Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сочетанные нарушения эритро- и иммунопоэза при экспериментальных вторичных иммунодефицитах и методы их коррекции

РГБ ОД

2 Ь йЕВ

На правах рукописи

Сухенко Татьяна Германовна

СОЧЕТАНИЕ НАРУШЕНИЯ ЭРИТРО- И ШМУНОПОЭЗА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ВТОРИЧНЫХ ИЫМУНОДЕФИЦИТАХ И МЕТОДЫ ИХ КОРРЕКЦИИ.

14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 1996

Работа выполнена в Институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН

Научный руководитель - член-корреспондент РАЫН, профессор

В.А.Козлов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук К.В.Гайдулъ;

кандидат медицинских наук Л.П.Коненкова

Ведущая организация - НИИ фармакологии ТНЦ СЮ РАМН

Залита диссертации состоится "_" _ 1996 года

в_часов на заседании диссертационного совета

Д 001.01.01 Института клинической иммунологии СО РАМН (6Э0091, Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАЫН

Автореферат разослан 1Ци"'-1996 года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических

О.Т.Кудаева

Актуальность проблемы. Актуальной проблемой современной клинической иммунологии является исследование механизмов развития и клинических проявлений иммунологической недостаточности в процессе формирования широкого круга заболеваний инфекционно-воспалительной, опухолевой, в том числе лимфопролиферативной природы.

Несмотря на определенные успехи в диагностике и лечении иммуно-дефицитных сосотояний, в настоящее время не сформулировано понятие "вторичный иммунодефицит", которое отражало бы его сущность как иммунопатологического процесса (Ширинский B.C., 1991, Кожевников B.C., 1994). Нет и общепринятой классификации вторичных иммунодефицитов. Адекватный выбор средств и методов иммунокоррекции обусловливает необходимость иметь представление об основных нарушениях иммуногенеза, т.е. основываться на патогенетических принципах оценки иммунной системы (Ширинский B.C., ЯукЕ.А., 1991, Ширинский B.C., 1994).

Среди множества подходов к изучению механизмов развития иммунологической недостаточности важным представляется изучение взаимосвязи иммуно- и гемопоэза (в частности, эритропоэза). Данные литературы последних лет убедительно свидетельствуют о регулирующем влиянии клеточных элементов иммунной системы на эритропоэз в физиологических и патологических условиях (Johnson C.S. е.а., 1988, 1989). Например, система мононуклеарных фагоцитов, и ее цитокины обладают активирующей способностью в отношении ранних и ингибирующей - в отношении поздних эритроидных предшественников (Johnson C.S. е.а., 1989). Т-клетки с фенотипом цитотоксических/супрессоров и их продукты, такие как ИФН-т, подавляют как грануло-, так и эритропоэз, влияя на стволовую кроветворную клетку (СКН) (Tanaka Н. е.а., 1989, Torok-Storb В., 1990, Tong J. е.а., 1991). Действие В-клеточного звена на эритропоэз представлено широким спектром аутоантител, как к эритроцитам, так и к костномозговым предшественникам (Elkerbout E.A.S., Hijmans W. е.а., 1974).

Мало изученным остается вопрос о влиянии элементов эритрона на иммунопозз. Известно, что бластные клетки эритроидного ряда и секре-тируемый ими фактор подавляют гуморальный иммунный ответ, ингибируют пролиферацию В-клеток in vitro (Козлов В.А. и др., 1982, Митасов A.B., 1990).

В литературе вопрос о влиянии эритрона на иммунитет рассматривается преимущественно в физиологических условиях (Козлов В.А. и др., 1982). Имеются лишь единичные работы, указывающие на дисфункцию -эритропоэза как на одно' из звеньев патогенеза иммунопатологического заболевания (Коненкова Л.П. и др., 1992, Козлов В.А. и др., 1995), причем клинические данные свидетельствуют о том, что анемия при многих хронических заболеваниях с иммунологической недостаточностью

- г -

отягощает течение болевни и ухудшает прогноз. В то же время патогенез такой анемии недостаточно изучен. Известна роль основного моно-кина - ИЛ-1 - в развитии анемии при таких заболеваниях человека, как системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА) (Кетлинский С.А. и др., 1993, Maury C.P.J, е.а., 1988).

Следует заметить, что экспериментальное моделирование различных иммунопатологических состояний, как правило, не затрагивает сочетан-ныо нарушения эритро- и иммунопоэза. Имеются лишь отдельные работы, посвяценные изучению состояния эритрона на моделях СКВ, РА, СПИДа, обычно рассматривающие отдельные этапы дифференцировки эритрона.

Рассмотрение сочетанных нарушений эритро- и иммунопоэза в развитии иммунодефицита (ИД) позволит не только полнее раскрыть механизмы ИД, но и найти оптимальные пути коррекции анемического и иммунодефи-цитного синдромов. Такой подход позволит проводить поиск иммуноак-тивних средств с широким спектром действия, в том числе зритропоэз-модулируюшлх.

Цель и задачи исследования. Цель настоящего исследования: изучить процесс формирования сочетанных нарушений эритро- и иммунопоэза на различных моделях иммунодефицита и оценить возможность их коррекции гипоксией и новыми иммуноактивными препаратами.

В pawitax проблемы выполнялись следующие задачи:

1. Изучить состояние иммунной системы на моделях РТПХ-индуцированного иммунодефицита и иммунокомплексного гломерулонефрита у мыпей (C57B1/6:£DBA/2)F1 (B5D2F1) и иммунодефицита у мышей BALB/c (гуморальный ю«ункий ответ, фагоцитоз, продукция ИЛ-1 и «НО-« макрофагами).

2. Оценить состояние эритрона на экспериментальных моделях иммунодефицита (на мышах B6D2F1 и BALB/c) и иммунокомплексного гломерулонефрита (на мышах B5D2F1).

3. Изучить влияние хронической гипоксии на показатели эритро- и иммунопоэза У мышей B6D2F1 с иммунодефицитом.

4. Изучить эффект лечения серо- и кислородсодержащими производными алканкарбоноЕых кислот на показатели эритро- и иммунопоэза на моделях иммунодефицита и иммунокомплексного гломерулонефрита у мъией B5D2F1.

Научная новизна результатов исследовании. Впервые показана возможность моделирования различных по патогенезу анемических синдромов, возникающих на фоне вторичного ИД, индуцированного хронической РТПХ. Так, у мышей B6D2F1 с ИД, индуцированном переносом лимфоцитов от одного из родителей, развивается гемолитическая анемия с гиперплазией эритроидных предшественников в костном мозге. У мышей другой экспериментальной модели - BALB/c, иммунодефицит, индуцированный переносом лимфоидных клеток мышей BALB/c, иммунных к аллоантигенам, со-

четался с гипопластической анемией. Выявлены различия в макрофагаль-ном звене иммунитета: у мышей В602П с ИД сопровождался повышенной, а у мышей ВАЬВ/с - пониженной функциональной активностью фагоцитов.

Впервые установлено лечебное действие хронической гипоксии при ИД, сочетающемся с анемией. Хроническая гипоксия приводила к повышению первичного гуморального иммунного ответа у мышей В602П с ИД и купировала анемию с устранением гиперплазии эритрона в костном мозге.

Впервые показано, что производные алканкарбоновых кислот (АКК) обладают сочетанными эритро- и иммунотропными свойствами. Так, обнаружено, что трекрезан не только купирует анемию, но и повышает первичный гуморальный иммунный ответ у мышей В602П с ИД. Соединение ВМ-2-84, устраняя анемический синдром, обладает выраженными противовоспалительными свойствами у мышей В602П с ИД и иммунокомплексным гломерулонефритом (ИНГ).

Теоретическая и практическая значимость работы. Работа расширяет представления об эритро-иммунных взаимоотношениях в формировании иммунопатологических процессов. Гиперплазия эритроидного ростка кроветворения с повышенным содержанием эритробластов в костном мозге у мышей В602П с ИД и ИКГ является одной из причин подавления первичного гуморального иммунного ответа.

Проведенные исследования позволяют заключить, что использованные нами модели вторичного ИД отражают различные варианты патологии эритрона и могут быть" использованы для дальнейшего изучения механизмов эритро-иммунных взаимоотношений в условиях иммунопатологии.

Модели легко воспроизводятся, стандартизуются и являются адекватными для поиска и апробации новых иммуно- и эритротропных лекарственных средств и методов на доклиническом этапе скрининга.

Патогенетически обоснованное лечение анемического синдрома хронической гипоксией приводит к одновременной коррекции иммунологических показателей, что позволяет применять этот метод в качестве терапии вторичных ИД, особенно осложненных анемией.

При изучении влияния производных АКК на показатели иммуно- и эритропоэза на моделях ИД обнаружены сочетанные модулирующие свойства, позволяющие отнести эти вещества к новому классу синтетических лекарственных средств. Установлено, что производные АКК обладают выраженными противовоспалительными свойствами, что подтверждалось как снижением уровня протеинурии, так и улучшением морфологической картины почечной ткани, заключающемся в уменьшении явлений хронического воспаления.

В настоящее время на серосодержащее производное АКК - ВМ-2-84 -подана заявка на патент "Иммуномодулятор" (заяв-са N 93-16671 (016342) от 31.03.93). На трекрезан подана заявка на патент "Способ

лечения вторичного ИД" (заявка N 94038588 от 14.10.94)

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Развитие экспериментального иммунодефицита у мышей B6D2F1 и BALB/c сопровождается выраженными нарушениями эритропоэза, проявляющимися анемическим синдромом с гиперплазией или гипоплазией костномозгового эритропоэза, а также гипер- или гипофункцией макрофагаль-ного эвена иммунитета.

2. Иммуностимулирующее и противоанемическое действие хронической гипоксии у мышей B6D2F1 с ИД сочетается с подавлением стимулированного эритропоэза.

3. Производные алканкарбоновых кислот (соединение ВМ-2-84 и трекрезан) обладают выраженными иммуноактивными свойствами в отношении гуморального и клеточно-опосредованного иммунного ответа у ин-тактных и больных мышей. Препараты купируют анемию,• приводят к уменьшению количества эритроидых предшественников в костном мозге и устранению воспалительного процесса у мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены на Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Патогенез хронического воспаления" (Новосибирск, 1991), 1-ом Съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), на 1-ом международном симпозиуме РАЛАН (Москва,1992), научном отчете Института клинической иммунологии СО РАМН за 1993г. (Новосибирск, 1994), 12-ом Европейском съезде иммунологов (Барселона, 1994). Апробация диссертации состоялась на расширенном научном семинаре Института клинической иммунологии СО РАМН 17 ноября 1995г. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, содержит 34 рисунка и 5 таблиц; состоит из введения, обзора литературы (часть I), описания материалов и методов исследования (часть II), изложения результатов собственных исследований (часть III), их обсуждения, заключения и выводов. Список литературы включает 368 источников, из них 76 на русском языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Животные. В работе использовали мышей-гибридов B6D2F1, полученных из экспериментально-биологической клиники животных СО РАМН, мышей самкок DBA/2 , самцов BALB/c и С57В1/6, полученных из питомника "Столбовая" г.Москвы. Всего в работе использовано 2500 мышей.

Модели иммунодефицита. Моделирование иммунодефицита и иммуно-комплексного гломерулонефрита у мышей B6D2F1 осуществляли путем введения самкам B6D2F1 лимфоидных клеток родительской линии DBA/2. Вводили клетки лимфатических узлов, тимуса и селезенки в соотношении 1:3:6 соответственно (Klmura М. е.а., 1987). Поражение почек оценивали по уровню протеинурии. В опытах использовали мышей на 6-7 ме-

сяце заболевания, началом заболевания был условно принят момент индукции РТПХ (Колесникова О.П. и др., 1991).

Морфологический анализ органов мышей-гибридов B6D2F1, как ин-тактных, так и с РТПХ-индуцированной иммунопатологией проводили методом обзорной микроскопии и общегистологическими полуколичественными методами сотрудники Института лимфологии СЮ РАМН, к.м.н. В.А.Логинов и НИИ ПК СО РАМН, к.м.н. П.М.Ларионов.

Моделирование иммунодефицита у мышей BALB/c осуществляли путем серии переносов лимфоцитов, иммунных к аллоантигенам (Kim S.S., Hui K.M., 1985). В опытах использовались мыши на 5-6 месяце заболевания, началом заболевания был условно принят момент индукции РТПХ.

Количество АОК в селезенке мышей оценивали Hä 4-е сутки после внутривенной иммунизации эритроцитами барана (ЭБ) 2x10е по количеству локальных зон гемолиза в полужидкой среде модифицированным методом (Cunningham A.J.,1968).

Определение показателя гематокрита и гемоглобина. Показатель гематокрита определяли при помощи микроцентрифуги МЦГ-8. Уровень гемоглобина измеряли спектрофотометрически при длине волны 405 нм. Количества гемоглобина в крови рассчитывали по калибровочной кривой.

Окраска мазков крови. Для подсчета количества ретикулоцитов использовали мазки периферической крови, окрашенные азуром II.

Окраска мазков костного мозга. Мазки окрашивали азуром 11 - эо- • зином по Паппенгекму-Крюкову и подсчитывали процент ядросодержащих эритроидных предшественников.

Определение количества БОЕ-э в костном мозге. Оценку количества эритроидных бурстобразующих единиц (БОЕ-э) проводили по общепринятой методике с использованием 0,9% метилцеллюлозной культуры (Гольдберг Е.Д. и др., 1992). Содержание БОЕ-э подсчитывали на 105 клеток костного мозга (НИМ).

Определение количества КОЕс в костном мозге экспериментальных животных проводили с использованием метода экзогенного колониеобра-зования (Till G.E., McCulloch Е.А., 1961). Облучение животных проводили на аппаратуре РУМ-150/30-101 при мощности дозы 0,5 Гр/мин, напряжении 130 кВ, силе тока 10 мА, фильтре А1-3.

Определение ИЛ-1-активности. Активность ИЛ-1 в супернатантах пе-ритонеальных макрофагов определяли методом измерения пролиферативно-го ответа тимоцитов на субоптимальную дозу митогена (Кон-А) (Phillips R., Rabson A.R., 1983, Cavaillon J.-M., 1989). Результаты представлены в индексе стимуляции (ИС).

Определение биологической активность фактора некроза опуходи-ct (ФНО-cQ. Для определения уровня ФНО-й в макрофагальном супернатанте использовали ФНО-а-чувствительную клеточную линию L-929 (Flick D.A.,

Gifford S.E. ,1984). Активность ФНО-ct оценивали по результатам супра-витальной окраски монослоя клеток кристалл виолетом (окончательно учитывали процент погибших клеток).

Метод оценки фагоцитоза эритроцитов барана. Оценку Fc-зависимо-го фагоцитоза ЭБ в стимулированных пептоном перитонеальных макрофагов проводили согласно методу Rummage J.А. с соавторами (1985), основанному на спектрофотометрическом определении количества гемоглобина в фагоцитированных эритроцитах. Результаты выражали в условных единицах оптической плотности при длине волны 405нм.

Воздействие хронической_гипоксией._Хроническую гипоксическую

гипоксию вызывали путем "подъема" животных н^ высоту 3000 метров над уровнем моря в условиях барокамеры. "Подъем" проводили по 18 часов 6 раз с интервалом 30 часов.

Тестируемые соединения. В работе использовались следующие соединения: а) кислородсодержащее производное АКК - трекрезан, б) серосодержащее производное алканкарбоновых кислот, химическая структура которого является предметом авторских свидетельств с запретом открытой публикации, поэтому в дальнейшем оно будет иметь обозначение ВЫ-2-84. Препараты синтезированы в Иркутском институте органической химии СО РАН и любезно предоставлены д.х.н., профессором А.Н.Мирско-вой. Больным животным трекрезан и ВМ-2-84 вводили внутрибрюшинно в заранее оттестированной дозе 50 мг/кг 12 раз с интервалом 48 часов. Оценку интересующих нас параметров проводили через сутки после последней инъекции препарата.

Статистическая обработка._Средние величины сравнивали с помощью

непараметрического критерия U Вилкоксона-Манна-Уитни. Везде в таблицах даны значения средней и ее стандартной ошибки (М+m).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Состояние зритро- и иммунопозза у экспериментальной модели иммунодефицита и иммунокомплексного гломерулонефрита на мышах B6D2F1. Из данных литературы известно, что у мышей B6D2F1 хроническая РТПХ приводит к развитию аутоиммунного заболевания, по клиническим и морфологическим признакам сходного с СКВ у человека. У больных животных B6D2F1 выявлены политональная В-клеточная активация с повышенной секрецией IgG, аутоантител к ДНК, отсутствие способности В-клеток отвечать на дополнительные стимулы (ЛПС) (Rolink A.G. е.а., 1989, Колесникова О.П. и др., 1991, Кудаева О.Т. и др., 1992) и пониженный пролиферативный ответ Т-лимфоцитов (ТузоваМ.Н., 1995). У больных животных развивался иммунокомплексный гломерулснефрит различной степени выраженности - от минимальных изменений в почечных клубочках до гломерулосклероза. Степень выраженности морфологических изменений в почках коррелировала с протеинурией: от 0,3 до 3 г/л и более (Ко-

десникова О.П. и др., 1991, Appleby Р. е.а., 1989).

Из работы Кудаевой О. Т. и соавт. (1992), следует, что после индукции РТПХ у части животных не развивается протеинурия, при этом у животных с наличием и без протеинурии отмечается снижение первичного гуморального иммунного ответа.

Нами в работе использовались мыши B6D2F1 двух групп: I - мыши без протеинурии, II - животные с уровнем белка в моче 5,3+0,14 г/л. Кроме высокой протеинурии, у животных II группы развивался асцит, что свидетельствует о наличии у них нефротического синдрома (таблица 1).

Основным критерием наличия ИД мы считали снижение количества АОК в селезенке в ответ на иммунизацию Т-зависимым антигеном. Установлено, что у животных обеих групп отмечается достоверное снижение первичного гуморального иммунного ответа.

Развитие ИД верифицировали также и по морфологическому исследованию органов иммунной системы.

Помимо этого, у животных обеих опытных групп выявлено достоверное понижение массы тела и повышение показателя СОЭ. При этом спленоме-галия обнаружена только у животных II группы.

Таким образом, данные литературы (Кудаева О.Т. и др., 1992), а также собственные результаты позволили нам заключить, что в результате индукции РТПХ мыши B6D2F1 разделились на две группы. У мышей I группы явления ИД сопровождались меньшими клиническимим проявлениями, отсутствием белка з моче. Эта группа условно обозначена нами как группа с КД. .У животных II группы развивался более тяжелый ИД в сочетании с нефритическим синдромом, причина которого морфологически идентифицирована как мембранозный гломерулонефрит - группа этих мышей условно обозначена нами как группа с ИКГ.

Причиной сниженного первичного гуморального иммунного ответа у мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ может быть дисфункция Т-лимфоцитов-хелперов (ТХ) (с повышенной активностью ТХ 2 типа и их цитокинов и пониженной - ТХ1) (Dubey С., Bellen В., 1991), иммунодепрессивное действие макрофагов (Колесникова О.П. и др., 1991) и их продуктов (простагланди-HOB; КФН-г) (Klimpe! G.I?, е.а., 1989, Howell С. е.а., 1992).

В последнее гремя в литературе появились сообщения, что иммуно-супрессилными свойстесми обладают не только клетки иммунной системы и их цитокины, «о и ядросодерзкащие клетки эритроидной природы (Козлов В. А. и др., 1984, Дырлова Й.Т., 1987, Цырлова И.Г. и др., 1988, Чеглякова В.В. и др., 1389). Синтезируемый ими Эр-супрессорный фактор подавляет гуморальный иммунный отьет (Чеглякова В.В., 1984), и может участвовать в патогенезе ИД у исследуемых нами мышей.

В связи с этим следующий раздел работы был посвящен изучению состоянии' зритрона у больных мышей B6D2F1.

Нами установлено, что у животных с ИД и ИКГ развивается анемический синдром, о чем свидетельствует достоверное снижение уровня гемоглобина и геыатокрита. Для уточнения природы анемии нами оценивался зритропозз на уровне ранних и поздних предшественников.

У животных обеих опытных групп анемический синдром сопровождался ретикулоцитозом в периферической крови, достоверным повышением ядросодержащих эритроидных предшественников в мазках костного мозга и количества БОЕ-э в костном мозге (таблица 1).

В отношении количества КС®с выявлены различия в группах мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ. Так, у мышей с ИД на 6-7 месяце болезни имелось достоверное повышение числа КОЕс-5 и КОЕс-8 по сравнению с интактны-ми животными. Иная картина наблюдалась у мышей с ИКГ: число КОЕс-5 достоверно снижено, а количество КОЕс-8 не отличалось от контрольных значений.

Повышение количества БОЕ-э и ядросодержащих эритроидных предшественников свидетельствует о стимуляции эритропоэза у исследуемых нами мышей. Анемия у мышей B6D2F1, сопровождающаяся ретикулоцитозом и гиперплазией костномозгового эритропоэза в костном мозге, развивается в результате повышенного кроверазрушения, т.е. является гемолитической. Appleby Р. с соавт. (1989) обнаружили, что у мышей с РТПХ-инду-цированным гломерулонефритом имеются аутоантитела к эритроцитам, поэтому можно предположить, что у исследуемых нами животных гемолиз эритроцитов имеет аутоиммунную природу. У мышей с ИКГ повышение количества эритроидных ядросодержащих клеток и количества БОЕ-э сочеталось с пониженным содержанием КОЕс-5 и нормальным КОЕс-8. Наблюдаемое нами состояние эритропоэза может быть обусловлено влиянием им-мунокомпетентных клеток, в частности макрофагов и их цитокинов.

Показано, что избыток макрофагов или длительное культивирование клеток костного мозга с фагоцитами приводило к подавлению эритропоэза (Furmanskl Ph., Johnson O.S., 1990). Действие макрофагов на зритропозз опосредовано рядом факторов: простатландинами, интерферонами, ИЛ-1, ФНО-о и др. Так, ФНО-ct и ИФН-т, действуя синергично, подавляют рост как ранних (БОЕ-э), так и поздних (КОЕ-э) эритроидных предшественников (Le J., VIleek J., 1987, Roodman 6.D. e.a., 1987). Интер-лейкин-1 в небольших количествах обладает стимулирующим (Wang C.Q. e.a., 1992), а в больших - ингибирующим влиянием на эритропоэз (Johnson С.S. e.a., 1989). Известно, что ИЛ-1 стимулирует образование КОЕс-12, не оказывая при этом влияния на КОЕс-5 (Громыхина Н.Ю. и др., 1988). В связи с этим мы изучали функциональную активность макрофагов у мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ.

Установлено, что у мышей обеих групп достоверно усилена фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов, повышена спонтанная

продукция ими ИЛ-1 в сравнении с интактными животными, тогда как ЛПС-стимулированная не отличалась от контрольных значений. При изучении продукции ФНО-й перитонеальными макрофагами выявлено, что у животных с ИД на 6-7 месяце болезни спонтанная секреция ФНО-й достоверно снижалась, а ЛПС-стимулированная практически не отличалась от контрольных значений. У мышей с ИКР при оценке спонтанной продукции ФИО-« перитонеальными макрофагами не обнаружено статистически значимых отличий от контроля, в то же время стимуляция макрофагов ЛПС приводила к достоверному повышению продукции цитокина в сравнении с контролем.

Прямее влияние макрофагов и их продуктов на эритропоэз может сочетаться с опосредованным действием ИЛ-1 и ФНО-й на формирование и поддержание аутоиммунного процесса. Известно, что эти два цитокина усиливают выработку аутоантител В-лимфоцитами, активируя Т-лимфоциты- хелперы 2 типа (Кетлинский С.А. и др.,1992, 1993) и непосредственно влияя на В-лимфоциты (Jelinek D.F. е.а., 1987).

Таким образом, возможно, анемия у мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ связана с повышенной секрецией макрофагами ИЛ-1 и ФНО-й. Монокины, активируя ТХ2, вызьшают синтез ростовых и дифференцировочных лимфокинов для В-клеток - ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, которые, в свою очередь, усиливают пролиферацио В-лимфоцитов, вызывая поликлональную активацию В-клеток и синтез иммуноглобулинов, в том числе аутоантител к эритроцитам.

Известно, что ИЛ-1 и ФНО-й обладают различными эффектами на эритропоэз, в зависимости от присутствия или отсутствия эритропоэтина. Обнаружено, что негативный эффект ИЛ-1 на эритропоэз опосредован ФНО-ct и ГМ-КСФ и отменяется эритропоэтином, при избытке которого ИЛ-1 синергично с ним стимулирует эритрон (Wang C.Q. е.а., 1991).

Учитывая данные литературы и полученные результаты, можно предположить, что у шшей B6D2F1 с ИД гемолиз эритроцитов вызывает повышенную продукцию эритропоэтина, который совместно с ИЛ-1 участвует в стимуляции костномозгового эритропоэза. При этом обнаружено, что у мышей с ИД секреция ФНО-й макрофагами понижена.

Несколько иной механизм анемии, вероятно, наблюдается у мышей B6D2F1 с ИКГ, у которых выявлена повышенная секреция ФНО-а. Неоходи-мо учесть, что, вероятно, у мышей с ИКГ поражение почечной ткани приводит к понижению продукции эритропоэтина. Кроме того, установлено, что ФНО-й уменьшает чувствительность эритробластов к действию эритропоэтина (Jongen M. е.а., 1993). Поэтому сочетанным действием ИЛ-1 и ФНО-й можно объяснить пониженное количество КОЕс-5 у мышей с ИКГ.

Таким образом, у исследуемых нами мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ анемия сочетается с гиперплазией эритрона на уровне эритрокариоцитов. Известно, что ядросодержащие эритроидные клетки и секретируемый ими

фактор обладают супрессирующими свойствами в отношении первичного гуморального иммунного ответа (Козлов в.А. и др., 1982, Цырлова И.Г. и др., 1988). Учитывая это, можно предположить, что именно действие эритробластов .и Эр-супрессорного фактора является одной из причин подавленного ¡^-ответа у мышей В602П обеих опытных групп.

Помимо того, что ИЛ-1 и ФНО-а являются медиаторами иммунных реакций, обладают регулирующим влиянием на эритропоэз, они известны как провоспалительные цитокины (Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1991, Маянский Д.Н., 1991). Обнаруженное повышение продукции ИЛ-1 и ФНО-а у мышей В602Р1 с ИКГ сопровождается деструктивными изменениями в почечной ткани и высокой протеинурией, что не противоречит данным литературы.

Таблица 1.

Показатели эритро- и иммунопоэза у мышей В602П интактных и больных ИД и ИКГ.

исследуемые показатели контроль мыши с ИД мыши с ИКГ

кол-во АОК в селезенке 45600+1234 17200+1599"" 12600+1120*"

протеинурия (г/л) 0,25+0,07 0,57+0,3 5,3+0,6""

масса тела (г) 25,0+0,8 22,4+0,3" 21,79+0,9"*

селезеночный индекс (X) 1,05+0,4 1,2+0,2 1,9+0,2""

показатель СОЭ (мм/час) 1,5+0,4 3,6+0,9" 12,1+2,7"

уровень гемоглобина (г/л) 199,5+3,5 166,6+2,4"" 137,3+6,9""

показатель гематокрита (X) 49,2+0,38 45,84+0,24"" 39,7+1,38""

кол-во ретикулоцитов(°/оо) 10,0+1,32 15,9+1,78"* 26,25+4,7**

кол-во эритрокариоцитов(Х) 28,35+1,2 33,26+1,55" 37,57+2,9*

количество Б0Е-э/Ю5ККМ 7,8+0,87 14,4+1,5"" 21,3+1,8""

кол-во К0Ес-5/селезенку 10,3+0,5 14,2+0,98" 8,6+0,3"

кол-во К0Ес-8/селезенку 12,8+1,7 19,2+2,1"" 12,4+2,2

фагоцитоз (усл. ед.) 340,5+12,98 601,21+21,4" 1029,4+34,2""

продукция ИЛ-1 (ИС):

спонтанная 1,56+0,22 2,53+0,34** 2,61+0,62**

ЛПС-стимулированная 5,96+ 1,5 6,1+1,4 7,27+2,3

продукция ФНО-а (%):

спонтанная 13,8+2,0 3,5+1,8*" 10,66+5,0

ЛПС-стимулированная 39,0+3,2 42,1+5,0 52,8+4,0*"

Здесь и далее - * Р<0,05, "" ~ Р<0,01 относительно контроля. Кроме того, известно, что ФНО-а опосредует развитие кахексии, действуя на адипоциты, приводя к усилению катаболитических и ослаблению анаболических процессов в организме (Недоспасов С.Ф. и др.,

- и -

1988). Именно повышенной продукцией ФНО-et, обнаруженной у мышей B6D2F1 с ИКГ, можно объяснить значительное снижение массы тела.

Состояние эритро- и иммунопоэза у экспериментальной модели СПИД-подобного заболевания на мышах BALB/c. Из данных литературы известно, что у мышей BALB/c серия переносов сингенных лимфоцитов, иммунных к аллоантигенам, приводит к активации эндогенного ретровируса и развитию заболевания, по клиническим и иммунологическим признакам сходного со СПИДом у человека (Kim B.S., Hui K.M., 1985).

Из данных, представленных в таблице 2, видно, что у животных на 5-6 месяце после индукции РТПХ достоверно снижалась масса тела, развивалась спленомегалия. Кроме того, отмечались дерматит, конъюнктивит, диарея.

Мы оценивали первичный гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген у больных и интактных мышей BALB/c по количеству АОК в селезенке. Установлено, что у опытных мышей отмечалось достоверное снижение IgM-антителообразования по сравнению с интактными животными. В последующем опытная группа животных условно обозначена нами как группа с ИД.

Таким образом, из полученных нами результатов, а также из данных литературы (KimB.S., Hui K.M., 1985) следует, что у мышей BALB/c развивается иммунодефицитный синдром со спленомегалией, значительным снижением иммунной реакции на Т-зависимые и Т-независимые антигены, снижением пролиферативного ответа клеток селезенки на Т- и В-клеточ-ные митогены, повышением уровня иммуноглобулинов в крови, а также развитием вторичных инфекций.

Изменения в иммунитете, вероятно, сопровождаются нарушением эритропоэза, поэтому следующим этапом работы была оценка состояния эритрона у больных мышей BALB/c.

При исследовании периферической крови больных мышей BALB/c выявлена анемия, для уточнения характера которой проведено изучение эритропоэза на различных уровнях. Обнаружено, что у мышей с ИД относительное число ретикулоцитов в периферической крови было достоверно снижено по сравнению с контролем, что свидетельствует о снижении ре-генерационной способности костного мозга. Изучение эритропоэза на уровне костномозговых предшественников показало его гипоплазию, так как у мышей BALB/c с ИД наблюдали значительное снижение количества морфологически идентифицируемых ядросодержащих эритроидных клеток в мазках костного мозка, числа БСЕ-з и количества экзогенных селезеночных колоний КОЕс-5 и КОЕс-8 (таблица 2).

Особое значение в патогенезе гипопластических анемий отводится дефекту продукции гуморальных факторов роста. Так, установлено, что при апластической анемии (АА) снижена транскрипция генов и продукция

ИЛ-6 и ГМ-КОФ, ИЛ-3 (Stark R. е.а., 1993, Scopes J.е.а.,1994). При этом роль макрофагов и их цитокинов в патогенезе АА остается недостаточно изученной. В связи с этим мы изучали состояние макрофагов и их цитокинов у больных мышей BALB/c.

При оценке функциональной активности макрофагов установлено, что у мышей BALB/c с ИД достоверно снижен фагоцитоз ЭБ перитонеальными макрофагами, спонтанная и ЛПС-стимулированная продукция ИЛ-1 и ФНО-й.

Известно, что ИЛ-1 оказывает стимулирующее действие на гуморальный иммунный ответ, увеличивает количество АОК в селезенке (Boraschi D. е.а., 1990), стимулирует пролиферацию Т-лимфоцитов (Кетлинский С.А. и др., 1992). Таким образом, нарушение функциональной активности макрофагов (уменьшение продукции ИЛ-1), вероятно, имеет значение в снижении Т-клеточной пролиферации у мышей BALB/c с ИД (Kim В.S., Hui K.M., 1985) и ослаблении у них первичного гуморального иммунного ответа. Кроме того, сниженние активности фагоцитоза способствует развитию у животных оппортунистической инфекции и уменьшению продолжительности жизни.

Для нормального кроветворения необходима сбалансированная продукция цитокинов (Nakayama N. е.а., 1989), а их дисфункция играет большое значение в патогенезе АА, в том числе вторичной при СПИДе. Исследования последних лет показали, что ИЛ-1 вызывает усиление пролиферации полипотентных предшественников гемопоэза в сочетании с КСФ, ИЛ-3 и ИЛ-6 (Ikebuchi К. е.а., 1988). Действуя синергично с эритропоэтином, ИЛ-1 стимулирует рост БСЕ-э как в костном мозге, так и в селезенке (Johnson С.S. е.а., 1989). ИЛ-1 может также действовать на рост колоний, индуцируя синтез простагландина Ег (Zucall J.R. е.а. ,1986), который обладает стимулирующим влиянием на эритро-поэз у человека и животных In vivo и In vitro (Повещенко А.Ф., 1987, Fisher J.W. е.а., 1984). Пониженная продукция ИЛ-1 и действующих синергично с ним цитокинов и медиаторов (ИЛ-3, эритропоэтин, простаг-ландин Ег) приводит к подавлению эритропоэза. У больных АА подавление БОЕ-э, КСЁ-э, ГМ-КОЕ сопровождалось пониженной продукцией ИЛ-1 (Nakao S. е.а., 1989, Childs В., 1991, Gluckman G.S., 1993), ИЛ-3, ГМ-КОФ и ИЛ-6 (Amano Joshlro е.а., 1993, Scopes J. е.а., 1994). Следовательно, у исследуемых нами мышей BALB/c понижением активности макрофагов и продукции ИЛ-1 можно объяснить гипоплазию эритрона.

Мы также предполагаем, что наблюдаемая у мышей BALB/c спленомега-лия в значительной степени.объясняется компенсаторной гиперплазией эритроидных предшественников, которые, синтезируя Эр-супрессорный фактор, поддерживают ИД. Наше предположение основывается на данных (Hellman S., Grata Н.Е., 1968), показавших, что угнетение зритропоз-

за на уровне костномозговых предшественников у мышей может сопровождаться компенсаторной гиперплазией ядросодержащих эритроидных предшественников в селезенке.

Таблица 2.

Показатели эритро- и иммунопоэза у мышей ВАЬВ/с интактных и больных ИД.

исследуемые показатели контроль мыши с ИД

масса тела (г) 21,1+0,4 16,9+0,3""

селезеночный индекс (%) 1,07+0,03 2,3+0,1""

количество АОК/селезенку 168100+12653 60126+1232""

уровень гемоглобина (г/л) 221,1+6,2 168,8+6,7""

показатель гематокрита (X) 55,1+0,7 48,1+0,8""

кол-воретикулоцитов (°/оо) 10,9+1,42 6,7+1,2""

кол-во эритрокариоцитов (%) 22,1+0,8 14,9+0,3*"

кол-во Б0Е-э/105ШШ 23,8+0,9 6,9+1,8*"

количество К0Ес-5/селез. 15,1+0,6 2,1+0,9""

количество К0Ес-8/селез. 19,2+1,2 1,6+0,3**

фагоцитоз (усл. ед.) 351,6+14,6 205,13+9,3*

продукция ИЛ-1 (ИС):

спонтанная 5,4+0,5 3,06+0,7*

ЛПС-стимулированная 10,3+0,8 5,6+1,1**

продукция ФНО-й (%):

спонтанная 17,6+1,8 9,8+1,6*

ЛПС-стимулированная 42,4+2,9 24,5+2,1*

В литературе практически отсутствуют разработки, касающиеся совместного рассмотрения эритро- и иммунотропных свойств лекарственных препаратов, а тем более попытки коррекции вторичных ИД через воздействие на эритропоэз. Используя в качестве модели мышей B6D2F1 с РТПХ-индуцированными ИД и ИКГ, мы изучали действие эритротропного фактора - хронической гипоксии - на состояние иммунного ответа, а также оценивали влияние на эритропоэз и иммунный статус новых имму-номодуляторов - производных АКК.

Влияние хронической гипоксии на иммуно- и эритропоэз у мышей B6D2F1 с ИД. Известно, что гипоксия, стимулируя синтез эритропоэтина почечной тканью , применяется для лечения анемий с гипоплазией эрит-рона (Jelkmann W. е.а., 1988, Eckardt K.U. е.а., 1989). Однако данных о применении хронической гипоксии для лечения умеренной гемолитической анемии с гиперрегенераторным эритропоэзом и ИД нами в доступной литературе не встречено.

Известно, что в зависимости от режима гипоксии меняется синтез эритропоэтина (Макаров В.П. и др.,1992). Так, острая гипоксия приводит к повышению синтеза гормона, а хроническая - к снижению.

Учитывая вышесказанное, мы проводили коррекцию анемии у мышей Вбюгп с ИД хронической гипоксией, вызванной пребыванием мышей в условиях барокамеры.

Полученные нами данные свидетельствуют, что после воздействия хронической гипоксией у больных животных нормализовалась масса тела (таблица 3).

При исследовании влияния хронической гипоксии на количество АОК в селезенке обнаружено, что у интактных мышей гипоксия не оказывала влияния на 1£М-ответ. У животных с ИД хроническая гипоксия приводила к достоверному увеличению количества А<Ж в селезенке.

Иммуностимулирующий эффект хронической гипоксии у исследуемых нами мышей с ИД не описан в литературе, и мы предположили, что он связан с влиянием на эритропоэв. Для проверки этой гипотезы оценивали эритропозз у больных мышей В602П после воздействия хронической гипоксией.

Установлено, что гипоксия не только полностью купирует анемию у животных с ИД, но и повышает уровень гемоглобина и гематокрита выше контрольных значений.

Известно, что хроническая гипоксия приводит к полицитемии с последующим снижением синтеза и секреции эритропоэтина, влекущим за собой подавление эритропоэза (Макаров В.П. и др., 1992). По-видимому, у исследуемых нами мышей также наблюдается подавление эритрона под влиянием гипоксии. Для подтверждения этого предположения нами исследован эритропозз на уровне поздних и ранних предшественников.

После воздействия гипоксией нормализовалось количество ретикуло-цитов в периферической крови и показатели эритрона в костном мозге больных мышей обеих групп. Так, количество эритрокариоцитов в мазках костного мозга мышей с ИД достоверно снижалось до нормальных значении. Уровень БСЕ-э в костном мозге больных мышей также снижался (таблица 3). При этом установлено, что гипоксия практически не оказывала влияния на число КОЕс-5, а количество КОЕс-8 достоверно снижалось.

Таким образом, из полученных данных следует, что хроническая гипоксия у больных мышей вызывает подавление эритропоэза, начиная с уровня БОЕ-э.

Как следует из таблицы 3, хроническая гипоксия приводит к незначительному повышению как спонтанной, так и ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-1 у интактных животных. У больных мышей с ИД отмечалось незначительное снижение уровня ИЛ-1, продуцируемого макрофагами спонтанно и под влиянием ЛПС. Аналогичные данные получены и при оп-

ределении влияния гипоксии на продукцию ФНО-й у мышей с ид. Установлено, что после гипоксии у мышей с ид отмечается незначительное снижение как спонтанной, так и ЛПС-с табулированной продукции ФИО-«.

Таким образом, можно предположить следующий механизм воздействия хронической гипоксии на эритропоэз и иммунный ответ у мышей В602И с ИД. Первоначальное увеличение синтеза эритропоэтина ведет к росту уровня гемоглобина в крови. Параллельно снижается секреция фракция которых содержит аутоантитела к эритроцитам, что также способствует купированию анемии. О подавляющей роли хронической гипоксии на синтез иммуноглобулинов Б у здоровых людей свидетельствуют данные работы Горошковой А.Н. (1988). При восстановлении уровня гемоглобина крови устраняется гиперплазия эритрона на уровне костномозговых предшественников, т.е. снижается выработка Эр-супрессорного фактора эритробластами. Последнее обстоятельство и объясняет повышение количество АОК в селезенке.

Таблица 3.

Влияние гипоксии на массу тела и показатели эритро- и иммунопоэ-за у мышей В602Р1 с ИД.

исследуемые контроль контроль+ мыши с ИД мыши с ИД+

показатели гипоксия гипоксия

масса тела (г) 25,5+0,3 - 22,6+0,4*" 27,0+0, 4##

кол-во АОК/селез. 48403+2634 48048+1998 8664+1560"" 17906+1693**

гемоглобин (г/л) 197,5+3,5 224,5+7,85* 153,3+1,4"" 212,4+5,6**

гематокрит (%) 49,25+0,4 50,0+1,29 44,8+0,24"" 50,9+0,6**

ретикулоциты (°/0о) 10,1+1,32 - 16,1+1,3"" 7,83+1,9**

зритрокариоциты (%) 30,1+1,2 - 36,3+1,55" 27,7+2,8*

кол-во Б0Е-э/105ККМ 7,8+0,87 - 17,8+1,8"" 11,3+1,2*

кол-во К0Ес-5/селез. 10,3+1,5 - 14,5+2,1" 18,9+3,5

кол-во К0Ес-8/селез. 12,8+1,7 - 19,2+1,9*" 13,56+1,8*

продукция ИЛ-1 (ИС):

спонтанная 1,4+0,15 1,8+1,3 2,4+0,25"" 2,1+0,34

ЛПС-стимулир. 5,3+0,7 6,1+0,52 5,6+0,6 4,0+0,7

продукция ФНО-й (%):

спонтанная 13,2+1,8 - 5,3+2,2* 6,1+1,6

ЛПС-стимулир. 40,1+4,8 - 42,1+5,0 40,4+2,4

Здесь и далее - *-Р<0,05, *"-Р<0,01 относительно контроля; #-Р<0,05, ##-Р<0,01 относительно больных мышей.

Отсутствие влияния хронической гипоксии на секреторную активность макрофагов у исследуемых нами мышей совпадает с данными лите-

ратуры (Гроыыхина Н.Ю., Зейналиева Э.Н.,1989), и свидетельствует о непосредственном регуляторном воздействии эритрона на гуморальный иммунный ответ.

Влияние кислородсодержащего производного АКК - трекрезана - на показатели эритро- и иммунопоэза у больных мышей B6D2F1 с ИД. Установлено, что трекрезан обладает иммуностимулирующими свойствами как у интактных (63400+2665 до введения препарата и 130100+8366 после введения), так и больных мышей B6D2F1 с ИД, о чем свидетельствует достоверное повышение количества АОК в селезенке (таблица 4).

Устранение иммуносупрессии у больных мышей под влиянием трекрезана может быть обусловлено нормализацией функций ТХ1 и ТХ2, а также устранением супрессирующего влияния эритроидных клеток. Для проверки последнего предположения мы оценивали влияние трекрезана на эритро-поэз у мышей B6D2F1 с ИД.

Для этой цели определяли показатели гемоглобина, гематокрита, количество ретикулоцитов в крови, содержание ядросодержащих эритроидных предшественников и БОЕ-э в костном мозге, а также число экзогенных селезеночных колоний КОЕс-5 и КОЕс-8. Курсовое введение трекрезана мышам с анемическим синдромом приводило к купированию анемии (таблица 4). Содержание ретикулоцитов в периферической крови, число эритрокариоцитов в миелограмме, а также количество БОЕ-э в костном мозге достоверно снижалось. При изучении влияния трекрезана на экзогенные селезеночные колонии у мышей с ИД установлено, что препарат незначительно повышает количества КОЕс-5 и достоверно снижает число КОЕс-8.

Таким образом, установлено, что трекрезан, устраняя анемию, снижает гипертрофию эритроидного ростка кроветворения у мышей с ИД, начиная с БОЕ-э. Такое действие трекрезана на эритропоэз может быть связано как с прямым влиянием на эритрон, так и опосредованным, изменением уровня секреции монокинов. С этой целью мы оценивали влияние трекрезана на секрецию ИЛ-1 перитонеальными макрофагами больных мышей.

Обнаружили, что после введения трекрезана достоверно снижалась как спонтанная, так и ЛПС-стимулированная продукция ИЛ-1 у больных мышей. Учитывая,, что ИЛ-1 обладает способностью стимулировать рост БОЕ-э (Johnsos С.S. е.а.,1989), а также, усиливая активность ТХ2, активировать синтез аутоантител (Кетлинский С.А. и др.,1992), можно предположить, что уменьшение секреции ИЛ-1 под влиянием трекрезана является одной Из причин устранения анемии у исследуемых нами животных.

Известно, что ИЛ-1, являясь провоспалительным цитокином, играет большое значение в развитии иммунного воспаления в почках. Учитывая,

что у мышей В602И с ИД и ИКГ секреция ИЛ-1 повышена, что, очевидно, имеет значение в развитии нефрита, можно предположить, что снижение секреции ИЛ-1 под влиянием трс1фезака должно уменьшать поражение почек.

Важным показателем активности воспалительного процесса в клубочках является концентрация белка в моче. Уровень белка в моче у мышей В602П с ИКГ определяли после введения им трекрезана. Установлено, что у животных с ИКГ отмечалось достоверное снижение протеинурии почти в 2 раза (с 4,8+0,7 до лечения до 2,5+0,6 после лечения).

Учитывая полученные результаты, можно предположить следующий механизм действия трекрезана: препарат, усиливая активность ТХ1, приводит к подавлению функций ТХ2. Снижение активности ТХ2 может быть опосредовано и пониженной секрецией ИЛ-1. Устранение гиперфункции ТХ2 и их стимулирующих воздействий в отношении В-клеточного звена иммунитета приводит к уменьшению выработки аутоантител к эритроцитам. Нормализация эритропоэза сопровождается устранением гиперплазии эритрона и, возможно, снижением секреции Эр-супрессорного фактора, что способствует нормализации иммунного статуса.

Таблица 4.

Влияние трекрезана на эритро- и иммунопоэз у мышей В602Р1, больных ИД.

исследуемые показатели контроль мыши с ИД мыши с ИД+ трекрезан

количество АОК/сел. 45600+1234 12640+2564** 30826+2676**

гемоглобин (г/л) 189,0+2,9 165,6+2,3"* 191,57+5,6**

гематокрит (%) 49,4+0,4 45,9+0,14"* 47,07+0,53*

ретикулоциты (°/оо) 10,3+1,3 15,9+0,76** 10,0+0,7**

эритрокариоциты (%) 28,5+1,5 34,4+1,5** 27,8+2,3*

кол-во БОЕ-э/Ю5 ККМ 6,75+0,53 20,25+1,6** 12,7+2,3?#

кол-во К0Ес-5/селез. 9,7+0,8 14,21+1,3* 16,1+2,09

кол-во К0Ес-8/селез. 12,1+1,4 19,8+1,4*" 12,4+1,1*

продукция ИЛ-1 (ИС): 1,35+0,26**

спонтанная 1,51+0,2 2,49+0,25**

ЛПС-стимулированная 5,0+0,2 5,9+0,6 2,68+0,33**

Влияние серосодержащего производного АКК - соединения ВМ-2-84 - на иммуно- и эритропозз у мышей B6D2F1 с ИД и ИКГ. Установлено, что введение препарата больным животным приводило к достоверному повышению массы тела у мышей с ИКГ, у животных с ИД препарат на массу тела не влиял. Выявлено также достоверное снижение показателя COQ у жи-

вотных обеих групп. При оценке влияния препарата на протеинурию обнаружено, что соединение ЕМ-2-84 достоверно снижает количество белка в моче (в 1,7 раза) у мышей с ИКГ (таблица 5).

Морфологическое изучение ткани почек у мышей с ИКГ показало, что после курса лечения БМ-2-84 наблюдается торможение развития хронического воспаления, что проявлялось в подавлении пролиферации мезан-гиоцитов, фиксации компонентов иммунных комплексов, формировании лимфовдных инфильтратов.

В предварительных опытах было установлено, что у интактных мышей препарат обладал иммуностимулирующим влиянием, однако при изучении влияния ЕМ-2-84 на первичный гуморальный иммунный ответ у животных В602П с ИД обнаружено, что курс лечения препаратом практически не оказывает влияния на антителообразование.

Ранее нами было сделано предположение, что иммунодефицит у исследуемых нами мышей связан с супрессивным действием эритробластов, поэтому дальнейшая работа была посвящена изучению влияния соединений БМ-2-84 на эритропоэз у больных мышей.

Установлено, что курсовое введение препарата приводило к нормализации показателей гематокрита и гемоглобина у мышей обеих групп с анемическим синдромом. При этом количество ретикулоцитов под влиянием лечения снижалось в 1,7 раза - как у мышей с ИД, так и с ИКГ.

При изучении влияния соединения БМ-2-84 на эритроидные предшественники костного мозга у больных мышей установлено, что препарат значительно снижает количество эритрокариоцитов, число БОЕ-э в костном мозге и количество экзогенных селезеночных колоний КОЕс-5 и К0-Ес-8 у животных обеих групп.

Таким образом, соединение ЕМ-2-84 обладает выраженным эффектом на эритропоэз у больных животных, начиная с ранних этапов дифференци-ровки. Учитывая, что препарат устраняет гиперплазию эритрона у больных мышей, можно предположить, что купирование анемии связано с уменьшением гемолиза эритроцитов.

О влиянии БМ-2-84 на функциональную активность макрофагов у больных мышей В602И с ИД судили по фагоцитозу и продукции ИЛ-1 и ФНОй перитонеальными макрофагами.

Установлено, что предварительное курсовое введение соединения БМ-2-84 мышам с ИД приводило к снижению фагоцитарной активности макрофагов. Продукция ИЛ-1 перитонеальными макрофагами под влиянием препарата также достоверно снижалась - как спонтанная, так и ЛПС-стимулированная - у животных с ИД и ИКГ. Курс лечения мышей с ИД препаратом ЕМ-2-84 приводил к достоверному повышению спонтанной продукции ФНО-сс, и практически не влиял на ЛПС-стимулированную секрецию цитокина.

Таким образом, препарат нормализует функцию макрофагов у больных мышей и этим, вероятно, обусловлено его лечебное действие. Уменьшением фагоцитоза и продукции ИЛ-1 под влиянием препарата, предположительно, можно объяснить повышение массы тела, снижение СОЭ и протеи-нурии у опытных мышей. С другой стороны, несмотря на то, что препарат нормализует количество эритрокариоцитов, у больных животных не наблюдается повышения первичного гуморального иммунного ответа. Возможно, подобное действие БМ-2-84 связано с повышением спонтанной продукции ФНО-ct, известного как ингибитора иммунного ответа (Gordon С., 1990).

Таблица 5.

Влияние ВМ-2-84 на показатели иммуно- и эритропоэза у мышей B6D2F1, больных ИД и ИНГ.

исследуемые показатели

контроль

мыши с ИД

мыши с ИД + ЕМ-2-84

мыши с ИКГ

мыши с ИКГ + ВМ-2-84

масса тела (г) уровень СОЭ

(мм/час) протеинурия

(г/л) число АОК/сел. гемоглобин(г/л) гематскрит (X) рет!«.кулоциты(%^ эритрокарноцить (X)

кол-во БОЕ-э/

105НКМ кол-во КСЕс-5/ селезенку кол-во КОЕс-8/ селезенку фагоцитоз (у. ед.) предугадал ИЛ-1: спонтанная ЛПС-стимулир. продукция ФИО: спонтанная ЛПС-стимулир.

26,1+0,8 1,3+0,4

0,3+0,06

45600+1234 199,2+3,6 49,4+0,4 10,2+1,32 27,5+1,5

7,7+0,9

10,4+1,5

12,8+1,5

280+15,2

1,6+0,13 5,8+0,8

12,2+0,45 40,8+3,9

22,4+0,75 3,6+0,4**

0,54+0,3

* *

W* **

*

27562+4453 169,6+1,4 44,9+0,14 15,9+2,4 35,7+1,2

20,2+1,5"

13,1+2,1*

18,1+2,5*

502,7+20*

2,6+0,3** 6,2+0,5

4,1+1,6*" 41,0+4,2

24,8+1,78 1,5+0,1##

0,36+0,4

20184+4168 206,9+4,6## 47,2+0,52**' 9,4+2,9** 25,2+3,1*

5,4+1,3**

5,8+1,9'

7,lil,5'

276,6+29

1,85+0,25" 4,9+0,4*

10,2+1,0* 38,4+5,3

21,3+0,7 11,2+3,3**

6,6+0,5**

140+6,9** 38,8+1,4** 21,34+3,4* 37,8+2,8*

22,7+2,5**

8,0+1,5*

12,3+1,9

2,8+0,3 6,9+0,5

25,2+1,46* 4,2+2,3*

3,8+0,4*

197,6+4,6' 44,0+0,7** 14,4+2,3* 29,6+2,4*

13,6+1,4

4,3+2, 9*'*

1,6+0,5**

1,8+0,4 5,1+0,38*

##

- 20 -ВЫВОДЫ.

1. Вторичные иммунодефицита у мышей, индуцированные хронической реакцией "трансплантат против хозяина", сопровождаются выраженными нарушениями эритрона, характеризующимися развитием различных по патогенезу анемических синдромов, и могут быть использованы в качестве экспериментальных моделей для изучения сочетанных нарушений иммуно-и эритропоэза и подходов к их коррекции.

2. Вторичный иммунодефицит у мышей В602Р1 (с иммунокомплексным глом ; улонефритом и иммунодефицитом), характеризующийся депрессией 1^<-антителообразования, сопровождается гемолитической анемией с гиперплазией эритроидных предшественников (ретикулоцитоз, увеличение количества эритрокариоцитов, БОЕ-э), повышением фагоцитарной активности макрофагов и секреции ими интерлейкина-1.

3. Вторичный иммунодефицит у мышей ВАЬВ/с, характеризующийся снижением количества антителообразующих клеток, фагоцитарной активности макрофагов и секреции ими интерлейкина-1, сопровождается анемией с гипоплазией эритрона.

4. Хроническая гипоксия обладает иммуностимулирующими и эритро-поэзмодулирующими свойствами у мышей В602Р1 с иммунодефицитом, что выражается в повышении первичного гуморального иммунного ответа, устранении анемии и нормализации показателей костномозгового эритропоэза.

5. Курсовое применение новых иммуноактивных препаратов (трекре-зан, соединение ЕМ-2-84) с широким спектром биологической активности (в том числе эритропоэзмодуЛирующей и противовоспалительной) в лечении вторичного иммунодефицита и иммунокомплексного гломерулонефрита приводит к положительному эффекту: купированию анемии, подавлению воспалительного процесса в почках, снижению функциональной активности макрофагов, коррекции иммунодефицита.

6. Гиперплазия эритроидного ростка кроветворения с повышенным содержанием зритробластов в костном мозге у мышей В602Р1 с иммунодефицитом и иммунокомплексным гломерулонефритом является одной из причин подавления первичного гуморального иммунного ответа: эритропоэз-модулирующие воздействия (хроническая гипоксия, трекрезан), снижая численность костномозговых- эритроидных предшественников, купируют иммунодефицит.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Колесникова О.П., Кудаева О.Т., Логинов В.А., Мирскова А.Н., Левковская Г.Г., Тузова М.Н., Сухенко Т.Г., Козлов В.А. Иммуноактив-ные и противовоспалительные свойства производных серосодержащих ал-канкарбоновых кислот у интактных и больных иммунокомплексным гломерулонефритом и прогрессирующим иммунодефицитом мышей // Патогенез

хронического воспаления. Тез.докл. - Новосибирск, 1991. - С.89.

2. Козлов В. А., Колесникова О.П., Кудаева Т.Г., ТузоваМ.Н., Су-хенко Т.Г. Коррекция прогрессирующего иммунодефицита и иммунокомп-лексного гломерулонефрита новыми производными алканкарбоновых кислот и германий-органическими соединениями //Тез. междунар. симпозиума по аллергологии и иммунологии. - Алма-Ата, 1992, раздел II, С.162.

3. Колесникова О. П., ТузоваМ.Н., Сухенко Т.Г., Козлов В. А. Спонтанная, митоген- и антигениндуцированная пролиферация тимоцитов и спленоцитов, а также фагоцитарная активность макрофагов мышей под действием производных алканкарбоновых кислот и германийорганических соединений // 1 съезд иммунологов России. Тез.докл. - Новосибирск, 1992. - С.231.

4. Колесникова О.П., Кудаева О.Т., ТузоваМ.Н., Сухенко Т.Г., Козлов В.А. Модель аутоиммунного заболевания, индуцированного реакцией "трансплантат против хозяина" // Ланималогия.- 1993.- N 1.-С.64.

5. Ширинский B.C., Колесникова О.П., Кудаева О.Т., Сухенко Т.Г., ТузоваМ.Н., Семенова Н.В. Иммуноактивные свойства трекрезана // Экспериментальная и клиническая фармакология. -1993. -Т.56. -N3. -С. 42-45.

6. Сухенко Т.Г. Эритропоэз и продукция интерлейкина 1 у мышей с РТПХ-индуцированными иммунодефицитом и иммунокомплексным гломеруло-нефритом. // Институт клинической иммунологии СО РАМН, научный отчет за 1993 г. Тез.докл. - Новосибирск, 1994.- С.37.

7. Сухенко Т.Г. Показатели эритропоэза и продукция интерлейкина 1 у мышей (C57Bl/6xDBA/2)Fl с иммунодефицитом и иммунокомплексным гломерулонефритом, индуцированными "реакцией трансплантат против хозяина". // Сборник молодых ученых СО РАМН, Тез. докл. - Новосибирск. 1994, С.49-52.

8. Kozlov V., Kolesnlkova 0., Suchenko Т., Kudaeva О. Varlants of experlmental Immunodeficiency with different mechanisms of erythropoiesis disturbances. //12th European immunol. meetlng, Abstracts. - Barcelona, 1994, P.59.

9. Козлов В.А., Колесникова О.П., Сухенко Т.Г., Филимонов П.Н., Шкловская Е.В. Состояние эритропоэза и продукция интерлейкина-1 у мышей с РТПХ-индуцированными иммунодефицитом и иммунокомплексным гломерулонефритом. //Иммунология. -1995. -N.1. -С.36-38.