Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Проявления и некоторые механизмы апоптоза, индуцируемого клетками акантамебы линии CDHT и их гуморальными продуктами
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.36
Оглавление диссертации Комогорова, Виктория Вячеславовна :: 2002 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Цитопатогенные свойства представителей типа Sarcomastigophora.
1.2. Механизмы цитопатогенности представителей рода Acanlhamoeba
1. Биология амеб - представителей рода Acanthamoeba
2. Растворимые факторы Acanthamoeba spp, оказывающие цитотоксическое действие на клеточные линии и культуры клеток млекопитающих
3. Основные механизмы и проявления программированной клеточной гибели -апоптоза.
4. Апоптоз как один из механизмов цитопатогенности представителей рода
Acanthamoeba.
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Положение организмов штамма CDHT в систематике животных.
3.2 Сокулътивация амебы CDHT и различных клеток-мишеней.
3.3 Апоптоз, индуцированный супернатантом и лизатом CDHT и амебой CDHT.
3.4 Влияние клеточных ядов, действующих на биосинтез макромолекул и состояние цитоскелета, на апоптоз тимоцитов, индуцированный CDHT.
3.5 Влияние блокады мембранных молекул тимоцитов на развитие их апоптоза, индуцированного CDHT.
3.6 Изучение роли каспаз 3 и 8 и Fas-рецептора в индукции и проведении сигнала апоптоза в опытах с тимоцитами человека.
3. 7 Фракционирование супернатанта CDHT с целью обогащения апоптотической активности.
3,8 Обсуждение.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Комогорова, Виктория Вячеславовна, автореферат
В конце 70-х годов цитопатогенное действие некоторых представителей простейших в отношении клеток млекопитающих является уже установленным фактом. Начиная с этого периода растет количество исследований, посвященных явлению цитопатогенности протистов. Объектами изучения становятся различные классы простейших; повышенное внимание ученых привлекает анализ спектра клеток-мишеней, а также механизмы, посредством которых реализуется цитотоксическое действие.
Среди простейших наиболее выраженная степень цитопатогенности характерна для отдельных представителей класса Lobosea: амеб - паразитов человека и животных, а также свободноживущих амеб, некоторые виды которых, тем не менее, способны вызывать тяжелые патологические процессы в организме млекопитающих (Bonilla H.F. et all., 1999; Hawley H.B. et all., 1997).
Хорошо известно, что гибель клетки может происходить при участии двух принципиально различных процессов - некроза и апоптоза (Denecker G. et all., 2001). Многочисленные результаты исследований протозоологов, иммунопатологов и иммунохимиков позволили сделать вывод, что растворимые цитотоксические факторы, синтезируемые некоторыми видами амеб, способны индуцировать клеточную гибель, запуская механизмы как некроза, так и апоптоза (Berninghausen О. et all., 1997). Апоптоз клеток-мишеней, происходящий в результате воздействия на клетку гуморальных факторов амеб, вызывает повышенный интерес к феномену, поскольку действие этих факторов проявляется в отношении трансформированных клеточных линий в условиях in vitro, а также в отношении опухолевых масс in vivo (Pidherney M.S. et all., 1993). Таким образом, изучение сигналов, которые возникают между клетками амеб и клетками-мишенями, позволит расшифровать природу, интенсивность и избирательную направленность этих сигналов, что может позволить в дальнейшем контролировать процессы патологической клеточной пролиферации и трансформации клеток.
Ранее в Институте Иммунологии МЗ РФ была получена линия клеток из тимуса ребенка (Sharova N.I. et all., 1993), получившая название CDHT (Cells Derived from Human Thymus). Природа клетки долгое время не была выясненной. С участием протистологов было показано, что эти клетки происходят не из организма-хозяина, а являются амебами. Присутствие амеб в тимусе человека было показано впервые и представляло большой интерес выяснить взаимоотношения между этими клетками с одной стороны и лимфоидными и эпителиальными клетками тимуса - с другой.
Цель работы состояла в характеристике свойств и поведения in vitro клеток амебы линии CDHT, выделенной из тимуса ребенка, изучении их взаимоотношений с клетками тимуса, в особенности апоптоза тимоцитов, индуцируемого клетками CDHT in vitro.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
1. Определить таксономическое положение организмов, образующих линию CDHT.
2. Изучить пролиферативную активность и спектр цитопатогенного действия клеток CDHT, а также реакцию клеток-мишеней при их совместном культивировании с CDHT.
3. Исследовать способность клеток CDHT и их гуморальных факторов вызывать апоптоз нормальных и трансформированных клеток млекопитающих.
4. Выяснить роль некоторых мембранных молекул и внутриклеточных компонентов тимоцитов, а также синтеза макромолекул de novo в развитии апоптоза тимоцитов под влиянием клеток CDHT и их гуморальных продуктов.
5. На основании фракционирования супернатанта CDHT дать предварительную характеристику гуморальных факторов CDHT, вызывающих апоптоз тимоцитов.
Научная новизна работы.
Впервые объектом иммунологических исследований стала свободноживущая амеба рода Acanthamoeba, происходящая из тимуса человека. Установлены зависимость пролиферации клеток линии CDHT от присутствия в культуре ядросодержащих клеток млекопитающих. Показана роль индукции апоптоза в реализации цитопатогенного эффекта амебы и зависимость чувствительности к апоптозу, вызываемому клетками CDHT, от активационного статуса клеток-мишеней (в том числе лимфоидных и эпителиальных клеток тимуса). Обнаружено, что апоптоз тимоцитов могут вызывать как жизнеспособные клетки CDHT, так и их гуморальные продукты, в частности компонент с молекулярной массой 12 600 Да и «19 ООО Да. Выявлена зависимость развития CDHT-индуцированного апоптоза тимоцитов от двухвалентных ионов, синтеза РНК de novo, участие в его индукции каспаз 3 и 8 и ряда мембранных молекул тимоцитов и независимость от сигналов, поступающих через Fas-рецептор.
Теоретическая и практическая значимость.
Теоретическая значимость работы состоит в углублении понимания характера и механизмов взаимодействия между паразитами и клетками тимуса, в частности, в установлении возможности воспроизведения паразитом некоторых эффектов нормальных клеток организма-хозяина (в данном случае - эпителиальных клеток тимуса, взаимодействующих с тимоцитами).
Практическое значение работы состоит в установлении возможности проникновения акантамеб в тимус детей и выяснении характера их цитопатогенного действия.
Линия акантамебы CDHT может быть использована в практике экспериментальных лабораторий для дальнейшего изучения амеб. Факторы с молекулярной массой 12 600 Да и «19 ООО Да, обнаруженные в супернатанте амебы линии CDHT, могут быть использованы как инструмент для индукции апоптоза в эксперименте, а в перспективе - возможно и в клинической практике.
Положения, выносимые на защиту:
1.Клетки линии CDHT, выделенные из тимуса человека, принадлежат к типу Sarcomastigophora, классу Lobosea, роду Acanthamoeba.
2.При совместном культивировании амебы CDHT и клеток-мишеней млекопитающих степень цитопатогенности in vitro клеток CDHT уменьшается в ряду трансформированных, активно делящихся, активированных, покоящихся и безъядерных клеток-мишеней. Степень цитопатогенности коррелирует с уровнем пролиферации клеток амебы в совместной культуре с клетками млекопитающих.
3.Амебы CDHT, а также клеточный лизат и супернатант CDHT, способны вызывать апоптоз тимоцитов.
4. Пролиферация амеб CDHT и CDHT-индуцированный апоптоз тимоцитов значительно уменьшается при добавлении в сокультивируемую систему актиномицина Д и ЭДТА и не снижается при обработке системы цитохалазином, колхицином, циклогексимидом и митомицином.
5. Проведение апоптогенного сигнала внутрь клетки-мишени Т-ряда не зависит от Fas-рецептора. В качестве инициаторной каспазы при этом выступает каспаза 8, в качестве эффекторой каспазы - каспаза 3.
6. Моноклональные антитела к некоторым мембранным молекулам тимоцитов влияют на выраженность апоптоза, вызванного амебой CDHT: антитела к CD4 увеличивают, а антитела к CD3, CD54, CD62L и молекулам главного комплекса гистосовместимости классов I и II уменьшают его. Обработка системы перечисленными МоАт не влияет на апоптоз тимоцитов, вызываемый супернатантом CDHT.
7. Способность супернатанта клеток CDHT вызывать апоптоз связана с присутствием в нем молекул с массой 12 600 Да и »19 ООО Да.
Заключение диссертационного исследования на тему "Проявления и некоторые механизмы апоптоза, индуцируемого клетками акантамебы линии CDHT и их гуморальными продуктами"
Выводы.
1.Установлено таксономическое расположение клеток амебы штамма CDHT, выделенной из тимуса ребенка. Данный организм принадлежат к роду Acanthamoeba, классу Lobosea, типу Sarcomastigophora.
2.При совместном культивировании амебы CDHT и клеток млекопитающих отмечается высокая цитопатогенность in vitro клеток CDHT по отношению к трансформированным, активно делящимся и активированным клеткам-мишеням, и низкая степень цитопатогенности - по отношению к покоящимся и безъядерным клеткам. Чем выше способность делящихся клеток млекопитающих поддерживать размножение клеток амебы штамма CDHT, тем чувствительнее они к цитопатогенному эффекту амебы.
3.Цитопатогенный эффект амебы штамма CDHT, а также клеточного лизата и супернатанта реализуется через индукцию апоптоза клеток-мишеней. В наиболее четкой форме прослеживается способность амебы штамма CDHT индуцировать апоптоз тимоцитов.
4.Активной фракцией растворимых факторов культурального супернатанта амебы, вызывающей апоптоз тимоцитов, являются молекулы с массой 12 - 20 кДа.
5.Апоптоз тимоцитов и пролиферация амеб линии CDHT в совместной культуре этих клеток значительно уменьшается при удалении двухвалентных ионов в присутствии ЭДТА и блокаде синтеза РНК актиномицином Д.
6.Обработка тимоцитов моноклональными антителами к CD4 усиливает, а антителами к CD54, CD62, CD3, HLA-I, HLA-II ослабляет апоптоз тимоцитов, вызванный амебой CDHT, а также пролиферацию клеток CDHT в ко-культуре с тимоцитами. Антитела к CD8 не влияют на интенсивность апоптоза тимоцитов.
Введение в культуру тимоцитов перечисленных антител не влияет на апоптоз клеток, вызываемый супернатантом CDHT.
7.Индукция апоптоза тимоцитов в совместной культуре с клетками CDHT или при действии их гуморальных продуктов не зависит от Fas-рецептора. В его осуществление вовлечены инициаторная каспаза 8 и эффекторная каспаза 3.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Комогорова, Виктория Вячеславовна
1. Галактионов В.Г. Иммунология. М.: МГУ им. Ломоносова, 1998
2. Дзуцев А.Х. Влияние эпителиальных клеток тимуса и их гуморальных факторов на апоптоз тимоцитов. Дис. на соиск. учен, степени канд. мед. наук. М., 2001.- 122с.
3. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа, М.: Медицина, 1986
4. Программированная клеточная гибель. Под ред. B.C. Новикова. С.-П., «Наука», 1996.
5. Сопина В.А. Клеточная биология амеб и амебожгутиконосцев -паразитов человека и животных. Цитология 1997; том 39, № 4/5, с. 361-385.
6. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме. Патологич. физиолог, и эксп. терап. 1998; №2; с. 38-48.
7. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М. «Наука». 1999.
8. Abbas А.К., А.Н. Lichtman, J.S. Pober. Cellular and Molecular Immunology. 4-th Ed. 2000. 553 p.
9. Alizadeh H, Pidherney MS, McCulley JP, Niederkorn JY. Apoptosis as a mechanism of cytolysis of tumor cells by a pathogenic free-living amoeba. Infect Imun 1994; 62(4): 1298-1303.
10. Anderson G., Moore n.c., Owen J.J.Т., Jenkonson E.J. Cellular interactions in thymocyte development. Ann. Rev. Imunol. 1996, 4:73-99.
11. Auran, J.D., M.B. Starr, and F.A. Jacobiec. Acanthamoeba keratitis. Cornea 1987,6:2-26.
12. Avila EE, Calderon J. Entamoeba histolytika trophozoites: a surface-associated cysteine protease. Exp Parasitol 1993; 76(3): 232-241.
13. Beg, A. A., and D. Baltimore. An essential role for NF-k in preventing TNFa-induced cell death. Science 1996, 274:782.
14. Berninghausen О., and Leippe M. Necrosis versus apoptosis as the mechanism of target cell death induced by Enthamoeba histolytica. Infect. Immun. 1997; 65(9):3615-3621.
15. Bonaldo, M.C., L.N. D'Escoffier, J.M. Salless, and S. Goldenberg. Characterization and expression of proteases during Trypanosoma cruzi metacyclogenesis. Exp. Parasitol. 1991; 73:44-51.
16. Bonilla HF, Whitehurst A, Kauffman CA. Acanthamoeba sinusitis and disseminated infection in a patient with AIDS. Infect Med 1999; 16(6): 397-400.
17. Brita Gaudecker Functional histology of the human thymus, //Anat Embryol, 1991, 183:1-15
18. Brockhaus, M., H. J. Schoenfeld, E. J. Schlaeger, W. Hunzicher, W. Less-lauer, H. Loetsher. Identification of two types of tumor necrosis factor receptors on human cell lines by monoclonal antibodies. Proc. Natl.Acad. Sci. USA 1990, 87:3127-3131.
19. Buendia В., Santa-Maria A., and Courvalin J.C. Caspase-dependent proteolysis of integral and peripheral proteins of nuclear membranes and nuclear pore complex proteins during apoptosis. Journal of Cell Science; 1999; 112:1743-1753.
20. Cabral HR. The tumoricidal effect of Trypanosoma cruzi: its intracellular cycle and the immune response of the host. Med Hypotheses 2000; 54(1): 1-6.
21. Cao Z, Jefferson DM, Panjwani N. Role of carbohydrate-mediated adherence in cytopathogenic mechanisms of Acanthamoeba. J Biol Chem 1998; 273(25): 1583815845.
22. Cho J.H., Na В.К., Kim T.S., and Song C.Y. Purification and characterization of an extracellularserine proteinase from Acanthamoeba castellanii. Appl. Environ. Microbiol. 2000; 66(10):4408-4413.
23. Cohen JJ, Duke RC. Glucocorticoid activation of a calcium-dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell-death. J Immunol 1984; 132: 38-42.
24. Dechat Т., Korbei В., Vaughan O.A., Vlcek S., Hutchison C.J., and Foisner R. Lamina-associated polypeptide 2 (alpha) binds intranuclear A-type lamins. J. Cell. Sci. 2000; 113:3473-3484.
25. Denecker G., Vercammen D., Declercq W., and Vandenabeele P. Apoptotic and necrotic cell death induced by death domain receptors. Cell Mol. Life Sci. 2001; 58(3):356-370.
26. Dodson JM, Petri WA. Pore formation ant cytolysis by Entamoeba hystolytica. Parasitol Today 1004; 10: 7-8.
27. Duke RC, Witter RZ, Nash PB, Young JD, Ojcius DM. Cytolysis mediated by ionophores and pore-forming agents: role of intracellular calcium in apoptosis. FASEB J 1994; 8(2): 237-246.
28. Duma R.J., W.I. Rosenblum, R.F. McGhee, M.M. Jones, and E.C. Nelson. Primary amoebic meningoencephalitis caused by Naegleria. Ann. Intern. Med. 1971; 74:923-931.
29. Dunnebacke TH, Walen KH. A protein from Naegleria amoebae causes apoptosis in chick embiyo and CHO cells after they become confluent. In vitro Cell Dev Biol Anim 1999; 35(5): 252-261.(10)
30. Feingold C, Bracha R, Wexler A, Mirelman D. Isolation, purification and partial characterization of an enterotoxin from extracts of Entamoeba histolytica trophozoites. J Infect Dis 1982; 146(5): 616-625.
31. Ferrante A., and Bates E.J. Elastase in the pathogenic free-living amoebae Naegleria and Acanthamoeba spp. Infect. Immun. 1988; 56(12):3320-3321.
32. Fulda S., Meyer E., Friesen C., Susin S.A., Kroemer G., and Debatin K.M. Cell type specific involvement of death receptor and mitochondrial pathways in drug-induced apoptosis. Oncogene 2001;20(9): 1063-1075.
33. Fulford DE, Bradley SG, Marciano-Cabral F. Cytopathogenicity of Naegleria fowlery for cultured rat neuroblastoma cells. J Protozool 1985; 32(1): 176-180.
34. Gotzmann J., Vlcek S., and Foisner R. Caspase-mediated cleavage of the chromosome-binding domain of lamina-associated polypeptide 2 alpha. J. Cell. Sci. 2000;113(21):3769-3780.
35. Griffith T.S., Yu X., Herndon J.M., Green D.R., and Ferguson T.A. CD95-induced apoptosis of lymphocytes in an immune privileged site induces immunological tolerance. Immunity; 1996; 5:7-16.
36. Hakem, R., A. Hakem, G. S. Duncan, J. T. Henderson, M. Woo, M. S. Soengas et al. Differential requirement for caspase 9 in apoptotic pathways in vivo. //Cell 1998,94:339.
37. Hare, D.F., E.L. Jarroll, and D.G. Lindmark. Giardia lamblia: characterization of proteinase activity in trophozoites. Exp. Parasitol. 1989; 29:168-175.
38. Hawley HB, Czachor JS, Malhotra V, Funkhouser JW. Acanthamoeba encephalitis in patients with AIDS. The AIDS Reader 1997; 7(4): 134-137.
39. He, Y.G., J.Y. Neiderkorn, J.P. McCulley, G.L. Stewart, D.R. Meyer, R. Silvany, and J. Doughtery. In vivo and in vitro collagenolytic activity of Acanthamoeba castellanii. Invest. Ophthal. Vis.Sci. 1990; 31:2235-2240.
40. Hsu, H., J. Xiong, and D. V. Goeddel. The TNF receptor 1-associated protein TRADD signals cell death and NF-kB activation. Cell 1995, 81:495.
41. Jaison PL, Cao Z, Panjwani N. Binding of Acanthamoeba to mannose-glycoproteins of corneal epitelium: effect of injury. Curr Eye Res 1998; 17(8): 770-776.
42. Janeway C.A., P. Travers, M. Walport, J.D. Capra. Immunobiology. 4-th Ed. 1999. 635 p.
43. Jantzen H. and Schulze I. The cell cycle and the genome organization in Acanthamoeba castellanii. J. Protozool. 1990. 37: 41 A.
44. Keene, W.E. Enthamoeba histolytica: correlation of the cytopathic effect of virulent trophozoites with secretion of a cystein proteinase. Exp. Parasitol. 1990; 71:199206.
45. Khan N.A., E. L. Jarroll, N. Panjwani, Z. Cao, and T. A. Paget. Proteases as markers for differentiation of pathogenic and nonpathogenic species of Acanthamoeba. J. Clin. Microbiol. 2000; 38 (8): 2858-2861.
46. Lagmay J.P., Matias R.R., Natividad F.F., Enriquez G.L. Cytopathogenicity of Acanthamoeba isolates on rat glial C6 cell line. South. As. J. Trop. Med. Public. Health. 1999; 30(4):670-677.
47. Leher PI, Silvany R, Alizadeh H, Huang J, Niederkorn JY. Mannose induces the release of cytopathic factors from Acanthamoeba castellanii/ Infect Immun 1998; 66(1): 5-10.
48. Lowrey, D.M., and J. McLaughlin. Activation of a heat-stable cytolytic protein associated with the surface membrane of Naegleria fowlery. Infect.Immun. 1985; 50:478-482.
49. Lushbaugh WB, Hofbauer AF, Kairalla AA, Cantey JR, Pittman FE. Relationship of cytotoxins of axenically cultivated Entamoeba histolytica to virulence. Gastroenterology 1984; 86(6): 1488-1495.
50. Ma, P., G.S. Visvesvara, A.J. Martinez, F.H. Theodore, P.M. Dagget, and Т.К. Sawyer. Naegleria and Acanthamoeba infections. Rev. Infect. Dis. 13 (Suppl. 5):369-372.
51. Marciano-Cabral F, Bradley SG. Cytopathogenicity of Naegleria grubery for rat neuroblastoma cell cultures. Infect Immun 1982; 35: 1139-1141.
52. Marciano-Cabral F, Fulford DE. Cytopathology of Pathogenic and nonpathogenic Naegleria species for cultured rat neuroblastoma cells. Appl. Environ Microbiology 1986; 51(5): 1 133-1 137.
53. Marciano-Cabral F, John DT. Cytopathogenicity of Naegleria fowlery for rat neuroblastoma cell cultures: scanning electron microscopy study. Infect Immun 1983; 40: 1214-1217.
54. Marciano-Cabral F., and Fulford DE. Cytopathology of pathogenic and non pathogenic action Naegleria species for cultured rat neuroblastoma cells. Appl. And Env. Microbiol. 1986; 51(5): 1 133-1137.
55. Marciano-Cabral F., M. Patterson, D.T. John, and S.G. Bradley. Cytopathogenicity of Naegleria fowlery and Naegleria gruberi for established mammalian cell cultures. J. Parasitol.1982; 68:1110-1116.
56. Marciano-Cabral F., Zoghby K.L., and. S.G. Bradley. Cytopathic action of Naegleria fowleri amoeba on rat neuroblastoma target cells. J. Parasitol.1990; 37(2): 138144.
57. MattanaA, Bennardini F, Usai S, Fiori PL, Franconi F, Cappuccinelli P. Acanthamoeba castellanii metabolites increase the intracellular calcium level and cause cytotoxicity in wish cells. Microb Pathog 1997; 2392): 85-93.
58. McKerrow, J.H. The role of proteases in the pathogenesis and immune response to parasitic disease. UCLA Symp. Mol. Cell. Biol. 1987; 42:553-557.
59. McKerrow, J.H. The role of proteases in the pathogenesis and immune respons to parasitic disease. UCLA Symp. Mol. Cell. Biol. 1987, 42:553-557.
60. McKerrow, J.H., E. Sun, P. Rosenthal, and J. Bouvier. The proteases and the pathogenicity of parasitic protozoa. Annu. Rev. Microbiol. 1993; 47:821-853.
61. Mitra MM, Alizadeh H, Gerard RD, Niederkorn JY. Characterization of a plasminogen activator produced by Acanthamoeba castellanii. Mol Biochem Parasitol 1995; 73(1-2): 157-164.
62. Mitro, K., A. Bhagavathiammai, O.M. Zhou, G. Bobbett, H.J. McKerrow, R. Chokshi, B. Chokshi, and R.E. James. Partial characterization of proteolytic secretions of Acanthamoeba polyphaga. Exp. Parasitol. 1994; 78:377-385.
63. Morgan J., Hary K. et al. Fas is expressed early in human thymocyte development but does not transmit an apoptotic signal.// J.Immunol., 1999, 163: 1195-1204
64. Murakawa GJ, McCalmont T, Altman J, Telang GH, Hoffman MD, Kantor GR, Berger TG. Disseminated acanthamebiasis in patients with AIDS. A report of five cases and a rewiew of the literature. Arch Dermatol 1995; 131(11): 1291-1296.
65. Murphy, M., L. Pike-Nobile, V.W. Soo, and L. B. Epstein. Characterization of TNF receptors on human thymocytes. Thymus 1994, 23:177.
66. Musci M.A., Latinis K.M., and Koretzky G.A. Signaling events in T lymphocytes leading to cellular activation or programmed cell death. Clin. Imunol. And Immunopath. 1997; 83(3):205-222.
67. Na В., Kim J., and Song C. Characterization and pathogenetic role of proteinase from Acanthamoeba castellanii. Microb. Pathog. 2001; 30(l):39-48.
68. Niszl IA, Veale RB, Markus MB. Cytopathogenicity of clinical and environmental Acanthamoeba isolates for two mammalian cell lines. J Parasitol 1998; 84(50):961-967.
69. O'Brien M.A., Moravee R.A., and Riss T.L. Poly (ADP-ribose) polymerase cleavage monitored in situ in apoptotic cells. Biotechniques 2001;30(4):886-891
70. Orrenius S, McConkey DJ, Bellomo G, Nicotera P. Role of Ca++ in toxic cell killing. Trends Pharmacol Sci 1989; 10: 281-285.
71. Page FC. The classification of «naked» amoebae (phylum Rhizopoda). 1987. Bd 133. s.199-217.
72. Pettit DA, Williamson J, Cabral GA, Marciano-Cabral F. In vitro destruction of nerve cell cultures by Acanthamoeba spp.: a transmission and scanning electron microscopy study. J Parasitol 1996; 82(5): 769-777
73. Pidherney MS, Alizadeh H, Stewart GL, McCulley JP, Niedercorn JY. In vitro and in vivo tumoricidal properties of a pathogenic/free-living amoeba. Cancer Lett 1993; 72(1-2): 91-98.
74. Prina, E., J.C. Antoine, B. Weideranders, and H. Kirschke. Localization and activity of various lysosomal proteases in Leishmania amazonensis-infected macrophages. Infect. Immun. 1990; 58:1730-1737.
75. Reeds, S.L., W.E. Keene, and J.H. McKerrow. Thiol proteinase expression and pathogenicity of Enthamoeba hystolytica. J. Clin. Microbiol. 1989; 27:2772-2777.
76. Said-Fernandes S, Lopes-Revilla R. Cytopathogenic activity of extracts E. histolytica trophozoites. Arch Invest Med 1978; 9 Suppl 1: 155-162.
77. Selby DM, Chandra RS, Rakusan ТА, Loechelt B, Markle BM, Visvesvara GS. Amebic osteomyelitis in a child with acquired immunodeficiency syndrom: a case report. Pediatr Pathol Lab Med 1998; 18(1): 89-95.
78. Shin HJ, Cho MS, Lee M, Park S, Sohn S, Im KI. Apoptosis of primary-culture rat microglial cells induced by pathogenic Acanthamoeba spp. Clin Diagn Lab Immunol 2000; 7(3): 510-514.
79. Stopak SS, Roat MI, Nauheim RC, Turgeon PW, Sossi G, Kowalski RP, Thoft RA. Growth of Acanthamoeba on human corneal epithelial cells and keratocytes in vitro. Invest Ophthalmol Visual Sci 1991; 32: 354-359.
80. Tan B, Weldon-Linne CM, Rhone DP, Penning CL, Visvesvara GS. Acanthamoeba infection presenting as skin lesions in patients with the acquired immunodeficiency syndrom. Arch Pathol Lab Med 1993; 117(10): 1043-1046.
81. Taylor WM, Pidherney MS, Alizadeh H, Niederkorn JY. In vitro characterization of Acanthamoeba castellanii cytopathic effect. J Parasitol 1995; 81(4): 603609.
82. Tucek-Szabo C., Andjelic S. Surface T-cell Fas-receptor/CD95 regulation in vitro activation and apoptosis. Activation induced death can occure without Fas-receptor. J Immunol 1996, 156:192-200.
83. Wajant, H., F. J. Johannes, E. Haas, K. Siemienski. Dominant-negative FADD inhibits TNFR60-, Fas/Apol- and TRAIL-R/Apo2-mediated cell death but not gene induction. //Curr. Biol 1998, 8:113.
84. Wang E., Marcotte R., and Petroulakis E. Signaling pathway for apoptosis: a racetrack for life or Death. J. Cell Biochem. Suppl. 1999; 32/33:95-102.
85. Wilhelmus, K.R. The increasing impotance of Acanthamoeba. Rev. Infect. Dis. 1991, 13(Suppl. 5):5367-5446.
86. Winoto A. Cell death in the regulation of immune responses. Current Opinion in Immunol. 1997; 9:365-370.
87. Yang Z, Cao Z, Panjwani N. Pathogenesis of Acanthamoeba keratitis: carbohydrate-mediated host-parasite interactions. Infect Immune 1997; 65(2): 439-445.
88. Yarilin A.A. What the thymus is needed for? Intrathymic events and their uniqueness. Russian. J. Immunol. 1998, 3(1): 5-20.
89. Young JD, Lowrey DM. Biochemical and functional characterization of membrane-associated pore-forming protein from the pathogenicameboflagellate Naegleria fowlery. J Biol Chem 1989; 264: 1077-1083.
90. Список работ, опубликованных по теме диссертации
91. Шарова Н.И., Дзуцев А.Х., Комогорова В.В., Ярилин А.А. Индукция апоптоза тимоцитов человека при их взаимодействии с эпителиальными клетками тимуса. Медицинская иммунология. - 1999. - Т. 1 - №3-4. - с. 27-28.
92. Ярилин А.А., Шарова Н.И., Дзуцев A.X., Комогорова В.В. Последствия взаимодействий лимфоидных и эпителиальных клеток тимуса in vitro. Российский Физиологический Журнал им. И.М. Сеченова. 2000. - 86. - №3. - с. 285-291.