Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Особенности спектра HLA-антигенов I и II класса при профессиональных заболеваниях легких

На правах рукописи

ИГНАТОВА НАТАЛИЯ КОНСТАНТИНОВНА

ОСОБЕННОСТИ СПЕКТРА НЬА-АНТИГЕНОВIИ Н КЛАССА ПРИ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЛЕГКИХ

14.00 36 — «Аллергология и иммунология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ООЗ1ВОЭ52

Уфа-2007

003160952

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации и на базе Государственного учреждения здравоохранения «Самарская областная станция переливания крови».

Научный руководитель доктор медицинских наук,

профессор Жестков АлександрВикторович;

Официальные оппоненты доктор медицинских наук,

профессор Еникеева Светлана Ахметовна;

доктор медицинских наук Азиабаева Лилия Фаритовна

Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации

Защита диссертации состоится «» 2007 г в^^часов

на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002 124 01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу 450014, г Уфа, ул Новороссийская 105

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке филиала «Иммунопрепарат» Федерального государственного унитарного предприятия «Научно-производственное объединение по производству медицинских иммунобиологических препаратов «Микроген» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу 450014, г Уфа, ул Новороссийская, 105

Автореферат разослан 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Лукманова К. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Значительное распространение заболеваний легких специфической и неспецифической этиологии, деструктивных форм патологии, утяжеление течения хронических профессиональных заболеваний легких приводит к снижению качества жизни пациентов, увеличению числа инвалидов с бронхолегочной патологией и в связи с этим к значительным экономическим потерям [Косарев В В , 1995, Измеров Н Ф , 1996, Тарасова JIА и др , 1998, Палеев Н Р , 2000, Чучалин А.Г., 2004]

Установление диагноза происходит чаще всего со значительным опозданием, так как многочисленными морфологическими исследованиями доказано опережающее развитие пылевого фиброза легких по сравнению с рентгенологическими изменениями [Донец И К, 1986, Жестков A.B., 2000, Васюкова Г Ф, 2005, Echert Н, 1987]

Значительное место в общей структуре пульмонологической заболеваемости занимают пылевые болезни легких [Чучалин А Г, 1992, Агаджанян НА идр, 1999, Framann G , 1986]

Вопросам своевременной диагностики и прогнозирования течения легочных заболеваний уделяется значительное внимание [Милишникова И И и др, 1990, Палеев HP, 1990, Панкова В Б и др, 1991, Siafakas N M.,Vermeire Р, 1995, Чучалин А.Г., 2006] в связи с этим оправдано применение новых технологий в диагностике поражений органов дыхания профессиональной этиологии [Артамонова В Г и др , 1995, Sheppard D et

В последнее время значительный практический интерес представляют данные о связи генетических маркеров главного комплекса гистосовместимости с некоторыми патологическими процессами [Хаитов Р М и др , 2000, Эюбова А А и др , 2004]

Одним из ключевых аспектов в развитии заболеваний легких является состояние иммунного гомеостаза. Однако, определению факторов, которые участвуют в иммунном воспалении при пневмокониозах - интерлейкинов -1а, -1Р, -8 (ИЛ-1а, ИЛ-1р, ИЛ-8), альфа-фактора некроза опухоли (ФНО-а), общего иммуноглобулина класса Е 0№) и фибронектина плазмы у больн) :

al, 1986]

пылевой патологией легких посвящены единичные работы [Жестков А В, 1995, Авдеева О Е, 1998]

В комплексное исследование иммунного статуса таких больных входит и изучение тканевых антигенов (системы НЬА). При определенных условиях существует взаимосвязь между НЬА-фенотипом и проявлениями болезни Гены, детерминирующие Ш А-антигены, одновременно являются генами, контролирующими иммунный ответ, поскольку при связывании чужеродных антигенов НЬА-молекулы осуществляют взаимодействие между антигенами и Т-клетками [Яздовский В В , 1991; Хаитов Р.М, 1999]

Между некоторыми НЬА-молекулами и рядом заболеваний установлена статистически достоверная взаимосвязь [БаНоп Т А, Веппе1 1С, 1992]

Это позволяет прогнозировать распространение той или иной патологии, диагностировать, персонифицировать заболевание [Шабалин В Н, 1988; Яздовский В В , 1991, Потемкина Е Е, 2003]

Место иммуногенетических методов в прогнозировании течения пылевых заболеваний легких нуждается в уточнении

В настоящее время недостаточно исследовано диагностическое значение иммуногенетических тестов при пылевых заболеваниях в целом и в зависимости от фиброгенности этиологического фактора

Определение индивидуальной чувствительности к промышленным аэрозолям представляет собой актуальную задачу и позволяет выделить маркеры для профессионального отбора, прогнозирования развития профессиональных заболеваний органов дыхания

Цель исследования

Изучение спектра антигенов НЬА-системы I и П класса, показателей иммунного статуса для ранней диагностики и прогнозирования течения заболеваний легких профессиональной этиологии

Задачи исследования

1 Провести НЬА-типирование здоровых доноров региона Среднего Поволжья и проанализировать полученные данные в сравнении с другими популяциями

2 Провести иммуногенетические исследования и проанализировать данные тканевого типирования больных с профессиональными заболеваниями легких с целью выявления маркеров высокого риска развития пневмофиброза.

3 Выявить НЬА-ассоциированиые маркеры индивидуальной предрасположенности и резистентности к различным формам профессиональных заболеваний органов дыхания

4 Изучить НЬА-генотип II класса больных с пылевыми заболеваниями легких с целью выявления маркеров тяжелого неблагоприятного течения

5 Определить значения показателей элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций, гуморальных факторов иммунитета и уровень провоспалительных цитокинов сыворотки крови у лиц, контактирующих с промышленными аэрозолями, и у пациентов с профессиональными заболеваниями легких (пылевой бронхит, пневмокониозы, силикотуберкуле)

Научная новизна

Впервые обобщены данные по спектру НЬА-специфичностей I и II класса (локусов А, В, БК. БС^А и ВС)В) в русской популяции региона Среднего Поволжья

Выявлены иммуногенетические критерии предрасположенности к легочной патологии профессионального генеза, описаны особенности НЬА-генотипа у пациентов с заболеваниями легких профессиональной этиологии и здоровых доноров, выявлены НЬА-маркеры генетической резистентности к патологии легких

Впервые разработаны иммунологические критерии чувствительности к промышленным аэрозолям, отобраны биомаркеры для скрининговых исследований при профессиональном отборе на работу в условиях контакта с промышленными аэрозолями

Научно-практическая значимость работы

Установлен определенный спектр НЬА-антигенов при заболеваниях легких профессиональной этиологии, который служит основанием для выделения групп риска по развитию данной патологии, а также по неблагоприятному течению с развитием инфекционных осложнений (силикотуберкулез).

Полученные результаты определили место и значение исследований показателей гуморальных факторов иммунитета и элиминационных

5

механизмов в ходе иммунных реакций, сывороточного уровня провоспалительных цитокинов, частоты встречаемости эритроцитарных и лейкоцитарных антигенов в диагностике пылевого воздействия на органы дыхания

Безопасность и доступность иммунологических и иммуногенетических методов позволяют использовать их в комплексе тестов для профессионального отбора на работы, связанные с интенсивным воздействием промышленных аэрозолей.

Внедрение результатов исследования в практику Разработанный комплекс лабораторных исследований у больных с пылевыми заболеваниями легких и лиц, контактирующих с высокими концентрациями промышленных аэрозолей, используется на ГУЗ «Самарская областная станция переливания крови», в отделении аллергологии и пульмонологии клиник Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава

Ряд положений теоретического и практического характера, сформулированных в диссертации, включены в курс лекций по клинической иммунологии на кафедре общей и клинической микробиологии, иммунолопш и аллергологии в ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Росздрава для студентов и слушателей последипломного образования

Основные положения, выносимые на защиту

1 Иммуногенетический скрининг индивидуальной чувствительности респираторного тракта к действию промышленных аэрозолей различной степени фиброгенности является моделью для разработки и внедрения медико-генетической концепции прогнозирования развития и первичной профилактики профессиональных заболеваний органов дыхания.

2 Использование комплекса иммунологических и иммуногенетических методов при профессиональном отборе и среди рабочих со стажем способствует повышению качества диагностики пылевых заболеваний легких и определению индивидуальной предрасположенности или устойчивости к действию промышленных аэрозолей

3 Результаты индикации спектра антигенов НЬА-системы I и II класса у здоровых жителей Самарской области могут быть использованы при проведении исследований взаимосвязи заболеваний человека с наличием определенных НЬА-антигенов

4 Провоспалительные цитокины - интерлейкины-1а, -1(3, -8 (ИЛ-1а, ИЛ-1Р, ИЛ-8), а-фактор некроза опухоли (ФНО-а), фибронектин и иммуноглобулин класса Е (1§Е) участвуют в иммунопатогенезе при профессиональных заболеваниях лепсих

Апробация работы

Материалы и основные положения диссертации доложены и обсуждались на научно-практической конференции Приволжского федерального округа «Дни иммунологии и аллергологии в Самаре» (Самара, 2004), объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004), Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2004) Автором диссертации сделаны доклады на X Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2005), заседании секции пульмонологов Самарского областного научного общества терапевтов (Самара, 2007)

Диссертация апробирована на межкафедральном заседании Государственного образовательного учреждения высшего

профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава (протокол от 15 мая 2007 года №8) и заседании Регионального диссертационного совета КМ 002 124 01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан (протокол от 14 июня 2007 года №63)

Публикации

По теме проведенных исследований опубликовано девять научных работ, в том числе одна в издании, утвержденном в перечне ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 137 страницах, содержит 26 таблиц, 4 рисунка Она состоит из введения, обзора литературы (одна глава), собственных исследований (пять глав), заключения, выводов и практических рекомендаций Список литературы включает 214 источников (151 отечественных и 63 зарубежных)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Диссертационная работа выполнена на базе ГУЗ «Самарская областная станция переливания крови», кафедры профессиональных болезней и клинической фармакологии, кафедре общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Росздрава

Для решения поставленных задач за период 2004-2007 гг в условиях поликлинического приема, в отделениях клиник ГОУ ВПО «СамГМУ» Росздрава проведено комплексное клинико-иммунологическое обследование 456 пациентов в возрасте от 45 до 55 лет с различными формами пылевых заболеваний легких Контрольную группу составили 1134 донора Самарской областной станции переливания крови.

Все больные, в зависимости от фиброгенных свойств промышленных аэрозолей, течения заболевания и в соответствии с современной классификацией пневмокониозов (приказ МЗ РФ N 90 от 14 марта 1996 года) были разделены на пять групп Первую группу (п=105) составили рабочие без рентгенологических признаков поражения легких, контактирующие на производстве с фиброгенной пылью, содержащей свободную двуокись кремния в концентрации более 10% и превышающей предельно допустимую концентрацию (ПДК) в 10 и более раз У рабочих этой группы периодические медосмотры проведали сотрудники кафедры профессиональных болезней и клинической фармакологии ГОУ ВПО «СамГМУ» Росздрава Вторая группа (п=74), - больные с воспалительной формой хронического пылевого бронхита В третью группу (п=72) включены больные с установленным диагнозом силикотуберкулез. Рентгенологическая характеристика процесса соответствовала интерстициальной форме (от з 1 до М), очаговой форме туберкулезных изменений, без выделения микобактерий туберкулеза Все пациенты данной группы были обследованы фтизиатром и проходили лечение в туберкулезных диспансерах по месту жительства после установления диагноза На момент обследования больные не принимали противотуберкулезных и противовоспалительных препаратов Четвертую группу (п=102) составили больные силикозом первой стадии с рентгенологической картиной, соответствующей интерстициальной форме

8

(от з1 до t2) В пятую группу (п=103) вошли больные с установленным диагнозом пневмокониоза от воздействия малофиброгенной смешанной пыли (ПДК более 10 мг/мл) Рентгенологические изменения у этих пациентов так же соответствовали интерстициальной форме (от до 12).

Пациенты первой и четвертой групп поступили на обследование непосредственно после "пылевого" контакта на производстве, обследуемые лица из других групп прекратили контакт с пылью три - семь лет назад после установления клинического диагноза "силикоз" и "пневмокониоз", течение заболевания оценивалось у них как "медленно прогрессирующее"

Диагноз заболевания каждому обследованному ставился в соответствии с Международной классификацией болезней 10-го пересмотра (1995) и классификацией пневмокониозов [Милишникова В В и др, 1996] на основании клинического, рентгенологического и функционального исследований, а также данных обследования санитарно-гигиенических условий труда в соответствии с приказом МЗ РФ N83 от 16 августа 2004 года (в редакции приказа МЗ РФ N 338 от 16 05 2005)"0б утверждении перечней вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся предварительные и периодические медицинские осмотры (обследования), и порядка проведения этих осмотров (обследований)"

Рентгенологическое исследование всем обследуемым проведено в соответствии с требованиями, предъявляемыми к этой процедуре [Розенштраух Л С и др, 1987, Гольдельман А Г и др, 1992] В сложных диагностических случаях использовалась проба Вальсальва, позволяющая разграничить сосудистые и фиброзные изменения в легких.

В соответствии с целью работы рассмотрены пациенты без клинически выраженных признаков легочного сердца и дыхательной недостаточности второй и третьей степени, а также без значимой сопутствующей терапевтической патологии.

Изучение вентиляционной функции легких провели с помощью компьютерного пневмотахографа "Мюго1оор" (Великобритания) Исследуемые величины выражены в процентах к должным, что значительно упрощает сравнение различных групп пациентов, исключая необходимость стандартизации по возрасту, полу, массе, росту

При вычислении должных величин учтены параметры пациента и микроклимата помещения, в котором проводилось определение вентиляционной функции легких. Определены не только общепринятые объемные показатели, такие как жизненная емкость легких на вдохе (1УС), резервный объем вдоха (ШУ) и выдоха (ЕКУ), дыхательный объем (ТУ), но и параметры кривой "поток-объем": форсированная жизненная емкость легких (БУС), абсолютный (БВУ!) и относительный (БЕУ1 % УС) объемы форсированного выдоха в течение одной секунды, максимальный поток при форс1фованном выдохе (РЕБ), поток при форсированном выдохе при остатке 25 %, 50 %, 75 % форсированной жизненной емкости легких (воздушный поток по бронхам мелкого, среднего и крупного калибра - МЕР 25 % УС; МЕР 50 % УС; МЕР 75 % УС), вязкостное дыхательное сопротивление.

Эти объемные и скоростные показатели выбраны как малозависящие от условий проведения исследования и имеющие диагностическую ценность [Шмутер Л.М. и др., 1993, Жестков А В , 2000]

Иммунологические и иммуногенетические исследования больным выполнены в соответствии с рекомендациями ВОЗ и отечественных авторов [Петров Р В и др., 1992; Хаитов Р.М и др ,1995; Йегер Л, 1990] на базе ГУЗ «Самарская областная станция переливания щзови» и на кафедре общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии ГОУ ВПО «СамГМУ» Росздрава.

При проведении иммунологического обследования использован комплекс стандартизованных тестов, включающих оценку.

- содержания иммуноглобулинов классов А, М, О в сыворотке крови методом радиальной имму но диф фузии в геле с моноклинальными антителами [Мапсш е! а1., 1965],

- концентрации общего иммуноглобулина класса Е в сыворотке крови пациентов с помощью иммуноферментного анализа и диагностических наборов ДИА-плюс (Швейцария) и НПФ Хема (Россия),

- фагоцитарной активности лейкоцитов в тесте с латексом производства Института биологического приборостроения (Москва) [Федосеева В Н, 1993)];

- концентрации фибронектина в сыворотке крови с помощью твердофазного иммуноферментного анализа на многоканальном

спектрофотометре "Dynatech MR 5000" (США) при длине оптической волны 492 нанометра;

- содержания уровня лизоцима в сыворотке крови турбидиметрическим методом с использованием ацетонированного микрококка [Петров Р В и др , 1992],

- уровня сывороточного муцинового антигена 3EG5 методом иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител ЗЕ1 2 (Medical Innovations, Australia) и афинно-очищенного козьего антитела G5 против всего семейства муцин-антигенов (НПФ Хема, Россия),

- уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови в реакции преципитации с полиэтиленгликолем [Петров Р В и др, 1992],

- содержания в сыворотке крови ряда цитокинов - альфа-фактора некроза опухоли (ФНО-а), интерлейкинов -1 и -8 (ИЛ-1а, ИЛ-ip, ИЛ-8) с помощью иммуноферментных тест-систем для определения ФНО-а человека, набора реагентов РгоСоп методом твердофазного иммуноферментного анализа [Хаитов Р М и др , 1995]

При исследовании иммуногенетических факторов проводили- определение антигенного состава - форменных элементов крови человека - эритроцитов по методикам в соответствии с рекомендациями Гематологического научного центра РАМН,

- серологическое определение HLA-антигенов локусов А и В в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте (ЛЦТТ) [Terasaki, 1964] с использованием набора гистогипирующих антилейкоцитарных сывороток Российского НИИ гематологии и трансфузиологии МЗ РФ,

- генотипирование HLA-аллелей II класса локусов DR и DQ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием набора реагентов производства НПФ «ДНК-Технология» (Москва)

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета компьютерных программ «Statistica-6, Excel-8» Результаты представлены в виде М±т, где М средняя арифметическая, m — стандартная ошибка средней арифметической Оценку значимости различий средних арифметических проводили с использованием t-критерия Стьюдента Статистически значимыми считали различия при Р<0,05

Математическая обработка результатов иммуногенетических исследований проводилась в три этапа Для оценки силы ассоциации между антигенами HLA-фенотипа и заболеванием на втором этапе был произведен расчет критерия относительного риска (RR) по формуле Wolf и его 95% доверительного интервала [Певниций JIА, 1988] Вычисляли атрибутивный риск (5, Haldane) развития пылевой патологии легких в зависимости от наличия или отсутствия определенного антигена локусов А и В системы HLA [Яздовский В.В., 1994]. На третьем этапе рассчитывали величину абсолютного риска (AR), отражающую риск развития заболевания у пациента, имеющего данный аллель, в течение всей жизни, этиологической фракции (EF), характеризующей силу положительной HLA-ассоциации, превентивной фракции (PF), характеризующей силу отрицательной HLA-ассоциации Для оценки статистической значимости различий встречаемости определяемых признаков между контрольной группой и группами больных пылевыми заболеваниями легких использовали критерий Хи-квадрат [Sveigaard А, 1994]

Результаты исследований и их обсуждение

В ходе клинических исследований получены данные, позволяющие судить о возможном их диагностическом и прогностическом значении у пациентов с пылевыми заболеваниями легких

Частой жалобой у всех обследованных лиц был кашель, сухой (во всех группах) или с мокротой (вторая и третья группы обследованных)

Одышка разной степени выраженности носила смешанный характер, беспокоила реже в покое, чаще при физической нагрузке

Боль в грудной клетке, не носящая коронарогенный характер и связанная с актом дыхания, отмечалась у 20,0 % пациентов из первой группы, у 52,9 % - из второй, у 68,2 % - из третьей группы, у 25,0 % - из четвертой группы, у 28,1 % больных из пятой группы. Притупление перкуторного тона и коробочный оттенок практически одинаково часто определялись у всех обследованных

Анализ полученных данных показал, что клиническая симптоматика во всех группах разнообразна и неспецифична, не позволяет прогнозировать развитие и течение пылевых заболеваний легких профессиональной этиологии

Признаки эмфиземы легких отсутствовали у лиц первой группы, частота эмфиземы во второй группе составила 8,8 %, в третьей группе - 59,1 %, в четвертой группе - 28,1 %, в пятой группе - 21,9 %

Определение параметров функции внешнего дыхания (ФВД) проводилось у всех обследованных в одно и то же время дня с отменой бронхолитиков за один день до исследования

Статистически значимое снижение значений показателей функции внешнего дыхания РЕУ1, РЕVI % УС и МЕБ 25 % УС (Р<0,01), РЕР и повышение вязкостного дыхательного сопротивления (Р<0,001) отмечено у пациентов с хроническим пылевым бронхитом

При силикотуберкулезе оставалось в пределах нормы значение показателя вязкостного дыхательного сопротивления, несмотря на незначительное снижение МЕБ 25 % УС (Р<0,05) Были снижены значения показателей абсолютного (ЕЕУ1), относительного (БЕVI % УС) объема форсированного выдоха и максимального потока при форсированном выдохе (РЕР) (Р<0,001) При интерстициальной форме силикоза были изменены по сравнению с контрольной группой все показатели форсированного выдоха (Р<0,01)

У рабочих с пневмокониозом при действии малофиброгенных промышленных аэрозолей отмечены нормальные значения показателей объема форсированного выдоха за одну секунду Вязкостное дыхательное сопротивление было повышено (Р<0,001), снижены значения показателей РЕЕ (Р<0,001) и МЕБ 25 % УС (Р<0,05)

При межгрупповом сравнении сниженных показателей ФВД нами не получены статистически значимые различия, что позволяет сделать вывод о неспецифичности выявленных изменений пневмотахометрии (форсированного выдоха) у обследованных лиц

Проведенные нами исследования показали, что клинические особенности проявлений пылевых заболеваний легких и изменения значений показателей пневмотахограммы не позволяют достоверно диагностировать возможность возникновения и определять прогноз развития пылевых заболеваний легких и могут использоваться лишь в комплексе общепринятых диагностических методов, а также при скрининговых обследованиях больших групп рабочих

Определение значений параметров ФВД не позволяет проводить дифференциальную диагностику пылевых заболеваний легких без комплекса рентгенологических, иммунологических, биохимический,

иммуногенетических методов

Полученные нами при проведении иммуногенетических исследований результаты определения эритроцитарных (системы ABO, Rh), лейкоцитарных антигенов и аллельных вариантов генов (системы HLA) позволили выделить отдельные специфичности как факторы предрасположенности и резистентности к развитию пылевых заболеваний легких

При определении групповых и резус - антигенов крови у пациентов из первой группы (рабочих без рентгенологических признаков, контактирующих на рабочем месте с высокими концентрациями промышленных аэрозолей высокой степени фиброгенности) выявлены незначительные отличия от аналогичных показателей в контрольной группе (здоровые доноры)

У обследованных пациентов второй группы (хронический пылевой бронхит) были получены следующие результаты Шг(+)фактор - у 59,1 %, Rh(-) - у 40,9 % обследованных, распределение групп крови 0(1) - у 38,6 %, А(П) - у 25,0 %, В(Ш) - у 25,0 %, A2B(IV) - у 4,6 %, AB(IV) - у 6,8 % пациентов

В третьей группе (больные с силикотуберкулезом) Шг(+)фактор выявлен у 49,4,% обследованных, Rh(-) — у 50,6 % пациентов, группы крови составили- 0(1) - 16,7 %, А(11) - 58,3 %, В(Ш) - 25,0 %, A2B(IV) и AB(IV) -не встречались.

В четвертой группе (больные с интерстициальной формой силикоза) резус-фактор определялся как положительный у 49,4 %, как отрицательный у 50,6 % обследованных, группы крови 0(1) - у 33,8 %, А(П) - у 47,1 %, В(Ш) - у 17,6 %, A2B(IV) - у 1,5 %, АВ ~ у 0 % пациентов

У обследованных лиц пятой группы (пневмокониоз от действия малофиброгенной пыли) Ш1(+)фактор выявлен у 93,3 %, Rh(-) - у 6,7 % обследованных; 0(1) группа крови - у 20,0 % пациентов, А(П) - у 36,7 %, В(Ш) - у 20,0 %, A2B(IV) - у 3,3 %, AB(IV) - у 0 % пациентов

контроль 2 группа Э группа '(группа 5 группа

0(1) А(||) а В{[||) ■ ДВ(1У) ■ А2В(1У)

Рисунок 1 - Распределение (в %) эритроцитарных антигенов системы ЛВО у обследованных лиц контрольной, второй, третьей, четвертой и пятой групп

контрольная 2грурлз 3 группа 4 группа 5 группа

группа

Рисунок 2 - Распределение (в %) зритроцитарного антигена Юг-фактора у обследованных лиц контрольной, второй, третьей, четвертой и пятой групп

Для более точного анализа полученных данных вычисляли относительный 0Ш.) и атрибутивный раек (5) при различных формах пылевых заболеваний легких. Это позволило определить диагностическое значение отдельных параметров.

_ ________

В ходе серологического типирования эритроцитов выявили, что при хроническом пылевом бронхите (вторая группа) достоверно выше, чем в контрольной группе обследованных, количество больных с КЬ(-)фактором (Р<0,001), при силикотуберкулезе (третья группа) отмечается повышение частоты встречаемости группы крови А(П) В этой же группе и при силикозе (четвертая группа) достоверно снижено (Р<0,001) количество пациентов, имеющих положительный резус-фактор У больных пневмокониозом (пятая группа) - выявлена положительная- корреляция с группой^ крови A2B(IV) и Rh(-) (Р<0,01). Предрасположенность к развитию пылевого пневмофиброза ассоцшфуется с 0(1) и AB(IV) группами крови

Проведенное исследование HLA-антигенного состава регистра доноров ГУЗ ОСПК г Самары выявило некоторые отличия в сравнении с донорами локальных регистров других регионов страны (Волго-Вятского и Уральского регионов, доноров г Санкт-Петербурга) В ходе исследования нами получены результаты HLA-генетического профиля 1134 доноров Самарской ОСПК

Анализ полученных результатов показал, что самым распространенным антигеном в русской популяции Среднего Поволжья является антиген А2 (52,6 %) Далее, в порядке убывания, в локусе А располагаются антигены A3, AI, А9, All, в локусе В чаще других в фенотипе встречаются антигены В7 (22,9 %) и ВЗ 5(20,5 %), затем В12, В15, В27 При сравнении частоты встречаемости антигенов в указанных группах доноров обращает на себя внимание некоторое увеличение частоты антигенов А2, А28 и снижение частоты антигенов AI, A3, В7, В8, В40 Из сплитовых антигенов, представляющих собой субтипы более общих специфичностей, с наибольшей частотой встречается А24, составляющий основную долю в частоте антигена А9, и антиген А25 - сплит антигена А10

К редким антигенам, встречающимся в фенотипе менее чем у 3 % обследованных лиц, относятся А23, А29, АЗЗ, В45, В52, В53, В56 Анализ внутрилокусных сочетаний HLA-аятигенов показал, что для доноров нашего региона наиболее характерными в локусе А являются следующие антигены. А1-А2, А2- А9, А2-АЗ, А1-АЗ, в локусе В В5-В7, В7-В13, В7-В35, В12-В35 Наиболее широко распространены гаплотипы А1-В8, АЗ-В7, А2-В12, А2-В15, А2-В40. Отмечается высокая встречаемость гаплотипа А25-В18 (маркера славянской популяции) Основная часть этих гаплотипов является

16

классическими европеоидными

Сравнительный анализ полученных данных НЬА-типирования выявил сходство в антигенном составе с популяциями Волго-Вятского и Уральского регионов Наибольшее сходство отмечено с регистром доноров из Нижнего Новгорода. Проведенные расчеты при сравнении антигенного состава европеоидной, Московской и Самарской популяции показали некоторое снижение частоты встречаемости антигенов А1 , А2, 28, В8, В14, В18, В37, В38, В39 и увеличение антигенов АЗ, А24, В7, В13, что отражает закономерность уменьшения данных специфичностей по мере продвижения с запада на восток.

Проанализирована частота встречаемости НЬА-антигенов локусов А и В у лиц обследуемых групп и у здоровых доноров В результате математической обработки полученных данных и сопоставления значений относительного (М1) и атрибутивного (8) риска для каждой группы обследованных лиц в отдельности были получены результаты, которые позволяют отобрать из многочисленных отклонений от значений показателей здоровых доноров частоты встречаемости отдельных НЬА-антигенов, наиболее достоверные и статистически значимые.

В результате компьютерной статистической обработки значений показателей получены следующие во второй группе достоверно изменен атрибутивный риск для антигена А10 (повышение), в третьей группе - для АЗ (повышение) При силикозе (четвертая группа) статистически значимые (Р<0,001) изменения показателя получены в отношении антигенов А28 (повышение) и АЗ (понижение), при пневмокониозе от воздействия малофиброгенной промышленной аэрозоли (пятая группа) - для антигена А2 (понижение) Для первой группы в локусе А не выявили достоверно значимых изменений показателей.

При определении показателя атрибутивного риска развития профессиональных заболеваний для антигенов локуса В получены следующие статистически значимые (Р<0,001) результаты для третьей группы - В12, В13, В35 (понижение), В22 (повышение), для четвертой группы - антигены В12 и В35 (понижение), для пятой группы - В7 (понижение), В5 и В35 (повышение) Для первой и второй группы в локусе В не выявили достоверно значимых изменений показателей

Таким образом, устойчивость к действию на организм промышленных аэрозолей ассоциируется с антигенами А2, A3, А9, В7, В12, В13 (перечислены в порядке убывания силы ассоциации антигена с отсутствием профессиональной патологии легких), и, наоборот, наиболее опасными в плане риска развития профессионального легочного фиброза являются HLA-антигены В35, В5, А10, А28, В22 (перечислены в порядке убывания силы ассоциации антигена А и В локусов с профессиональными заболеваниями легких)

При анализе результатов генотипирования HLA II класса установлено повышение носительства при изучаемой нозологии HLA-DRB1*04,*11, DQA1*0102, *0301, DQB1*0501, *0502 При этом частота встречаемости HLA-DRB1*04 составила 21,22 % (RR=5,84), DRB1*11 - 20,75 % (RR=2,23), DQA1*0102 - 42,27 % (RR=3,01), *0301 - 31,68 % (RR=5,39), *0401 - 6,91 % (RR=2,92), DQB 1*0501 - 23,02 % (RR=2,58), *0502 - 11,81 % (RR=2,10)

Отмечен высокий риск развития профессионального заболевания легких у носителей DQB1*0501 (RR=2,58) с наибольшим значением показателя EF=0,420 Также наиболее высокий риск развития болезни был присущ носителям DQA1*0301 (RR=5,39, EF=0,143) Но максимально высокие значения показателя этиологической фракции ассоциировались с DQA1*0102 (RR=3,01, EF=0,267) и, следовательно, эти аллели, присутствующие у данного индивидуума, значительно повышают риск развития профессиональной патологии легких

В качестве протектора с наименьшим риском развития заболевания в локусе DRB1 оказался ген DRB1*09 (0,86 %, RR=0,15, PF=0,046) Однако, ген DRB1*07 на уровне популяции имел наиболее значимый протективный эффект (PF=0,061), хотя его носительство у больных было снижено незначительно по сравнению с популяционным контролем (16,99 % и 11,86%)

Оценка иммунного статуса обследованных больных проведена с определением сывороточной концентрации цитокинов, гуморальных факторов (иммуноглобулинов классов А, М, G, общего иммуноглобулина Е) и параметров элиминационных механизмов (фагоцитарной активности лейкоцитов, уровня фибронектина, муцинового антигена 3EG5, циркулирующих иммунных комплексов, гемолитической активности комплемента, уровня лизоцима в сыворотке крови)

При исследовании иммунной системы у рабочих, контактирующих с высокими концентрациями фиброгенных промышленных аэрозолей, но без признаков поражения легких, выявлено незначительное снижение уровня активности комплемента и показателя фагоцитарной активности лейкоцитов, выраженное снижение уровня муцинового антигена до (1б,74±4,53) ед/мл (Р<0,01), умеренное повышение уровней фибронектина (516,4±34,9) нг/мл (Р<0,05), ^А и общего - (2,61±0,25) МЕ/мл и (175,4±12,98) г/л соответственно (Р<0,01). Содержание иммуноглобулинов классов М и в, активность лизоцима оставались в пределах нормы

У рабочих с хроническим пылевым бронхитом изменения в иммунном гомеостазе носили более выраженный характер Показатели активности лизоцима, гемолитической активности комплемента, фагоцитарная активность лейкоцитов были достоверно снижены (Р<0,01), возросло количество и в сыворотке крови по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе до (2,48±0,53) г/л и (23,34±3,45) г/л соответственно (Р<0,001) Уровень 1§А оставался в пределах нормы Отмечено снижение уровня фибронектина и повышение концентрации муцинового антигена (Р<0,05).

У больных с диагностированным силикотуберкулезом в иммунном статусе отмечались подобные изменения, но уровень находился выше нормы (3,89±0,39) г/л (Р<0,001)

Интерстициальная форма силикоза у рабочих сопровождалась резким повышением уровня фибронектина - (710,9+35,7) нг/мл (Р<0,001). Содержание иммуноглобулинов всех классов (кроме увеличения концентрации общего IgE в сыворотке крови) находилось в пределах нормы Активность лизоцима, комплемента, фагоцитарная активность лейкоцитов, концентрация муцинового антигена были статистически значимо снижены (Р<0,001).

Исследования состояния гуморальных факторов иммунитета и элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций у рабочих с пневмокониозом от действия малофиброгенной промышленной аэрозоли выявили изменение всех значений определяемых параметров, активность лизоцима, комплемента, фагоцитарная активность лейкоцитов, концентрация 1§М были статистически значимо снижены (Р<0,01), уровни фибронектина,

общего 1цЕ - резко повышены (Р<0,001), увеличена концентрация и (Р<0,01). Содержание муцинового антигена от нормы не отличалось

Проведенные исследования показали, что при -контакте с высокими концентрациями промышленных аэрозолей происходит активация местного иммунитета и факторов неспецифической защиты

При развитии клинических проявлений профессионального Легочного заболевания (хронический пылевой бронхит, силикоз, силикотуберкулез, пневмокониоз) происходит постепенное истощение элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций, активация гуморальных факторов (повышенные уровни иммуноглобулинов классов М и в у рабочих с хроническим пылевым бронхитом, силикотуберкулезом)

В ходе исследования нами получено повышение концентрации общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови практически у всех обследованных групп пациентов до величин, характерных для аллергических заболеваний кожи, бронхиальной астмы и грибковых поражений легких. Максимальное повышение значения отмечалось в третьей группе - у больных силщотуберкулезом до (549,8±20,7) МЕ/мл, в контрольной группе -(57,1±17,0) МЕ/мл Очевидно, это связано с распространением в последнее время в производственной среде промышленных аэрозолей сложного состава, обладающих раздражающим, токсическим и аллергическим действием Данный факт позволяет предположить, что общий ^Е, наряду с фибронектином и провоспалительными цитокинами, участвует в патогенезе пылевых заболеваний легких

Уровень фибронектина сыворотки крови был снижен при развитии инфекционных осложнений пылевых поражений легких (воспалительной форме хронического пылевого бронхита и силикотуберкулезе), и, наоборот, значительно в более высоких концентрациях по сравнению с контрольной группой этот показатель отмечен у обследованных лиц четвертой и пятой групп. Максимальные значения фибронектина выявлены при силикозе (710,9±35,7) нг/мл, что свидетельствует о значительной активности клеток -альвеолярных макрофагов, фибробластов, участвующих в иммунном воспалении, а также интенсивном фиброзообразовании в легочной ткани.

При исследовании провоспалительньгх цитокинов сыворотки крови у пациентов с профессиональными заболеваниями легких (Нылевой бронхит, пневмокониозы, силикотуберкулез) установлено в разной степени

20

повышение уровня всех исследуемых интерлейкияов (ИЛ-1а, ИЛ-1(3, ИЛ-8) и альфа-фактора некроза опухоли (ФНО-а) по сравнению с контрольной группой.

Отмечен одинаково высокий уровень ИЛ-1а во всех обследованных группах (Р<0,001), однако степень его повышения различна

Интерлейкин-ip, как доминирующая секреторная форма ИЛ-1 у человека, в плазме крови здорового человека составляет 0-50 пг/мл Этот показатель, в большей степени отражающий тяжесть воспалительного процесса, во всех группах оказался в пределах нормальных значений Однако, во второй, третьей и четвертой группах обследованных больных уровень ИЛ-ip, по сравнению с уровнем в контрольной группе статистически значимо повышался (Р<0,01), а у рабочих, контактирующих с высокими концентрациями фиброгенных промышленных аэрозолей без поражения легких (первая группа) значение этого показателя было снижено по сравнению с контролем

Концентрация ИЛ-8 оказалась незначительно повышенной в первой группе обследованных, а в третьей и четвертой группах степень ее повышения была существенно выше (Р<0,01) Отмечено небольшое повышение уровня этого цитокина в пятой группе (Р<0,05) В этой же группе больных выявлено снижение продукции ФНО-а по сравнению с контролем (Р<0,001) Во всех других группах выявлено повышение этого показателя, причем в большей степени в третьей и четвертой группах пациентов (Р<0,001).

Проведенный нами анализ динамики системного уровня комплекса провоспалительных цитокинов у обследованных лиц свидетельствует об активных иммунологических реакциях уже на ранних этапах силикотического процесса и доказывает, что развитие силикоза сопровождается различного рода иммунологическими изменениями как гуморального, так и клеточного (синтез цитокинов) иммунитета Нарастание уровня провоспалительных цитокинов идет параллельно с нарастанием тяжести патологического процесса

Таким образом, предложенный нами комплекс иммунологических и иммуногенетических методов целесообразно включать наряду с рентгенографией легких, оценкой функции внешнего дыхания с проведением проб с бронхолитиками в программу предварительных и периодических

21

медицинских осмотров для выявления индивидуальной чувствительности и прогностических рисков развития профессионального заболевания легких

Выводы

1 Сравнительный анализ полученных данных НЬА-типирования I класса здоровых доноров региона Среднего Поволжья выявил сходство антигенного спектра с популяциями Волго-Вятского и Уральского регионов Проведенная оценка антигенного состава в Самарской популяции показала снижение частоты встречаемости антигенов А1 , А2, 28, В8, В14, В18, В37, В38, В39 и увеличение - антигенов АЗ, А24, В7, В13 по сравнению с антигенным составом европейцев

2 Предрасположенность к развитию пылевого пневмофиброза ассоциируется с 0(1), АВ(ГУ) Предрасположенность к развитию профессиональных заболеваний легких ассоциируется с Шг-отрицателыюй принадлежностью Наиболее опасными в плане развития профессионального легочного фиброза являются НЬА-антигены, и соответственно гены, АЗ, А10, В 22, и, наоборот, устойчивость к действию промышленных аэрозолей ассоциируетсясВ12,В13, В35

3 Отдельно для каждого вида пылевой патологии легких выделены маркеры предрасположенности и устойчивости- хронический пылевой бронхит характеризуется Ш1(-)фактором, а так же повышенной частотой встречаемости НЬА-антигенов А10, Ву/4, развитие силикотуберкулеза ассоциируется с группой крови А(П), Ш1(-)фактором, НЬА-антигенами АЗ, В22, устойчивость к развитию силикотуберкулеза связана с Й1(+)фактором, НЬА-В12 и В35 При силикозе статистически значимо повышение встречаемости НЬА-антигена А28, снижение частоты НЬА-В12 В35, у больных пневмокониозом выявлена положительная корреляция с группой крови А2В(ГУ), КЬ(-)фактором и НЬА- антигенами А10,А28, В5, В22, В35

4 Для прогноза развития профессионального легочного фиброза определяющими являются специфичности НЬА-Б11В1*04, 11 и сцепленные с ними аллели В<ЗА1*0102, *0301, 0<ЗВ1*0501, *0502, наличие которых в генотипе увеличивает риск развития пневмокониозов Устойчивость к развитию пылевых заболеваний легких определяют специфичности НЬА-Б11В1*09, *07, НЛА-ОдВ 1*0201

5 Фибронектин, иммуноглобулин класса Е (1|§Е) и провоспалительные цитокины - интерлейкины -1а, -1|3, -8 (ИЛ-1а, ИЛ-1|3, ИЛ-8), а-фактор некроза опухоли (ФНО-а) участвуют в иммунном воспалении при пылевых заболеваниях легких. Нарушения гуморальных факторов иммунитета и элиминационных механизмов (фагоцитарной активности лейкоцитов и гемолитическая активность комплемента) в ходе иммунных реакций при пылевой патологии легких зависят от типа заболевания и определяют возможность развития инфекционных осложнений (силикотуберкулез)

Практические рекомендации

1 Предлагаемый комплекс иммунологических и иммуногенетических методов целесообразно включать в программу предварительных и периодических медицинских осмотров работающих людей для выявления индивидуальной чувствительности к промышленным аэрозолям и риска развития профессиональной патологии легких

2 Рекомендуется определение показателей 1уморальных факторов иммунитета, цитокинов и элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций у рабочих, контактирующих с высокими концентрациями промышленных аэрозолей, и больных с профессиональными заболеваниями легких для точной оценки уровня патологического процесса, эффективного профессионального отбора и определения риска развития инфекционных осложнений

3 При хроническом пылевом бронхите, пневмокониозах и силикотуберкулезе необходимо участие в диспансерном наблюдении пациентов врача аллерголога-иммунолога, с оценкой значимых показателей иммунного статуса, уровней цитокинов и коррекцией лечебной программы с применением иммунотропных препаратов

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Жестков А В., Косов АИ, Кулагина В.В, Игнатова НК Иммунологические аспекты заболеваний легких // Сборник статей научно-практической конференции Приволжского федерального округа «Дни иммунологии и аллергологии в Самаре» - Самара, 2004. - С 74-81

2 Жестков А В, Кулагина В.В., Косов А И, Игнатова Н К Иммуногенетический скрининг и состояние иммунного гомеостаза при

заболеваниях легких // Объединенный иммунологический форум -Екатеринбург - 2004 - С. 82

3 Жестков А В , Косов А И., Кулагина В В , Игнатова Н К, Кудинова Е В Применение кластерного анализа для оценки показателей иммунного статуса при заболеваниях легких // Там же — С 94

4 Косов А А, Жестков А В, Игнатова Н К, Кулагина В В Иммуногенетический скрининг при патологии легких // Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии Материалы Российской научно-практической конференции -Санкт-Петербург -2004 -С 146-147

5 Жестков А В , Косов А И., Кулагина В В , Игнатова Н К Иммунный гомеостаз при патологии легких // Актуальные вопросы современной клинической медицины Материалы областной научно-практической конференции «XIV научные чтения памяти академика НН Бурденко» -Пенза, 2004. - С. 104-105

6 Жестков А В , Косов А И, Игнатова Н.К Иммунологические факторы при профессиональных заболеваниях легких // Труды X Всероссийского конгресса «Эколошя и здоровье человека» -Самара, 2005 —С 107-109

7 Жестков А В, Косов А И, Игнатова Н К Иммунологические и иммуногенетические аспекты профессиональных заболеваний легких // Гигиенические проблемы оптимизации окружающей среды и охраны здоровья населения Научные труды ФНЦГ им Эрисмана Вып 17 - Самара, 2006 -С 162-165

8 Косов А И, Игнатова Н К, Трубинова Н А Антигенные системы крови и их значение в клинической практике методическое пособие - Самара, 2006 - 24 с

9 Жестков A.B., Косов А.И., Игнатова Н К, Абдалкин М Е, Исаева С Ю., Письменный А К Иммуногенетические факторы при профессиональных заболеваниях легких // Уральский медицинский журнал — 2007 - № 8 - С 34-37

ИГНАТОВА НАТАЛИЯ КОНСТАНТИНОВНА

ОСОБЕННОСТИ СПЕКТРА НЬА-АНТИГЕНОВ IИ П КЛАССА ПРИ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЛЕГКИХ

14.00 36 — «Аллергология и иммунология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано ь печать 20 09 2007 Формат 60x90/1б Бумага писчая. Гарнитура Times New Roman Тираж 100 экз. Отпечатано в полиграфической фирме « Таймер - Самара» г Самара, ул Советской Армии, 99а

Значительное распространение заболеваний легких специфической и неспецифической этиологии, деструктивных форм патологии, утяжеление течения хронических профессиональных заболеваний легких приводит к снижению качества жизни пациентов, увеличению числа инвалидов с брон-холегочной патологией и в связи с этим к значительным экономическим потерям [Косарев В.В., 1995; Измеров Н.Ф., 1998; Тарасова JT.A. и др., 1998; Палеев Н.Р., 2000; Чучалин А.Г., 2004].

Установление диагноза происходит чаще всего со значительным опозданием, так как многочисленными морфологическими исследованиями доказано опережающее развитие пылевого фиброза легких по сравнению с рентгенологическими изменениями [Донец И.К., 1986; Белецкий B.C., 1988; Жестков А.В., 2000;; Echert Н., 1987].

Значительное место в общей структуре пульмонологической заболеваемости занимают пылевые болезни легких [Величковский Б.Т., 1991; Чучалин А. Г., 1993; Агаджанян Н.А. и др., 1999; Frumann G., 1986].

Вопросам своевременной диагностики и прогнозирования течения легочных заболеваний уделяется значительное внимание [Милишникова И.И. и др., 1990; Панкова В.Б. и др., 1992; Палеев Н.Р., 2000; Чучалин А.Г., 2006; Siafakas N.M.,Vermeire P., 1995]. В связи с этим оправдано применение новых технологий в диагностике поражений органов дыхания профессиональной этиологии [Артамонова О.Г. и др., 1995; Sheppard D. et al.,1986].

В последнее время значительный практический интерес представляют данные о связи генетических маркеров главного комплекса гистосовмести-мости с некоторыми патологическими процессами [Хаитов P.M. и др., 2000; Эюбова A.A. и др., 2004].

Одним из ключевых аспектов в развитии заболеваний легких является состояние иммунного гомеостаза. Однако, определению факторов, которые участвуют в иммунном воспалении при пневмокониозах - интерлейкинов -la, -lß, -8 (ИЛ- 1а, ИЛ-lß, ИЛ-8), альфа-фактора некроза опухоли (ФНО-а), общего иммуноглобулина класса Е (IgE) и фибронектина плазмы у больных с пылевой патологией легких посвящены единичные работы [Жестков A.B., 1995; Авдеева O.E., 1998].

В комплексное исследование иммунного статуса таких больных входит и изучение тканевых антигенов (системы HLA). При определенных условиях существует взаимосвязь между HLA-фенотипом и проявлениями болезни. Гены, детерминирующие HLA-антигены, одновременно являются генами, контролирующими иммунный ответ, поскольку при связывании чужеродных антигенов HLA-молекулы осуществляют взаимодействие между антигенами и Т-клетками [Яздовский В.В., 1991; Хаитов P.M., 1999].

Между некоторыми HLA-молекулами и рядом заболеваний установлена статистически достоверная взаимосвязь [DaltonT.A., Bennet J.C., 1992].

Это позволяет прогнозировать распространение той или иной патологии, диагностировать, персонифицировать заболевание [Шабалин В.Н., 1988; Яздовский В.В., 1991; Потемкина Е.Е., 2003].

Место иммуногенетических методов в прогнозировании течения пылевых заболеваний легких нуждается в уточнении.

В настоящее время недостаточно исследовано диагностическое значение иммуногенетических тестов при пылевых заболеваниях в целом и в зависимости от фиброгенности этиологического фактора.

Определение индивидуальной чувствительности к промышленным аэ розолям представляет собой актуальную задачу и позволяет выделить маркеры для профессионального отбора, прогнозирования развития профессиональных заболеваний органов дыхания.

Цель исследования

Изучение спектра антигенов НЬА-системы I и II класса, показателей иммунного статуса для ранней диагностики и прогнозирования течения заболеваний легких профессиональной этиологии.

Задачи исследования

1 Провести НЬА-типирование здоровых доноров региона Среднего Поволжья и проанализировать полученные данные в сравнении с другими по" пуляциями.

2 Провести иммуногенетические исследования и проанализировать данные тканевого типирования больных с профессиональными заболеваниями легких с целью выявления маркеров высокого риска развития пневмофибро-за.

3 Выявить НЬА-ассоциированные маркеры индивидуальной предрасположенности и резистентности к различным формам профессиональных заболеваний органов дыхания.

4 Изучить НЬА-генотип II класса больных с пылевыми заболеваниями легких с целыо выявления маркеров тяжелого неблагоприятного течения.

5 Определить значения показателей элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций, гуморальных факторов иммунитета и уровень провоспа-лительных цитокинов сыворотки крови у лиц, контактирующих с промышленными аэрозолями, и у пациентов с профессиональными заболеваниями легких (пылевой бронхит, пневмокониозы, силикотуберкулез)

Научная новизна

Впервые обобщены данные по спектру НЬА-специфичностей I и II класса (локусов А, В, БЯ, БС^А и ОрВ) в русской популяции региона Среднего Поволжья.

Выявлены иммуногенетические критерии предрасположенности к легочной патологии профессионального генеза, описаны особенности НЬА-генотипа у пациентов с заболеваниями легких профессиональной этиологии и здоровых доноров; выявлены НЬА-маркеры генетической резистентности к патологии легких.

Впервые разработаны иммунологические критерии чувствительности к промышленным аэрозолям, отобраны биомаркеры для скрининговых исследований при профессиональном отборе на работу в условиях контакта с промышленными аэрозолями.

Научно-нрактическая значимость работы

Установлен определенный спектр НЬА-антигенов при заболеваниях легких профессиональной этиологии, который служит основанием для выделения групп риска по развитию данной патологии, а также по неблагоприятному течению с развитием инфекционных осложнений (силикотуберкулез).

Полученные результаты определили место и значение исследований показателей гуморальных факторов иммунитета и элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций, сывороточного уровня провоспалитель-ных цитокинов, частоты встречаемости эритроцитарных и лейкоцитарных антигенов в диагностике пылевого воздействия на органы дыхания.

Безопасность и доступность иммунологических и иммуногенетических методов позволяют использовать их в комплексе тестов для профессионального отбора на работы, связанные с интенсивным воздействием промышленных аэрозолей.

Внедрение результатов исследования в практику

Разработанный комплект лабораторных исследований у больных с пылевыми заболеваниями легких и лиц, контактирующих с высокими концентрациями промышленных аэрозолей, используется на ГУЗ «Самарская областная станция переливания крови», в отделении аллергологии и пульмонологии клиник Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации.

Ряд положений теоретического и практического характера, сформулированных в диссертации, включены в курс лекций по клинической иммунологии на кафедре общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии в ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Росздрава для студентов и слушателей последипломного образования.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Иммуногенетический скрининг индивидуальной чувствительности респираторного тракта к действию промышленных аэрозолей различной степени фиброгенности является моделью для разработки и внедрения медико-генетической концепции прогнозирования развития и первичной профилактики профессиональных заболеваний органов дыхания.

2 Использование комплекса иммунологических и иммуногенетических методов при профессиональном отборе и среди рабочих со стажем способствует повышению качества диагностики пылевых заболеваний легких и определению индивидуальной предрасположенности или устойчивости к действию промышленных аэрозолей.

3 Результаты индикации спектра антигенов НЬА-системы I и II класса у здоровых жителей Самарской области могут быть использованы при проведении исследований взаимосвязи заболеваний человека с наличием определенных НЬА-антигенов.

4 Провоспалительные цитокины - интерлейкины-1а, -ф, -8 (ИЛ-1а, ИЛ-1(3, ИЛ-8), а-фактор некроза опухоли (ФНО-а), фибронектин и иммуноглобулин класса Е (1§Е) участвуют в иммунопатогенезе при профессиональных заболеваниях легких.

Апробация работы

Материалы и основные положения диссертации доложены и обсуждались на научно-практической конференции Приволжского федерального округа «Дни иммунологии и аллергологии в Самаре» (Самара, 2004), объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004), Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и транс-фузиологии» (Санкт-Петербург, 2004). Автором диссертации сделаны доклады на X Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2005), заседании секции пульмонологов Самарского областного научного общества терапевтов (Самара, 2007).

Диссертация апробирована на межкафедральном заседании Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава (протокол от 15 мая 2007 года №8) и заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан (протокол от 14 июня 2007 года № 63).

Публикации

По теме проведенных исследований опубликовано девять научных работ, в том числе одна в издании, утвержденном в перечне ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 133 страницах, содержит 21 таблицу, 4 рисунка. Она состоит из введения, обзора литературы (одна глава), собствен

Выводы

1 Сравнительный анализ полученных данных НЬА-типирования I класса здоровых доноров региона Среднего Поволжья выявил сходство антигенного спектра с популяциями Волго-Вятского и Уральского регионов. Проведенная оценка антигенного состава в самарской популяции показала снижение частоты встречаемости антигенов А1, А2, А28, В8, В14, В18, В37, В38, В39 и увеличение - антигенов АЗ, А24, В7, В13 по сравнению с антигенным составом европейцев в целом.

2 Предрасположенность к развитию профессиональных заболеваний легких ассоциируется с 0(1), АВ(1У) группами и с Шг-отрицательной принадлежностью. Наиболее опасными в плане развития профессионального легочного фиброза являются НЬА-антигены АЗ, А10, В 22; и, наоборот, устойчивость к действию промышленных аэрозолей ассоциируется с антигенами В12, В13, В35.

3 Отдельно для каждого вида пылевой патологии легких выделены маркеры предрасположенности и устойчивости: хронический пылевой бронхит характеризуется Ш1(-) - фактором, а также повышенной частотой встречаемости НЬА-антигенов А10, В\у4; развитие силикотуберкулеза ассоциируется с группой крови А(П), Ш1(-) - фактором, НЬА-антигенами АЗ, В22; устойчивость к развитию силикотуберкулеза связана с Ш1(+)фактором, НЬА-В12 и В35. При силикозе статистически значимо повышение встречаемости НЬА-антигена А28, снижение частоты НЬА-В12, В35; у больных пневмокониозом от действия малофиброгенной пыли выявлена положительная корреляция с группой крови А2В(1У), Ш1(-) - фактором и НЬА- антигенами А10,А28, В5, В22, В35.

4 Для прогноза развития профессионального легочного фиброза определяющими являются специфичности НЬА-011В1*04, 11 и сцепленные с ними аллели ЭС)А1*0102, *0301; БС)В 1*0501, *0502, наличие которых в генотипе увеличивает риск развития пневмокониозов. Устойчивость к развитию пылевых заболеваний легких определяют специфичности НЬА-011В1*09, *07, НЬА-БдВ 1*0201.

5 Фибронектин, иммуноглобулин Е и провоспалительные цитокины - ин-терлейкины -1а, -1(3, -8, а-фактор некроза опухоли участвуют в иммунном воспалении при пылевых заболеваниях легких. Нарушения гуморальных факторов иммунитета и элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций (фагоцитарной активности лейкоцитов и гемолитической активности комплемента) при пылевой патологии легких зависят от типа заболевания и определяют возможность развития инфекционных осложнений (силикоту-беркулез).

Практические рекомендации

1 Предлагаемый комплекс иммунологических и иммуногенетических методов целесообразно включать в программу предварительных и периодических медицинских осмотров работающих людей для выявления индивидуальной чувствительности к промышленным аэрозолям и риска развития профессиональной патологии легких.

2 Рекомендуется определение значений показателей гуморальных факторов иммунитета, цитокинов и элиминационных механизмов в ходе иммунных реакций у рабочих, контактирующих с высокими концентрациями промышленных аэрозолей, и у больных с профессиональными заболеваниями легких для точной оценки патологического процесса, эффективного профессионального отбора и определения риска развития инфекционных осложнений.

3 При хроническом пылевом бронхите, пневмокониозах и силикотубер-кулезе необходимо участие в диспансерном наблюдении пациентов врача аллерголога-иммунолога с оценкой иммунного статуса, уровней цитокинов и коррекцией лечебной программы с применением иммунотропных препаратов.