябинский областной кожно-венерологический диспансер», консультационно-диагностического центра ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия»; Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах кожных и венерических болезней, аллергологии и иммунологии, микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертации доложены: на научной конференции «Актуальные проблемы практической медицины» (г.Челябинск 2004, 2005, 2006, 2007), Международном конгрессе по иммунореабилитации (г.Москва, 2005), IV конференции иммунологов Урала (г.Уфа, 2005), «Международном конгрессе по иммунореабилитации» (г.Москва, 2005), конференции, посвященной 25-летию ЦНИЛ ЧелГМА «Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека» (г. Челябинск, 2006), V конференции иммунологов Урала ( г.Оренбург, 2006), Всероссийском форуме с международным участием им. академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г.СПб, 2006), научно —практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (г. Челябинск, 2006), юбилейной научно-практической конференции, посвященной 60-летию дерматологической службы области «Достижения и перспективы развития дерматовенерологии» (г. Челябинск, 2007), конференции, посвященной 60-летию клиники ЧелГМА «Актуальные вопросы теоретической и практической медицины» (г.Челябинск, 2007), научно-практических конференциях Челябинской областной общественной организации врачей - лаборантов (г.Челябинск, 2005, 2006, 2007, 2008), 2-м Российско-чешском медицинском форуме с международным участием (г. Челябинск, 2006), Научно-практической конференции «Магнитные поля и здоровье человека» (г.Курск, 2007), VII конференции иммунологов Урала (г. Ижевск, 2007), материалах VI итоговой научно-практической конференции молодых учёных челябинской государственной медицинской академии (г. Челябинск, 2008), VI конференции иммунологов Урала (г. Оренбург, 2008), XIII объединённом всероссийском иммунологическом форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (СПб, 2009), VII конференции иммунологов Урала «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической аллергологии и иммунологии» (г. Архангельск, 2009) Всероссийском съезде дерматовенерологов (г. Казань, 2009), Научно-практической конференции Центрального федерального округа Российской Федерации с международным участием (г.Тверь, 2009)

По теме диссертации опубликовано 45 печатных работы.

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИСЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 355 стр. машинописного текста, содержит 71 таблицу и 16 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Библиография включает в себя 395 литературных источников, в том числе 270 отечественных и 125 зарубежных

Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета"

выводы

1.В экспериментальных условиях воздействие низкоинтенсивным лазерным излучением (длина волны 0,632мкм) с переменной генерацией импульса оказывает разнообразное по точкам приложения, направлению и степени выраженности влияние на функциональный статус нейтрофилов, зависящее от условий эксперимента, степени действия лазерного излучения, времени экспозиции. Частота 100 Гц, время экспозиции лазерного излучения 12,5 мин, доза облучения 0,56Дж/см~ приводит к снижению активности лизосом, повышению биоцидного потенциала, активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов.

2.0блучение in vitro нейтрофилов крови здоровых доноров низкоинтенсивным лазером с постоянной генерацией импульса при длине л волны 0,632 мкм, времени экспозиции 12,5 мин, дозе облучения 1,1 Дж/см приводит к усилению спонтанной и индуцированной НСТ-редуцирующей активности, увеличению функционального резерва и фагоцитарного потенциала данных клеток при снижении лизосомальной активности гранулоцитов.

3.Действие низкоинтенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса приводит к однонаправленным изменениям функциональных характеристик облучённых лазером нейтрофилов, выраженных в изменении их функциональной активности. При этом доза необходимая для максимальной активации нейтрофила при переменной генерации импульса составила 0,56дж/см~, что вдвое ниже дозы, необходимой для получения аналогичных стимулирующих эффектов при лазерном воздействии с постоянной генерацией импульса.

4.Культивирование интактных нейтрофилов in vitro сопровождается выделением провоспалительных цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-ip, РАИЛ, ИЛ-8, ФНО-а), растворимых антимикробных факторов (оксида азота, дефенсинов, бактерицидного/индуцирующего протеина), глюкозы, ионов кальция, магния. Индукция нейтрофилов крови лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса приводит к секреции биологически активных продуктов одинакового состава: увеличивается содержание провоспалительных цитокинов, бактерицидного/индуцирующего протеина, ионов кальция, снижается уровень глюкозы, ионов магния. При использовании в качестве индуктора низкоинтенсивного лазерного излучения с переменной генерацией импульса, то степень выраженности секреции исследуемых биологических веществ нейтрофилами выше по сравнению с лазерным излучением с постоянной генерацией импульса.

5. У больных с воспалительными заболеваниями нижнего отдела урогенитального тракта, вызванного хламидийной инфекцией регистрируется изменения клеточных и гуморальных факторов иммунной системы: лейкоцитоз, лимфоцитоз с уменьшением количества СОЗ+, СБ4+, С020+, СБ 16+-лейкоцитов, снижение иммунорегуляторного индекса (СБ4+/С08+), повышение С08+, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, уменьшению активности нейтрофилов по НСТ-тесту при снижении их функционального резерва, повышении индекса люминесценции лизосом нейтрофилов, повышение содержания ^О, снижение компонентов комплемента С1-С5, повышения количества циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови, снижения уровня противовоспалительных цитокинов, дефенсинов, содержания оксида азота, сдвиги липидной компоненты сыворотки крови, выраженной в снижении уровня холестерина, триглицеридов, холестерина липопротеидов низкой и высокой плотности, характерные для локальной воспалительной реакции. б. Применение внутрисосудистого лазерного облучения крови в комплексе с базисной антибиотикотерапией приводит к нормализации иммунологических и биохимических показателей крови: снижению абсолютного и относительного числа лейкоцитов, восстановления количества и рецепторного пейзажа лимфоцитов, снижению лизосомальной активности, активности нейтрофилов по НСТ-тесту, снижении содержания ^А, ^О, ^М и повышения С1-С5 компонентов комплемента, повышении концентрации ИЛ-1а, ИЛ-1(3, ФНО-а, дефенсинов, ВР1 и снижении ИЛ-8. У пациенток с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями, пролеченных без использования лазеротерапевтических воздействий дисфункция биохимических и иммунологических показателей периферической крови после проведённого лечения сохранялась.

7.Локальное действие лазером низкой интенсивности в комплексной терапии пациенток с хламидиозом нижнего отдела репродуктивного тракта стимулирует функциональную активность фагоцитов в очаге воспалительной реакции, что проявляется в: нормализации абсолютного и относительного количества нейтрофилов, восстановлении их лизосомальной активности и интенсивности люминесценции лизосом, увеличении интенсивности спонтанного восстановления НСТ нейтрофилов, повышении функционального резерва этих клеток, усилении поглотительных способностей и фагоцитарного числа нейтрофилов цервикального секрета.

8. Динамика показателей гуморальных факторов цервикального женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидийной инфекцией, под влиянием лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса имеет однонаправленный характер, выраженная в нормализации продукции ]£ О, продукции С1-С5 компонентов комплемента, общей гемолитической активности, нормализации продукции цитокинов и дефензинов.

9:Использование лазерного излучения с переменной генерацией импульса с целью нормализации факторов местной противоинфекционной защиты женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванных хламидиями приводит к более быстрым позитивным изменениям факторов мукозального иммунитета репродуктивного тракта, направленных в сторону их нормализации по сравнению с применением лазерного излучения с постоянной генерацией импульса и базисных методов терапии.

10. Разработанные методы локальной иммунокоррекции с учётом биоэффективных доз воздействия 0,56Дж/см для импульсного режима и 1,1 Дж/см для режима с постоянной генерацией излучения открывают перспективу для проведения дальнейших испытаний по использованию лазерного излучения в терапевтической практике с целью коррекции дисфункций факторов врождённого иммунитета при их системном и локальном применении.

Заключение

Успехи современной клинической иммунологии позволили установить нарушения функционирования иммунной системы, которым в последнее время отводится ведущая роль в патогенезе воспалительных заболеваний [80,81,161,183,184]. Как правило, воспалительные процессы сопровождаются дестабилизацией иммунного статуса с возможным развитием иммунной недостаточности. Иммунная недостаточность приводит к снижению эффективности проводимой терапии, способствует активизации условно-патогенной микрофлоры, что в итоге может приводить к хронизации заболевания или персистенции возбудителя [160, 161,163].

Недооценка важности диагностики и коррекции нарушений функций иммунной системы может приводить к развитию иммунодефицитных состояний и ухудшению течения патологического процесса [67,168]. Прогрессирующее снижение эффективности традиционной терапии при патологических состояниях стимулирует поиск новых альтернативных методов лечения [235,253,272].

Таким образом, восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием терапии инфекционно -воспалительных заболеваний. Нейтрофилы являются основными эффекторными клетками иммунной системы и активными участниками воспалительного процесса. Вопрос об их роли в регуляции иммунного и других звеньев гомеостаза является предметом пристального изучения исследователей, поскольку известно, что данные клетки являются важным компонентом неспецифического звена иммунитета, инициирующих и регулирующих иммунологические реакции на системном и локальном уровнях [80,160,161,187,190]. Функциональные свойства нейтрофилов достаточно точно отражают вторичные иммунологические изменения при многих неспецифических воспалительных заболеваниях и соответственно могут служить показателем наличия или динамики нарушений иммунной системы [80,160,161,187,190].

Обладая рядом систем быстрого и эффективного уничтожения микроорганизмов и являясь ведущими представителями факторов врождённого иммунитета, нейтрофилы принимают активное участие в эффекторных и регуляторных звеньях неспецифических иммунных реакций [27,81,190] и рассматриваются как одни из основных участников противоинфекционной защиты организма [80,81,161,183], благодаря своей способности поглощать патогены, высвобождать широкий спектр микробоцидных компонентов, в том числе эндогенных антимикробных пептидов, синтезировать вазоактивные и хемотаксические липидные медиаторы, играющие важную роль в развитии процессов воспаления, поддержания регуляции адаптивных возможностей иммунной системы. Работами последнего десятилетия доказано, что нейтрофилы играют огромную роль в межклеточных взаимодействиях, в которых цитокины выступают в роли посредников и регуляторов [164,186,235].

Клинические и экспериментальные исследования, проведённые в последнее десятилетие, свидетельствуют о возможности модуляции иммунных реакций при действии на него различных физических факторов в качестве немедикаментозных стимуляторов клеточного и гуморального звеньев иммунитета [171,204,213]. В стратегическом плане заслуживает внимание изучение потенциала физиотерапевтических лечебных воздействий и оценка их влияния на факторы врождённого иммунитета с учётом выбора рациональных параметров воздействий [43-45,177,179]. К наиболее перспективным, в плане физической иммуномодуляции, может быть отнесено использование низкоинтенсивного лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса. Как свидетельствуют предшествующие исследования, проблема изучения биотропных эффектов лазеров низкой интенсивности - одна из важнейших в современной биологии [43

45,57,74,88,93,393,371]. Изучение уникальных свойств лазерного излучения открыли широкие возможности для его локального и системного применения. В настоящее время принято считать, что низкоинтенсивное лазерное излучение весьма эффективно при различных патологических процессах [42-52, 65, 85,120, 153, 221, 266, 344, 420, 421, 426-429].

В медицинской практике наиболее часто применяется НИЛИ красного спектра излучения в непрерывном и импульсном режимах. Воспалительная реакция, вызванная применением лазера низкой интенсивности, является полезной, т.к. позволяет устранять чужеродные патогенны и способствовать восстановлению повреждения, вызванные ими в тканях, особенно при хронических и вялотекущих воспалительных процессах [17,180,198]. По данным исследований, представленных на обсуждение за последнее десятилетие, показано, что терапевтический лазер оказывает корригирующее влияние на дефектные функции НГ, активизируя фагоцитарную активность, стимулируя клеточную и внеклеточную бактерицидность, снимая блокаду ответа на дополнительную стимуляцию, повышая способность клеток к реализации резервных возможностей [114,186].

Данные последнего десятилетия свидетельствуют о том, что нейтрофильные гранулоциты, подвергаясь лазерному воздействию, способны изменить свой качественный и субпопуляционный состав, перестраивать свою функциональную активность, секретировать многочисленные медиаторы воспалительных реакций, в том числе и цитокины, чтобы в конечном итоге выполнить свою основную функцию, «погибнуть при исполнении своих обязанностей» и инициировать и регулировать воспаление и иммунный ответ [27,204, 212, 237, 295].

На современном этапе в клинической практике преобладает эмпирический подход к разработке новых методов иммунокоррекции с использованием НИЛИ. Проведенные экспериментальные и клинические Ю.А.Владимирова, И.И. Горяйнова, А.И.Конопли, Л.В.Ковальчука,

С.В.Москвина показали, что воздействие лазером низкой интенсивности активирует метаболические процессы в клетках и тканях, способствуя усилению иммунологической активности организма [74,177]. Несмотря на новые данные, полученные при изучении НИЛИ, биологические изменения в тканях живого организма, иммунологические эффекты действия низкоинтенсивного лазера на фагоцитирующие клетки, а также его влияние на локальные иммунные реакции, до конца не изучены. До настоящего времени точно не известны, а существуют на уровне гипотез элементарные уровни перехода энергии поглощённых квантов света в нейтрофилах, механизмы изменения реактивности нейтрофильных гранулоцитов при действии низкоинтенсивного лазерного излучения и роль этих изменений в системе клеточно-гуморальных взаимодействий [161,163,183].

В успешном решении вопросов связанных с эффективностью лазеротерных воздействий, большая роль отводится рационально подобранным параметрам излучения. Однако применяемые в эксперименте и клинической практике физиотерапевтические подходы при одинаковых схемах лечения могут оказывать на иммунную систему больных совершенно различные эффекты не только по силе, но и по направленности, что, соответственно, вызывает значительные сложности в вопросах их применения. Моделирование иммунного ответа на действие лазерного излучения в эксперименте позволит не только выявить оптимальные параметры действия лазеров, но и установить пороговые значения, наиболее эффективные для локального и системного воздействия [4,18,42,124,126,130].

В связи с выявленными предпосылками, изучение влияния лазерного излучения на функциональное состояние иммунной системы является важным аспектом, требующим глубокого изучения с применением клинико-иммунологических и экспериментальных методов исследования, тем более что основные механизмы, посредством которых реализуется иммуномодулирующий эффект лазерного излучения находится в стадии изучения. Практически отсутствует адекватное экспериментальное обоснование применяемых доз воздействия [32,46,74,97]. Остаются неясными вопросы влияния лазера на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета при воспалительном процессе. Такое положение затрудняет развитие указанного направления иммунокоррекции и делает его достаточно актуальным для дальнейшего изучения. Указанные обстоятельства определили цель и направления настоящего исследования-на основании морфофункциональных, цитохимических, биохимических характеристик нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, цервикального секрета и факторов мукозального иммунитета оценить возможность применения лазеров низкой интенсивности для системной и местной иммунокоррекции данных факторов.

Для решения поставленной цели, необходимо первую очередь изучить в экспериментальной модели влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы, выделенные из периферической крови доноров [80,81]. Выбор донорских нейтрофилов в качестве клеток мишеней НИЛИ был обусловлен с одной стороны, их полифункциональной ролью в поддержании защитной реакции организма, а с другой, доступностью, и, в определённом смысле простотой исследования отдельных показателей их функциональной активности. В соответствии с первой поставленной задачей нами была исследованы функциональная активность нейтрофилов донорской крови при действии на них, в условиях in vitro, лазерного излучения с различными дозами излучения. Для получения максимально достоверной информации о влиянии НИЛИ на активность нейтрофилов мы изучили два вида лазерного излучения (постоянная и переменная генерацию импульса). Выбор НИЛИ, как источника излучения, не случаен, поскольку известно, что его энергия относительно невелика, недостаточна для отрицательного влияния на процессы электронного поглощения в клетке и, таким образом, не вызывает фототоксических эффектов [64,74,124].

Для проведения экспериментальных исследований был использован лазерный излучатель «Мустанг-2000». Использованием при проведении лазеротерапии матричной лазерной головки, имеющей 10 лазерных диодов, достигнуто интенсивное воздействие на взвесь клеток по типу «лазерного душа». В связи с этим, лазерный поток действовал на больший объём взвеси по сравнению с точечным излучателем [49-55].

В серии опытов, в аналогичных условиях выделенные из крови доноров нейтрофилы подвергали лазерному облучению с переменной и постоянной генерацией импульса. Глубина проникновения излучения составила до 30 мм, что позволило проводить облучение нейтрофилов в стандартной кювете со светопоглощающими стенками. Для проведения эксперимента нейтрофилы облучали при постоянной длине волны 0.63 мкм, поскольку по данным большинства исследователей работающей над проблемой НИЛИ именно длина волны 0.63 мкм соответствует на ионном уровне зоне адсорбции основных метаболитов НГ в световом спектре излучения лазера [32,64,91,97,104,124].

Мощность лазерного излучения, на уровне дна кюветы, измеренная с помощью дозиметра РбК-7101(«Анод», Россия), составила на выходе световода 1Вт, диаметр светового пятна световода 0,8 см. Рассчитанная из этих параметров возможная доза облучения лежала в интервале значений 0,0018-1,1 Дж/см" (разовая доза составила 0.0018 Дж/см , при проведении исследований доза кратно увеличивалась и составила от 0,0018 Дж/см" до 1,1 Дж/см"). Световое поле для облучения взвеси НГ конфигурировали таким образом, чтобы в любой точке зоны облучения значение отклонения плотности светового потока было не более чем на 10%, что обеспечивало практически одинаковые условия для равномерного облучения суспензии НГ. Равномерность распределения светового потока производили при помощи люксметра («Маз1есЬ» модель МБббЮ) в отн.ед (Люкс).

Для исследования влияния ЛО с переменной генерацией импульса были выбраны следующие частоты: 20 Гц, 100 Гц, 500Гц, 2500Гц, которые подбирали таким образом, чтобы обеспечить равные дозовые нагрузки при всех режимах воздействия при проведении эксперимента. В первой серии опытов изменяемым параметром стала частота импульса при постоянной длине волны 0,632 мкм и дозе излучения 0,018Дж/см Частота воздействия при импульсном режиме излучения составила 20, 100, 500, 2500 Гц. Время воздействия излучения во время проведения эксперимента 5-ти кратно увеличивалось-0,5 мин, 2,5 мин, 12,5 мин. Время воздействия НИЛИ на выделенные нейтрофилы выбрано с учетом анализа литературных данных по проблемам воздействия НИЛИ на клетки и отсутствия материалов о влиянии именно этих временных промежутков на функциональную активность нейтрофилов в условиях эксперимента [108,179,210,228,287].

При облучении суспензии нейтрофилов НИЛИ с частотой 20 Гц, 100Гц, мощности 0,018 Дж/см~, времени экспозиции 0,5 мин. -12,5 мин. мы отметили лишь тенденцию к изменению лизосомальной, бактерицидной и фагоцитарной активности нейтрофилов т.е. НГ не отвечают мгновенно воздействием НИЛИ с переменной генерацией импульса. Частоты 500Гц, 2500Гц приводят к незначительной активации НГ. Следующим этапом исследования была оценка функциональных возможностей НГ при облучении взвеси нейтрофилов ЛО с дозой 0,036 Дж/см~: при данной дозе облучения и частоте в 20 Гц активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов при действии НИЛИ с переменной генерацией импульса с дозой 0,036 Дж/см" достоверно увеличилась относительно значений необлучённых НГ. При повышении частоты следования импульса НИЛИ нами зарегистрированы достоверные изменения в значениях секреторной активности НГ. НГ являются клетками, содержащими большое количество биологически активных веществ [27,81,153]. Несмотря на то, что секреция нейтрофилами биологически активных гранул, является достаточно изученным процессом, он продолжает интересовать исследователей многих лабораторий в связи с феноменом многофункционального ответа клетки на изменение условий внешней среды. Одним из факторов, стимулирующих экзоцитоз нейтрофилов, является лазерное излучение низкой интенсивности [109]. Возможно, при действии лазера низкой интенсивности на первое место встаёт физиологический ответ нейтрофилов, выражающийся в выделении большого количества веществ, обладающих большой активностью коротко и длинно дистантного уровня [109,389]. С повышением частоты до 100Гц выявлено достоверное снижение секреторной активности, возможно, зарегистрированный нами процесс является следствием дегрануляции НГ под влиянием лазерного излучения низкой интенсивности [124]. ^

Доза облучения 0,072 Дж/см" при переменной генерации импульса и частоте 20Гц приводит к достоверному повышению спонтанной и индуцированной НСТ-редуцирующей активности нейтрофилов. Генерация активных форм кислорода является важной функцией фагоцитарных клеток. АФК образуются в результате активации клетки, которая сопровождается существенными функциональными и биохимическими перестройками. Нами зарегистрировано изменение активности по НСТ-тесту по сравнению в нейтрофилами, инкубированными в темноте. Максимальное значение спонтанного и индуцированного НСТ-теста зарегистрировано нами при времени воздействия 12,5 минут. ФРН при облучении НГ с дозой 0,072 Дж/см" с дозой имеет тенденцию к снижению по отношению к показателям НГ при облучении с дозой 0.036 Дж/см" Секреторная активность нейтрофилов, облучённых НИЛИ с переменной генерацией импульса при частотах от 20 до 2500 Гц постепенно понижалась. Максимальное изменение биоцидного потенциала и фагоцитарной активности НГ при данной дозе облучения зарегистрированы при времени экспозиции 12,5 мин.

Анализ функциональной активности НГ при облучении НИЛИ с переменной генерацией импульса дозой излучения ОД4 Дж/см2 показал дальнейшую тенденцию к снижению активности лизосом в процентах и показателей люминесценции лизосом в у.е. Оценка «респираторного взрыва нейтрофилов» показала, что лазерное облучение НГ с дозой 0,14 Дж/см2 приводило к значительному повышению результатов НСТ-теста. Этот показатель нарастал за счет повышения, как количества гранул восстановленного формазана в цитоплазме клеток, в результате чего повышался процент НГ, полностью, заполненных гранулами, так и общего числа формазан-позитивных клеток.

Одним из возможных объяснений зависимости эффекта бактерицидной и фагоцитарной активности нейтрофилов от интенсивности воздействия лазерного излучения может быть предположение о воздействии излучения с переменной генерацией импульса на периодические процессы, происходящие в НГ, что согласуется с гипотезами D. Lloyd, согласно которой все реакции и процессы в клетке признаются периодическими в зависимости от скорости протекания и периода. Периодический процесс, который потенциально способен реагировать на НИЛИ по данным D. Lloyd должен иметь частотные характеристики от 10 до 500 Гц с периодом От 100нс до 1с [179,371]

Следующей экспериментальной дозой было воздействие на НГ ЛО с переменной генерацией импульса с дозой 0,28 Дж/см и частотой облучения от 20Гц до 2500 Гц. Частотная характеристика 20Гц - 2500 Гц, на наш взгляд, важна по двум основным причинам. Во-первых, посредством подбора необходимой частоты можно регулировать величину средней выходной мощности лазерного излучения, а через неё, соответственно, и дозу воздействия. Во-вторых, частота излучения (особенно в области выбранных нами для проведения эксперимента "небольших" частот 20Гц - 500 Гц несёт информационную компоненту, которая может оказаться резонансной к частотам метаболитов, участвующих в процессах изменений функциональной активности НГ [140,158,179]. Излучение с частотой в 2500 Гц было использовано нами поскольку, по литературным данным, исследователи часто рассматривают его как квазинепрерывное, т.к. в этом диапазоне частот организм чувствителен только к энергетической составляющей лазерного воздействия [179]. При данных параметрах воздействия мы зарегистрировали зависимость между повышением бактерицидной, фагоцитарной, снижением лизосомальной активности НГ и увеличением времени экспозиции с 0.5 мин. до 12.5 мин.

Доза излучения в 0,56 Дж/см~ стала в наших экспериментальных исследованиях лимитирующей, т.е. при данной дозе и частоте в 100 Гц времени экспозиции 12,5 мин, мы зарегистрировали максимальное усиление функциональной активности НГ доноров (бактерицидной и фагоцитарной). Воздействие на взвесь НГ с частотой 2500 Гц и времени экспозиции 0,5 мин., 2,5 мин. 12,5 мин. приводило к достоверному снижению активности и интенсивности фагоцитоза, угнетению внутриклеточной бактерицидности нейтрофилов, что позволяет считать параметры-дозу 0.56 Дж/см частоту 500Гц и 2500Гц началом фазы депрессивных функциональных способностей НГ, под действием НИЛИ.

Анализ проведённых исследований показал обратно пропорциональную зависимость изменения функциональных свойств ГН, облучённых лазером низкой интенсивности с переменной генерацией импульса в зависимости от частоты излучения. Нами было выявлено, что при постоянной длине волны 0.63 мкм, мощности 0,56 Дж/см увеличение частоты свыше 100Гц приводит к снижению показателей, характеризующих фагоцитарную и бактерицидную активность НГ. Дальнейшее увеличение частоты до 2500 Гц приводило к угнетению эффекторных возможностей НГ. Зарегистрированное нами снижение функциональной активности НГ при увеличении частоты мы можем обосновать с точки зрения известного для неионизирующего излучения феномена «энергетических» или «частотных» окон, в пределах которых наблюдаются биотропные эффекты лазерного излучения [178].

Доза излучения 1,1 Дж/см приводила к снижению функциональной активности НГ, а воздействие с частотой 500Гц 2500Гц выявило резкое снижение бактерицидной и фагоцитарной активности НГ, вплоть до их полной депрессии, возможно связанного с энергетическим перенасыщением нейтрофила. Усиление дозы излучения в 2 раза до 1,1 Дж/см показало дальнейшее снижение функциональных возможностей НГ.

В экспериментальной модели выявлено преимущественно стимулирующее влияние лазеров низкой интенсивности с длиной волны 0.63 нм, частотой 100 Гц, частотой следования импульса 100 не и дозой

•у воздействия 0,56Дж/см~ при переменной генерации импульса на кислородозависимую микробоцидную систему и фагоцитарную активность НГ. Выявленные нами иммуностимулирующие эффекты ЛО с переменной генерацией импульса, вероятно, можно объяснить непосредственным влиянием квантов света на НГ, приводящим к развитию качественно новых биохимических процессов, обусловленных изменениями со стороны внутриклеточных образований и проницаемости клеточных мембран. Это ведёт к увеличению активности транспорта кислорода и биологически активных веществ в иммуноциты через мембраны и усилению основных биоэнергетических процессов [329, 371].

Таким образом, использование импульсного режима НИЛИ позволяет создать более эффективные и оптимальные условия для лазерного воздействия' за счет высокой концентрации световой энергии в импульсе, что в практическом плане может приводить к хорошему терапевтическому эффекту при меньших дозах воздействия на организм.

Поскольку наряду с НИЛИ с переменной генерацией для решения задач клинической и экспериментальной биологии используются излучения с постоянной генерацией импульса, второй задачей исследования было изучение влияния дозы излучения, времени экспозиции низкоэнергетического лазерного излучения с постоянной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов донорской крови. Низкоинтенсивное лазерное излучение с постоянной генерацией импульса является одним из видов воздействия и активации нейтрофилов. По мнению С.В.Москвина данный вид излучения обладает не менее высокой селективностью действия на биологические объекты, чем НИЛИ с переменной генерацией импульса [179]. Условия выделения нейтрофилов и дизайн проведения эксперимента были аналогичны модели, использованной нами при исследовании влияния лазерного излучения с переменной генерацией импульса на функциональную активность нейтрофилов крови доноров. Для этого нами были проанализированы следующие показатели: лизосомальная активность, спонтанный и индуцированный НСТ-тест, функциональный резерв, активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов.

Анализ in vitro различных параметров ЛО с постоянной генерацией импульса позволил выявить оптимальную дозу, при которой зарегистрирована максимальная функциональная активность НГ. Такими параметрами являются доза излучения 1,1 Дж/см", время экспозиции 12,5мин (20-кратное увеличение времени экспозиции).

При изучении влияния НИЛИ с постоянной генерацией импульса на функциональную активность фагоцитирующих клеток мы выявили одинаковую направленность изменения показателей, в сторону усиления функциональной активности НГ, при действии постоянного и переменного режимов излучения лазера. Результаты наших исследований коррелируют с известным в лазерной медицине мнением, что излучение кванта света на разных режимах излучения имеет сходное биостимулирующее действие, т. е истинная природа фотоакцепторов квантов света оказывается не имеющей решающего значения, ибо их количество и многообразие вполне может уравнивать (усреднять) вторичные эффекты [74,90,111,133].

Анализируя полученные результаты, мы пришли к заключению о том, что при импульсном' режиме излучения доза необходимая для максимальной л активации клетки

0,056Дж/см ) снижается по отношению к дозе, позволяющей достичь аналогичного эффекта при ЛО с постоянной генерацией импульса (1,1 Дж/см~).Таким образом при использовании импульсных полупроводниковых лазеров биоэффективные дозы оказались вдвое ниже, чем при воздействии непрерывным излучением. Возможная причина состоит в том, что импульсное лазерное излучение действует на организм как триггер, запуская те реакции и процессы, которые направлены на нормализацию утраченных функций клетки. Особенность импульсного излучения исключает возможность передозировки и возможного получения негативных биологических реакций. Уникальной возможностью НИЛИ является возможность резонансного взаимодействия с эндогенным электромагнитным излучением биологического объекта. При совпадении частоты проводимого облучения с частотой вращения молекул возможна перекачка энергии излучения в молекуле, сопровождающаяся увеличением её вращательной кинетической энергии, влияющей на её реакционную способность.

При проведении исследований по действию НИЛИ на НГ in vitro наиболее значительные изменения были зарегистрированы нами при анализе влияния НИЛИ как с переменной, так и с постоянной генерацией импульса на процессы внутриклеточной бактерицидности НГ. Можно предположить, что данный процесс связан со стимуляцией локализованных в гранулах цитоплазмы НГ ферментов гексозомонофосфатного шунта, в частности НАДФН -оксидазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы или иных энзимов, отвечающих за редукцию НСТ. Кроме того, это обстоятельство может свидетельствовать и об изменении функциональной активности мембранного аппарата НГ под действием НИЛИ.

Для изучения правильности нашего предположения проведено измерение активности НАДФН-оксидазы нейтрофилов. Результаты исследований подтверждают наше предположение о том, что НИЛИ стимулирует выработку локализованных в гранулах цитоплазмы НГ фермента НАДФН -оксидазы, поскольку зарегистрированное усиление на 21% выработки НАДФН -оксидазы, достоверно более выражено при облучении взвеси НГ с переменной генерацией импульса

Для решения следующей задачи была изучена динамика содержания рецепторов CD95 на НГ являющихся маркером апоптотических процессов в

НГ под действием НИЛИ с постоянной и переменной генерацией импульса, исследована продолжительность жизни НГ, поскольку, по мнению ряда авторов [114,116,124,178] воздействие НИЛИ могло приводить к изменению рецепторный аппарат НГ [163]. Интерес к проблеме программируемой гибели нейтрофилов вызван тем, что исследование апоптотических возможностей фагоцитов и направленная регуляция апоптоза под действием НИЛИ может рассматриваться как возможный терапевтический подход для коррекции ряда заболеваний, причиной которых может быть антиапоптотическое действие патогенов, в том числе внутриклеточных патогенов [385].

С целью выяснения закономерностей и особенностей воздействия лазеров низкой интенсивности на процесс клеточной гибели НГ было проведено исследование in vitro действия НИЛИ на нейтрофилы, выделенные из периферической крови. Данные экспериментальных исследований позволили нам выбрать дозу излучения, при которой функциональная активность нейтрофилов периферической крови доноров максимальна. Для проведения исследования апоптотических потенций нейтрофилов нами выбраны следующие параметры НИЛИ: доза излучения 0,56 Дж/см2, частота 100 Гц, время экспозиции 12,5 минуты, генерация излучения- импульсная.

Процессы апоптоза выделенных нейтрофилов изучали с помощью люминесцентной микроскопии, после окраски этидий бромидом и акридиновым оранжевым. Для этого взвесь клеток с неактивированными и активированными нейтрофилами окрашивали этими красителями [374]. Учет результатов проводили с помощью люминесцентной микроскопии, по диферинцированному окрашиванию жизнеспособных, апоптозных и погибших клеток [322, 374]. Одновременно с окраской этидий бромидом и акридиновым оранжевым использовался метод определения поверхностных рецепторов апоптоза CD 95+ на нейтрофилах донорской крови. При изучении клеточной гибели нейтрофилов, было решено оценить этот процесс сразу после выделения и через 30 минут инкубации в термостате, с последующей активацией нейтрофилов НИЛИ.

В процессе исследования было обнаружено, что в диапазоне от 0.018 гу гу

Дж/см" до 0,28 Дж/см при действии как непрерывного так и импульсного режимов излучения происходит индукция апоптоза исследуемых клеток. При дальнейшем увеличении дозы облучения (до 0,56 Дж/см ) процент апоптозных клеток не увеличивается. Доля живых нейтрофилов в этом диапазоне доз изменялась незначительно (96-98%). Культивируемые нейтрофилы, не облучённые НИЛИ, погибали медленнее, чем нейтрофилы, подвергшиеся воздействию лазера низкой интенсивности. Увеличение дозы НИЛИ приводит к более быстрой гибели этих клеток, по сравнению с контролем (р<0.003). Характер дозовой зависимости апоптоза при действии НИЛИ с постоянной генерацией импульса близок к изменениям показателей апоптоза НГ при действии ни них НИЛИ с переменной генерацией импульса. Необходимо учесть, что изменения апоптотических потенций НГ при их стимуляции НИЛИ с переменной генерацией импульса выражены более отчётливо при этом показатели апоптоза достоверно ниже, чем при облучении суспензии НГ НИЛИ с постоянной генерацией импульса.

Нейтрофилы могут реализовать свой эффекторный потенциал в качестве секретирующих клеток, способных выделять биологически активные продукты, реализуя своё иммнорегуляторное влияние на систему общего иммунитета [80,81,105,160,190,270]. Доказано, что функциональные возможности нейтрофилов раскрываются при их стимуляции [186,189]. С учётом поставленной задачи нас интересовала секреторная функция фагоцитов, активированных низкоинтенсивным лазерным излучением с последующим изучением биохимического, цитокинового состава супернатантов нейтрофилов. Литературные данные о процессе дегрануляционных возможностей НГ определили дальнейшее направление нашего исследования Нам представлялось интересным детально разобраться в действии энергии лазерного излучения на этот процесс, поскольку нейтрофил, активизируясь энергией лазерного излучения, мобилизует содержимое гранул, секретируя его в эндоцитозные вакуоли или наружу, в окружающую среду [124,270], проявляя при этом свой бактерицидный потенциал [80,81].

Было изучено влияние уровня Са2+ на процесс дегрануляции лизосомальных гранул НГ под действием лазера низкой интенсивности. Изучение этого процесса обусловлено недостаточностью и противоречивостью информации по исследуемой проблеме. За гипотезу мы приняли предположение А.И. Козеля, Г.К. Попова [124, 227] о том, что процесс дегрануляции нейтрофильных гранулоцитов связан с взаимодействием кальция с актиновой сетью НГ. Дизайн проведения эксперимента по выделению и облучению НГ in vitro аналогичен модели, разработанной нами для проведения исследований по изучению функциональной активности нейтрофилов.

Для выяснения вопроса о возможности влияния на процесс дегрануляции НГ при действии низкоэнергетического облучения активации Са каналов мы использовали блокатор Са каналов из группы фенилалкиламинов-верапамил (фенилалкиламин, гидрохлорида-изопропил[(К-метил-1Ч-гомовератрил)-у-аминопропил)]-3,4-диметоксифенил-ацетонитрила) [124]. Верапамил вносили в суспензию выделенных из крови доноров НГ в концентрации 1,5 х 105 мМоль/л, что составило 40мг верапамила (разовая доза) на 1 мл взвеси нейтрофилов. В этих условиях лазерное облучение суспензии НГ уже не вызывало дегрануляции нейтрофилов. Концентрация верапамила была выбрана с учетом ранее проведенных работ А.И.Козеля, Г.К. Попова [124] с использованием данного соединения по изучению Са -зависимых процессов в фагоцитах при действии лазера низкой интенсивности. Лазерное излучение при концентрации верапамила 1,5 х 105 мМоль/л не вызывало достоверного скачка дегрануляции нейтрофилов и выброса лизосомальных гранул, соответственно (р>0.003, р=0,87) При рассмотрении полученных эффектов у нас возникло предположение, состоящее в том, что решающим фактором в процессах выброса НГ лизосомальных гранул, содержащих биологически активные вещества с широким спектром бактерицидного действия является приток Са2+ в клетку, поскольку эксперимент с блокированием Са2+ каналов приводит к полной остановке процессов дегрануляции, независимо от кратности воздействия лазером низкой интенсивности. Таким образом, возможный путь реализации эффектов низкоэнергетического лазера, на процессы усиления секреторной активности НГ, может быть инициирован через активацию кальциевых каналов клеточной мембраны данных клеток Результаты наших исследований позволяют высказать следующее предположение: Использование I блокатора Са каналов фенилалкиламина - верапамила перед ЛО суспензии НГ блокирует эффект усиления экзоцитоза лизосомальных гранул, что выявляет важную роль Са каналов в акцепции энергии лазерного излучения, и процессов дегрануляции НГ.

Анализ экспериментальных данных позволяет предположить следующий вариант развития событий: под действием изменения содержания ионизированного кальция в НГ изменяется структура белка актина, присутствие которого является необходимым условием для экзоцитоза лизосом в межклеточное пространство. Верапамил блокирует кальциевые каналы, и выброса лизосомальных гранул не происходит. По нашему мнению, период задержки дегрануляции лизосомальных гранул необходим для активации биохимических процессов, происходящих в НГ при воздействии НИЛИ, например активации инозитит - специфичной фосфодиэстеразы, что, возможно, приводит к генерации иннозитолтрифосфата и диацилглицерола, активации протеинкиназы С. Вышеперечисленные биохимические процессы, по данным Н. ОЬззтап, ВХ)., вотреЛБ, М. МкБипоЫ, М. Кепр, I. 81;пез1гщ, У. Таэака и др. исследователей [282,288,291,305,315] приводят к перераспределению и полимеризации актина, окружающего гранулы, т.е. напрямую влияют на процесс дегрануляции лизосомальных гранул [300,302,303,306].

В соответствии с задачей исследования было изучено содержание ИЛ-1а, ИЛ-1Р, ИЛ-8, ФНО-а в супернатантах не активированных и активированных лазером нейтрофилов. Получение супернатантов нейтрофилов проводилось согласно методике разработанной коллективом сотрудников ЧелГМА Росздрава г. Челябинска под руководством профессора И.И. Долгушина [81].

Анализируя содержание ИЛ-1а в супернатантах активированных НИЛИ с постоянной и переменной генерацией импульса, мы не обнаружили достоверных различий в содержании этого цитокина в исследуемых супернатантах до и после облучения (Р>0.003, р=0,37). Оценка содержания ИЛ-1Р,ИЛ-8, ФНО-а в исследуемых супернатантах НГ выявила достоверное увеличение уровня ИЛ-1 (3,ИЛ-8, ФНО-а по сравнению с содержанием цитокинов в супернатантах не активированных (интактных) НГ, причём при облучении НИЛИ с переменной генерацией импульса их содержание было достоверно выше Р<0.003, р=0.00011. Исследование одного из ключевых медиаторов воспаления ФНО-а показало повышение этого цитокина в супернатантах после облучения НГ НИЛИ с постоянной и/или переменной генерацией импульса. Повышение содержание ФНО-а в супернатантах активированных ЛО с постоянной генерацией импульса происходит быстрее по сравнению с содержанием исследуемого цитокина к супернатантах интактных НГ и в 3 раза выше в супернатантах НГ, облучённых лазером с переменной генерацией импульса.

Полученные результаты свидетельствуют о способности НИЛИ активировать системы нейтрофильного гранулоцита и способствовать выработке ими ряда цитокинов, обладающих иммуностимулирующими свойствами. В целом же способность активированных НГ к продукции цитокинов позволяет считать его регуляторной клеткой — своеобразной «одноклеточной железой», секретирующей высоко и низкомолекулярные пептиды, участвующие в каскадной сети регуляций многих процессов в организме. Следующим этапом нашего исследования было дальнейшее изучение биологически активных веществ - дефенсинов и бактерицидного белка ВР1.

Результаты проведённых исследований подтверждают данные литературы об инициации НИЛИ процессов выработки дефензинов и ВР1 [80,81] В супернатантах интактных НГ уровень дефензинов составил 44,7±9,05 пг/мл, после воздействия на НГ лазерным излучением с постоянной генерацией импульса отмечен достоверный рост их содержания до 47,8±5,05 пг/мл (р.=0.0001, р.<0.003).Воздействие на НГ лазерным излучением с переменным импульсом мы зарегистрировали рост ВР1 в 1,5 раза по сравнению с содержанием дефензинов в супернатантах интактных НГ.

Анализ содержания белка ВР1 показал тенденцию к снижению его продукции при действии НИЛИ с постоянной генерацией импульса 5,95±2,02 пг/мл (р=0.003) и достоверное его повышение при действии НИЛИ с переменной генерацией импульса 9,98±3,03 пег/мл (р<0.003).Увеличение содержания ВР1 в супернатантах НГ, который способен связываться с липополисахаридами и оказывать бактерицидное действие, возможно, также приводит к усилению бактерицидного потенциала нейтрофилов, зарегистрированного нами при проведении исследования.

НИЛИ активирует кислородзависимые бактерицидные механизмы НГ [80,81] среди которых важную роль играют продукты метаболизма азота N0 в частности пероксинитрит. Оксид азота (N0) - медиатор внутриклеточного и межклеточного взаимодействия. Эндогенный N0 существует и непрерывно синтезируется в клетках ферментативным путём, и, нейтрофилы относятся к одним из основных его продуцентов. Биологические эффекты оксида азота заключаются в его защитном действии, проявляющихся в его антиоксидантной активности, ингибировании адгезии лейкоцитов и защите от токсического действия ФНО-а, индукции процессов перекисного окисления липидов

285,293,301]. Важным представляется тот факт, что длина волны терапевтического лазера 632 мкм относится к тому диапазону волн, в котором находятся спектры поглощения и излучения различных клеточных метаболитов, в том числе и N0 [109,117,133].

Была проведена оценка концентрации продуктов метаболизма оксида азота (N0), в супернатантах нейтрофилов как интактных, так активированных НИЛИ с постоянной и переменной генерацией импульса. Содержание метаболитов азота в супернатантах облучённых лазером нейтрофилов увеличилось в 3,7 раза по сравнению с содержанием продуктов метаболизма азота с супернатантах интактных НГ. На 50% увеличилось содержание нитратов и нитритов в супернатантах по отношению к контрольным значениям. В супернатантах нейтрофилов активированных лазером низкой интенсивности с переменной генерацией импульса была зарегистрирована достоверно более высокая концентрация конечных продуктов метаболизма N0 чем в супернатантах нейтрофилов, активированных НИЛИ с постоянной генерацией импульса.

Повышение содержания N0 в супернатантах (нитратов в 2 раза, нитритов в 3 раза, общего содержание метаболитов оксида азота в 3 раза, возможно, является следствием активации метаболических процессов в НГ. Возможно, повышение содержания N0 при воздействии НИЛИ происходит за счёт усиления окислительно-восстановительных процессов, в том числе ускорения реакции окисления аргинина ферментом Ж)-синтазой, результатом которой и является образование оксида азота. Выделяющийся в межклеточное пространство N0 является реакционно-способным соединением с широким спектром биологического, в том числе бактерицидного действия, которое становится возможным, благодаря наличию одного электрона с неспаренным спином. После оценки содержания метаболитов азота представляло интерес изучить содержание глюкозы и макроэлементов в составе исследуемых супернатантов НГ.

При изучении содержания глюкозы в супернатантах неактивированных и активированных нейтрофилов доноров было отмечено, что в ответ на стимуляцию гранулоцитов лазером низкой интенсивности уровень глюкозы достоверно снижается (р<0.003, р=0.00023) с 4,25 до 2,05 мкмоль/л. Возможно, расход глюкозы, являющейся ключевым метаболитом огромного количества биохимических процессов, происходит вследствие повышения энергетических затрат клетки при её стимуляции лазерным излучением, т.к. именно глюкоза является источником энергии клеток. Активация нейтрофилов лазером низкой интенсивности с постоянной генерацией импульса выявила рост уровня секреции ионов кальция в супернатантах нейтрофилов более чем в 3 раза по сравнению с неактивированными нейтрофилами доноров.

Увеличение концентрации ионов Са в супернатантах стимулированных НИЛИ НГ, возможно, является следствием, быстрого выхода под влиянием НИЛИ из органел- кальциосом в цитозоль большого количества ионов Са" . Таким образом, активация нейтрофилов НИЛИ приводит к секреторной дегрануляции, и повышением содержания

Са в супернатантах. Исследование содержания ионов в исследуемых супернатантах показало, что после активации гранулоцитов НИЛИ происходит достоверное снижение уровня свободного магния; расходование этого иона, вероятно, идёт на процессы активации процессов метаболизма, а именно катаболизма в клетке. Изменения содержания М» 2+ при действии НИЛИ с постоянной и переменной генерацией импульса имели однонаправленные изменения, при этом снижение содержания ионов магния происходило интенсивнее в группе, где нейтрофилы активировали лазером с переменной генерацией импульса.

Изменения биохимического, цитокинового состава секреторных продуктов неактивированных и активированных лазером НГ доноров дало повод к изучению и анализу иммунологических и биохимических показателей периферической крови женщин с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидиями до и после воздействия внутрисосудистого лазерного облучения. Воспалительные заболевания урогенитального тракта, вызванные ИППП сопровождаются нарушениями не только местного, но и системного иммунитета [31,33,67,71,85]. Возникающая при этом функционально структурная недостаточность происходит в том случае, когда патологический вариант регуляторного ответа на патоген становится устойчивым и, более того, его подкрепляет определённый морфологический компонент. Как правило, уже наблюдаются фенотипические сдвиги на уровне популяций фагоцитов и мононуклеаров, и обязательно формируется дисбаланс системы иммунореактивности за счёт факторов естественной резистентности. Организм пытается компенсировать недостаток «выпавших» функций, используя факторы той или иной биологической специализации. В этом случае, как правило, возникают нарушения клеточного метаболизма, рушатся процессы, обеспечивающие бактерицидность НГ [80,118,157].

Результаты проведённых нами исследований показывали, что НИЛИ обладает эффективным иммуномодулирующим действием in vitro, в основе которого лежит влияние на клетки и ткани квантового излучения. Поэтому следующим этапом наших исследований стало изучение воздействия лазерного излучения на факторы системного иммунитета, состояние нитроксидергической системы периферической крови при проведении внутривенного лазерного облучения крови (ВЛОК) женщинам с воспалительными заболеваниям нижнего отдела урогенитального тракта.

Для проведения исследования были сформированы группы; здоровые женщины (без соматической патологии и заболеваний урогенитального тракта), женщины без соматической патологии с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными только хламидиями, женщины без соматической патологии с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидиями и микоплазмами.

В соответствии с задачами исследования был проведен сравнительный анализ клеточных и гуморальных компонентов системы противоинфекционной защиты крови женщин с хламидийной инфекцией. Анализ содержания количества нейтрофилов в периферической крови женщин при внутривенном лазерном излучении выявил их достоверное повышение по отношению к группе женщин до лечения. Относительное количество нейтрофилов оказалось одинаковым в группе здоровых и больных женщин, тогда как абсолютное количество этих клеток было существенно меньше у больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями урогенитального тракта, вызванными ХИ. Следует отметить, что данные изменения не выходят за границы региональных норм показателей периферической крови у женщин [235] и результатов других исследователей.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Гизингер, Оксана Анатольевна

1. Айламазян, Э.К. Современное состояние проблемы перинатальных инфекций / Э.К. Айламазян // Вестн. Рос. ассоц. акушеров-гинекологов. 1995. - № 2. - С. 3-11.

2. Акопян, Т.Э. Бактериальный вагиноз и беременность / Т.Э. Акопян// Акушерство и гинекология. 1996. — № 6. — С. 3-5.

3. Александрова, О.Ю. организация работы физиотерапевтических отделений (лазерная терапия). Основные нормативные документы / О.Ю. Александрова. -М.: Техника, 2003.

4. Аленов, С.Н. Иммунологические аспекты применения полиоксидония в комплексной терапии осложненного урогенитального хламидиоза / С.Н. Аленов, О.Л. Иванов, K.M. Ломоносов и др. // Рос. журн. кож. и венерич. болезней. 2002. - № 3. - С. 58-61.

5. Анкирская, A.C. Бактериальный вагиноз / A.C. Анкирская // Акушерство и гинекология. — 1995. № 6. - С. 13-16.

6. Анкирская, A.C. Проблемы хронической (персистирующей) хламидийной инфекции / A.C. Анкирская // Акушерство и гинекология. 1999. - № 3. — С. 810.

7. Анчупане, И.С. Урогенитальный трихомониаз и смешанные трахомонадно-гонококко-хламидийные инфекции: дис. . канд. мед. наук / И.С. Анчупане. -М., 1992.- 133 с.

8. Аппарат лазерной терапии «Мотылёк»: руководство по применению. — М., 2000.

9. Аппарат лазерной терапии «Мулат»: руководство по применению. — М., 2001.

10. Аппарат лазерной терапии «Муравей»: руководство по применению. М., 2001.

11. Аппарат лазерной терапии «Мустанг»: руководство по применению. М., 2001.

12. Артюхов, В.Г. Влияние УФ-облучения на функциональную активность нейтрофилов крови доноров / В.Г.Артюхов, А.Ю. Искусных, О.В. Башарина и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2005. — Т. 139, № 3. — С. 291-293.

13. Бабич, П.Н. Применение современных статистических методов в практике клинических исследований / П.Н.Бабич, A.B. Чубенко, С.Н. Лопач // Укр. мед. часопис. 2003. - № 4. - С. 36.

14. Баев, O.P. Резидентная флора генитального тракта и этиология инфекционных осложнений беременности и послеродового периода: обзор / O.P. Баев, А.Н. Стрижаков // Акушерство и гинекология. 1997. — № 6. - С. 3-7.

15. Бакулев, А.Л. О клинической классификации болезни Рейтера / А.Л. Бакулев, H.A. Слесаренко // Рос. журн. кож. и венерич. болезней. — 2002. № 2. - С. 66-68.

16. Барабаш, Р.Д. Ферментативные механизмы антимикробной защиты ротовой полости / Р.Д. Барабаш, А.П. Левицкий // Вопр. мед. химии. — 1978. — Т. 24, № З.-С. 291-310.

17. Баранов, В.Н. К механизму действия низкоэнергетических лазеров на хронический воспалительный процесс в придатках матки / В.Н. Баранов // Тезисы Международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья 98». -Тюмень, 1998.-С. 335.

18. Баранов, В.Н. Лечебно-диагностическое устройство для биоуправляемой и биосинхронизированной лазерной терапии: свидетельство РФ на полезную модель № 10095 / В.Н. Баранов. опубл. 16.06.99, Бюл. № 6.

19. Баранов, В.Н. Низкоэнергетические лазеры в рефлексотерапии хронических сальпингоофоритов / В.Н. Баранов. — Челябинск : Иероглиф, 2000. — 105 с.

20. Бартенева, Н.С. Вопросы иммунитета при хламидийных инфекциях / Н.С. Бартенева // Хламидийные инфекции: сб. науч. тр. / под ред. A.A. Шаткина. — М., 1986.-С. 14-20.

21. Барышников, А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. М., 2002. - 318 с.

22. Батыршина, C.B. Диагностика хламидийной инфекции у пациенток, страдающих воспалительными заболеваниями ургогенитального тракта: метод, рекомендации / C.B. Батыршина, В.А. Аковбян, И.П. Евстигнеева, И.В. Щербакова. Екатеринбург, 2000. - 22 с.

23. Башмакова, М.А. Инфекция и бактериальная колонизация урогениталий у беременных, влияние на течение беременности, плод и новорожденного ребенка / М.А. Башмакова, Н.К. Кошелева, Е.П. Калашникова // Акушерство и гинекология. 1995.-№ 1.-С. 15-18.

24. Беледа, Р.В. Лазеротерапия половых расстройств / Р.В. Беледа, В.Г. Тактаров. М., 2003.

25. Беляков, И.М. Иммунная система слизистых / И.М. Беляков // Иммунология. 1997. - № 4. - С. 7-13.

26. Бережная, Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз / И.М. Бережная. Киев : Наук, думка, 1988. — 192 с.

27. Блинников, И.Ю. Локомоторная функция фагоцитов у часто болеющих детей / И.Ю. Блинников, А.П. Корчагина // Тезисы докладов 1-го Съезда иммунологов России. — М., 1992. — С. 51.

28. Бодяжина, В.И. Хронические неспецифические воспалительные заболевания женских половых органов / В.И. Бодяжина. — М., 1978.

29. Бодяжина, В.И. Диагностика и лечение гинекологических заболеваний в женской консультации / В.И. Бодяжина, Л.Н. Василевская, Н.М. Побединский и др. М. : Медицина, 1980. - 285 с.

30. Болтович, A.B. Урогенитальный хламидиоз у женщин: метод, пособие / A.B. Болтович, Л.Ф. Чернецова, Н.В. Ермаков, О.В. Липская. — Тюмень, 1999. 44 с.

31. Борисенко, К.К. Современные итоги и некоторые проблемы лечения урогенитальных хламидиозов / К.К. Борисенко, М.Б. Алиев // Тезисы докладов Сибирской научно-практической конференции дерматовенерологов. — Новосибирск, 1998. С. 3-4.

32. Боровиков, В.П. Популярное введение в программу Statistica / В.П. Боровиков. М. : Компьютер Пресс, 1998. - 267 с.

33. Брагина, Е.Е. Патогенетическое обоснование корригирующей терапии больных хламидийно-трихомонадной инфекцией / Е.Е. Брагина, Д.П. Андерсоне, А.П. Милтиньш // 9-й Всесоюзный съезд дерматовенерологов. М., 1991.-С. 6-7.

34. Брагина, Е.Е. Структурно функциональные особенности жизненного цикла хламидий in vivo / Е.Е. Брагина, O.E. Орлова, Г.А. Дмитриев // Вестн. дерматологии и венерологии. — 1995. -№ 6. С. 18-21.

35. Брагина, Е.Е. Некоторые особенности жизненного цикла хламидий: атипичные формы существования / Е.Е. Брагина, O.E. Орлова, Г.А. Дмитриев // Заболевания, передаваемые половым путем. 1998. — № 1. — С. 3-6.

36. Брагина, Е.Е. Структурно-функциональные особенности жизненного цикла хламидий. Атипичные формы существования / Е.Е. Брагина, Г.А. Дмитриев, В.И. Кисина // Заболевания, передаваемые половым путем. 1998. — № 1. — С. 3-9.

37. Брискин, Б.С. Иммунные и ферментные нарушения у больных острым панкреатитом / Б.С. Брискин, Г.А. Яровая, З.И. Савченко и др. // Хирургия. — 2001.-№7.-С. 21-24.

38. Бугрова, О.Г. Иммунологическая характеристика варианта острого течения урогенитального монохламидиоза / О.Г. Бугрова, Е.Ф. Кира, A.M. Савичева // Журн. акушерства и жен. болезней. — 1999. — № 4. — С. 21-25.

39. Буйлин, В.А. Низкоинтенсивные лазеры в терапии фригидности / В.А. Буйлин. -М. : Техника, 1999.

40. Буйлин, В.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия заболеваний суставов: информ. -метод, сб. / В.А. Буйлин; под ред. О. К. Скобелкина. 3-е изд. - M : Техника, 2000. - 35 с. - (В помощь практическому врачу. Лазерная терапия).

41. Буйлин, В.А. Применение полупроводниковых терапевтических лазеров в лечении и профилактике последствий поражения ионизирующей радиацией: информ.-метод. сб. / В. А. Буйлин. М. : Техника, 2001. - 24 с. - (В помощь практическому врачу. Лазерная терапия).

42. Буйлин, В.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия в оториноларингологии: информ.-метод. сб. / В.А. Буйлин, А.Н. Наседкин. M : Техника, 2003. — 73 с. — (В помощь практическому врачу. Лазерная терапия).

43. Буйлин, В.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия табакокурения (табакизма): информ.-метод. сб. / В.А. Буйлин. 2-е изд. - М. : Техника, 2000. -44 с. - (В помощь практическому врачу. Лазерная терапия).

44. Буйлин, В.А. Низкоинтенсивные лазеры в терапии различных заболеваний / В.А. Буйлин, C.B. Москвин. -М., 2003.

45. Буйлин, В.А. Лазерная рефлексотерапия / В.А. Буйлин. М. : Техника, 2002.

46. Буйлин, В.А. Применение АЛТ «Мустанг» в комплексной терапии остеохондроза / В.А. Буйлин. М. : Техника, 2002.

47. Буйлин, В.А. Низкоинтенсивные лазеры в терапии различных заболеваний / В. А. Буйлин, С. В. Москвин. М. : Триада, 2005. - 173 с.

48. Бурова, A.A. Основные свойства возбудителя хламидиоза и его роль в развитии инфекции урогенитального тракта / A.A. Бурова, С.А. Абдуллаева, E.H. Торганова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1999.-№4.-С. 107.

49. Бухарин, О.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев. Томск, 1994. - 209 с.

50. Вавилова, Л.М. Диагностическое значение определения компонентов комплемента у детей с аутоиммунным тиреоидитом / Л.М. Вавилова, М.Р. Горгеладзе, Л.В. Козлов // Педиатрия. 1987. - № 3. - С. 25-29.

51. Ванько, Л.В. Фактор некроза опухоли в иммунологии репродукции / Л.В. Ванько, Г.Т. Сухих // Акушерство и гинекология. 1993. - № 4. — С. 9—14.

52. Василенко, A.M. Цитокины в сочетанной регуляции боли и иммунитета / A.M. Василенко, Л.А. Захарова // Успехи соврем, биологии. 2000. - № 5. - С. 11-17.

53. Васильев, А.П. Клинический эффект низкоинтенсивного лазерного излучения как результат формирования адаптации организма / А.П. Васильев, H.H. Стрельцова, М.А. Секисова // Вопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. физкультуры. 1999. — № 4. — С. 49-51.

54. Васильева, Г.И. Кооперативное взаимодействие моно- и полинуклеарных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами / Г.И. Васильева, И.А. Иванова, С.Ю. Тюкавкина // Иммунология. 2000. - № 5. - С. 11-17.

55. Вашурина, Т.В. Цитокины и адгезивные молекулы в патогенезе хронического гломерулонефрита / Т.В. Батурина, Т.В. Сергеева // Нефрология и диализ. 2002. - № 3. - С.27-30.

56. Владимиров, Ю.А. / Ю. А. Владимиров, В. И. Оленев Т Суслова // ВИНИТИ. Итоги науки и техники / под ред. Ю А. Владимирова М. 1988. - Т. 4, Ч. 2. - С.63-66. - (Сер. Биофизика).

57. Волков, C.JI. Клинико-иммунологическая характеристика женщин с внутриутробной инфекции плода и новорожденного: дис. . канд. мед. наук / С.Л. Волков. Челябинск, 1999. - 142 с.

58. Глазкова, Л.К. Генитальная хламидийная инфекция: Этиология, эпидемиология, патогенез, диагностика, клиника и терапия: руководство для врачей / Л.К. Глазкова, B.C. Полканов, Н.М. Герасимова. Екатеринбург : Изд-во Урал. мед. ин-та, 1994. - 90 с.

59. Глазкова, Л.К. Современные аспекты лечения хламидийной инфекции / Л.К. Глазкова, Н.М. Герасимова // Заболевания, передаваемые половым путем. — 1996. -№ 4. С 9-11.

60. Глазкова Л.К. Урогенитальная хламидийная инфекция / Л.К. Глазкова, Н.М. Герасимова. — Екатеринбург : Изд-во Урал. гос. мед. акад., 1997. — 74 с.

61. Гланц, С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ. / С. Гланц. — М. : Практика, 1999. 460 с.

62. Говалло, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло. — М. : Медицина, 1987.-304 с.

63. Гомберг, М.А. Совершенствование диагностики урогенитального хламидиоза: автореф. дис. . канд. мед. наук/М.А. Гомберг. — М., 1989.

64. Гомберг, М.А. Иммунотерапия при хроническом персистирующем урогенитальном хламидиозе / М.А. Гомберг, A.M. Соловьев, A.B. Некрасов и др. // Заболевания, передаваемые половым путем. — 1997. № 4. - С. 34-36.

65. Гомберг М.А., Соловьёв A.M. // Современное лечение урогенитальных инфекций. -М., 1999.-С. 1-8.

66. Гомберг, М.А. Обоснование иммунотерапии при лечении рецидивирующего урогенитального хламидиоза / А. Гомберг, A.M. Соловьёв, А.Д.Черноусов // Инфекции, передаваемые половым путем. — 2000. — № 2. — С.30-33.

67. Горяйнов, И.И. Функциональная активность лейкоцитов человека под влиянием инфракрасного лазерного облучения / И.И. Горяйнов, Л .В. Ковальчук, А.И. Конопля и др. // Иммунология. 1998. - № 2. - С. 32-34.

68. Делекторский, В.В. Лечение урогенитального хламидиоза эрициклином в сочетании с тималином и химотрипсином / В.В. Делекторский, A.A. Скуратович, A.A. Асранов // Вестн. Дерматологии и венерологии 1991- № 3. - С.54-56.

69. Дергачева, Т.И. Реактивность больных с неспецифическими воспалительными заболеваниями придатков матки: автореф. дис. . д-ра мед. наук / Т.И. Дергачева. Томск, 1991. - 47 с.

70. Дзержинская, И.И. Розеткообразующая способность нейтрофилов и Т-лимфоцитов у больных хронической почечной недостаточностью / И.И. Дзержинская // Иммунология. — 1982. № 1. — С. 64-66.

71. Долгушин, И.И. Дифференцированная коррекция местного иммунитета репродуктивного тракта с помощью лизоцима и иммуноглобулинов у беременных с генитальной инфекцией / И.И. Долгушин, В.Ф. Долгушина, Л.Ф.

72. Телешева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1997. № 4. - С. 111-115.

73. Долгушин, И.И. Участие нейтрофилов в регуляции воспалительно-репаративной реакции поврежденной ткани / И.И. Долгушин, A.B. Зурочка, A.B. Чукичев // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 14.

74. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин; УрО РАН. Екатеринбург, 2001.-258 с.

75. Дорофейчук, В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г. Дорофейчук // Лаб. дело. 1968. - № 11. - С. 28-30.

76. Дубенский, В.В. Патологическое значение иммунных нарушений в развитии осложненных урогенитальных инфекций и болезни Рейтера и их коррекция с помощью препаратов интерферона и цитокинов: автореф. дис. . д-ра мед. наук / В.В. Дубенский. -М., 1999. 38 с.

77. Илич-Стоянович, О. Влияние низкоинтенсивной инфракрасной импульсной лазерной терапии на маркеры активности воспаления у больных ревматоидным артритом / О. Илич-Стоянович, E.JI. Насонов, P.M. Балабанова // Терапевт, арх. -2000.-№5.-С. 32-34.

78. ИлЛарионов, В.Е. Лазерная терапия — механизмы действия и возможности / В.Е. Илларионов // Перспективные направления лазерной медицины: материалы междунар. конф. М. ; Одесса, 2002. - С.484-486.

79. Илларионов, В.Е. Техника и методики процедур лазерной терапии: справочник / В.Е. Илларионов. М., 1994. — 180 с.

80. Ильина, Н.И. Воспаление и иммунитет в клинической практике. Общая концепция / Н.И. Ильина, Г.О. Гудима // Цитокины и воспаление. 2005. - Т.4, № 3. - С.43.

81. Покровский, В.И. Иммунология инфекционного процесса: руководство для врачей / В.И. Покровский, С.П. Гордниенко, В.И. Литвинов. — М., 1984.

82. Каграманова, Ж. А. Комплексная диагностика и принципы лечения генитального хламидиоза: автореф. дис. канд. мед. наук / Ж.А. Каграманова. -М., 1997.-23 с.

83. Каплан, М.А. Лазерная терапия — механизмы действия и возможности / М.А. Каплан // Тезисы международной конференции «Laser Health'97». М. : Техника, 1997. - С. 88-92.

84. Каплан, М.А. Биологические эффекты низкоинтенсивного лазерного излучения ближнего инфракрасного диапазона / М.А. Каплан, Л.П.

85. Жаворонков, Я.В. Кривошеев и др. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. -Т. 39, №6.-С. 701-706.

86. Карки, Т.В. Количественный состав лактофлоры и методика его определения / Т.В. Карки, A.A. Ленцнер // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1994. - № 4. — С. 16-18.

87. Кармолин А.Л К механизму лазерной терапии. // Применение методов и средств лазерной техники в биологии и медицине. Киев, 1981. - С. 180-191.

88. Кару Т.Й., Рябых Т.П., Федосеева Г.Е. К механизму лазерной терапии // Радиобиология. 1989. - Т. 29, Вып. 2. - С. 230-235.

89. Кару, Т.Й. Влияние монохроматического света красной и ближней инфракрасной областей спектроа на адгезивные свойства клеточной мембраны в зависимости от длины волны / Т.Й. Кару // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. - Т. 117, № 6. - С. 670-672.

90. Кару, Т.Й. Изменение спектра поглощения монослоя живых клеток после низкоинтенсивного лазерного облучения / Т.Й. Кару // Докл. АН РФ. 1998. — Т. 360, №2.-С. 267-270.

91. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьёв. — СПб. : Гиппократ, 1992. 256 с.

92. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 30-44.

93. Кетлинский, С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина. СПб. : Гиппократ, 1998. — 156 с.

94. Кибисов, Р.К. К механизму лазерной терапии / Р.К. Кибисов // Тезисы международной конференции «Laser Health'97» М.: Техника, 1997. — С. 8.

95. Клебанов, Г.И. Влияние перекисного окисления липидов на структуру и функционирование мембран и липопротеидов: дис. . д-ра биол. наук / Г.И. Клебанов. М., 1991.

96. Клебанов, Г.И. Низкоинтенсивное лазерное облучение вызывает priming лейкоцитов / Г.И. Клебанов // Использование лазеров для диагностики и лечения заболеваний: сб. — М. : ЛАС, 1996. С. 11—14.

97. Клебанов, Г.И. Динамика содержания фотосенсибилизаторов и параметров свободнорадикальных реакций в плазме крови и больных при проведении фотодинамической терапии опухолей / Г.И. Клебанов // Лазерная медицина. 1999. - Т. 3, № 1. -С. 24-28.

98. Клебанов, Г.И. Модуляция кислородного метаболизма фагоцитов рекомбинантными цитокинами и комплексом природных цитокинов / Г.И. Клебанов // Журн. микробиологии, эпидемиологии, и иммунологии. 1999. - № 5. - С.106-108.

99. Клебанов, Г.И. Окислительный метаболизм лейкоцитов новорожденных: особенности цитокин зависимой регуляции / Г.И. Клебанов // Междунар. журн. иммунореабилитации. - 2000. - Т. 2, № 1. - С.128-132.

100. Клебанов, Г.И. К вопросу о механизме лечебного действия низкоинтенсивного и инфракрасного лазерного излучения / Г.И. Клебанов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2001. - Т.131, № 3. - С. 286-289.

101. Клебанов, Г.И. Антиоксиданты и лазерное излучение в терапии ран и трофических язв / Г.И. Клебанов, П.И. Толстых и др. М. : Эко, 2002. - 238 с.

102. Клинышкова, Т.В. Клинико-иммуноморфологические аспекты генитальной патологии женщин при хламидийной инфекции: автореф. дис. . канд. мед. наук / Т.В. Клинышкова. — Омск, 1998. — 22 с.

103. Князева, Т.А. Использование инфракрасного лазерного излучения в реабилитации больных ИБС после хирургической реваскуляризации миокарда / Т.А. Князева, В.К. Нагапетьян // Вопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. физкультуры. 1994. - № 6. - С. 10-12.

104. Ковальчук, Л.В. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская // Иммунология. 1995. - № 1. - С. 4-6.

105. Ковальчук, Л.В. Хемокины — новое семейство цитокинов, регулирующих миграцию лейкоцитов / Л.В. Ковальчук, Р.Т. Сайгитов // Журн. микробиололгии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. — № 1. — С. 90-94.

106. Ковальчук, Л.В. Анализ молекулярного взаимодействия в системе. IL-lbeta IL-IRa - IL-IR / Л.В. Ковальчук, Б.Н. Соболев, Л.И. Ганковская и др. // Иммунология. - 2001. - № 1. - С.6-10.

107. Кожные болезни и инфекции, передающиеся половым путём: руководство для врачей / под ред. Ю.С. Бутова. — М. : Медицина, 2002.

108. Козель, А.И. Механизм действия лазерного излучения на тканевом и клеточном уровне / А.И. Козель, Г.К. Попов // Вестн. РАМН. 2000. - № 2. - С. 41-43.

109. Козлов, В.А. Интерлейкин-1: роль в иммунитете / В.А. Козлов, Н.Ю. Громыхина // Иммунология. — 1987. № 4. — С. 24-29.

110. Козлов, В.И. Механизм действия лазерного излучения на тканевом и клеточном уровне Лазеротерапия / В.И. Козлов, В.А. Буйлин. — М.,1993. — С. 275.

111. Козлов, Л.В. Образование классической СЗ конвертазы в ходе активации альтернативного пути активации комплемента человека / Л.В. Козлов, Е.Д. Шибанова // Биохимия. 1987. - Т. 52, № 4. - С. 660-666.

112. Козлов, Л.В. Система комплемента при антисклеротической ретинопатии и лечении никотиновой кислотой / Л.В. Козлов, Н.С. Бугрова, И.А. Лоскутов // Иммунология. 1997. - № 2. - С. 55-60.

113. Козлова, В.И. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий / В.И. Козлова, А.Ф. Пухнер. М.: Филинъ, 1997.

114. Козлова, И.С. К механизму действия лазерной терапии при ревматоидном артрите /И.С. Козлова, В.В, Цурко, В.В. Пирязева и др. // Терапевт, арх. 1994. - № 5. - С. 38-41.

115. Короткий, Н.Г. Сравнительная клинико-лабораторная оценка эффективности антибиотиков при лечении больных с микоплазменной инфекцией / Н.Г. Короткий, C.B. Воробьёв, В.Н. Царёв // Вестн. дерматологии и венерологии. 2003. - № 4. - С. 58-62.

116. Корочкин, И.М. Механизмы терапевтической эффективности излучения гелий-неонового лазера / И.М. Корочкин, Е.В. Бабенко // Сов. медицина. 1990. -№ 3. - С. 3-8.

117. Коэн, K.P. Патогенез воспалительных заболеваний органов малого таза хламидийной этиологии / K.P. Коэн, Р.К. Бранэм // Инфекции, передаваемые половым путем. 1999. - № 6. - С. 5-7.

118. Краснопольский, В.Г. Иммуногенез, гомеостаз и неспецифическая резистентность организма / В.Г. Краснопольский // Инфекция в акушерстве: сб. науч. тр. М., 1995. - С. 68-77.

119. Крашенинникова, Е.А. Влияние продуктов, выделяемых нпейтрофилами. на функции клеток СМФ: автореф. дис. . канд. мед. наук / Е.А. Крашенинникова. Челябинск, 1987. - 19 с.

120. Кротов, С.А. Хламидиозы: Эпидемиология, характеристика возбудителя, методы лабораторной диагностики, лечение генитальных хламидийных заболеваний / С.А. Кротов, В.А. Кротова, С.Ю. Юрьев. Кольцово, 1995. - 34 с.

121. Кузник, Б.И. Иммуногенез, гомеостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, H.H. Цыбиков. M., 1989.

122. Кузовкова H.A., Сагалович Е.Е., Телегин Л.Ю. // The 1-st International Congress «Laser and Health» '97. P. 218. Влияние лазерного излучения неповреждающей интенсивности на систему иммунитета

123. Купин, В.И. Влияние лазерного излучения неповреждающей интенсивности на систему иммунитета / В.И. Купин, A.M. Сорокин, A.B. Иванов и др. // Сов. медицина. 1985. - № 7. - С. 8-12.

124. Курносенко, И.В. Клинико-иммунологические аспекты цервицитов хламидийной этиологии: автореф. . канд. мед. наук / И.В. Курносенко. -Челябинск, 2001. 22 с.

125. Курочкин, А. А. Низкоинтенсивное лазерное излучение в комплексном лечении детей и подростков: информ. -метод, сб. / A.A. Курочкин, C.B. Москвин, В.В. Аникин. M : Техника, 2000. - 111 с. — (В помощь практическому врачу. Лазерная терапия).

126. Лазерная терапия заболеваний мочеполовой сферы : учеб. -метод, сб. / С. В. Москвин и др.. М. : Триада, 2004. - 151 с.

127. Ларюшин, А.И. Низкоинтенсивные лазеры в медико— биологической практике / А.И. Ларюшин, В.Е. Илларионов. Казань, 1997.

128. Легкая, Э.И. Оптимизация лечения хламидийной инфекции гениталийженщин в условиях женской консультации: автореф. дис. канд. мед. наук /

129. Э.И. Легкая. Уфа, 1998. - 21 с.

130. Лепилин, A.B. Применение внутривенного лазерного облучения крови для профилактики и лечения гнойно-инфекционных осложнений переломов нижней челюсти / А.В Лепилин, В.И. Рубин, А.К. Мышкина и др. // Стоматология. 1994. - № 2. - С. 36-38.

131. Липперт, Г. Международная система единиц в медицине / Г. Липперт. — М. : Медицина, 1980. 208 с.

132. Логинова, Н.С. Интерфероновый статус больных урогенитальным хламидиозом / Н.С. Логинова, Л.З. Файзуллин, A.B. Жданов и др. // Заболевания, передаваемые половым путем. — 1997. — № 6. — С. 20.

133. Ломтатидзе, Л.В. Влияние Бестима на функционирование нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте: дис. . канд. мед. наук / Л.В. Ломтатидзе. -Краснодар, 1999. 216 с.

134. Ляшенко, В.А. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток / В.А. Ляшенко, В.А. Дроженников, И.М. Молотковская. М., 1988.

135. Ляшенко, Ю.И. Способ определения концентрации иммуноглобулинов в секрете слизистых оболочек: а. с. 1050668 СССР, МКИА 61310(00) / Ю.И. Ляшенко // ИЗР. 1984. - Вып. 13, № 3. - С. 4.

136. Маеда, X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке / X. Маеда, Т. Акаике // Биохимия. -1998. Т. 63, № 7. - С. 1007-1019.

137. Мазинг, Ю.А. Нейтрофильные гранулоциты и системы защиты организма / Ю.А. Мазинг // Арх. патологии.- 1991.- Т.53, № 9. С. 70-74.

138. Мансуров Х.Х., Баркаев С.Б., Ашурова P.A. Особенности состояния иммунной системы у женщин с воспалительными заболеваниями гениталий хламидийной и вирусной этиологии // Здравоохр. Таджикистана. 1988. - № 3. -С. 24-27.

139. Манухин, И.Б. Лазерная терапия в комплексном лечении рецидивирующего герпетического цервицита / И.Б. Манухин, Т.П. Крапошина, Т.П. Захарова и др. // Акушерство и гинекология. 2001. — № 4. — С. 38-41.

140. Матвеева, Н.К. Особенности состояния иммунной системы у женщин с воспалительными заболеваниями гениталий хламидийной и вирусной этиологии / Н.К. Матвеева, Л.З. Файзуллин, М.В. Альварес и др. //Акушерство и гинекология. — 1995. — № 1. С. 45-47.

141. Машкиллейсон, A.J1. К проблеме урогенитального хламидиоза / A.JI. Машкиллейсон, М.А. Гомберг, A.M. Соловьев // Заболевания, передаваемые половым путем. 1995. - № 5. - С. 28-33.

142. Маянский, А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитрасинего тетразолия: метод, рекомендации / А.Н. Маянский, М.Е. Виксман. Казань, 1979. - 11 с.

143. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск, 1989.

144. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. — Казань : Магариф, 1993. 192 с.

145. Маянский, А.Н. Апоптоз нейтрофилов / А.Н. Маянский, H.A. Маянский, М.И. Заславская и др. // Иммунология. 1999. - № 6. - С. 11-20.

146. Маянский, Д.Н. Хроническое воспаление / Д.Н. Маянский. М. : Медицина, 1991.-272 с.

147. Медведев, Б.И. Местный противоинфекционный иммунитет половой системы женщин / Б.И. Медведев, В.Ф. Долгушина // Акушерство и гинекология. 1993. - № 4. - С. 7-9.

148. Медведев, Б.И. Иммунопатологические реакции при хронических воспалительных заболеваниях матки и придатков и возможности их терапевтический коррекции / Б.И. Медведев, Э.А. Казачкова, E.JI. Казачков //

149. Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. — № 4. - С. 111-114.

150. Мезинова, H.H. Влияние противохламидийных препаратов на эффективность лечения привычного невынашивания беременности / H.H. Мезинова, П.Д. Чучупалов, Н.С.Евдокимова и др. // Акушерство и гинекология. 1991.-№7.-С. 30-32.

151. Меньшикова, Е.Б. Биохимия окислительного стресса / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, СМ. Шергин. Новосибирск, 1994.

152. Меньшикова, Е.Б. Оксид азота и NO-синтаза в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов // Биохимия. 2000. -Т. 65, № 4. - С. 485-503.

153. Методические материалы по диагностике и лечению наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путём (протоколы ведения больных) / ГУ ЦНИКВИ МЗ РФ. М., 2001.

154. Методы изучения фагоцитарных клеток при оценке иммунологического статуса человека: учеб.-метод. пособие / под ред. И.С. Фредлина. М., 1986. — 37 с.

155. Руководство по клинической иммунологии, аллергологии и, иммуногенетике и иммунофармакологии / A.A. Михайленко, В.И. Коненков, Г.А. Базанов, В.И. Покровский. — М. ; Тверь, 2005. — Т.1.

156. Мищенко, Т.Я. Поиск веществ простагландиноподобного типа действия в морских организмах / Т.Я. Мищенко, О.Д. Коротченко, C.B. Исай // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1982. — Т. 94, № 11. — С. 94-96.

157. Мортон, P.C. Урогенитальная хламидийная инфекция: Переоценка данных и гипотезы / P.C. Мортон, Дж.Р. Кингхорн // Инфекции, передаваемые половым путем. 2000. - № 2. - С. 4-15.

158. Москвин, C.B. Внутривенное лазерное облучение крови / C.B. Москвин, Г.А. Азизов. М., 2003.

159. Москвин, C.B. Основы лазерной терапии / C.B. Москвин, В. А. Буйлин. М. : Триада, 2006. - 251 с.

160. Муравьева, В.В. Особенности микроэкологии влагалища при бактериальном вагинозе и вагинальном кандидозе / В.В. Муравьева, A.C. Анкирская // Акушерство и гинекология. — 1996. № 6. — С. 27—30.

161. Мыслович, Л.В. Низкоинтенсивные лазеры и вакуумный массаж в косметологии и лечении некоторых дерматологических заболеваний / Л.В. Мыслович, C.B. Москвин. M : Техника, 2000. - 111 с.

162. Нестерова, И.В. Интралейкоцитарная микробицидная система нейтрофильных гранулоцитов у здоровых детей и при гнойно—септических заболеваниях: дис. канд. мед. наук / И.В. Нестерова. -М., 1980. — 249 с.

163. Нестерова, И.В. Значение исследования функционального потенциала нейтрофильных гранулоцитов при гнойно-септических заболеваниях / И.В. Нестерова, М.А. Светличная // Педиатрия. 1984. -№ 9. - С. 63-65.

164. Нестерова, И.В. Иммунореабилитация детей со вторичными иммунодефицитными состояниями: дис. . д-ра мед. наук / И.В. Нестерова. -М., 1992. 455 с.

165. Нестерова, И.В. Влияние рекомбинатного интерлейкина 1 бета на функции интактных и поврежденных нейтрофильных гранулоцитов в системе in vivo / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова, Г.А. Чудилова И др. // Иммунология. 1993. - № 4. - С. 36-39.

166. Нестерова, И.В. Комплексное трехуровневое исследование системы нейтрофильных гранулоцитов с возможной диагностикой ИДС при различной патологии: метод, рекомендации NS 96/11 / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова, Г.А. Чудилова. Краснодар, 1996. - 22 с.

167. Нестерова, И.В. Особенности функционирования противовирусного иммунитета / И.В.Нестерова // Цитокины и воспаление. 2002. - Т.4, № 3. - С. 89.

168. Нестерова, И.В. Современные представления о роли системы нейтрофильных гранулоцитов / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова // Russ. J. Immunol. 1999. - Vol. 4, Suppl. 1. - P. 22-29.

169. Нестерова, И.В. Физиологическая роль нейтрофильных гранулоцитов в поддержании иммунного гомеостаза / И.В. Нестерова // Russ. J. Immunol. — 2004. Vol. 9, Suppl. 1. - P. 17.

170. Нестерова, И.К. Современные представления о роли системы нейтрофильных гранулоцитов / И.К. Нестерова, Н.В. Колесникова // 2-й съезд иммунологов России: ввод, лекции, тез. докл. Сочи, 1999. - С. 22-29.

171. Николаева, Н.В. Эффективность препаратов из группы макролидов и тетрациклинов при лечении больных с урогенитальной хламидийной инфекцией / Н.В. Николаева // Вестн. дерматологии и венерологии. — 2003. — № 4. С. 40-42.

172. Номенклатура антигенов CD (кластеров дифференцировки лейкоцитов) на ноябрь 1994 года // Гематология и трансфузиология. — 1994. — Т. 39, № 6. — С. 45-48.

173. Ориэл, Дж. Хламидиоз: пер. с англ. / Дж. Ориэл, Дж.А. Риджуэй. М., 1984.

174. Орлов, С.Н. Концентрация свободного кальция в цитоплазме, методы регистрации, достижения и артефакты / С.Н. Орлов, Ю. А. Лабас // Биол. мембраны—1989. -Т.6, № 9. С. 901-938.

175. Пагава, K.M. Механизмы действия низкоинтенсивного лазерного излучения на целостный организм / K.M. Пагава // Применение лазеров в хирургии и медицине: тез. междунар. симп. М., 1988. - Ч. 1 - С. 540-541.

176. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, A.A. Иванов. М. : Медицина, 1995. - 224 с.

177. Пауков, B.C. Взаимоотношения «местного» и «общего» в воспалении / B.C. Пауков, О.Я. Кауфман // Арх. патологии. 1988. - № 7. - С. 7-16.

178. Пешев, Л.П. Лечение лазером в акушерско-гинекологической практике / Л.П. Пешев, Г.Г. Джвебенава, А.Р. Чхеидзе. Саранск : Изд-во Мордов. ун-та, 1993.- 152 с.

179. Пигаревский, В.Е. Гипотеза о резорбтивной клеточной резистентности как особой форме антимикробной защиты организма / В.Е. Пигаревский // Арх. патологии. 1992. - Т. 54, № 8. - С. 40-45.

180. Пирс, 3. Гистохимия. Теоретическая и прикладная: пер. с англ. / 3. Пирс М. : Медицина, 1962. - 962 с.

181. Плотко, Е.Э. Роль хламидийной и микоплазменной инфекции в генезе послеродового эндометрита, оптимизация его диагностики и терапии: автореф. дис. . канд. мед. наук / Е.Э. Плотко. Омск, 1996. — 22 с.

182. Погодин, O.K. Хламидийная инфекция в акушерстве, гинекологии и перинатологии / O.K. Погодин. Петрозаводск, 1997. — 163 с.

183. Полканов, B.C. Патогенез и терапия инфекций, передаваемых половым путем, у женщин: метод, рекомендации /B.C. Полканов, Л.К. Гладкова, В.В. Делекторский и др. — Свердловск, 1990. — 26 с.

184. Полонский, А.К. О некоторых аспектах лазерной терапии / А.К. Полонский // Применение полупроводниковых лазеров и светодиодов в медицине. Калуга, 1994. - Вып. 4. - С. 1-5.

185. Полунина, Т.Е. Биологические и клинические основы применения низкоинтенсивного лазерного излучения в терапии / Т.Е. Полунина // Лечащий врач. 2002. - № 1-2. - С. 41.

186. Полушина, Н.Д. Клинико-экспериментальный анализ эффектов лазертерапии / Н.Д. Полушина, Ю.М. Гринзайд, Е.А. Шляпак и др. // Вопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. физкультуры. 1997. - № 4. - С. 14-16.

187. Пономаренко, Г.Н. Физические методы лечения / Г.Н. Пономаренко. — СПб., 1999.

188. Попов, В.Л. Облигатный внутриклетгочный паразитизм прокариотов: автореф. дис. . д-ра биол. наук / В.Л. Попов. -М., 1985.

189. Прикладная лазерная медицина: руководство для врачей: пер. с нем. / под ред.Х.-П. Бермена, Г.Й. Мюллера. М., 1997.

190. Прозорова, С.Г. Влияние гелий- неонового лазера на цитохимический статус нейтрофилов периферической крови при стрессе: автореф. дис. . канд. биол. наук / С.Г. Прозорова. Саратов, 1998.

191. Проскуряков, С.Я. Оксид азота в механизмах патогенеза внутриклеточных инфекций / С.Я. Проскуряков, С.И. Бикетов, А.И. Иванников и др. // Иммунология. 2000. - № 4. - С. 9-20.

192. Рентой, A.M. Контроль и ведение заболеваний, передающихся половым путём в Великобритании и Российской федерации: сходства и различия / A.M. Рентой, К.К. Борисенко, Л.И. Тихонова и др. // Инфекции, передаваемые половым путем. 1999. - № 5. - С. 27-33.

193. Репродуктивное здоровье: в 2-х т.: пер. с англ. / под ред. Л.Г. Кейта и др. М. : Медицина, 1988. - Т. 2. - 413 с.

194. Роговин, В.В. Антимикробные белки и пептиды нейтрофильных лейкоцитов / В.В. Роговин, В.А. Муравьев // Известия РАН. Сер. биол. — 1992. — № 6. С. 854-889.

195. Рубин, А.Б. Биофизика / А.Б. Рубин. М., 1987. - Кн.2.

196. Руководство по лечению заболеваний, передаваемых половым путём. — М. : Венера-пресс, 1998. 135 с.

197. Рюмин, Д.В. Характеристика иммунного статуса у больных с хроническим рецидивирующим урогенитальным хламидиозом / Д.В. Рюмин, Е.В. Коваленко, С.А. Новицкая // Вестн. Рос. ассоц. акушеров-гинекологов. —1999. -№ 1.-С. 26-28.

198. Савичева, A.M. Урогенитальный хламидиоз у женщин и его последствия / A.M. Савичева, М.А. Башмакова. Н. Новгород : Изд-во НГМА, 1998. - 182 с.

199. Сахарова, В.В. Клинико- иммунологическая характеристика больных с псевдоэрозией шейки матки, осложнённой и не осложнённой генитальной инфекцией: автореф. дис. . канд. мед. наук / В.В. Сахарова. — Челябинск,2000.-163 с.

200. Сенчук, А.Я. О роли факторов местного иммунитета в диагностике и оценке эффективности лечения предопухолевых заболеваний шейки матки / А.Я. Сенчук, О.И. Миляновский, В.Д. Мельничук и др. // Пед1атр1я, акушерство i гшеколопя. 1993. - № 5-6. - С. 33-34.

201. Сергиенко, В.И. Математическая статистика в клинических исследованиях / В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева. М. : ГЭОТАР Медицина, 2000.-256 с.

202. Серов, В.Н. Хламидиоз: клиника, диагностика, лечение: метод, рекомендации / В.Н. Серов, В.И. Краснопольский и др. — М., 1996. — 22 с.

203. Симбирцев, A.C. Биология семейства интерлейкина-1 человека / A.C. Симбирцев // Иммунология. — 1998. — № 3. — С. 9-17.

204. Смольникова, JI.А. Клинико—иммунологические особенности бактериального вагиноза у беременных: дис. . канд. мед. наук / Л.А. Смольникова. Челябинск, 1999. - 182 с.

205. Смольянинова, Н.К. Облучение Не- Ne лазером усиливает бласттрансформацию, вызванную фитогемаглютинином / Н.К. Смольянинова // Докл. АН СССР. 1990. - Т.315, № 5. - С. 1256-1259.

206. Соловьёва, Л.И. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на некоторые популяции клеток кроветворной системы: экспериментальное исследование: автореф. дис. . канд. мед. наук / Л.И. Соловьёва. Челябинск, 2001.

207. Спасов A.A. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на некоторые популяции клеток кроветворной системы: / A.A. Спасов, В.В. Негода, О.В. Островский // Лазер и здоровье: материалы 1-го междунар. конгр. -Лимассол, 1997. -С.412-415.

208. Стрелец, Е.В. Антибактериальная активность лизоцима, модифицированного реакцией комплексообразования с молекулярным йодом и полийодидами / Е.В. Стрелец, М.А. Демидова // Иммунология. 2002. - № 1. -С. 38-40.

209. Стругацкий, В.М. Физические факторы в акушерстве и гинекологии /

210. B.М. Стругацкий. -М., 1981.-206 с.

211. Стругацкий, В.М. Лечение хронических воспалительных заболеваний органов малого таза: опыт применения аппаратно-программного комплекса «АНДРО-ГИН» / В.М. Стругацкий, Е.С. Силантьева // Акушерство и гинекология. 2002. - № 6. - С. 51 -52.

212. Тарасенко, B.C. Особенности иммунного статуса при остром панкреатите / B.C. Тарасенко, А.И. Смолягин, В.А. Кубышкин // Хирургия. 2000. - № 8. —1. C. 51-55.

213. Тартаковский, И.С. Факторы патогенности листерий и их роль в патогенезе и лабораторной диагностике листериоза / И.С. Тартаковский, С.А.

214. Ермолаева, B.B. Малеев // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. - № 4. -С. 31-36.

215. Телешева, Л.Ф. Механизмы противоинфекционной защиты репродуктивного тракта женщин / Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина, И.И. Долгушин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998.- № 4. С. 85-90.

216. Телешева, Л.Ф. Иммунологические факторы секретов репродуктивного тракта женщины: дис. . д-ра мед. наук / Л.Ф. Телешева. — Челябинск, 2000. -324 с.

217. Тимошенко, Л.В. Патогенетические аспекты в лечении женского бесплодия воспалительного генеза / Л.В. Тимошенко, И.Г. Евтушенко // Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии: сб. науч. тр. симп. с междунар. участием. Киев, 1995. - С. 48-49.

218. Тихомиров, A.A. Модификации метода Манчини для количественного определения иммуноглобулинов / A.A. Тихомиров // Лаб. дело. 1977. - № 1. -С. 45-47.

219. Толыбеков, Ф.С. Морфогенез и вопросы патогенеза инфекционных процессов, вызванных хламидиями: автореф. дис. . д-ра мед. наук / Ф.С. Толыбеков. — Л., 1979. 32 с.

220. Торчинов, A.M. Использование НИЛИ для лечения бактериального вагиноза и других И111111 / A.M. Торчинов, В.В. Ежов // Вопр. гинекологии, акушерства и перинатологии. — 2008. Т. 7, № 1. - С.43-46.

221. Тотолян, A.A. Современные подходы к диагностике иммунопатологических состояний / Тотолян A.A. // Мед. иммунология. 1999.1. Т.1, № 1-2.-С. 75-108.

222. Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб. : Наука, 2000.

223. Трапезников, H.H. Действие излучения гелий-неонового лазера на лимфоциты человека in vitro / H.H. Трапезников, В.И. Купин, A.B. Иванов и др. // Вестн. АМН СССР. 1984. - № 5. - С. 40-43 .

224. Фомичева, E.H. Роль уреаплазменной и хламидийной инфекции в акушерской практике / E.H. Фомичева, E.H. Зарубина, В.И. Минаев и др. // Акушерство и гинекология. — 1997. № 2. - С. 55-57.

225. Фрейдлин, И.С. Система мононуклеарных фагоцитов / И.С. Фрейдлин. -М. : Медицина, 1984.

226. Фрейдлин, И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной сети / И.С. Фрейдлин // Иммунология. — 1995. № 3. - С. 44-47.

227. Фрейдлин, И.С. Регуляторные функции провоспалительных цитокинов и острофазных белков / И.С. Фрейдлин, П.Г. Назаров / Вестн. РАМН. 1999. - № 5.-С. 28-32.

228. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Аллергия, астма и клиническая иммунология. М., 2000. - С.73-80.

229. Хаитов, P.M. Вторичные иммунодефициты: клиника, диагностика, лечение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1999. — № 1. — С. 14-17.

230. Хаитов, P.M. Иммунология: учебник / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева И.Г. Сидорович. М. : Медицина, 2000. - 432 с.

231. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2000. — № 1. — С. 6164.

232. Халястова, Э.А. Эффективность магнито- и лазеротерапии в лечении мочекаменной болезни с применением дистанционной ударно-волновой литотрипсии / Э.А. Халястова, С.В. Москвин // Лазерная медицина. — 2002. -Т.6, № 3. С. 40-41.

233. Хейхоу, Ф.Г.Дж. Гематологическая цитохимия: пер. с англ. / Ф.Г.Дж. Хейхоу, Д. Квалино. М. : Медицина, 1983. - 465 с.

234. Хламидиозы: эпидемиология, характеристика возбудителя, методы лабораторной диагностики, лечение генитального хламидиоза: метод, пособие. -Кольцово : Вектор-Бест, 1995. 35 с.

235. Цинзерлинг, А.В. Хламидиозы: диагностика, роль в патологии человека Хламидиозы: диагностика, роль в патогенезе человека / А.В. Цинзерлинг // Арх. патрологии. 1989. - Т. 51, № 1. - С. 3-9.

236. Урогенитальный хламидиоз: последствия инфицирования, принципы терапии: учеб.-метод. пособие для врачей / В.В. Чеботарёв, Н.В. Беляева, В.А. Игликов, В.А. Земцов. Ставрополь, 1997.

237. Чеботарёв, В.В. Урогенитальный хламидиоз: современные проблемы диагностики, патогенеза, лечения / В.В. Чеботарёв // Журн. дерматологии, венерологии и косметологии. 1997. - № 2. - С. 5-10.

238. Черняк, Л.А. Новые достижения лазерной медицины / Л.А. Черняк. М., 1993.- 566 с.

239. Чичук, Т.В. Свободнорадикальные механизмы стимулирующего действия низкоинтенсивного лазерного излучения / Т.В. Чичук, И.А. Страшкевич, Г.И. Клебанов // Вестн. Рос. АМН. 1999. - № 2. - С. 27-32.

240. Чучупалов, П.Д. Выявление хламидий в плацентарной и хориальной ткани при привычном невынашивании беременности / П.Д. Чучупалов, Л.И.

241. Фохридина // Вопр. охраны материнства и детства. 1989. - Т. 34, № 1. - С. 1617.

242. Шабалин, В.Н. Иммунологические и физико-физические эффекты действия лазера на биологические объекты / В.Н. Шабалин, Т.В. Иваненко, Т.В. Скокова и др. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39, № 6. - С. 603606.

243. Шалагин, A.M. Механическое воздействие лазерного излучения на атомы / A.M. Шалагин // Соросов, образоват. журн. 1999. - № 10. - С. 86-92.

244. Шаткин, A.A. Урогенитальные хламидиозы / A.A. Шаткин, И.И. Мавров. -Киев, 1993.

245. Шварцаман, Я.С. Местный иммунитет / Я.С. Шварцаман, Л.Б. Хазенсон. М. : Медицина, 1978. - 224 с.

246. Ширшев, C.B. Механизмы иммунного контроля процессов репродукции / C.B. Ширшев. Екатеринбург, 1999. - 381 с.

247. Эйдельштейн, И.А. Фундаментальные изменения в классификации хламидий и родственных им микроорганизмов порядка Chlamidiales / И.А. Эйдельштейн // Клинич. микробиология и антимикроб, химиотерапия. 1999. — № 1.-е. 5-11.

248. Юсупова, Л.Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов / Л.Б. Юсупова // Лаб. дело. — 1989. — №4.-С. 19-21.

249. Юцковский, А.Д. Эффективность различных методов лечения урогенитальной инфекции / А.Д. Юцковский, Я.А. Юцковская // Вестн. дерматологии и венерологии. — 2003. — № 1. — С. 61-62.

250. Яловега, Ю.А. Магнитолазерная терапия в комплексном лечении женщин с гнойно- воспалительными заболеваниями придатков матки / Ю.А.Яловега, A.A. Родионченко, И.Д. Евтушенко // Акушерство и гинекология. 2006. - № 1. -С. 41-46.

251. Ярилин, A.A. Действие лазерного излучения на выработку гормонов тимуса / A.A. Ярилин, Н.К, Шарова, H.H. Кочергина // Радиац. биология. Радиоэкология. 1995. - Т. 35, Вып. 4. - С. 481-485.

252. Ярилин, A.A. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / A.A. Ярилин // Иммунология. 1997. - № 5. — С. 7-14.

253. Ярилин, A.A. Основы иммунологии: учебник / A.A. Ярилин. М., 1999.

254. Abdelrahman, Y.M. The chlamydial developmental cycle / Y. M. Abdelrahman, R.J. Belland // FEMS Microbiol. Rev. 2005. - Vol. 29, N 5. - P. 949-959.

255. Adams, D.O. Molecular interactions in macrophage activation / D.O. Adams // Immunol. Today. 1989. - Vol. 10, № 2. - P. 33-35.

256. Almendro, V. Sepsis induces DNA fragmentation in rat skeletal muscle / V. Almendro, N. Carbo, S. Busquets et al. // Eur. Cytokine Netw. 2003. - Vol. 14, N 4.-P. 256-259.

257. Almendro V., Carbo N., Busquets S. et al. Sepsis induces DNA fragmentation in rat skeletal muscle // Eur. Cytokine Netw. — 2003. Vol. 14, N 4. - P. 256-259.

258. Amsel, R., Totten P.A., Spiegel C.A. et al. The role of programmed cell death (apoptosis) in thymic involution following sepsis // Contracept. Fertil. Sex. 1994. -Vol. 22, N12.-P. 771-776.

259. Ashby, B. Kinetic evidence indicating separate stimulatory and inhibitory prostaglandin receptors on platelet membranes / B. Ashby // J. Cyclic Nucleotide Protein Phosphor. Res. 1986. - Vol. 11, N 4. - P. 291-300.

260. Barke, R.A. The role of programmed cell death (apoptosis) in thymic involution following sepsis / R.A. Barke, S. Roy, R.B. Chapin et al. //Arch. Surg. -1994.-Vol. 129, N 12. — P. 1256-1261.

261. Bastien, D. Gomperts. Current status Review Exocitotic: the role of Ca2+, GTF and ATF as regulators and modulators in the rat mast cell model / D. Bastien // J. Exp. Path. 1990. - Vol. 71. - P. 423-431.

262. Beauchamp, C. Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gels / C. Beauchamp, I. Fridovich // Anal. Biochem. — 1971. Vol. 44. - P. 276-287.

263. Barke R. A., Roy S., Chapin R. B., Charboneau R. The role of programmed cell death (apoptosis) in thymic involution following sepsis//Arch. Surg. 1994.-Vol. 129, N 12. - P. 1256— 1261; discus.: P. 1261 — 1262.

264. Beckman, J.S. Extensive nitration of protein tyrosines in human atherosclerosis detected by immunohistochemistry / J.S. Beckman, Y. Ye, P.G. Anderson et al. // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1994. - Vol. 375. -P.81-88.

265. Ben-Her, E. The effect of fluoride on binding and photodynamic action of phthalocyanines with proteins / E. Ben-Her, T.M. Dubbelman, J. Van Stevenink // Photochem. Protobiol. 1991. - Vol.54, N 5. - P. 163-166.

266. Ben-Her, E. Cytoplasmic free calcium changes as a trigger mechanism in the response of cells to photosensitization / E .Ben-Her, T.M. Dubbelman // Photochem. Photobiol. 1993. - Vol. 58. - P. 890-894.

267. Beutler, B. Identity of tumour necrosis factor and the macrophage-secreted factor cachectin / B. Beutler, D. Greenvald, J.D. Hulmes et al. // Nature. — 1985. — Vol. 316.-P. 552-554.

268. Bommhardt, U. Akt decreases lymphocyte apoptosis and improves survival in sepsis / U. Bommhardt, K.S. Chang, P.E. Swanson et al. // J. Immunol. 2004. — Vol. 172,N 12:-P. 7591.

269. Bradford, M.M. A rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein—dye binding / M.M. Bradford // Analyt. Biochem. 1976. - Vol. 72. - P. 248-254.

270. Braun, L. Interactionsbetween Listeria monocytogenes and host mammalian cells / L. Braun, P. Cossart // Microbes Infect. 2000. - Vol. 2. - P. 803-811.

271. Burgner, D. Nitric oxide and infectious diseases / D. Burgner, K. Rockett, D. Kwiatkowski // Arch. Dis. Child. 1999. - Vol. 8, N 2. - P. 185 -189.

272. Byrne, M. The ultrastructure of the morula cells of Eupentacta quinquesemita (Echinodermata: Holothuroidea) and their role in the maintenance of the extracellular matrix / M. Byrne // J. Morphol. —1986. Vol. 188. -P. 179-189.

273. Cain, K. Antibodies and antibody secreting cells in the female genital tract after vaginal or intranasal immunization with cholera toxin B subunit or conjugates / K. Cain, R. Rank, M. Johansson // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66, N 2. - P. 514-520.

274. Canicatti, C. The coelomocytes of Ho/othuria polii (Echinodermata). I. Light and electron microscopy / C. Canicatti, G. D'Ancona, E. Farina-Lipari // Bull. Zool. 1989. - Vol. 56, N 1. - P. 29-36.

275. Casterlin, M.E. Fever induced in marine arthropods by prostaglandin EI / M.E. Casterlin, W.W. Reynolds // Life Sci. 1979. - Vol. 25, N 18. - P. 1601-1603.

276. Charlesworth, J.A. The metabolism of C3 fiid C4 in patients with immune complex and normal complement levels / J.A. Charlesworth, P.W. Peake, J. Golding etal. // Aust. N. Z. J.Med. 1989.-Vol. 19, N20.-P. 118-124.

277. Chia, F. Echinoderm coelomocytes / F. Chia, Xing // Zool. Stud. 1996. -Vol. 35, N4.-P. 231-254.

278. Coban, Y.K. Serum 1L-18 is increased at early postburn period in moderately burned patients / Y.K. Coban, M. Aral // Mediat. Inflamm. — 2006. N 2. - P. 16492.

279. Cochrane, C.G. Cellular injury by oxidants / C.G. Cochrane // Am. J. Med. — 1991. Vol. 91, № 3C. - P. 23-30.

280. Creasey, A.A. Biological effects of recombinant human tumor necrosis factor and its novel muteins on tumor and normal cell lines / A.A. Creasey, L.V. Doyle, T. Reynolds et al. // Cancer Res. 1987. - Vol. 47. - P. 145-149.

281. Crowley-Nowick, P.A. Normal uterine cervix characterization of isolated lymphocyte phenotype and immunoglobulin secretion / P.A. Crowley-Nowick, M. Bell, R.P. Edwards et al. // Am. J. Reprod. Immunnol. 1995. - Vol. 34, N 4. - P. 241-247.

282. Curl, T. Percentage of phagocytosis, production of Cte, H202 and NO', and antioxidant enzyme activities of rat neutrophils in culture / T. Curl, M. Demelo, A. Palanca et al. // Cell. Biochem. Funct. 1998. - Vol. 16. - P. 43-48.

283. Didenko, V.V. DNA damage and p21 (WAF1/C1P1/SDI1) in experimental injury of the rat adrenal cortex and trauma-associated damage of the human adrenal cortex / V.V. Didenko, X. Wang, L. Yang et al. // J. Pathol. 1999. - Vol. 189, N 1. -P. 119-126.

284. Dinarello, C.A. Tumor necrosis factor (cachectin) is an endogenous pyrogen and induces production of interleukin 1 / C.A. Dinarello, J.G. Cannon, S.M. Wolf et al. // J. Exp. Med. 1986. - Vol. 163. - P. 1433-1450.

285. Dockrell, D.H. Alveolar macrophage apoptosis contributes to pneumococcal clearance in a resolving model of pulmonary infection / D.H. Dockrell, H.M. Marriott, L.R. Prince et al. // J. Immunol. — 2003. -Vol. 171, N 10. P. 5380-5388.

286. Fang, F.C. Mechanisms of Nitric Oxide-related Antimicrobial Activity / F.C. Fang // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 99. - P. 2818-2825.

287. Finnerty, C.C. Serum cytokine differences in severely burned children with and without sepsis / C.C. Finnerty, D.N. Herndon, D.L. Chinkes et al. // Shock. 2007. -Vol. 27, N 1. - P. 4-9.

288. Fischer, S.F. Characterization of antiapoptotic activities of Chlamydia pneumoniae in infected cells / S.F. Fischer, G. Hacker // Ann. N. Y. Acad. Sci. -2003.-Vol. 1010. -P. 565-567.

289. Fontes, B. The role of the polymorphonuclear neutrophils in the failure of multiple organs and systems / B. Fontes, R. Sergio-Poggetti // Rev. Hosp. Clin. Fac. Med. Sao-Paulo. 1996. - Vol. 51, № 1. - P. 21-25.

290. Fukuzuka, K. Caspase-3 dependent organ apoptosis early after bum injury / K. Fukuzuka, J. Rosenberg, G. Gaines et al. // Ann. Surg. - 1999. - Vol. 229, N 6. -P. 851.

291. Gamble, J.R. Stimulation of the adherence of neutrophils to umbilical vein endothelium by human recombinant tumor necrosis factor / J.R. Gamble, J.M. Harlan, S.J. Klebanoff et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. - Vol. 82. - P. 8667-8672.

292. Glossman, H. Strcture of Calcium Channels. Calcium Channels / H. Glossman, J. Striesing et al. // Ann. N. Y. Calcium Channels Acad. Sciens. 1989. - Vol. 560. -P. 198-214.

293. Gomperts, B.D. Intracellular .Mechanism Regulating Exocitotic Secretion in Mast Cells / B.D. Gomperts et al. // Int. Arcy Allegry Appl. Immunol. -1991. Vol. 94.-P. 38-46.

294. Granstein, D. In vivo inflammatory activity of epidermal cell-derived thymocyte activating factor and recombinant interleukin 1 in the mouse. / D. Granstein, R. Margolis, S. Mizel // J. Clin. Invest. 1986. - Vol. 77. - P. 1020-1026.

295. Hamblin, A. A method of preparing blood leukocytes for flow cytometry which prevents upregulation of leukocyte integrins / A. Hamblin, M. Taylor, J. Bernhagen et al. // J. Immunol. Methods. 1992. - Vol. 146, N 2. - P. 219-238.

296. Held, Ch.A. Real time quantitative PCR / Ch.A. Held, J. Stevens, K.J. Livak, P.M. Williams // Genome Res. 1996. - Vol. 10, N 6. - P. 986-994.

297. Holers, V.M. Complement / V.M. Holers // Clinical immunology. Principles and Practice / ed. by R.R. Rich. St. Louis, etc. : Mosby, 1996. - P. 363-391.

298. Hussain, L.A. Investigation of the complement reseptor 3 (CD lib/CD 18) in human rectal epithelium / L.A. Hussain, C.G. Kelly, A. Rodin et al. // Clin. Exp. Immunol. -1995. Vol. 102, N 2. - P. 384-388.

299. Ito, H.O. Hen egg-white lysozyme inhibits biological activities of lipopolysaccharides from periodontopathic bacteria / H.O. Ito, M. Hirata, T. Koga // J. Periodont. Res. 1997. - Vol. 32, N 3. - P. 295-299.

300. Joseph, R.R. Prostaglandins and activation of AC/cAMP prevents anoikis in IEC—18 / R.R. Joseph, E. Yazer, Y. Hanakawa et al. // Apoptosis. 2005. - Vol. 10, № 6. - P. 1221-1233.

301. Karu, T.I. Photobiological fuhdamentals of low—level laser therapy / T.I. Karu // IEEE J. Quant. Elect. 1987. - Vol. QE-23. - P. 1703-1717.

302. Kaufmann, S.H.E. Immune responses to intracellular bacteria / S.H.E. Kaufmann // Clinical immunology: principles and practice / ed. -in-chief R. Rich. -St. Louis :Mosby,1996.-Vol. 1. -P. 503-518.

303. Kelsall, B.L. Host defenses at mucosal surfaces / B.L. Kelsall, W. Strobe // Clinical immunology. Principles and Practice / ed. by R.R. Rich. St. Louis : Mosby, 1996.-P. 229-331.

304. Klebanoff, S.J. Stimulation of neutrophils by tumor necrosis factor / SJ. Klebanoff, M.A. Vadas, J.M. Harlan et al. // J. Immunol. 1986. - Vol. 136. - P. 4220-4226.

305. Klebanoff, S.J. Oxigen metabolites from phagocytes / S.J. Klebanoff // Inflammation basic principles and clinical correlated / ed. by J. I. Gallin, R. Snyderman. — Piladelphia: Lippincot: Williams &Wilkins, 1999. P. 345-386.

306. Kobayashi, K. The mechanisms of gastrointestinal mucosal injury and repair / K. Kobayashi, K. Kashima, K. Higuchiet al. //Nippon Rinsho. 1998. - Vol. 56, N 9. -P. 2215-2222.

307. Lee, C. Stimulation of DNA synthesis by tumor promoters in primary rat hepatocytes is not mediated by arachidonic acid metabolites / C. Lee, A. Edwards//J. Cell Physiol.-2001.-Vol. 187.-P. 336-344.

308. Lee, E.O. Palmitoyl lysozyme-induced stabilization of PE (phosphatidylethanolamine) liposomes and their interaction with Candida albicans / E.O. Lee, J.D. Kim // J. Biochem. (Tokyo). 1995. - Vol. 117, N 1. - P. 54-58.

309. Lee, R.F. Use of the single cell gel electrophoresis/comet assay for detecting DNA damage in aquatic (marine and freshwater) animals / R.F. Lee, S. Steinert // Mutation Res. 2003. - Vol. 544. - P. 43-64.

310. Malyak, M. The differential production of three forms of IL-1 receptor antagonist by human neutrophils and monocytes / M. Malyak, M.F. Smith Jr., A.A. Abel et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 161. - P. 2004-2010.

311. Mannel, D.N. Biological aspects of tumor necrosis factor / D.N. Mannel // Immunobiology. 1986. - Vol. 172. - P. 283-290.

312. Marsik, C. Regulation of Fas (APO-1, CD95) and Fas ligand expression in leukocytes during systemic inflammation in humans / C.Marsik, T. Halama, F. Cardona et al. // Shock. Vol. 20, N 6. - P. 493-496.

313. Mason, M.J. In vivo neutrophil emigration in response to interleukin-1 and tumor necrosis factor-alpha / M.J. Mason, D.E. Van Epps // Leukoc. Biol. 1989. — Vol. 45, N l. - P. 62-68.

314. Mazolli. Immune response of the genital tract to Clamidia trachomatis The role of programmed cell death (apoptosis) in thymic involution following sepsis / Mazolli // J. Eur. Acad. Dermatol. Veneorol. -1997. Vol. 9, № 1. - P. 528.

315. McConkey, D. Agents that elevate cAMP stimulate DNA fragmentation in thymocytes / D. McConkey, S. Orrenius, M. Jondal // J. Immunol. 1990. — Vol. 145. - P. 1227-1230.

316. Miller, J.S. Eicosanoids mediate insect nodulation responses to bacterial infections / J.S. Miller, T. Nguyen, D.W. Stanley-Samuelson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91. - P. 12 418-12 422.

317. Mitsunobi, M. Mikrofilament Associated, Local Degranulation of Rat Peritonial Mast Cells / M. Mitsunobi, K. Tasaka // Int. Arcy Allegry Appl. Immunol. 1989. - Vol. 88. - P. 369-371.

318. Mosmann, T. Cytokines and immune regulation / T. Mosmann // Clinical immunology: principles and practice / ed. -in-chief R. Rich. — St. Louis : Mosby, 1996.-Vol. 1.-P. 217-230.

319. Mouly, F. Chronic recurrent acyclovir-resistant genital herpes in an immunocompetent patient. / F. Mouly, M. Baccard, C. Scieux // Dermatology. — 1995.-Vol. 190, N2.-P. 177.

320. Murphy, F.J. Targeting inflammatory diseases via apoptotic mechanisms / F.J. Murphy, L. Hayes, T.G. Cotter // Curr. Opin. Pharmacol. 2003. - Vol. 3,N4.-P. 412-419.

321. Nathan, C.F. Neutrophil activation on biological surfaces. Massive secretion of hydrogen peroxide in response to products of macrophages and lymphocytes / C.F. Nathan // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 80. - P. 1550-1560.

322. Neher, E. Ion influx as Transduction Signal in Mast Cells / E. Neher // Int. Arcy Allegry Appl. Immunol. 1991. - Vol. 94. - P. 47-50.

323. Nomura, Z. Distribution of prostaglandins in the animal kingdom / Z.Nomura, H. Ogata // Biochem. Biophys. Acta. 1976. - Vol. 431, N 1. -P. 127-131.

324. Ozbalkan, Z. Investigation of the course of proinflammatory cytokines after bum sepsis / Z. Ozbalkan, A.K. Aslar, Y. Yildiz et al. // Int. J. Clin. Pract. — 2004. -Vol. 58, N2.-P. 125-129.

325. Pao, C.C. Differintial expression of cytokine genes in cervical cancer tissues / C.C. Pao, C.Y. Lin, D.S. Yao et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1995. -Vol. 214,N3.-P. 1146-1151.

326. Phillips, H.J. Dye exclusion tests for cell viability / H.J. Phillips // Tissue culture methods and applications. — N.Y. : Acad. Press, 1973. P. 406-408.

327. Pietarinen, P. Catalase and glutathione-reductase protection of human alveolar macrophages during oxidant exposure in vitro / P. Pietarinen, K.

328. Raivio, R.B. Devlin et al. // Am. J. Respiratory Cell Molec. Biol. 1995. - Vol. 13, №4.-P. 434-441.

329. Pino, M.S. Prostaglandin E2 drives cyclooxygenase-2 expression via cyclic AMP response element activation in human pancreatic cancer cells / M.S. Pino, S.T. Nawrocki, F. Cognetti et al. // Cancer Biol. Then 2005. - Vol. 4, N 11. - P. 1263-1269.

330. Pramanick, D. 4 M guanidine hydrochloride applied to the isolation of DNA from different sources / D. Pramanick, J. Forstova, L. Pivec // FEBS Lett.- 1976.-Vol. 62, N l.-P. 81-84.

331. Priestie, J.P. Crystal structure of the cytokine interleukin-1 beta / J.P. Priestle,

332. H.P. Schär, M.G. Grütter // EMBO J. 1988. - Vol. 7, № 2. - P. 339-343.

333. Rautelin, H. Incidence of Helicobacter pylori strains activating neutrophils in patients with peptic ulcer disease / H. Rautelin, B. Blomberg, G. Jamerot et al. // Gut.- 1993. Vol. 34, N 5. - P. 599-6903.

334. Reid, M.F. Vulvovaginitis and cervicitis / M.F. Reid // Principles and Practice of Infection Disease / ed. by G.L. Mandell. New York, etc : Churchill Livingstone, 1995.-P. 1074-1090.

335. Reid, K.B.M. The complement system. A major effector mechanism in humoral immunity / K.B.M. Reid // The Immunologist. 1995. - Vol. 3, N 5/6. - P. 206-211,

336. Reyes, R. Jr. Early inflammatory response in rat brain after peripheral thermal injury / R. Reyes Jr., Y. Wu, Q. Lai et al. // Neurosci. Lett. 2006. - Vol. 407, N 1. -P. 11-15.

337. Robak, J. Scavenging of reactive oxygen species as the mechanism of drug action / J. Robak, E. Marcinkiewicz // Pol. J. Pharmacol. 1995. - Vol. 47, N1.-P. 89-98.

338. Rollins, B.J. Chemokines / B.J. Rollins // Blood. 1997. - Vol. 90, N 3. - P. 909-928.

339. Saito, H. Effect of human interferon on different functions of human neutrophils and eosinophils / H. Saito, T. Hayakawa, Y. Yui et al. // Int. Arch. Allergy. 1987. - Vol. 82. - P. 133-140.

340. Savill, J. Macrophage recognition of senescent neutrophils I J. Savill // Clin. Sei. 1992. - Vol. 83, N 6. - P. 649-655.

341. Scaffer, M. The role of programmed cell death (apoptosis) in thymic involution following sepsis / M. Scaffer, H. Bonel, R. Sroka et al. // J. Photochem. Photobiol. -2001. Vol. 54, N 1. - P. 55-60.

342. Shalaby, M.R. Activation of human polymorphonuclear neutrophil functions by interferon-gamma and tumor necrosis factors / M.R. Shalaby, B.B. Aggarwal, E. Rinderkntcht et al. // J. Immunol. 1985. - Vol. 135. - P. 2069-2073.

343. Simonet, M. Role of virulence-associated plasmid in the uptake and killing ofYersinia pseudotuberculosisby resident macrophages / M. Simonet, J.L. Fauchere, P. Berche // Ann. Inst. Pasteur. Microbiol. 1985. - Vol. 136. - P. 283-294.

344. Song, G.Y. What is the role of interleukin 10 in polymicrobial sepsis: antiinflammatory agent or immunosuppressant? / G.Y. Song, C.S. Chung, I.H. Chaudry et al. // Surgery. 1999. - Vol. 126, N 2. - P. 378-383.

345. Southwick, F.S. Intracellular pathogenesis of Listeriosis / F.S. Southwick, D.L. Punch//New Engl. J. Med. 1996. - Vol. 334, N 12. - P. 770-776.

346. Stergaachis, A. Selective screening for Chlamidia trachomatis infection in a primary care population of women / A. Stergaachis, D. Scholes, F.E. Heidrich et al. //Am. J. Epidemiol.- 1993.-Vol. 138.-P. 143-153.

347. Strober, W. IgA deficiency / W. Strober, M.C. Sneller // Ann. Allergy. 1991. -Vol. 66, N5.-P. 363-381.

348. Tacak, S. Classification of laser irradiation and safety measures / S. Tacak, S. Stojanovic // Med. Pregl. 1998. - Vol. 51, N9-10.-P. 245-249.

349. Takada, K. Lysozyme regulates LPS-induced interleukin-6 release in mice / K. Takada, N. Ohno, T. Yadomae // Circ. Shock. 1994. - Vol. 44, N 4. - P. 169-174.

350. Taneja, R. Delayed neutrophil apoptosis in sepsis is associated with maintenance of mitochondrial transmembrane potential and reduced caspase-9 activity / R. Taneja, J. Parodo, S.H. Jia et al. // Crit.Care Med. 2004. - Vol. 32, N 7. -P. 1460-1469.

351. Taylor-Robinson, D. Diagnostic tests than are worth while for patients with stxually transmitted bacterial infections in industrial countries // D. Taylor-Robinson, A. Renton // Int. J. STD AIDS. 1990. - Vol.10, N 1. - P. 1-4.

352. Thomas, M. Differential cytokines gene expression in the genital tracts of mice infected with Chlamydia trachomatis / M. Thomas, S. Everson, M. Tusirey et al. // Proc 3rd Meet. Eur. Soc. Chiam. Res, 11-14 Sept. 1996. Vienna, 1996. - P. 82.

353. Van Epps, D.E. Enhancement of neutrophils function as a result of prior exposure to chemotactic factor / D.E. Van Epps, M.L. Garsia // J. Clin. Invest. -1980. -Vol. 66, N 2. -P.167-175.

354. Von Knethen, A. Superoxide attenuates macrophage apoptosis by NF-kappa- B and AP-1 activation that promotes promotes cyclooxygenase-2, expression / A. Von Knethen, D. Callsen, B. Brune // J. Immunol. 1999. - Vol. 163, N 5. - P. 28582866.

355. Ward, P.A. Mechanisms of neutmphil-mediated injury / P.A. Ward, L. Varani // Clin. Exp. Immunol. 1993. - Vol. 93, Suppl. 1. - P. 2.

356. Whicher, J.T. Cytokines in disease / J.T. Whicher, S.W. Evans // Clin. Chemistry. 1990.-Vol. 36, N7.-P. 1269-1281.

357. Witko-Sarsat, V. Neutropils: molecules function and path physiological aspects / V. Witko-Sarsat, P. Rieu, L. Descamps-Latsha et al. // Laboratory Investig. 2000. - Vol. 80. - P. 617-653.

358. Yeh, F.L. Changes in serum tumour necrosi factor-alpha in burned parients / F.L. Yeh, W.L. Lin, H.D. Shen et al. // Burns. 1997. - Vol. 23, N 1. - P. 6-10.

359. Yeh, F.L. Changes in circulation levels of interleukin 6 in burned patients / F.L. Yeh, W.L. Lin, H.D. Shem et al. // Burns. 1999. - Vol. 2S, N 2. - P. 131-136.

360. Yeh, F.L. Changes in circulation levels of an anti-inflammatory cytokine interleukin 10 in burned patients / F.L. Yeh, W.L. Lin, H.D. Shen // Burns. 2000. -Vol. 26, N5.-P. 454-459.

361. Yu, W. Improvement of host response to sepsis by photobiomodulation / W. Yu, L.H. Xu, J.O. Nairn et al. // Lasers Surg. Med. 1997. - Vol. 21, № 3. - P. 262268.

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета

Оглавление диссертации Гизингер, Оксана Анатольевна :: 2010 :: Челябинск

Введение диссертации по теме "Клиническая иммунология, аллергология", Гизингер, Оксана Анатольевна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Гизингер, Оксана Анатольевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций