Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Периферическое звено гемопоэза и некоторые биохимические показатели у лиц различных возрастных групп, проживающих в Абхазии

ДИССЕРТАЦИЯ
Периферическое звено гемопоэза и некоторые биохимические показатели у лиц различных возрастных групп, проживающих в Абхазии - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Периферическое звено гемопоэза и некоторые биохимические показатели у лиц различных возрастных групп, проживающих в Абхазии - тема автореферата по медицине
Каландия, Теона Зурабовна Москва 2006 г.
Ученая степень
кандидата биологических наук
ВАК РФ
14.00.29
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Периферическое звено гемопоэза и некоторые биохимические показатели у лиц различных возрастных групп, проживающих в Абхазии

На правах рукописи

КАЛАНДИЯ ТЕОНА ЗУРАБОВНА

ПЕРИФЕРИЧЕСКОЕ ЗВЕНО ГЕМОПОЭЗА И НЕКОТОРЫЕ БИОХИМИЧЕСКИ ПОКАЗАТЕЛИ У ЛИЦ РАЗЛИЧНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП, ПРОЖИВАЮЩИХ В АБХАЗИИ.

14.00.29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА - 2006

Работа выполнена в Государственном учреждении «Гематологический Научный Центр» РАМН и в Научно-исследовательском Институте Экспериментальной Патологии и Терапии Академии Наук РА (Сухум, Абхазия).

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор

Козинец Геннадий Иванович

кандидат медицинских наук, профессор

Баркая Владимир Спиридонович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор

Луговская Светлана Алексеевна

доктор биологических наук, профессор

Шарова Юлия Алексеевна

Ведущая организация: Главный военный клинический

госпиталь им. академика Н.Н.Бурденко

Защита состоится « №

У> ¿¿¿^^ 2006г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 001.042. 02 в Гематологическом научном центре РАМП по адресу: 125167. Москва, Ново-Зыковский проезд, 4а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Гематологического научного центра РАМН.

Автореферат разослан « ^Х/'ЯЛ/ 2006г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Е.Е.Зыбунова.

¿Ш А

Актуальность исследования.

Современная демографическая ситуация характеризуется общим постарением населения и увеличением доли людей старше 65 лет. Наступление старости -процесс индивидуальный, и не всегда «календарный» и «физиологический» возраст совпадают. Учитывая увеличение количества людей пожилого возраста, необходимо иметь данные о лабораторных показателях крови. Большой интерес представляет исследование этих показателей у пожилых людей, проживающих в Абхазии, где подобные исследования ранее не проводились.

Феномен абхазского долгожительства издавна привлекал внимание ученых. Проводились совместные программы американских и советских ученых по изучению случаев активного дол! олетия в СССР и США. В одной из них в качестве первого объекта были взяты жители Очамчирского и Гудаутского районов Абхазии, использовались и др. регионы Союза(Украина, Западная Грузия) Наблюдения прошлых лет в основном касались общедемографических аспектов, сведений об образе жизни, жилищно-бытовых условий, особенностей питания долгожителей Абхазии. Были данные, характеризующие различные системы организма (сердечнососудистая, дыхательная и др.). Лишь в конце 80-х гг появились отдельные сообщения о биохимических, цитогенетических, иммунологических показателях на предмет выявления их связи с феноменом абхазского долгожительства.

Вопросу долголетия в Абхазии была посвящена монография американской ученой С. Бенет, опубликованная в 1974 г и вызвавшая широкий интерес общественности.

В 1980-е - начале 1990-х гт под руководством проф. В.И Козлова были выполнены два крупных международных проекта, включающие экспедиционные исследования в Закавказье; исследовались демографические особенности жителей абхазских и азербайджанских селений и возможные факторы их популяционного долгожительства(условия географической среды, системы питания, хозяйственной деятельности, жилища, психологических механизмов адаптации). В составе экспедиции работала американская журналистка П. Гарб, издавшая книгу «Долгожители», переведенную на русский язык в 1986 г.

К сожалению, интерес ученых к данной проблеме в Абхазии стал угасать в последние 14 лет постсоветского периода. Однако, вопрос по-прежнему остается чрезвычайно актуальным, тем более что современные технологии позволяют получить ранее недоступный объем информации о морфофункциональных

особенностях клеток организма.

г

Так как комплексное исследование показателей крови в Абхазии не проводилось, то естественно, что проблема изучения клинико-физиологических особенностей пожилых людей и долгожителей приобретает серьезное значение как для решения фундаментальных вопросов биологии старения на самом позднем этапе онтогенеза, так и для решения ряда важных медико-социальных вопросов, связанных с планированием и организацией охраны здоровья и социального обеспечения людей старших возрастных групп.

Цель работы.

Целью настоящей работы явилось изучение клеточного состава периферической крови, сравнительная характеристика периферического отдела эритрона и биохимических показателей крови жителей Абхазии различных возрастных групп.

Задачи работы.

1) Изучить показатели периферического отдела эритрона (гемоглобин, эритроциты и их морфологическая характеристика).

2) Исследовать количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу, оценить сегментацию ядер нейтрофилов у лиц старческого возраста.

3) Определить биохимические показатели крови (глюкоза, холестерин, мочевина).

4) Исследовать некоторые показатели свертывающей системы (протромбиновый индекс, количество тромбоцитов, время свертывания крови).

5) Дать сравнительную характеристику вышеперечисленных показателей крови у представителей различных возрастных групп, включая долгожителей.

Научная новизна работы: изучение лабораторных показателей крови у лиц пожилого возраста и долгожителей Абхазии с применением метода компьютерной обработки изображения.

Теоретическая и практическая значимость работы.

На основании полученных данных планируется подтвердить утверждение о длительном отсутствии при физиологическом старении нарушений со стороны кроветворения, о чем свидетельствует динамическое постоянство гематологических показателей периферической крови, наблюдаемое у лиц старших возрастных групп.

Положения, выносимые на защиту.

1. На основании полученных данных подтверждено отсутствие при старении резких нарушений со стороны кроветворения.

2. Показано сохранение основных гематологических параметров у долгожителей в пределах физиологической нормы для среднего возраста.

3. На основании данных биохимического исследования установлена стабильность метаболических процессов в старческом и долгожительском возрасте при условии отсутствия острых и хронических заболеваний важнейших систем организма.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 99 страницах машинописного текста Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 129 источников. Работа иллюстрирована 7 таблицами, 17 рисунками.

Апробация работы.

Апробация работы состоялась 2 мая 2006 г. на заседании ученого совета Научно-исследовательского Института Экспериментальной Патологии и Терапии Академии Наук РА. Материалы диссертации доложены на Юбилейной Научно-практической конференции, посвященной 15-летию кафедры клинической лабораторной диагностики факультета последипломного образования Ставропольской Медицинской Академии (май 2005)), на 1 Съезде Физиологов СНГ (сентябрь 2005г), на Научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава Абхазского Государственного Университета (апрель 2006г).

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Материалы.

Представлены результаты исследования крови гематологически здоровых мужчин и женщин, где в статистическую обработку было включено 100 гематологических исследований по 24 параметрам клинического, 3 параметрам биохимического исследования крови. Каждое взятие крови выполнялось только в утренние часы (с

ь

8.00 до 10 ч.), натощак и в состоянии покоя обследуемого. Режим труда и отдыха не регламентирован.

Материалом исследования служила капиллярная и венозная кровь 100 человек (50 мужчин и 50 женщин), разбитых в соответствии с классификацией ВОЗ на следующие группы:

- мужчины- в возрасте 24-65 лет (контрольная группа)-20 человек;

в возрасте 78-89 лет (старые) - 20 человек; в возрасте 90 лет и старше (долгожители) - 10 человек;

- женщины: в возрасте 24-65 лет (контрольная группа) - 20 человек;

в возрасте 78-89 лет (старые) - 20 человек; в возрасте 90 лет и старше (долгожители) - 10 человек.

В контрольной группе представлен смешанный контингент городских и сельских жителей. Что касается исследуемых групп, в особенности долгожителей, то это были лица, проживающие в сельских районах, большей частью в предгорьях Абхазии. Необходимо отметить, что всего было обследовано более 150 человек в возрасте старше 75 лет. Однако из них затем отобрали 60 человек, чьи характеристики отвечали целям исследования. Т.е., в работе использованы показатели людей, у которых отсутствовали хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, мочевыделительной системы, нервной и эндокринной систем. В группе старых людей и долгожителей отмечались изменения, соответствующие возрастным особенностям, описанным в литературе. Все обследованные предъявляли жалобы либо на снижение слуха и/или зрения, либо на боли в суставах. Как правило, все активно передвигались, вели свое хозяйство, на протяжении жизни были заняты активным физическим трудом. В еде особых пристрастий нет, пища, как правило, не жирная, с большим количеством приправ и зелени.

Методы исследований.

Все исследования выполнены с помощью общепринятых методик с учетом современных требований и на со временной аппаратуре. Результаты исследований подвергнуты статистической обработке с использованием критерия Стьюдента

Количественные методы.

Подсчет лейкоцитов и эритроцитов периферической крови осуществляли путем смешивания крови с соответствующими смесителями с использованием камеры Горяева (производство ЛОМО, Санкт-Петербург) по общепринятой методике. Метод морфологической оценки. Подсчет лейкоцитарной формулы проводили в окрашенных препаратах при помощи светового микроскопа. Окрашивание производили но Романовскому. Подсчитывалось 200-300 клеток. Параллельно с определением процентного содержания различных видов лейкоцитов, отмечали сегментацию ядер нейтрофилов.

Определение гемоглобина проводили унифицированным гемиглобинцианидным методом с использованием набора реактивов фирмы «Диагем Т» (г. Санкт-Петербург). Гемоглобин окисляли в гемиглобин железосинеродистым калием, образующийся с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид определяли колориметрически. Эритроцитометрия.

Исследование эритроцитов дает возможность открыть ряд важных в диагностическом и прогностическом отношении морфологических изменений в эритроцитах. Понятие морфофизиологических особен ностей нормального эритроцита конкретизируется соответствующими средними данными индексов, применяемых при исследовании красной крови- средний диаметр эритроцитов, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объем эритроцита, толщина эритроцита, показатель сферичности эритроцитов, показатель насыщения эритроцитов гемоглобином и др. Всего 10 показателей. Эритроцитометрия проводилась согласно методике, разработанной в Гематологическом Научном Центре (г. Москва). Установка для автоматизированной эритроцитометрии включала:

1. микроскоп «ЛОМО Биолам-4»

2. 1елекамеру «НТС-550»

3. фреймграббер (аналогово-цифровой преобразователь) «Pixel View» 4 персональный компьютер типа IBM PC.

Сухие, неокрашенные, нефиксированные мазки периферической крови, приготовленные по методике получения монослоя, помещали в фокальную плоскость светового микроскопа (с использованием иммерсии, объектив х60), затем с помощью телекамеры и устройства ввода изображения клеток передавались на экран персонального компьютера. Выбор полей зрения и фокусировка осуществлялись

вручную. Далее производили автоматическую седиментацию (выделение границ) клеток и измерение морфоденситометрических параметров клеток - площади поперечного сечения, периметра, фактора формы, эллиптичности, оптической плотности и ее профиля. Оптическая плотность в дальнейшем пересчитывалась на содержание гемошобина. На основании анализа контура, формы клетки, профиля оптической плотности поводилась автоматическая классификация клеток на морфологические типы эритроцитов: дискоциты, эхиноциты, эллиптоциты, мишеневидные, каплевидные клетки и др.

Проводился анализ гистограмм распределения по размерам и по содержанию гемоглобина, их математическое описание. Количественное соотношение эритроцитов различных средних объемов и средних диаметров выражали графически в виде кривой Прайс-Джонса, в которой указывались: вершина кривой, диапазон вариации и граница рассеяния, то есть исследовался анизоцитоз эритроцитов; при подсчете каждого среднего объема эритроци тов от 10 кубических мк до 110 мк, что соответствовало среднему диаметру эритроцитов от 3.5 до 11.0 микрон, регистрировали количество эритроцитов по каждому параметру, дававшему представление о количественном состоянии анизоцитоза, соотношении молодых и старых эритроцитов.

Математический вариант анализа графического распределения микроцитометрической кривой заключался в следующем: все двенадцать измерений диаметра эритроцитов делились пополам, сумма первых шести измерений занимает диапазон от 3.5 до 6.8 микрон, то есть более старых, изношенных эритроцитов, приближающихся по своей форме к сфероцитам и микросфероцитам; сумма второй половины кривой от 7.5 до 11.0 микрон охватывает диапазон более стойких по отношению к гипотоническим растворам нормальных эритроцитов и юных ретикулоцитов, являющихся "макропланоцитами". Обычно в норме сумма второй половины больше сум мы первой, то есть нормоцитов и молодых (НМ) больше, чем старые (С) и соответствует в среднем величине, равной 3.6б±10.43-0.88±)0 105. Показатели гемостаза.

Количество тромбоцитов определяли в окрашенных мазках крови подсчетом на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 мкл крови, исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов.

Протромбиновый индекс определяли по методу Мачабели, для анализа использовали цельную капиллярную кровь. Определяли время свертывания оксалатной капиллярной крови при добавлении суспензии тромбопластина и раствора хлорида кальция.

Время свертывания цельной нестабилизированной крови определяли по методу Сухарева.

Биохимические показатели.

Глюкозу крови определяли глюкозооксидазным методом с использованием набора реактивов производства «Olvex», Санкт-Петербург.

Мочевину крови определяли диацетилмонооксимным методом с использование реактивов производства «Lachema », Чехия.

Общий холестерин крови определяли ферментативным методом с использованием реактивов производства «Olvcx», Санкт-Петербург.

Групповую принадлежность крови по системе ABO и резус-фактор определяли с использованием моноклональных антител.

Результаты собственных исследований и их обсуждение.

Эритроцитометрия. Полученные данные представлены в таблице 1 (мужчины) и в габлице 2 (женщины) Что касается содержания гемоглобина в исследуемых группах мужчин,то в контрольной группе (возраст 24-65 лет, средний возраст - 37,5 лет) количество гемоглобина колебалось от 124 до 160 г/л, среднее значение составило 141,8+2,1 Зг/л.

В группе старых мужчин в возрасте 78-89 лет (средний возраст - 81,4 года) количество гемоглобина колебалось от 106 до 146 г/л, среднее значение составило 31,9±2,35 г/л.

В группе долгожителей-мужчин, средний возраст которых составил 94 года, наблюдались колебания гемоглобина от 124 до 144 г/л, среднее значение в группе составило 137+2,9 г/л.

Т.о., среднее значение гемоглобина в контрольной группе долгожителей отличалось незначительно (р=0,25) в группе же пожилых оно было ниже по сравнению с контрольной (р=0,01, различие достоверно), но незначительно отличалось от показателей в группе долгожителей (р=0,25).

У женщин в контрольной группе среднее количество гемоглобина составило 128,1+5,3 г/л. В группе женщин в возрасте 78-89 лет гемоглобин колебался от 96 г/л до 131 г/л, среднее значение составило 117,37+4,36 г/л, что было несколько ниже, чем в контрольной группе (р=0,1, различие недостоверно). В группе женщин в возрасте до 105

лет (средний возраст 97 лет) среднее количество 1емоглобина было 112+6,24 г/л при колебаниях от 80 г/л до 146 г/л. Наблюдается некоторое снижение количества гемоглобина у долгожительниц по сравнению с женщинами среднего возраста (р^0,1). Таким образом, полученные нами цифры были близки к нижней границе нормы для среднего возраста, достоверных различий между возрастными группами не обнаружено.

Таблица 1. Показатели эритроцитометрии у мужчин

Возрастная группа Показатель 24-65 лет 78-89 лет 90лет и старше

Гемоглобин {М ±т,г/л) 141,8+2,13 131,9±2,35 137+2,9

Эритроциты (М ± т, млн) 4,25±0,08 4,03±0,05 4,08±0,09

Цветной показатель 1,0 0,98 1,0

МСН (М±т,п?) 33,41+0,24 32,94±0,27 33,55±0,12

Анизоцитоз (М ± т,%) 5,53±0.13 6+0,19 5,83±0,3

Пойкилоцитоз (М ± т,%) 12,33±1,74 15,31 ±3,45 13,16+1,8

Коэффициент овалоцитоза 0,88+0,01 0,89+0,004 0,89+0,005

Средний диаметр эритроцитов (М ±т,мкм) 7,63±0,06 8, И ±0,06 7,97+0,07

Нормоциты {М ± т,%) 95,75±0,92 84,6+3,29 89,56+1.13

Микроциты (М ± т,%) 1,83±0,38 0,49±0,13 0,72±0,13

Макроциты (М ± т,%) 2,45±0,99 14,91 ±3,3 9,66±1,07

Дискоциты (М ±т,%) 87,51±1,92 84,15±3,54 87,73+1,45

Сфероциты (М ± т,%) 1,43+0,24 2,04±1,3 1,52+0,17

Эхиноциты (М ± т,%) 1,79±0,62 3,25±1,8 3,02±0,8

Эллиптоциты (М ± т,%) 0,49±0,18 0,07±0,03 1,16±0,06

Мишеневидные (М ± «,%) 1,01±0,38 3,45±2,12 1,36+0,5

Каплевидные (М ± т,%) 0,51 ±0,16 0,19±0,05 0,2±0,08

Всего необратимо измененных (М + т,%) 2,01 ±0,42 3,75±2,1 1,73±0,52

Таблица 2. Показатели эритроцитометрии у женщин

Возрастная группа Показатель 24-65 лет 78-89 лет 90л ет и старше

Гемоглобин (М±т,р/п) 128.1+5,3 117,37±4,36 112+6,24

Эритроциты (М ±т,мпн) 3,85+0,09 3,75±0,09 3,48±0,15

Цветной показатель 0,97 0,92 0,95

МСН (М ± т, т) 32,63+0,66 31,09+0,72 33,09+0,76

Анизоцитоз (М + т,%) 5,85±0,14 5,75+0,25 610,24

Пойкилоцитоз (М ± т,%) 19,57+3,57 10,75+2.5 14,77+2,7

Коэффициент овалоцитоза 0,87+0,01 0,89+0,01 0,88+0,01

Средний диаметр эритроцитов (М ±т,мкм) 7,9±0,04 7,74+0,08 7,96±0,07

Нормоциты (М±т.%) 93,9±0,98 92,85+1,39 91,06±1,08

Микроциты (М ± т,%) 0,63±0,3 1,52+0,36 1,41 ±0,7

Макроциты (М ± т,°/о) 5,41+1,1 5,52+1,67 7,47±1,4

Дискоциты (М ± т,%) 79,04±3,64 88,35+2,25 84,02±3,16

Сфероциты (М ± т,%) 0,93±0,3 0,25±0,15 0,98+0,4

Эхиноциты (М ± т,%) 3,61+1,94 5,25±0.5 4,49+1,9

Эллиптоциты (М±т,%) 0,28±0,13 0,22±0,1 0,46+0,2

Мишеневидные (М ± т,%) 4,17±3,43 3,9±2,5 1,9±1,15

Каплевидные (М ± т.%) 0,42+0,18 0,1+0,04 0,22±0,1

Всего необратимо измененных (м ± т.%) 4,3+2,97 4,2±2,53 2,58±1,43

В количестве эритроцитов наблюдались следующие колебания. У мужчин в контрольной группе их количество составило 4Д5±0,08-10|2/л.

В группе мужчин старческого возраста наблюдались колебания от 3,5-10,2/л до 4,4 10|2/л, среднее значение составило 4,03+0,05-10|2/л, что было достоверно меньше чем в контрольной группе (р=0,01). У долгожителей количество эритроцитов практически не отличалось от показателей старых людей - 4,08±0,09-10|2/л, колеблясь от 3,7-1012/л до 4,310|2/л (р=0,5); различие же с контрольной группой было недостоверным (р=0,1).

У женщин количество эритроцитов в контрольной группе колебалось от 3,5-1012/л до 4,510|2/л, среднее значение было 3,85±0,09-10|2/л. В группе пожилых женщин в возрасте 78-89 лет количество эритроцитов составило 3,75+0,09-10,2/л при минимальном и максимальном значениях 3,510,2/л и 4,310|2/л соответственно, что отличалось от показателей контрольной группы (р=0,5). Наиболее выраженное различие наблюдалось мезвду контрольной и долгожительской группой женщин, у которых количество эритроцитов в среднем было 3,48±0,15-1012/л при колебаниях от 2,6-1012/л до 4.3-1012/л (р=0,05). Показатели же пожилых женщин и долгожительниц отличались незначительно (Р=0,1).

Что касается индексов эритроцитов у мужчин (цветного показателя и МСН -среднего содержания гемоглобина в одном эритроците) (таблица 3), то во всех группах наблюдались практически одинаковые показатели. Цветной показатель - 1,0; 0,98; 1,0 в группах среднего, пожилого и долгожительского возраста соответственно. Такая же картина наблюдалась и в отношении МСН, за исключением группы долгожителей, в которой средний показатель составил 33,55 пг, по сравнению с 32,94 пг у пожилых людей (р=0,05).

Индексы эритроцитов у женщин во всех трех группах практически не отличались друг от друга (р>0,1). Цветной показатель в группах среднего, пожилого и долгожительского возраста был 0,97; 0,92 и 0,95 соответственно, МСН - 32,63 пг, 31,09 пг и 33,09 пг.

В показателях анизоцитоза и пойкилоцитоза различий между исследуемыми группами у мужчин практически не было: 5,53 и 12,33; 6 и 15,31; 5,83 и 13,16 в группе среднего, пожилого и долгожительского возраста (р=0,5), за исключением показателя анизоцитоза в контрольной группе и у пожилых людей, где различие было достоверным (р~0,05). У женщин отличие отмечено в показателе пойкилоцитоза между контрольной группой и группой пожилого возраста - 19,57 и 10,75 соответственно (р=0,05).

ы

Коэффициент овалоцитоза не отличался в исследуемых группах ни у мужчин, ни у женщин.

Наиболее показательные изменения выявлены при исследовании среднего диаметра эритроцитов и процентного соотношения нормо-, микро- и макроцитов. У мужчин наблюдалось достоверное увеличение диаметра эритроцитов в старческой и долгожительской группах по сравнению со средним возрастом (р=0,001 и р=0,005 соответственно). Ихли в группе среднего возраста (24-65 лет) этот показатель составил 7,63±0,06мкм, то в группе старых мужчин (78-89 лет) средний диаметр эритроцитов составляет уже 8,11 ±0,06мкм, а у долгожителей (90 лет и старше) - 7,97±0,07 мкм. Причем у долгожителей получены цифры, приближающиеся к показателям в группе среднего возраста. Различие между пожилыми и долго жителями было недостоверно (р=0,1).

У женщин величина среднего диаметра колебалась незначительно; 7,9+0,04; 7,74+0,08 и 7,96±0,07 мкм в контрольной, старческой и долгожительской группах соответственно. Достоверное различие отмечено лишь между пожилыми женщинами и долгожительницами (р=0,05).

Что касается процентного соотношения нормо-, микро- и макроцитов, то у женщин достоверного отличия в исследуемых группах не отмечено. Доля нормоцитов колебалась незначительно: 93.9±0,98% в группе 24-65 лет, 92,85±1,39 в группе 78-89 лет и 91,06*1,08 в группе 90-105 лет (р>0,1). У мужчин же с возрастом наблюдается достоверное снижение доли нормоцитов и микроцитов и увеличение доли макроцитов. Нормоциты составили 95,75% клеток в контрольной группе в отличие от пожилых - 84,6% (р=0,01) и долгожителей - 89,56% (р=0,001). Микроцшы составили 1,83% клеток у мужчин среднего возраста, снижаясь до 0,49% у старых (р>0,01) и до 0,72% у долгожителей (р=0,01). Доля макроцитов, составлявшая в контрольной группе 2,45%, достоверно увеличилась до 14,91 % у старых (р=0,01) и до 9,66% долгожителей (р<0,001).

Известно, что более 90% эритроцитов периферической крови составляют дискоциты Нарушения эритропоэза, а также нарушение электролитного баланса крови приводят к появлению обратимо измененных клеток (эхиноцитов и стоматоцитов) и необратимо измененных (сфероцитов, эллиптоцитов, мишеневидных и т.д.).

Содержание дискоцитов, составило у мужчин 87,51+1,92% в средневозрастной группе (24-65 лет), 84,15±3,54% в группе старых людей (78-89 лет) и 87,73±1,45% в группе долгожителей (90-105 лет). Содержание сфероцитов составило 1,43+0,24%;

2,04±1,8% и 1,52+0,17% в группах среднего, старческого и долгожнтельского возрастов соответственно.

Количество дискоцитов у женщин составляло 79,04+3,64% в контрольной фуппе, 88,35±2,25% - в старческой фуппе и 84,0213,16% в группе долгожительниц. Достоверное различие отмечено между женщинами среднего (24-65 лет) и старческого (78-89 лет) возраста (рЮ,05). Среднее количество сфероцитов было равным 0,93±0,3%, 0,25±0,15% и 0,98±0,4% в средневозрастной, старческой и долгожительской группах соответственно. Отличие также отмечено между контрольной и старческой группами (р 0,05).

Количество эхиноцитов в группе мужчин 24-65 лет составило 1,43+0,24%, в группе 78-89 лет-2,04+1,3%, в группе 90-105 лет - 1,52+0,17% (р=0,5 для всех возрастных групп).У женщин этот показатель был равен 3,61+1,94%, 5,25±0,5% и 4,49+1,9% в контрольной, старческой и долгожительской группах соответственно (р>0,5 для всех возрастных групп).

Что касается других необратимо измененных форм эритроцитов, то у мужчин количество мишеневидных и каплевидных эритроцитов было практически одинаково в трех исследованных группах. Количество мишеневидных в группе мужчин 24-65 лет составило 1,01 ±0,38%, %, в группе 78-89 лет-3,45±2,12% и в группе 90-105 лет -1,36+0,5% ( р=0,5 для всех возрастных групп). Содержание каплевидных форм эритроцитов составило 0,51+0,16%, 0,19+0.05% и 0,2+0,08% в средневозрастной, старческой и долгожительской группах соответственно (р>0,1). Количество же эллиптоцитов достоверно различалось. Рели в средневозрастной группе эллинтоциты составляли 0,49+1,18%, то в 1 руппе с гарых мужчин их содержание было всего 0,07+0,03% (р<0,05), а в фуппе долгожителей 1,16+0,06% (р<0,01). Несмотря на это, общее количество необратимо измененных клеток существенно не отличалось: 2,01±0,42%, 3,75+2.1% и 1,73±0,52% в средневозрастной, старческой и долгожительской фуппах соответственно (р>0,5).

У женщин различий в содержании необратимо измененных форм и отдельных их видов нами отмечено не было. Количество мишеневидных в фуппе 24-65 лет составило 4,47±3,43%, в группе 78-89 лет-3,9±2,5% и в фуппе 90-105 лет - 1,9+1,15% ( р>0,5 для всех возрастных групп). Содержание каплевидных форм эритроцитов составило 0,42±0,18%, 0,1+0,04% и 0,22±0,1% в средневозрастной, старческой и долгожительской фуппах соответственно (р>0,1). В средневозрастной фуппе женщин эллиптоциты

составляли 0,28+0,13%, то в группе старых их содержание было 4,2±2,53% (р>0,5), а в группе долгожительниц - 2,58±1,43% (р=0,25).

Лейкоциты и лейкоцитарная формула. В литературе имеются данные, что с возрастом число лейкоцитов существенно не меняется, хотя у лиц более старых возрастных групп намечается тенденция у лейкопении с нейтропенией (Германов В.А., 1972; Козинец Г.И. ссоавт., 1998).

Полученные данные представлены в таблице 5. В нашем исследовании не отмечено значимых различий в количестве лейкоцитов между средневозрастной и старческой группами мужчин, в которых их число составляло 5,69±0,46 тыс/мкл и 5,36+0,18 тыс/мкл (р>0,5) Явное снижение было отмечено в группе долгожителей, где число лейкоцитов было близко к нижней границе нормы - 4,76+0,15 тыс/мкл (р=0,05 в сравнении с контрольной группой и р=0,01 в сравнении со старческой группой). У женщин число лейкоцитов во всех трех возрастных группах колебалось незначительно: 4,74±0,23; 5,65±0,84 и 4,86+0,28 в средневозрастной, старческой и долгожительской группах соответственно (р=0,5).

При исследовании лейкоцитарной формулы (процентного соотношения различных видов лейкоцитов) было выявлено относительное постоянство в содержании палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, как у мужчин, так и у женщин. Количество палочкоядерных нейтрофилов составило у мужчин 2,06±0,21%, 2,45+0,47% и 2,5+0,5% в средневозрастной, старческой и долгожительской группах соответственно (р=0,5). У женщин их содержание также значительно не отличалось: 2,0+0,39%, 2,37±0,59% и 2,11±0,38% в группе 24-65 лет. 78-89 лет и 90-105 лет соответственно (р>0,5). Сегментоядерные нейтрофилы составили 53,46±1,9% в группе мужчин 24-65 лет, 56,65+1,8% в группе 78-89 лет и 58,5±2,23% в группе 90-105 лет (р>0,1 для всех возрастных групп). У женщин различие в содержании сегментоядерных нейтрофилов также не отмечено: 56,2+3,03% в группе среднего возраста, 60,37+3,79% в группе старческого возраста и 60,88±3,8% в группе долгожительниц (р>0,5 для всех групп).

Достоверно установлено снижение количества эозинофилов в группе долгожителей (как у мужчин, так и у женщин). У мужчин в контрольной группе (средний возраст 37,5 лет) их содержание составило 3,53+0,8%, в группе 78-89 лет - 3,25±0,4% (р>0,5), в группе 90-105 лет - 1,5+0,34% (р=0,01 в сравнении с контрольной группой). Количество эозинофилов в старческом и долгожительском возрасте отличалось недостоверно (р=0,1).

Такая же картина наблюдалась у женщин. Если в средневозрастной группе количество эозинофилов составляло 4,3±0,59%, а в группе 78-89 лет 3,62+1,07% (р>0,5),

то у долгожительниц (90-105 лет) эозинофилы составили 2,33+0,33%, что достоверно отличалось от данных контрольной группы (р<0,01). Различие между группами старческого и дол! ожительского возраста у женщин также было недостоверно (р=0,25).

Количество лимфоцитов с возрастом существенно не меняется. Так, у мужчин получены следующие цифры. 32,6±1,5%, 30,0±1,79% и 31,3±2,12% в контрольной, старческой и долгожительской ipynnax соответственно (р=0,5). У женщин наблюдается незначительное снижение: 30.5±2,62% в среднем возрасте, 26,87±3,37% в старческом возрасте и 27,66+2,52% в возрасте 90-105 лет (р=0,5 для всех групп).

Согласно нашим исследованиям, у женщин с возрастом число моноцитов в крови существенно не меняется. В средневозрастной группе оно составило б,9±0,6%, в группе старческого возраста 6,62±0,8% и 7,88±0,63% в группе долгожительниц (р>0,25). У мужчин же нами обнаружено достоверное снижение их числа после 90 лет: 8,33±0,59% в среднем возрасте. 7,65+0,5% в старческом возрасте (р=0,5) и 6,16±0,47% в возрасте 90-105 лет (р=0,01 в сравнении со средним возрастом и р=0,05 в сравнении со старческим возрастом).

Таблица 5. Количест во лейкоцитов и лейкоцитарная формула.

Мужчины

возрастная "— группа 24-65 лет 78-89 лет 90л ет и старше

Показатель

Лейкоциты (М + т. тыс) 5,6910,46 5,36+0,18 4,76±0,15

Палочкоядерные нейтрофилы {М ± т,%) 2,06±0,21 2,45+0,47 2,5+0,5

Сегментоядерные нейтрофилы (М ± т,%) 53,46+1,9 56,65+1,8 58,5±2,23

Эозинофилы (М ± т,%) 3,53±0,8 3,25±0,4 1,5±0,34

Лимфоциты (М + ш,%) 32,6+1,5 30,0+1,79 31,3+2,12

Моноциты (М ± т,%) 8,33+0,59 7,65+0,5 6,16+0,47

Женщины

Возрастная группа Показатель ^^ 24-65 лет 78-89 лет 90лет и старше

Лейкоциты (М + т, тыс) 4,74±0,23 5,65±0,84 4,86±0,28

Палочкоядерные нейтрофилы (М±т,%) 2,0±0,39 2,37+0,59 2,11 ±0,38

Сегментоядерные нейтрофилы (М ± т,%) 56,2+3,03 60,37+3,79 60,88+3,8

Эозинофилы (А/ ± т,%) 4,3±0,59 3,62+1,07 2,33±0,33

Лимфоциты (М + т,Уо) 30,5±2,62 26,87±3,37 27,66+2,52

Моноциты (М + т,%) 6,9±0,6 6,62+0,8 7,88±0,63

□ 2 сегмента В3 сегмента СМ сегмента Об сегментов

а) средний возраст

□2 сегмента ВЗ сегмента □ 4сегмента П5 сегментов

б) старческий возраст и долгожители. Рис.1. Сегментация ядер нейтрофилов.

На рисунке 1 представлена сегментация ядер нейтрофилов, выраженная в процентном соотношении 2-х, 3-х, 4-х и 5-сегментых ядер. Как видно из рисунка, в контрольной группе большая часть сегментоядерных нейтрофилов - с 3-х сегментным ядром (53,77%), далее по количеству следуют нейгрофилы с 2-х сегментным ядром.

В группе людей в возрасте 78 лет и старше (78-105 лет) количество нейтрофилов с 3-х и 2-х сег ментным ядром практически не отличается от контрольной группы - 51,89% и 26,13% соответственно. На4-сегментные приходятся 19,28% и 2,7% - это нейгрофилы с 5-сегментным ядром. Следует отметить, что количество нейтрофилов с 5-сегментым ядром практически одинаково в группе старых людей (78-89 лет) и долгожителей (90-105 лет), также не отличае1СЯ оно у мужчин и у женщин. При изучении ядер нейтрофилов достоверно установлено появление в крови старых людей долгожителей нейтрофилов с гиперсегментированными ядрами (5 сегментов) в значимом количестве (2,7%, по сравнению с 0% в контрольной группе).

Скорость оседания эритроцитов. При изучении скорости оседания эритроцитов нами было обнаружено следующее. У мужчин этот показатель увеличивался с возрастом. Если в группе 24-65 лет он составил 4,06+0,62 мм/ч, то в группе 78-89 лет -12,9+1,39 мм/ч (р<0,001, различие достоверно), а группе 90-105 лет - 17,5+7,96 мм/ч, хотя л о различие недостоверно (р=0.1 в сравнении с контрольной группой и р=0.5 в сравнении с группой старческого возраста).

У женщин наблюдалась такая же картина. В средневозрастной группе СОЭ была в пределах 11,9±2,08 мм/ч, в группе старческого возраста - 18,12±4,93 мм/ч, а в группе долгожительниц - 26,2±2,36 мм/ч. Достоверным является различие только между средневозрастной и долгожительской группами (р=0,01).

Биохимические показатели крови (таблица 6). В показателях глюкозы крови в исследованных возрастных группах не наблюдалось значимых колебаний. У мужчин количество глюкозы в группе 24-65 лет составляло 4,48±0,12 ммоль/л, в группе 78-89 лет - 4,77+0,19 ммоль/л, в группе 90-105 лет 4,68 ммоль/л (р>0,25 для всех групп). У женщин этот показатель также был практически одинаков во всех возрастных группах: 4,35±0,16 ммоль/л, 4,72±0,24 ммоль/л и 4,42+0,31 ммоль/л в группе среднего, старческого и долгожительского возрастов соответственно (р>0,5).

Что касается содержания холестерина в сыворотке крови, то отмечается заметное снижение этого показателя у долгожителей, как у мужчин, так и у женщин. Если у мужчин среднего возраста содержание холестерина составило 4,3+0,1 ммоль/л, в группе старческого возраста - 4,22±0.07 ммоль/л (р=0,5), то у долгожителей-мужчин

его содержание было в пределах 4,02±0,05 ммоль/л (р=0,01 в сравнении с контрольной группой и р=0,05 в сравнении с группой возраста 78-89 лет). У женщин количество холестерина в группе 24-65 лет составило 4,39+0,13 ммоль/л, в группе 78-89 лет -4,3+0,16 ммоль/л, в группе 90-105 лет - 4,01±0,08 ммоль/л. Различие было достоверным между средневозрастной и долгожительской группами (р~0,01).

Количество мочевины достоверно возрастало с возрастом, как у мужчин, так н у женщин В группе мужчин 24-65-летнего возраста ее содержание составило 5,63±0,35 ммоль/л, в группе 78-89 лет 5,78±0,24 ммоль/л(р=0,5, различие недостоверно), в группе 90-105 лет - 7,08+0,45 ммоль/л (р=0,01 в сравнении с контрольной группой и рЧ).05 в сравнении с группой старческого возраста). У женщин содержание мочевины в группе 2465 лет было в пределах 4,98±0,44 ммоль/л, в группе 78-89 ммоль/л - 6,56±0,58 ммоль/л (р=0,05), в группе 90-105 лет - 8.17±0.43 ммоль/л (р<0,001 в сравнении с группой среднего возраста и р=0,05 в сравнении с группой старческого возраста) Это может говорить о преобладании в организме людей преклонного возраста катаболических процессов Также возможно снижение азотвыделительной функции почек. Однако следует отметить, что все показатели, наблюдаемые в старших возрастных группах, оставались в пределах физиологических колебаний, хотя и близкими к верхней границе нормы.

Таблица 6. Некоторые показатели плазмы и сыворотки крови в исследуемых возрастных

группах.

Мужчины

Возрастная ^ группа Показатель 24-65 лет 78-89 лет 90лет и старше

Скорость оседания эритроцитов (М ± т, ми / ч) 4,06+0,62 12,9+1,39 17,5+7,66

Глюкоза (М ±т,шимь/ а) 4,48+0,12 4,77+0,19 4,68+0,41

Холестерин (М ± т, нмоль/л) 4,3 ±0,1 4,22+0,07 4,02±0,05

Мочевина {М ±т,ммоль! л) 5,63±0,35 5,78±0,24 7,08±0,45

Женщины

Возрастная группа Показатель 24-65 лег 78-89 лет 90лег и старше

Скорость оседания эритроцитов (М±т,мм!ч) 11,9±2,08 18,12±4,93 26,2+2,36

Глюкоза (М1 т.мчоль! >1) 4,35±0,16 4,72±0,24 4,42±0,31

Холестерин (М±т, ммоль /л) 4,39±0,13 4,3±0,16 4,01 ±0,08

Мочевина (М + т, ммоль / л) 4,98±0,44 6,56+0,58 8,17+0,43

Показатели гемостаза (таблица 7). В отношении показателей гемостаза можно отмстить сохранение концентрации протромбина на постоянном уровне, хотя у мужчин -долгожителей мот показатель был несколько ниже, чем в остальных группах. У мужчин отмечены следующие колебания в содержании протромбина с возрастом. В средневозрастной группе его количество составило 93,93±1,53%, в группе старческого возраста - 98,55±1,69% (р=0,05), в группе долгожителей - 91,33+1,23% (р=0,25 в сравнении с средневозрастной группой и р=0,005 в сравнении с группой старческого возраста).

У женщин в группе 24-65 лет содержание протромбина было в пределах 97,8±2,9%, в группе 78-89% - 97,37+2,9% (р>0,5), в группе 90-105 лет - 94,33±3,48% (р=0,5 в сравнении с остальными группами).

Количество тромбоцитов достоверно уменьшалось с возрастом. Так, у мужчин среднего возраста их количество колебалось в пределах 273,7+8,63 тыс/мкл, в возрасте 7889 лет - 207,4+5,43 тыс/мкл (р<0,001), в возрасге 90-105 лет - 202,3+7,65тыс/мкл (р<0,001 в сравнении с контрольной группой и р 0.5 в сравнении с группой старческого возраста).

У женщин их количество составило в группе среднего возраста 246,4±11.9 тыс/мкл, в группе старческого возраста - 210,6±10,6 тыс/мкл (р—0,005, различие достоверно), а в группе долгожительниц - 195.4+4,01 тыс/мкл (р=0,005 в сравнении с контрольной группой и р=0,25 в сравнении с группой старческого возраста).

Явные изменения были отмечены при исследовании времени свертывания цельной крови по методу Сухарева. При исследовании времени свертывания крови достоверно отмечено удлинение времени свертывания цельной нестабилизированной крови в старших

возрастных группах. Если у мужчин среднего возраста начало свертывания отмечалось в среднем на 94 секунде (1,56 мин.), а конец - на 153 секунде (2,55 мин), то в старческой группе начало отмечалось на 148 секунде (1,48 мин.), конец - на 216 секунде (3,6 мин) (р=0,001). В группе мужчин 90-105 лет начало свертывания отмечалось в среднем на 190 секунде(3,16 мин.), а конец - на 305 секунде (5,08 мин) (р<0,001 в сравнении с остальными группами

У женщин в возрасте 24-65 лет начало свертывания отмечалось в среднем на 100 секунде (1,66 мин.), конец - на 146 секунде (2,43 мин), в возрасте 78-89 лет начало - на 135 секунде (2,25 мин), конец - на 210 секунде (3,5 мин.) (р=0,001). У долгожительниц начало свертывания крови отмечалось в среднем на 190 секунде (3,16 мин ), а конец - на 270 секунде (4,5 мин.) (р=0,001 в сравнении с контрольной группой и р=0,01 в сравнении с группой старческого возраста). Т.о., в старших возрастных группах отмечается удлинение, как времени начала, так и времени конца свертывания. Эти изменения одинаковы у мужчин и у женщин

Группы крови. Группа крови «О» (1-ая) была у 87,5% представителей средневозрастной группы, у 22,5% - группа «А» (2-ая). В старческом возрасте группа «О» была у 95% обследованных, у 15% - группа «А». В группе 90-105 лет частота встречаемости группы «О» составила 100%.

Т.о. при оценке периферического звена гемопоэза не отмечено значительных различий , что свидетельствует о стабильности кроветворения в течение всей жизни.

Таблица 7. Некоторые показатели гемостаза в исследованных группах.

Мужчины

Возрастная группа Показатель ■—^ 24-65 лет 78-89 лег 90лет и старше

Протромбин (М ± т,%) 93,93+1,53 98,55±1,69 91,33±1,23

Тромбоциты (М + т, тыс.) 273,7±8,63 207,4±5,43 202,3+7,65

Время свертывания крови (по Сухареву) начало (м ± т,сек) 94±6,9 148±9,3 190+2,7

конец (М ±т,сек) 153+8,8 216±9,6 305±12,04

Возрастная — группа Показатель 24-65 лет 78-89 лет 90лет и старше

Протромбин (М + 7П,%) 97,8±2,9 97,3 7±2,9 94,33±3,48

Тромбоциты (М±т,тыс.) 246,4± 11,9 210,6±10,6 195,4±4,01

Время свертывания крови (по Сухареву) начало (М ±т,сек) 100±7,4 135±6,4 190±18,03

конец (М ± т,сек) 146+9,9 210+5,06 270±16,5

ВЫВОДЫ.

1. При оценке периферического звена гемопоэза не отмечено значительных различий в показателях различных возрастных групп, что свидетельствует о стабильности кроветворения на протяжении всей жизни.

2. Содержание гемоглобина и количество эритроцитов остается относительно стабильным в группах старческого возраста. Снижение числа эритроцитов в группе долгожителей, возможно, обьясняется сужением плацдарма кроветворения не только в плане возрастной инволюции, но и из-за уменьшающейся потребности организма (в частности мышечной ткани) в кислороде. Это предположение подтверждено при исследовании крови космонавтов, во время полетов длительное время не испытывающих мышечных нагрузок и влияния земной гравитации.

3. Распределение эритроцитов по диаметру в группах мужчин старческого и долгожительского возраста характеризуется увеличением доли макроцитов, снижением доли микроцитов. Таким образом, с возрастом средний диаметр эритроцитов имеет тенденцию к увеличению. У женщин таких изменений не обнаружено.

4. При исследовании количества лейкоцитов явное снижение установлено в группе долгожителей - мужчин, где оно приближалось к нижней границе нормы Различий между средневозрастной и старческой группами мужчин, а также между тремя возрастными группами женщин не обнаружено. При исследовании лейкоцитарной формулы выявлено относительное постоянство в содержании лимфоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов (как у мужчин, так и у женщин)

Отмечено снижение количество эозинофилов у долгожителей. Количество моноцитов у женщин с возрастом существенно не меняется. У мужчин выявлено достоверное снижение их числа

Скорость оседания эритроцитов значительно увеличивается с возрастом, как у мужчин, так и у женщин, причем у последних в гораздо большей степени, что возможно, объясняется увеличением частоты диспротеинемий. Наши исследования подтвердили данные о частоте распространения групп крови среди геронтов, что подтверждается литературными данными, согласно которым наблюдается большая приспособленность лиц с группой «О» к меняющимся условиям среды

Отмечено большее сходство средних значений и диапазона колебаний исследованных параметров между средневозрастной и долгожительской группами, что говорит о достижении порогов долголетия лиц с сохранением основных показателей.

¿Л

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

Лабораторные показатели крови пожилых людей, проживающих в Абхазии. // Материалы региональной юбилейной научно-практической конференции Ставрополь, 2005, с.60-63. (соавт. В С.Баркая, Г.И.Козинец )

Некоторые обменные процессы у лиц пожилого и старческого возраста, проживающих в Абхазии, (соавт. B.C. Баркая, Г.И.Козинец ) // Научные труды 1 съезда физиологов СНГ, 2005, т. 2, с.204.

Показатели периферической крови у лиц пожилого возраста, проживающих в Абхазии, (соавт. B.C. Баркая, Г.И Козинец.) //Научные труды 1 съезда физиологов СНГ, 2005, т. 2, с.204

Исследование крови у лиц пожилого возраста, проживающих в Абхазии с применением метода компьютерной эритроцитометрии. (соавт. B.C. Баркая, Г И Козинец.) // Сборник научных трудов АГУ. Сухум, 2006.

»

V.

I

I

!

*

J

1

Подписано в печать 24.05.2006. Формат 60/84 1/16. Бумага офисная. Печать офсетная. Усл. п. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ № П-257.

Типография «Телер» 127299, Москва, ул. Космонавта Волкова, 12 Тел.: (495) 937-8664,156-4084

Л 0С6&

 
 

Оглавление диссертации Каландия, Теона Зурабовна :: 2006 :: Москва

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Гемопоэз как система клеточного обновления

1.1. Функции различных клеток крови в поддержании гомеостаза.

1.1.1. Эритропоэз.

1.1.2. Миелопоэз и лимфопоэз.

1.1.3. Мегакариоцитопоэз.

2. Возрастные особенности реакции системы крови.

2. 1. Эритропоэз.

2.2. Лейкоциты.

2.3. Тромбоциты и система свертывания крови.

2.4. Состав плазмы крови.

3. Сведения о долгожителях Абхазии.

Глава И. Материалы и методы.

Глава III. Результаты собственных исследований.

Глава IV. Обсуждение результатов. 79 Выводы 87 Список литературы.

 
 

Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Каландия, Теона Зурабовна, автореферат

Актуальность исследования.

Современная демографическая ситуация характеризуется общим постарением населения и ростом доли людей старше 65 лет. Наступление старости - процесс индивидуальный, и не всегда «календарный» и «физиологический» возраст совпадают. Учитывая увеличение количества людей пожилого возраста, необходимо иметь данные о лабораторных показателях крови. Большой интерес представляет исследование этих показателей у пожилых людей, проживающих в Абхазии, где подобные исследования ранее не проводились.

Феномен абхазского долгожительства издавна привлекал внимание ученых. Проводились совместные программы американских и советских ученых по изучению случаев активного долголетия в СССР и США. В одной из них в качестве первого объекта были взяты жители Очамчирского и Гудаутского районов Абхазии, использовались и др. регионы Союза(Украина, Западная Грузия) Наблюдения прошлых лет в основном касались общедемографических аспектов, сведений об образе жизни, жилищно-бытовых условий, особенностей питания долгожителей Абхазии. Были данные и о состоянии у них различных систем организма (сердечнососудистая, дыхательная и др.). Лишь в конце 80-х гг появились отдельные сообщения о биохимических, цитогенетических, иммунологических показателях на предмет выявления их связи с феноменом абхазского долгожительства.

Вопросу долголетия в Абхазии была посвящена монография американской ученой С. Бенет, опубликованная в 1974 г и вызвавшая широкий интерес общественности.

В 1980-е - начале 1990-х гг под руководством проф. В.И Козлова были выполнены два крупных международных проекта, включающие экспедиционные исследования в Закавказье; исследовались демографические особенности жителей абхазских и азербайджанских селений и возможные факторы их популяционного долгожительства(условия географической среды, системы питания, хозяйственной деятельности, жилища, психологических механизмов адаптации). В составе экспедиции работала американская журналистка П. Гарб, издавшая книгу «Долгожители», переведенную на русский язык в 1986 г.

К сожалению, интерес ученых к данной проблеме в Абхазии стал угасать в последние 14 лет постсоветского периода. Однако, вопрос по-прежнему остается чрезвычайно актуальным, тем более что современные технологии позволяют получить ранее недоступный объем информации о морфофункциональных особенностях клеток организма.

Так как комплексное исследование показателей крови в Абхазии не проводилось, то естественно, что проблема изучения клинико-физиологических особенностей пожилых людей и долгожителей приобретает серьезное значение как для решения фундаментальных вопросов биологии старения на самом позднем этапе онтогенеза, так и для решения ряда важных медико-социальных вопросов, связанных с планированием и организацией охраны здоровья и социального обеспечения людей старших возрастных групп.

Цель работы: изучение клеточного состава периферической крови, сравнительная характеристика периферического отдела эритрона жителей Абхазии различных возрастных групп, исследование лейкоцитарной формулы и особенностей сегментации ядер нейтрофилов, изучение некоторых биохимических показателей крови.

Задачи работы: 1) изучить показатели периферического отдела эритрона (гемоглобин, эритроциты и их морфологическая характеристика);

2) исследовать количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу, оценить сегментацию ядер нейтрофилов у лиц пожилого возраста;

3) определить биохимические показатели крови (глюкоза, холестерин, мочевина);

4) исследовать некоторые показатели свертывающей системы (протромбиновый индекс, количество тромбоцитов, время свертывания крови);

5) дать сравнительную характеристику вышеперечисленных показателей крови представителей различных возрастных групп, включая долгожителей.

Научная новизна работы: изучение лабораторных показателей крови у лиц пожилого возраста и долгожителей Абхазии с применением метода компьютерной обработки изображения.

Теоретическая и практическая значимость работы:

На основании полученных данных планируется подтвердить утверждение о длительном отсутствии при физиологическом старении нарушений со стороны кроветворения, о чем свидетельствует динамическое постоянство гематологических показателей периферической крови, наблюдаемое у лиц пожилого возраста.

Положения, выносимые на защиту.

1. На основании полученных данных подтверждено отсутствие при старении резких нарушений со стороны кроветворения.

2. Показано сохранение основных гематологических параметров у долгожителей в пределах физиологической нормы для среднего возраста.

3. На основании данных биохимического исследования установлена стабильность метаболических процессов в старческом и долгожительском возрасте при условии отсутствия острых и хронических заболеваний важнейших систем организма.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 99 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 129 источников. Работа иллюстрирована 7 таблицами, 17 рисунками.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Периферическое звено гемопоэза и некоторые биохимические показатели у лиц различных возрастных групп, проживающих в Абхазии"

выводы

1. При оценке периферического звена гемопоэза не отмечено значительных различий, что свидетельствует о стабильности кроветворения на протяжении всей жизни.

2. Содержание гемоглобина и количество эритроцитов остается относительно стабильным в группах старческого возраста. Снижение числа эритроцитов в группе долгожителей, возможно, объясняется сужением плацдарма кроветворения не только в плане возрастной инволюции, но и из-за уменьшающейся потребности организма (в частности мышечной ткани) в кислороде. Это предположение подтверждено при исследовании крови космонавтов, во время полетов длительное время не испытывающих мышечных нагрузок и влияния земной гравитации.

3. Распределение эритроцитов по диаметру в группах мужчин старческого и долгожительского возраста характеризуется увеличением доли макроцитов, снижением доли микроцитов. Таким образом, с возрастом средний диаметр эритроцитов имеет тенденцию к увеличению. У женщин таких изменений нами не обнаружено.

4. При исследовании количества лейкоцитов явное снижение обнаружено в группе долгожителей - мужчин, где оно приближалось к нижней границе нормы. Различий между средневозрастной и старческой группами мужчин, а также между тремя возрастными группами женщин не обнаружено. При исследовании лейкоцитарной формулы выявлено относительное постоянство в содержании лимфоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов (как у мужчин, так и у женщин). Обнаружено снижение количество эозинофилов у долгожителей.

Количество моноцитов у женщин с возрастом существенно не меняется. У мужчин выявлено достоверное снижение их числа.

5. Скорость оседания эритроцитов значительно увеличивается с возрастом, как у мужчин, так и у женщин, что возможно, объясняется увеличением частоты диспротеинемий.

6. Наши исследования подтвердили данные о частоте распространения групп крови среди геронтов, что подтверждается литературными данными, согласно которым наблюдается большая приспособленность лиц с группой «О» к меняющимся условиям среды.

7. Отмечено большее сходство средних значений и диапазона колебаний исследованных параметров между средневозрастной и долгожительской группами, что говорит о достижении порогов долголетия лиц с сохранением основных показателей.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Каландия, Теона Зурабовна

1. Асфандиярова Н.С., Шатров В.В., Гончаренко Л.В., Колчева Н.Г. Система иммунитета у лиц пожилого и старческого возраста. // Клиническая геронтология, т.2, №4, 1996.

2. Барышников А. Ю. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике // М., 1997. С. 124.

3. Барченко Л.А., Генис Е. Д. Изучение морфологического состава периферической крови у людей пожилого возраста. Физиол. журн. АН УССР, 1960, т. 6, с. 801—807.

4. Бигвава В. Образ жизни абхазских долгожителей. Тбилиси, «Мецниереба», 1988, -92с.

5. Биология старения. Руководство по физиологии. JL, Наука, 1982, С.298-303.

6. Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н. Современное представление о роли нейтрофилов в противоопухолевом иммунитете (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика, №8, 2005-С.51-54.

7. Вербицкий Н.М., Анненков Г.А., Башлай А.Г.и др. Распределение изоантигенов генетических систем групп крови среди населения Абхазской АССР // Вопросы антропологии-1972 -т.5 №40, С. 123-133.

8. Гаврилов JI.A., Гаврилова Н.С. Биология продолжительности жизни. 2-е изд. М.: Наука, 1991.-280с.

9. Гарб П. Долгожители. М., «Прогресс», 1986, -183с.

10. Гейне К. М., Клатт Р., Герман Г., Стоббе Г., Сакран Сахи И., Шмидт У. Снижение реактивной способности лимфоцитов в старости. — Пробл. гематол., 1970, № 8, с. 29—32.

11. Германов В.А., Пиксанов О.Н., Чакина J1.A. Срок жизниразличных стадий зрелости тромбоцитов и мегакариоцитов у лиц старческого возраста (72-108 лет). В кн.: Кровь при старении и некоторых заболеваниях. Куйбышев, 1972, с. 68-72.

12. Глузман Д.Ф., Филатов А. В., Абраменко И.В. // Эксперим. онкол 1996.-Т. 18. № 3. - С. 293-299.

13. Гребенюк А.Н., Антушевич А.Н. и др. Нейтрофилы и экстремальные воздействия: СПб., - 1998. - С. 215.

14. Давыдовский И. В. Геронтология. М., Медицина, 1966, С. 130-134.

15. Добрынина В.А. К характеристике свертывающей и анти-свертывающей системы у лиц пожилого и старческого возраста. В кн.: Вопросы гериатрии. М., 1965, с. 49-50.

16. Долгушин И.И, Зурочка А.В., Чукичев А.В. // Иммунология.-1996-№ 1.-С. 40-45.

17. Долгожительство: медицинские и социальные аспекты. / Под ред. Чеботарева Д.Ф., Минаевой В.П., Маньковского Н.Б., Киев, 1984, с.10-14.

18. Зорькина Н.К. Содержание тромбоцитов у практически здоровых лиц пожилого и старческого возраста. В кн.: Вопросы геронтологии и гериатрии. Ставрополь, 1965а, с. 154-155.

19. Зорькина Н.К. Время свертывания крови у практически здоровых лиц пожилого возраста. В кн.: Вопросы геронтологии и гериатрии. Ставрополь, 1965, с. 152-154.

20. Зорькина Н.К. Характер тромботеста у практически здоровых лиц пожилого и старческого возраста. Сов. мед., 1966, № 3, с.23-24.

21. Зюбина Л.Ю., Лосева М.И, Бельцова А.И., Улыбина В.А., Андреев В.М. Особенности анемического синдрома у лиц старшей возрастной группы.// Клиническая геронтология, т.4, №4, 1998.

22. Кассирский Н.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология, М, 1970, 56-73.

23. Кипшидзе Н.Н., Ткешелашвили Л.К., Салуквадзе Н.С. Об изучении некоторых показателей липоидного белкового и углеводного обмена в сыворотке крови у долголетних жителей Абхазии. В кн.: Механизмы старения. Киев, 1963, с. 115-120.

24. Козинец. Г.И. Экология и кроветворение. // Гематология и трансфузиология №12, 1990, С. 7-11.

25. Козинец Г.И., Гаврилов O.K., Быкова И.А. и др. Гематологические аспекты космических полетов. Сообщение 1. Цитологическая характеристика периферической крови. Проблемы гематологии и переливания крови. М., 1980, 28-86 .

26. Козинец. Г.И., Погорелов В.М., Котельников В.М. и др. О стабильности кроветворения и его лабораторных показателей.// Лабораторное дело №7, 1988, С. 3-7.

27. Козинец. Г.И., Новодержкина Ю.К. Стабильность кроветворения и его адаптационные возможности. // Клиническая лабораторная диагностика №5, 1997, С.16.

28. Козинец. Г.И., Сарычева Т.Г. Значимость лабораторных анализов крови. // «Триада-фарм» М, 2003, С.97.

29. Козинец. Г.И., Сарычева Т.Г., Дягилева О.А., Попова О.В., Левина Т.Н., Наумова И.Н., Соколинский Б.З., Стрелецкая Е.А. Особенности клеточного состава и исследование крови пожилых людей. // Лабораторная медицина №1, 1998, С.34-42.

30. Козинец. Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А., Боев С.Ф., Сазонов В.П. Клетки крови современные технологии их анализа. Москва, 2002.

31. Козлов В.И. Абхазское долгожительство. М., Наука, 1987 294 с.

32. Козловская Л.В., Николаев А.Ю. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования. М., 1984.

33. Колвин Р.Б., Дворак Х.Е. // Механизм иммунопатологии. -М.,-1983. С. 85-108.

34. Колесникова А.И., Лепехина Л.А., Конопляников А.Г. и др.// Экспериментальная онкология-1985. № 5. - С. 48-50.

35. Кузнецова С.М. Средовые и генетические факторы феномена группового долгожительства. // Здоровье Украины, Киев, 2003.

36. Кулаков В. В., Киселевский М. В., Полоцкий Б. Е. // Вест. ОНЦ. -1999. № 2. С. 26-31.

37. Лаврова В.С, Чередынцева Н.В., Васильев Н.В. // Нейтрофилы и злокачественный рост. Томск, 1992.

38. Левина Т.Н. Современный проточный счетчик в службе крови. Автореф. дис. на соиск. уч. степ, к.м.н., Москва, 2003.

39. Левина Т.Н., Сарычева Т.Г., Шмаров Д.А., Козинец Г.И. Клинический анализ крови возрастные аспекты. // Мат. науч.-практ. конф. «Заболевания крови у пожилых людей: диагностика, лечение, особенности иммуносупрессии», М., 2004.

40. Легеньков В.И., Киселев Р.К. Гематологические показатели периферической крови космонавтов.// Гематология и трансфузиология. М., 1991,№9, 30-32.

41. Маматов С.М. Клиническая картина и морфофункциональные особенности гемопоэза у больных с депрессиями кроветворения в процессе горноклиматического лечения. Автореф. диссерт. на соиск. уч. степ, д.м.н., Бишкек, 2000.

42. Маянский А. II., Пикуза О. И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань, 1993. 191 с.

43. Маянский А.П. Иммунология.-1995. № 4. - С. 8-14.

44. Мельник А.А. Референтные значения лабораторных показателей у детей и взрослых. Киев, «Книга плюс», 2000.

45. Переверзев А.Е. Кроветворные колониеобразующие клетки и физические стресс факторы. Л: Наука, 1986.

46. Петров Р.В. Иммунология.- М., 1987.

47. Пигаревский В.Е. // Арх. пат. 1983. - вып. 3. - С. 14-22.

48. Плейфэр Дж. Наглядная иммунология: Пер. с англ. М.,1999.

49. Погорелов В.М., Гусев А.А., Сазонов В.В., Козинец Г.И. Мониторинг формулы крови в динамике приготовления мазков. // Клиническая лабораторная диагностика №10,2002, С.ЗЗ.

50. Погорелов В.М., Хазем Г.М., Козинец Г.И. Анализ клеточного изображения.// Клиническая лабораторная диагностика №3, 1995, С.40-43.

51. Проблема старения и долголетия. Под ред. Никитина В.Н. М., МедГиз, 1963, с. 343-359.

52. Пушкова Э.С., Иванова JI.B. Долгожители: состояние здоровья и способность к самообслуживанию.//Клиническая геронтология. 1996. С. 64-67.

53. Пятницкий A.M., Соколинский Б.З., Козинец Г.И. Анализ изображения эритроцитов в приборе Мекос-Ц. // Клиническая лабораторная диагностика №5,1997.

54. Рзаев Н.А., Надиров Р.А., Ахвердиев О.Г., Караев А.Н. Объем циркулирующей крови, уровень белков и свертывающая система у мужчин пожилого возраста. — В кн.: 9-й Международный конгресс геронтологов. Киев, 1972, т. 3, с. 379.

55. Ройт А. Основы иммунологии. М., Мир, 2001.

56. Руководство по геронтологии. Под ред. акад. Чеботарева Д.Ф. М., Медицина, 1978, с. 205-213.

57. Руководство по гематологии. Под ред. Воробьева А.И. в 3-х томах, М., 2003.

58. Сарычева Т.Г., Козинец. Г.И. Морфофункциональная характеристика эритрона в норме (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика №5, 2001, С.3-8.

59. Соколинский Б.З. Методика и применение автоматизированнойэритроцитометрии. Автореф. дис. на соиск. уч. степ, к.м.н., М., 2001.

60. Соколов В.В., Грибова И.А. Показатели периферической крови у здоровых людей. Лабораторное дело. М., 1972, 5, 259-261.

61. Солонин Ю.Г. Физиологические показатели у женщин на севере при старении. // Клиническая геронтология, т.З, №4, 1997.

62. Спасокукоцкий Ю. А., Барченко Л. И. Содержание протромбина и количество тромбоцитов у людей на различных этапах старения. — Врач, дело, 1960, № 7, с. 51-54.

63. Среди долгожителей Абхазии. Под ред. проф. Инал-ипа Ш.Д., проф. Козлова В.И., Тбилиси, «Мецниереба», 1987.

64. Стражеско Н.Д., Яновский Д.Н. Атлас клинической гематологии. МД963.

65. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы // СПб., 1999.

66. Тульчинский М. Лабораторные методы клинического исследования. Польское гос. мед. изд. Варшава, 1965.

67. Тыныбеков А. Т., Сыдыгалиев К. С. Возрастные особенности гемодинамики у жителей Киргизии. — В кн.: 9-й Международный конгресс геронтологов. Киев., 1972, т. 3, с. 397.

68. Филленбаум П., Здоровье и благополучие пожилых. Подходы к многоаспектной оценке ВОЗ: англ. М. Медицина, 1987-79с.

69. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М., 1995.

70. Хринсафова Е.Н. Основы геронтологии (Антропологические аспекты). М.: Гуманит. изд. центр ВЛАДОС, 1999, с. 42-45,68-77.

71. Чакина Л. А. Изменение белковых фракций в сыворотке крови при старении. — Клин, мед., 1964, № 1, с. 34—36.

72. Чакина Л. А. Клинико-гематологические особенности старения. Автореф. докт. дис. Куйбышев, 1970.

73. Шафиро И.Б., Дарсания Я.М., Кортуа И.Е., Чикватия В.Р.

74. Долголетние люди Абхазии. Сухуми, АбГИЗ, 1956, -187с.

75. Шинский Г.Э. Показатели периферической крови в норме. Лабораторное дело. М., 1972, 5, 264-267.

76. Шиффман Дж. Патофизиология крови. Пер. с англ. - М., 2000.

77. Шмаров Д.А., Соболевская Л.В., Скрипка А.В., Левина Т.Н., Козинец Г.И. К вопросу о соотношении количества эритроцитов и их размеров в периферической крови. // Клиническая лабораторная диагностика №4, 2002, С.43-45.

78. Щерба М. М. Некоторые проблемы функциональной гематологии старости. Автореф. канд. дис. Л., 1963.

79. Яковлева И. Н., Дубовицкая А. П. Эритрограмма при нарушении липидного обмена у лиц пожилого и старческого возраста. — В кн.: Вопросы гериатрии. М., 1967, с. 82—84.

80. Ярилин А.А. Возрастные изменения тимуса и лимфоцитов. // Иммунология т.2,№2, 2003, с.117-128.

81. Abbort M.N., Abbey Н., Boiling D.R., Murphy Е.А. The familial component in longevity. A study of the offsprings of nonagenarians. 3. Intrafamilial studies//Amer. J Med. Genet. 1987. - Vol.2, -p.105-120/

82. Babior B.M., Gold D.W. // Williams Hematology: 5th ed. New York.-1995. - P. 773-779.

83. Bainton D.F. // Williams Hematology: 5th ed - New York. -1995. P. 753-765.83. (Binet L., Bourliere F.) Бине Л., Бурльер Ф. Основы геронтологии. М., 1960.

84. Borregaard N., Kjeldsen L., Rygaard К. ct al. // J. Clin. Invest. 1992. Vol. 66. P. 676-683.

85. Boxer L. // Williams Hematology: 5th ed. Naturae cell -mediated immunity against tumor. Ed. R. B. Herberman, - New York. - 1995. - P. 228-244.

86. Clark R.A., Slot S. // Ibid.-1981 Vol. 126. N 3. -P. 1295-1299.

87. Constein B.N., Weissmann G. // Arthr. and Rheum.-1993.Vol. 36.- P. 147-157.

88. Dallegri F., Patrone F., Trumenlo G., Sacchelli С // J. Natl. Cancer Inst. — 1984. — Vol. 73. —P. 331—339.

89. Dallegri F., Ottonello L. // Arch. Immunol. Ther. Exp. -Vol 10- 1992.-P. 39-42.

90. Epidemiology in Old Age / Ebrahim S., Kalache A.K. eds. London: BMJ Publ. Group, 1996. - 436 p.

91. Geffner J.R., Giordano M., Palermo M.S. et. al // Clin. Exp Immunol. Rev. 1987. - Vol. 69. - 668-675.

92. Gergely J. Sarmay G. // Immunol. Rev.-1992.-Vol. 125.P. 5-19.

93. Gerrard Th., Cohen D.I., Kaplan A. M. // J. Nat. Cancer Inst. 1981.-Vol. 66. -N3.-P. 483.

94. Ginaldi L., De Martinis M., D'Ostilio A. et al. Immunologikal changes in the elderly. III. Innate immunity // Immunol. Res. 1999. -Vol. 20. - P.113-126.

95. Graziano R.F., Fancer M. W. // J. Immunol. 1987. -Vol. 138. -P. 3356-3541.

96. Guglielmo R. D., Miliani A., Guidi G. Raffronti fra l'ematopoiesifisiologica del giovane e del vecchio. — Giorn. di Geront., 1962, v. 10, p. 518—521.

97. Harris P.J. //Clin. Exp. Immunol. 1982 -Vol 50-N 3 p. 474-478.

98. Inagaki J., Rodriguez V., Bodey G. P. Causes of death in cancer patients// Cancer. 1974. - Vol. 33. - P. 568-573.

99. Ishiko Osamu, Deguchi Masaaki, Tatsuta Ichiro et al. // Jpn. J.Cancer Res. 1990. - Vol. 81. - N 6-7. - P. 564-566.

100. Jablonska Ewa, Zofia Pietniska, Marian Furman, Miroslaw Ko-slowski // Arch. Immunol, et Ther. Exp. 1994. - Vol. 42,- P. 393-397.

101. Kay H.D., Smith D. // Immunobiology.-1981. Vol. 159.-N 12.-P.136-137.

102. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase. Occurence and biological function// Peroxidases in Chemistry and Biology. Boca raton, - 1991. - P. 1-36.

103. Kores S. / In: Natural cell-mediated immunity against tumors.-New York, 1980. - P. 1301-1307.

104. Kuypers T.W., Tool А. Т., van der School et al. // Blood. -1991. Vol. 78. - P. 1105-1111.

105. Kuypers T. W., Hakkert В. C, Hoogerwelf M. et al. // J. Immunol. -1991. Vol. 147, - P. 1369-1376.

106. Lindemann A., Riedel D., Oster W. et al. // J. Immunol. -1988. -Vol. 140. P. 837-839.

107. Ling P., Gately M., Gubler U. et al. // J. Immunol. 1995. -Vol. 154. - P. 1 16-127.

108. Lo S.K, van Seventer G.A., Levin S.M., Wright S.D. // J. Immunol. 1989. - Vol. 143. - P. 3325-3329.

109. Mazzone A., Pasotti D., Ricevtiti G. // Brit. Jour, of Haemotol.-1990.-Vol. 76. P. 215-220.

110. Prior C., Townsend P.J., Hughes D.A., Haslam P.L. // Clin. Exp. Immunol. 1992. - Vol. 87. - N 3. - P. 485-492.

111. Pilgeram L. O., Bandi Z., Thelander P. F. Albumin correction of the clearing factor defect in ageing, arteriosclerotic subjects. — J. Atheroscler. Res., 1964, v. 4, p. 244—253.

112. Schulz Aellen M. - F. Aging and Human Longevity. - Boston: Birkhauser. 1997. -283 p.

113. Swan Н. Т. Fibrinolysis related to age in men. — Brit. J. Haematol., 1963, v.9, p. 311— 318.

114. Smolen J.E., Boxer L.A. // Williams Hematology. 5 th ed. New York-1995. - P. 779-798.

115. Tchorzewski Н. // Arch. Immunol. Ther. Exp.- 1992 - Vol. 40. - P. 5-9.

116. Tiku K., Tiku M.L., Liu S., Skosey J.L. // J. Immunol. -1985. -Vol. 136. P. 3677-3685.

117. Todd R.F. Ill, Arnaout M.A., Rosin R. E. et al. // J. Clin. Invest. 1984. - Vol. 74. - P. 1280-1290.

118. Wintrobe's. Clinical Hematology. / G. Richard Lee, J. Foerster, J. Lu Kens et al. (Philadelphia-Baltimore. New-York London). - X. -1999. Vol. 2.

119. Wollner A., Wollner S., Smith J. B. // Am J. Rcspir. Cell Mol. Biol. 1993. - Vol. 9. - N 2. - P. 179-185.

120. Zeman К The modem aspects of neutrophils role in the inflamation

121. Pol. J. Immunol. 1993 - Vol. 28. - P. 23-44.

122. Zielasek J., Archelos J., Toyka K.V., Hartung H.P. // Neurosci. -Lett. 1993. - Vol. 153. - N 2. - P. 136-139.

123. Zimmerman G.A., Prescott S.M., Mclntyre Т. M. // Immunol. Today. 1992. - Vol. 13. - P. 93-99.