Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Нейропротективное действие экстракта соплодий хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.)

На правах рукописи

НЕЙРОПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭКСТРАКТА СОПЛОДИЙ ХМЕЛЯ ОБЫКНОВЕННОГО (HUMUS LUPULUS L.)

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 1 ДЕК 2011

Улан-Удэ, 2011

005004243

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук

Ажунова Татьяна Александровна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Жамсаранова Сэсэгма Дашиевна

доктор медицинских наук

Цыбиков Еши Нянюевич

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт

лекарственных и ароматических растений РАСХН

Защита состоится 22 декабря 2011 года в 12 00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского Отделения РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяно-вой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан 18 ноября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

В.Б. Хобракова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Глобальные эпидемиологические исследования, проводимые ВОЗ, и исследования в отдельных странах показывают, что рост темпа жизни, количества коммуникационных связей, социально-экономического напряжения в обществе, урбанизация и научно-технический прогресс приводят к увеличению численности стрессорных влияний и, как следствие, развитию невротических и соматоформных расстройств (Н.Г. Булдакова, 2006; Т.Г. Вознесенская 2006; Д.Ю. Вельтишев, 2009; R.B. Weisberg, 2009). Также в последние годы наблюдается значительная тенденция роста психических расстройств при соматических заболеваниях (Ю.А. Александровский, 2007; М.Ю. Дробижев, A.A. Овчинников, 2010; И.А. Хейфец и др., 2007; G. Chouinard, 2006).

В связи с большой распространенностью нервно-психических заболеваний актуальным является разработка лекарственных средств, направленных на коррекцию функциональных нарушений нервной системы. На сегодняшний день в медикаментозном лечении неврозов, депрессии, синдрома хронической усталости и тревоги применяются средства с анксиолитическим действием. При этом большинство синтетических анксиолитиков вызывает побочные действия, что в, конечном итоге, нивелирует их терапевтическую эффективность. Средства растительного происхождения, имеющие значительно меньше побочных эффектов, могут рассматриваться в качестве альтернативной терапии или использоваться в комплексном лечении данных патологических состояний (О.В. Воробьева, Е.А. Карачкова, 2007; В.Н. Кузнецов, 2008; Е. Behar et al., 2009).

Перспективным растением в терапии тревожных расстройств является хмель обыкновенный (Humus lupulus L.). Соплодия хмеля в России разрешены к использованию в качестве анальгезирующего, противоязвенного, седативного и снотворного средства. Он входит в состав таких препаратов, как уролесан, валокордин и валоседан, а также в состав различных сборов (JI.M. Беленовская, АЛ. Буданцев, 2008; М.Д. Машковский, 2010). В Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН разработан сухой экстракт соплодий хмеля обыкновенного.

Целью работы явилось определение спектра нейропротективной активности и фармакотерапевтической эффективности экстракта соплодий хмеля обыкновенного (ЭСХО) при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

- определить спектр нейропротективной активности ЭСХО;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность ЭСХО при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами (хронический эмоциональный стресс, депривация сна и хроническая алкогольная интоксикация);

- выявить основные механизмы нейропротективного действия ЭСХО.

Научная новизна. Работа представляет собой определение спектра нейропротективной активности ЭСХО и оценка его фармакотерапевтической эффек-

з

тивности при лечении и профилактике тревожных расстройств. Установлено, что исследуемое средство обладает анксиолитическим, антидепрессивным, ноо-тропным, антиагрессивным и умеренным седативным влиянием. Выявлено, что ЭСХО обеспечивает выраженную фармакотерапевтическую эффективность при хроническом эмоциональном стрессе, депривации сна и алкогольной интоксикации, сопровождающихся тревожными расстройствами, нормализуя у животных поведенческие реакции, оказывая антиамнестическое влияние, уменьшая выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, а также количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий головного мозга. Установлена мембраностабилизирующая, антигипок-сическая, противосудорожная и антистрессорная активность ЭСХО. Основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние ЭСХО, является антиоксидантное, антигипоксическое действие и стимуляция ГАМК-ергической нейропередачи.

Практическая значимость. Результаты проведенных экспериментальных исследований позволяют рекомендовать ЭСХО для клинических исследований с целью его применения в качестве эффективного средства в неврологической практике для лечения и профилактики тревожных расстройств. Полученные в работе данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета. Подана заявка на предполагаемое изобретение «Способ получения лекарственного средства, обладающего анксиолитическим действием» № 2011114947/15(022219), приоритет от 15.04.2011.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экстракт из соплодий хмеля обыкновенного обладает анксиолитической, антидепрессивной, антиагрессивной, противосудорожной, ноотропной и седа-тивной активностью.

2. ЭСХО обеспечивает выраженную фармакотерапевтическую эффективность при хронических стресс-индуцированных состояниях: снижает чувства страха и тревоги, улучшает когнитивные функции, оказывает антикоагулянтное влияние, уменьшает выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, а также количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий головного мозга.

3. Курсовое введение ЭСХО на фоне хронической алкогольной интоксикации нормализует поведенческие реакции, оказывает антиамнестическое влияние и увеличивает количество функционально активных нейронов в структурах головного мозга.

4. Основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние ЭСХО, является антиоксидантное, антигипоксическое действие и стимуляция ГАМК-ергической нейропередачи.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: 4th International Symposium on Traditional medicine and innovative drugs (Erdos, 2009); региональной конференции, посвя-

щенной 85-летию Республиканской клинической больницы им. Семашко (Улан-Удэ, 2009); Всероссийской конференции «Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина» (Улан-Удэ, 2010); III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2010); Всероссийской конференции молодых ученых «Биоразнообразие: глобальные и региональные процессы» (Улан-Удэ, 2010); II Международной научной конференции «Разнообразие почв и био-ты Северной и Центральной Азии», посвященной 30-летию ИОЭБ СО РАН (Улан-Удэ, 2011); 5й1 International Symposium on Present Situation and Future Development of Mongolian Traditional Medicine (Ulaanbaatar, 2011).

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация» на 2006-2011 гг., утвержденным Президиумом СО РАН.

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 15 научных работ, из них 7 в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 138 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 223 источник, из которых - 73 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 26 таблицами, 17 рисунками и 4 микрофотографиями.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 350 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой тела 180-200 г. Животные содержались в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Протокол исследования согласован с этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол №3 от 03.02.2009).

Сухой экстракт соплодий хмеля обыкновенного (Humus lupulus L.) (ЭСХО) был получен в ИОЭБ СО РАН путем последовательной экстракции разными типами экстрагентов. ЭСХО вводили животным внутрижелудочно через зонд в дозах 100, 200 и 300 мг/кг один раз в сутки. В качестве препарата сравнения использовали аптечный валерианы экстракт (ВЭ) в изоэффекгивной дозе 120 мг/кг. Животные контрольной группы получали воду очищенную в соответствующем объеме по аналогичным схемам введения ЭСХО.

Определение острой токсичности ЭСХО проводили согласно Методическим рекомендациям (Руководство..., 2005). Класс токсичности определяли по классификации К.К. Сидорова (1973).

Анксиолитическое и седативное действие ЭСХО изучали согласно Методическим указаниям (Т.А. Воронина, С.Б. Середенин, 2005) в следующих тестах: конфликтная ситуация по Vogel, «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), «светло/темная» камера, метод «зоосоциального взаимодействия», 24-часовой иммобилизационный стресс, «открытое поле», потенцирование снотворного действия тиопентала натрия и пролонгирование кетаминового сна. Антидепрессивное действие ЭСХО исследовали на двух моделях: тест «поведенческого отчаяния» по Порсолту и тест «подвешивание за хвост». Антиагрессивную активность ЭСХО определяли по порогу агрессивной реакции крыс на фоне усиления стимулирующего тока (Т.А. Воронина, С.Б. Середенин, 2005).

Ноотропное действие ЭСХО исследовали согласно Методическим рекомендациям (Т.А. Воронина, Р.У. Островская, 2005) в методах: условная реакция пассивного избегания (УРПИ) и активного избегания (УРАИ), а также условного рефлекса с положительным подкреплением в Т-образном лабиринте. Влияние ЭСХО на нарушения когнитивных функций у белых крыс изучали по сохранности УРПИ в условиях моделирования амнезии, вызванной острой нормо-барической гипоксией с гиперкапнией.

Миорелаксантное действие ЭСХО исследовали согласно Методическим рекомендациям (Т.А. Воронина, С.Б. Середенин, 2005) в тестах «вращающийся горизонтальный стержень» и «горизонтальная перекладина».

На моделях стрихниновых, коразоловых и камфорных судорог изучали про-тивосудорожное действие ЭСХО (Т.А. Воронина, С.Б. Середенин, 2005).

Водно-иммерсионный стресс воспроизводили помещением крыс в пластиковые цилиндры с погружением их в воду (20-22° С) в течение 4 суток (И.А. Захарова, 2009).

Стресс по Жуве создавали депривацией парадоксальной фазы сна в течение 72 часов (Т.А. Воронина, Р.У. Островская, 2005).

Алкогольную интоксикацию у лабораторных животных вызывали внутри-желудочным введением крысам 40 % этанола в объеме 9 мл/кг массы животного в течение 45 дней 1 раз в сутки (Т.А. Воронина, Р.У. Островская, 2005).

Для оценки антистрессорной активности определяли выраженность триады Селье: гипертрофию надпочечников, инволюцию иммунокомпетентных органов и появление деструктивных повреждений в слизистой оболочке желудка. Для каждого вида повреждений подсчитывали «индекс Паулса» (МЛ. Амосова, 1998).

Дня оценки влияния ЭСХО на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли содержание малонового диальдегида (МДА) в гомогенате мозга (Ю.В. Владимиров, А.И. Арчаков, 1972) и в сыворотке крови (И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977). Состояние ангиоксидантной системы организма оценивали по активности каталазы в гомогенате головного мозга и в сыворотке крови (М.А. Королюк и др., 1988), активности супероксиддисмутазы (СОД) в плазме крови (И. Чевари и др., 1985), а также по содержанию восстановленного глутатиона в крови (Т. Anderson, 1991).

Для патоморфологических исследований парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином и крезилвиолетом по Нисслю (Микроскопическая..., 1996). Для определения степени повреждения структур головного мозга проводили морфометрический анализ клеточного состава III-V слоев коры головного мозга и гиппокампа (Н.И. Артюхина, 2009).

Мембраностабилизирующую активность ЭСХО определяли in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов донорской крови (И.Е. Ковалев и др., 1986).

Антигипоксическое действие ЭСХО исследовали с использованием 3 моделей: острой нормобарической (Л.Д. Лукьянова, 1989), острой гемической (Ю.Ф. Костюченко, Н.Ф. Фаранщук, 1982) и острой гистотоксической гипоксии (А.П. Караев и др., 1989).

Влияние ЭСХО на ГАМК-ергическую систему исследовали с помощью метода конфликтной ситуации по Vogel. С целью блокады ГАМКА-рецептора использовали - бикукуллин (Sigma, США) в дозе 1,0 мг/кг внутрибрюшинно, а для блокады хлорного канала - пикротоксин (Sigma, США) в дозе 1,0 мг/кг внутрибрюшинно (Т.А. Воронина, 2003).

Результаты исследований статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (т). Степень достоверности результатов исследований (Р) оценивали с помощью непараметрического критерия Манна - Уитни. Различие между данными контроля и опыта считали достоверным при вероятности 95% (Р < 0,05) (В.И. Сер-гиенко, И.Б. Бондарева, 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение острой токсичности ЭСХО проводили на крысах обоего пола линии Wistar при внутрибрюшинном и внутрижелудочном однократном введении экстракта. В результате проведенных исследований установлено, что при однократном внутрибрюшинном введении ЭСХО DL50 составляла 3200 мг/кг. При внутрижелудочном введении высоких доз ЭСХО (от 2000 мг/кг до 5000 мг/кг) в течение первых 2 суток у животных наблюдались признаки общей интоксикации в виде гиподинамии, потери аппетита, учащения дыхания, при этом гибели животных не наблюдалось в течение 14 суток наблюдения. Таким образом, полученные данные позволяют отнести ЭСХО по классификации К.К. Сидорова (1976) к группе малотоксичных веществ.

Исследование спектра нейропротективной активности экстракта из соплодий хмеля обыкновенного

Результаты исследований показали (табл. 1), что курсовое введение животным ЭСХО в дозах 100, 200 и 300 мг/кг устраняет чувства тревоги и страха в методике конфликтной ситуации по Vogel, увеличивая число наказуемых взятий воды в 4,3; 5,8 и 7,0 раза соответственно по сравнению с таковым показателем у крыс контрольной группы. При этом введение ЭСХО в дозе 300 мг/кг ока-

зывает более выраженное анксиолитическое действие по сравнению с таковым у препарата сравнения - ВЭ.

Установлено, что курсовое введение животным ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг и ВЭ подавляет у крыс чувства страха открытого пространства в тесте ПКЛ (табл. 2), в результате чего количество заходов в открытые рукава установки у животных данных опытных групп возрастает в 1,6; 1,4 и 1,9 раза и время пребывания в них увеличивается в среднем в 1,5 раза по сравнению с таковыми показателями у крыс контрольной группы.

Таблица 1

Группы животных Количество наказуемых взятий воды из поилки

Контрольная (Н20), п=9 1,0 ±0,3

Опытная 1 (ЭСХО, 100 мг/кг), п=9 4,3 ± 0,8*

Опытная 2 (ЭСХО, 200 мг/кг), п=9 5,8 ±0,5*

Опытная 3 (ЭСХО, 300 мг/кг), п=9 7,0 ± 1,3*

Опытная 4 (ВЭ, 120 мг/кг), п=9 5,6 ± 1,5*

Примечание: здесь и далее * - значения значимы по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р < 0,05; п - количество животных в группе.

Таблица 2

Влияние ЭСХО на поведение белых крыс в приподнятом крестообразном _лабиринте__

Показатели Группы животных

Контрольная (Н20), п=9 Опытная 1 (ЭСХО, 100 мг/кг), п=9 Опытная 2 (ЭСХО, 200 мг/кг), п=9 Опытная 3 (ЭСХО, ЗООмг/кг), п=9 Опытная 4 (ВЭ, 120 мг/кг), п=9

Количество заходов в рукава

закрытый 2,3±0,4 2,3±0,7 5,0±0,4* 4,9±0,3* 3,9±0,4*

открытый 1,4±0,1 1,6±0,1 2,3±0,3* 2,0±0,3 2,6±0,5*

Время пребывания в рукавах, с

закрытый 518,0±40,3 500,0±39,2 471,0±22,4 460,9±33,3 475,0±30,7

открытый 57,1±18,2 74,3±36,4 103,0±29,2 110,0±19,9* 98,1±23,5

Результаты тестирования животных в темной/светлой камере показали, что курсовое введение крысам ЭСХО в дозах 100, 200 и 300 мг/кг увеличивает количество переходов между отсеками в 2,6; 3,3 и 3,5 раза и повышает время пребывания животных в светлом отсеке установки в 2,9; 3,5 и 2,5 раза по срав-

нению с таковыми показателями у животных контрольной группы (табл. 3). ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг в данном эксперименте оказывает более выраженное анксиолитическое действие по сравнению с таковым у ВЭ.

Курсовое введение животным ЭСХО в исследуемых дозах увеличивает длительность социальных контактов в тесте «зоосоциальная активность» в среднем в 1,5 раза по сравнению с таковой у животных контрольной группы, что также подтверждает наличие у фитоэкстракта анксиолитических свойств.

Таблица 3

Влияние ЭСХО на поведение белых крыс в темной/светлой камере

Группы животных Показатели

Количество переходов Время пребывания в светлом отсеке, с

Контрольная (Н20), п=9 1,0±0,0 21,0 ±5,5

Опытная 1 (ЭСХО, 100 мг/кг), п=9 2,6±0,7* 60,9±18,5*

Опытная 2 (ЭСХО, 200 мг/кг), п=9 3,3±0,8* 73,0±18,9*

Опытная 3 (ЭСХО, 300 мг/кг), п=9 3,5±0,8 * 53,6± 14,0*

Опытная 4 (ВЭ, 120 мг/кг), п=9 2,5±0,5 56,2±22,1

На фоне иммобилизационного стресса ЭСХО во всех исследуемых дозах оказывал стресспротективное действие, уменьшая выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных: относительная масса надпочечников снижалась на 18, 22 и 25 %, относительная масса тимуса увеличивалась на 17, 27 и 39 % и относительная масса селезенки - на 19,27 и 38 % соответственно по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. Наряду с этим, превентивное введение крысам фитоэкстракта оказывает выраженное гастропротективное действие, задерживая развитие глубоких деструк-ций в слизистой оболочке желудка.

Как известно, одним из основных терапевтических свойств хмеля являются его седативное и снотворное действие. Так, по данным литературы (H. Schiller et al., 2006), экспериментально подтверждено седативное действие этанольного и С02-экстрактов соплодий, которые понижают спонтанную двигательную активность экспериментальных животных, увеличивают время сна, вызванного кетамином, и понижают температуру тела.

Результаты исследований показали, что введение крысам ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг снижает уровень тревожности, ослабляет пассивно-оборонительную реакцию и повышает ориентировочно-исследовательское поведение в тесте «открытое поле». Введение животных ЭСХО в дозах 100 и 200 мг/кг не оказывает влияния на потенцирование и пролонгирование наркотического сна. Исследуемый экстракт в дозе 300 мг/кг увеличивает продолжительность кетами-нового сна на 21 % по сравнению с контролем.

Анксиолитическое и седативное действие ЭСХО обусловлено наличием р-кислот и эфирного масла. Так, экспериментально доказано седативное действие

ß-кислот и 2-метил-3-бутен-2-ола - одного из компонентов эфирного масла (R. Hansel et al., 1980; R. Wohlfart et al.,1983; H. Schiller et al., 2006).

Наряду с анксиолитическими свойствами ЭСХО в дозах 100, 200 и 300 мг/кг обладает антидепрессивной активностью, снижая время иммобилизации животных в методике «поведенческого отчаяния» по Порсолту на 20, 26 и 32 % и в тесте «подвешивание за хвост» - в 1,3; 1,8 и 1,6 раза соответственно по сравнению с данными у крыс контрольной группы. В литературе имеются сведения, что у фракции соплодий хмеля, содержащей а-кислоты, выявлено в эксперименте антидепрессивное действие (К. Lee et al., 1993; P. Zanoli et al., 2005;2007). Антидепрессивное влияние ЭСХО сопоставимо с таковым у ВЭ.

Известно, что большинство анксиолитиков обладают способностью уменьшать проявления агрессивного поведения животных. Результаты исследований показали, что введение ЭСХО во всех исследуемых дозах оказывает антиагрессивное действие, которое наиболее выражено при введении животным исследуемого средства в дозе 300 мг/кг: порог возникновения агрессивной реакции увеличивается в 2,1 раза и количество схваток между животными снижается в 2,0 раза по сравнению с данными у контрольных животных.

При изучении ноотропных свойств ЭСХО было выявлено, что курсовое введение животным фитоэкстракта вызывает у них снижение пассивно-оборонительной реакции, как в тесте «открытое поле», так и в Т-образном лабиринте и, как следствие, повышение поисково-исследовательской активности и увеличение скорости выработки рефлекса с положительным пищевым подкреплением. Так, животные, получавшие исследуемый экстракт в дозах 200 и 300 мг/кг, на 3 сутки тестирования достигали критерия обучения. При этом на фоне введения ЭСХО в дозе 200 мг/кг на 3 сутки опыта у крыс отсутствовали заходы в неподкрепляемый рукав лабиринта, что свидетельствует о выработке пищедо-бывающего навыка у 100 % животных, тогда как выработка рефлекса у животных других опытных групп наблюдалась только на 4 сутки эксперимента, а у крыс контрольной группы пищевой рефлекс отмечался лишь у 80 % животных на 5 сутки тестирования.

В тесте УРПИ курсовое введение животным ЭСХО в дозе 200 мг/кг стимулирует когнитивные функции у крыс, ускоряя выработку условного рефлекса и вызывая сохранность памятного следа: латентный период захода в темный отсек установки через 24 часа и 7 суток на 29 и 71 % соответственно выше такового показателя у крыс контрольной группы.

При выработке рефлекса активного избегания на условный раздражитель — звук установлено, что у белых крыс, получавших ЭСХО в дозах 100, 200 и 300 мг/кг, происходит более быстрое формирование условной реакции по сравнению с контролем. Так, введение животным ЭСХО в дозах 100 и 300 мг/кг снижает время выполнения реакции в 1,9 раза и количество проб, затраченных на обучение, - на 22 и 28 % соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы. Введение животным ЭСХО в дозе 200 мг/кг вызывает значительное сокращение времени выполнения реакции и количества проб, затра-

ценных на обучение, по сравнению с таковыми у животных, как контрольной группы, так и групп, получавших ЭСХО в дозах 100 и 300 мг/кг и ВЭ в дозе 120 мг/кг. Так, время реакции снижается в 2,2 раза, количество проб - на 34 % по

сравнению с контролем.

Известно, что высокой антиамнестической активностью ноотропы обладают в условиях амнезии, вызванной гипоксией (Т.А. Воронина, 2009). Установлено, что ЭСХО в условиях нормобарической гипоксии с гиперкапнией обладает ан-тиамнестическим эффектом, повышая когнитивные функции у крыс, что проявляется в выработке условного рефлекса и сохранности памятного следа на протяжении всех сроков эксперимента по сравнению с контролем. Так, введение животным ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг повышает длительность латентного периода захода в темный отсек установки через 1 час, 24 часа и 7 суток в 1,3; 1,5 и 1,7 раза соответственно, по сравнению с таковой у животных контрольной группы.

Противосудорожная активность ЭСХО показана на моделях камфорных, ко-разоловых и стрихниновых судорог. На фоне введения животным ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг время наступления стрихниновых судорог увеличивается в 1,8 и 1,5 раза, длительность судорожного периода сокращается на 22 и 19 % соответственно, а общая продолжительность жизни животных повышается в 2,2 раза по сравнению с показателями у животных контрольной группы. На модели коразоловых судорог выявлено, что наиболее выраженное противосудорожное действие оказывает ЭСХО в дозе 300 мг/кг: время наступления судорожного периода удлиняется на 22 %, время жизни - в 2,3 раза, продолжительность коразоловых судорог укорачивается в среднем на 11 % по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. Введение крысам ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг на модели камфорных судорог увеличивает длительность латентного периода на 28 и 43 %, уменьшает продолжительность судорожного периода на 77 и 69 % соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы. В группах животных, получавших ЭСХО в исследуемых дозах, в 40 % случаях наблюдается летальных исход, при 100% - в контрольной группе.

На фоне выраженной анксиолитической, антидепрессивной, антиагрессивной, противосудорожной и ноотропной активности ЭСХО не оказывает миоре-лаксантного действия, характерного для большинства классических анксиоли-тиков.

Таким образом, результаты наших исследований показали, что исследуемый экстракт обладает широким спектром нейротропной активности: анксиолитической, антидепрессивной, антиагрессивной, ноотропной, противосудорожной и седативной.

Фармакотерапевтическая эффективность экстракта соплодий хмеля обыкновенного при хроническом эмоциональном стрессе

Результаты исследований показали, что курсовое введение животным ЭСХО в экспериментально-терапевтической дозе 200 мг/кг оказывает выраженное ан-тистрессорное действие при хроническом эмоциональном стрессе, о чем свидетельствует снижение относительной массы надпочечников на 24 % и увеличение относительной массы тимуса и селезенки в 1,5 раза по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

При проверке поведенческих реакций в тесте ПКЛ установлено (табл. 4), что введение животным ЭСХО в дозе 200 мг/кг и ВЭ в дозе 120 мг/кг увеличивает количество заходов в открытый рукав установки в 3,1 и 1,4 раза соответственно, и время пребывания в нем - в среднем в 3,7 раза по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Таблица 4

Влияние ЭСХО на поведение белых крыс в приподнятом крестообразном

лабиринте при хроническом эмоциональном стрессе

Показатели Группы животных

Интактная (Н20), п=12 Контрольная (стресс +Н20), п=12 Опытная 1 (стресс + ЭСХО, 200 мг/кг), п=12 Опытная 2 (стресс + ВЭ, 120 мг/кг), п=12

Количество заходов

Закрытый рукав 2,3±0,41 1,5±0,17 2,5±0,48 2,0±0,32

Открытый рукав 1,4±0,17 0,7±0,16 2,2±0,18* 1,0±0,16

Время пребывания, с

Закрытый рукав 518,8±40,27 577,8±3,22 520,2±22,90 542,7±20,96

Открытый рукав 57,1±8,18 11,3±4,80 42,3±6,45* 43,0± 14,03*

При проверке сохранности рефлекса УРПИ выявлено, что в контрольной группе на 5 сутки эксперимента ни у одного животного не сохранился рефлекс. Введение белым крысам на фоне эмоционального стресса ЭСХО вызывает сохранность памятного следа у 60 % животных, при 80% - в интактной группе.

Известно, что длительные стрессорные нагрузки приводят к чрезмерному усилению свободнорадикального окисления липидов (СРО), в результате чего происходит повреждение клеточных мембран и формирование патологического процесса. В силу физиологических особенностей от нарушений СРО в большей степени страдает нервная ткань (Ю.А. Александровский, 1991). Основным современным методом лечения подобных состояний является применение психотропных препаратов, наличие антиоксидантной активности которых показано в экспериментальных и экспериментально-клинических исследованиях (Д.Ю. Вельтишев, 2010). Курсовое введение животным ЭСХО вызывает ингибирова-ние перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активацию антиоксидантной системы организма: содержание МДА в сыворотке крови снижается в 1,6 раза,

активность каталазы, СОД и содержание ВГ повышаются в 1,3; 1,5 и 1,3 раза соответственно по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы (табл. 5).

Таблица 5

Влияние ЭСХО на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантную активность организма у белых крыс на фоне хронического

Показатели Группы животных

Интактная (Н20),п=6 Контрольная (стресс +Н20), п=6 Опытная 1 (стресс + ЭСХО, 200 мг/кг), п=6 Опытная 2 (стресс + ВЭ, 120 мг/кг), п=6

МДА, нмоль/мл 2,6±0,2 3,8±0,3 2,4±0,3 2,5±0,2

Каталаза, мкат/л 600,2±48,1 234,8±16,3 301,8±20,9 289,0±12,0

СОД, мкмоль/мл 16,6±2,0 8,0±0,4 12,0±0,6 11,4±0,6

ВГ, мкмоль/мл 10,5±0,4 7,2±0,4 9,4±0,3* 9,68±1,7

Известно, что в условиях продолжительного стресса активируется тромбо-цитарное звено гемостаза и угнетается фибринолитическая и антикоагулянтная активность крови, что приводит к повышению свертываемости крови (М.Е. Григорьева, JI.A. Ляпина, 2010). При исследовании гемокоагуляционного звена гемостаза установлено, что введение животным ЭСХО увеличивает активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) на 19 %, протромбиновое и тромбиновое время - в среднем на 15 % и содержание фибриногена - на 17 % по сравнению с таковыми показателями у крыс контрольной группы. На фоне хронического эмоционального стресса скорость агрегации тромбоцитов возрастает в 1,4 раза. Курсовое введение животным ЭСХО снижает данный показатель на 15 % по сравнению с контролем.

Результаты патоморфологических исследований показали, что на фоне ведения животным ЭСХО в коре головного мозга белых крыс наблюдаются менее выраженные структурные изменения: увеличивается количество нормохром-ных, умеренно гипо- и гиперхромных клеток, уменьшается число резко гипо- и гиперхромных нейронов в III и V слоях коры больших полушарий, что свидетельствует о повышении функциональной активности нейронов. Гиперхромные нейроны, «клетки-тени» и явления нейронофагии встречаются в поле зрения единично. Введение животным ЭСХО на фоне хронического эмоционального стресса снижает количество гиперхромных нейронов в гиппокампе на 25 % по сравнению с таковым у животных контрольной группы.

Фармакотерапевтическая эффективность экстракта соплодий хмеля обыкновенного при хронической алкогольной интоксикации

Результаты исследований показали, что 45-дневная алкогольная интоксикация вызывает у животных нарушения поведенческих реакций. Так, у крыс контрольной группы при тестировании в «открытом поле» отмечается высокая горизонтальная активность, при этом ни одно животное не заходит в центральные квадраты установки, и у них отсутствует норковый рефлекс. На фоне хаотического поведения у крыс контрольной группы наблюдается увеличение количества дефекаций и актов груминга. О превалировании у животных контрольной группы чувства страха и тревоги на фоне алкогольной интоксикации свидетельствует также поведение их в ПКЛ: количество заходов в открытые рукава установки ниже в 4,0 раза, а время, проведенное в нем, - в 2,0 раза по сравнению с таковыми показателями у животных интактной группы.

Введение животным ЭСХО в дозе 200 мг/кг вызывает увеличение вертикальной активности в 4,2 раза по сравнению с контролем в тесте «открытое поле», 50% крыс данной группы посещают центральные квадраты, и у них отмечается норковый рефлекс, что свидетельствует о превалировании ориентировочно-исследовательского поведения над хаотичными движениями. На фоне введения исследуемого экстракта у крыс снижается количество актов груминга и дефекаций в 4,0 и 1,5 раза соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы. При исследовании поведения животных первой опытной группы в тесте ПКЛ установлено, что введение ЭСХО увеличивает количество заходов в открытые рукава установки и время пребывания в них в 3,3 и 5,0 раза соответственно по сравнению с показателями у животных контрольной группы.

с{ 200 О

1 час

24 часа

7 суток

; П Интакт а Контроль Ш ЭСХО Ш ВЭ

Рис. 1. Влияние ЭСХО на сохранение условного рефлекса пассивного избегания у белых крыс на фоне хронической алкогольной интоксикации.

Влияние ЭСХО на процессы обучения и памяти у белых крыс в условиях алкогольной интоксикации исследовали по сохранности УРПИ. Результаты ис-

14

следований показали, что введение этанола в течение 45 дней не вызывает нарушений выработки рефлекса у животных всех групп в тесте УРПИ (рис. 1). При проверке сохранности памятного следа установлено, что латентный период захода в темный отсек установки у животных, получавших ЭСХО, выше показателя у крыс контрольной группы через 24 часа и 7 суток после выработки рефлекса на 41 и 47 % соответственно (рис. 1).

По данным литературы (И.А. Завалишин, М.Н Захарова, 1996), ключевым звеном в гибели нейронов является активация СРО. Известно, что введение этанола (П.Д. Шабанов, 1998) вызывает активацию ПОЛ в мембранах клеток печени, мозга и сердца, что приводит к накоплению содержания первичных и вторичных продуктов ПОЛ в тканях и повышению их концентрации в биологических жидкостях.

Таблица 6

Влияние ЭСХО на показатели перекисного окисления липидов и антиокси-дантную активность организма у белых крыс при алкогольной интоксикации

Показатели Группы животных

Интактная (Н20), п=6 Контрольная (этанол +Н20), п=6 Опытная 1 (этанол + ЭСХО, 200 мг/кг), п~6 Опытная 2 (этанол + ВЭ, 120 мг/кг), п=6

МДА в сыворотке, нмоль/мл 2,6±0,19 12,3±1,13 4,0±0,77* 5,4±0,90*

МДА в мозге, нм оль/г ткани 0,14±0,01 0,21 ±0,01 0,08±0,01* 0,07±0,05*

Каталаза в сыворотке, мкат/л 600,2±48,08 151,4±10,17 356,9±33,81* 255,8±32,05*

Каталаза в мозге, мкат/мг 1168,2±32,91 845,6±37,6 971,9±43,61* 931,3±16,84

СОД, мкмоль/мл 16,6±2,01 6,19±0,73 9,13±0,38* 8,92±0,74*

ВГ, мкмоль/мл 10,5±0,43 4,1±0,21 5,5±0,27* 5,7±0,30*

Курсовое введение животным ЭСХО вызывает ингибирование ПОЛ и активацию антиоксидантной системы организма (табл. 6). Так, у животных опытной группы содержание МДА в сыворотке крови и гомогенате головного мозга снижается в 3,0 и 2,5 раза, активность каталазы в сыворотке крови и гомогенате головного мозга увеличивается в 2,4 раза и на 15 %, активность СОД в плазме крови и содержание ВГ в крови - в 1,5 и 1,3 раза соответственно по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

Результаты патоморфологических исследований показали, что длительное введение алкоголя вызывает выраженные структурные изменения в коре больших полушарий головного мозга и гиппокампе. Введение белым крысам ЭСХО в дозе 200 мг/кг снижает в коре больших полушарий количество резко гипер-хромных нейронов и «клеток-теней» в среднем в 2,0 раза, резко гипохромных -

в 1,7 раза, а также увеличивает число умеренно гипо- и гиперхромных клеток в 2,0 и 1,7 раза соответственно по сравнению с таковыми у животных контрольной группы, что свидетельствует о повышении функциональной активности нейронов (Д.Д. Орловская, 1986).

Известно, что амнестический эффект алкоголя связан, прежде всего, с его преимущественным повреждающим воздействием на структуры гиппокампа (Л.Е. Бородкина и др., 2002). Введение животным ЭСХО на фоне алкогольной интоксикации снижает количество гиперхромных нейронов в гиппокампе на 26 % по сравнению с таковым у животных контрольной группы.

Фармакотерапевтическая эффективность экстракта соплодий хмеля обыкновенного при длительной депривации сна

При тестировании животных в ПКЛ и УРПИ было установлено, что 72-часовая депривация сна вызывает у животных стойкие нарушения поведения, выражающиеся в повышении уровня тревожности и эмоциональности, изменении ориентировочно-исследовательского и целенаправленного поведения на хаотичные движения, ухудшении процессов обучения и памяти.

При исследовании поведения животных, получавших ЭСХО в дозе 200 мг/кг, в тесте ПКЛ выявлено, что исследуемый экстракт снижает чувства страха и тревоги и влияет на сохранность памятного следа. На фоне введения крысам ЭСХО 30 % животных посетили однократно открытый рукав установки, количество заходов в закрытый рукав установки было выше в 1,7 раза такового показателя у животных контрольной группы (рис. 2).

При проверке сохранности УРПИ установлено, что в опытной группе количество животных с сохранившимся рефлексом в 2,0 раза выше, чем в контрольной группе. Латентный период у животных, получавших ЭСХО, на 56 % больше аналогичного показателя у животных контрольной группы.

о ч о

X с}

со

О

Щ

н

о

<и -

ч

о «

3 2,5 2 1,5 1

0,5

Й!

А .

Темный отсек

Светлый отсек

И Интактная ЕЗ Контрольная Ш Опытная (ЭСХО, 200 мг/кг)

Рис. 2. Влияние ЭСХО на поведение белых крыс в приподнятом крестообразном лабиринте при стрессе Жуве.

Выявлено, что курсовое введение животным ЭСХО в дозе 200 мг/кг вызывает ингибирование ПОЛ и активацию антиоксидантной системы организма: содержание МДА в сыворотке крови ниже на 39 %, а активность каталазы и СОД выше в 1,9 и 1,2 раза соответственно по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы.

Результаты патоморфологических исследований головного мозга показали, что у животных, получавших ЭСХО, в среднем более 70 % от всей популяции нейронов составляют функционально активные клетки, находящиеся в состоянии умеренного гиперхроматоза или слабо выраженного хроматолиза, с эктопи-рованными, но сохраненными ядрами и ядрышками. Единично присутствуют тяжелые изменения, характеризующиеся наличием пикнотических нейронов, «клеток-теней», явлений сателлитоза и нейронофагии.

Таким образом, курсовое введение животным ЭСХО на фоне стрессовых ситуаций и хронической алкоголизации оказывает выраженное нейропротектив-ное действие, нормализуя поведенческие реакции, оказывая антиамнестическое влияние и уменьшая выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных и количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий, а также ингибируя свободнорадикальное окисление липидов и активируя антиоксидантную систему организма. В целом, ЭСХО по эффективности не уступает, а по отдельным показателям превосходит таковую у препарата сравнения - ВЭ.

Изучение возможных механизмов нейропротективного действия экстракта соплодий хмеля обыкновенного

In vitro на моделях перекисного и осмотического гемолиза изучали мембра-ностабилизирующую активность ЭСХО в широком диапазоне концентраций. В результате исследований установлено, что наиболее выраженное мембраноста-билизирующее действие исследуемое фитосредство оказывает в концентрации 10 мг/мл, при которой происходит уменьшение степени перекисного гемолиза на 71 %, осмотического - на 93 % по сравнению с контролем. 1С 50 для перекисного и осмотического гемолиза составляет 5,20 и 0,65 мг/мл соответственно.

Антигипоксическое действие является одним из основных компонентов спектра фармакологической активности большинства нейропротективных препаратов (И.В. Зарубина, П.Д. Шабанов, 2009). Противогипоксические эффекты, характерные для синтетических препаратов, выявляются и у флавоноидсодер-жащих фитосредств (Г.Х. Дамдинова, 2000; И.Л. Зеленская и др., 2005). Установлено также антигипоксическое действие настоя соплодий хмеля (Л.В. Пас-тушенков, Е.Е. Лесиовская, 1991).

Результаты исследований показали, что курсовое введение животным ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг способствует увеличению резервного времени жизни при гемической гипоксии на 19 и 23 %, при гистотоксической - на 23 и 28 % и при нормобарической - на 30 и 20 % соответственно по сравнению с данными у животных в контрольной группе.

Интакт бикукуллин бикукуллин пикротоксин пикротоксин

+ЭСХО +ЭСХО

Рис. 3. Влияние ЭСХО на ГАМК-ергическую систему.

Основной тормозной медиатор в ЦНС - гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) играет ведущую роль в патогенезе тревоги, судорог и других невротических состояний. С усилением ГАМК-ергического торможения связывают механизм действия большинства применяемых в настоящее время анксиолитиков (Ю.А. Александровский, 2000). Результаты исследований показали, что внутри-брюшинное введение животным блокатора хлорного канала - пикротоксина и блокатора ГАМКд-рецептора - бикукуллина вызывало проконфликтный эффект, что выражалось в снижении числа наказуемых взятий воды в 5,0 раз по сравнению с показателями у интактных животных (рис. 3). Использование ЭСХО в дозе 300 мг/г на фоне введения пикротоксина и бикукуллина увеличивает количество наказуемых взятий воды на 44 и 39 % соответственно по сравнению i с данными у животных контрольной группы.

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют о том, что в реализации нейропротективное действия ЭСХО возможно участие ГАМК-ергической системы, а также мембраностабилизирующая, антигипоксическая и антиоксидантная активность изучаемого средства, обусловленные широким спектром биологически активных веществ, содержащихся в указанном средстве: á- и (3-кислот, халконов (ксантогумол, изоксантогумол, дезметилксантогу-мол), флавонов, процианидинов и других соединений. Установлено, что фе-нольные соединения хмеля обладают выраженными антиоксидантными свойствами. Ксантогумол, изоксантогумол и 8-пренилнарингенин в микромолярных концентрациях угнетают индуцируемое сульфатом меди или анионом перокси-нитрила окисление липопротеинов низкой плотности (C.L. Miranda, 2000; J.F. Stevens, 2003). Антиоксидантное действие ксантогумола выше, чем у а-токоферола (C.L. Miranda, 2006). Также установлено, что высокой антиокси-дантной активностью в отношении липопротеинов низкой плотности обладают процианидины хмеля.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, экстракт соплодий хмеля обыкновенного обладает широким спектром нейропротективной активности, оказывая анксиолитическое, антидепрессивное, антиагрессивное, противосудорожное, ноотропное и умеренное седативное влияние. Исследуемое средство относится к группе малотоксичных веществ и для него не характерно типичное для классических анксиолитиков миорелаксантное действие.

ЭСХО оказывает выраженное нейропротективное действие при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами: хронический эмоциональный стресс, депривация сна и алкогольная интоксикация. Исследуемый экстракт уменьшает выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, снижает чувства страха и тревоги, улучшает организацию исследовательских движений, активирует выработку условных рефлексов, а также замедляет угасание памятного следа при краткосрочном и долгосрочном запоминании. ЭСХО оказывает положительное влияние на состояние гемостаза при эмоциональном стрессе. На фоне фармакотерапии ЭСХО происходит нормализация морфофункционального состояния коры головного мозга и гиппокампа.

Полученные в работе данные, свидетельствуют о том, что в реализации ней-ропротективного действия ЭСХО возможно участие ГАМК-ергической системы, а также антигипоксическая и антиоксидантная активность изучаемого средства, обусловленные широким спектром биологически активных веществ: а- и р-кислот, хапконов (ксантогумол, изоксантогумол, дезметилксантогумол), фла-вонов, процианидинов и других соединений.

ВЫВОДЫ

1. Экстракт соплодий хмеля обыкновенного обладает анксиолитической, антидепрессивной, антиагрессивной, противосудорожной и седативной активностью.

2. Исследуемое средство обеспечивает выраженную фармакотерапевтиче-скую эффективность при хронических стресс-индуцированных состояниях: снижает чувства страха и тревоги, улучшает когнитивные функции, оказывает анти-коагулянтное влияние, уменьшает выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, а также количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий.

3. Экстракт соплодий хмеля обыкновенного на фоне хронической алкогольной интоксикации нормализует поведенческие реакции, оказывает антиам-нестическое влияние и увеличивает количество функционально активных нейронов в структурах головного мозга.

4. Основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние исследуемого средства, является антиоксидантное, антигипоксическое действие и стимуляция ГАМК-ергической нейропередачи.

Список опубликованных работ

1. Razuvaeva Ya.G. Influence of hop strobiles extract on white rat behavior / Ya.G. Razuvaeva, N.V. Kabachuk, O.V. Nagaslayeva // Abstract of the 4th international symposium on traditional medicine and innovative drugs «Erdos forum on development of International Traditional medicine». - Erdos, 2009. - P. 51.

2. Кабачук H.B. Антигипоксическое действие соплодий Humus Iupulus L. / H.B. Кабачук, Я.Г. Разуваева, O.B. Нагаслаева //Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2009. -№3(67).-С. 185-186.

3. Разуваева Я.Г. Стресспротективное действие экстракта из соплодий Humus Iupulus L. / Я.Г. Разуваева, H.B. Кабачук, Т.А. Ажунова, О.В. Нагаслаева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 2 (72). - С. 210-212.

4. Разуваева Я.Г. Влияние соплодий хмеля обыкновенного (Humus Iupulus L.) на функциональное состояние нервной системы у белых крыс / Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, Н.В. Кабачук, О.В. Нагаслаева // Сибирский медицинский журнал.-2010.-№ 1.-С. 115-117.

5. Разуваева Я.Г. Анксиолитическое действие экстракта из соплодий Humus Iupulus (Canabaceae) / Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, Н.В. Кабачук, О.В. Нагаслаева // Растительные ресурсы. - 2010. - Т. 46, вып.4. - С. 137-142.

6. Разуваева Я.Г. Психотропное действие экстракта соплодий Humus Iupulus L. / Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, Н.В. Кабачук, О.В. Нагаслаева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2010. - Вып.12: Медицина. - С. 41-45.

7. Разуваева Я.Г. Противосудорожное действие соплодий шишек хмеля / Я.Г. Разуваева, Н.В. Кабачук // Мат. всеросс. научно-практ. конф. «Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина». Серия: Байкальские чтения-4. -СПб., 2010.-С. 223-226.

8. Разуваева Я.Г. Влияние экстракта шишек хмеля на поведение крыс в конфликтной ситуации / Я.Г. Разуваева, Т.А. Ажунова, Н.В. Кабачук, О.В. Нагаслаева // Мат. III всеросс. науч.-практич. конф. с междун. участием «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ, 2010. - С.350.

9. Кабачук Н.В. Антидепрессивное и антиагрессивное действие экстракта из соплодий Humus Iupulus L. / Н.В. Кабачук, Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, О.В. Нагаслаева // Мат. всеросс. конф. молод, ученых «Биоразнообразие: глобальные и региональные процессы». - Улан-Удэ, 2010. - С. 133-135.

Ю.Кабачук Н.В. Экспериментальное обоснование применения соплодий Humus Iupulus L. для премедикации в стоматологии / Н.В. Кабачук, Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, О.В. Нагаслаева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2011. -№ 1 (77), Ч.2.- С. 145-147.

11 .Разуваева Я.Г. Влияние соплодий Humus Iupulus L. на процессы обучения и памяти у белых крыс / Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, Н.В. Кабачук, О.В. Нагаслаева //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2011. - № 1 (77), ч.2,- С. 168-170.

12.Кабачук Н.В. Антиоксидантное действие экстракта из соплодий Humus Iupulus L. (Canabaceae) // Н.В. Кабачук, A.A. Торопова, Я.Г. Разуваева, С.М. Ни-

колаев, О.В, Нагаслаева // Тез. докл. II межд. научн. конф. «Разнообразие почв и биоты Северной и Центральной Азии», посвященной 30-летию ИОЭБ СО РАН. - Улан-Удэ, 2011. - С. 71 -72.

13.Kabachuk N.V. The influence of extract from fruits Humus lupulus L. on behavior of white rats in a cruciform labyrinth / N.V. Kabachuk, S.M. Nikolaev, Ya.G. Razuvaeva, O.V. Nagaslaeva // Мэс Засал. - 2011. - № 13. - P.149-150.

14.Kabachuk N.V. Membranostabilizing activity of Humus lupulus (Canabaceae) stobiles extract / N.V. Kabachuk, A.A. Toropova, Ya.G. Razuvaeva // Мэс Засал. -2011.-№ 13. -P.150-151.

15.Kabachuk N.V. The influence of extract of Humus lupulus stobiles extract on the processes of educating and memory of rats / N.V. Kabachuk, S.M. Nikolaev, Ya.G. Razuvaeva // Abstracts of the 5th international symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine. - Ulaanbaatar, 2011. - P. 112.

Подписано в печать 17.11.2011 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,2 печ. л. Тираж 100. Заказ № 60

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН. 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.

Актуальность темы. Глобальные эпидемиологические исследования, проводимые ВОЗ, и исследования в отдельных странах показывают, что рост темпа жизни, количества коммуникационных связей, социально-экономического напряжения в обществе, урбанизация и научно-технический прогресс приводят к увеличению численности стрессорных влияний и, как следствие, развитию невротических и соматоформных расстройств (Булда-кова, 2006; Вознесенская 2006; Вельтишев, 2009; \Veisberg, 2009). Также в последние годы наблюдается значительная тенденция роста психических расстройств при соматических заболеваниях (Александровский, 2007; Дро-бижев, Овчинников, 2010; Хейфец и др., 2007; СЬошпагс!, 2006).

В связи с большой распространенностью нервно-психических заболеваний актуальным является разработка лекарственных средств, направленных на коррекцию функциональных нарушений нервной системы. На сегодняшний день в медикаментозном лечении неврозов, депрессии, синдрома хронической усталости и тревоги применяются средства с анксиолитическим действием. При этом большинство синтетических анксиолитиков вызывает побочные действия, что в, конечном итоге, нивелирует их терапевтическую эффективность. Средства растительного происхождения, имеющие значительно меньше побочных эффектов, могут рассматриваться в качестве альтернативной терапии или использоваться в комплексном лечении данных патологических состояний (Воробьева, Карачкова, 2007; Кузнецов, 2008; ВеЬаг е1 а1., 2009).

Перспективным растением в терапии тревожных расстройств является хмель обыкновенный (Ни тикм \upuhis Ь.). Соплодия хмеля в России разрешены к использованию в качестве анальгезирующего, противоязвенного, се-дативного и снотворного средства. Он входит в состав таких препаратов, как уролесан, валокордин и валоседан, а также в состав различных сборов (Беленовская, Буданцев, 2008; Машковский, 2010). В Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН разработан сухой экстракт соплодий хмеля обыкновенного.

Целью работы явилось определение спектра нейропротективной активности и фармакотерапевтической эффективности экстракта соплодий хмеля обыкновенного (ЭСХО) при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

- определить спектр нейропротективной активности ЭСХО;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность ЭСХО при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами (хронический эмоциональный стресс, депривация сна и хроническая алкогольная интоксикация);

- выявить основные механизмы нейропротективного действия ЭСХО.

Научная новизна. Работа представляет собой определение спектра нейропротективной активности ЭСХО и оценка его фармакотерапевтической эффективности при лечении и профилактике тревожных расстройств. Установлено, что исследуемое средство обладает анксиолитическим, антидепрессивным, ноотропным, антиагрессивным и умеренным седативным влиянием. Выявлено, что ЭСХО обеспечивает выраженную фармакотерапевтическую эффективность при хроническом эмоциональном стрессе, депривации сна и алкогольной интоксикации, сопровождающихся тревожными расстройствами, нормализуя у животных поведенческие реакции, оказывая антиамнести-ческое влияние, уменьшая выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, а также количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий головного мозга. Установлена мембраностабилизирующая, антигипоксическая, противосудорожная и анти-стрессорная активность ЭСХО. Основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние ЭСХО, является антиоксидантное, антигипокси-ческое действие и стимуляция ГАМК-ергической нейропередачи.

Практическая значимость. Результаты проведенных экспериментальных исследований позволяют рекомендовать ЭСХО для клинических исследований с целью его применения в качестве эффективного средства в неврологической практике для лечения и профилактики тревожных расстройств. Полученные в работе данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета. Подана заявка на предполагаемое изобретение «Способ получения лекарственного средства, обладающего анксиолитическим действием» № 2011114947/15(022219), приоритет от 15.04.2011.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экстракт соплодий хмеля обыкновенного обладает анксиолитической, антидепрессивной, антиагрессивной, противосудорожной, ноотропной и се-дативной активностью.

2. ЭСХО обеспечивает выраженную фармакотерапевтическую эффективность при хронических стресс-индуцированных состояниях: снижает чувства страха и тревоги, улучшает когнитивные функции, оказывает антикоагулянт-ное влияние, уменьшает выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, а также количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий головного мозга.

3. Курсовое введение ЭСХО на фоне хронической алкогольной интоксикации нормализует поведенческие реакции, оказывает антиамнестическое влияние и увеличивает количество функционально активных нейронов в структурах головного мозга.

4. Основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние ЭСХО, является антиоксидантное, антигипоксическое действие и стимуляция ГАМК-ергической нейропередачи.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

• 4lh International Symposium on Traditional medicine and innovative drugs (Erdos, 2009);

• региональной конференции, посвященной 85-летию Республиканской клинической больницы им. Семашко (Улан-Удэ, 2009);

• Всероссийской конференции «Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина» (Улан-Удэ, 2010);

• III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2010);

• Всероссийской конференции молодых ученых «Биоразнообразие: глобальные и региональные процессы» (Улан-Удэ, 2010);

• II Международной научной конференции «Разнообразие почв и био-ты Северной и Центральной Азии», посвященной 30-летию ИОЭБ СО РАН (Улан-Удэ, 2011);

• 5th International Symposium on Present Situation and Future Development of Mongolian Traditional Medicine (Ulaanbaatar, 2011).

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация» на 2006-2011 гг., утвержденным Президиумом СО РАН.

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 15 научных работ, из них 6 в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 138 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 223 источник, из которых - 73 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 26 таблицами, 17 рисунками и 4 микрофотографиями.

ВЫВОДЫ

1. Экстракт соплодий хмеля обыкновенного обладает анксиолитиче-ской, антидепрессивной, антиагрессивной, противосудорожной и седативной активностью.

2. Исследуемое средство обеспечивает выраженную фармакотерапев-тическую эффективность при хронических стресс-индуцированных состояниях: снижает чувства страха и тревоги, улучшает когнитивные функции, оказывает антикоагулянтное влияние, уменьшает выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, а также количество регрессивных форм нейронов в гиппокампе и коре больших полушарий.

3. Экстракт соплодий хмеля обыкновенного на фоне хронической алкогольной интоксикации нормализует поведенческие реакции, оказывает ан-тиамнестическое влияние и увеличивает количество функционально активных нейронов в структурах головного мозга.

4. Основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние исследуемого средства, является антиоксидантное, антигипоксиче-ское действие и стимуляция ГАМК-ергической нейропередачи.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, экстракт соплодий хмеля обыкновенного обладает широким спектром нейропротективной активности, оказывая анксиолитическое, антидепрессивное, антиагрессивное, противосудорожное, ноотропное и умеренное седативное влияние. Исследуемое средство относится к группе малотоксичных веществ и для него не характерно типичное для классических ан-ксиолитиков миорелаксантное действие.

ЭСХО оказывает выраженное нейропротективное действие при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами: хронический эмоциональный стресс, депривация сна и алкогольная интоксикация. Исследуемый экстракт уменьшает выраженность стрессорных изменений во внутренних органах животных, снижает чувства страха и тревоги, улучшает организацию исследовательских движений, активирует выработку условных рефлексов, а также замедляет угасание памятного следа при краткосрочном и долгосрочном запоминании. ЭСХО оказывает положительное влияние на состояние гемостаза при эмоциональном стрессе. На фоне фармакотерапии ЭСХО происходит нормализация морфофункционального состояния коры головного мозга и гиппокампа.

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что в реализации нейропротективного действия ЭСХО возможно участие ГАМК-ергической системы, а также антигипоксическая и антиоксидантная активность изучаемого средства, обусловленные широким спектром биологически активных веществ: а- и р-кислот, халконов (ксантогумол, изоксантогумол, дезметилк-сантогумол), флавонов, процианидинов и других соединений.