Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Нефропротекторное действие растительного средства "Флаворен"

с

ГУРЖАПОВА АНЖЕЛИКА АНАТОЛЬЕВНА

НЕФРОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ФЛАВОРЕН»

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

-в ЛЕК 2011

Улан-Удэ - 2011

005006590

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН

Научный руководитель:

доктор медицинских Мондодоев Александр Гаврилович наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских Маланов Ким Жапович наук

кандидат медицинских Иванов Виктор Викторович наук

Ведущая организация: ГБОУ ДПО «Иркутская

Защита состоится « 23 » декабря 2011 г. в 14.00 на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан «22 » _ ноября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

государственная медицинская академия последипломного образования»

Минздравсоцразвития РФ

кандидат биологических наук

В.Б. Хобракова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Широкая распространенность и наблюдающийся рост патологии органов мочевыделительной системы определяет необходимость совершенствования фармакотерапии заболеваний указанного профиля. За пятилетний период (2005-2009) обращаемость больных к врачу-нефрологу в России возросла в 1,8 раза, распространенность заболеваний почек среди населения - в 5,8 раза и составила 6,1 %о (Ведерникова и соавт., 2010).

Нефропатии, особенно хронические формы, характеризуются тяжелым течением, развитием рецидивов заболевания, приводящих к длительной потере трудоспособности и инвалидизации (Баранов, Сергеева, 2007; Шилов, 2008; Simon et al., 2004).

Помимо широкой распространенности заболеваний почек, нефропатии встречаются при интоксикациях (Лобанов, 2010), шоковых состояниях, заболеваниях печени (Добронравов, Дунаева, 2008; Цыган, 2009; Perico et all., 2009), сахарном диабете (Маслова и соавт. 2010; Parving, Lewis, 2006), у больных с сердечной недостаточностью (Батюшин, Врублевская, 2010; Кузьмин, 2011), отмечаются случаи лекарственной нефропатии (Краснова, Сагинова, 2007; Zorov, 2010).

Основным требованием к нефропротекторным средствам является отсутствие токсичности и нежелательных побочных явлений при их применении. Этой задаче в полной мере отвечают средства природного (растительного) происхождения, поскольку они оказывают комплексное влияние на патологический процесс без риска развития побочных эффектов. Так, доля медикаментов растительного происхождения на фармацевтических рынках развитых стран расширяется и имеет постоянную тенденцию к увеличению в структуре лекарственных средств (Афанасьева, Нетцева, 2009), а в России выбор препаратов, оказывающих комплексное нефропротекторное действие, ограничен.

В связи с этим, актуальной задачей остается разработка и внедрение новых эффективных и безопасных лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний почек. Одним из перспективных направлений в разработке новых лекарственных средств является перевод тибетских многокомпонентных сборов, имеющих многовековой опыт применения в лечебной практике, в экстракционные препараты. Они представляют собой сумму биологически активных веществ в концентрированном виде и сохраняют все преимущества многокомпонентных лекарственных средств: кинети-

/

/

ческий синергизм в действии ингредиентов, соответствие мультифак-торности заболеваний, воздействие на организм больного как корригирующей лекарственной системы, отсутствие токсичности и побочных нежелательных эффектов (Николаев, 2008).

В связи с этим, нами разработано новое нефропротекторное средство растительного происхождения в виде полиэкстракта, состоящего из сухих экстрактов, полученных из корней и корневищ марены красильной (Rubia tinctorium L.), надземной части мари остистой (Cheno-podium aristaíum L.) sin. (Teloxis aristata (L.) Мок.), красных листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia Fritsch.), в соотношении 1:1:1, условно названное «Флаворен». Сухие экстракты компонентов «Флаворена» получены путем экстракции из растительного сырья водно-спиртовой смесью в концентрации 40-60%, с последующим упариванием полученного экстракта в вакууме и быстрой сушкой. Экстракт содержит следующие группы биологически активных веществ; флаво-ноиды (10,7%), антрахиноны, антоцианы, танины, фенологликозиды, углеводы, аминокислоты и др. (Корнопольцева и соавт. 2008).

Целью настоящей работы явилось определение фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности «Флаворена» при повреждениях почек, а также выявление возможных механизмов его нефропротекторного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить спектр фармакологических свойств «Флаворена»;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность «Флаворена» при нефропатиях токсической, ишемической этиологии и гепаторе-нальном синдроме;

- выявить основные механизмы нефропротекторного действия «Флаворена»;

Научная новизна. Работа представляет собой исследование фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности нового нефропротекторного средства растительного происхождения, полученного на основе тибетской рецептуры по ресурсосберегающей и щадящей технологии. Установлено, что «Флаворен» в экспериментально-терапевтических дозах обладает диуретической, натрийуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, иммуномодулирующей, мембраностабилизирующей, антиоксидантной активностью. Показано, что указанный фитоэкстракт обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при нефропатиях ишемической, токсической

этиологии и гепаторенальном синдроме, способствуя нормализации морфофункционального состояния почек животных. Установлено, что одним из ведущих механизмов в нефропротекторном действии «Флаво-рена» является наличие у него мембраностабилизирующей активности, реализация которой связана с ингибированием свободнорадикальных процессов, обусловленным высоким содержанием биологически активных веществ, обладающих как прямым антирадикальным действием, так и способностью повышать активность эндогенной антиокислительной системы организма. В дополнительной серии экспериментов показано снижение активности процессов индуцированного апоптоза в почках под влиянием испытуемого средства, обусловленное активацией энергетических процессов.

Практическое значение. На основании проведенных фармакологических исследований подготовлена и представлена заявка на предполагаемое изобретение в Роспатент «Средство, обладающее ги-поазотемическим и диуретическим свойствами» за № 2011131780/17 от 05.05.2011. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 12.09.2011).

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

- Международной научной конференции "Current Situation and future trends of drag research and development from natural sources" (Ulan-baatar, 2010);

III Всероссийской научной конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2010);

II Международной научной конференции «Разнообразие почв и биоты северной и центральной Азии» (Улан-Удэ, 2011);

V Международной научной конференции "Present Situation and Future Status of Mongolian Traditional Medicine Development" (Ulan-baätar, 2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из которых 2 статьи - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с программой №6.11.1.3 «Молекуляр-но - клеточные механизмы повреждений органов мочеполовой системы и коррекция их средствами традиционной медицины».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. «Флаворен» обладает диуретической, гипоазотемической, са-луретической, иммуномодулирующей, противовоспалительной, мем-браностабилизирующей и антиоксидантной активностью.

2., Курсовое введение «Флаворена» в экспериментально-терапевтической дозе оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при нефропатиях ишемической, токсической этиологии и гепаторенальном синдроме, нормализуя морфофункциональное состояние почек животных.

3. Важным из молекулярно-клеточных механизмов в нефропро-текторном действии «Флаворена» являются его способности ингиби-ровать процессы свободнорадикального окисления биомакромолекул, предупреждать ранний апоптоз.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 130 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 233 источника, из которых 71 - работы иностранных авторов. Работа иллюстрирована 35 таблицами и 13 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объекта исследования был использован растительный полиэкстракт, состоящий из сухих экстрактов, полученных из корней и корневищ марены красильной (Rubia tinctorium L.), надземной части мари остистой {Chenopodium aristatum L.) sin. (Teloxis aristata (L.) Мок.), красных листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia Fritsch.), в соотношении 1:1:1, условно названный «Флаворен». В состав полиэкстракта входит полифенольный комплекс, антоцианы, ли-пиды, углеводы, аминокислоты. Стандартизация осуществляется по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид (лютео-лин-7-гликозид).

Фармакологические свойства и фармакотерапевтическую эффективность «Флаворена» определяли при его внутрюкелудочном введении лабораторным животным в виде водного раствора 1 раз в сутки, соответственно условиям опыта, в экспериментально-терапевтической дозе - 20 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали водно-спиртовый настой канефрона (Германия) в объеме 1,5 мл/кг.

Эксперименты выполнены на 270 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-220 г и 96 мышах линии СВА и Fl(CBAxC57

В1/6) массой 18-24 г. Животные находились в стандартных условиях содержания и кормления в виварии (Приказ МЗ № 1179 от 10.10.83r.). Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или иных научных целей» (Женева). Протокол исследования согласован этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол №3 от 03.02.2009). В работе также были использованы модельные системы и культуры тканей: 1% суспензия эритроцитов донорской крови; культура моно-нуклеарных лейкоцитов (Воуиш, 1968); суспензия липосом из яичного желтка (Лопухин и соавт., 1983), а также системы, содержащие в качестве субстратов окисления стандартные химические соединения.

Двустороннюю ишемию почек воспроизводили путем выделения почек крыс из жировой капсулы и окклюзии сосудистых пучков обеих почек на 60 мин (Шепотиновский и соавт., 1989). Операцию проводили под барбамиловым наркозом (80 мгУкг внутрибрюшинно). По истечении 60 мин зажимы с почечных ножек снимали и рану ушивали послойно наглухо в асептических условиях.

Сулемовый некронефроз у белых крыс вызывали однократным внутрибрюшинным введением водного раствора сулемы (^С12) в дозе 2 мг/кг (Соколова и соавт., 1975).

Тетрахлорметановый некронефроз у белых крыс вызывали подкожным введением 50 % масляного раствора углерода четыреххлори-стого (ССЦ) из расчета 0,4 мл/100 г массы, 4-х кратно, 1 раз в день (Мондодоев, 2010).

С целью оценки функционального состояния почек животных определяли: диурез по общепринятому методу без нагрузки и с 2,5 % водной нагрузкой (Берхин, Иванов, 1972); концентрацию катионов натрия и калия в моче - методом пламенной фотометрии на приборе «Р1арЬо 4». Депурационную функцию почек оценивали по содержанию мочевины и креатинина в сыворотке крови и моче - унифицированными методами с использованием наборов реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Россия); содержание белка в моче - реакцией с сульфосалициловой кислотой (Меньшиков и соавт., 1987). Концентрационную функцию почек оценивали по изменению концентрации электролитов и мочевины, скорость клубочковой фильтрации (СКФ) - по клиренсу эндогенного креатинина, интенсивность канальцевой реабсорбции - по А. Вандер (2000).

Функциональное состояние печени животных оценивали по активности щелочной фосфатазы (ЩФ), содержанию билирубина, активности аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспартатаминотрансфера-зы (АсТ) в сыворотке крови, содержанию гликогена в печени (Меньшиков и соавт., 1987).

Асептическое воспаление моделировали путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3% раствора формалина (Стрельников, 1960); 0,1 мл 6% раствора декст-рана (Ленинский, 1976); 0,1мл 5% раствора гистамина гидрохлорида (Александров и соавт., 1986). Выраженность отека оценивали онко-метрическим, либо весовым методом по разнице между объемами или массами здоровой и отечной лапки.

Асептический перитонит вызывали у крыс однократным внутри-брюшинным введением 1% раствора уксусной кислоты в объеме 10 мл/кг. Оценивали количество экссудата, содержание в нем форменных элементов крови.

Влияние «Флаворена» на процессы альтерации и регенерации в очаге воспаления оценивали на модели повреждения тканей уксусной кислотой (Ойвин, Шетель, 1961). Площадь некротизированной ткани определяли планиметрическим методом. Оценку влияния «Флаворена» на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли по методу Ф. Тринус и соавт. (1975).

Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа у мышей оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Петров и соавт., 2000), гуморального звена - по количеству антителообразующих клеток, определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham (1965), макрофа-гального - в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в отношении частиц коллоидной туши (Руководство..., 2005).

При исследовании антистрессорной активности фитоэкстракта в качестве стресс фактора использовали иммобилизацию белых крыс на спине в течение 24 часов.

Оценку мембраностабилизирующей активности «Флаворена» осуществляли по степени гемолиза эритроцитов, который вызывали реактивом Фентона (перекисный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) (Ковалев и соавт., 1986).

Активность каспазы-3 определяли спектрофотометрически в го-могенате коркового слоя почек с использованием стандартного набора

реактивов «Caspase assay kit» (Sigma) (в пикомолях высвободившегося pNA в минуту на миллиграмм белка).

Влияние «Флаворена» на энергетическое состояние клеток неф-рона определяли по содержанию АТФ в гомогенате коркового слоя почек методом Лампрехта Тродшольдта (Прохорова, 1982).

Концентрацию малонового диальдегида (МДА) определяли спек-трофотометрически по степени образования окрашенного комплекса с 2-тиобарбитуровой кислотой в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и в гомогенате почек (Стальная, Гаришвили, 1977). Концентрацию диеновых коньюгатов в сыворотке крови определяли по методу В.Б. Гаврилова, М.И. Мишкорудной (1983).

При оценке влияния указанного средства на состояние системы ан-тиоксидантной защиты в сыворотке крови определяли активность ката-лазы (Королюк и соавт., 1988), супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари, 1985), концентрацию восстановленного глутатиона (Anderson, 1989).

Общую антиоксидантную емкость (ОАЕ) определяли по методу Go-vindarajan и соавт. (2003), основанному на способности вещества восстанавливать молибдат аммония до фосфомолибденового комплекса с последующей спектрофотометрической регистрацией в сравнении с показателями известного антиоксиданта-восстановителя - аскорбиновой кислоты. ОАЕ (¿дк) выражали в концентрации аскорбиновой кислоты (мм оль/г), условно содержащегося в 1 г вещества. Антирадикальную активность (АРА) определяли по методу J. Lee с соавт. (1996) по уменьшению интенсивности оптической плотности раствора ДФПГ-радикала после введения растворов исследуемого вещества. Связывание супероксидных радикалов (02"") определяли по методу Chen с соавт.(2003), в котором продукция 02" осуществлялась в неэнзиматической системе феназин метосульфат - НАДФ с последующей спектрофотометрической регистрацией количества окисленного тетразолия нитросинего.

Хелатирующую активность (ХА) «Флаворена» определяли фе-нантролиновым методом, основанному на способности вещества связывать ионы Fe2+, с последующей спектрофотометрической регистрацией оптической плотности образующегося комплекса Fe2+0CTaT - фе-нантролин (Chen с соавт., 2004).

Для патоморфологических исследований почки животных фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и фиксаторе Буэна. Депарафинированные срезы, полученные на микротоме, окрашивали гемотоксшшн-эозином и по методу Массона (Руководство..., 2005).

Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны методами для малой выборки с определением средней величины (М) и средней арифметической ошибки (ш). Достоверность результатов (Р) оценивали с применением I - критерия Стьюдента и и - критерия Манна-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2000). Различие считали значимым при вероятности (р <0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование специфической фармакологической активности

В серии предварительных экспериментов установлено, что острая токсичность (Е>Ь50) «Флаворена» при внутрибрюшинном введении белым крысам составляет 385,5 мг/кг (416,8^364,2), а при введении мышам -368,0 мг/кг (385,4-^350,6). При его внутрижелудочном введении в максимально возможной дозе 4500 мг/кг крысам и 4000 мг/кг мышам линии СВА гибели животных не наблюдали, что позволяет отнести испытуемый фитоэкстракт к группе малотоксичных веществ (Сидоров, 1973).

При исследовании влияния «Флаворена» на функциональное состояние почек интактных крыс установлено, что фитоэкстракт обладает наиболее выраженной диуретической активностью при его использовании в дозе 20 мг/кг (табл. 1).

Таблица 1

Влияние «Флаворена» на диуретическую функцию почек крыс

Группы животных Доза, мг/кг Диурез мкл/100 г/ч Увеличение диуреза, %

Контрольная (Н20) - 216,1± 12,43 -

Опытная 1 «Флаворен» 20,0 279,4 ± 14,42* 29,3

Опытная 2 (канефрон) 1,5 мл/кг 248,3 ± 11,15* 14,9

Примечание: - здесь и далее различия значимы по сравнению с данными контрольной группы при р < 0,05.

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, на фоне введения per os крысам «Флаворена» в дозе 20 мг/кг диурез повышается почти на 30% по сравнению с данными у крыс контрольной группы. При этом диуретическая активность «Флаворена» в указанной дозе несколько превосходила таковую у препарата сравнения канефрона. В дальнейшем эта доза была использована при проведении всех основных экспериментов.

Увеличение диуреза обусловлено повышением СКФ на 42,5 % и увеличением выведения ионов натрия с мочой в среднем на 28 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Вместе с тем, испытуемое средство не оказывало существенного влияния на канальцевую реабсорбцию и калийурез (табл. 2).

Таблица 2

Влияние «Флаворен» на СКФ, натрийурез и интенсивность канальцевой реабсорбции у интактных крыс

Группы животных Доза, мг/кг СКФ, мкл/ЮОг/мин , мг/мл Интенс-ть ка-нальц. реабсорбции, %

Контрольная (Н20) 92,3 ± 5,25 0,93 ± 0,04 96,1 ±6,15

Опытная «Флаворен» 20 мг/кг 131,5 ±8,81* 1,19 ±0,05* 96,5 ±7,38

В следующей серии экспериментов было установлено, что «Флаворен» обладает выраженной противовоспалительной активностью, оказывая влияние на все стадии воспалительного процесса. Так, его курсовое введение крысам в дозе 20 мг/кг на фоне острого асептического воспаления сопровождается уменьшением альтерации тканей при их повреждении уксусной кислотой и ускорением процесса регенерации, о чем свидетельствовало уменьшение площади кожно-мышечного дефекта на 2, 9 и 25 сутки наблюдения соответственно на 38, 42 и 34 %. Наряду с этим, «Флаворен» оказывает антиэкссудативное действие, уменьшая степень отека конечности, вызванного введением формалина, декстрана и гистамина соответственно на 44,43 и 54 % по сравнению с аналогичными показателями у животных в контроле. Антиэкссудативное действие «Флаворена» превосходило таковое у препарата сравнения. При определении влияния «Флаворена» на пролиферативные процессы установлено, что испытуемый фитоэкстракт в дозе 20 мг/кг угнетает развитие фиброзно-грануляционной ткани на 34%.

Фитоэкстракт оказывает стимулирующее влияние на показатели гуморального, клеточного и макрофагального звеньев иммунного ответа на фоне введения азатиоприна. При введении «Флаворена» отмечалось достоверное увеличение количества антителообразующих клеток, как в абсолютных значениях в 2,3, так и в относительных - в 1,9

раза по сравнению с данными у животных контрольной группы. Также фитосредство повышает индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа в 1,7 раза; фагоцитарный индекс в - 2,1 раза.

Наряду с этим, 2-кратное превентивное введение «Флаворена» в дозе 20 мг/кг на фоне 24 часовой иммобилизации оказывало стресс-протективное действие, препятствуя инволюции тимуса, гипертрофии •надпочечников и уменьшая количество язвенных повреждений слизистой оболочки желудка.

При исследовании мембраностабилизирующего действия «Флаворена» установлено, что под его влиянием в концентрации 1мг/мл степень перекисного гемолиза эритроцитов уменьшается в 4 раза.

С использованием модельных систем показано, что «Флаворен» в концентрации 375,12 мкг/мл обладает способностью восстанавливать аммония молибдат до фосфомолибденового комплекса, сопоставимой с таковой у аскорбиновой кислоты и гидрохинона, и оказывает выраженное антирадикальное действие по отношению к радикалам дифе-нилпикрилгидразина (ДФПГ) и супероксидным анион-радикалам, а также обладает хелатирующей активностью.

При определении влияния «Флаворена» на индуцированный апоптоз установлено, что его введение крысам в дозе 20 мг/кг на фоне ишемии/реперфузии почек крыс сопровождается снижением активности каспазы-3 в гомогенате коркового слоя почек в 1,6 раза, увеличением содержания АТФ на 28% по сравнению с аналогичными данными животных контрольной.

Исследование фармакотерапевтической эффективности.

Результаты исследования фармакотерапевтической эффективности «Флаворена» при токсической (сулемовой) нефропатии представлены в таблице 3. Интоксикация белых крыс сулемой сопровождается развитием выраженной азотемии, протеинурии, снижением диуреза и СКФ.

Введение «Флаворена» на фоне сулемовой нефропатии во все сроки (1,3 и 6 сутки) наблюдения оказывало выраженное гипоазоте-мическое действие. На 3 сутки эксперимента введение «Флаворена» способствовало снижению концентрации креатинина в сыворотке крови и повышению его содержания в моче практически в 2 раза, что свидетельствует об активном купировании азотемического синдрома. На фоне введения «Флаворена» отмечалось достоверное повышение СКФ, диуреза и снижение протеинурии во все сроки наблюдения, причем по многим показателям испытуемое средство значительно превосходило действие препарата сравнения.

Таблица 3

Влияние «Флаворена» на функциональное состояние почек у белых __крыс на фоне сулемовой нефропатии_

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (сулема + н2о) Опытная 1 (сулема+ «Флаворен») Опытная 2 (сулема+ канефрон)

3 сутки наблюдения

Креат. сыв.кр. мкмоль/ л 87,2 ± 6,52 693,2+52,43 321,5±41,25* 551,3+47,48

Креат. в моче, мкмоль/ л 4296,5±421,3 2735,4+ 317,27 4985,1±314,5* 3832,4± 348,37*

СКФ, мкл/ЮОг /мин 295,6±24,04 15,1 ± 1,14 80,2 ± 7,42* 31,3 ±2,54'

Диурез, мл/100г/ ч 0,36 ±0,016 0,23 + 0,024 0,31+0,011* 0,27 ± 0,036

Белок в моче, г/л 0,43±0,026 1,35+0,115 0,84+0,052* 1,22+0,131

Как следует из данных таблицы 4, интоксикация крыс сулемой вызывает значительную активацию свободнорадикальных процессов, о чем свидетельствуют повышение концентрации продуктов перокси-дации липидов в крови и гомогенате почек на фоне снижения активности ферментов эндогенной антиоксидантной системы и содержания восстановленного глутатиона в крови.

Курсовое введение крысам «Флаворена» в экспериментально-терапевтической дозе сопровождается выраженным антиоксидантным влиянием, на что указывает снижение концентрации МДА и диеновых конъюгатов в сыворотке крови, а также МДА в гомогенате почек животных опытной группы по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Одновременно, под влиянием испытуемого средства наблюдали повышение активности СОД, каталазы и

концентрации восстановленного глутатиона в крови животных опытной группы.

Таблица 4

Влияние «Флаворена» на показатели процессов СРО и состояние антиоксидантной системы белых крыс на фоне сулемовой нефропатии

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (сулема + Н20) Опытная 1 (сулема+ «Флаворен») Опытная 2 (сулема+ канефрон)

3 сутки эксперимента

МДА в гомог. почек, нмоль/г 15,6 ± 1,12 31,0 ± 2,21 14,5 ±0,83* 18,0 ±2,25*

МДА в сыв.кр., мкмоль/л 2,4 ±0,16 4,62 ± 0,34 3,15 ± 0,21* 3,58 ± 0,34

ДКв сыв.кр., усл.ед. 1,40 ±0,052 4,14±0,232 2,98±0,167* 3,57±0,324

Катал аза, мкат/л 4,10 + 0,310 2,13±0,172 4,67±0,280* 3,51±0,279*

СОД, мкмоль/л 27,0± 1,50 19,8±1,19 24,2±3,90* 23,8±2,30*

Восст. глутатион, ммоль/л 0,65±0,034 0,23±0,014 0,32±0,024* 0,21±0,024

Патоморфологические исследования почек животных позволили заключить, что «Флаворен» способствует сохранности базальной мембраны, ускорению элиминации некротических масс из просвета канальцев. На фоне введения испытуемого фитосредства отмечали также более высокую степень регенерации в почках.

В таблице 5 представлены результаты исследования влияния «Флаворена» на показатели функционального состояния почек на фоне постишемической нефропатии. Известно, что ишемия почек вызы-

вает выраженные нарушения их функционального состояния, характеризующиеся азотемией, протеинурией, снижением СКФ и диуреза.

Таблица 5

Влияние «Флаворена» на функциональное состояние почек крыс на фоне постишемической нефропатии на 3 сутки наблюдения

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (ишемия + Н20) Опытная 1 (ишемия + «Флаво-рен») Опытная 2 (ишемия +канефрон)

Диурез, мл/100 г час 0,51 ±0,044 0,34 ±0,02 0,45 ± 0,02* 0,42 ±0,01*

Белок в моче, г/л 0,38 + 0,017 1,48 ±0,125 0,72 ± 0,047* 1,12 ±0,156

Креатинин в крови, мкмоль/л 72,4 ± 5,73 278,3 ± 24,16 142,3 ± 12,97* 160,6 ± 11,65*

Креатинин в моче, мкмоль/л 4112,2 ± 433,5 3036,2 ± 252,45 5642,4 ± 347,67* 3652,0 ± 278,50

СКФ, мкл/100/мин 482,7 ± 35,70 62,2 ± 9,57 297,4 ± 24,82* 159,2 ± 14,67*

Курсовое введение крысам указанного полиэкстракта на фоне постишемической острой почечной недостаточности во все сроки исследования сопровождалось снижением содержания креатинина в сыворотке крови и повышением его концентрации в моче. Наряду с этим, в моче крыс опытной группы достоверно снижалось количество белка. Также отмечено увеличение СКФ и диуреза соответственно срокам наблюдения на 81, 32 и 37 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Ишемия почек крыс характеризуется активацией СРО, что подтверждается увеличением содержания продуктов пероксидации липидов в крови и гомогенате почек и снижением активности эндогенной антиоксидантной системы (табл. 6). Введение крысам «Флаворена» на фоне постишемической нефропатии сопровождалось снижением содержания продуктов ПОЛ в тканях, повышением активности антиокислительных ферментов и увеличением концентрации восстановленного глутатиона в крови.

Таблица 6

Влияние «Флаворена» на показатели процессов ПОЛ и состояние антиоксидантной системы белых крыс на фоне постишемической нефропатии на 3 сутки наблюдения

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная ишемия + Н20) Опытная 1 (ишемия + «Флаворен») Опытная 2 (ишемия + канефрон)

МДА в сыв. крови, мкмоль/л 2,1 ±0,11 3,5 ± 0,22 2,6 ±0,15' 2,7 ±0,12*

МДА в го-мог. почки, нмоль/г ткани 14,7 ±0,83 35,3 ±3,21 24,4 ± 2,27' 27,4 ± 1,86'

Диен, конь-югаты, ед. ОП 2,14 ±0,112 3,28 ± 0,235 2,72 ± 0,259* 3,19 ±0,276

Каталаза, мкат/л 3,40 ± 0,05 1,34 ± 0,156 2,61 ±0,280' 2,18± 0,184*

СОД, мкмоль/л 32,1 ±3,10 19,8 ± 1,19 27,2 ±2,68' 23,1 ± 2,36

Восст. глу- татион, ммоль/л 0,73 ± 0,048 0,38 ± 0,036 0,57 ±0,043' 0,46 ± 0,039

Так, концентрация МДА в сыворотке крови у животных 1 опытной группы была ниже, чем в контрольной в среднем на 25-29%, а в гомоге-нате коркового слоя почек - на 32, 30 и 37% соответственно срокам наблюдения. Активность каталазы в крови животных опытной группы превышала в 3,8; 1,9 и 1,3 раза аналогичные показатели в контрольной группе крыс. Активность СОД и содержание восстановленного глута-тиона у животных, получавших испытуемое средство, во все сроки эксперимента превосходили таковые у крыс контрольной группы.

Патоморфологические исследования показали, что постишемические повреждения характеризуются, в основном, гемодинамическими нарушениями коры почек; на фоне введения крысам исследуемого фитосредства указанные морфологические изменения были менее выражены.

Результаты исследования фармакотерапевтической эффективности «Флаворена» при гепаторенальном синдроме представлены в таблице 7. Как следует из данных таблицы, курсовое введение крысам «Флаворена» на фоне интоксикации тетрахлорметаном оказывает выраженное нефро-протекторное действие. Так, на 7 сутки исследования концентрация мочевины и креатинина в сыворотке крови животных опытной группы была на 21,6 и 18,9% меньше, чем в контроле, на фоне повышения СКФ и диуреза соответственно в 2,2 и 1,3 раза по отношению к контролю.

Таблица 7

Влияние «Флаворена» на функциональное состояние почек белых крыс при интоксикации тетрахлорметаном на 7 сутки опыта

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (ССЬ4 + Н20) Опытная (ССЬ4+ «Флаворен»)

Мочевина в сыворотке, ммоль/л 6,96 ± 0,425 14,72+0,871 11,54 ±0,323*

Креатинин в сыворотке, мкмоль/л 7-1,6 ±5,23 167,7± 19,43 136,0 ± 14,43

Креатинин в моче, ммоль/л 4,47 ±0,393 2,17 ±0,328 3,13 ±0,478*

СКФ, мкл/ЮОг/мин 509,8 ± 42,73 62,5 ± 5,38 141,9 ± 15,45*

Диурез, мл/100 г/ч 0,49 ± 0,012 0,29 ± 0,027 0,37 ± 0,023*

На 14 сутки эксперимента у животных контрольной группы сохранялось устойчивое нарушение функциональной состоятельности почек, тогда как у крыс опытной группы показатели функционального состояния почек характеризовались четкой тенденцией к нормализации. Под влиянием испытуемого средства наблюдали, одновременно, менее выраженные нарушения функционального состояния печени, показатели цитолиза гепатоцитов, синдрома холестаза были значимо ниже, чем в контрольной группе животных. Интоксикация белых крыс четыреххлористым углеродом сопровождается индукцией ПОЛ и снижением активности эндогенной антиокислительной системы организма. Данные представлены в таблице 8. Установлено, что курсовое введение крысам «Флаворена» на фоне гепаторенальной патологии оказывает антиоксидантное действие.

Таблица 8

Влияние «Флаворена» на концентрацию продуктов ПОЛ и активность каталазы и СОД в сыворотке крови белых крыс

при интоксикации тетрахлорметаном

Показатели Сроки, сут. Группы животных

Интактная Контрольная (ССЬ4+ Н20) Опытная (ССЬ4 + «Флаворен»)

ДК, ед.ОП 7 1,37 ±0,125 4,31 ±0,328 3,42 ±0,253*

МДА, мкмоль/л 1,37 ±0,173 2,73 ± 0,207 1,92 ±0,092*

Каталаза, мкат/л 2,27 ±0,213 1,23 ±0,093 1,85 ± 0,121*

СОД, мкмоль/л 18,4 ± 1,23 31,3 ±2,96 23,7 ± 1,85*

Так, на 7 сутки опыта концентрация диеновых коньюгатов и МДА в сыворотке крови у белых крыс, получавших испытуемое фитосредст-во, была ниже на 20,7 и 40,1 % соответственно, а активность каталазы в крови на 50,4 % выше по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. На 14 сутки эксперимента у животных контрольной группы происходило дальнейшее накопление продуктов пероксидации липидов и снижение активности каталазы, а в группе животных, получавших «Флаворен», наблюдали их значимое снижение.

Патоморфологические исследования почек показали, что интоксикация крыс терахлорметаном вызывает повреждение нефронов, которые характеризуются дистрофическими и некротическими изменениями, в основном, проксимальных канальцев на фоне гемоциркуля-торных расстройств. Введение животным «Флаворена» снижало выраженность указанных изменений в клетках канальцев нефрона.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Полученные в работе данные свидетельствуют, что «Флаворен» в экспериментально-терапевтической дозе обладает выраженной фарма-котерапевтической эффективностью при нефропатиях токсической, ишемической этиологии и гепаторенальном синдроме, о чем свидетельствует нормализация морфофункциональной состоятельности почек животных на более ранних сроках патологического процесса. В частности, введение животным испытуемого фитоэкстракта сопровождалось повышением диуретической функции почек; снижением азотемии, протеинурии, увеличением скорости клубочковой фильтрации,

что свидетельствует об улучшении гемодинамики почек. Курсовое введение животным «Флаворена» предупреждало развитие структурных повреждений почек, способствовало ранней инволюции патологических изменений и ускорению процессов регенерации в почках. В специальной серии экспериментов показано, что введение животным «Флаворена» предупреждает ранний апоптоз в почках на фоне увеличения пула АТФ. В реализации нефропротекторного действия испытуемого средства, как показали исследования, вносят вклад экстраре-нальные эффекты. Важным фактором нефрозащитного действия испытуемого средства является наличие у него выраженной противовоспалительной активности. Введение животным экстракта в условиях альтерации почек способствует ускорению репарации в почках и восстановлению структурной и функциональной целостности клеток. В реализации нефропротекторного действия «Флаворена» важное значение имеет поддерживаемый им иммуномодулирующий потенциал.

Одним из ключевых механизмов в нефропротекторном действии «Флаворена» является наличие у него мембраностабилизируюхцих свойств, которые обеспечиваются его выраженной антиоксидантной активностью, поскольку развитие нефропатий характеризуется оксидатив-ным стрессом с угнетением эндогенной антиокислительной системы организма (Мондодоев, 2009). Введение животным фитоэкстракта оказывает как прямое антиоксидантное действие, так и опосредованное, заключающееся в повышении активности ферментативного звена эндогенной антиокислительной защиты организма. Установленная радикалперехва-тывающая активность испытуемого средства имеет важное значение для объяснения молекулярных механизмов его нефропротекторного влияния, поскольку известно, что повреждающее действие свободные радикалы реализуют посредством инициирования свободнорадикальных реакций в биологических мембранах с последующим нарушением их морфофунк-циональной целостности (Меньшикова и соавт., 2008).

Указанные эффекты «Флаворена» обусловлены комплексом биологически активных веществ, прежде всего - полифенольной природы, а также полисахаридов, антоцианов и других БАВ, содержащихся в указанном полюкстракте.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что «Флаворен» оказывает выраженное нефропротектор-ное действие, нормализуя морфофункциональное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса благодаря широкому спектру его фармакологических свойств.

выводы

1. «Флаворен» в экспериментально-терапевтической дозе обладает диуретическим, гипоазотемическим, натрийуретическим, противовоспалительным, иммуномодулирующим, стресспротективным, мем-браностабилизирующим и антиоксидантным свойствами.

2. Курсовое введение животным «Флаворена» в экспериментально-терапевтической дозе при нефропатиях токсической, ишемической этиологии и гепаторенальном синдроме оказывает выраженное фармакотера-певтическое влияние, нормализуя морфофункциональное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса.

3. Одним из важных механизмов в нефропротекторном действии «Флаворена» является ингибирование процессов свободнорадикального окисления и активация эндогенной антиоксидантной системы организма, а также способность предупреждать ранний апоптоз в почках.

4. Функциональная состоятельность почек под влиянием «Флаворена» обусловлена его ренальными и экстраренальными факторами, обусловленными биологически активными веществами, содержащимися в указанном средстве.

Практические рекомендации

Нефропротекторные свойства «Флаворена» аргументируют целесообразность его внедрения в клиническую практику в качестве вспомогательного средства при комплексной фармакотерапии и фар-макопрофилактики заболеваний почек.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Gurzhapova А.А. Diuretic activity of plant remedy "The three red" / A.A. Gurzhapova // Abstract of the 4th international symposium on traditional medicine and innovative drugs «Erdos forum on development of International Traditional medicine». - Erdos, 2009. - P.30.

2. Mondodoev A.G. Mechanisms of nephroprotective effect of plant remedies in experimental nephropathies /A.G. Mondodoev, S.V. Lemza, Yu.E. Makushkina, A.A. Gurzhapova, I.B. Baginova //Abstracts of International scientific conference "Current situation and future trends of drug research and development from natural sources". - Ulaanbaatar, 2010. - P. 69-71.

3. Mondodoev A.G. Antioxidant properties of plant nephroprotective remedies /A.G. Mondodoev, A.A. Gurzapova, Yu. E. Makushkina, I.B. Baginova //Abstracts of International scientific symposion "The 5th

International Symposium on "Present Situation and Future Status of Mongolian Traditional Medicine Development". - Ulaanbaatar, 2011. - P. 155.

4. Мондодоев А.Г. Механизмы нефропротекторного действия растительных лекарственных средств при экспериментальных нефропатиях /А.Г. Мондодоев, C.B. Лемза, Т.А. Ажунова, Ю.Э. Макушкина, A.A. Гуржапова, И.В. Багинова //Мат. 2-й Международной научной конференции, посвященной 30-летию Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. - Улан-Удэ, 2011. - С. 81-82.

5. Лемза C.B. Влияние растительных средств на активность ферментов антиоксидантной защиты in vitro /C.B. Лемза, Т.А. Ажунова, A.A. Торопова, Ю.Э. Макушкина, A.A. Гуржапова //Мат. 2-й Международной научной конференции, посвященной 30-летию Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. - Улан-Удэ, 2011. - С. 75-76.

6. Мондодоев А.Г. Влияние нового фитосредства на функциональное состояние почек у белых крыс при интоксикации сулемой /А.Г. Мондодоев, Л.Н. Шантанова, С.М. Николаев, C.B. Лемза, Т.А. Ажунова, A.A. Гуржапова, Ю.Э. Макушкина, И.Б. Багинова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - №2 (72). - С. 189 - 193.

7. Мондодоев А.Г. Экспериментальная фармакотерапия повреждений почек лекарственными растительными средствами / А.Г. Мондодоев, C.B. Лемза, С.М. Николаев, A.A. Гуржапова, Ю.Э. Макушкина, И.Б. Багинова //Мат-лы междун. научн. конф., поев. 15-летию Бурятского государственного университета «Актуальные исследования Байкальской Азии». - Улан-Удэ, 2010. - С. 147-152.

8. Мондодоев А.Г. Влияние новых лекарственных средств на течение экспериментальных нефропатий /А.Г. Мондодоев, C.B. Лемза, Ю.Э. Макушкина, A.A. Гуржапова, И.Б. Багинова // Мат-лы III Всеросс. науч.-практич. конф. с междун. участием «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ, 2010. - С. 312-318.

9. Гуржапова A.A. Противовоспалительное влияние нового растительного средства /A.A. Гуржапова, В.М. Болдогуев //Мат-лы III Всеросс. науч.-практич. конф. с междун. участием «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ, 2010. - С. 333-334.

10. Хобракова В.Б. Иммуномодулирующие свойства фитосредства тибетской медицины при экспериментальной иммунодепрессии /В.Б. Хобракова, A.A. Гуржапова //Российский аллергологический журнал. - 2011, №4, вып.1. - С. 404-405.

Подписано в печать 21.11.2011 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,3печ. л. Тираж 100, Заказ № 68.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН. 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.

Широкая распространенность и наблюдающийся рост патологии органов мочевыделительной системы определяет необходимость совершенствования фармакотерапии заболеваний указанного профиля. По статистическим данным в России в 2000 г. на 100 тыс. взрослого населения приходилось 8794,6 больных с заболеваниями органов мочеполовой системы, а в 2009 г - 11914,0; из них 1519,8 с патологией почек (Заболеваемость населения России., 2000; 2009). За пятилетний период (2005-2009) обращаемость к врачу-нефрологу возросла в 1,8 раза, распространенность заболеваний почек среди населения - в 5,8 раза и составила 6,1%о (Ведерникова и соавт., 2010).

Нефропатии, особенно хронические формы, характеризуются тяжелым течением, развитием рецидивов заболевания, приводящим к длительной потере трудоспособности и инвалидизации (Баранов, Сергеева, 2007; Шилов, 2008; Simon et al., 2004). Несмотря на использование современных методов лечения гломерулярных и тубулоинтерстициальных заболеваний почек, в 1,5 % случаев развивается почечная недостаточность, при которой летальность достигает 50 % (Рябов, 2000).

Помимо широкой распространенности нозологических форм заболеваний почек, нефропатии встречаются при многих патологических состояниях: интоксикациях (Лобанов, 2010), шоковых состояниях, заболеваниях печени (Добронравов, Дунаева, 2008; Цыгин, 2009; Perico et all., 2009), сахарном диабете (Маслова и соавт. 2010; Parving, Lewis, 2006), у больных с сердечной недостаточностью (Батюшин, Врублевская, 2010; Кузьмин, 2011), встречаются ВИЧ-ассоциированные нефропатии (Гоженко и соавт., 2010; Гаджикулиева и соавт., 2011). В настоящее время чаще отмечаются случаи лекарственной нефропатии (Краснова, Сагинова, 2007; Zorov, 2010). Социальная значимость нефрологической патологии, определяется ее значительным омоложением, что подтверждается данными Игнатовой, Коровиной (2007), Петросяна, (2008).

Фармакотерапия и фармакопрофилактика заболеваний почек требует осторожного подхода ввиду снижения функциональной состоятельности почек при их повреждениях и сама медикаментозная терапия может явиться причиной развития рецидивов заболевания. В этой связи основным требованием к нефропротекторным средствам является отсутствие токсичности и нежелательных побочных явлений при их применении. Кроме этого, сложный патогенез заболеваний почек предполагает комплексное фарма-котерапевтическое воздействие на разные звенья патологического процесса (Мондодоев, 2009).

Этой задаче в полной мере отвечают средства природного происхождения, поскольку они оказывают комплексное влияние на патологический процесс и обладают минимальным побочным действием. С этим обстоятельством связано значительное повышение интереса к растительным пре-< паратам. Так, доля медикаментов растительного происхождения на фармацевтических рынках расширяется и имеет постоянную тенденцию к увеличению в структуре фармацевтических средств (Афанасьева, Нетцева, 2009). Вместе с этим, выбор препаратов, оказывающих комплексное неф-ропротекторное действие, в России весьма ограничен.

Учитывая широкое распространение заболеваний почек, их прогрессирующее течение, приводящее к развитию почечной недостаточности, тяжелый медико-социальный прогноз, недостаточное количество нефро-протекторных препаратов, актуальной задачей остается разработка и внедрение новых эффективных и безвредных лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний почек.

В связи с этим, актуальной задачей остается разработка и внедрение новых эффективных и безопасных лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний почек. Одним из перспективных направлений в разработке новых лекарственных средств является перевод тибетских многокомпонентных сборов, имеющих многовековой опыт применения в лечебной практике, в экстракционные препараты. Они представляют собой сумму биологически активных веществ в концентрированном виде и сохраняют все преимущества многокомпонентных лекарственных средств: кинетический синергизм в действии ингредиентов, соответствие мультифакторности заболеваний, воздействие на организм больного как корригирующей лекарственной системы, отсутствие токсичности и побочных нежелательных эффектов (Николаев, 2008).

В связи с этим, нами разработано новое нефропротекторное средство растительного происхождения в виде полиэкстракта, состоящего из сухих экстрактов, полученных из корней и корневищ марены красильной (Rubia íinctorium L.), надземной части мари остистой (Chenopodhim aristatum L.) sin1. (Teloxis aristata (L.) Мок.), красных листьев бадана толстолистного

Bergenia crassifolia Fritsch.), в соотношении 1:1:1, условно названное i

Флаворен». Сухие экстракты компонентов «Флаворена» получены путем■■ экстракции из растительного сырья водно-спиртовой смесью в концентрации 40-60%, с последующим упариванием полученного экстракта в вакууме и быстрой сушкой. Экстракт содержит следующие группы биологически активных веществ; флавоноиды (10,7%), антрахиноны, антоцианы, i танины, фенологликозиды, углеводы, аминокислоты и др. (Корнопольцева и соавт. 2008).

Целью настоящей работы явилось определение фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности «Флаворена» при повреждениях почек, а также выявление возможных механизмов его нефро-протекторного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить спектр фармакологических свойств «Флаворена»;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность «Флаворена» при неф-ропатиях токсической, ишемической этиологии и гепаторенальном синдроме;

- выявить основные механизмы нефропротекторного действия «Флаворена»;

Научная новизна. Работа представляет собой исследование фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности нового нефропротекторного средства растительного происхождения, полученного на основе тибетской рецептуры по ресурсосберегающей и щадящей технологии. Установлено, что «Флаворен» в экспериментально-терапевтических дозах обладает диуретической, натрийуретической, ги-поазотемической, противовоспалительной, иммуномодулирующей, мембран остаби л изирующей, антиоксидантной активностью. Показано, что указанный фитоэкстракт обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при нефропатиях ишемической, токсической этиологии и гепаторенальном синдроме, способствуя нормализации морфофункцио-нального состояния почек животных. Установлено, что одним из ведущих • механизмов в нефропротекторном действии «Флаворена» является наличие у него мембраностабилизирующей активности, реализация которой связана с ингибированием свободнорадикальных процессов, обусловленным высоким содержанием биологически активных веществ, обладающих как прямым антирадикальным действием, так и способностью повышать -активность эндогенной антиокислительной системы организма. В дополнительной серии экспериментов показано снижение активности процессов индуцированного апоптоза в почках под влиянием испытуемого средства, обусловленное активацией энергетических процессов.

Практическое значение. На основании проведенных фармакологических исследований подготовлена и представлена заявка на предполагаемое изобретение в Роспатент «Средство, обладающее гипоазотемическим и диуретическим свойствами» за № 2011131780/17 от 05.05.2011. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 12.09.2011).

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

Международной научной конференции "Current Situation and future trends of drug research and development from natural sources" — Ulanbaatar, Mongolia. — 2010

3й - Всероссийской научной конференции «Развитие традиционной медицины в России» - Улан-Удэ, Россия. — 2010

2й Международной научной конференции «Разнообразие почв и био-1 ы северной и центральной Азии» - Улан-Удэ, Россия. — 2011.

5й Международной научной конференции "Present Situation and Future Status of Mongolian Traditional Medicine Development" — Ulanbaatar, Mongolia. - 2011

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, из которых 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с программой № 6.11.1.3 «Молекулярно — клеточные механизмы повреждений органов мочеполовой системы и коррекция их средствами традиционной медицины».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. «Флаворен» обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, мембраностабилизирующей, гипокоагуляционной активностью.

2. Курсовое введение «Флаворена» оказывает выраженный фарма-котерапевтический эффект при поражениях почек ишемической, токсической этиологии и гепаторенальном синдроме, нормализуя морфофункцио-нальное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса.

3. Фармакотерапевтическая эффективность «Флаворена» обусловлена как ренальными фармакологическими эффектами, так и экстраре-нальной неспецифической фармакологической активностью.

4. Одним из базисных молекулярно-клеточных механизмов нефро-протекторного действия «Флаворена» является его способность ингибиро-вать процессы свободнорадикального окисления липидов.

ВЫВОДЫ

1. «Флаворен» в экспериментально-терапевтической дозе обладает диуретическим, гипоазотемическим, натрийуретическим, противовоспалительным, иммуномодулирующим, стресспротективным, мембрано-сгабилизирующим и антиоксидантным свойствами.

2. Курсовое введение животным «Флаворена» в эксперименталь-нотерапевтической дозе при нефропатиях токсической, ишемической этиологии и гепаторенальном синдроме оказывает выраженное фарма-котерапевтическое влияние, нормализуя морфофункциональное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса.

3. Одним из важных механизмов в нефропротекторном действии «Флаворена» является ингибирование процессов свободнорадикального окисления и активация эндогенной' антиоксидантной системы организма, а также способность•<предупреждать ранний апоптоз в почках.

4. Функциональная состоятельность почек под* влиянием «Флаворена» обусловлена его ренальными' и экстраренальными факторами, обусловленными биологически активными веществами, содержащимися в указанном средстве.

Внедрение полученных данных в практику На основании проведенных фармакологических исследований подготовлена и представлена заявка на предполагаемое изобретение в Роспатент «Средство, обладающее гипоазотемическим и диуретическим свойствами» за № 2011131780/17 от 05.05.2011. Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета Федерального агентства по образованию и социальному развитию.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют, что «флаворен» обладает широким спектром фармакологических свойств: диуретическим, гипоазотемическим, салуретическим, противовоспалительным, иммуномодулирующим, стресспротективным, противоапоптоти-ческим, энерготропным, мембраностабилизирующим и антиоксидантным.

Исследование фармакотерапевтической эффективности «флаворена» показало, что его курсовое введение в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 20 мг/кг, при нефропатиях токсической, ишемической этиологии и гепаторенальном синдроме оказывало выраженное нефропротекторное влияние, характеризующееся'нормализацией морфофункционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса. В частности, на фоне введения испытуемого фитоэкс-гракта повышался диурез, увеличивалась скорость клубочковой фильтрации, снижались азотемия и протеинурия; также происходило уменьшение выраженности деструктивных изменений в нефронах.

Установлено, что наиболее важным аспектом в механизме нефропро-текторного действия «флаворена» является наличие базисной мембрано-стабилизирующей активности, реализация которой связана с антиоксидантным действием комплекса биологически активных веществ в основном фенольной природы. В свою очередь, механизм антиоксидантной активности «флаворена» обусловлен как прямым радикалперехватывающим действием полифенольных соединений, так и опосредованным, связанным с активацией системы антиоксидантной защиты организма. Установлено также, что одним из возможных механизмов нефропротекторного действия «флаворена» является ингибирование ферментов, индуцирующих апопго-тический процесс и повышении клетками нефрона энергопродукции при повреждениях почек.

Полученные данные о выраженной нефропротекторной активности «флаворена» аргументируют целесообразность его применения в комплексной фармакотерапии нефропатий различной этиологии, а также для профилактики рецидивов заболеваний почек.