Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Состояние гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы (ГГНС) и эпителия аденогипофиза при воздействиях на организм экспериментальных животных дестабилизмрующих факторов

На правах рукописи

Р Г Б ОД

2 О СЕН

ЗАВЕРШИНСКАЯ Людмила Ильшшчна

СОСТОЯНИЕ ГИПОТАЛАМО-ГИПОФИЗАРНОЙ НЕЙРОСЕКРЕТОРНОЙ СИСТЕМЫ (ГГНС) И ЭПИТЕЛИЯ АДЕНОГИПОФИЗА ПРИ

ВОЗДЕЙСТВИЯХ НА ОРГАНИЗМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ДЕСТАБИЛИЗИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ

(14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург - 1999

Работа выполнена на кафедре гистологии,цитологии и эмбриологии Оренбургской государственной медицинской академии и кафедре эмбриологии и гистологии Российского государственного медицинского университета.

Научные руководители .-доктор биологических наук, профессор А.А.Стадников доктор медицинских наук, профессор Т.Г.Боровая

Официальные оппоненты:доктор медицинских наук,

профессор Н.В.Ямщиков кандидат медицинских наук, доцент В.П.Соустя

Ведущая организация: Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова

Защита^_д^ссертации состоится • /1999 г

в часов на заседании диссертационного совета К 084.51.02 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу(Россия,460000,г.Оренбург,ул.Советская,6, зал заседаний диссертационного совета). тел.:(3532)77-61-03,факс:(3532)77-&

... _пг. ио.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан — 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук,доцент Ю.П.Семченко

р ад. з о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.. Вопросы физиологических и репаративных гистогенезов,тканевой детерминации и дифференцировки.их регуляции продолжают оставаться актуальными.К настоящему времени сформулирован ряд существенных положений,которые раскрывают ведущую роль гипогаламических факторов(нейропептидов и моноаминов) в реализации тканями различного генеза своих компенсаторно-приспособительных возможностей,гисто- и органотипических свойств (Поленов, 1983, 1994; Стадников,1989,1991, 1955;Акмаев,1989,1997).

Стержневым моментом в данной проблеме являются,с одной стороны, изучение гипогаламических влияний на функционирование клеток (особенно для гормонопродуцентов), а, с другой-исследование нейрогормонов.как факторов весьма важных для процессов пролиферации, роста, цитодифференцировки тканевых структур.Однако до сих пор ощущается дефицит знаний относительно выяснения механизмов избирательного и прямого влияния нейропептидов на клеточную репродукцию, характер структурно-функциональной реорганизации эпителия аденогипофиза,в т.ч. ив условиях воздействий на организм животных и человека экстремальных факторов.

Особый интерес представляет дальнейшее изучение адаптогенно-го влияния гипоталамических нонапептидов(окситоцина и вазопресси-на) на диапазон биологических свойств тканей,проявляющийся при их высокой функциональной нагрузке и повреждениях.Данный аспект приобретает несомненную актуальность в связи с имеющимися указаниями на го,что блокировка транспорта и высвобождения гипоталамических нейрогормонов в общий кровоток приводит к резкому ограничению приспособительных возможностей экспериментальных животных при анафилактическом шоке,гриппозной инфекции,церебро-кардиальном синдроме, вызванном каротидной окклюзией(Фролов,Стадни-ков,1991,1993; Долгов,Стадников,1998).Эти данные в еще большей степени привлекают внимание к изучению эффектов,оказываемых гипо-таламическими нейрогормонами на уровне периферических клеток-мишеней, обосновывают необходимость в экспериментальной проверке и

морфологической идентификации подобных эффектов.

Ставшая классической концепция стресса, провозгласившая вовлечение в реакцию организма на любое повреждающее воздействие симпато-адреналовой и гипофизарно-адренокортикальной сисгем(5е-1уе,193б),не является догмой.В ряде случаев,в зависимости от характера стрессорного влияния,можно наблюдать изменение секреции и других аденогипофизотропных гормонов.Однако спектр фенотипических свойств различных аденоцитов передней доли гипофиза при такого рода влияниях исследован недостаточно (Науменко,1994).Особенно это касается установления морфофункциональных параллелей между состоянием нонапептидергической нейросекреторной системы гипоталамуса и цитодифференцировкой железистого эпителия аденогипофи-за,определяющей сохранение или угрозу сохранения клеточного и тканевого гомеостаза.

Цель н задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в выяснении влияния стрессорных факторов на структурно-функциональные особенности нонапептидергической гшоталамо-гипофизарной нейросекреторной систеш(ГГНС) и аденогипофизарного эпителия,установлении диапазона регенераторных возможностей эпителия аденоги-пофиза и значения нейропептидов в этом процессе.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:

1.Дать структурно-функциональную характеристику супраопти-ческих.паравентрикулярных ядер гипоталамуса,нейрогипофиза и эпителия аденогипофиза в условиях умеренной дегидратации и эмоционально-болевого стресса (ЭВС) у половозрелых крыс-самцов.

2. Выяснить компенсаторно-приспособительные возможности эпителия аденогипофиза в условиях культивирования в миллипоро-бых(диффузионных) камерах на материале интактных и предварительно стрессированных животных.

3.Оценить морфологические особенности репаративной регенерации эпителия аденогипофиза при сокультивировании с ядрами гипоталамуса в следующих сочетаниях:эпителий и ядра гипоталамуса интактных животных; эпителий стрессированных животных и ядра гипоталамуса интактных крыс.

Научная новизна результатов. Уточнены и конкретизированы особенности структурно-функциональной реорганизации нонапептидергической ГГНС и эпителия аденогипофиза у крыс в условиях воздейс-

гбия на организм различных стрессоров. Усиление высвобождения ней-росекрета из нейрогипофиза(прослеженное через 4-6 суток дегидратации животных) коррелировало с возрастанием митогической активности эпителиоцитов аденогипофиза.Новыми фактами подтвержден феномен возрастания гетероморфности соматотропоцитов и разнохарактерный их ответ на водно-солевую нагрузку животных. Установлены /льтраструктурные различия тиреотропоцитов в зависимости от секреторного цикла.Для гонадотропоцитов показаны фенотилические зризнаки подавления их секреции(особенно у ФСГ-гонадотропоци-гов).Подтверждены представления о различном реагировании пептид-л моноаминергических нейросекреторных центров гипоталамуса при ЭБС.Впервые показано, что при длительном воздействии сильных стрессоров происходит разбалансировка(диспропорция) между уровнем продукции нонапептидов и моноаминов и уровнем их высвобождения из герминалей аксонов нейросекреторных клеток.При этом идентифициро-заны ультраструктурные повреждения кортико-, сомато-,тирео- и ¿аммотропоцитов.Репродуктивная активность железистого эпителия тередней доли гипофиза крыс,подвергнутых длительному сгрессорному зоздействию,понижалась в 2-2,5 раза(по сравнению с интактными жи-зотными).Впервые предпринято совместное культивирование аденоги-юфиза и крупноклеточных ядер гипоталамуса в диффузионных камерах Ln vivo. При этом получены факты,свидетельствуюшие о существенном стимулирующем воздействии гуморальных факторов супраоптических и таравентрикулярных ядер гипоталамуса на синтез ДНК и митотическую жтивность эпителиоцитов аденогипофиза не только интактных.но и дрессированных животных.Установлено позитивное влияние гумораль-шх факторов крупноклеточных ядер гипоталамуса на пролиферацию зденогипофизарного эпителия (в>моделируемых условиях диффузионных самер,особенно при сокультивировании аденогипофиза с паравентри-сулярньши ядрами).

Теоретическая и практическая значимость работы.Сведения об юобенностях структурно-функциональной реорганизации ГГНС и эпи-'елия передней доли гипофиза,наблюдаемые при стрессорных воздейс-'виях на организм млекопитающих,могут быть использованы при раз->аботке проблем адаптации,физиологии и патологии эндокринной сис-'емы,коррекции отклонений.в ГГНС,экологии.Полученные результаты и гх обобщения позволяют существенно дополнить имеющиеся знания об щаптивном,влиянии факторов гипоталамуса на функционирование раз-

личных типов гормонопродуцентов, укрепляют современную концепцию о немаловажной роли гипоталамических нонадептидов как регуляторов процессов дедифференцировки,пролиферации и роста эпителия адено-гипофиза.в том числе и при измененном гомеосгазе.

В своей совокупности проведенное исследование открывает перспективы для последующего исследования роли и значимости нона-пептидных факторов гипоталамуса в регуляции репаративных гистогенезов, создает методологическую базу для решения прикладных аспектов клинической эндокринологии, трансплантологии и вносит дополнительный вклад в учение о биологии тканей.

Внедрение.Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедрах гистологии Оренбургской,Ярославской,Российской военно-медицинской академий, кафедре анатомии и гистологии Оренбургского аграрного университета, кафедре анатомии и физиологии человека и животных Оренбургского педагогического университета, Оренбургском медицинском колледже.

Основные положения,вьшосимые на защиту.

1.Диапазон компенсаторно-приспособительных возможностей ГГШ определяется этапностью структурно-функциональной реорганизации нейросекреторных клеток,проявляющейся дифференцированно в зависимости от характера стрессорного воздействия.

2.При длительном ЭБС происходит разбалансировка(диспропорция) между уровнем продукции нонапептидов и моноаминов и степенью их высвобождения из терминален аксонов нейросекреторных клеток, что ограничивает регенераторные потенции железистого эпителия передней доли гипофиза.

3.Гуморальные факторы супраоптических (и особенно паравент-рикулярных) ядер гипоталамуса в условиях культивирования аденоги-пофиза в диффузионных камерах in vivo стимулируют ДНК синтетическую и миготическую способность аденоцитов(в том числе и у предварительно стрессированных животных).

4.Гуморальные факторы паравентрикулярных ядер имеют существенное значение для цитодифференцировки кортико- и тиреотропоци-тов.Позитивное влияние на сохранность и функционирование сомато-и маммотропоцитов (при культивировании in vivo) со стороны супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса носит сходный характер.

Апробация работы.Материалы.диссертации доложены и обсуждены

на 4-й Всероссийской конференции "Нейроэндокринологият95"(С.-Петербург, 1995),2-й съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995).научно-практической конференции морфологов Тюменской области (Тюмень,1996).региональной конференции молодых ученых и специалистов (Оренбург,1996).Российской научной конференции "Вопросы оперативной микрохирургии и микрохирургической анатомии"(Оренбург,1997),27-м Международном конгрессе Society for Neuroscience(New 0rlean,1997).

Публикации.По материалам опубликовано 8 научных работ.

Объем и структура диссертации.Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста.Работа состоит из введения,обзора литературы,главы "Материалы и методы исследования",3-х глав с описанием результатов собственных исследований,обсуждения полученных результатов, выводов.Диссертация иллюстрирована 23 рисунками. Библиография включает 73 отечественных и 60 зарубежных источников. Диссертация написана на русском языке.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При проведении работы использовано 164 белых беспородных лабораторных крыс-самцов, массой 180-230 г.Материалом для исследований служили гипофизы и крупноклеточные ядра (супраоптические и паравентрикулярные) гипоталамуса.

Опыты по дегидратации проведены на 35 крысах. Хроническая дегидратация достигалась заменой питьевой воды 2,5% раствором хлористого натрия (Беленький, 1981). Материал от этих животных для гистологического исследования был взят через 1, 3, 5, 7, 10 и 14 суток от начала эксперимента.Контролем в данной серии опытов служили 5 интактных крыс.

Эмоционально-болевой стресс ОБО воспроизводился по методике ОезхсЗегаЬо е1 а1 (1974) на 26 .животных. Материал для исследования взят в различные сроки после завершения стрессорных воздействий (через 1, 2, 3, 5, 7 и 10 суток). На 20 крысах моделировался хронический ЭБС (ежедневное 5-часовое стрессирование на протяжении 10 суток). Контролем служили б интактных крыс.

Культивирование аденогипофиза в диффузионных камерах (ЛИ) выполнено на 25 крысах.Диффузионные камеры изготавливали по методике Э.И.Дедкова (1996).Крысам-реципиентам под тиопенталовым наркозом (внутрибрюдмнно .100 мг на кг массы тела) с соблюдением правил асептики и антисептики производили подкожную имплантацию по одной диффузионной камере (ДК).

Совместное культивирование аденогипофиза и фрагментов гипоталамуса, содержащих супраоптические и паравенгрикулярные ядра, в двойных диффузионных камерах выполнено на 32 крысах. При этом были осуществлены следующие варианты опытов:сокультивирование аденогипофиза и ядер гипоталамуса от интактных животных-доноров(16 животных); сокультивирование аденогипофиза стрессированных крыс и ядер гипоталамуса,выделенных от интактных животных(16).Контролем для данной серии экспериментов служили объекты.полученные от 25 крыс 2-ой серии. После декапитации крыс-доноров быстро вскрывали полость черепа, извлекали головной мозг и помещали его в стерильный охлажденный до 44°с раствор Хенкса. Выделение крупноклеточных нейросекреторных ядер гипоталамуса производили при помощи микроскопа МБС-9,используя стереотаксические карты (Буреш с соавт., 1962).

Через 1,3,6,8,10 суток от начала имплантации животных-реципиентов умерщвляли путем декапитации под эфирным раУш-наркозом. Диффузионные камеры извлекали из подкожной соединительно-тканной капсулы и фиксировали 30 минут при комнатной температуре в смеси 22 параформальдегида и 2,51 глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,3 - 7,4) по прописи Б1аиег1 (1975). Затем снимали фильтры с колец и вместе с трансплантатами погружали их еще на 1,5 часа в свежую порцию охлажденной до +4°С фиксирующей смеси.

Для гистологического исследования на каждой стадии йыплантат погружали в 10 % нейтральный формалин, охлажденный до +4°С, и фиксировали при комнатной температуре 2 суток. После стандартной гистологической проводки материал заливали в парафин. Затем приготавливались серийные срезы толщиной 5-6 мкм на ротационном микротоме МПС-2. Парафиновые срезы окрашивались гематоксилином Манера и эозином.

■ Для электронно-микроскопического исследования материал последовательно фиксировали при т4°С в 2.5Х растворе глютарового альдегида и 2%, растворе ОбОа по МШогпе (1961), обезвоживали в

ацетонах возрастающей концентрации я заливали в эпон-812.

С каждого блока получали полутонкие (1мкм) и ультратонкие срезы, пользуясь ультратомом LKB-V. Полутонкие срезы окрашивали капельным способом метиленовым синим и основным фуксином по прописи Sato et Shamoto, 1973,а также после деэлонизации перйодатом калия и реактивом Шиффа с докраской оранжем "Ж".Ультратонкие срезы подвергали двойному контрастированию растворами уранилацетата и цитрата свинца по Reynolds (1963).

Исследование ультратонких срезов и их фотографирование производили в электронном микроскопе 8MB ICO АК при увеличениях от Х4000 до X24000.

Для изучения процессов пролиферации исследовали ДНК-синтетическую способность клеток аденогкпофиза при помощи гистоавторади-ографии имплантированного материала. За 1 час до забоя крысам-реципиентам вводили внутрибрюшинно Н3-тимидин в дозе 3,7хЮ4 Бк/г массы тела. Светооптическую гистоавторадиографию проводили на парафиновых (5 мкм) и полутонких (1мкм) срезах.Для приготовления гистоавтографов предметные стекла покрывали жидкой эмульсией типа МР" (производство НИИХИМШОТО) по методике, предложенной Жинкиным Л.Н. (1959). Экспонирование эмульсии осуществляли на протяжении 2-х месяцев при температуре +4°С и проявляли в амидоловом проявителе. Гистоавтографы на парафиновых срезах окрашивали гематоксилином Майера и эозином, а на полутонких срезах - метиленовым синим и основным фуксином. Подсчет зерен серебра производили при 1000-кратном увеличении. При этом мечеными считали те клетки, ядра которых содержали не менее 5 зерен серебра.

Морфометрические показатели получены при исследовании полутонких срезов в световом микроскопе с помощью винтового окуляр-микрометра М0В-1-15ху4.2.

. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ГИП0ТАЛАМ0-ГИП0ФИЗАРН0Й НЕЙРОСЕКРЕТОРНОЙ СИСТЕМЫ (ГГНС) У КРЫС В УСЛОВИЯХ ВОДНО-СОЛЕВОЙ НАГРУЗКИ и ЭМОЦИОНАЛЬНО-БОЛЕВОГО СТРЕССА (ЭБС)

Используя модель водно-солевой нагрузки(умеренная дегидратация крыс), мы получили электронно-микроскопические данные,свидетельствующие о стадийном характере структурно-функционального состояния нейросекрегоркых клеток супраоптических и паравентрику-лярных ядер гипоталамуса. Установлено достоверное увеличение размеров ядер,ядрышек и цитоплазмы "светлых"(исходно функционально активных) НСК в исследованных ядрах (через 2-6 суток от начала эксперимента).Через 10 суток опыта данные морфометрические показатели возвращались к таковым,свойственным интактным животным.Одновременно, на этапах 2-6 суток эксперимента,мы проследили усиление процесса высвобождения нейросекреторных продуктов на уровне нейрогипофиза через аксовазальные контакты (рис.1,2).Эти факты в полной мере согласуются со сведениями Беленького(1965,1972),Ва-гer,Ledeгis(1966),Liwigstone(1975),которые в своих исследованиях показали,что в первые сутки стрессорных воздействий на организм экспериментальных животных существенно активизируются процессы синтеза и экструзии нейросекреторного материала из НСК нонапепти-дэргических ядер гипоталамуса, через 8-10 суток происходят адаптивные процессы в ГГНС.

Бри умеренном дегидратационном стрессе(через 2-3 суток) мы выявили значительное увеличение секреторных гранул в цитоплазме соматотропоцитов(на фоне резкого расширения шероховатого эндоп-лазматического ретикулума.кринофагии и появления крупных ламел-лярных телец).С другой стороны,возрастает количество соматотропо-цитов,переполненных секреторными гранулами,имеющими узкие и непротяженные канальцы .ЗПР.Этот факт,на наш взгляд,дополнительно свидетельствует о гетероморфности популяции аденоцитов,секреткру-ющих гормон роста,проявляющейся особенно ярко при стрессорных ситуациях.

Оценив цитофизиологическую характеристику кортикотропоци-

стадии эксперимента

Рис. I. Морфометрические показатели нейросекреторньк клеток (НСК) супраоптических ядер гипоталамуса в условиях дегидратации ("светлые" функционально активные клетки).

□ цитоплазма

1 Я*

20 -4—

и чдрышко •

15 -л ! гаг дач гзп 1

т ¿г** 1 1

«¿1 №

. / О! Щ щ - г<г м 1

щ } .'1

контроль . Зсу'О* ■ б У/ТС К 14сут 0*

стадии эксперимента

Рис. 2. Морфометрические показатели нейросекретсрньк клеток паравентрикулярнмхязер гипоталамуса в условиях дегидратации ("светлые" функционально активные клетки).

тов.мы констатируем весьма высокую функциональную активность эти клеток (на стадиях 2-8 суток эксперимента). Это проявилось в значительном увеличении размеров клеток, удлинении и дополнительно* разветвлении их отростков,возрастании объемов ядер и ядрышек.Специфические секреторные гранулы локализовались по периферии цитоплазмы, в большей степени концентрируясь на сосудистом полюсе клетки (здесь же'регистрировались экзоцитозные ультраструктуры), чт< согласуется с известными представлениями о том,что активизации ГГНС как правило сочетается с повышением функциональной деятельности аденогипофизарно-адренокортикальной системы(Поле-нов,1983,1994;Филаретов,1987;фролов с ссавт.,1990).

Наш фактический материал позволил проанализировать реактивные изменения и других типов горманопродуцентов аденогипофиза( частности, гонадогропоцитов и маммотропоцитов). При этом выявле но,что последние сохраняли свои фенотипические свойства на все этапах дегидратационного стресса(в их цитоплазме присутствовал типичные секреторные гранулы полигональной формы высокой злект ронной плотности.Признаков ультраструктурных повреждений данны клеток не обнаружено. С другой стороны - для гонадотропоцитов по добные изменения были весьма характерны (лизис мембран и демаски ровка лилидов, увеличение числа аутофагосом,локальная секвестрам цитозоля,набухание и разрушения митохондрий).Таким образом,над данные подтверждают имеющиеся представления о том, что любые (дал незначительные по своей интенсивности) стрессорные воздейств* вызывают существенные отклонения в гипоталамо-гипофизарно-гонг дальной системе,могущие повлечь за собой немаловажные отклонеш в функции органов репродуктивной системы Млекопитающих (АЗ И<а < а1. ,1971;Стадников.Шевлхж, 199?;111евлюк с соавт., 1998).

В целом результаты,полученные нами на модели умеренной д< гидратации экспериментальных животных,дополнительно свидетельс вуют о существовании вакных морфофункциональных параллелях меж; уровнем функциональной активности нонапептвдэргической нейросе] реторной системы ГГНС и патофизиологическими отправлениями ра личных типов аденоцитов передней доли гипофиза. Моделируем стрессорные воздействия,безусловно,вызывают адаптивные сдвиги структурном состоянии железистого эпителия аденогипофиза(репр дуктивная активность эпителиоцитов,изменения межклеточных корр ляций,разнохарактерный ответ гормонолродуцентов).С другой стор

г»

- -

ны,анализ полученных результатов и сопоставление их с данными литературы, позволили нам приблизиться к пониманию роли и значимости гипоталамических нонапептидов не только с позиций регулирующего их воздействия на функционирование аденогипофизарного эпителия,но и как вероятных регуляторов процессов клеточного и тканевого го-меостаза. Использование нами экспериментальной модели эмоционяяь-но-болевого стресса(ЭБС) дало возможность получить дополнительный фактический материал о диапазоне компенсаторно-приспособительных возможностей ГТНС в отношении обеспечения процессов клеточного и тканевого гомеосгаза в структурах дистальной части аденогипофиза.

Прежде всего мы получили результаты,подтверждающие этапность структурно-функциональных перестроек в ГГНС(наблюдаемые нами и на модели водно-солевой нагрузки крыс).Однако,были установлены и специфические особенности реагирования нонапептидзргических и мо-ноаминэргических нейросекреторных центров подбугорья.Прежде всего было отмечено, что наряду с усилением секреции и экструзии нонапептидов происходило резкое возрастание квоты моноаминэргических терминален на уровне нейрогипофиза (рис.3).Этот феномен наиболее ярко проявился в случае хронического ЭБС(длительное стрессорное воздействие на животных в течение 10-12 суток).Одновременно происходило торможение(блокирование) экструзии нонапептидных секреторных гранул в области аксовазальных контактов НСК. Мы отмечаем, что в наших экспериментах имеет место прогрессирующее(по срокам наблюдений) возрастание в пептидэргических терминалях доли секреторных гранул с мелкозернистым центральным содержимым и так называемых "пустых пузырьков".При этом возможны также "зернистый распад" гранул и увеличение экстрагранулярного пула нейрогормонов в нейроплазме аксонов супраоптических и паравентрикулярных ядер. Через 7_10 суток нами обнаружены признаки дегенеративных изменений в перикарионах и аксонах НСК гипоталамуса.Они проявились б уплотнении нейроплазмы,агрегации секреторных гранул и лизо-сом,возникновении полиморфных включений,крупных ламеллярных телец и липидных капель гигантских размеров.Параллельно усиливалась фагоцитарная активность питуицитов.Подобные явления можно трактовать с позиций закономерностей секреторного цикла НСК,который,как известно(Поленов, 1994) возможен в двух вариантах(спокойное функционирование и интенсивное-гиперсекреция). При длительном ЭБС усиленная секреция нонапептидзргических НСК гипоталамуса происхо-

контроль 5 суток 7 суток 10 суток. 14 суток

после после после после

стимуляции стимуляции стимуляции стимуляции

стадии эксперимента

□ супрасптические ядра гипоталамуса О паравентрикулярные ядра гипоталамуса" ЕЗ нейрогипофиз

Рис. 3. Цитофотометрическое определение содержания катехоламинов в ГГНС у интактных и подвергнутых эмоционально-болевому стрессу крыс (ФМЭЛ I А, ок.40х,

ит на грани истощения,"физиологической дегенерации(по Полено-у),на фоне частичной или полной , для различных НСК,блокировки ысвобождения нейросекреторного материала в общий кровоток.

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АДЕНОГИПОФИЗА ИНГАКТНЫХ КРЫС В ПОДКОЖНО ИМПЛАНТИРОВАННЫХ ДИФФУЗИОННЫХ КАМЕРАХ.

С целью выяснения потенциальных компенсаторно-приспособи-•ельных возможностей аденоцитов гипофиза у стрессированных живот-:ых на 30 крысах-самцах проведено органотипическое культивирова-ме аденогипофиза в диффузионных камерах(донорами служили кры-;ы-самцы,подвергнутые эмоционально-болевому стрессу,а реципиекта-¡и - кнтактные крысы).

В первые сутки эксперимента центральные участки пересаженно-■о аденогипофиза подвергаются некрозу и некробиозу, клетки периферических участков частично сохраняют свою жизнеспособность: в [ервые 3 суток эксперимента погибает до 65% аденоцитов. Оставшие-:я аденоциты подвергаются дегрануляции.Наиболее выраженная дегра-¡уляция наблюдается у тирео- и гонадотроповдтов.

Вплоть до 10 суток эксперимента хорошо выявлялись соматотро-гациты, оказавшиеся более устойчивыми к процессам гибели и дегра-гуляции (хотя до 25£ этих клеток подвергалось разрушению в 1-3 зутки эксперимента).Нами отмечено изменение ультраструктурной ор-'анизации сохранных соматотропоцитов через 6-10 суток эксперимента (набухание и разрушение митохондрий, локальные повреждения мембран шероховатого эндоплазмагического регикулума, появление фупных гранул низкой электронной плотности). Однако встречались 1 соматотропоциты с большим количеством секреторных гранул, что изволило нам предположить неоднозначность реактивности соматот-эопоцитов.

Мы н& получили достоверных морфологических признаков пролиферации дегранулированных клеток, не было отмечено формирования значимых эпителиальных разрастаний в пределах имплантированных в 1Иффуэионные камеры кусочков аденогипофиза. Процессы синтеза ДНК I внутриклеточной регенерации незначительны. Указанные факты, вероятно .связаны с отсутствием адекватного стромального микроокру-кения, т.к. миллипоровые фильтры диффузионных камер препятствовали врастанию соединительнотканных элементов из окружающих сгрук-

тур организма крысы-реципиента.

СОВМЕСТНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АДЕНОГИПОФИЗА И КРУПНОКЛЕТОЧНЫХ ЯДЕР ГИПОТАЛАМУСА В ДИФФУЗИОННЫХ КАМЕРАХ IN VIVO.

При сокультивировании кусочков аденогипофиза и ядер гипоталамуса мы получили ряд существенных фенотипических отличий в реагировании эпителиальных структур аденогипофиза.При этом,исходя и; целевой установки работы,мы основное внимание сосредоточили ш исследовании реактивных свойств железистого эпителия передней доли гипофиза,взятого у доноров,предварительно подвергнутых стрес-сорным воздействиям.Особенно тщательно анализировался материал длительно стрессированных животных (ЭБС),когда регенераторный потенциал зпителиоцитов существенно понижался.

В этих опытах мы установили достоверное усиление ДНК синтетической способности дегранулирозанных аденоцитов,зндотелиоци-тов.леймиоцитов сосудов,фолликулярно-звездчатых клеток и их повышение млтотической активности (рис.4).Кроме того,через 6-8 cyro¡ культивирования появлялись эпителиальные пролифераты in situ.Kai по край имплантата.так и погружного характера.Электронно-микроскопически нам удалось также зарегистрировать жизнеспособные кор-тикотроноцигы и тиреотропоциты(особенно при совместной имплантации аденогипофиза с паравентрикулярными ядрами). Эти результаты ] полной мере подтверждают суждения нейроэндокринологов о том,чт< нонапептидкые нейрогормоны гипоталамуса вполне могут выступать ¡ качестве регуляторов пролиферации и цитодифференцировки конкретных типов аденоцитов гипофиза(Fraw ley et al. ,1985;Aritoni, 1936; Stadnikov et al.,1987).С другой стороны,мы высказываем мысль < том, что данные гипоталамические факторы возможно могут и корригировать нарушенный клеточный гомеостаз б аденогипофизе.

ВЫВОДЫ

1.Морфофункциональное состояние ГГНС в условиях стрессорны) воздействий на организм животных характеризуется определенно! этапность» патофизиологических проявлений и активности нонапепти-дзргических НСК гипоталамуса, коррелирующих с реорганизацией же-

и

к ц

с; к 2 о а. с и

3 2,5 2 1,5 1

0,5 0

щ ¡«1

, ¡»¿Уч!

¿¡Н;; ¡10>р & 1.1.1.:. 1! К'."',-.', ¡Мы'

II ¡«¡КЛ.

■.«Ак А!:1,1 ш:

щ

-1—а=

а адекогипофиз

□ аденогяпофиз+супрзоптимеские ядра

Оадвногипофиз+паравэнтрикулярные ядра

3 суток 8 суток 10 суток

стадии эксперимента

Рис. 4. Интенсивность мечения ДНК клеток аденогнпофи-за стрессированных крыс (в промишшх) в условиях сокультивирования с супраоптнческими и паравентрикулярными ядрами (интактных крыс) в диффузионных камерах.

лезистого эпителия передней доли гипофиза. Выраженность ультраструктурных изменений в НСК и аденогипофизе экспериментальных животных была более значительной при ЭБС, по сравнению с дегидратацией (водно-солевой нагрузкой).

2.В период стрессорной активизации ГГНС происходит разнохарактерный ответ различных аденоцитов гипофиза (усиление секреторной деятельности кортико-, тирео-, соматогропоцитов и ее торможение у гонадотропоцигов).

З.ЭБС.и особенно при длительном его воздействии, приводит (через 10 суток) к блокировке транспорта нейропептидов на уровне аксовазальных контактов нейрогипофиза, повреждениям мембранных структур НСК, что существенно ограничивает диапазон адаптивных, репарашвных и цитофизиологических свойств аденогипофизарного эпителия (особенно в популяции кортико- и тиреотропоцитов). Репродуктивная активность аденоцитов гипофиза крыс, подвергнутых длительному ЭБС, понижалась в 2-2,5 раза(по сравнению с ингактны-ми животными).

4.Разбалансировка(диспропорция) процессов секреции и экструзии нейросекреторного материала в ГГНС(при ЭБС) сочетается с повышением квоты моноаминэргических структур как в срединном возвышении гипоталамуса, так и на уровне нейрогипофиза.

5.Структурно-функциональная реорганизация аденоцитов передней доли гипофиза крыс в условиях стресса проявляется в усиленш гетероморфности популяции соматотропоцитов, появлении переходны? клеточных форм(маммо-соматотропоцитов), гипертрофии тирео- и кор-тикотропоцитов, фолликулярно-звездчатых клеток при одновременно} возрастании процессов ультраструктурных повреждений аденоцитов (включая дегракулированные клетки).

6.Культивирование кусочков аденогипофиза в ДК создает адек ватные условия для наблюдений отдельных этапов репаративных про цессов железистого эпителия(адаптации, роста,клеточной репродук цйи, цитодифференцировки), проявляющихся на основе предсуществую вдх паренхиматозных и стромальных элементов донорского материала изолированного в условиях имплантации от межткакевых влияний с стороны организма-реципиента.

7.В условиях сокультивирования аденогипофиза интактных крк с крупноклеточными ядрами гипоталамуса установлены лучшая сохран ность и адаптированность имплантированного железистого эпители

гипофиза, более широкий спектр реализации его гисто- и органоти-пических потенций. Факторы паравентрикулярных ядер являются существенными для цитодифференцировки тирео- и кортикотропоцитов.

8.Гуморальные факторы ноналетидэргических центров гипоталамуса в условиях культивирования аденогипофиза в ДК оказывают корригирующее влияние на репаративные свойства и объем специфических датодифференцировок железистого эпителия гипофиза, полученного от животных-доноров, предварительно подвергнутых длительным стрес-сорным воздействиям.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ЛИССЕРТЛЦИИ

1.0 существенном значении гипоталашчесшк нонапептидов(ГН) и моноаминов(МА) как межуровневых регуляторов репаративных гистогенезов //Тез.докл.Всероссийской научн.конф. "Нейрозндокриноло-гия-95".-С-Бб, 1995.- С.117-(соавт.Э.М.Дедков, И.И.Рыбкин,А.Н.Му-хортова.Л.В.Ковбык).

2.0 значении нонапептидэргической нейросекреторной системы гипоталамуса в обеспечении тканевого гомеостаза // Тез. докл. II съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока.- Новосибирск, 1995,-С. 412-413 (соавт. А.А.Стадников, Э.М.Дедков, И. И.Рыбкин, Л.В.Ковбык, А.Н.Мухортова).

3.Ультраструкгурная характеристика крупноклеточных ядер гипоталамуса и аденогипофиза у сгрессированных животных //Тез. докл.региональн. научной конференции молодых ученых и специалистов.- Оренбург, 1996.- С.6-8.

4.Динамика ультраструктурных изменений ГГНС в условиях стрессорных воздействий //Материалы научной практической конф. морфологов Тюменской обл.- Тюмень, 1996.- С. 134-136 (соавт. А.А.Стадников).

5.Hypothalamic nonapeptide- and ronoaminergic controls of the reparative histogenesis //Abstr. Ann. Meeting' Soc. Neurosci. New Orlean, La, 1997.- vol.23, part 2.- P.1453 (A.A.Stadnlkov, E. I.Dedkov, L.v'.Kovbyk, A.N.Kozlova).

6.Метод тканевых культур: принципы и значение //Мат-лы Российской научной конференции. Оренбург, 1997.- С. 123. (соавт.

А.А.Стадников, Ю.П.Семченко, Э.И.Дедков, Л.В.КовСык, A.H.K03J ва).

7.0 сокультивировании аденогипофиза длительно стрессировг ных крыс с супраоптическими ядрами гипоталамуса интактных крыс диффузионных камерах in vivo //Тез. докладов Всероссийской на;, ной конференции, посвящ. 80-летию проф. П.В.Дунаева. - Тюмень.-1998,- С.108.

8.Реактивные изменения эпителиев мягкого неба и аденогипод за в условиях их сокультивирования in vivo с нонапептидэргичесь ми ядрами гипоталамуса //Морфология. - 1998.- Т.113, N 3.- С.1 (соавт. А.А.Стадников, Л.В.Ковбык).