Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сочетанный анализ аллельного полиморфизма генов цитокинов TNFA,IL4,IL5 и HLA-DRB1,-DQA1,-DQB1 при различных вариантах клинического течения атопического дерматита

На правах рукописи

КАРПОВА Анна Валерьевна

СОЧЕТАННЫЙ АНАЛИЗ АЛЛЕЛЬНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ TNFA, IL4, ILS и HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1 ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАЙТАХ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА.

14.00.36 - Аллергология и иммунология 14.00.11 - Кожные и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□□3488895

Новосибирск- 2009

003488895

Работа выполнена в Учреждении РАМН Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной лимфологии и Учреждении РАМН Научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН

Научные руководители:

академик РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Владимир Иосифович Коненков

доктор медицинских наук Наталья Николаевна Свечникова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Константин Валентинович Гайдуль

доктор медицинских наук, профессор Александр Иванович Новиков

Ведущая организация: Сибирский государственный медицинский университет

Защита состоится " Л? " 2009 г. в /Г часов на

заседании диссертационного совета Д 001.001.01 НИИ клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630099, г.Новосибирск, ул.Ядринцевская, 14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ клинической иммунологии СО РАМН (630099, г. Новосибирск, ул.Ядринцевская, 14)

Автореферат диссертации разослан " Д/ " // 2009 г. Учёный секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук Ольга Тимофеевна Кудаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Атопический дерматит - хроническое заболевание, начинающееся в раннем детском возрасте, продолжающееся в течение всей жизни или до пубертатного периода и характеризующееся стадийностью развития воспалительного процесса кожи. Болезнь сопровождается поражением не только кожи, но и многих других органов и систем, существенно влияет на качество жизни больных (Lewis-Jones M.S. et al., 2001, Hanifin J.M, 2002).

Уровень заболеваемости атопическим дерматитом остается высоким. Возросло количество больных тяжелыми, инвалидизирующими формами (Торопова Н.П., и др., 1997, 2000, Hanifin J.M., 2002).

В последние годы появились работы, характеризующие состояние опорно-двигательного аппарата у детей, больных атопическим дерматитом, тогда как у взрослых больных состояние опорно-двигательного аппарата и причины его изменений остаются мало изученными (Торопова Н.П., 2000).

В последнее десятилетие подробно освещена роль цитокинов в возникновении клинических проявлений атопического дерматита. Различными исследователями изучались ассоциации полиморфизма аллельных вариантов генов цитокинов с атопическим дерматитом. Выявлены как положительные ассоциации (Tanaka К. et al., 2001, Novak N. et al., 2002, Wilkowska A. et al., 2003, Oiso N. et al., 2000), так и их отсутствие (Reich К., 2003, Elliot К. et al., 2001, Oiso N., et al. 2000). В связи с этим целесообразно проанализировать адлельный полиморфизм генов цитокинов, принимающих непосредственное участие в развитии атопического дерматита - IL4, IL5, TNFA.

Обнаружена связь атопических заболеваний с определенными антигенами главного комплекса гистосовместимости, в частности

установлена положительная ассоциация атопического дерматита с антигенами HLA А24, -В5, -В9, -В 12 и -В27 (Leung D.Y.M, 1996).

Цель исследования: Оценить информативность сочетанного выявления аллелей генов цитокинов 1L4, ILS, TNFA и HLA-комплекса для прогноза развития различных вариантов течения атопического дерматита. Задачи исследования:

1. Изучить характер распределения аллельных вариантов генов цитокинов IL4, 1L5, TNFA среди больных атопическим дерматитом и среди здоровых лиц.

2. Определить ассоциированность аллельных вариантов регуляторных участков генов цитокинов IL4, 1L5, TNFA с признаками дисплазии соединительной ткани системного характера и вариантами клинического течения у больных атопическим дерматитом .

3. Исследовать характер распределения HLA-антигенов среди больных атопическим дерматитом и степень их ассоциированность с вариантами клинического течения заболевания.

4. Оценить значимость выявления аллелей промоторных участков генов цитокинов IL4, 1L5, TNFA и HLA-комплеса в прогнозе течения атопического дерматита.

Научная новизна: Впервые получены данные о распределении аллельных вариантов промоторных регионов генов TNFA, IL4, ILS в точках полиморфизма TNFA G-308A, IL4 С-590Т, ILS С-703Т в популяции сибирских европеоидов и проведён сравнительный анализ характера их распределения с другими европеоидными популяциями по данным литературы, осуществлён анализ неравновесного сцепления аллелей генов TNFA и генов HLA-DRB1, -DQA1 и -DQB1, расположенных на одном участке короткого плеча хромосомы 6q.

Установлено, что генетические факторы риска развития атопического дерматита ассоциированы не только с аллелями генов HLA-

комплекса, но и с БЫР полиморфизмами промоторных регионов генов цитокинов с про- и противовоспалительной активностью.

Выявлены ассоциации клинического полиморфизма атопического дерматита, вариантов его течения, связанных с наличием или отсутствием дисплазий соединительной ткани, с развитием в коже морфологических элементов пролиферативного характера, с уровнем 1§Е с аллельными вариантами исследованных генов и их комбинаций.

Практическая значимость: Полученные данные об ассоциированности аллельных вариантов генов цитокинов и НЬА-комплекса с атопическим дерматитом позволяют использовать их в качестве дополнительных скрининговых тестов для выявления генетических факторов риска развития болезни в педиатрической практике и в семейной медицине.

Наличие ассоциированности аллельных вариантов исследованных генов с вариантами течения атопического дерматита может быть использовано в дерматологии для прогноза варианта течения болезни на ранних этапах возникновения заболевания. Положения, выносимые на защиту:

1. Носительство генотипа -590ТТ 1Ь4 является важным фактором генетической предрасположенности к развитию атопического дерматита. Аллель -308 в гена ШРА ассоциирована с тяжелым характером течения атопического дерматита, тогда как носительство «мутантного» аллеля 308А гена 77УК4 играет протективную роль в развитии тяжелого характера течения атопического дерматита.

2. Выявленные признаки неравновесного сцепления ряда генов DQA1, DQB1 и гена ТИРА в позиции -308, характерные для здоровых лиц, значительно реже выявляются среди пациентов с атопическим дерматитом, для которых достоверно наличие иных двухлокусных гаплотипов.

3. Значительные изменения в частотах встречаемости как отдельных аллелей генов TNF A, IL4, IL5 и HLA-DRB1, -DQA1, -DQB, так и их 2-х и 3-х локусных гаплотипов, позволяет использовать разработанные на этой основе иммуногенетические критерии в прогнозе вариантов клинического течения атопического дерматита.

Объем и структура диссертации: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с изложением материалов и методов исследования с описанием клинической характеристики обследуемых больных, главы результатов собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Список литературы включает 218 источников (из них 81 отечественных и 137 зарубежных). Работа изложена на 118 страницах машинописного текста.

Апробация работы и публикации: Основные результаты работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции "Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии" (Новосибирск, 29.10.08).

Апробация работы состоялась на расширенном семинаре НИИ КИ СО РАМН 25.06.09. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для опубликования результатов соискателя учёной степени кандидата медицинских наук.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Характеристика обследованных групп. Обследовано 120 больных атопическим дерматитом, находившихся на лечении в городе Новосибирске, из них 55 мужчин и 65 женщин. В группе исследованных при оценке анамнеза получены данные о характере и начале течения заболевания, частоте обострений, наличии сопутствующих заболеваний.

Группу контроля составили 210 здоровых европеоидов, проживающих в Западной Сибири, в возрасте от 18 до 45 лет, средний возраст составил 31 год.

Методы клинического анализа пациентов с атопическим дерматитом. Клинико-диагностические критерии установления диагноза соответствовали общепринятым методам. Интенсивность поражения кожи оценивалась по бальной системе ЗСОЯАО и вносили в индивидуальную карту.

Больные были разделены на 3 группы в соответствии с тяжестью поражения кожи: в 1-ой группе интенсивность поражения кожи составила до 30 баллов ЗСОЯАВ (36 человек). Во 2-ой группе - от 30 до 50 баллов (56 человек), в 3-ей группе - более 50 баллов (28 человек).

Клинические формы в зависимости от преобладания отдельных морфологических элементов определяли по классификации Т.А. Гариной и К.Н. Суворовой и соавт. (1989). Эритематосквамозная без лихенификаций встретилась у 32, эритематосквамозная с лихенификациями - у 28, лихеноидная - у 37, и пруригинозная - у 23 пациентов.

По степени тяжести больных атопическим дерматитом разделили на 3 группы - легкого "течения (36 пациентов), средней тяжести (56 пациетов) и тяжелого течения (28 человек). ,

По уровню ^Е в сыворотке крови больных атопическим дерматитом разделили на две группы - 1 группа - с нормальным уровнем ^Е (65 человек), 2 группа - с повышенным 1§Е (55 человек).

По степени выраженности дисплазии соединительной ткани больных разделили на две группы: первая - имеющих 1-2 признаков дисплазии соединительной ткани (53 человека) и вторая - больше двух признаков (67 человек).

Методы исследования иммуноглобулина Е в сыворотке крови

Для количественного определения общего IgE в сыворотке человека использовали набор «Тест-система для определения общего IgE».

Метод выделения ДНК из периферической крови

Геномную ДНК выделяли из цельной венозной крови методом высаливания с протеиназой К (Green E.D., 1990, Savage D., 1993).

Методы исследования аллельного полиморфизма генов цитокинов. Исследованы полиморфные варианты генов цитокинов: IL4 С-590Т, 1L5 С-703Т, и TNFA G-308A. Генотипирование аллельных вариантов осуществляли методом рестриктного анализа продуктов амплификации (ПДРФ - анализ), используя последовательности праймеров и параметры температурных циклов, описанные в литературе и учитывая рекомендации производителя использованного в работе амплификатора "i-Cycler" ("BioRad", США) (табл.1).

Таблица 1.

Характеристики исследованных полиморфизмов.

Ген Полимор физм Структура праймеров Фермент рестрикции Литература

IL4 С-590Т 5 '-actaggcctcacctgatacg-3 ' 5'-gttgtaatgcagtcctcctg-3' Bsrn FI' [108]

IL5 С-703Т 5'-cagggagagccaatcagt-3' 5'-atgatgtccagactccaggatct-3' AlwNI1 [192]

TNFA G-308A 5 '-ggcaataggttttgagggccat-3 ' 5'-acactccccatcctcccggct -3' Bspl911 [185]

Примечания: 1- производство "New England Biolabs", Великобритания; 2 - производство "СибЭнзим", Новосибирск.

Методы исследования полиморфизма НЬА-комплекса.

Генотипирование Г_ЖВ1, ПС>А1, П>С)В1 осуществляли методом аллель-специфической амплификации с сиквенс-специфическими праймерами (РСЛ-тБЗР) (А1ехее\> А. й а1. 1996), с использованием тест-систем АО

"ДНК-технология", Москва. Панели позволяют тестировать 13 аллелей гена DRB1, 12 аллелей гена DQB1 и В аллелей гена DQA1.

Статистические методы обработки данных. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий у?. Уровень статистической значимости принимали р<0,05.

Обработка результатов генетических исследований осуществлялась с использованием критерия отношения шансов OR [Mehta C.R., 1985]. Все расчеты проводили с помощью программ «STATISTICA for Windows 6.0» и «Microsoft Excel ХР».

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Распределение аллелей гена TNFA в позиции G-308A среди здоровых лиц и больных атоническим дерматитом.

Исследование проведено среди 120 здоровых европеоидов Западной Сибири (55 мужчин, 65 женщин).

Выявлено преобладание частоты гомозиготного варианта GG (84,2%) над гетерозиготным AG (14,2%) и гомозиготным АА (1,6%).

Полученные нами результаты исследования характера генотипов TNFA у здоровых лиц отражает закономерности, полученные как в европеоидных, так и в монголоидных популяциях, среди которых генотип GG также является преобладающим.

Исследование проведено у 52 больных атопическим дерматитом (22 мужчины, 30 женщин).

Среди больных атопическим дерматитом выявлено преобладание лиц, имеющих гомозиготный вариант GG гена TNFA, гетерозиготный вариант GA имели 5,75% больных, гомозиготный вариант - АА имели 5,75% пациентов. Выявлена близкая к достоверной (р=0,06) тенденция к

снижению частоты встречаемости гетерозиготного варианта вА у пациентов с атопическим дерматитом за счёт увеличения обоих гомозиготных вариантов гена ШГА.

Характеристики распределения аллелей и генов ТЫ РА в позиции <7-308А среди пациентов с различными вариантами клинического течения атонического дерматита.

Исследование проведено в группе 52 больных атопическим дерматитом (22 мужчин и 30 женщин).

Таблица 2.

Частота встречаемости генотипов и аллелей С-308А ШЕЛ среди больных атопическим дерматитом с легким и тяжелым вариантами течения.

Полиморфи зм генов интерлей кинов Аллель/ генотип Частота аллелей и генотипов в долях единицы при различных вариантах течения OR DK Р

Лёгкий (N=13) Тяжёлый (N=18)

TNFA -308 (G-»A) G 0.77 0.972 -10,50 -1,0 0,0168

А 0.23 0.028 10,5 9,2 0,0168

GG 0.692 0.944 -7,55 -1,3 0,0757

AG 0.154 0.056 3,09 4,4 0,3123

АА 0.154 0 8,04 8,4 0,1677

Примечание: достоверные отличия результатов при р < 0, 05.

Выявлена ассоциированность аллеля -308 G гена TNF А с тяжелым вариантом течения атопического дерматита (табл.2), в то время как носительство «мутантного» аллеля 308А гена TNFA играет протективную роль в развитии тяжелого характера течения атопического дерматита. Распределение аплельных вариантов гена IL4 в позиции С-590Т среди здоровых лиц и больных атопическим дерматитом.

Анализ распределения генотипов IL4 в позиции С-590Т среди 140 здоровых лиц европеоидного происхождения, проживающих в Новосибирской области, выявил преобладание гомозиготного СС варианта (61.42%) над гетерозиготным CT (34.29%). Аллель -590Т

(Ь=0.2143) встречается в данной группе в 3,5 раза реже, чем аллель -590С (11=0.7857).

Исследование проведено среди 31 больных атопическим дерматитом (14 мужчин и 17 женщин).

Выявлено статистически значимое снижение частоты аллеля -590С в группе больных атопическим дерматитом по сравнению с контрольной группой. Частота аллеля -590Т среди больных атопическим дерматитом более чем в 2,5 раза превосходит частоту данного аллеля в группе практически здоровых лиц.

Установлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа ТТ (32,26%) и достоверное снижение частоты гомозиготного генотипа СС среди больных атопическим ■ дерматитом (22,58%), по сравнению с контрольной группой.

Таблица 3.

Частота встречаемости генотипов и аллелей С-590Т1Ь4 в группах больных атопическим дерматитом и здоровых европеоидов Западной __Сибири.____

Полиморфиз м генов интерлейкин ов Аллель/ генотип Частота аллелей и генотипов в долях единицы (Ж БК Р

Больные атоническим дерматитом (N=31) Здоровые лица (N=140)

114-59 0 (С—>Т) С 0.4516 0.7857 -4,45 -2,4 0,0001

Т 0.5484 0.2143 4,45 4,1 0,0001

СС 0.2258 0.6142 -5,46 -4,3 0,0001

ст 0.4516 0.3429 1,54 1Д 0,0846

ТТ 0.3226 0.0429 10,63 8,8 0,0001

Примечание: достоверные отличия результатов при р < 0, 05.

Можно предположить, что ассоциированность аллельного варианта Т в данной точке полиморфизма регуляторной зоны гена 1Ь4 с высоким уровнем внутриклеточной экспрессии самого 1Ь4 и высоким уровнем его

продукции во внеклеточную среду, приводит к тому, что носители данного аллелыюго варианта являются лицами с высоким содержанием в тканях этого Th2 цитокина с противовоспалительной активностью. Распределение аллельных вариантов гена JL5 в позиции С-703Т среди здоровых лиц и больных атоническим дерматитом.

Среди 137 здоровых европеоидов Западной Сибири, из них 65 мужчины и 72 женщины установлено преобладание генотипа СС(55%), СТ составил 38%, и 7% - ТТ. Подобное соотношение генотипов выявлено в европеоидных популяциях.

Исследование распределения С-703Т промоторного участка гена IL5 проведено в группе 35 больных атопическим дерматитом (18 мужчин и 17 женщин).

£3 Больные атопическим

дерматитом ■ Здоровые европеоиды Западной Сибири

Рисунок 1. Частота встречаемости генотипов С-703ТIL5 среди больных атопическим дерматитом и здоровых лиц. Результаты сравнительного анализа показали высоко достоверное

снижение частоты выявления гомозиготных генотипов СС (17%) среди

больных атопическим дерматитом по сравнению со здоровыми лицами

(55%). Наряду с этим у пациентов достоверно чаще встречался

гетерозиготный вариант СТ (63%). Выявлена тенденция к повышению

частоты встречаемости гомозиготного варианта ТТ по сравнению с

контрольной группой, однако, выявленные различия не достоверны.

Характеристика распределения гена ILS в позиции С-703Т среди пациентов с различными вариантами клинического течения атонического дерматита.

Проведен сравнительный анализ частоты встречаемости генотипов и аллелей С-703Т ILS среди 35 больных атопическим дерматитом с различными вариантами тяжести течения заболевания. В группе больных с лёгким течением (12 человек) заболевания по сравнению со среднетяжёлым течением (10 человек) достоверно чаще встречался генотип СТ (р=0,0433), и достоверно реже генотип ТТ(р=0,0287).

Распределение аллельных вариантов HLA-комплекса среди здоровых лиц и больных атопическим дерматитом.

Изучены особенности распределения аллельных вариантов HLA-комплекса 88 пациентов (42 мужчины и 46 женщин). Контрольную группу составили 210 здоровых европеоидов Западной Сибири (102 мужчины и 108 женщины).

Выявлены достоверные различия в частоте встречаемости указанных генов в группе больных атопическим дерматитом и доноров: HLA-DQB 1*0201 достоверно чаще встречали в группе доноров. Среди больных атопическим дерматитом и доноров выявлены следующие различия: аллели DQA1*0102, DQB1*0302, DR13, DQA1*0301, DQA1*0501 и генотипы DQB1*0301-DQB1*0302, DRB1*01-DRB1*11 достоверно чаще обнаруживали в группе больных атопическим дерматитом (таблица 4).

Анализ частоты встречаемости показал, что двухлокусные гаплотипы DRBP04-DQB 1*0302, DQAl*0103-DQBl*0602-8 и DQA1*0301-DQB 1*0302 встречаются достоверно чаще в группе больных атопическим дерматитом. Напротив, частота встречаемости ассоциации DRB1 * 15-DQА1 *0102 была достоверно выше в группе доноров.

Гаплотипы 011В1*04-ВС}Л1*0301-0(ЗВ 1*0302 и ШШ1*15-0(ЗА1*0103-ВС)В 1*0602-8 достоверно чаще выявляли среди больных атопическим дерматитом по сравнению с группой здоровых доноров, тогда как гаплотип В11В1*15-В(ЗА1*0102-ВС)В 1*0602-8 доминировал в группе здоровых лиц.

Таблица 4.

Частота встречаемости (%) гаплотипов НЬА локусов 011В, БС^А, БС)В в

группах больных атопическим дерматитом и здоровых европеоидов _Западносибирского региона. __^_

НЬА гаплотип : Частота (И) в группе больных атопическим дерматитом (п=88) Частота (И) в группе здоровых доноров (п=210) Р (Ж БК

011В1*15-В(ЗА1*0102 0,045 0,128 0,015 -3,10 -4,5

ОК.Б1*04-Бдв 1*0302 0,102 0,043 0,033 2,54 3,8

Э(}А 1 *0103-Б(}В1 »0602-8 0,170 0,090 0,024 2,07 2,8

0<ЗА1*0301-0(5В1*0302 0,102 0,043 0,033 2,54 3,8

1ЖВ1 *04-В<ЗА 1 *0301 -ООВ 1*0302 0,102 0,043 0,033 2,54 3,8

ВИВ1*15-0(ЗА1*0102-БОВ 1*0602-8 0,045 0,116 0,024 -2,84 -4,2

ШШ1*15-0(ЗА1*0103-ООВ 1*0602-8 0,068 0,016 0,018 5,05 6,8

Примечание: достоверные отличия результатов при р < 0, 05

Сравнительный анализ распределения генов НЬА-комплекса II класса среди пациентов с различными вариантами клинического течения атонического дерматита.

Изучены распределения генов НЬА-комплекса II класса у 30 больных атопическим дерматитом. Эритематосквамозная форма заболевания без лихенификаций встречалась у 15 больных, эритематосквамозная с лихенификациями встретилась у 7 человек, лихеноидная - у 5 и пруригинозная - у 3 больных. Группы были объединены по выраженности пролиферативных процессов в эпидермисе

на эритемато-сквамозную и пруригинозно-лихеноидную формы заболевания.

Анализ полученных результатов показал, что аллели HLA-A3, DR11; генотип DR11/DR16; гаплотипы А2/В49, АЗ/В7, А9/В27, A0/DR11, A2/DR11, A3/DR16, A9/DR2, A9/DR11, B7/DR2 , B27/DR11 достоверно чаще выявляются у больных с эритематосквамозной формой заболевания по сравнению с лихеноидной и пруригинозной. Определение у больного аллелей HLA-A3, DR11, а также генотипов DR11/DR16; гаплотипов А2/В49, АЗ/В7, А9/В27, A0/DR11, A2/DR11, A3/DR16, A9/DR2, A9/DR11, B7/DR2, B27/DR11 свидетельствует о том, что у него будет эритематосквамозная форма заболевания. Напротив, клинические формы атопического дерматита, сопровождающиеся появлением на коже морфологических элементов, связанных с пролиферативными процессами в коже, ассоциированы с HLA-гаплотипами АО/В 13, A2/DR3.

Проанализирован характер распределения HLA-антигенов и их различных комбинаций у 81 больного с различной тяжестью течения заболевания. Выявлена следующая закономерность: для больных с легким течением болезни характерно достоверное увеличение частоты встречаемости HLA-антигена В13 (RR=7.0); гаплотипов АЗ/В7 (RR=2.10), A3/DR2 (RR=2.71), B7/DR2 (RR=2.53), B7/DR6 (RR=3.48) и уменьшение частоты встречаемости, по сравнению с контролем, антигена DR3 (RR=-6.25). Тяжелое течение заболевания негативно ассоциировано с такими комбинациями антигенов как A2/DR3 (RR=-4.02) и B7/DR5 (RR=-6.12).

Сочетание HLA-антигена В7 с антигеном DR2 или DR6 характерно для легкого течения атопического дерматита, тогда как сочетание данного антигена с HLA-DR5 - для тяжелого течения.

Проведён анализ ассоциированности HLA II с IgE у 34 больных атопическим дерматитом (18 женщин и 16 мужчин). Выделены две группы - первую группу с нормальным уровнем IgE составили 16 человек

(12 женщин и 4 мужчин), вторую группу, с повышенным уровнем ^Е составили 18 человек (6 женщин и 12 мужчин). При сравнительном анализе частоты встречаемости антигенов НЬА-А, и -В достоверных ассоциаций выявлено не было. Для НЬА -011 локусов в группе больных атопическим дерматитом выявлена достоверно значимая ассоциация НЬА- антигена 01Ш1-0602-8 и повышенного уровня ^Е -, а также НЬА ОС? В1 0602-8 -31,25 и 64,71.

В группах с минимальными и максимальными проявлениями дисплазий соединительной ткани отмечены следующие достоверные отличия: аллель НЬА-ОЯ2 и НЬА-генотип ОЯ2ЮЯЗ; НЬА-гаплотипы А9/В15, А2ЛЖ2, А2ЛЖЗ, А9ЛЖ15, В13ЛЖ2 чаще выявляются у больных с выраженными проявлениями дисплазии соединительной ткани. Отмечено достоверное преобладание НЬА-ВЯ7 и НЬА-гаплотипов А2/В0, А2ЯЖ7, А10ЛЖ7, В0ЛЖ5 , В13ЛЖ5 у больных с минимальными проявлениями дисплазии соединительной ткани, что позволило рассматривать наличие указанных генов и гаплотипов как признаки благоприятного течения атопического дерматита.

Неравновесное сцепление аллелей гена ТМРА в позиции С-308А с аллелями генов НЬА- БЯВ1, В()А1 и -ВОН! среди здоровых сибирских европеоидов и больных атопическим дерматитом.

Анализ частоты встречаемости четырёхлокусных гаплотипов ОГШ1-ОС>А11-ОС>В1- ТИРА показал, что частота гаплотипов Б11В1*03-0(^1*0501-0(381*0201- ШРА -308 А и 011В1*15-0(ЗА1*0102-0(ЗВ 1*0602-8- ШРА -308 в выше в контрольной группе по сравнению с группой больных атопическим дерматитом, что указывает на протективное значение данных гаплотипов в отношении развития атопического дерматита (табл.5).

Таблица 5

Частота встречаемости (Ь) гаплотипов НЬА генов ОЯВ1, 0<ЗА1, БСШ 1 и

"ШИА (-308) в группах больных атопическим дерматитом и здоровых _европеоидов Западной Сибири._

HLA-TNF гаплотипы Больные Здоровые P OP ДК

DRB1*13- TNFA(-308)G 0,159 0,083 0,023 2,15 2,9

DQA1*0101- TNFA(-308)A 0,062 0,005 0,008 7,61 8,5

DQB 1*0201- TNF A(-308)G 0,087 0,161 0,041 -1,93 -2,5

DRB 1 »03-DQA1 »0501 -DQB 1*0201-TNFA(-308)A 0,011 0,048 0,028 -9,27 -9,5

DRB 1 * 15-DQA1 *0102-DQB1 »0602-08-TNFA(-308)G 0,045 0,116 0,031 -2,71 -4,0

Примечание: ОР - относительный риск заболевания, ДК - диагностический коэффициент.

Прогностическая значимость выявления в генотипе пациентов с атоническим дерматиты аллелышх вариантов генов цитокинов TNFA, IL4, ILS и генов HLA-комплекса.

Исследование генотипа аллельных вариантов генов цитокинов TNF A, IL4, ILS и генов HLA-комплекса может служить прогностическим признаком того или иного варианта течения заболевания.

Выявление аллеля -308 G гена TNF А свидетельствует о высокой вероятности тяжелого варианта течения атопического дерматита.

Тестирование аллеля -590Т 1L4 у потомков больных атопическим дерматитом может свидетельствовать о наличии или отсутствии предрасположенности к данному заболеванию.

Наличие HLA- антигенов DRB1-0602-8, HLA DQ В1 0602-8 - 31,25 и 64,71 свидетельствует о развитии варианта атопического дерматита с повышенным уровнем IgE.

Ранним прогностическим признаком лёгкого характера течения атопического дерматита является сочетание HLA- антигена В7 с

антигеном DR2 или DR6, а сочетание HLA-антигена В7 с антигеном DR5 характерно для тяжелого течения атопического дерматита.

Наличие аллеля HLA-DR7 и HLA-гаплотипов А2/В0, A2/DR7, A10/DR7, B0/DR5, B13/DR5 следует рассматривать как ранние прогностические признаки развития диспластических процессов в соединительной ткани, не сопровождающихся системностью. Таким образом, выявление этих генов позволит прогнозировать и более благоприятное течение атопического дерматита, не сопровождающегося диспластическими процессами во внутренних органах.

Сочетание гаплотипов DRB1 *03-DQA 1 *0501 -DQB1 *0201 - TNFA -308 А и DRB1*15-DQA1*0102-DQB 1*0602-8- TNFA -308 G напротив, свидетельствует о малой вероятности развития атопического дерматита.

ВЫВОДЫ

1. Факторами риска развития атопического дерматита в популяции сибирских европеоидов являются наличие в геноме пациента генотипа АА в промоторной зоне гена TNFA G -308А, ассоциированного с высоким уровнем продукции этого провоспалительного цитокина, аллеля Т и генотипа ТТ в полиморфной позиции С-590Т гена IL4, аллеля Т и генотипа ТТ полиморфного участка С-703Т гена IL5, генотипов DRB 1 *04-DQB 1*0302 и DRB 1 * 15-DQA 1*0103-DQB1 *0602-8 генов HLA комплекса.

2. Протективную роль в развитии атопического дерматита играют: наличие в геноме пациента генотипа AG в промоторной зоне гена TNFA G -308А, аллеля С и генотипа СС полиморфного участка С-590Т гена IL4, аллеля С и генотипа СС полиморфного участка С-703Т гена IL5, генотипов DRB1*15-DQA1*0102 и DRBl*15-DQAl*0102-DQBl*0602-8 генов HLA комплекса.

3. Вариант длительного тяжелого течения атопического дерматита ассоциируется с наличием в геноме пациента аллеля G и генотипа GG в промоторной зоне гена TNFA G -308А, сцепленного с низким уровнем

продукции этого провоспалительного цитокина, генотипа ТТ полиморфного участка С-703Т гена IL5 и HLA-специфичностей -А9, -DR3, A2-DR3, B7-DR5.

4. Среди пациентов с атопическим дерматитом в значительной части выявляются клинические проявления дисплазии соединительной ткани, ассоциированной с наличием в геноме генотипа ТТ полиморфного участка С-703Т гена 1L5 и HLA-специфичностей - DR2, A2-DR3, А9-DR15, B13-DR2.

5. Среди пациентов с атопическим дерматитом установлено наличие неравновесного сцепление аллелей гена TNFA в позиции G-308A с аллелями генов HLA - DRB1, DQA1 и -DQB1, расположенными на одном участке хромосомы 6q по аллелям DRB1*13-77VK4-308G и DQA1 *0101- TNFA -308, не характерное для здоровых лиц.

6. Комплексное типирование генов цитокинов с про- и противоспалительной активностью и генов главного комплеса гистосовместимости позволяет выявить генетическую

предрасположенность к развитию атопического дерматита и развития болезни.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В педиатрической практике и в семейной медицине при появлении начальных признаков системных нарушений состояния кожных покровов целесообразно проводить генотипирование пациента по участкам полиморфизма генов TNFA, IL4, IL5 и HLA-комплекса для выявления генетических факторов риска развития атопического дерматита.

2. На начальных этапах установлении диагноза атопического дерматита рекомедуется проводить генотипирование исследованных полиморфизмов генов цитокинов и главного комплекса гистосовместимости для установления дальнейшего варианта его

клинического течения и предрасположенности к дисплазиям соединительной ткани.

3. Лечение атопического дерматита рекомедуется проводить с учетом генетических данных о преимущественном характере его клинического течения и выраженности диспластических нарушений соединительной ткани.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Коненков В.И., Свечникова H.H., Карпова A.B. Роль аллелыюго полиморфизма генов цитокинов в развитии атопического дерматита Система цитокинов. Теоретические и практические аспекты / Под ред. В.А.Козлова, С.В.Сенникова. - Новосибирск: Наука, 2004. -324 с. -С.49-61.

2. Свечникова H.H., Карпова A.B. Отдаленные результаты наружной терапии больных атопическим дерматитом элиделом. IX Всероссийский съезд дерматовенерологов. Тезисы научных работ. Т.1. Москва,-2005-С.34.

3. Карпова A.B., Коненков В.И., Свечникова H.H. Ассоциированность аллелей С-590Т IL-4 с различной тяжестью течения атопического дерматита/ Материалы научных трудов I Международного форума медицины и красоты 17-19 ноября 2006 года - Москва - С. 131 -132.

4. Коненков В.И., Карпова A.B., Свечникова H.H., Голованова О.В., Прокофьев В.Ф Ассоциированность аллелей гена фактора некроза опухоли (G- 308 А) с HLA-антигенами локусов DRB1, DQA1, DQB1 у больных атопическим дерматитом. Иммунология. - 2007. - №6. -С.ЗЗ 1-335

5. Коненков В.И., Свечникова H.H., Карпова A.B., Прокофьев В.Ф. Ассоциированность аллелей (G-308) гена TNFA с пролиферативными и диспластическими процессами при атопическом дерматите. Генетика человека и патология // Сборник научных трудов под редакцией В.П. Пузырева. Выпуск 8 - Томск. - Издательство «Печатная Мануфактура» - 2007 - С.85 - 88.

6. Карпова A.B., Свечникова H.H., Голованова О.В., Прокофьев В.Ф.

B.И.Коненков Ассоциированность аллелей гена фактора некроза опухолей TNFA с HLA- антигенами у больных атопическим дерматитом/ Генетика человека и патология // Сборник научных трудов под редакцией В.П. Пузырева. Выпуск 8 - Томск. -Издательство «Печатная Мануфактура» - 2007 - С.84 - 85.

7. Карпова A.B., Н.Н.Свечникова, В.Ф.Прокофьев, В.И.Коненков Генотипы и аллели G - 308А TNFA у больных атопическим дерматитом с различным характером течения заболевания Российский иммунологический журнал - 2008 - том 2 (11), № 2-3 -

C.216

8. Карпова A.B., Н.Н.Свечникова, В.Ф.Прокофьев, В.И.Коненков Иммуногенетическая характеристика больных атопическим дерматитом с разной степенью выраженности диспластических процессов/ Российский иммунологический журнал - 2008 - том 2 (11), № 2-3 -С.225.

9. Карпова A.B., Н.Н.Свечникова, В.Ф.Прокофьев, В.И.Коненков Иммуногенетические особенности атопического дерматита при разной степени выраженности пролиферетивных и диспластических процессов. Тезисы международной конференции "Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии" 29-29.10.08, С. 164-167

10. В.И.Коненков, О.В.Голованова, В.В.Дортман, А.В.Шевченко, А.В.Карпова. Полиморфизм гена TNFA и неравновесное сцепление TNFA и HLA-генов II класса (DRB1, DQA1 и DQB1) в популяции сибирских европеоидов. Иммунология №1,2008, С.6-10.

Подписано к печати 10.11.2009 формат-60х84 1/16,Усл. псч.л. 1,5

Бумага: офсетная Печать: трафаретная Тираж: 50 экз. Номер заказа № 612 Типография ООО "ЮГУС-ПРИНТ", ИНН 5402467637, г. Новосибирск, ул. Залесского, 4,