Автореферат и диссертация по медицине (14.00.28) на тему:Роль комплексного иммуноферментного определения нейроспецифических белков в диагностике опухолей головного мозга

4 ..fxfc^

\МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ОЕДЕРАДИИ

г

шсковский областной научно-ксслшвательский клинический институт им. м. ф. владимирского

На правах рукописи

БИКТИШРОВ Равиль Габбасович

УДК 616.831-006-07:616.153.96

роль комплексного 1<кшгаа=МЕнтного определения

нй'рсспецифическкх белков в диагностике опухолей головного мозга

14.00.28 - нейрохирургия 03.00.04 - биохишя

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

москва - 1993

Работа выполнена в Московском областном научно-исследовательском клиническом институте им. М.Ф.Владимирского Министерства Здравоохранения Российской Федерации (директор-доктор медицинских наук, профессор Г.А.Оноприенко).

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: доктор медицинских наук И. А.КАЧКОВ; доктор медицинских наук, профессор В.П.ЧЕХОНИН

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ: доктор медицинских наук С.Ю.КАСУМСЗА

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор медицинских наук, профессор К.Я.ОГЛЕЗНЕВ доктор медицинских наук С.К.КРИВОНОСОЕ

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: Научно-исследовательский Институт неврологии РАМН РФ

Защита состоится " "__ 1993 г. в _часов

на заседании Специализированного Ученого Совета Д 001.26.01 при Научно-исследовательском Институте нейрохирургии РАМН по адресу: 125047, Москва, ул. Фадеева, д. 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института нейрохирургии им. Н.Н.Бурденко РАМН (ул. Фадеева, д.5).

Автореферат разослан " " _ 1393 г.

Ученый секретарь

Специализированного Совета член-корреспондент РАМН,

профессор Ф. А.СЕРБИНЕНКО

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы: Развитие современной нейроонкологии характеризуется энергичным вторжением, в труднодоступные области головного ' мозга и возрастающей радикальностью операций. В настоящее время основополагающим методом лечения является оперативное вмешательство с целью тотального и субтотального удаления опухолей /Земская А.Г..Лещинский Б.И. 1986, Уага-ПтогЬеск еЬ а1.1987/.Вместе с тем вырабатываются и определенные противопоказания к изолированному хирургическому лечению опухолей некоторых локализаций с учетом их гистоструктуры и биологических качеств. Накопился огромный клинический опыт, постоянно обогащаемый данными инструментальных методик исследования. Все это делает реальным дифференцированный подход к диагностике опухолей голоеного мозга. В то же время на наш взгляд, нельзя ограничиваться уточнением топикиновообразования, необходимо заблаговременно, до оперативного вмешательства распознать не только расположение опухоли, отношение ее.к структурам мозга, оболочек, но и выяснить ее гкс-тоструктуркый характер, степень злокачественности /Лихтерман Л.Б.,1979/, т.е. провести гистоструктурную дифференциальную диагностику. Дооперационная гистосгруктурная диагностика церебрального новообразования -знание структурно-биологических особенностей процесса (гистогенез, характер роста, степень зрелости) имеет для клинической практики не менее важное значение, чем установление локализации новообразования, так как во многом определяет оптимальную тактику, выбор метода лечения и прогноз заболевания /Самойлов В.И.,1985/. Распознавание вероятной гистоструктуры новообразования представляет собой не менее, а, скорее, более сложную задачу, чем топическая диагностика. Отдельные попытки установить корреля-, цгао между клиническими проявлениями и гистоструктурой церебрального новообразования стали предприниматься с двадцатых • годов. Однако систематические исследования, направленные на выявление возможностей установления дифференциального диаг-

ноза опухоли головного мозга с учетом гистоструктуры и биологических свойств,стали проводиться с конца пятидесятых годов и продолжаются по настоящее время / Арутюнов А.И.,1970,-Бабчин И.О., 1973, Габибов Г.А., 1975, Земская А.Г.,1976, ' 1985, Лихтерман А.Г. ,1979, ВерезинВ.А., 1985, Mori'Т.,-1973, Eng L.1979, StaurowD., 1990, 1991, 1992/.

В свою очередь развитие иммунологии, вопросов иммунодиагностики и иммунотерапии,, определяют перспективность данного пути. Актуальным в теоретическом.и практическом отношении является вопрос о специфических антигенах -маркерах опухолей. Иммуногистохимическими методами удалось идентифицировать и в. различной степени охарактеризовать около 60 нейрос-пецифических белков (НСБ). Как правило они синтезируются в клетках мозга, а количественное их содержание в несколько раз превышает уровень,' чем в других тканях. Использование высокоселективного анализа НСБ для маркирования проницаемости гематознцефалического барьера ( ГЭБ ) в направлении мозг-кровь открыло широкие перспективы их использования для диагностики опухолей головного мозга. - В отечественной и за~-рубежной литературе превалируют сведения о клиническом применении в диагностических целях в основном глиофибриллярного кислого протеина-SFA, белка S-100, специфического альфа 2-гликопротеида(о(2-6Р), нейроспецифической енолазы - 14-3-г и некоторых других. Большинство работ посвящены фундаментальным аспектам получения НСБ из опухолевой ткани и их физико - химической характеристике и анализу их в биологических жидкостях . Mori Т.,1973 одним из первых выявил GFA в сыворотке крови больных с опухолями головного мозга радиоиммунным методом, тем'самым открыв новую эру в подходах к методам дополнительной диагностике опухолей. Однако данные, приводимые в литературе по исполь8ованио НСБ в диагностике опухолей головного мозга, разноречивы. Исходя из этого, есть все основания для продолжения исследований в целях выявления диагностических возможностей НСБ при ОГМ. Разработка серологических систем обнаружения НСБ важна с точки зрения возможного практического применения.

- 3 -

Цель и задачи исследования:

Основной целью является исследование диагностических возможностей комплексного иммуноферментного анализа нейрос-пецкфических белков в сыворотке крови больных опухолями го-лозного мозга.

Для достижения этой цели определены следующие непосредственные задачи:

1) охарактеризовать спектр нейроспецифических белков (НСБ) в сыворотке крови больных опухолями головного мозга (ОГМ);'

2) оценить диагностическую значимость иммуноферментного анализа НСБ у больных с ОГМ;

3) выяснить при каких ОГМ усиливается продукция того или иного белка и какова зависимость от степени повреждения структур головного мозга, стадии и проявлений опухолевого процесса;

4) дать конкретные рекомендации по использованию НСБ в практике нейрохирургии и неврологии.

Научная новизна работы:

Впервые исследована диагностическая значимость комплексного тмуноферментного анализа 4 глиоспецифических белков в сыворотке крови у больных с опухолями головного мозга:

1) проведен комплексный анализ НСБ в сыворотке крови при различных опухолях головного мозга;

2) установлена взаимосвязь уровня НСВ от гистоструктуры

ОГМ;

3) отмечены особенности уровней НСБ от размеров опухолевого очага, уровня дислокации, показателей индекса качества жинни больных.

Практическая еначимость работы:

установлено количественное содержание НСБ в сыворотке крови больных ОГМ различной гистоструктуры;

выявлены особенности изменений антигенного состава в зависимости от гистоструктуры опухолевого процесса;

результаты исследований позволяют рекомендовать использование иммуноферментных тест-систем по определению 4 НСВ у Сольных' с ОГМ с целью:

1) определить дооперационный предполагаемый генез заболеваний головного мозга;

2) определить уровни содержания НОВ;

3) определения антигенной композиций опухолевой ткани мозга, уточнения гнстроструктуры, степени злокачественности;

4) дифференциальной диагностики, скринникговэй диагностики ОГМ.

Внедрение в практику: результаты исследований внедрены в клиническую практику нейрохирургического отделения МОНИКИ

Основные положения, вынесенные на запиту:

1) особенности спектра НСБ в сыворотке крови больных при ОГМ;

2) антигенный состав сыворотки крови при различной гис-тоструктуре опухолей головного мозга;

3) особенности изменений НСБ в зависимости от: размеров опухоли головного мозга; дислокации срединных структур мозга; , индекса качества жизни (тяжести состояния).

Апробация работы: Официальная апробация диссертации состоялась на расширенном заседании проблемно-плановой комиссии М б "Диагностика и лечение онкологических заболеваний" *М0НЙКИ 16.04.93.

Основные положения диссертации доложены на конференции молодых ученых Московской области (1989 г.), 1 Московской научно-практической конференции молодых ученых (1990 г.), научно-практических конференциях 1 Межобластного научного центра (1991, 1992 гг.), Всероссийском симпозиуме "Биологические проблемы нервных и психических заболеваниях" г.Ростов-на-Дону (1993 г.).

Автор выражает глубокую признательность академику РАМН РФ А.Н.Коновалову директору ИМ нейрохирургии им.акад.Н.Н.Бурденко , на базе которого выполнялась часть гистологических исследований, директору НИИ Общей и Судебной

психиатрии им.В.П.Сербского д.м.н. Т.Б.Дмитриевой за предоставленную возможность проведения ишукоферментннх иссле-дозаний. Автор искренне благодарит коллектив лаборатории г.м-мунохтмии НИИ ОСП и»«!. В.П. Сербского, в соазторстве с которыми выполнялся биохимический раздел работы.

Публикаций:

По теме диссертации опубликованы научные статьи, список которых приводится в конце автореферата.

00тем и структура работы:

Диссертация изложена на 166 страницах машинописного г-гкста, состоит из введения, пята глав, обсуждения получение результатов, выводов и библиографического указателя, ;ос1с;щего из 195 названий (из них 49 на русском языке, 146-яа инострагши). Реэувхтаты работы иллюстрированы 23 жунгсами, 19 таблицами и 37 графиками.

содержание работы

/

В первой главе - обзоре литературы приведены данные о юли не^роспенифических белков ь диагностике опухолей голов-¡сго м:.-.та. На основе анализа наиболее репрезентативных источников литературы показано, что к числу актуальных задач »временной биологии и медицины относятся поиск, изучение :пецифических белков нервной ткани и исследования проникно-¡ения их через гематоэнцефашческий барьер. Согласно соврэ-¡еннкм представлениям, контакт специфических веществ мозга с ммунлой системой организма предотвращается за счет функцио-трования ГЗБ. Нарушение его проницаемости, имеющее место !ри опухолях головного мозга, ведет к проникновению НСБ в :ровь. Использование высокочувствительного и селективного юадяза НСБ для маркирования проницаемости ГББ в направлении [озг-кровь открыло широкие перспективы их ^пользования для ;иагностики опухолей головного мозга. В литературе превали-|уют сведения о клиническом применении в диагностический це-;ях, в основном глкофибр:шгяряого кясяого протеннл (Сг А),

белка,-S-100, специфического альфа 2 - гликопротеида (аг-GP), нейроспецифической енолгзы, в структуре обзора они выделены. Однако данные о количественном содержании НСБ при 0FM разнородны. Перспективным прикладным направлением в ней-роонкологии считается внедрение в практическое здравоохранение целого ряда клинико-биохимических тестов обнаружения НСБ в биологических жидкостях. Безусловно, результаты этих исследований дают возможность использовать нейроспецифи-ческие белки в качестве специфических маркеров опухолей и в ряде случаев проводить дифференциальную диагностику.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе представлены результаты обследования 120 больных с опухолями головного мозга, поступивших в отделение нейрохирургии Московского областного научно-исследовательского клинического института ( руководитель отделения д.м.н. И.А.Качков) за период с 1990 по 1992 год. Из них: мужчин 56 (46,7%) и 64 (53,3%) женщин, в возрасте от 3 до 64 лет. Изучению подверглись: история болезни, данные клинических осмотров и инструментальных методов исследования, гистологические микропрепараты, сыворотки крови больных.

Используя Международную гистологическую классификацию опухолей центральной нервной системы (ВОЗ) /Авцын А.П. и соавт., 1981/ больные были разделены и составили 10 клини-ко-гистологических групп:

1. ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ГЛИОМЫ 26 (21,7%)

2. ГЛИОМЫ НИЗКОЙ СТЕПЕНИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ - 25 (20,8%)

3. МЕНИНГИОМЫ ;. 27 (22,5%)

4. НЕВРИНОМЫ VIII НЕРВА 12 (10%)

5. АДЕНОМЫ ГИПОФИЗА 6 (5%)

б. МЕДУЛЛОВЛАСТОМЫ 3 (2,5%)

7. ЭПЕНДИМОМЫ/ЭПЕНДИМОБЛАСТШЫ 3 (2,5%)

8. АНГИОРЕТИКУЛЕМЫ 2 (1,7%)

9. КРАНИОФАРИНГИОМЫ 2 (1,7%)

10. . ПРОЧИЕ НОЗОЛОГИИ 14. (11,6%)

- У -

В группу больных с гистологической формой злокачественные глиомы (ЗГ) вопли изоморфоклеточная глиобласгома, муль-тиформная глиобластома, глиосаркома, анапластичэская астро-цитома III-IV. В группу больных с гистологической формой глиомы низкой степени злокачественности (ГНСЗ) вошш анап-дастичеекая астроцитома II, акапластическая олигоастроцитома II, прогоплазкатическая астроцитома, фибриллярная астроцитома.

В группу прочих нозологических форм вошли больные с метастатическим поражением головнэго мозга, хронической недостаточностью мозгового кровообращения, хронической субдураль-ной гематомой, окклюзиояной гидроцефалией воспалительного генеза, множественными туберкулемами головного мозга, нейро-фибромой головного мозга, остеомой костей черепа.

Частота локализации патологического процесса существенно не отличались сторошостью - справа 49 случаев (40,6?.), схева - 40 (33,3%), по средней линии - 31 (25,97.) соответственно.

Длл кжккческой оценки состояния больных использовали инггекс общего состояния по шкале КагпоУзКу. По этой шкале каждому уровню функционального состояния больного соответствует определенная суммарная оценка симптоматики.

В работе на каждого оолыгого заполнялась специальная карта, согласно которой огмечатись следующие критерии: ГТАСПОРТНАЯ ЧАСТЬ ' Н истории болезни, год ВЮРАСТ - от 3 до 64 лет

ПОЛ мужчины + женетны

ДИАГНОЗ Опухоли головного мозга

ЛОКАЛИЗАЦИЯ - супра-субтенториаяьная, справа-

слева- срединная , лобная-височная -теменная-затылочная,червь-полушарие- мозжечка

КЛИНИКА

ПСИХИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ РЕЧЕВЫЕ РАССТРОЙСТВА МЕНИНГИАЛЫ!АЯ СИМПТОМАТИКА \ ДИСЛОКАЦИОННЫЙ СИНДРОМ - ■ V-

1-Х 11 пары

гипер- гипо- экстрапирамидный справа-слева справа - слева, сншены-оживлены

+/-+/-

Проведенные дополнительные ( в том числе инструментальные) методы исследования:

ОФТМЬМОНЕВРОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ отек-застой-атрофия

дисков зрительных нервов, нарушение полей зрения

ЭХОЭНЦЕФАЛОСКОПИЯ - ЭЭС-12

КОМПЬЮТЕРНАЯ ТОМОГРАФИЯ производилась с введением контрастного вещества . ( верографш 762-40 мл) на рентгеновских компьютерных томографах:

СТ МАХ ( "General Electric", США); • СТ МАХ ( "General Electric", США)-мобильная установка ОПЕРАЦИЯ с указанием даты'.Н операции, названия операции ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ операционного материала проводились в патоморфологическом отделе института с послеи дующей консультацией препаратов в патоморфологическом отделе научно-исследовательского института - нейрохирургии

им.акад.Н.Н.Бурденко РАМН РФ.

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 4 НЕЙРОСПЕЩФМЕСКИХ БЕЛКОВ (НСБ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ в день поступления больного в отделение до начала терапии каждому больному производился забор крови из вены одноразовыми системами в количестве 10 мл без добавления консервантов с последующим центрифугированием в режиме 3000 оборотов в минуту в течение 5 минут, с целью получения сыворотки крови. Определение НСБ иммуноферментным методом проводилось в лаборатории иммунохимии научно-исследовательского института Общей и Судебной психиатрии им.В.П.Сербского.

- 8 -

ЧЕРЕПНО-МОЗГОВЫЕ НЕРВЫ МЫШЕЧНЫЙ ТОНУС

ПАРЕЗ/ПЛЕГИЯ РЕФЛЕКСЫ

ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ ЗНАКИ НАРУШЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КООРДИНАТОРЫЕ НАРУШЕНИЯ

Б своей работе в целях количественного определения НС®, концентрация которых била чрезвычайно низкой, были испольво-" ваны разработанные б предастаиленной лаборатории 2 варианта иммуноферментного анатаза:

ДВУХЦЕНТРОВЬЙ ШМУНОФЕРШШЬЙ АНАЛИЗ НА ОСНОВЕ КОЛОНОЧНОЙ ЮА4УН0С0РЕЦЮНН0Й ХРОМАТОГРАФИИ - (ДКФАИХ), принцип которого изложен Yanaroto R., 1986 (предел чувствительности 50 иг/мл), в некоторой модификации В.П.Чехонина, для определения «i-BQ (альфа 1 глобулин мозга) и «2-BG (альфа 2 глобулин мозга).

процедура зшдих

50 мкл стандартной сыворотки, содержащей «i-Вб и oí2-BG различной концентрации (для приготовления высокоочищенные препараты разводили в сыворотке крови человека) или 50 мкл исследуемого образца биологической жидкости смешивали с 500 мкл разведенного коныогата F(ab)2 фрагментов овечьих антител к «i-ВСэ или o¡2"BG ( в зависимости от того, какой антиген изучается) с пероксидаэой в буфере (0,1 М фосфат натрия, 0,3 М хлорид натрия, 1 мм хлорид марганца, 1 г/л бычьего сывороточного альбумина, 1 г/л езида натрия) рН 7,4;

смесь инкубировали в течения 10 минут при температуре 30 С, после чего к ней добавляли 100 мкл коньюгата овечьих F(ab) фрагментов антител к «г-ВЗ или <хг~Вй с кроличьим Ig G (10 мкг/мл в выие названном буфере) и инкубировали 30 минут при температуре 30 С;

500 мкл полученной смеси наслаивали на колонку (4x8 мм с воронкообразным резервуаром иаверхукпри скорости протока 1 мл/ч, наполненную 0,1 мл сефарозь: 4 В с иммобилизованными на ней F(ab) фрагментов лошадинных антител к Ig G кролика и уравновешенную буфером;

колонку дважды промывали буфером и наносили на нее 0,125 мл 0,08%, раствора 5-ачиносалициловой кислоты (Serva, ФРГ), содержащим 0,02% перекиси водорода (рН 6,0), при этом проток задерживали на 60 минут для осуществления ферментативной реакции (небольшой избыток субстратного реагента применяли для предупреждения подсыхания иммуносорбента). Оста-

^сливали реакцию промыванием колонки 1 мл 80 мМ раствора карбоната натрия;

оптическую плотность элюата (1,125 мл)' измеряли на спектрофотометре Hitachi (Япония), при 450 нм.

ТВЕРДСФАЗНЫЙ ИШУНОФЕРМЕНТНЬЙ АНАЛИЗ - принцип которого изложен Voiler А.,1076 (с пределом чувствительности 800 пг/мл),для количественного определения GFA (глиофибркллярный кислый протеин) и «г-GP (альфа 2 гликопротеид). Учитывая.,что коммерческих иммуноферментных систем для определения этих антигенов не существует, наш осуществлялась разработка подобных систем самостоятельно.

ПРОЦЕДУРА ПОСТАНОВКИ ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ В ячейки специальных планшетов для иммуноферыентного анализа фирм Dynatech ( Швецария ), linbro ( Англия ) или Flow ( Англия ) вносили по 200 мкл раствора специфических антител к НСБ, концентрацию которых подбирали в каждом слу-, чае экспериментально, и инкубировали в течении 12 часов при температуре 4 С. Эту активацию твердой фазы проводили в карбонатном буфере pH 0,6. Отмывку несвяэавшихся с твердой фазой антител осущетвляли отмывающим буфером.Разведение всех реагентов делали на забуференном физиологическом растворе pH 7,4. В ячейки, отмытые от несвязавшейся с твердой фазой антител, вносили 0,2 мл исследуемого образца или раствора стандартного НСБ с известной концентрацией и инкубировали в течении 2 часов при комнатной температуре, после чего повторяли отмывку, как описано выше. На следующем этапе ячейки заполняли разведенным коньюгатом соответствующих антител с ферментом и инкубировали при комнатной температуре в течении 3 часов, после чего ячейки планшета тщательно отмывали от несвязавнегося коньюгата. Проявление ферментативной активности проводили 0,08?=. раствором 5-аминосалициловой кислоты, содержащим 0,01% перекиси водорода pH 6 (pH при необходимости доводили до 6 при помощи 0,1 X раствора NaOH). После 1 часовой инкубации субстратной смеси для проявления активное-' ти пероксидазы определяли оптическую плотность раствора в

ячейках планшета с помсвд>ю многоканального фотометра Mitertek Multlskan фирмы Flow Laborator ( Англия ).

Статистическая обработка количественных результатов проводилась с использованием программы "Statgraphlcs" на компьютере IBM-PC-286. Графические представлейия выполнялись с помошью программы HPG (. Harvard Preslntatlon Graphics ), по методу наименьших квадратов с расчетом коэффициента корреляции.

Достоверность различия средних значений выборок определялась по "t" коэффициенту Стьюдента с доверительным уровнем 95%(р < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. КЛИНИКО-ИММУНОХИШЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕЙРОСПЕЦИФИЧЕСКИХ БЕЛКОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ГЛИОМАМИ

Под нашим наблюдением находилось 26 больных в возрасте от 10 до 62 лет. Злокачественные глиомы преобладали в возрастной группе 41-50 лет , что соответствует данным литературы - злокачественные глиомы выше у лиц среднего и пожилого возраста /Земская А.Г., 1985, Качков И.А., 1988, Ромоданов А.П., 1977 и др./. Соотношение частоты встречаемости злокачественных глиом (ЗГ) у мужчин и дентин на нашем материале было равным. Почти в половине случаев (61,5%) опухоль поражала смежные доли мозга. Тяжесть состояния больных (индекс качества жизни) определялась по шкале Karnovsky и была представлена в диапазоне от 30 до 70. В более чем половине случаев тяжесть состояния была равна 60-70.

Гистологически данная группа была представлена: изомор-фоклеточной глиобластомой - 65% больных, глиосаркомой -7,7%, мультиформной глиобластомой - 3,8% и смешанными ЗГ -22,5%.

С помощью иммуноферментных тест-систем нами проведен количественный иммунохимический анализ 4 нейроспецифических белков (НСВ) в сыворотке крови больных при поступлении в отделение с последующей верификацией гистологической природы опухолей.

- -12 -

В группе больных со злокачественными глиомами показатели НСБ в сыворотке крови варьировали:

1) «1-В0 от 0,1 нг/мл до 1,6 нг/мл;

2) «2-В0 от 0,05 нг/мл до 1,6 нг/мл;

3) 6РА от 32 нг/мл до 256 нг/мл;

4) «2-6Р от 31 нг/мл до 204,8 нг/мл.

«2-бР

113,4 64,7 р<0,0'1

У больных со злокачественными глиомами также было проведено изменений концентрации НСБ в сыворотке крови в зависимости от размеров опухоли, степени дислокации срединных структур мозга и индекса качества жизни по шкале Кагпоузку. В своих исследованиях мы отметили, что уровег;:-ВГА и «г-БР в сыворотке крови у больных со ЗГ зависит от размера опухоли,таковой зависимости для с^-Вб и с^-Вв мы не выявили. Злокачественные глиомы имеют широкую зону поражения и глубинную локализацию, вызывая значительное смещение желудочковой систеш в противоположную от очага сторону, однако при этом уровень НСБ не зависит от степени дислокации срединных структур мозга. Для больных со ЗГ также важное значение имеет индекс качества лизни, определяемый в нашей работе по шкале Кагпс/зку. При анализе изменений НСБ отмечено, что уровень концентрации антигенов в крови достоверно коррелирует с индексом качества жизни только для оц-ВС, причем низкие показатели индекса качества жгаки соответствуют низкому уровню антигена в сыворотке кровк.

Отмечено также, что при наличии обширных некрозов в злокачественных глиомах уровень НСБ в крови уменьшается.

«1-Вв аг-ВЗ ЗГА (нг/мл)

Среднестатистические

показатели 0,38 0,35 155,1 Статистическое

отклонение 0,34 0,41 85,0 Вероятность

отклонений р<0,05 р<0,1 р<0,001

КЛИНИКО-ИММУНОХИШЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕЙРОСПШ1ФИЧЕСКИХ БЕЛКОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ У БОЛЬНЫХ С ГЛИОМАМИ НИЗКОЙ СТЕПЕНИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ

Изучаемая группа из 25 больных в возрасте от 3 до 57 лет, причем ГНСЗ преобладали в возрастной группе от 30 до 50 лет (48%). У мужчин в наших исследованиях ГНСЗ преобладали -(72%). Поражения смежных долей мозга отмечено в 44%, в 36% опухоль имела срединное расположение. При изолированном положении опухолью долей мозга лобная локализация отмечена в 4%, височная - в 28%, изолированного поражения теменной и затылочной доли не встретилось.Индекс качества жизни по шкале Катоуэку наблюдался от 40 до 80.

Гистологически ГНСЗ были представлены: полиморфоклеточ-ная астроцитома у 7 больных, фибриллярная астроцитома - 5 , аналластическая астроцитома II степени злокачественности -10, анапластическая олигоастроцитома 3 .

В группе больных с ГНСЗ показатели НСВ в сыворотке крови определялись с помощью иммуноферментных тест-систем , описанных выше,и их количественные данные варьировали:

1) «1~В(3 от 0 до 0,8 нг/мл

2) «2-ВЗ от 0 до 1,6 нг/мл

3) СРА от 16 нг/мл до 128 нг/мл

4) «г-6Р от 31 нг/мл до 102 нг/мл

«1-Вб

Среднестатистические показатели 0,26

Статистическое отклонение 0,21

Вероятность отклонений р<0,3

«2-ве еРА «г-вр (нг/мл)

0,25 81,28 69,92

0,26 40,46 29,23

р<0,2 р<0,001 р<0,001

У больных с ГНСЗ показатели НСБ отличались от нормы, однако вероятность отклонений получена для с(1-В6 и «2-В6 бы-

\

ла больше р > 0,05. Хорошие показатели вероятности отклонений отмечены для ЗРА и «г-бР.Прк изучении зависимости уровней НСБ в сыворотке крови у больных с ГНОЗ от размеров опухоли, степени дислокации срединных структур и индекса качества жизни в нашей работе мы получили следующие результаты. Отмечена статистически слабая зависимость уровня аг-Вв от размера опухоли, для других антигенов подобной не отмечено, Степень дислокации срединных структур достоверно не влияет на уровни 4 НСБ в сыворотке крови. Отмечена также корреляция между концентрацией «1-Ва в сыворотке крови и Индексом качества жизни, при этом более высокие показатели злого антигена характерны для больных с высоким индексом качества жизни.

КЖНИКО - ИММУН0Х5ШИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АНАЛИЗА НЕЙРОСПЕЩФИЧЕСКЛХ БЕЛКОВ ПРИ ОПУХОЛЯХ ГОЛОВНОГО МОЗГА

Менингкомы не являются редкой опухолью головного мозга и в . наших наблюдениях они представлены 27 больными в воз-расге от 29 до 62 лет, из них женщин - 70,4%. Локализация менингиом была представлена следующим образом: конвекситаль-ные - 44,4%, крыльев основной кости - 22,2%, верхнего саги-тального синуса - 14,8%, ольфакторной ямки - 7,4%, бугорка турецкого седла - 3,7%, задней черепной ямки - 7,4%.

Изменения НСБ в сыворотке крови у больных с менингиома-ми выли следующие: с^-Вй и «2-ВЗ в крови не обнаружены; среднестатические показатели для 6ГА - 11,7 кг/мл ( при показателе нормы 8±1 нг/мл), а для «г-6Р - 11,3 нг/мл ( при показателе нормы 7,810,9 нг/мл), что естественно незначительно отличается от нормальных показателей. Вероятность отклонений для этих 2 НСБ р< 0,ч5, Учитывал тот факт, что дачные показатели содержания НОВ в сыворотке крови у больных с менингиомами незначительно отличались от нормальных, при вероятности отличий р<0,5, изучение зависимости уровней НСБ от размеров опухоли, степени дислокации и качества кивни мы считали недостаточно точными. Однако наличие большой группы больных с менингиомами головкогс мозга обосновывало проведе-

ние исследования. Для менингиом не выявленно зависимости уровней GFA и «г-GP от клинических проявлений процесса. Нев-риомы VIII нерва в наших исследованиях отмечены у 12 больных в возрасте от 35 до 59 лет, из них 10 жемщин и 2 мужчин.

При анализе сыворотки крови больных с невриномами VIII нерва на содежание НСБ было отмечено: ui-bG и «g-BG обнаружены не были, среднестатистический показатель 12,0 нг/мл для GFA и 11,7 нг/мл для «2-SP, при вероятности отклонения р<0,б. Учитывая тот факт, что уровень GFA и «2-6Р в сыворотке крови у больных с невриномами VIII нерва незначительно отличается от нормальных показателей и отсутствия зависимости от клинических проявлений применения иммуноферментного анализа данных антигенов для неврином слухового нерва неспецифично.

Среднестатистические показатели НСБ в сыворотке крови больных с опухолями головного мозга

«1-BG сс2-ВЗ GFA «2-ЗР

(нг/мл)

Злокачественные глиомы 0,38 0,35 155,1 113,2

Глиомы низкой степени

злокачественности 0,25 0,26 81,28 69,92

Медуллобластомы 0,2 0,1 106 66,1

Зпендимобластома 0,03 0 32 31,2

Краниофаринг иома 0 • 0 20 23,3

Невринома . 0 0 12 11,7

Ангиоретикулема . 0 0 12 11,7

Менингиома 0 0 11,7 11,3

Аденома гипофиза 0 0 8 7,8

Анализируя полученные среднестатические д- иные по им-муноферментному комплексному анализу 4 НСБ, мы отмечаем, что наиболее высокая концентрация в сыворотке крови данных анти- • генов соответствует больным с гл:иальными опухолями. При этом уровни НСБ в сыворотке при злокачественных глиомах достоверно выше, чем в группе глиом низкой степени злока-

честзенности. Изменения НСБ при медуллобластомах менее показательны, в первую очередь из-за малого количества исследуемых больных данной гистологической /руппы. Однако у всех больных выявлено содержанке четырех НСБ в концентрациях: «1-Б8 от 0,1 до 0,4 нг/мл, при среднестатистическом показателе 0,2нг/мл;«2-Вй от 0,05 до 0,£нг/мл,при среднестатическом показателе 0,1нг/мл.Волее высокий уровень ЭРА у больных с ме-дуллобластомами от 31 до 256 нг/мл, при средней величине 106 нг/мл, а также «2-йР от 32 до 102 нг/мл, при средней величине 66,1 нг/мл. Анализируя эти изменения всех четырех НСБ в комплексе, можно отметить, что они по своим величинам приближены к показателям в сыворотке крови больных со злокачественными глиомами.Среди Сольных с экстрацеребральными опухолями иммуноферментное определение НСБ в сыворотке крови отмечает следующие изменения: данная методика не обнаруживает наличия Й1-В6 и «2-ВЗ в сыворотке крови. В частности у больных с менингиомами не выявлены ах-БЗ и аг-Вй, а концентрация в сыворотке крови вГА и сег-бР превышает показатели нормы при среднестатическом определении в 1,5 раза. Аналогичные изменения были характерны и для больных с неврикомами VIII нерва, а также с ангнорегикулемами. Эаендимими и эпекдиобласто-мы имеют лрактичэски равные показатели КСБ в сыворотке крови у исследованных больных,при этом см-ВО и а.г-Вв обнаруживаются на уровне чувствительности данного метода, а концентрация СРА и «¿-6Р в 4 раза превышает нормальные урозни. Изменения при краниофарингиомах характерны отсутствием «1-135 и «2-ВЗ в сыворотке крови, а концентрация 6РА и 6Р в 3 раза выше нормы. Анализируя изменения НСБ в сывсротке крови у больных аденомами гипофиза, мы не выявили каких-либо отличий от уровня нормальных показателей, т.е. иммукоферментный метод определения данных 4 НСБ не является диагностическим.

Незначительное повышение уровней 0РА и с^-СР в наиих исследованиях получены у больных с метастатическими порах;*?-' ниями головного мозга в 2-4 раза, хотя выявить какую-либо закономерность этих изменений не представляется возможным из-за малого количества наблюдений и различного генеза первичных очагов. Изменения НСБ в сыворотке крови у больных с

хронической недостаточность» мозгового кровообращения, хронической субдуральной гематомой, остеомой, нейрофибромой были на уровне нормы.

Уровни НСБ в первую очередь определяются гистострукту-рой новообразования и уровнем злокачественности. Так, наиболее высокие концентрации НСБ были характерны для нейроэкто-дермальных опухолей, в то же время при менингиомах, неврино-мах, аденомах гипофиза уровни НСБ значительно меньше.

Также нами проведено исследование по сравнению диагностической значимости отдельных НСБ при глиальных опухолях и комплексного анализа НСБ. Так, использование диагностических тест систем на «1-ВЗ позволяет выявить этот антиген в концентрациях выше нормы в 88% случаев, использование аг-Вб позволили выявить данный антиген в 84% случаев, а комплексный анализ 4 НСБ подтверждает наличие опухоли в 100%.

Комплексное определение четырех НСБ является важным моментом в диагностике и дифференциальной диагностике опухолей головного мозга. Важно отметить, что учет изменений только вРА и «2-6Р снижает качество дифференциальной диагностики опухолей головного мозга, так как изолированное увеличение данных двух НСВ может быть при патологии головного мозга не только опухолевого генеза. Даже количественный уровень отдельного антигена не всегда может свидетельствовать о гистологической природе опухоли. Наличие «г-Вб и «г-Вб в сыворотке крови практически всегда было характерно для опухолей глиального ряда. Изменения уровней НСВ в сыворотке крови в зависимости от размера опухоли, степени дислокации структур мозга' и индекса качества жизни у больных £ новообразованиями мозга для каждой группы и антигенов различны и не имеют сильной корреляции.

Увеличение концентрации НСБ в сыворотке крови у больных с опухолями головного мозга происходит не только за счет синтеза антиген-продуцирующими клетками, а также за счет нарушения собственно барьерной функции гематоэнцефалического барьера. Расширение спектра НСВ, определяемых в сыворотке крови, может значительно увеличить возможности комплексной иммуноферментной диагностики.

вывода

1) Комплексный иммуноферментный анализ нейроспецифи-чесгсих белков Cc<i-BQ, аг-ВО, GFA и «2-GP.? в сыворотке крози позволяет достоверно выявлять повышение их концентраций в сыворотке крови вше нормальных значений у 79,2±0,9% больных с опухолями головного мозга. При этом уровень НСЬ в сыворот-кэ крови зависит от гистоструктуры опухоли, ее дкфференци-ровки и характера роста.

ч

2) Иммуноферментный анализ НСБ «i-BG и ccg-ВЗ позволяет достоверно отмечать их увеличение в сыворотке крови у S6,2±0,8£ больных со злокачественными глиомами и 86Ю,6% глиом низкой степени злокачественности.

Иммуноферментный анализ GFA и «2-6Р дает возможность достоверно выявить увеличение концентраций этих антигенов в сыворотке крови у 100% больных со злокачественными глиомами и глиомами низкой степени злокачественности, а также у 33,310,6 % больных с менингиомами, 25±0,4% больных с неври-номами VIII нерва. • '

3) Статистический ' анатаз комплексного исследования уровней НСБ р сыворотке крови более информативен и достоверен нежели анализ отдельных нейроспецифических белков.

. 4) Комплексный количественный анализ НСБ позволяет надежно проводить дифференциальную диагностику следующих опухолей:

Злокачественных глиом - «i-BS(p<0,05), «2-BG(p<0,l),

GFA и «2-ЗРСр<0,00'П;

Тлиом низкой степени злокачествености -

•' «i-BG(p<0,3), a2-BG(p<0,3), VGFA и «2-GP(p<0,OOD;

Меникгиом . GFA и «2-GP(p<0,5).

5) Целесообразно внедрение комплексного иммунофермент-ного анализа НСБ в сыворотке крови в ' работу нейрохирургических и неврологических отделений как дополнительного теста в целях улучшения дифференциальной диагностики, контроля за качеством проводимой терапии, а также для проведения скрия-нинговой диагностики опухолей мозга.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1) Иммунологическая диагностика опухолей головного мозга/Научно-практическая конференция молодых учёных Московской области: Тез.докладов-М.-1989.-с.6 (в соавт. с Б.А. Кругловым) .

2) Иммунохимическая диагностика опухолей головного моз-.га/Современные вопросы диагностики и лечения в условиях многопрофильного стационара: Матер. XXII научной конференции ЦВМУ-М-1990.-С.38 (в соавт.'с Б.А. Кругловым, И.М. Притулой)

3) Комбинированное лечение больных с глиобластомами головного мозга//МР1.-1990.-раздел VI.-Т.6.-публ.-N. 1919.-

Д-190017(в соавт. с Б.А.' Кругловым, И.М. Притулой).

4) Изменения нейроспецифических белков при опухолях головного мозга// I Московская конф. молодых, ученых: Тез. докл. -М.-1990.-с.5-7(в соавт. с Б.А. Кругловым, И.М. Притулой)..

5).Механизмы аутоагрессии антител к нейроспецифическим белкам в', эксперименте// Юбилейный сборник к 70-летию института ОСП'им. В.П.- Сербского.-1993.-М.-123-129 (в соавт. с В.П. Чехониным, Н.Ю. Беляевой, B.C. Пауковым, Р.Ц. Лиджие-вой.-Е.А. ' Кортеевой, С.Г. Морозовым, Л.Т. Михальчук, Е.Я. Карагановой, Е.В. Матушевской, Д.А. Лабунским).

6)'Нормализация структуры и синтеза белка в дистрофиро-ванных • постгипоксических нейронах головного мозга под влиянием' 'органоспецифической гидрофобизованной РНК у

. крыс//ж.Доклады Академии Наук-1992.-Том 324.-N.-4-c.876-880(b соавт. Л.В.Полежаевым, Л.В. Черкасовой, В.Н. Витвицким, В.П. Чехониным)

7) Двухцентровый иммуноферментный анализ специфического альфа 1 глобулина мозга//ж. Лаб. дело - 199Й. - N. 1.'- с. 15-19 (в соавт.' В.П. Чехониным, С.Г Морозовым, Е.Я Карагановой, Л. Т. Михальчук).

8) Normalization of protein strukture systhesis in dystropfic posthy'poxls of the brain effekted by the

- 20 -

organospeclfic hydrorhoboaed rat RNA//Neyral

Transplantation. -1993.(.L Poleshaev.L.Chehonln). - in press 9) Высокоселективная экстракарпональная иммуноадсорбцкя антител к нейроспецифическим белкам-метод завзяты мозга при аутоиммунных пооцессах/УМатер. Всеросс. симп. 1993. --Ростов-на-Дону в печати (в соавт. с в.П. Чехониным, И.А. Рябухиным, Е.А. , Коротеевой, Л.Т. Мнхальчук, И.И. Шепелевой, А.Б. Аниным).

10) Диагностические возможности иммуноферментногс опре-. деления нейроспецифйческих белков у больных со злокачественными глиомами //Биологические аспекты патогенеза нервных и психических заболеваний:Сборник.-1993.-Томск.-с.б7(в соавт. с В.П.Чехониным, И.А. Качковым, С.Ю. Касумовой, ¡O.A. Жирко-вым).