Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Молекулярные и клеточные основы иммунопатогенеза Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у населения Республики Хакасия

ДИССЕРТАЦИЯ
Молекулярные и клеточные основы иммунопатогенеза Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у населения Республики Хакасия - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Молекулярные и клеточные основы иммунопатогенеза Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у населения Республики Хакасия - тема автореферата по медицине
Агеева, Елизавета Сергеевна Томск 2012 г.
Ученая степень
доктора медицинских наук
ВАК РФ
14.03.03
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Молекулярные и клеточные основы иммунопатогенеза Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у населения Республики Хакасия

На правах рукописи

АГЕЕВА Елизавета Сергеевна

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ ОСНОВЫ ИММУНОПАТОГЕНЕЗА HELICOBACTER PYLORI-АССОЦИИРОВАННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У НАСЕЛЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ ХАКАСИЯ

14.03.03 - патологическая физиология 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск 2012

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный университет Минздравсоцразвития России», федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова»

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук

Рязанцева

Наталья Владимировна

Штыгашева

Ольга Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук,.. профессор

Агафонов

Владимир Иванович

Савченко

Андрей Анатольевич

Плешко

Раиса Ивановка

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт терапии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск).

Защита состоится «_»__2012 г. в_часов на заседании

диссертациошюго совета Д 208.096.01 при Сибирском государственном медицинском университете (643050, г. Томск, ул. Московский тракт, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета

Автореферат разослан «_»_2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Петрова И. В.

РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА

2012_

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Helicobacter pylori является ведущим этиологическим фактором язвенной болезни и хронического гастрита [FConturek P.C., 2006; Хомери-ки С.Г., 2008]. Результаты широкомасштабных исследований показали, что на долю язвенной болезни, ассоциированной с инфекцией Helicobacter pylori, приходится 70-80 % случаев выявления дуоденальных язв и 50-60 % язв желудка [Suerbaum S., 2002]. Появляется все больше доказательств той роли, которую играет инфекция Helicobacter pylori в возникновении и развитии рака желудка [Malekzadeh R., 2004; Hansen S., 2007; Янкин A.B., 2010]. Исследователи связывают с инфицированием Helicobacter pylori 100 % случаев выявления проксимального рака желудка у японцев [Uedo N.. 2003].

Ключевым звеном в развитии гастродуоденальной патологии является не только длительная инфекция Helicobacter pylori в макроорганизме, но и непосредственное участие в этом процессе клеток иммунной системы. Механизмы дизрегуляции иммунного ответа макроорганизма при длительном инфицировании Helicobacter pylori связаны с прямым цитопатическим действием патогена, приводящим к поляризации иммунного ответа по Thl-пути и выработке соответствующего спектра цитокинов (IFNy, TNFa, IL-1, IL-2, IL-8, IL-10). Детерминация иммунного ответа no Thl-клеточному типу оказывает решающую роль в иммунопатогенезе заболеваний, связанных с Helicobacter pylori-инфекцией [Lohoff М., 2000; Кондрашина Э.А., 2002]. Действие цитокинов, с одной стороны, вызывает неадекватную активацию иммунной системы: усиление апоптоза иммунных клеток с их последующей элиминацией [Согтеа Р., 1997; Suares G., 2006], а, с другой, - дисбаланс между процессами программированной гибели желудочных эпителиоцитов и их пролиферацией [Васильев Ю.В., 2006; Хоме-рики С.Г., 2006]. Усиление гибели эпителиоцитов приводит к усугублению язвенных дефектов слизистой оболочки желудка. И, наоборот, преобладание про-лиферативных процессов при хроническом воспалении эпителия слизистой оболочки желудка увеличивает риск развития рака [Нургалиева Б.К., 2005].

Характер взаимодействия Helicobacter pylori и организма человека имеет популяционные отличия. В литературе описаны феномены «африканская загадка», «азиатская загадка», «северная загадка», сущность которых заключается в «консервации» макроорганизмом патогенных штаммов Helicobacter pylori при хронической инфекции [Mitchell Н., 2002; Hellmig S., 2003; Perez-Perez G.L, 2004; Цуканов В.В., 2007, 2011]. Подобные результаты были выявлены при эпидемиологическом исследовании распространенности язвенной болезни у населения Республики Хакасия [Штыгашева О.В., 2004, 2005]. Было установлено, что распределение цитотоксических штаммов Helicobacter pylori и ассоциация

bacter pylori-сопряженными хроническим гастритом и язвенной болезнью, характеризующиеся снижением базальной и резервной продукции IL-2 у хакасов и увеличением продукции IL-4, IL-10 - у европеоидов. Выявлены нарушения реализации спонтанного и индуцированного перекисью водорода in vitro апоп-тоза лимфоцитов крови, полученных у хакасов и европеоидов, больных Helicobacter pylori-ассоциированными хроническим гастритом и язвенной болезнью. Показано, что иммунофенотипический состав лимфоцитов крови характеризуется снижением числа CD3+-, CD4+- и СБ8+-лимфоцитов у хакасов как при хроническом гастрите, так и при язвенной болезни. У европеоидов изменения субпопуляционного состава лимфоцитов характеризуются увеличением количества CD4+- и С08+-лимфоцитов крови у пациентов с хроническим гастритом и язвенной болезнью.

Впервые проведено исследование распределения частоты полиморфизма генов цитокинов (С+3953Т IL-lß, IL-lRa VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-6, -251 T>A IL-8) у коренных и пришлых жителей Республики Хакасия. Установлена связь между предрасположенностью к Helicobacter pylori-ассоциированным язвенной болезни и хроническому гастриту и носительством полиморфизмов генов С+3953Т IL-lß, IL-lRa VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-6, -251 T>A IL-8 у хакасов и европеоидов. Впервые выявлены ассоциации между носительством полиморфизма генов интерлейкинов и инфицированием этиологически-значимыми для развили.язвенной болезни генотипами возбудителя (cagA Helicobacter pylori - у хакасов и vac A sls2 Helicobacter pylori - у европеоидов).

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенного исследования позволили выявить взаимосвязь между генетическими особенностями патогена и ДНК-маркеров вовлеченности полиморфных вариантов генов цитокинов, их роль в иммунопатогенезе Helicobacter pylori-ассоциированных хронического гастрита и язвенной болезни с учетом этно-популяционных различий у коренного и пришлого населения Республики Хакасия.

Полученные фундаментальные знания об иммуногенетических факторах, обладающих протективным эффектом и определяющих риск прогрессирования и хронизации язвенной болезни и хронического гастрита представляют основу для разработки новых подходов к прогнозированию клинического течения Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний, у хакасов и европеоидов, а также технологии персонализированной терапии иммунных нарушений. Идентификация полиморфизмов генов позволит в дальнейшем обоснованно определить показания для назначения эрадикационной терапии, что является достаточно важным фактором в условиях возрастающей резистентности к антибиотикам.

Положения, выносимые па защиту:

1. Различия гастродуоденальной патологии (хронического гастрита, язвенной болезни) у европеоидов и хакасов обусловлены генетическими особенностями Helicobacter pylori. V хакасов при язвенной болезни превалируют cagA, при хроническом гастрите - m2 vacA штаммы Helicobacter pylori. У европеоидов при язвенной болезни чаще встречаются sls2 vacA, при хроническом гастрите - ml vacA штаммы Helicobacter pylori.

2. Нарушения функциональных свойств компонентов локального (на уровне органа-мишени) и системного иммунитета у пациентов с хроническим гастритом и язвенной болезнью, ассоциированными с Helicobacter pylori, носят однонаправленный характер и различаются у представителей разных этнических групп (хакасы, европеоиды).

3. Распространенность полиморфизмов генов цитокинов у коренного и пришлого населения Республики Хакасия различается. У хакасов риск развития язвенной болезни ассоциирован с полиморфизмами -330 T/G IL-2 (генотип GG) и -251 Т>А IL-8 (генотип А А); у европеоидов - с С+3953Т IL-ip (генотип СС), IL-IRa VNTR (генотип R2R3) и -174 G>C IL-6 (генотип СС). Предикторами хронического гастрита у хакасов являются полиморфизм гена - С+3953Т IL-ip (генотип СТ); у европеоидов - IL-IRa VNTR (генотип R2R3) и -330 T/G IL-2 (генотип GT).

Апробация и реализация работы. Результаты проведенного исследования докладывались и обсуждались на межрегиональной научно-практической конференции «Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы» (Абакан, 2008, 2011), научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Е.Ф. Ларина «Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и патологии» (Томск, 2007), международной конференции «Генетика человека и патология» (Томск, 2007), VIII, EX, X, XI Восточно-Сибирских гастроэнтерологических конференциях с международным участием «Клинико-эпидемиологичсские и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения (Красноярск, 2008; Иркутск, 2009; Абакан, 2010; Иркутск, Чита, 2011), Всероссийской научной конференции «Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008), XI, XII, XIII, XIV научно-практических конференциях «Актуальные проблемы медицины» (Абакан, 2008; 2009; 2010; 2011), итоговой научно-практической конференции ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Кызыл, 2008; Абакан, 2009; Красноярск 2010), XXIth, XXIIth, XXIIIth, XXIVth International Workshop on Helicobacter and related bacteria in chronic digestive inflammation and gastric cancer (Рига, 2008; Порто, 2009; Роттердам, 2010; Дублин, 2011), XIV и XV Российских Гастроэнтерологических Неделях (Москва, 2008; 2009), Всероссийской научно-практической конференции «Вопросы патогенеза

типовых патологических процессов» (Новосибирск, 2009; 2010), Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2009), Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 2010; Абакан, 2011), Третьем съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных сил Российской Федерации (Санкт-Петербург, 2010), Международной конференции «3-е тысячелетие: Взгляд молодых ученых» (Санкт-Петербург, 2010), XII International Euroasian Congress of Surgery and Gastroenterology (Баку, 2011).

Исследование выполнено в рамках проекта ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (проект «Разработка технологической платформы молекулярной диагностики и лечения социально значимых заболеваний и подготовка на ее основе научно-исследовательских кадров для молекулярной медицины», ГК № 02.740.11.0311; фанта РФФИ № 09-04-98011 р_сибирь._а - Региональный конкурс Сибирь «Исследование роли патогенных фаеторов Helicobacter pylori для превенции язвенной болезни и рака желудка у коренного и пришлого населения Хакасии» (2009-2010).

Основные положения и выводы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры фундаментальной медицины и гигиены в курсе «Патофизиология», в курсе «Микробиология, иммунология и вирусология», кафедры внутренних болезней для студентов, обучающихся по специальности «Лечебное дело» Медико-психолого-социального института ФГБОУ ВПО «ХГУ им. Н.Ф. Катанова»; внедрены л. учебный процесс кафедры фундаментальных основ клинической медицины ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцраз-вития России в разделах «Современные проблемы медико-биологической науки» и «Молекулярные основы патологии».

Публикации. По теме диссертации опубликованы 64 работы, из них 15 статей в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, определенных ВАК РФ, монография «Гены и болезни хакасов» и 45 статей и тезисов в материалах конференций, конгрессов и съездов.

Личный вклад автора. Автором были выполнены следующие этапы работ: анализ данных отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, выделение и культивирование лимфоцитов крови, оценка содержания TNFo, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10 в сыворотке крови и в супернатантах клеточных культур методом иммуноферментного анализа, оценка апоптотической гибели лимфоцитов крови (спонтанного и индуцированного перекисью водорода), выделение ДНК и проведение рестрикционного анализа полиморфизма генов интерлейкинов С+3953Т IL-lß, ILl-Ra VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G/C IL-6, -251 T/A IL-8, выделение ДНК из биоптатов слизистой оболочки желудка и определение субтипов cagA, sls2 и mlm2 vacA Helicobacter pylori методом поли-меразной цепной реакции, статистический анализ результатов, написание диссертации.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 256 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов и библиографического списка. Работа содержит 63 рисунка и 51 таблицу. Библиографический указатель включает 363 источника (98 - отечественных и 265 -иностранных).

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу работы положены результаты комплексного клинико-лабораторного обследования 201 (102 мужчин и 99 женщин) больного хроническим гастритом и язвенной болезнью, в возрасте от 18 до 55 лет (средний возраст - 42,0±4,1 года). Обследованный контингент представлен двумя популяциями: хакасы (монголоиды или коренное население) и остальные жители Республики Хакасия. С учетом того, что во второй популяции более 95 % составляли русские, украинцы и белорусы, мы обозначили данную группу как «европеоиды». В качестве синонима мы применяли термин «пришлое население»,

Набор клинического материала осуществлялся при непосредственном участии врачей ГУЗ «Хакасская Республиканская больница им. Г.Я. Ремишев-ской»: д-ра мед. наук, врача высшей категории, заведующей Ш терапевтическим отделением (1993-2009 гг.) О.В. Штыгашевой, врача этого же отделения H.A. Россовай, канд. мед. наук, врача высшей категории, заведующего эндоскопическим отделением H.H. Буторина, врача высшей категории, заведующего клинико-диагностической лабораторией В.М. Иптышева.

Ряд обследованых пациентов находились на стационарном лечении в III терапевтическом отделении ГУЗ «Хакасская Республиканская больница им. ГЛ. Ремишевской» (главный врач - В.Ф. Костюш). Также были обследованы жители Таштыпского (Матур, Анчуль, Таштып), Аскизского (Усть-Есь, Есино, Усть-Чуль, Оггы, Нижняя и Верхняя Тея, Иммыш, Кызлас) и Ширинского (Шира, малый Спирин, Топаново) районов Республики Хакасия в ходе научно-медицинских экспедиций (ноябрь 2007 г., март 2008 г.).

Исследование проводилось на кафедре фундаментальной медицины и гигиены ФГБОУ ВПО «ХГУ им. Н.Ф. Катанова» (ректор - д-р мед. наук О.В. Штыгашева, г. Абакан), в Научно-образовательном центре молекулярной медицины ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России (ректор - академик РАМН, д-р мед. наук, профессор В.В. Новицкий, г. Томск). Иммуногисто-химическое исследование выполнено под руководством заведующего кафедрой патологической анатомии с курсом клинической патологии д-ра мед. наук, профессора A.B. Кононова ГБОУ ВПО ОмГМА Минздравсоцразвития России

(ректор - д-р мед. наук, профессор А.И. Новиков, г. Омск). Рестрикционный анализ был выполнен на базе лаборатории популяционной генетики НИИ медицинской генетики СО РАМН под руководством д-ра биол. наук В.А. Степанова (директор - академик РАМН, д-р мед. наук, профессор В.П. Пузырев, г. Томск) и на кафедре фундаментальной медицины и гигиены ФГБОУ ВПО «ХГУ им. Н. Ф. Катанова».

В I группу обследованных был включен 71 пациент (36 хакасов и 35 европеоидов) с диагнозом язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (ЯБ), во II группу - 130 пациентов (61 хакас и 69 европеоидов) с хроническим поверхностным антральным гастритом (ХГ).

Диагноз ЯБ устанавливался в период обострения заболевания на основании клинических, эндоскопических и морфологических данных. Материал для морфологического исследования забирался во время ЭФГДС с прицельной биопсией из пилорического отдела, большой кривизны и малой кривизны (области угла) тела желудка аппаратом «Olympus-10» (Япония). Для исследования брали 3 биоптата из антрального отдела и тела желудка в каждой контрольной точке на границе здоровой и пораженной ткани.

Диагноз ХГ в острый период заболевания устанавливался при морфологическом исследовании биоптатов слизистой из трех отделов желудка (пилориче-ский отдел, малая кривизна, большая .кривизна) в соответствии с классификацией, разработанной на основе Сиднейской системы [Dixon M.F., 2005].

Обязательным критерием включения в группу исследования было наличие у пациентов Helicobacter pylori (HP). Больным, включенным в группы исследования, не должна была проводиться эрадикационная терапия, а также лечение следующими препаратами: антибактериальными, нестероидными противовоспалительными, ингибиторами протонной помпы, кортикостероидами (в течение шести предшествующих месяцев). Обязательным было информированное согласие на участие в исследовании.

Контрольной группой служили 60 здоровых доноров-добровольцев (30 хакасов и 30 европеоидов), сопоставимых по полу и возрасту.

Материалом для исследования являлась венозная кровь и биоптаты слизистой оболочки желудка. Кровь забирали утром натощак из локтевой вены в количестве 10 мл в пробирку, содержащую 2,5 % раствор ЭДТА. Биоптаты для выделения ДНК помещали в сухой эппендорф и затем замораживали при температуре -20 "С. Для гистологического исследования биопсийный материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине, забуференном по Р. Лилли.

На первом этапе исследования проводили идентификацию HP. Присутствие бактерий должно было быть подтверждено с помощью хотя бы одного из четырех методов: быстрого уреазного теста, серологического - определение

специфических IgG HP в сыворотке крови («Им-Ди Спектр», г. Новосибирск), бактериоскопического исследования биоггтатов слизистой оболочки желудка и/или определения видов и субтипов HP cagA, vacA si, vacA s2, vacA ml, vacA m2 в биоптатах слизистой оболочки желудка методом ПЦР («Хеликопол» НПФ «Литех», г. Москва) (табл. 1).

На втором этапе исследования проводили оценку наличия маркеров CD4+ (клон RTU-CD4-1F6 «Novocastra», Великобритания), CD8+ (клон RTU-CD8-295 «Novocastra», Великобритания), CD20+ (клон L26 «DAKO», Дания), Ki-67 (клон «М1В-1 DAKO», Дания), Вс1-2 (клон 124 «DAKO», Дания), СРР-32 (клон JHM62 «Novocastra», Великобритания) в лимфоцитах клеточного инфильтрата слизистой оболочки желудка в биоптатах иммуногистохимическим методом. Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера в течение 15 сек. -1 мин. Учет содержания маркеров в мононуклеарных клетках собственной пластинки слизистой оболочки желудка проводили определением процента положительно окрашенных клеток (с ядерной и цитоплазматической метками в зависимости от использованного маркера) (табл. 1).

В крови оценивали иммунофенотипический состав лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+) методом проточной лазерной цитофлуориметрии с применением моноклональных антител («R&D Systems», США). Параметры напряжения для регистрации показателей на проточном цитометре задавали согласно указаниям в инструкции к набору. Результаты выражали в относительных (%) и абсолютных (тыс./мкл) значениях.

Содержание цитокинов (TNFa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10) в сыворотке крови определяли методом ИФА согласно приложенной инструкции («Ргосоп», г. Санкт-Петербург). Затем проводили оценку содержания цитокинов (IL-2, IL-4, IL-10) в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови (без добавления митогена для определения спонтанной продукции цитокинов и с добавлением 10 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА) («Difco», Германия) для активации лимфоцитов при определении индуцированной продукции цитокинов (Хаитов Р.М., 2005]). Учет результатов проводили с использованием спектрофотометра Immunochem 2100 («ThermoLabSistems», Финляндия). Результаты выражали в пкг/мл.

Оценивали спонтанный и индуцированный апоптоз лимфоцитов крови. Для индукции апоптотической гибели использовали неспецифический индуктор апоптотической гибели - перекись водорода в концентрации 0,01 %. Учет апоптотической гибели лимфоцитов крови проводили с использованием световой микроскопии и окрашивания гематоксилин-эозином [Меньшиков В.В., 1997]. При анализе использовали критерии, характеризующие кариопатологи-ческие и цитопатологические изменения в клетках.

Таблица 1

Распределение здоровых доноров и пациентов в зависимости от методов исследования

Методы исследования Европеоиды Хакасы

Здоровые дошры Больные Здоровые доноры Больные

ХГ | ЯБ ХГ | ЯБ

1. Идентификация Helicobacter pylori

Быстрый уреазный тест Не проводилось 69 35 Не проводилось 61 36

Цитологический метод определения НР в мазках-отпечатках биоптатов слизистой оболочки желудка Не проводилось 20 20 Не проводилось 20 20

Определение специфических ДО к НР в сыворотке крови метолом иммуно-ферментаого анализа 30 69 35 30 61 36

Определение видов и субтипов НР в биоптатах слизистой оболочки желудка методом полимеразной цепной реакции Не проводилось 29 18 Не проводилось 27 21

IL Оценка морфо-фуякциональньа свойств слизистой оболочки желудю

Морфометрия структурных элементов слизистой оболочки желудка Не проводилось 30 19 Не проводилось 28 22

Определение маркеров апоптоза (Вс1-2, СРР-32) и пролиферации (К>67) в биоптатах методом иммуно-гистохимии Не проводилось 20 20 Не проводилось 20 20

Определение СС>-маркеров (СГН+, С08+, С020+) в биоптатах слизистой оболочки желудка методом иммуно-гистохимии Не прОвск" дилось 20 20 Не проводилось 20 20

III. Оценка клеточных и молекулярно-генггических показателей нмм уиитета

Определение общего количества лимфоцитов крови 30 60 35 30 60 36

Оценка CD-маркеров (CD3+, CD4+, CD8+) в лимфоцитах крови методом проточной шпофлуориметрии 20 25 20 20 24 21

Определение уровней IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNFa в сыворотке крови методом имму но ферментного анализа 20 60 35 30 60 35

Определение спонтанпой и индуцированной (ФГА) цитокинпродуцирую-щей способности лимфоцитов 1L-2, IL-4, IL-10 в супернатантах методом иммуноферментного анализа 20 20 20 20 20 20

Оценка спонтанного и индуцированного (перекись водорода) апоптоза лимфоцитов крови методом световой микроскопии 30 60 35 30 60 36

Анализ полиморфизма генов интер-лейкинов IL-ip, IL-IRa, IL-2. IL-4, IL-6, IL-8 методом рестрикциомного анализа 50 60 35 50 60 36

Морфологически апогттоз проявляется в конденсации и маргинации хроматина, уменьшении объема клетки, пуэырчатости и фрагментации клеточного ядра [Allen R.T., 1997; Kroemer G., 2009]. Подсчитывали не менее 200 клеток, учет результатов проводили путем определения процента клеток с апоптотиче-ской морфологией (табл. 1). Для сравнительного анализа степени прироста индуцированного апоптоза в разных группах определяли апоптотический индекс (АИ) как отношение между разницей спонтанного и индуцированного апоптоза к спонтанному, выраженное в процентах.

Полученные показатели подвергали статистическому анализу. Результаты измерений представлены в виде медианы (Me) и интерквартильного размаха в виде 25 и 75 процентилей (Q25 и Q75). Для проверки нормальности распределения данных использовали критерий Колмагорова-Смирнова. Для выявления статистической значимости различий показателей в сравниваемых группах использовали непараметрические критерии: W-критерий Вилкоксона для независимых выборок и Т-критерий Вилкоксона - для зависимых выборок. Различия считались достоверными при уровне значимости р<0,05.

На третьем этапе исследования был проведен анализ полиморфизма генов цитокинов (IL-lß, IL-lRa, IL-2, IL-6, IL-8) методом рестрикционного анализа продуктов амплификации специфических участков генома (табл. 1). ДНК из клеток крови выделяли фенольным методом. Смесь для амплификации содержала: по 0,5 мкл R- и F-праймера (С+3953Т IL-lß F: gttgtcatcagactttgacc и R: ttcagttcatatggaccaga; IL-lRa VNTR F: ctcagcaacactcctat и R: tcctggtctgcaggtaa; -330 T/G IL-2 F: cacaatatgctattcacatgttcagttagtcata и R: taccttcatttttcctcttctgatg; -174 G>C IL-6 F : tgacttcagctttactctttgt и R : ctgattggaaaccttattaag; -251 1>A IL-8 F: tgttctaacacctgccactctagta и R : ttatgcaccctcatcttttcattat) («Сибэнзим», г. Новосибирск). К амплификату добавляли смесь для рестрикции, содержащую фермент (Taq I для С+3953Т IL-lß, FauND I для -330 T/G IL-2, SfaNI для -174 G>C IL-6, Mfe I для -251 T>A IL-8), 0,15 мкл BSA, 1,5 мкл буфера из расчета на одну пробу. Инкубировали в зависимости от температурного оптимума фермента при 37 или 56 °С в течение 12 ч.

Детекцию продуктов амплификации проводили в 4 % агарозном геле, в качестве маркера размера ДНК использовали плазмиду pUC19, расщепленную ре-стриктазой Mspl («Сибэнзим», г. Новосибирск). Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью критерия хг- Для проверки значимости общей меры связи использовали критерий х2 Мантела-Ханзела, для оценки значения критерия отношения шансов (OR - Odds Ratio) с расчетом для него 95% доверительного интервала (CI - Confidence Intervals) [McHugh M.L., 2009].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Генетические особенности Helicobacter pylori у хакасов и европеоидов, страдающих хроническим гастритом и язвенной болезнью

В России инфицированность HP взрослого населения колеблется в пределах 50 80 %, а в некоторых регионах приближается к 100 %. Показатели распространенности инфекции у детей не отличаются от таковых у взрослого населения [Лазебник Л.Б., 2006; Хомерики С.Г., 2006]. В Республике Хакасия этот показатель составляет 96,2 % для европеоидов и 96,4 % для хакасов [Штыгаше-ва О.В., 2005].

Разную географическую распространенность имеют и субтипы HP (рис. П.

Рис. L Распространенность аллельных вариантов vac А субтипов Helicobacter pylori в мире (по данным R Morales-Espinosa, 1999, L, J A van Doom, 1999; X.-J. Chen, 2001)

Изучение распределения генотипов HP показало, что у европеоидов cagA штаммы достоверно чаще встречались у больных ЯБ, чем при XI4 (94,4 и 79,3 %, соответственно, х2~9,6; р<0,05). VacA штаммы встречались у 100,0 % больных ЯБ и XI'. У европеоидов, больных ЯБ и ХГ, содержание vacA si штаммов HP не имело различий. Частота субтипов s2 и ml vacA штаммов HP преобладала у больных ХГ, а при ЯБ - vacA s 1 s2 и m2, различия носили статистически значимый характер. Смешанные изоляты vacA mlm2 достоверно чаще встречались у больных ЯБ, по сравнению с их содержанием у больных ХГ (х2=20,7; р<0,05).

У хакасов, больных ЯБ, доминировали cagA штаммы HP (рис. 2). VacA штаммы HP были одинаково высоко распространены у хакасов как с ЯБ, так и с ХГ. Однако соотношение распределения vacA штаммов в обследованных популяциях различалось. Большая часть больных (как ЯБ, так и ХГ) были инфицированы смешанными изолятами HP s 1 s2 vacA. Однако встречались больные.

инфицированные только или только уасА НР. При этом, если частота уасА %2 штаммов не различалась у больных ЯБ и ХГ, то чаще диагностировались у больных ХГ, чем у больных с ЯБ. Распространенность уасА ш1 не имела статистически значимых различий у больных ЯБ по сравнению с больными ХГ. Содержание уасА ш2 у хакасов с ЯБ было достоверно ниже, по сравнению с больными ХГ (х2=12,5; р<0,05). Содержание сразу же двух видов штаммов НР - уасА т1ш2 - не имело статистически значимого увеличения значений показателей у больных ЯБ, по сравнению с их содержанием у больных ХГ.

При межпопуляционном сравнении нами было выявлено, что са§А штаммы НР при ХГ чаще встречались у европеоидов, чем у хакасов (х2=36,2; р<0,05; рис. 2). При ЯБ частота встречаемости са£А штаммов НР не имела статистически значимых различий между европеоидами и хакасами.

0 Хакасы Ü Европеоиды

cagA

vacA

vacAsI

\acAs2 vacAsls2 vacAml

»acAm2 vacAmlm2

100 80

60 -t—H 40 20

0 Хакасы □ Европеоиды

Ш

Ь.

cagA

vacA

vacAsI vacAs2 vacAsIs2 vacAml vacAm2 vacAmlm2

Рис. 2. Распределение генов cagA и vacA Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью (а) и хроническим гастритом (б) среди хакасов и европеоидов. * - р<0,05 - достоверность различий при сравнении значений показателей у хакасов и европеоидов

При ХГ нами было выявлено достоверное увеличение частоты генотипа vacA ml у европеоидов, по сравнению с его встречаемостью у хакасов [х2=66,9 (р<0,05)], и, наоборот, достоверное снижение частоты генотипов vacA m2 и mlm2 у европеоидов, по сравнению с хакасами [х2=60,6 (р<0,05) и х2=11,1 (р<0,05), соответственно]. При ЯБ у хакасов и европеоидов подобных закономерностей выявлено не было (рис. 2).

Значения критерия отношения шансов OR=5,2 при 95 % CI (2,3-11,6) и OR=3,3 при 95 % CI (1,7-6,2) позволили предположить о наличии положительной ассоциации между инфицированием mlm2 и sls2 субтипами vacA HP и риском развития ЯБ у европеоидов.

У хакасов, учитывая значения критерия отношения шансов, нами было высказано предположение о взаимосвязи инфицирования cagA штаммами ИР и риске развития язвенной болезни - OR=32,3 при 95 % CI (11,3-99,6). Риск развития ХГ у хакасов, предположительно, был связан с vacA m2 штаммами HP (OR=2,8 при 95 % CI (1,5-5,1)).

В настоящее время доказано, что между штаммами cagA и vacA sl ИР существует четкая корреляция, то есть большинство vacA sl позитивных штаммов HP являются носителями cagA-rena - штаммы I типа (цитотоксические). Для них характерно более агрессивное воздействие на макроорганизм (высокая вирулентность, адгезия и внутриклеточная_рцвазия). Интерес представляет тот факт, что штаммы I типа ИР стимулируют наибольшую секрецию IL-8 эпите-лиоцитами слизистой оболочки желудка по сравнению со штаммами II типа HP (vacA+/cagA-). Цитотоксические штаммы вызывают выраженное воспаление в слизистой оболочке желудка, способствуют развитию деструктивных процессов - язвообразованию, за счет увеличения инфильтрации нейтрофклами, выделения ими свободного кислорода и развития окислительного стресса. Показано, что vacA slml в присутствии гена cagA HP увеличивает риск развития ЯБ [Bindayana K.M., 2010]. В отличие от них штаммы II типа (vacA+/cagA-) очень быстро фагоцитируются, что снижает их патогенное воздействие на организм.

Сопоставляя полученные нами результаты с данными литературы, можно отметить, что при обследовании хакасов было выявлено сходство с распространенностью инфекции в других азиатских странах [Dabiri Н., 2009; Liao Y.L., 2009]. Так, например, во Вьетнаме CagA штаммы HP встречаются у 96,2 % жителей Ханоя, в то же время, риск развития ЯБ связан с vacA ml генотипом HP [Nguyen T.L., 2010]. Китайские ученые показали в своем исследовании ассоциацию ЯБ с аллелем vacA с sla HP [Liao Y.L., 2009].

Генетические различия этиологического фактора ЯБ и ХГ у хакасов и европеоидов имели отражение и в клиническом течении заболеваний. При ретроспективной оценке жалоб и анамнеза нами были показаны различия в частоте

обострений и длительности заболевания. Так, в ходе опроса больные ЯБ предъявляли жалобы на голодные боли и ночные боли - язвенноподобная форма диспепсии (европеоиды - 22,6 % и хакасы - 12,3 %, р<0,05); тошноту и отрыжку - дискинетическая форма диспепсии (европеоиды - 44,9 % и хакасы - 48,3 %); боль в эпигастрии - неспецифическая форма диспепсии (европеоиды - 32,5 % и хакасы - 39,4 %). Пациенты с ХГ в ходе опроса предъявляли жалобы на быструю утомляемость, раздражительность (43 % хакасов и 52 % европеоидов), слабость, головную боль (18 % хакасов и 24 % европеоидов), боль в области эпигастрия (72 % - хакасов и 81 % европеоидов), диспепсические расстройства (92 % хакасов и 95 % европеоидов).

В целом, анализ клинических проявлений HP-ассоциированных заболеваний у европеоидов и хакасов продемонстрировал выраженные этнические различия в структуре ЯБ. У европеоидов ЯБ чаще регистрировалась с более тяжелым характером течения, что может быть связано с присутствием гена vacA sls2. У хакасов более легкое течение ЯБ ассоциировано с наличием гена cagA HP. Таким образом, мы еще раз подтвердили тезис о взаимосвязи между генетическими особенностями инфекта у хакасов и европеоидов, страдающих Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией, и клиническими фенотипами заболеваний.

2. Закономерности н особенности изменения локального м системного иммунитета у хакасов и европеоидов, страдающих Helicobacter pylori-ассоциированными хроническим гастритом и язвенной болезнью

Инициация антибактериальной защиты организма связана с выделением HP в окружающую его среду продуктов микробного происхождения, что приводит к выработке Thl-цитокинов (IL-1, IL-8, TNFa, IFN7) [Meyer F., 2000; Та-guchi А., 2005; D'Ellios М.М., 2007]. Одновременно инициируется запуск Th2-пути иммунного ответа, сопряженный с экспрессией лимфопоэтина эпителиальными клетками, хемокина М1Р-За и фактора активации B-клеток дендритными клетками [Kido М., 2010]. По мнению R. Göll et al. (2005), различия Т-клеточного ответа можно рассматривать как различия в активации иммунной защиты при HP-ассоциированных ХГ и ЯБ. Вместе с тем некоторые авторы считают, что инициация воспалительного процесса при ХГ и ЯБ имеет выраженные различия только в раннем периоде инфицирования, а соответствующий цитокиновый профиль предопределяет различия позднего периода инфекции [Царегородцсва Т.М., 2003].

В результате CD-типирования лимфоцитов слизистой оболочки желудка было выявлено, что у европеоидов с ЯБ значения количества CD4+- и CD8+-

лимфоцитов в биоптатах слизистой оболочки антрального отдела желудка составили 26,0±0,8 и 19,3±0,7 %, соответственно. Их количество было выше, чем у больных ХГ (17,8±0,9 и 16,5±0,4 %, соответственно). Увеличение числа С04+-лимфоцитов у пациентов с ЯБ носило достоверный характер (р<0,05). Доля С020+-лимфоцитов у пациентов с ЯБ была ниже, чем у больных ХГ (32,4±0,7 и 36,4±0,8 %, соответственно, р<0,05).

У хакасов с ЯБ отмечалось увеличение числа С04+- и СЮ8+-лимфоцитов (33,6±С,9 и 16,3±0,5 %), по сравнению с их количеством у пациентов с ХГ (24,1 ±0,4 и 12,1±0,2 %, соответственно, р<0,05) (рис. 3). Количество С020+-лимфоцитов у пациентов с ЯБ составило 38,8±0,9 %, что было выше относительно данного показателя у пациентов с ХГ (34,4±0,7 %),

Рис. 3. Микрофотография препарата слизистой оболочки желудка антрального отдела больного К., хакаса, 41 год, диагноз: язвенная болезнь. Па препаратах - метки, содержащие маркеры С 04+-лимфоцитов (1) и СП8+-лимфоцитов (2). Иммуногистохимический метод с докраской гематоксилином, ув. х 400 (а), х 900 (б)

При межпопуляциоином анализе было показано, что у хакасов, больных ЯБ и ХГ, доля С04+-лимфоцитов в слизистой оболочке желудка была достоверно выше, чем у европеоидов (р<0,05). Относительное количество СБ20+-лимфоцитов было статистически значимо выше у хакасов с ЯБ, по сравнению с европеоидами (р<0,05). Среди пациентов с ХГ у европеоидов число С08+- и С020+-лимфоцитов было достоверно выше, чем у хакасов (р<0,05).

ТЫ-ответ играет наиболее значимую роль в антибактериальной защите, так как препятствует колонизации НР в слизистой оболочке. Однако при длительном воспалительном процессе вместо ограничения роста патогена происходит гибель собственных клеток, в то время как детерминация ТЪ2-пути протекает без выраженного повреждения слизистой [Кондрашина ЭЛ., 2002;

Ивашкин В.Т., 2008; Кононов A.B., 2009]. В связи с этим увеличение численности популяции С020+-лимфоцитов у хакасов больных ЯБ может рассматриваться как протективная форма антихеликобактерной защиты.

Факторами, объясняющими выявленные нами различия иммунного реагирования у хакасов и европеоидов, больных ЯБ и ХГ, может быть недостаточное активирующее либо депрессивное действие HP на иммунную систему (низкая иммуногенность мембранных антигенов и продуктов жизнедеятельности HP, явление бактериальной мимикрии). После инвазии ИР в эпителиоциты микроорганизм становится недоступным для антител. В этот момент наибольшее значение приобретает ТЫ-путь иммунного ответа, в результате которого возможно уничтожение эпителиальных клеток вместе с внутриклеточными патогенами. Трансформация Th-ответа сопровождается изменением содержания цито-кинов в крови и слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта. Соответственно, развивается цитокин-опосредованная поляризация иммунного ответа по Thl-пути. Определенную роль в изменении численности СЕ)4+-лимфоцитов в слизистой оболочке желудка играет TGF-ß, вырабатываемый эпителиальными клетками в ответ на инфекцию HP [Beswick E.J., 2011].

Фундаментальным механизмом, регулирующим постоянство клеточного состава иммунной системы, является апоптоз. Модуляция программированной гибели, индуцированная ИР, детерминирует прогрессию ХГ и ЯБ [Labbé К., 2008; Chattopadhyay R., 2010].

Исследование содержания про- и антиапоптических белков (СРР-32 и Bcl-2, соответственно), а также антигена пролиферации (Ki-67) в лимфоцитах слизистой оболочки желудка у хакасов и европеоидов с ЯБ и ХГ позволили зарегистрировать различия значений данных показателей в зависимости от клинических форм заболевания. У хакасов и европеоидов уровень Ki-67 имел тенденцию к увеличению у пациентов с ЯБ (1,6±0,2 и 1,3±0,7 %, соответственно) по сравнению с таковыми у больных ХГ (1, 1±0,2 и 0,8±0,2 %, соответственно).

Содержание Вс1-2 в лимфоцитах собственной штастинки слизистой оболочки желудка было наибольшим при ЯБ (28,7±1,2 % - у хакасов, 30,9±1,6 % -у европеоидов), по сравнению с его уровнем в лимфоцитарных клетках у больных ХГ (21,4±1,3 % - у хакасов, 24,3±1,8 % - у европеоидов, р<0,05). Необходимо отметить, что частота встречаемости молекул Вс1-2 в лимфоцитах была выше у европеоидов, по сравнению с хакасами.

Более значимая частота встречаемости СРР-32 (каспаза-3) была отмечена у европеоидов, больных ХГ (52,1±1,9 %), по сравнению с таковыми у пациентов с ЯБ (38,3±2,7 %, р<0,05). Такая закономерность была характерна для обеих этнических популяций. У хакасов больных ХГ частота встречаемости СРР-32 составила 55,5±2,1 %, у пациентов с ЯБ - 40,0±1,8 % (р<0,05).

Факторами, модифицирующими апоптоз лимфоцитов клеточного инфильтрата слизистой оболочки желудка, выступают HP, интерлейкины и окислительный стресс [Rolig A.S., 2011]. При этом в ранний период инфицирования HP происходит угнетение апоптоза за счет стимуляции экспрессии ингибиторов апогттоза с1АР2, в более позднем периоде - VacA HP-зависимое усиление апоптоза [Kim J.M., 2010]. Эффекты CagA- и VacA-белков сопряжены с транслокацией цитоплазматического белка Вах в митохондрию, высвобождением цито-хрома с и активацией каспазы-3. Вероятно, выявленное нами увеличение содержания антиалоптотического белка Вс1-2 в слизистой оболочке желудка ассоциировано со способностью VacA HP активировать транскрипционный фактор NF-kB. Кроме того, VacA модулирует трансдукцию сигнального пути: активирует р38 МАРК, запускает синтез IL-8, PGE2 и PI3K/Akt, супрессирует активность GSK-Зр [Isomoto H., 2010]. CagA штаммы усиливают Fas-опосредованный апоптоз СТ)4+-лимфоцитов [Souza H., 2006; Wisniewski P., 2008]. В низких концентрациях происходит стимуляция клеточного роста и угнетение апоптоза за счет активации антиапоптотического белка Bcl-2, МАР-киназы и NF-kB. В больших концентрациях CagA+, наоборот, приводит к увеличению аполтотической гибели за счет активации ¡NOS, р53, Вах и каспазы-3 и -8 [Boonyanugomol W., 2010].

При исследовании системного иммунитета нами было выявлено, что ряд показателей у хакасов и европеоидов также различались. У европеоидов, страдающих ЯБ и ХГ, имело место увеличение относительного и абсолютного числа лимфоцитов крови, по сравнению со здоровыми донорами. Кроме того, при ЯБ количество лимфоцитов было ниже, чем при ХГ. У хакасов, наоборот, отмечалось увеличение относительного и абсолютного количества лимфоцитов крови у больных ЯБ, по сравнению с таковыми у здоровых доноров и больных ХГ.

У больных ЯБ, относящихся к европеоидной популяции, было выявлено увеличение числа CD3+ и С04+-лимфоцитов, по сравнению со здоровыми донорами. У больных ХГ было установлено увеличение абсолютных значений количества CD3+- и CD8 ^-лимфоцитов крови, по сравнению с ЯБ. У хакасов, наряду с увеличением числа лимфоцитов крови, нами было выявлено выраженное снижение численности CD3+-, CD4+-, СТ)8+-субпопуляций лимфоцитов, по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц, причем, при ЯБ указанные изменения были более выражены, чем при ХГ.

Одной из важных причин снижения количества лимфоцитов и/или их субпопуляций может служить угнетение процессов лимфопролиферации, связанные с недостаточностью активирующего сигнала (низкая концентрация активирующих цитокинов либо с гиперпродукция ингибирующих цитокинов) [Царе-городцева Т.М., 2003]. Это может быть обусловлено многими факторами, среди

которых: соотношение рецепторов-агонистов и антагонистов, инактивация циркулирующих цитокинов, величина рН, антиоксидантный потенциал клетки, истощение цитокин-продуцирующей способности клеток при длительной антигенной стимуляции [Ивашкин В.Т., 2008]. Имеет значение и локализация патологического процесса. При локализации язвы в желудке уровень продукции цитокинов ниже, чем при локализации в двенадцатиперстной кишке [Барановский А.Ю., 2001; Звягинцева Т.Д., 2002; Царегородцева Т.М., 2003].

Собственные результаты исследования показали, что содержание 1Ь-8 в сыворотке крови у европеоидов, больных ХГ и ЯБ [210,0 (150,0-527,5) и 225,0 (121,0—390,0) пкг/мл, соответственно], выше, чем у здоровых доноров [169,0 (100,0-198,5) пкг/мл]; при этом наиболее значимое увеличение отмечалось при ЯБ. У хакасов при ХГ уровень 1Ь-8 в сыворотке крови был выше, чем при ЯБ [400,0 (76,3-912,5) и 118,0 (52,5-337,5) пкг/мл, соответственно]. Оба показателя были выше, по сравнению с содержанием 1Ь-8 в сыворотке крови у здоровых доноров [167,5 (44,3-530,0) пкг/мл].

1Ь-8 идентифицируется как маркер «адаптивного иммунитета» на перси-стенцию НР в организме [Шейег в., 2001]. Этот цитокин является ключевым медиатором ТЫ-пути иммунного ответа, фактором дифференцировки и рекрутирования клеток-эффекторов воспаления, следовательно, и выраженности иммунной защиты. При НР-инфекции увеличение концентрации 1Ь-8 стимулирует хемотаксис нейтрофилов. Синтез ГЬ-8 может быть вызван воздействием провос-палительных медиаторов (1Ь-1Р, ТОТа). В свою очередь, 1Ь-8 стимулирует продукцию ТТЧРа, и 1Ь-1р.

В проведенном нами исследовании было выявлено, что у европеоидов и хакасов уровень ТЫГа в сыворотке крови был значительно выше у больных, чем у здоровых доноров (р<0,05). У больных ХГ увеличение ТОТа более значимо у хакасов [1350,0 (400,0-2250,0) пкг/мл], чем у европеоидов [1200,0 (760,0-1900,0) пкг/мл]. При ЯБ концентрация цитокина также была выше у хакасов, чем у европеоидов [1400,0 (520,0-2160,0) и 1000,0 (439,0-1585,0) пкг/мл, соответственно] (рис. 4). Считается, что максимальное содержание ТЫРа отмечается на пике обострения заболевания, при этом стойкое увеличение продукции ТОТа свидетельствует о деструктивно-воспалительных процессах, замедлении репарации, рубцевании язвенных дефектов, усилении апоптотической гибели клеток [Царегородцева Т.М., 2003; Би^тою М., 2010].

Вероятно, что выявленная нами прямая корреляционная взаимосвязь между увеличением уровня продукции ТОТа и снижением численности субпопуляций лимфоцитов (СЭЗ+, С04+, СЭ8+) у хакасов, больных ХГ, можно объяснить ци-ютоксическим влиянием ТОТа на иммунные клетки либо снижением активаци-онного сигнала в результате ТКТа-зависимой гибели эпителиоцитов.

лкг/мл 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 о

0 Хакасы П Европеоиды

ТОТа

И.-2

11-4

П.-6

11.-8

[НО

И Хакасы О Европеоиды

ТОТа

Ш-2

П^»

1Ь-6

1Ь-8

1Н0

Рис. 4. Содержание интерлейкинов в сыворотке крови у хакасов и европеоидов, больных язвенной болезнью (а) и хроническим гастритом (б), * -р<0,05 - достоверность различий при сравнении значений показателей у хакасов и европеоидов

Концентрация 1Ь-6 в сыворотке крови у европеоидов была выше у больных ХГ и ЯБ [75,0 (54,0-113,5) и 69,0 (36,0-105,5) пкг/мл, соответственно], чем у здоровых доноров [34,0 (19,5-104,5) пкг/мл]. У хакасов различий между больными [32,0 (20,0-44,0) пкг/мл при ХГ и 20,0 (8,3-60,0) пкг/мл при ЯБ] и здоровыми донорами [19,0 (10,0—50,0) пкг/мл] выявлено не было. Вместе с тем у хакасов, больных ХГ, была обнаружена обратно пропорциональная зависимость между уровнем 1Ь-6 и числом С1)8+-лимфоцитов у больных.

Считается, что при запуске специфического иммунитета в ответ на инфекционный агент активно увеличивается продукция IL-2, происходит дифферен-цировка ТЫ-лимфоцитов. Снижение продукции IL-2 может свидетельствовать о развитии вторичной иммунологической недостаточности [Rudnicka К., 2011]. Основным фактором в определении дифференцировки стимулированных антигеном наивных С04+-Т-клеток в Th2 является IL-4 [Nasta F., 2006; Khaled W.T.,

2007]. Физиологическим антагонистом и ингибитором ТЫ-ответа также является IL-10, увеличение которого приводит к снижению противоинфекционной защиты и развитию хронического воспаления [Jung М., 2004; Ивашкин В.Т.,

2008].

У европеоидов с ЯБ содержание IL-2 в сыворотке крови составило 139,0 (67,0-256,0) пкг/мл, у больных ХГ - 110,0 (29,5-189,5) пкг/мл, что статистически не отличалось от такового у здоровых доноров - 197,0 (120,0-225,0) пкг/мл. У хакасов наименьшие значения регистрировались у больных ЯБ - 15,0 (3,540,5) пкг/мл (по сравнению с контролем - 140,0 (28,5-500,0) пкг/мл, р<0,05). У больных ХГ содержание цитокина в сыворотке крови составило 28,0 (8,5-50,0) пкг/мл, что также было статистически ниже, чем в контроле (р<0,05). Межпопу-ляционное сравнение показало, что содержание IL-2 при ЯБ и ХГ было достоверно выше у европеоидов, по сравнению с хакасами (р<0,05) (рис. 4).

Содержание IL-4 в сыворотке крови у европеоидов составило при ХГ и ЯБ 350,0 (175,0-568,0) и 241,0 (168,0-370,0) пкг/мл, соответственно, что было достоверно выше, чем в группе здоровых доноров [37,0 (20,5-56,0) пкг/мл, р<0,05]. Среди хакасов было выявлено достоверное увеличение содержания данного интерлейкина при ХГ и ЯБ [262,5 (150,0-410,0) и 220,0 (100,0-400,0) пкг/мл, соответственно], по сравнению с группой здоровых доноров [32,5 (19,0-101,0) пкг/мл, р<0,05]. У европеоидов выше, чем у хакасов, однако, различия не были статистически значимы (рис. 4).

Значения уровней IL-10 в сыворотке крови у европеоидов при ХГ были достоверно выше, по сравнению с таковым у здоровых доноров [425,0 (210,0— 1145,0) и 60,0 (26,0-215,5) пкг/мл, р<0,05, соответственно], в то время как при ЯБ концентрация IL-10 составила 181,0 (90,0-312,0) пкг/мл (р>0,05). У хакасов, больных ХГ, величина содержания в сыворотке крови IL-10 была достоверно выше, по сравнению с уровнем цитокина в контрольной группе [307,5 (175,5600,0) и 32,0 (10,0-250,0) пкг/мл, соответственно, р<0,05]. При ЯБ значения показателя не отличались от такового в контрольной группе [42,5 (7,3-125,0) пкг/мл] и были достоверно ниже, чем у больных ХГ (р<0,05). Сравнительный анализ уровня IL-10 между хакасами и европеоидами показал, что концентрация FL-10 у европеоидов была выше, чем у хакасов; при этом при ЯБ различия носили статистически значимый характер (р<0,05) (рис. 4).

Более полная информация о направлении процесса дифференцировки мо-нонуклеарных лейкоцитов была нами получена при определении спонтанной и стимулированной продукции IL-2, IL-4 и IL-10 лимфоцитами крови. У здоровых лиц спонтанный синтез цитокинов низок, а при индуцированном действии различных стимуляторов (LPS, ФГА и др.) многократно возрастает [Фрейдлин И.С., 1998]. Индуцированная секреция цитокинов характеризует потенциальную (резервную) способность клеток иммунной системы отвечать на стимуляцию различными антигенами [Ржавичева О.С., 2006].

Нами было показано, что у европеоидов, больных ЯБ и ХГ, базальная продукция IL-2 не имела статистически значимых различий с таковой в контрольной группе, в то время как резервная была выше, чем в контрольной группе (табл. 2).

Таблица 2

Спонтанная и ФГА-стимулированная продукция IL-2, IL-4 и IL-I0 мононукпеарными лейкоцитами крови у европеоидов, больных с Helicobacter pylori-ассоциированными хроническим гастритом и язвенной болезнью

Продукция (пкг/мл) Здоровые доноры Больные ЯБ Больные ХГ

IL-2 спонтанная 124,4 (89,4-167,0) 169,0 (118,6-205,6) 113,4 (84,6-237,5)

ФГА- стимулированная 218,9 (189,6-280,0)2 290,0 (234,6-312,9)2 289,5 (210,2-425,1)

IL-4 спонтанная 50,1 (24,8-79,3) 34,9 (20,7-45,8) 69,2 (45,2-89,5)'

ФГА- стимулированная 99,3 (78,9-123,6>2" 78,0 - (64,0-91,8)2 108,6 (75,0-211,7)2

IL-10 спонтанная 5,0 (3,0-6,9) 10,8 (3,9-15,9) 8,5 (4,1-16,4)

ФГА- стимулированная 9,0 (6.5-15,4)2 15,8 (7.8-21.8) 11,3 (7,6-14,0)

Примечание ' - р<0,05 - достоверность различий по сравнению с язвенной болезнью, 1 - р<0,05 - достоверность различий при сравнении спонтанной и ФГА-стимулированной продукции цитокнна

Возможными причинами низкой концентрации 1Ь-2 у хакасов, больных ЯБ и ХГ, может служить высокая рецепторная активность клеток-мишеней (эндо-телиоцитов, эпителиоцитов, париетальных клеток и др.) в очаге воспаления, наличие растворимых рецепторов в кровотоке, эффективно связывающих циркулирующие цитокины. Подтверждением этому служит увеличение ФГА-стимулированной продукции 1Ь-2 у хакасов, больных ЯБ и ХГ (табл. 3).

Нами было установлено, что у хакасов и европеоидов повышена спонтанная и ФГА-стимулированная концентрация цитокинов 1Ь-4 и 1Ь-10 в суперна-тантах мононуклеарных лейкоцитов при ХГ и ЯБ (табл. 2, 3). Данный факт можно рассматривать как фактор, способствующий хронизации заболеваний, связанных с НР-инфекцией.

Таблица 3

Спонтанная и ФГА-стимулированная продукция 1L-2,1L-4 и IL-10 мононуклеарными лейкоцитами крови у хакасов, больных Helicobacter pylori-ассоциированными хроническим гастритом и язвенной болезнью

Продукция (пкг/мл) Здоровые доноры Больные ЯБ Больные ХГ

IL-2 спонтанная 141,7 (39,0-220,0) 45,0 (30,0-112,0) 89,0 (75,1-93,0)

ФГА- стимулированная 190,0 (70,0-279,0) 119,0 (90,0-205,9) 139,0 (112,0-164,9)1

IL-4 спонтанная 35,0 (16,0-44,3) 98,0 (84,0-131,6)' 101,0 (89,0-109,5)1

ФГА- стимулированная 123,3 (69,0-147,6)2 197,0 (176,0-342,7) u 189,0 (167,0-262,0)1,1

IL-10 спонтанная 57,3 (32,0-78,2) 342,9 (289,0-402,0)1 309,0 (239,0-369,8)'

ФГА- стимулированная 128,0 (90,0-134,0)г 509,0 (470,0-549,0) u 443,5 (397,0-535,0)u

--1-■--а---!—*--i--- <--1---

Примечание: - р<0,05 - по равнению с показателями у здоровых доноров, - р<0,05 -

достоверность различий при сравнении спонтанной и ФГА-стимулированной продукции ци-токина.

Определенное значение в дизрсгуляции иммунитета при длительной пер-систенции бактериальных патогенов имеет повышение интенсивности апоптоза клеток иммунной системы. При этом, в зависимости от концентрации, интер-лейкины могут оказывать проапоптотический или антиапоптотический эффект. Под действием IL-2 усиливается индукция клеточных рецепторов и образование FasL и TNFa - рецепторный механизм активации апоптоза. IL-2-индуцированный апоптоз может происходить при участии митохондрий [Чечи-на O.E., 2009]. В высоких концентрациях IL-2 обеспечивает устойчивость клеток к апоптотической гибели, особенно - СЕМ+-лимфоцитов. Инфицирование vacA штаммами HP оказывает иммуносупрессирующее действие на Т-лимфоциты через ингибирующее влияние на клеточную пролиферацию и IL-2 [SewaldX., 2011].

Проведенный нами анализ апоптотической гибели лимфоцитов крови (рис. 5) показал, что у больных ЯБ и ХГ, европеоидов, имеет место достоверное увеличение апоптотически измененных лимфоцитов крови [21,4 (19,4-23,6) и 24,3 (21,8-27,1) %, соответственно], по сравнению со здоровыми донорами [17,9 (16,5-19,0) %, р<0,05]. Число лимфоцитарных клеток крови, подвергшихся индуцированному апоптозу, у европеоидов, больных ЯБ, составило 26,4 (22,028,6) %, у больных ХГ - 29,6 (27,8-33,8) %. Значения обоих показателей были ниже таковых в контроле - 31,6 (27,1-34,8) %, р<0,05.

а б ■ г

Рис. 5. Микрофотографии лимфоцитов крови, полученных у больных, диагноз язвенная болезнь. Представлены - нормальный лимфоцит (а), клетки с признаками спонтанного (6-в) и индуцированного перекисью водорода (г) апоп-тоза. Световая микроскопия, окрашивание гематоксилин-эозином, ув. х 1500

У больных ЯБ, хакасов, значения числа лимфоцитов крови с морфологическими признаками апоптоза составили 18,5 (16,7-20,0) % и были достоверно выше, чем количество апоптотически измененных клеток крови у лиц контрольной группы [15,7 (13,6-16,4) % (р<0,05)]. У больных ХГ апоптоз лимфоцитов соответствовал 14,8 (11,2-21,0) %. Анализ числа клеток, вступивших в индуцированный апоптоз у хакасов, страдающих ЯБ, соответствовал 23,7 (21,927,6) %, у больных ХГ 22,9 (19,8 25,6) %. Оба показателя статистически не отличались от такового у здоровых доноров [27,9 (23,0 30,1) % (р>0,05)].

Для оценки степени прироста индуцированного апоптоза нами был рассчитан апоптотический индекс (АИ): при ЯБ АИ у хакасов соответствовал 36,4 %, в то время как у европеоидов - 16,7 % (р<0,05). У хакасов, больных ХГ, АИ составил 63,8 %, у европеоидов 33,3 % (р<0,05). У здоровых доноров АИ не имел достоверных отличий у хакасов, по сравнению со значениями указанных параметров у европеоидов (85,0 и 79,1 %, соответственно).

Безусловно, что процесс индукции апоптоза клеток локального иммунитета связан с непосредственным взаимодействием эффекторов воспаления с HP, развитием окислительного стресса, в то время как апоптоз лимфоцитов крови является результатом воздействия других апоптозмодифицируюших факторов,

В частности, апоптоз клеток иммунной системы может быть инициирован не только самим возбудителем, но и нарушениями метаболических процессов макроорганизма. Необходимо отметить, что в ряде случаев Thl-лимфоциты более чувствительны к апоптозу, чем ТЬ2-клетки. Возможно, это следует рассматривать как дополнительный механизм ограничения возможных патологических последствий I -опосредованного иммунного ответа [Morris S.C., 2009] и формирования различий в реализации апоптоза у больных ЯБ и ХГ" коренного и пришлого населения Хакасии.

3. Распределение аллельных вариантов и генотипов генов цитокинов у хакасов и европеоидов, страдающих Helicobacter pylori-

ассоциирова иными хроническим гастритом и язвенной болезнью

Известно, что способность реализовывать адекватный иммунный ответ является отражением генетической структуры макроорганизма [Frodham A.J., 2004]. Наиболее распространенным вариантом наследственной предрасположенности является сочетание у индивида аллелей генов, совокупный эффект которых определяет особенности иммунитета, повышающих риск развития инфекционных заболеваний [Casanova J.-L., 2002; Гончарова И.А., 2006]. В литературе данные касательно частоты встречаемости определенных полиморфизмов генов и их ассоциации с HP-зависимыми заболеваниями довольно противоречивы. Одни авторы не обнаружили статистически значимой связи между IL-ip (-511 С/Т и -31 Т/С), 1L-6 (-174 G/C), IL-8 (-251 Т/А, +396 T/G и +781 С/Т), IL-10 (-819 С/Т, -592 С/А, -1082 A/G) и TNFA (-308 G/A, -238 G/A) и риском развития HP-ассоциированной гастродуоденальной патологии [Кашап-gar F., 2006; Kim N., 2006; Shin W. G., 2008]. Другие, наоборот, придают большое значение в развитии HP-индуцированных заболеваний наличию определенных полиморфизмов генов цитокинов [Rad R., 2004; Wu M.S., 2003; Lu C.C., 2005; Lu W„ 2005; Zambón C.F., 2005; Hollegaard M.V., 2006].

Оценка распределения полиморфизмов C+3953T гена IL-ip показала, что у европеоидов наиболее частый генотип СС +3953 IL-ip. Его доля была достоверно выше у больных ЯБ по сравнению с контролем (х2=Ю,9; р<0,05). Доля ге-терозигот СТ +3953 IL-ip и гомозигот ТТ +3953 IL-ip у больных ЯБ и ХГ - у представителей европеоидной популяции - была ниже, чем у здоровых доноров. В группе ЯБ различия, по сравнению с контролем, носили статистически значимый характер (х2=4,3; р<0,05 и х2=3,9; р<0,05, соответственно).

У хакасов, больных ЯБ, количество гомозигот СС +3953 IL-ip было выше, чем у пациентов с ХГ и здоровых доноров (р<0,05). Генотип СТ +3953 IL-ip статистически значимо чаще встречался при ХГ, по сравнению с группами больных ЯБ (х2=11,3; р<0,05) и здоровых доноров (xJ=4,7; р<0,05). Гомозиготы ТТ +3953 IL-ip среди хакасов были редким генотипом и выявлялись только у здоровых доноров.

Анализ полиморфизма гена IL-lRa VNTR показал, что у хакасов и европеоидов наиболее распространенным генотипом являлся R4R4 IL-tRa. Однако частота R4R4 у европеоидов была значительно ниже, чем у хакасов. В отношении R3R4 нами были получены совершенно противоположные результаты. Доля генотипа была выше у европеоидов, по сравнению с хакасами. Редкими были генотипы R2R2 IL-lRa и R2R3 IL-lRa, которые чаще встречались у европеои-

дов, чем у хакасов. Межпопуляционный анализ показал, что у европеоидов с ЯБ была увеличена частота R2R2, R2R3, R2R4 и R3R3 (х2=8,9; р<0,05) и снижена частота R3R4 и R4R4 (х2=65,0; р<0,05) по сравнению со встречаемостью данных генотипов у хакасов. У европеоидов, больных ХГ, по сравнению с аналогичной группой хакасов повышена частота встречаемости R2R2 {¿=5,1\ р<0,05), R2R3, R2R4 (Х2=9,8; р<0,05), R3R4 и снижена - R4R4 (¿=35,5; р<0,05)

Полученные нами результаты распределения полиморфных вариантов гена подтверждаются и данными литературы. Исследования, проведенные в китайской популяции, показали, что только 16 % здоровых доноров были носителями R2 IL-IRa, в то время как в Швеции и Польше - 56,0 %, в Португалии - 47,3 % [El-Omar Е.М., 2000; Machado J.C., 2001; Shin W.G., 2008].

Представляют интерес результаты анализа распределения частот аллель-ных вариантов полиморфизма -330 T/G гена IL-2. Необходимо отметить, что роль полиморфизма -330 T/G гена IL-2 рассматривается в НР-ассоциированных заболеваниях не только с позиций регуляции иммунного ответа, но и одной из причин развития атрофии слизистой оболочки желудка при НР-индуцированном воспалении [Кондрашина Э.А., 2002]. Эффекты потенцируются при генетически детерминированной продукции цитокина. Известно, что замена аллеля Т в позиции -330 промоторной зоны гена IL-2 на G приводит к увеличению экспрессии интерлейкина [Hoffmann S.C., 2001].

Среди европеоидов, больных ХГ, нами зарегистрировано увеличение частоты GT и снижение ТТ -330IL-2. У хакасов, больных ХГ и ЯБ, увеличивалось содержание высокопродуцирующего варианта GG -330 IL-2. В то же время генотип ТТ -330 IL-2 встречался значительно реже у больных ХГ и ЯБ, по сравнению с группой здоровых доноров. Изменения частот генотипов у хакасов, больных ХГ и ЯБ, не были одинаковыми.

Ранее другими исследователями были получены фактические данные частоты встречаемости данного полиморфизма в разных этнических группах. Так, W.G. Shin et al. (2008) показали, что в японской популяции генотип ТТ -330 IL-2 встречался у 72,0 % обследованных в контрольной группе, в то время как у корейцев, по данным S. Togawa (2005), только у 39,6 %. В корейской популяции аллель Т -330 IL-2 встречался у 76,2 % обследованных контрольной группы [Руо C.W., 2003]. По результатам двух независимых исследований W.G. Shin et al. (2008) и J. Wu et al. (2009), среди китайцев, больных ХГ и ЯБ, доминирующим генотипом также был ТТ -330 гена IL-2, хотя различия, по сравнению с генотипами GT и ТТ, в этих же группах больных ХГ и ЯБ не были статистически значимыми [Shin W.G., 2008; Wu J., 2009].

Различия касались и роли генотипов в риске развития заболевания. S. Togawa et al. (2005) продемонстрировали связь между генотипом ТТ -330 IL-2 и

риском развития атрофии слизистой оболочки желудка. По результатам исследования проведенного научной группой D.M. Queiroz и соавторами (2009), показано, что у носителей аллеля G полиморфизма -330 T/G гена IL-2 снижен риск развития НР-ассоциированной гастродуоденальной патологии.

Анализ полиморфизма -174 G>C гена IL-6 показал, что у европеоидов при ЯБ доля GG -174 IL-6 снижалась с одновременным увеличением СС -174 IL-6 (Х2=3,90; р<0,05). У больных ХГ достоверных различий частот генотипов относительно контроля выявлено не было. У хакасов, больных ХГ и ЯБ, не было выявлено статистически значимых отличий по сравнению с группой здоровых доноров. Генотип СС -174 IL-6 в группе пациентов с ХГ выявлен не был. Однако у коренного и пришлого населения частота встречаемости возможных генотипов имеет существенные различия.

Роль аллельных вариантов гена IL-8 в патогенезе НР-ассоциированной ЯБ не является однозначной [Kamali-Sarvestani Е., 2006]. Аллель А -251 IL-8 связан с прогрессией атрофических изменений в слизистой оболочке желудка у пациентов с НР и увеличивает риск развития ЯБ в японской популяции [Ohyauchi М, 2005; Taguchi А., 2005]. Z. Gyulai et al. показали взаимосвязь между носи-тельством генотипа ТТ -251 IL-8 и риском развития дуоденальной язвы. B.D. Ye et al. (2009) показали, что аллель А полиморфизма Т-251 А гена IL-8 ассоциирован с высокой продукцией IL-8, тяжелой степенью воспаления, атрофией слизистой, по сравнению с генотипом ТТ -251IL-8.

В нашем исследовании среди европеоидов частота встречаемости генотипа АА -251 IL-8 не различалась у больных с ХГ и ЯБ. У хакасов при ЯБ была высокой частота встречаемости высокопродуцирующего генотипа АА -251 IL-8, доля ТА значительно снижалась относительно контроля. При ХГ такой закономерности не отмечалось.

Данный факт имеет подтверждение и в работах других исследователей. Генотип АА -251 IL-8 ассоциирован с риском развития ЯБ двенадцатиперстной кишки [Hofner Р., 2007]. J.M. Kang et al. (2009) также показали, что, хотя при ЯБ преобладающим генотипом был ТА и ТТ -257 IL-8, риск развития заболевания связан с генотипом АА -257 IL-8. Исследования, проведенные Е. Garza-Gonzalez et al. (2007), Р. Cañedo et al. (2008), продемонстрировали преобладание гетерозиготного генотипа ТА -257 IL-8 при ХГ.

Для дополнительного анализа мы рассчитывали значения критерия отношения шансов, на основании чего сделали вывод о положительной ассоциации генотипов и риске развития НР-ассоциированных ЯБ и ХГ. У европеоидов генотип GT -330 IL-2 (OR=2,35) положительно ассоциирован с риском развития ХГ. Риск развития ЯБ ассоциирован с генотипом СС +3953 IL-ip (OR=2,63), R2R3 IL-lRa (OR=8,08), СС -174 C>C IL-6 (OR=2,25). С учетом значений пока-

зателей критерия отношения шансов можно заключить, что полиморфный вариант ТТ -330 ЕЬ-2 ((Ж=0,28) является протективным в отношении риска развития ХГ у европеоидов. Генотипами, снижающими риск развития ЯБ, у европеоидов являются СТ и ТТ +3953 ГЬ-1р гена 1Ь-1Р (ОЯ=0,51 и СЖ=0,44, соответственно), Я4К4 [Ь-1Яа и ЯЗИ4 1Ь-1Иа (0я=0,51 и ОК=0,30, соответственно) (рис. 6).

У хакасов возможное влияние на риск развития ХГ связано с наличием генотипа СТ +3953 1ИР (СЖ=1,97), протективный эффект у хакасов оказывает генотип ТТ -330 1Ь-2 ((Ж=0,42). Фактором, ассоциированным с риском развития ЯБ, является йй -330 Л-2 (СЖ=1,91) и АА -251 1Ь-8 (ОК=3,15). Протективный эффект в отношении развития ЯБ в данной популяции был ассоциирован с ТА -251 1Ь-8 (011=0,40) (рис. 7).

Резистентность Предр асположенность

С+3953Т IL-lß

IL-lRa VNTR — 4ji ---------- R2R3

ТТ 0,28 -330 T/GIL-2 2,35 GT

-174 ОС IL-6 -251 T>A IL-8

0,5 1 2 3 5 8

Резистентность Предрасположенность

ТТ 0,44 : C+3953T IL-lp 2/3 cc

R4R4 0,51 IL-lRa VNTR ','v .L-.rl 8,08 R2R34

-330 T/O IL-2

-174 ОС IL-6 " 2,25 cc

-251 T>A IL-8

0,5 1 2 3 5 8

1'ис. 6. Показатели критериев отношения шансов (OR) риска развития Helicobacter ру1оп-ассоциированных хронического гастрита (а) и язвенной болезни (б) у европеоидов

Для определения взаимосвязи различных полиморфных вариантов гена с развитием ХГ или ЯБ нужно обратить внимание на системы межгенного взаимодействия. Известно, что полиморфный вариант Я2ЯЗ гена 1Ь-1Яа ассоциирован с высоким уровнем продукции цитокина. Его физиологическое действие направлено на конкурентное связывание рецептора для 1Ь-1р, тем самым при-

водя к подавлению эффектов цитокина. Однако гиперпродукция антагониста рецептора ГЬ-Ша оказывает парадоксальный эффект: по принципу обратной связи происходит усиление синтеза 1Ир. В результате воспалительная реакция приобретает затяжной характер.

На основании выявленной нами ассоциации риска развития ЯБ у европеоидов и комбинации генотипов СС +3953 1Ь-1(1 и Я2Ю гена 1Ь-1Яа можно предположить, что именно этот эффект имеет место в патогенезе ЯБ у европеоидов. В то же время у хакасов наиболее распространенными вариантами были СС +3953 1Ир и Я4Я4 1Ь-111а. Данные генотипы не характеризуются высоким уровнем экспрессии гена. Вероятно, эта особенность обеспечивает мягкий про-воспалительный эффект, следовательно, и низкую, по сравнению с европеоидами, заболеваемость ЯБ.

Резистентность Предрасположенность

С+3953Т IL-lp 1,97 CT

IL-IRa VNTR

ТТ <М2 -330 T/GIL-2

-174 ОС IL-6 -251 T>AIL-8

0,5 1 2 3 5 8

Л

Резистентность Предрасположенность

C+3953T IL-ip

IL-IRa VNTR

-330 T/G IL-2 Ifil GG

-174 ОС IL-6

ТА 0,40 -251 T>AIL-8 ':r'•'."•'• ' ' : : 3,15 AA

0,5

1

Fue. 7. Показатели критериев отношения шансов (UR) риска развития Helicobacíer pylori-ассоциированных хронического гастрита (а) и язвенной болезни (б) у хакасов

Необходимо отметить, что инфицирование CagA+ штаммами HP также может влиять на изменение концентрации IL-8 [Audibert С., 2000; Fischer W., 2001; Riedcr G., 2001; Kim N., 2010]. Важную роль в запуске и стимуляции продукции IL-8 играет липополисахарид клеточной стенки HP, причем, разные

штаммы HP оказывают разное стимулирующее влияние. Считается, что CagA+ штаммы увеличивают продукцию цитокина. В результате анализа внутриклеточных сигнальных механизмов было показано, что HP индуцирует транскрипцию гена IL-8 через активацию NF-кВ р65 [Ritter В., 2011]. В то же время L.I. Shu-Ping et al. (2010) показали, что при CagA HP-зависимой активации PI3K/Aktl сигнального пути происходит супрессия синтеза IL-8 эпителиоцита-ми.

Таким образом, можно сделать вывод, что у хакасов фактическим риском развития ЯБ является наличие генотипа АА -251 IL-8. Другим фактором является установленная нами взаимосвязь между генетическими особенностями инфекта (cagA+ HP) и носительством генотипа ТА -251IL-8 у хакасов, больных ЯБ. Анализ содержания IL-8 в сыворотке крови, в зависимости от генотипа, показал, что уровень IL-8 у носителей АА -251 продукции был наибольшим, по сравнению с уровнем интерлейкина у носителей генотипов ТА и TT -251 1L-8. Следовательно, сочетание CagA и ТА -251 IL-8 сопряжено с более выраженным воспалением в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки. Однако штаммы HP, не экспрессирующие CagA, не являются комменсалами, так как обнаруживаются и у больных язвенной болезнью, и у больных раком желудка, хотя значительно реже. Это связано с тем, что подверженность к ЯБ, ХГ является полигенной.

Заключение

Исследование иммунопатогенеза—НР-ассоциированной гастродуоденаль-ной патологии, проведенное у двух популяций - хакасов и европеоидов, проживающих на одной территории - в Республике Хакасия, позволило выявить ряд клинико-патогенетических особенностей ХГ и Ж (рис. 8).

У европеоидов чаще регистрировался более тяжелый характер течения ЯБ (степень тяжести, частота обострений, наличие осложнений), что может быть связано с присутствием гена vacA sls2 (OR=3,3). У хакасов более легкое течение ЯБ ассоциировано с наличием гена cagA HP (OR=32,3).

Изменения характеристик локального и системного иммунитета у пациентов с HP-ассоциированной патологией коррелировали со степенью выраженности инфекционного процесса и популяционными особенностями обследованных. HP является длительно протекающей инфекцией, в результате которой возникает гиперактивация локальной иммунной системы с последующей декомпенсацией по количественным и качественным признакам, соответственно, а также снижение эффективности иммунного ответа.

Свидетельством этого является факт выявления нарушения баланса цито-кинов в сыворотке крови (IL-4, IL-10, TNFa) у хакасов и европеоидов, страдающих Helicobacter pylori-ассоциированными хроническим гастритом и яз-

венной болезнью, а также особенности спонтанной и ФГА-индуцированной продукции интерлейкинов мононуклеарными лейкоцитами крови. Важное значение имеет иммунофенотипический состав лимфоцитов крови. У хакасов при хроническом гастрите и язвенной болезни наблюдалось снижение числа СЭЗ+-, С04+- и С08+-лимфоцитов крови, у европеоидов — увеличение численности субпопуляций СБ4+- и С08+-лимфоцитов крови.

Рис. 8. Молекулярно-клеточные механизмы нарушения локального и системного иммунитета при инфекции Helicobacter pylori СОЖ - слизистая оболочка желудка, ПК - периферическая кровь, по данным результатам собственных исследований (выделено цветом)

Обнаруженные изменения закономерностей реализации апоптотической гибели иммунных клеток являются важным звеном нарушения иммунореактив-

ности макроорганизма в патогенезе HP-ассоциированных заболеваний, так как уменьшение количества клеток иммунной системы сопряжено с изменениями соотношения субпопуляций лимфоцитов и является одним из проявлений им-мунореактивности.

Очевидно, что выявленные изменения, с одной стороны, являются следствием нарушения иммунологического равновесия, обеспечивающего адекватное реагирование макроорганизма на HP-инфекцию. С другой стороны, являются результатом молекулярно-генетической детерминации функционирования иммунной системы.

Выводы

1. Различные клинические фенотипы язвенной болезни, ассоциированной с Helicobacter pylori, у коренного и пришлого населения Республики Хакасия сопровождаются доминированием в различных этнических популяциях разных, по генетическим характеристикам, патогенов. У хакасов язвенная болезнь ассоциирована с cagA штаммами Helicobacter pylori (93,2 %), у европеоидов - sls2 vacA штаммами Helicobacter pylori (55,6 %). Helicobacter pylori-ассоциированный хронический гастрит также характеризуется молекулярно-генетической дифференцированностью возбудителя: у хакасов хронический гастрит ассоциирован с ш2 vacA штаммами (62,9 %), у европеоидов - с ml vacA штаммами Helicobacter pylori (62,1 %).

2. Изменения субпопуляционного состава клеточного инфильтрата в слизистой оболочке желудка у хакасов и европеоидов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией характеризуются активацией гуморального (увеличение числа С020+-лимфоцитов) и клеточного звеньев иммунитета (возрастание количества CD4+- и СБ8+-лимфоцитов).

3. Дисбаланс между апоптозом (СРР-32 и Вс1-2) и пролиферацией (Ki-67) лимфоцитов слизистой оболочки желудка у хакасов и европеоидов с хроническим гастритом и язвенной болезнью, ассоциированных с Helicobacter pylori, имеет одинаковую направленность, но разную интенсивность: активность апоптоза лимфоцитов (отношение показателей СРР-32 и Bcl-2) выше при хроническом гастрите, чем при язвенной болезни; у хакасов более выражено, по сравнению с европеоидами.

4. Изменения численности субпопуляций лимфоцитов крови при гастродуоденальной патологии, ассоциированной с инфекцией Helicobacter pylori, у коренного и пришлого населения Республики Хакасия, характеризуются снижением числа CD3+-, CD4+- и СЭ8+-лимфоцитов у хакасов как при хроническом гастрите, так и при язвенной болезни, и увеличением количества CD4+- и С08+-лимфоцитов у европеоидов, больных хроническим гастритом

и язвенной болезнью, по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров.

5. Течение Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальнон патологии у больных, относящихся к разным этническим группам и проживающих на территории Республики Хакасия, сопровождается изменением числа лимфоцитов крови, вступивших в апоптоз, наиболее выраженным у хакасов, по сравнению с европеоидами.

6. Чувствительность лимфоцитов, полученных у пациентов с гастродуоде-нальной патологией, ассоциированной с инфекцией Helicobacter pylori, к действию неспецифического модулятора апоптоза (0,01 % раствора перекиси водорода) in vitro снижена, по сравнению с лимфоцитарными клетками крови у здоровых доноров; выраженность указанных изменений наиболее значима у европеоидов, чем у хакасов. При язвенной болезни апоптотиче-ский индекс снижен, что свидетельствует о снижении функционального потенциала иммунных клеток при длительной инфекции Helicobacter pylori.

7. Дисбаланс интерлейкинов сыворотки крови у хакасов и европеоидов, страдающих Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальнон патологией, характеризуется увеличением концентрации TNFa, IL-4 и IL-I0. Особенности спонтанной и ФГА-индуцированной продукции интерлейкинов моно-нуклеарными лейкоцитами крови у пациентов с Helicobacter pylori-сопряженными хроническим гастритом и язвенной болезнью характеризуются снижением базальной и резервной продукции IL-2 у хакасов н увеличением продукции IL-4, IL-10 - у европеоидов.

8. Распространенность полиморфизмов генов цитокинов С+3953Т IL-ip, IL1-Ra VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G/C IL-6, -251 T/A IL-8 у хакасов и европеоидов имеет выраженные межпопуляционные различия и является определяющим в иммунопатогенезе Helicobacter pylori-сопряженных хронического гастрита и язвенной болезни у хакасов и европеоидов.

9. Иммуногенетическими предикторами Helicobacter pylori-ассоциированной язвенной болезни у хакасов являются генотип АА промоторного региона -251 Т>А гена IL-8 (OR=3,15), генотип GG промоторного региона -330 T/G IL-2 (OR=l,91); у европеоидов - генотип СС промоторного региона С+3953Т гена IL-lp (OR=2,63), генотип R2R3 гена IL-IRa (OR=8,08), генотип СС промоторного региона -174 G>C гена IL-6 (OR=2,25). У хакасов риск развития хронического гастрита при инфицировании Helicobacter pylori ассоциирован с генотипом СТ полиморфизма С+3953Т гена IL-ip (OR=l,97); у европеоидов - с генотипом R2R3 гена IL-IRa (OR=4,41) и генотипом GT промоторного региона -330 T/G гена IL-2 (OR=2,35).

10. Фактором, снижающим риск развития язвенной болезни, ассоциированной с Helicobacter pylori, у хакасов является генотип ТА промоторного региона -251 Т>А гена IL-8 (OR=0,40); у европеоидов - генотипы СТ и ТТ промоторного региона С+3953Т гена IL-ip (OR=0,51 и OR=0,44, соответственно), генотипы R3R4 и R4R4 гена IL-IRa (OR=0,30 и OR=0,51, соответственно). Риск развития хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, снижен у хакасов и европеоидов - носителей генотипа ТТ промоторного региона -330 T/G IL-2 (OR=0,42 и OR=Of28, соответственно).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Агеева, Е.С. Особенности хеликобактер-ассоциированной язвы желудка у населения Республики Хакасия / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, II.В. Рязанцева II Сибирский вестник гепатологии и гастроэнтерологии. - 2007. - № 21. - С. 48-49.

2. Штыгашева, О.В. Фенотипический состав лимфоцитов собственной пластинки желудка при язвенной болезни желудка у жителей Республики Хакасия / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева // Сибирский вестник гепатологии и гастроэнтерологии. -

2007,-№21.-С. 146-147.

3. Агеева, Е.С. Этно-биологические аспекты хеликобактер-ассоциированной патологии желудка / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева // Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы: материалы II межрегиональной научно-практической конференции 27-28 сентября 2007 г., г. Абакан / под. ред. Т.А. Фоте-ковой - Абакан: Издательство Хакасского Государственного Университета им. Н.Ф. Катанова, 2007. - С. 175-176.

4. Агеева, Е.С. Патогенетические аспекты в формировании хеликобактер-ассоциированной патологии / Е.С. Areeea^XLB- Штыгашева, Н.В. Рязанцева // Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под ред. В.П. Пузырева. Вып. 8. - Томск: Изд-во «Печатная мануфактура», 2007. - С. 42-44.

5. Штыгашева, О.В. Иммунобиологическая толерантность к хронической персистен-ции Helicobacter pylori / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева, Н.В. Рязанцева II Клинико-эпндемиологические и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения: материалы восьмой Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием и красноярской краевой гастроэнтерологической конференции / под ред. проф. В.В. Цуканова, проф. А.Б. Салминой - Красноярск, 2008.-С. 100-111.

6. Штыгашева, О.В. О роли персистенции микроорганизмов в генезе неинфекциом-ных заболеваний / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева II Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - 2 (22). - Ч. II. - С. 648-649.

7. Агеева, Е.С. Молекулярно-генетические особенности распространенности персистенции Helicobacter pylori в Республике Хакасия / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - 2 (22). - Ч. II. - С. 651-652.

8. Агеева, Е.С. Роль апоптоза в патогенезе мультифакториальных заболеваний / Е.С. Aieeea, О.В. Штыгашева // Актуальные проблемы медицины: материалы межрегиональной научно-практической конференции, 16-17 мая 2008 г., г. Абакан / под ред. О.В. Штыгашевой - Абакан: Издательство ООО «ДиалогСибирь-Абакан».

2008.-С. 82-86.

9. Особенности апоптоза лимфоцитов периферической крови при язвенной болезни у коренных жителей Республики Хакасия / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, H.H. Буто-рин и др. // Актуальные проблемы медицины: материалы межрегиональной научно-практической конференции, 16-17 мая 2008 г., г. Абакан / под ред. О.В. Штыгаше-вой - Абакан: Издательство ООО «ДиалогСибирь-Абакан», 2008. - С. 89-90.

10. Агеева, Е.С. Методы дифференциального окрашивания апоггготических клеток / Е,С. Агеева, O.A. Берсенева // Актуальные проблемы медицины: материалы межрегиональной научно-практической конференции 16-17 мая 2008 г., г. Абакан / под ред. О.В. Штыгашевой - Абакан: Издательство ООО «ДиалогСибирь-Абакан», 2008. - С. 234-236.

11. Штыгашева, О.В. Роль Helicobacter pylori в патогенезе актуальных социально-значимых заболеваний / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева // «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Республики Тыва»: материалы конференции в рамках ежегодной итоговой научно-практической конференции ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» / под. ред. В.Т. Манчука и C.B. Смирновой. - Кызыл: Тувинское книжное издательство, 2008. - Вып. 7. - С. 156-159.

12. The Features of Interactions between M. pylori and Human Organism in Caucasian and Mongol Populations / O.V. Shtygasheva, E.S. Ageeva, N.N. Butorin, N.V. Ryazantseva // Helicobacter. - 2008. - Vol. 13, № 5. - P.432-433.

13. Иммунологические показатели крови при язвенной болезни у коренного населения Хакасии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, H.H. Буторин и др. // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. Приложение № 32. Материалы Четырнадцатой Российской Гастроэнтерологической Недели, 6-8 октября 2008 г., г. Москва, 2008. - T. XVIII, № 5. - С. 143.

14. Анализ вклада гена -251 Т>А ИЛ-8 в генетическую предрасположенность язвенной болезни у хакасов / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, В.М. Иптышев, A.A. Смор-гова П Вопросы патогенеза типовых патологических процессов: труды Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Новосибирск: Снбмедиздат НГМУ, 2009. - С. 24-27.

15. Агеева. Е.С. Анализ уровня интерлейкина-lß у больных гастродуоденальной НР-ассоциированной патологией коренного населения Республики Хакасия / Е.С. Агеева, A.A. Сморгова // «Студент и научно-технический прогресс»: Медицина: материалы XLVII Международной научной студенческой конференции / Новосиб. гос. ун-т. Новосибирск, 2009. - С. 3.

16. Ассоциации полиморфизма генов интерлейкина 1 с гастродуоденальной патологией у хакасов / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, В.М Иптышев и др. II Клинико-эпидемиологические проблемы и этно-экологические проблемы органов пищеварения: материалы девятой Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием, 6-7 мая 2009 г. / под. ред. проф. В.В. Цуканова, проф. А.Б. Салминой. - Красноярск, 2009. - С. 133-134.

17. Иммунологические особенности течения гастродуоденальной патологии у жителей Хакасии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева В В. Цуканов, Н.В. Рязанцева // Иммунология. - 2009. - Т. 30, № 3. - С. 162-165.

18. Polymorphisms in Genes Interleukins Associated with Ulcer Disease in a High-Risk Khakas Population / O.V. Shtygasheva, E.S. Ageeva, N.N. Butorin, N.V. Ryazantseva // Helicobacter.-2009.-Vol 14, №4.-P 359.

19. Агеева, Б.С. Изучение ассоциаций полиморфизмов генов интерлейкинов с язвенной болезнью у хакасов / Е.С. Агеева, О. В. Штыгашева // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. Приложение № 34. Материалы Пятнадцатой Российской Гастроэнтерологической Недели, 12-14 октября 2009 г., Москва, 2009. - Т. XIX, № 5. -С. 131.

20. Механизмы формирования иммунного ответа при Helicobacter pylori персистенции у коренного населения Хакасии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева, Е.В. Кудряшова // Четвертая Всероссийская научно-практическая конференция / под ред. акад. РАМН проф. В.А. Шкурупия. - Новосибирск, 2009. - С. 5-6.

21. Характеристика морфологических изменений слизистой оболочки желудка у хакасов при персистенции инфекции Н. pylori / О.А. Берсенева, Е.А. Осипова, Е.С. Агеева, А.С. Пуликов // Наука и общество: взгляд молодых исследователей: материалы третьей научной конференции школьников и студентов с международным участием, Абакан / под. ред. С.В. Пебыковой. - Абакан: ООО «ДиалогСибирь-Абакан», 2009. - С. 43-46.

22. Агеева, Е.С. Особенности патогенеза Helicobacter pylori-инфекции у представителей хакасской популяции / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева // Бюллетень Сибирской медицины. - 2009. - № 4. - С. 5-9.

23. Некоторые показатели морфомстрии слизистой оболочки желудка при персистенции Helicobacter pylori у коренных жителей Республики Хакасия / О.А. Берсенева, Е.А. Осипова, Е.С. Агеева, А.С. Пуликов II Экология Южной Сибири и сопредельных территорий. Выпуск 13: в 2 т. Т. II / отв. ред. В.В. Анюшин. - Абакан: Издательство Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова, 2009. - С. 113-115.

24. Система цитокинов у больных с хронической персистенцией Helicobacter pylori у коренного населения Хакасии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, В.М. Иптышев, Н.В. Рязанцева И Дни иммунологии в Сибири: материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным" участием / под ред. В.А. Козлова, С.В. Смирновой, ВТ. Манчука. - Красноярск: Издательство КрасГМУ, 2010. - С. 91-93.

25. Молекулярные механизмы изменений слизистой оболочки желудка у хакасов при персистенции Helicobacter pylori / О.А. Берсенева, Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева и др. // Дни иммунологии в Сибири: материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием / Под ред. В.А. Козлова, С.В. Смирновой, В.Т. Манчука. - Красноярск: Издательство КрасГМУ, 2010. - С. 96-98.

26. Иммунопато генетические особенности развития Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний / Е.С. Агеева, З.К. Хаитова, О.В. Штыгашева и др. // Вопросы патогенеза типовых патологических процессов: труды II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Новосибирск: Сибмедиздат НГМУ, 2010. - С 7-10.

27. Агеева, Е.С. Модуляция программируемой гибели клеток при хронической персистенции Helicobacter pylori / Е.С. Агеева // Актуальные проблемы медицины: материалы 13-ой межрегиональной научно-практической конференции с международным участием; г. Абакан, 4-5 мая 2010 г. / отв. ред. О.В. Штыгашева. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова». 2010.-С. 232-238.

28. Агеева, Е.С. Особенности распределения генов цитокинов (IL-I и 11.-8) у больных язвенной болезнью / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева II Актуальные

проблемы медицины: материалы 13-ой межрегиональной научно-практической конференции с международным участием; г. Абакан, 4-5 мая 2010 г. / отв. ред. О.В. Штыгашева. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2010. - С. 238-243.

29. Фенотип лимфоцитов периферической крови при Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, З.К. Хаитова и др. // Актуальные проблемы медицины: материалы 13-ой межрегиональной научно-практической конференции с международным участием; г. Абакан, 4-5 мая 2010 г. / отв. ред. О.В. Штыгашева. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2010. - С. 243-246.

30. Гены и болезни хакасов / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева, В.Н. Харьков, В.А. Степанов // Красноярск: Поликор, 2010. - 296 с.

31. Фенотип лимфоцитов крови больных с Helicobacter pylori-ассоциированным раком желудка / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, МО. Максимов, Г.Н. Стрижаков // Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири: материалы научно-практической конференции молодых ученых. Вып. 8. / под ред. В.Т. Манчука, С.В. Смирновой. - Красноярск, 2010. - С. 3-4.

32. Роль TNFA в патогенезе Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологии / Е.С. Агеева, В.М. Иптышев, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева П Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири: материалы итоговой научно-практической конференции НИИМПС СО РАМН / под ред. В.Т. Манчука, С.В. Смирновой. - Красноярск, 2010. - Вып. 9. - С. 135-136.

33. Агеева, Е.С. Популяционные особенности распространенности инфекции Helicobacter pylori в Хакасии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева И Инфекция Helicobacter pylori в России: сборник научных статей / под. ред. Е.А. Корниенко и др. - СПб., 2010.-С. 5-12.

34. Агеева, Е.С. Ассоциация полиморфизмов генов G-174C ИЛ6 и Т-251А ИЛ8 с язвенной болезнью у хакасов / Е. С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева И Иммунология. - 2010. 3, Т. 31.-С. 131-133.

35. Молекулярно-генетические факторы, влияющие на исход инфицирования Helicobacter pylori у жителей Республики Хакасия I Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева, В.В. Цуканов // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатоло-гни, Колопроктологии. - 2010. - № 4. - С. 13-18.

36. Роль апоптоза в диерегуляции локального и системного иммунитета при Helicobacter pylori-инфекции / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, В.М. Иптышев и др. // Бюллетень Сибирской медицины. - 2010. - Ks 5. - С. 13-18.

37. The external features of polymorphism in genes IL-1В in patients with atrophic gastritis / E.S. Ageeva, O.V. Shtygasheva, N.N. Butorin, N.V. Ryazantseva // Helicobacter. -2010.-Vol. 15, N.4. -P.357.

38. The phenotype lymphocytes of patient with H. pylori-associated the gastric cancer / O.V. Shtygasheva, E.S. Ageeva, M O. Maksimov, G.N. Strizhakov // Helicobacter. -2010- Vol 15, №4.-P. 384.

39. Анализ эрадикационкой терапии хеликобактериоэа в России и возможности использования фитопрепаратов / Е.В. Смирнова, Е.О. Шалгинова, Ю.В. Саранчина, Е.С. Агеева и др. // Наука и общество: взгляд молодых исследователей: материалы четвертой научной конференции школьников и студентов с международным участием, 12-13 ноября 2010 г., г. Абакан / под. ред. О.В. Комаровой. - Абакан: ООО «ДиалогСибирь-Абакан», 2010. - С. 86-87.

40. Изучение фагоцитарной активности нейтрофилов и цитокин-продуцирующей способности лимфоцитов у больных с персистенцией Helicobacter pylori / Ю.В. Саран-чина, Е.С. Агеева, C.B. Водолаэова и др. Н Наука и общество: взгляд молодых исследователей: материалы четвертой научной конференции школьников и студентов с международным участием, 12-13 ноября 2010 г., г. Абакан / под. ред. О.В. Комаровой. - Абакан: ООО «ДиалогСибирь-Абакан», 2010. - С. 85-86.

41. Особенности цитокин-продуцирующей способности лимфоцитов больных хроническим гастритом и язвой желудка, ассоциированными с Helicobacter pylori у жителей Хакасии / Ю.В. Саранчина, Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, C.B. Водолазова // Экология Южной Сибири и сопредельных территорий. Выпуск 14: в 2 т. T. II / отв. ред. В.В. Анюшин. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасского государственного университета им. Н. Ф. Катанова», 2010. - С. 133-115.

42. Аспекты прогнозирования перехода Helicobacter pylori-ассоциированного хронического гастрита в рак желудка / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, О.М. Максимов и др. // Актуальные вопросы долголетия: материалы Всероссийского научно-практической конференции, г. Красноярск, 8-10 декабря 2010 г. / под ред. В Т. Манчука, C.B. Смирновой. - Красноярск: Изд-во КрасГМУ, 2010. - С. 3-5.

43. Агеева, Е.С. Роль аллельных вариантов гена IL-1B в формировании II. pylori-вссоциированной гастродуоденальной патологии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева// Медицинский Академический Журнал, 2010. - Т. 10, №5. - С.114.

44. Оценка иммунного статуса больных с персистенцией Helicobacter pylori / Ю.В. Саранчина, Е.С. Агеева, C.B. Водолазова и др. // Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных сил Российской Федерации: труды Третьего съезда военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных сил Российской Федерации (Санкт-Петербург, 8-10 декабря 2010 г.). - СПб., 2010. -С. 179.

45. Штыгашева, О.В. Роль иммунорегуляториызшитокинов в патогенезе хронического гастрита и язвенной болезни, поиск предикторов заболеваний / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева, В.М. Иптышев // Сибирский медицинский журнал. - 2011. - № I. -С. 88-90.

46. Агеева, Е.С. Популяционные особенности ассоциации полиморфизма генов ик-терлейкинов с патологией желудка и двенадцатиперстной кишки у хакасов / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева // Терапевтический архив. - 2011. - Т. 83, №2.-С. 16-19.

47. Агеева, Е.С. Роль полиморфизма гена -330 T/G IL-2 в патогенезе Helicobacter ру-lori-ассоциированных хронического гастрита и язвенной болезни / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева // Дни иммунологии в Сибири: материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием / под. ред. В.А. Козлова, C.B. Смирновой, В.Т. Манчука. - Абакан. Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2011. - С. 116-118.

48. Саранчина, Ю.В. Влияние полиморфизма гена С+3953Т IL-Iß на продукцию ин-терлейкина при хроническом гастрите, ассоциированном с Helicobacter pylori инфекцией / Ю.В. Саранчина, Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева // Дни иммунологии в

, Сибири: материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием / под. ред. В.А. Козлова, C.B. Смирновой, В Т. Манчука. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2011. - С. 163-167.

49. Штыгашева, О.В. Формирование научной школы: молекулярно-генетические предикторы и факторы риска социально-значимых заболеваний у коренного и пришлого населения Хакасии / О.В. Штыгашева, Е.С. Агеева // Актуальные проблемы медицины: материалы 14-й межрегиональной научно-практической конференции с международным участием; г. Абакан, 27-28 апреля 2011 г. / под. ред. О.В. Штыга-шевой. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2011. - С. 6-9.

50. Особенности иммунного статуса при семейной трансмиссии хеликобактериоза у населения Хакасии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Ю.В. Саранчина, С.В. Водола-зова // Актуальные проблемы медицины: материалы 14-й межрегиональной научно-практической конференции с международным участием; г. Абакан, 27-28 апреля 2011 г. / под. ред. О.В. Штыгашевой. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова», 20II. - С. 209-219.

51. Агеева, Е.С. Ассоциация полиморфных маркеров 251 Т>А гена IL-8 с язвенной болезнью у хакасов / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева // Молекулярная медицина. - 2011. - №2. - С. 17-22.

52. Аллсльный полиморфизм генов IL-IQ и IL-8 при персистенции Helicobacter pylori в случаях семейной трансмиссии у жителей Хакасии / Ю.В. Саранчина, Е.С. Агеева, С.В. Водолазова, О.В. Штыгашева II Клинико-эпидемиологические и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения: материалы одиннадцатой Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием; г. Иркутск, 24-25 мая 2011 г. и Забайкальской конференции «Актуальные проблемы гастроэнтерологии», г. Чита, 27-28 мая 2011 г. / под ред. В.В. Цуканова. - Красноярск, 2011.-С. 55-56.

53. Семейный анамнез в определении предрасположенности к заболеваниям / Е.С. Агеева, Ю.В. Саранчина, С.В. Водолазова, О.В. Штыгашева II Клинико-эпидемиологические и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения: материалы одиннадцатой Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием; г. Иркутск, 24-2S мая 2011 г. и Забайкальской конференции «Актуальные проблемы гастроэнтерологии», г. Чита, 27-28 мая 2011 г. / под ред. В.В. Цуканова. - Красноярск, 2011. - С. 63-66.

54. Эгно-популяционные особенности распределения полиморфизма гена lL-ф при Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева и др. // Бюллетень Сибирской медицины.-20П. - № 3. - С. 14-18.

55. Роль IL-ip и IL-8 в патоморфозе слизистой оболочки желудка при Helicobacter ру-bri-ассоциированном гастрите/ Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, А.С. Пуликов, Н.Н. Буторин // Бюллетень ВСПЦСО PAMII. -2011. - №1(77), ч. I.-C. 16-20.

56. Ageeva, E.S. The polymorphism in genes and pathomorphosis of the mucous membrane of the stomach at Helicobacter pylori-associated gastritis / E.S. Ageeva, O.V. Shty-gasheva, N.V. Ryazantseva //Helicobacter. -2011. -Vol. 16 (S.l). - P. 124.

57. Агеева, Е.С. Поиск молекулярно-генетических факторов риска Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний желудка / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева // Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы: материалы четвертой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, 20-21 октября 2011 г., г. Абакан / под. ред. Т.А. Фотековой. - Абакан: Издательство ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2011. - С. 176-178.

58. Изменение показателей иммунного ответа при хронической персистенции Helicobacter pylori-инфекции у населения Хакасии / Ю.В. Саранчина, С.В. Водолазова, Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева // Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы: материалы четвертой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, 20-21 октября 2011, Абакан / под. ред. Т.А. Фотеко-вой. - Абакан: Издательство ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2011. -С. 185-186.

59. Ageeva, E.S. Features of immune response in pathogenesis of ulcer disease at the native and stranger inhabitants of Khakassia / E.S. Ageeva, O.V. Shtygasheva // Abstracts of XII International Euroasian Congress of Surgery and Gastroenterology. Baku, October 20!I.-P. 36-37.

60. Продукция провоспалительных цитокинов IL-Iß и IL-8 при инфекции Helicobacter pylori / Ю.В. Саранчина, C.B. Водолазова, Е.С. Агеева, O.B. Штыгашева // Экология Южной Сибири и сопредельных территорий. Выпуск 15. В 2 т. Т. II / отв. ред. В,В. Анюшин. - Абакан: Издательство ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», 2011.-С. 141-142.

61. Особенности иммунного ответа при хронической инфекции Helicobacter pylori-инфекции / Ю.В. Саранчина, С.В. Водолазова, Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева // Актуальные вопросы бактериологии: материалы научно-практической конференции. -2011.-С. 63-65.

62. Генетические детерминанты прогноза инфицирования Helicobacter pylori / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, Н.В. Рязанцева и др. // Бюллетень СО РАМН. — 20II.— Т. 31, №6.-С. 5-9.

63. Роль нарушений системы цитокинов в патогенезе Helicobacter pylori-ассоциированной патологии / Е.С. Агеева, О.В. Штыгашева, В.М. Иптышев, Н.В. Рязанцева // Бюллетень Сибирской медицины. - 2011. - № 6. - С. 5-8.

64. Агеева, Е.С. Показатели спонтанного и индуцированного апоптоза при Helicobacter pylori-инфекции / Е.С. Агеева // Сибирский медицинский журнал. - 2012. -№ I .-C. 37-39.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕННА

АИ - аполтотический индекс

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

ОП - оптическая плотность

ПЦР - полимераэная цепная реакция

РХВ - равновесие Харди-Вайнберга

ФГА - фктогемагггаотанин

ХГ - хронический гастрит

ЭФГДС - ззофагогастродуоленоскопия

ЯБ - язаенная болезнь

CagA (cytotoxín associated gene A) - шгготоксин-ассоцииро ванный антиген CD (cluster differentiation) - кластер дифференци-ровки

CI (Confidents Intervals) - доверительный интервал HP - Helicobacter pylon IFNy - интерферон у lg - иммуноглобулин IL - интерлейкин

IL-IRa - антагонист рецептора интерлейкина OR (Odds Ratio) - отношение шансов Th - Т-хелперный лимфоцит

TNF (tumor necrosis factor) - фактор некроза опухоли

VacA (vacuolating-associated cylotoxin А) - вакуолизируюший

цитотоксин

VNTR (variable nucleotide trend repeat) - вариабельность длины та наемных повторов

Подписано в печать 27.03.2012. Формат 60x84 1/16. Гарнитура Times New Roman. Печать - ризограф. Бумага офсетная. Физ.печ.л. 2,75. Усл.печ.л. 2,6. Уч.-изд.л. 2,3. Тираж 100 экз. Заказ № 57.

Отпечатано в типографии ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова» 655017, г. Абакан, пр. Ленина, 90а, тел. 22-51-13; e-mail: izdat@khsu.ru

12-

1 69 Л

2011355610

2011355610

 
 

Оглавление диссертации Агеева, Елизавета Сергеевна :: 2012 :: Томск

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика Helicobacter pylori

1.1.1. Факторы патогенности Helicobacter pylori

1.1.2. Распространенность Helicobacter pylori

1.1.3. Клинико-морфологические варианты Helicobacter pylori- 3 5 инфицирования

1.2. Механизмы развития Helicobacter pylori-ассоциированных 41 заболеваний желудка

1.2.1. Этиология и патогенез язвенной болезни

1.2.2. Патогенез хронического гастрита

1.2.3. Патогенетическая взаимосвязь хронического гастрита 48 и язвенной болезни

1.3. Роль иммунной системы в патогенезе Helicobacter pylori- 50 ассоциированных заболеваний

1.3.1. Механизмы кооперации иммунных клеток в реализации 5 5 иммунитета к Helicobacter pylori

1.3.2. Роль полиморфизма генов цитокинов в развитии 57 Helicobacter pylori-ассоциированной патологии

1.4. Этно-популяционные особенности Helicobacter pylori- 67 ассоциированных заболеваний у хакасов и европеоидов Хакасии

1.4.1. Особенности течения мультифакторной патологии у 67 хакасов и европеоидов Хакасии

1.4.2. Особенности Helicobacter pylori-ассоциированных 68 болезней у хакасов и европеоидов Хакасии

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Материал исследования

2.3. Методы исследования

2.3.1. Оценка уреазной активности

2.3.2. Цитологический метод определения Helicobacter pylori 84 в мазках-отпечатках биоптатов слизистой оболочки желудка

2.3.3. Определение специфических IgG к Helicobacter pylori в 85 сыворотке крови

2.3.4. Определение видов и субтипов Helicobacter pylori в 86 биоптатах слизистой оболочки желудка

2.3.5. Оценка показателей морфо-функциональных свойств 89 слизистой оболочки желудка

2.3.5.1. Морфометрия структурных элементов слизистой оболочки 89 желудка

2.3.5.2. Определение маркеров апоптоза и пролиферации в 90 биоптатах слизистой оболочки желудка

2.3.5.3. Определение CD-маркеров лимфоцитов в биоптатах 92 слизистой оболочки желудка

2.3.6. Оценка состояния системного иммунитета

2.3.6.1. Определение общего количества лимфоцитов крови

2.3.6.2. Получение мононуклеарных лейкоцитов крови

2.3.6.3. Определение субпопуляционного состава лимфоцитов 94 крови

2.3.6.4. Оценка уровня цитокинов в сыворотке крови

2.3.6.5. Оценка спонтанной и индуцированной цитокин- 95 продуцирующей способности лимфоцитов крови

2.3.6.6. Оценка спонтанного и индуцированного апоптоза 96 лимфоцитов крови

2.3.7. Анализ аллельных вариантов генов интерлейкинов

2.4. Статистический анализ результатов исследования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Показатели морфометрии слизистой оболочки желудка у 102 пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастро-дуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.2. Анализ распределения Helicobacter pylori у пациентов 104 с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3. Особенности локального и системного иммунитета у 110 пациентов с Helicobacter pylori ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3.1. Закономерности изменения числа лимфоцитов крови у 110 пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3.2. Иммунофенотип лимфоцитов у пациентов с Helicobacter 112 pylori ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3.2.1. Иммунофенотипические особенности лимфоцитов 112 слизистой оболочки желудка

3.3.2.2. Иммунофенотипические особенности лимфоцитов 114 крови

3.3.3. Особенности реализации апоптоза мононуклеарных 118 лейкоцитов у пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3.3.1. Особенности апоптоза лимфоцитов слизистой оболочки 118 желудка

3.3.3.2. Особенности спонтанного и индуцированного апоптоза 120 лимфоцитов крови

3.3.4. Особенности содержания цитокинов в сыворотке крови 122 у пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3.5. Особенности продукции цитокинов мононуклеарными 129 лейкоцитами крови у пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.3.6. Системный анализ показателей, характеризующих 131 состояние иммунного ответа у пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.4. Распределение аллельных вариантов и генотипов генов 138 цитокинов у пациентов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией у хакасов и европеоидов

3.4.1. Анализ полиморфизма С+3953Т гена IL-1(

3.4.2. Анализ полиморфизма гена IL-IRa VNTR

3.4.3. Анализ полиморфизма-330 T/G гена IL

3.4.4. Анализ полиморфизма -174 G>C гена IL

3.4.5. Анализ полиморфизма-251 Т>А гена IL

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Диверсификация клинических проявлений инфекции 169 Helicobacter pylori у хакасов и европеоидов

4.2. Характеристика иммунологических показателей 173 Helicobacter ру1оп-ассоциированных хронического гастрита и язвенной болезни

4.3. Роль полиморфизмов генов интерлейкинов в реализации 200 иммунного ответа при Helicobacter pylori-инфекции у хакасов и европеоидов

Выводы

 
 

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Агеева, Елизавета Сергеевна, автореферат

Актуальность. Helicobacter pylori является ведущим этиологическим фактором язвенной болезни и хронического гастрита [118, 257]. Результаты широкомасштабных исследований показали, что на долю язвенной болезни, ассоциированной с инфекцией Helicobacter pylori, приходится 70-80 % случаев выявления дуоденальных язв и 50-60 % язв желудка [327]. Появляется все больше доказательств той роли, которую играет инфекция Helicobacter pylori в возникновении и развитии рака желудка [301, 355]. Исследователи связывают с инфицированием Helicobacter pylori 100 % случаев выявления проксимального рака желудка у японцев [163].

Ключевым звеном в развитии гастродуоденальной патологии является не только длительная инфекция Helicobacter pylori в макроорганизме, но и непосредственное участие в этом процессе клеток иммунной системы. Механизмы дизрегуляции иммунного ответа макроорганизма при хронической инфекции Helicobacter pylori связаны с прямым цитопатическим действием микроорганизма, приводящим к поляризации иммунного ответа по Thl-пути и выработке соответствующего спектра цитокинов (IFNy, TNFa, IL-1, IL-2, IL-8, IL-10). Детерминация иммунного ответа по Thl-клеточному типу оказывает решающую роль в иммунопатогенезе заболеваний, связанных с Helicobacter pylori-инфекцией [52, 269]. Действие цитокинов, с одной стороны, вызывает неадекватную активацию иммунной системы: усиление апоп-тоза иммунных клеток с их последующей элиминацией [143, 324], а, с другой, - дисбаланс между процессами программированной гибели желудочных эпителиоцитов и их пролиферацией [15, 84]. Усиление гибели эпителиоци-тов приводит к усугублению язвенных дефектов слизистой оболочки желудка. И, наоборот, преобладание пролиферативных процессов при хроническом воспалении эпителия слизистой оболочки желудка увеличивает риск развития рака [50].

Характер взаимодействия Helicobacter pylori и организма хозяина имеет популяционные отличия. В литературе описаны феномены «африканская загадка», «азиатская загадка», «северная загадка», сущность которых заключается в «консервации» макроорганизмом патогенных штаммов Helicobacter pylori при хронической инфекции [61, 208, 279, 293]. Подобные результаты были выявлены при эпидемиологическом исследовании распространенности язвенной болезни у населения Республики Хакасия [92, 93, 95]. Было установлено, что распределение цитотоксических штаммов Helicobacter pylori и ассоциация бактерии с язвенной болезнью имеет выраженные этнические особенности. При равной частоте инфицированности Helicobacter pylori у хакасов и европеоидов заболеваемость язвенной болезнью у них существенно различается. Кроме того, у хакасов и европеоидов были установлены различия в соотношении процессов пролиферативной и апоптотической активности эпителия слизистой оболочки желудка, а также в дифференциации локального иммунного ответа по ТЬ1/ТЬ2-пути [92]. Данный факт предполагает существование генетически-детерминированных особенностей иммунного ответа и является основой разнообразия Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний.

Приоритетным является изучение ассоциированности заболеваний с рядом аллельных вариантов генов цитокинов и их рецепторов. Накоплено и обобщено значительное число данных о вовлеченности различных полиморфных генов в формирование предрасположенности ко многим социально-значимым заболеваниям, в том числе - инфекциям и связанными с длительной персистенцией патогена осложнениями [57, 67, 212]. Отдельные ал-лельные варианты приводят к изменению уровней продукции соответствующих цитокинов и их рецепторов, что также оказывает влияние на характер течения заболевания и возникновение определенных осложнений, формирует популяционные различия в структуре заболеваемости у европеоидов и монголоидов. Вместе с тем фактические данные о роли конкретных полиморфизмов генов цитокинов и их рецепторов в развитии Helicobacter pyloriассоциированных язвенной болезни и хронического гастрита носят противоречивый характер, в пределах, даже, одной популяции [104]. Выявление генетических особенностей течения Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний необходимо для разработки персонализированных технологий профилактики, диагностики и лечения гастродуоденальной патологии и сопряженных с вызванной персистенцией патогена осложнений.

Таким образом, представляется актуальным и перспективным изучение популяционных различий молекулярных механизмов дизрегуляции иммунного ответа, вызванных инфицированием Helicobacter pylori, у хакасов и европеоидов.

Цель исследования

Установить молекулярно-генетические и клеточные основы иммунопа-тогенеза Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний (язвенная болезнь, хронический гастрит) у населения Республики Хакасия (хакасы, европеоиды).

Задачи исследования:

1. Установить распространенность субтипов VacA и CagA Helicobacter pylori у хакасов и европеоидов с хроническим гастритом и язвенной болезнью, ассоциированными с инфекцией Helicobacter pylori; оценить взаимосвязь между генетическими особенностями Helicobacter pylori и клиническим течением сопряженной с инфекцией гастродуоденальной патологии.

2. Выявить общие закономерности и особенности нарушений локального и системного иммунитета у хакасов и европеоидов с гастродуоденальной патологией, ассоциированной с Helicobacter pylori-инфекцией (хронический гастрит, язвенная болезнь).

3. Оценить роль нарушений системы цитокинов (IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF а) в иммунопатогенезе Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний гастродуоденальной зоны у хакасов и европеоидов.

4. Установить распространенность полиморфизмов генов цитокинов С+3953Т IL-lß, ILl-Ra VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G/C IL-6, -251 T/A IL-8 у европеоидов и хакасов, страдающих ассоциированной с Helicobacter pylori гастродуоденальной патологией.

5. Выявить критические иммуногенетические факторы предрасположенности и резистентности у коренного и пришлого населения Республики Хакасия к развитию сопряженных с Helicobacter pylori хронического гастрита и язвенной болезни.

Научная новизна

Впервые представлены знания фундаментального характера о роли ге-нетически-детерминированных механизмов развития Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологии (хронического гастрита и язвенной болезни), имеющих популяционно-зависимые закономерности.

Установлена причина взаимосвязи между генетическими особенностями инфекта у хакасов и европеоидов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией и клиническими проявлениями заболеваний. У европеоидов при язвенной болезни частым является субтип sls2 vacA Helicobacter pylori, у больных хроническим гастритом - ml vac A Helicobacter pylori. У хакасов sls2 vacA штаммы Helicobacter pylori чаще встречаются при язвенной болезни, ш2 vacA Helicobacter pylori - при хроническом гастрите. CagA штаммы Helicobacter pylori у европеоидов и хакасов чаще встречаются при язвенной болезни, чем при хроническом гастрите.

Установлены общие закономерности и особенности нарушений локального иммунитета у хакасов и европеоидов при Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологии. Показана роль нарушения баланса цитокинов в сыворотке крови (IL-4, IL-10, TNFa) в иммунопатогене-зе Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний гастродуоденальной зоны у хакасов и европеоидов. Выявлены особенности спонтанной и ФГА-индуцированной продукции интерлейкинов мононуклеарными лейкоцитами крови у пациентов с Helicobacter pylori-сопряженными хроническим гастритом и язвенной болезнью, характеризующиеся снижением базальной и резервной продукции IL-2 у хакасов и увеличением продукции IL-4, IL-10 - у европеоидов. Выявлены нарушения реализации спонтанного и индуцированного перекисью водорода in vitro апоптоза лимфоцитов крови, полученных у хакасов и европеоидов, больных Helicobacter pylori-ассоциированными хроническим гастритом и язвенной болезнью. Показано, что иммунофенотипический состав лимфоцитов крови характеризуется снижением числа CD3+-, CD4+- и СБ8+-лимфоцитов у хакасов как при хроническом гастрите, так и при язвенной болезни. У европеоидов изменения суб-популяционного состава лимфоцитов характеризуются увеличением количества CD4+- и СВ8+-лимфоцитов крови у пациентов с хроническим гастритом и язвенной болезнью.

Впервые проведено исследование распределения частоты полиморфизма генов цитокинов (С+3953Т IL-lß, IL-lRa VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-6, -251 T>A IL-8) у коренных и пришлых жителей Республики Хакасия. Установлена связь между предрасположенностью к Helicobacter pylori-ассоциированным язвенной болезни и хроническому гастриту и носительст-вом полиморфизмов генов С+3953Т IL-lß, IL-lRa VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-6, -251 T>A IL-8 у хакасов и европеоидов. Впервые выявлены ассоциации между носительством полиморфизма генов интерлейкинов и инфицированием этиологически-значимыми для развития язвенной болезни генотипами возбудителя (cagA Helicobacter pylori - у хакасов и vacA sls2 Helicobacter pylori - у европеоидов).

Теоретическая и практическая значимость

Результаты проведенного исследования позволили выявить взаимосвязь между генетическими особенностями патогена и ДНК-маркеров вовлеченности полиморфных вариантов генов цитокинов, их роль в иммунопатогене-зе Helicobacter pylori-ассоциированных хронического гастрита и язвенной болезни с учетом этно-популяционных различий коренного и пришлого населения Республики Хакасия.

Полученные фундаментальные знания об иммуногенетических факторах, обладающих протективным эффектом и определяющих риск прогресси-рования и хронизации язвенной болезни и хронического гастрита представляют основу для разработки новых подходов к прогнозированию клинического течения Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний, у хакасов и европеоидов, а также технологий персонализированной терапии иммунных нарушений. Идентификация полиморфизмов генов позволит в дальнейшем обоснованно определить показания для назначения эрадикационной терапии, что является достаточно важным фактором в условиях возрастающей резистентности к антибиотикам.

Положения, выносимые на защиту:

1. Различия гастродуоденальной патологии (хронический гастрит, язвенная болезнь) у европеоидов и хакасов обусловлены генетическими особенностями Helicobacter pylori. У хакасов при язвенной болезни превалируют cagA, при хроническом гастрите - m2 vac А штаммы Helicobacter pylori. У европеоидов при язвенной болезни чаще встречаются s 1 s2 vacA, при хроническом гастрите - ml vacA штаммы Helicobacter pylori.

2. Нарушения функциональных свойств компонентов локального (на уровне органа-мишени) и системного иммунитета у пациентов с хроническим гастритом и язвенной болезнью, ассоциированными с Helicobacter pylori, носят однонаправленный характер и различаются у представителей разных этнических групп (хакасы, европеоиды).

3. Распространенность полиморфизмов генов цитокинов у коренного и пришлого населения Республики Хакасия различается. У хакасов риск развития язвенной болезни ассоциирован с полиморфизмами -330 T/G IL-2 (генотип GG) и -251 Т>А IL-8 (генотип АА); у европеоидов - с С+3953Т IL-lß (генотип СС), IL-lRa VNTR (генотип R2R3) и -174 G>C IL-6 (генотип СС).

Предикторами хронического гастрита у хакасов являются полиморфизм гена - С+3953Т IL-ip (генотип СТ); у европеоидов - IL-IRa VNTR (генотип R2R3) и -330 T/G IL-2 (генотип GT).

Апробация и реализация работы

Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на II и IV межрегиональных научно-практических конференциях «Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы» (Абакан, 2008; 2011), научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Е. Ф. Ларина «Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и патологии» (Томск, 2007), международной конференции «Генетика человека и патология» (Томск, 2007), VIII, IX, X, XI Восточно-Сибирских гастроэнтерологических конференциях с международным участием «Клинико-эпидемиологические и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения» (Красноярск, 2008; Иркутск, 2009; Абакан, 2010; Иркутск, Чита, 2011), Всероссийской научной конференции «Современные эпидемиологические и профилактические аспекты профилактики инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008), XI, XII, XIII, XIV научно-практических конференциях «Актуальные проблемы медицины» (Абакан, 2008; 2009; 2010; 2011), итоговой научно-практической конференции ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Кызыл, 2008; Абакан, 2009; Красноярск 2010), XXIth, XXIIth, XXIIIth, XXIVth International Workshop on Helicobacter and related bacteria in chronic digestive inflammation and gastric cancer (Рига, 2008; Порто, 2009; Роттердам, 2010; Дублин, 2011), XIV и XV Российских Гастроэнтерологических Неделях (Москва, 2008; 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» (Новосибирск, 2009; 2010), Всероссийской конференции «Компенсаторноприспособительные процессы: фундаментальные экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 2010; Абакан, 2011), Третьем съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных сил Российской Федерации (Санкт-Петербург, 2010), Международной конференции «3-е тысячелетие: Взгляд молодых ученых» (Санкт-Петербург, 2010), XII International Eu-roasian Congress of Surgery and Gastroenterology (Баку, 2011).

Исследование выполнено в рамках проекта ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (проект «Разработка технологической платформы молекулярной диагностики и лечения социально значимых заболеваний и подготовка на ее основе научно-исследовательских кадров для молекулярной медицины», ГК № 02.740.11.0311; гранта РФФИ № 09-04-98011 рсибирьа - Региональный конкурс Сибирь «Исследование роли патогенных факторов Helicobacter pylori для превенции язвенной болезни и рака желудка у коренного и пришлого населения Хакасии» (2009-2010).

Основные положения и выводы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры фундаментальной медицины и гигиены в курсе «Патофизиология», в курсе «Микробиология, иммунология и вирусология», кафедры внутренних болезней для студентов, обучающихся по специальности «Лечебное дело» Медико-психолого-социального института ФГБОУ ВПО «ХГУ им. Н. Ф. Катанова»; внедрены в учебный процесс кафедры фундаментальных основ клинической медицины ГБОУ ВПО СибГМУ Мин-здравсоцразвития России в разделах «Современные проблемы медико-биологической науки» и «Молекулярные основы патологии».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 64 работы, из них 15 статей в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, определенных ВАК РФ, монография «Гены и болезни хакасов», 45 статей и тезисов в материалах конференций, конгрессов и съездов.

Личный вклад автора

Автором были выполнены следующие этапы работ: анализ данных отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, выделение и культивирование лимфоцитов крови, оценка содержания TNFa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10 в сыворотке крови и в супернатантах клеточных культур методом иммуноферментного анализа, оценка апоптотической гибели лимфоцитов крови (спонтанного и индуцированного перекисью водорода), выделение ДНК и проведение рестрикционного анализа полиморфизма генов интерлейкинов С+3953Т IL-lß, ILl-Ra VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G/C IL-6, -251 T/A IL-8, выделение ДНК из биоптатов слизистой оболочки желудка и определение субтипов cagA, sls2 и mlm2 vac A Helicobacter pylori методом полимеразной цепной реакции, статистический анализ результатов, написание диссертации.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 256 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов и библиографического списка. Работа содержит 63 рисунка и 51 таблицу. Библиографический указатель включает 363 источника (98 - отечественных и 265 - иностранных).

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Молекулярные и клеточные основы иммунопатогенеза Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у населения Республики Хакасия"

Выводы

1. Различные клинические фенотипы язвенной болезни, ассоциированной с Helicobacter pylori, у коренного и пришлого населения Республики Хакасия сопровождаются доминированием в различных этнических популяциях разных, по генетическим характеристикам, патогенов. У хакасов язвенная болезнь ассоциирована с cagA штаммами Helicobacter pylori (95,2 %), у европеоидов - sls2 vac А штаммами Helicobacter pylori (55,6 %). Helicobacter pylori-ассоциированный хронический гастрит также характеризуется молеку-лярно-генетической дифференцированностью возбудителя: у хакасов хронический гастрит ассоциирован с m2 vacA штаммами (62,9 %), у европеоидов -с ml vacA штаммами Helicobacter pylori (62,1 %).

2. Изменения субпопуляционного состава клеточного инфильтрата в слизистой оболочке желудка у хакасов и европеоидов с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией характеризуются активацией гуморального (увеличение числа CD20+-лимфоцитов) и клеточного звеньев иммунитета (возрастание количества CD4+- и С08+-лимфоцитов).

3. Дисбаланс между апоптозом (СРР-32 и Вс1-2) и пролиферацией (Ki-67) лимфоцитов слизистой оболочки желудка у хакасов и европеоидов с хроническим гастритом и язвенной болезнью, ассоциированных с Helicobacter pylori, имеет одинаковую направленность, но разную интенсивность: активность апоптоза лимфоцитов (отношение показателей СРР-32 и Вс1-2) выше при хроническом гастрите, чем при язвенной болезни; у хакасов более выражено, по сравнению с европеоидами.

4. Изменения численности субпопуляций лимфоцитов крови при гастродуоденальной патологии, ассоциированной с инфекцией Helicobacter pylori, у коренного и пришлого населения Республики Хакасия, характеризуются снижением числа CD3+-, CD4+- и С08+-лимфоцитов у хакасов как при хроническом гастрите, так и при язвенной болезни, и увеличением количества

CD4+- и CD8+-лимфоцитов у европеоидов, больных хроническим гастритом и язвенной болезнью, по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров.

5. Течение Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологии у больных, относящихся к разным этническим группам и проживающих на территории Республики Хакасия, сопровождается изменением числа лимфоцитов крови, вступивших в апоптоз, наиболее выраженным у хакасов, по сравнению с европеоидами.

6. Чувствительность лимфоцитов, полученных у пациентов с гастродуо-денальной патологией, ассоциированной с инфекцией Helicobacter pylori, к действию неспецифического модулятора апоптоза (0,01 % раствора перекиси водорода) in vitro снижена, по сравнению с лимфоцитарными клетками крови у здоровых доноров; выраженность указанных изменений наиболее значима у европеоидов, чем у хакасов. При язвенной болезни апоптотический индекс снижен, что свидетельствует о снижении функционального потенциала иммунных клеток при длительной инфекции Helicobacter pylori.

7. Дисбаланс интерлейкинов сыворотки крови у хакасов и европеоидов, страдающих Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией, характеризуется увеличением концентрации TNFa, IL-4 и IL-10. Особенности спонтанной и ФГА-индуцированной продукции интерлейкинов мо-нонуклеарными лейкоцитами крови у пациентов с Helicobacter pylori-сопряженными хроническим гастритом и язвенной болезнью характеризуются снижением базальной и резервной продукции IL-2 у хакасов и увеличением продукции IL-4, IL-10 - у европеоидов.

8. Распространенность полиморфизмов генов цитокинов С+3953Т IL-lß, ILl-Ra VNTR, -330 T/G IL-2, -174 G/C IL-6, -251 T/A IL-8 у хакасов и европеоидов имеет выраженные межпопуляционные различия и является определяющим в иммунопатогенезе Helicobacter pylori-сопряженных хронического гастрита и язвенной болезни у хакасов и европеоидов.

9. Иммуногенетическими предикторами Helicobacter pylori-ассоциированиой язвенной болезни у хакасов являются генотип АА промо-торного региона -251 Т>А гена IL-8 (OR=3,15), генотип GG промоторного региона -330 T/G IL-2 (OR=l,91); у европеоидов - генотип СС промоторного региона С+3953Т гена IL-1(3 (OR=2,63), генотип R2R3 гена IL-IRa (C>R=8,08), генотип СС промоторного региона -174 G>C гена IL-6 (OR=2,25). У хакасов риск развития хронического гастрита при инфицировании Helicobacter pylori ассоциирован с генотипом СТ полиморфизма С+3953Т гена IL-1J3 (OR=l,97); у европеоидов - с генотипом R2R3 гена IL-IRa (OR=4,41) и генотипом GT промоторного региона -330 T/G гена IL-2 (OR=2,35).

10. Фактором, снижающим риск развития язвенной болезни, ассоциированной с Helicobacter pylori, у хакасов является генотип ТА промоторного региона -251 Т>А гена IL-8 (OR=0,40); у европеоидов - генотипы СТ и ТТ промоторного региона С+3953Т гена IL-1(3 (OR=0,51 и (Ж=0,44, соответственно), генотипы R3R4 и R4R4 гена IL-IRa (OR=0,30 и C)R=0,51, соответственно). Риск развития хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, снижен у хакасов и европеоидов - носителей генотипа ТТ промоторного региона -330 T/G IL-2 (C)R=0,42 и QR=0,28, соответственно).

Заключение

Исследование иммунопатогенеза НР-ассоциированной гастродуоде-нальной патологии, проведенное у двух популяций, проживающих на одной территории - Республики Хакасия, позволило выявить ряд клинических особенностей течения хронического гастрита и язвенной болезни. Различия касались частоты ведущего синдрома функциональной диспепсии: у хакасов преобладали синдромы дискинетической и неспецифической диспепсии, у европеоидов - синдром язвенно-подобной диспепсии встречался чаще, чем у хакасов. В целом, течение болезни у хакасов характеризуется как более легкое (степень тяжести, частота обострений, наличие осложнений), по сравнению с европеоидами.

Известно, что развитие и ход инфекционного процесса предопределяется результатом взаимодействия макро- и микроорганизма и зависит как от вирулентности возбудителя, определяемой совокупным действием его факторов патогенности, так и от антиинфекционного потенциала макроорганизма, зависящего, в том числе, от функциональных возможностей клеток иммунной системы. Результаты, полученные в ходе настоящего исследования, о молекулярно-генетических особенностях макроорганизма, распространенности определенных видов НР и их ассоциации с заболеванием среди коренных (с Са§А+-штаммами) и пришлых (с УасА+-штаммами) жителей Республики Хакасия свидетельствуют о том, что гипотеза о консервации определенных штаммов НР в разных этнических группах имеет подтверждение и в данной популяции.

По результатам проведенного нами исследования, изменения характеристик локального и системного иммунитета у пациентов с НР-ассоциированной патологией (рис. 63) коррелировали со степенью выраженности инфекционного процесса и с популяционными особенностями обследованных. НР вызывает длительно протекающую инфекцию, в результате которой возникает гиперактивация локальной иммунной системы с последующей декомпенсацией по количественным и качественным признакам и снижением эффективности иммунного ответа.

Обнаруженные закономерности реализации апоптотической гибели иммунных клеток являются ключевым звеном нарушения иммунореактивности макроорганизма в патогенезе НР-ассоциированных заболеваний, так как уменьшение количества клеток иммунной системы сопряжено с изменениями соотношения субпопуляций лимфоцитов и является проявлением патологической иммунореактивности.

Очевидно, что выявленные изменения, с одной стороны, являются следствием нарушения иммунологического равновесия, обеспечивающего адекватное реагирование макроорганизма на НР-инфекцию. С другой стороны, являются проявлением генетической детерминации функционирования иммунной системы.

Персистенция HP

Попадание цитокинов в кровь, миграция клеток в органы дифференцировки и пролиферации

Модуляция апоптоза

Цитокиновый дисбаланс

Опосредованное цитопатическое действие HP

Нарушение активации Т-лимфоцитов

Антигенный дрейф, бактериальная мимикрия

Дисбаланс локального Thl/Th2 иммунного ответа

Полиморфизм генов цитокинов

Нарушение активации факторов транскрипции

Изменение белкового продукта

Нарушение антиген-презентации сож

Снижение активационного сигнала

Изменение содержания основных иммунорегуляторных цитокинов в сыворотке крови

ПК

Цитокиновый дисбаланс

Деструкция слизистой оболочки желудка Активация клеточного иммунного ответа

Нарушение соотношения CD-лимфоцитов клеточного и гуморального звена

Дисбаланс системного Thl/Th2 иммунного ответа

Изменения в апоптоз-регулирующих системах

Хроническая персистенция HP

Угнетение гуморального иммунного ответа

Миграция иммунных клеток в слизистую оболочку желудка

Рис. 63. Молекулярно-клеточные механизмы нарушения локального и системного иммунитета при инфекции Helicobacter pylori. СОЖ - слизистая оболочка желудка, ПК - периферическая кровь, по данным результатам собственных исследований (выделено цветом)

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Агеева, Елизавета Сергеевна

1. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия: руководство Текст. / Г. Г. Автандилов. -М.: Медицина, 1990. 382 с.

2. Алексеев, В. П. Историческая антропология и антропогенез Текст. / В. П. Алексеев. М.: Наука, 1989. - С. 446.

3. Андрейчикова, Е. А. Состояние системного иммунитета у больных аллергической бронхиальной астмой Республики Хакасия Текст. / Е. А. Андрейчикова, Ю. А. Сеннкова, В. А. Козлов // Медицинская Иммунология. -2009. Т. 11, № 2-3. - С. 273-278.

4. Апоптоз, роль в патологии и значимость его оценки при клинико-иммунологическом обследовании больных Текст. / А. А. Ярилин, М. Ф. Ни-конова, А. А. Ярилина [и др.] // Медицинская иммунология. 2000. - Т. 2, № 1. - С. 7-16.

5. Аруин, JI. И. Инфекция Helicobacter pylori и рак желудка Текст. / JI. И. Аруин // Клиническая и экспериментальная гастроэнтерология. -2006.-Т. 1.-С. 15-22.

6. Аруин, JI. И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника Текст. / JI. И. Аруин, А. Л. Капуллер, В. А. Исаков. М.: Триада-Х; 1998.-483 с.

7. Аруин, Л. И. Оценка обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori и активности хронического гастрита Текст. / Л. И. Аруин, В. А. Исаков // Архив патологии. 1995. - № 3. - С. 75-76.

8. Балганова, Е. А. Роль инфекции в реализации мультифакториальных заболеваний у жителей Хакасии Текст. / Е. А. Балганова, В. В. Цуканов, О. В. Штыгашева // Вестник Российской Военно-медицинской академии. Приложение. Ч. II. 2008. - № 2 (22). - С. 657-658.

9. Баснакян, И. А. Белки теплового шока: будущая вакцина или триггеры аутоиммунных заболеваний Текст. / И. А. Баснакян, А. О. Арзуманян,

10. С. К. Машилов // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2007. - № 4. -С. 39-42.

11. Бельмер, С.В. Негастроинтестинальные проявления хеликобактерной инфекции Текст. / С. В. Бельмер, Т. В. Гасилина, Е. М. Лукьянова // Лечащий,врач. 2002. - № 7-8. - С. 72-75.

12. Бондарев, Г. И. Фактическое питание коренного и некоренного населения районов Крайнего Севера и Дальнего Востока Текст. / Г. И. Бондарев,

13. A. И. Феоктистова, Т. А. Землянская // Вопросы питания. 1993. - № 2. -С. 14-18.

14. Бурчинский, Г. И. Язвенная болезнь Текст. / Г. И. Бурчинский,

15. B. Е. Кушнир. Киев: Здоровье. - 1973. - 352 с.

16. Василенко, В. X. Некоторые старые и новые проблемы патогенеза язвенной болезни Текст. / В. X. Василенко // Клиническая медицина. 1970. -№ 10.-С. 117-123.

17. Васильев, Ю. В. Патогенетические аспекты Helicobacter pylori Текст. / Ю. В. Васильев, В. С. Беляева // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2006. - № 1. - С. 28-36.

18. Влощинский, П. Е. Влияние питания на биохимические показатели крови у жителей Азиатского Севера Текст. / П. Е. Влощинский, Л. Е. Панин, И. Е. Колесова // Вестник РАМН. 1994. - № 7. - С. 21-24.

19. Волгарев, М. Н. Состояние питания некоторых групп населения Дальнего Востока и Крайнего Севера Текст. / М. Н. Волгарев, М. М. Левачев, Г. М. Бондарев // Вестник АМН СССР. 1989. - № 9. - С. 51-55.

20. Геномные основы предрасположенности к инфекционным заболеваниям Текст. / И. А. Гончарова, М. Б. Фрейдин, А. А. Рудко [и др.] // Вестник ВОГиС. 2006. - Т. 10, № 3. - С. 540-552.

21. Гены и болезни хакасов Текст. / О. В. Штыгашева, Е. С. Агеева, В. Н. Харьков [и др.]. Красноярск: Поликор, 2010. - 296 с.

22. Григорьев, П. Я. Диагностика и лечение болезней органов пищеварения Текст. / П. Я. Григорьев, Э. П. Яковенко. СПб.: СОТИС. - 1997. - 45 с.

23. Домарадский, И. В. О взаимоотношениях эпителиальных клеток слизистых оболочек с микробами внутриклеточными паразитами Текст. / И. В. Домарадский, В. Н. Бабин // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1996. - № 4. - С. 3-8.

24. Дубцова, Е. А. Содержание цитокинов при часто рецидивирующей форме язвенной болезни двенадцатиперстной кишки Текст. / Е. А. Дубцова, Г. Н. Соколова, И. Е. Трубицина // Медицинская иммунология. 2002. - Т. 4, №2. -С. 148.

25. Звягинцева, Т. Д. Нарушение иммунного гомеостаза при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки Текст. / Т. Д. Звягинцева, Д. Н. Ермолаева // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2002.-Т. 12, №5.-С. 26.

26. Зенков, Н. К. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты Текст. / Н. К. Зенков, В. 3. Ланкин, Е. Б. Меныцикова. -М.: МАИК «Наука / Интерпериодика», 2001. 343 с.

27. Ивашкин, В. Т. Основные понятия и положения фундаментальной иммунологии Текст. / В. Т. Ивашкин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2008. - № 4. - С. 4-13.

28. Ивашкин, В. Т. Современный подход к терапии гастроэзофагеальной рефлюксной болезни во врачебной практике Текст. / В. Т. Ивашкин, А. С. Трухманов // РМЖ. 2003. - Т. 5, № 2. - С. 444-447.

29. Иммунологические особенности течения гастродуоденальной патологии у жителей Хакасии Текст. / Е. С. Агеева, О. В. Штыгашева, В. В. Цуканов [и др.] // Иммунология. 2009. - Т. 30, № 3. - С. 162-165.

30. Исаков В. А. Хеликобактериоз Текст. / В. А. Исаков, И. В. Домрадский, М., 2003, С. 235-245.

31. Казаченко, Б. Н. Генетико-демографический подход в антропологических исследованиях. Фамильно-родовая структура хакасских популяций Текст. / Б. Н. Казаченко // Вопросы антропологии. 1987. - Вып. 79. - С. 36-37.

32. Калимолдаева, С. Б. Иммунологические аспекты хронической крапивницы, индуцированной инфекцией Helicobacter pylori Текст. / С. Б. Калимодае-ва // Иммунология. 2009. - № 6. - С. 355-358.

33. Кетлинский, С. А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета Текст. / С. А. Кетлинский // Иммунология. -2002.-№2.-С. 77-79.

34. Клочкова, Е. В. Особенности питания и липиды крови у коренных жителей Чукотки и Бурятии Текст. / Е. В. Клочкова, Е. К. Ядрышникова, JI. П. Шелудько // Вопросы питания. 1990. - № 6. - С. 26-30.

35. Ковальчук, JI. В. Апоптогенные механизмы возникновения иммуноде-фицитных заболеваний Текст. / JI. В. Ковальчук, А. Н. Чередеев // Журнал Микробиологии. 1999. - № 5. - С.47-52.

36. Козлова, Н. Н. Иммунный ответ организма на инфекцию Helicobacter pylori Текст. / Н. Н. Козлова, В. Д. Прокопенко // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2007. - № 4. - С. 58-62.

37. Кононов, А. В. Воспаление как основа Helicobacter pylori-ассоциированных болезней Текст. / А. В. Кононов // Архив патологии.2006. Т. 68, вып. 5. - С. 3-10.

38. Кононов, А. В. Генетическая регуляция и фенотип воспаления при Helicobacter pylori-инфекции Текст. / А. В. Кононов // Архив патологии. -2009.-Т. 71 (5).-С. 57-63.

39. Кононов, А. В. Молекулярная генетика и фенотип воспаления, вызванного Helicobacter pylori Текст. / А. В. Кононов // Омский научный вестник.2007. -№3 (61). -С. 17-23.

40. Константинов, В. В. Сравнительная характеристика питания мужского населения в некоторых городах СССР Текст. / В. В. Константинов, Г. С. Жуковский, Р. Г. Оганов //Вопросы питания. 1991. -№ 1. - С. 12-17.

41. Курилович, С. А. Эпидемиология заболеваний органов пищеварения в Западной Сибири Текст. / С. А. Курилович, О. В. Решетников, Новосибирск: Наука, 2000.- 165 с.

42. Лакин, Г. Ф. Биометрия Текст.: учебное пособие для биологических специальностей вузов / Г. Ф. Лакин. 3-е изд., перераб. и доп. - Высш. школа, 1980.-293 с.

43. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия Текст. // Р. Лили. М.: Мир, 1969. - С. 541-543.

44. Логинов, А. С. Диагностика и лечение кампиллобактерных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки Текст.: методические рекомендации /

45. A. С. Логинов, Л. И. Аруин, А. А. Ильченко. М.: Б. и., 1989. - 23 с.

46. Маев, И. В. Аллельный полиморфизм интерлейкина-1 при геликобакте-риозе Текст. / И. В. Маев, Ю. А. Кучерявый, Т. С. Оганесян // Иммунология. -2008.-№5.-С. 4-11.

47. Маянский, Д. А. Лекции по клинической патофизиологии (руководство для врачей) Текст. / Д. А. Маянский. М.: ГЭОТАР Медия, 2008. - 484 с.

48. Меньшиков, В. В. Клинический диагноз лабораторные основы Текст. /

49. B. В. Меньшиков. М.: Издательство «Лабинформ», 1997. 320 с.

50. Меркулов, М. Н. Курс патологогистоскопической техники Текст. / М. Н. Меркулов. Л.: Медицина, 1969. - 423 с.

51. Молекулярные механизмы цитокиновой регуляции апоптоза лимфоцитов Текст. / О. Е. Чечина, А. К. Биктасова, Е. В. Сазонова [и др.] // Аллергология и иммунология. 2009. - Т. 10, № 2. - С. 176.

52. Натвиг, Д. Б. Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика Текст. / Д. Б. Натвиг, П. Пердмана, X. Вигзель. М., 1980. - 280 с.

53. Особенности цитокинового профиля у пациентов с хроническим Н. ру-lori-ассоциированным гастритом и язвенной болезнью Текст. / Э. А. Конд-рашина, Н. М. Калининина, Н. И. Давыдова [и др.] // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1, № 4. - С. 3-11.

54. Панин, JI. Е. Адаптация и рационализация питания Текст. / JI. Е. Панин // Механизмы адаптации человека в условиях высоких широт. JL: Медицина, 1980.-С. 116-122.

55. Патачаков, К. М. Родовой состав и народные предания о происхождении бельтиров Текст. / К. М. Патачаков // Ученые записки ХакНИИЯЛИ. -1959.-Вып. 7.-С. 127-134.

56. Пинегин, Б. В. Нейтрофилы: структура и функция Текст. / Б. В. Пинегин, А. Н. Маянский // Иммунология. 2007. - № 6. - С. 374-382.

57. Потапов, JI. П. Краткие очерки истории и этнографии хакасов (XVII-XIX вв.) Текст. / JI. П. Потапов. Абакан: Хакоблгосиздат, 1952. - С. 218.

58. Практические аспекты и лечения иммунных нарушений: руководство для врачей Текст. / В. А. Козлов, А. Г. Борисов, С. В. Смирнова [и др.]. -Новосибирск: Наука, 2009. 274 с.

59. Проблемы и перспективы исследований инфекции Helicobacter pylori Текст. / JI. Б. Лазебник, И. А. Морозов, А. А. Ильченко [и др.] // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2006. — JST« 1. - С. 4-14.

60. Распространенность CagA-штаммов Helicobacter pylori и язвенная болезнь у населения Восточной Сибири Текст. / В. В. Цуканов, С. В. Баркалов, Ю. А. Тонких [и др.] // Терапевтический архив. 2007. - № 2. - С. 15-18.

61. Распространенность Н. pylori и ГЭРБ у монголоидов и европеоидов Восточной Сибири Текст. / В. В. Цуканов, О. В. Хоменко, О. С. Ржавичева [и др.] // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопрокто-логии. 2008. - № 5 (32). - С. 153.

62. Ризопулу, А. П. Спонтанная и митогениндуцированная продукция интер-лейкинов-1, -2, -8, ИФ у у больных хроническим вирусным гепатитом Текст. / А. П. Ризопулу, Ф. Ю. Гарий, Т. У. Арипова // Медицинская иммунология. -2002. Т. 4, № 2. - С. 252-253.

63. Роль активных форм кислорода и белков семейства Вс1-2 в реализации ФНОа-опосредованного апоптоза лимфоцитов Текст. / Н. В. Рязанцева, В. В. Новицкий, О. Б. Жукова [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2010. - № 2. - С. 139-142.

64. Роль цитокинов в редокс-зависимой регуляции апоптоза Текст. / О. Е. Чечина, А. К. Биктасова, Е. В. Сазонова [и др.] // Бюллетень Сибирской медицины. 2009. - № 2. - С. 67-72.

65. Рязанцева, Н. В. Молекулярная медицина и вирусные инфекции: современный взгляд на проблему и стратегию взаимоотношений Текст. / Н. В. Рязанцева // Бюллетень сибирской медицины. 2008. - № 2. - С. 5-13.

66. Сарсенбаева, А. С. Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: Учебное пособие Текст. / А. С. Сарсенбаева, Г. Л. Игнатова, С. В. Воротникова. Челябинск: УГМАДО, 2005. - 50 с.

67. Симбирцев, А. С. Роль цитокинов в регуляции физиологических функций иммунной системы Текст. / А. С. Симбирцев // Физиология и патология иммунной системы 2004. - № 10. - С. 3-9.

68. Соловьева, Г. А. Эрозии желудка — отдельная нозологическая форма или универсальная реакция слизистой оболочки на повреждение? Текст. / Г. А. Соловьева // Внутренняя медицина. 2007. - № 3. - С. 56-62.

69. Спектр жирных кислот и липидов сыворотки крови у больных холе-литиазом Текст. / В. В. Цуканов, Е. Ю. Куперштейн, Ю. Л. Тонких [и др.] // Клиническая медицина. 2009. - Т. 87, № 2. - С. 42^14.

70. Старостин, Б. Д. Спорные и нерешенные вопросы ГЭРБ. Ч. 2 Текст. / Б. Д. Старостин // Известия Вузов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. Спецвыпуск. 2005. - С. 52-54.

71. Стрессовые белки бактерий при болезнях человека Текст. / И. А. Бас-накян, Н. А. Михайлова, В. А. Мельникова [и др.] // Иммунология. 2010. -№6.-С. 304-310.

72. Структура, разнообразие и дифференциация генофонда хакасов по данным маркеров Y-хромосомы Текст. / В. Н. Харьков, К. В. Хамина,

73. Тонких, Ю. JI. Клинико-эпидемиологические особенности холелитиаза у населения Сибири Текст. / Ю. Л. Тонких, В. В. Цуканов // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2002. - № 2-3. - С. 130.

74. Тонких, Ю. Л. Липидный состав желчи и сыворотки крови у лиц с избыточной массой тела Текст. / Ю. Л. Тонких, В. В. Цуканов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2001. - № 1. - С. 56.

75. Фаллер, Д. М. Молекулярная биология клетки Текст.: руководство для врачей / Д. М. Фаллер, Д. Шилдс; пер. с англ. М.: Бином-Пресс, 2003. -272 с.

76. Фишер, А. А. Гиперсекреция и гиперплазия слизистой оболочки желудка при язвенной болезни Текст.: автореф. дис. д-ра. мед. наук / А. А. Фишер. Краснодар, 1972. - 38 с.

77. Фрейдлин, И. С. Иммунная система и ее дефекты Текст.: руководство для врачей / И. С. Фрейдлин. СПб., 1998. - 113 с.

78. Фрейдлин, И. С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции Текст. / И. С. Фрейдлин // Иммунология. 2001. - № 5. -С. 4-7.

79. Хаитов, Р. М. Физиология иммунной системы Текст. / Р. М. Хаитов // «ВИНИТИ РАН», М., 2001; 1-е издание, 2005. 223 с.

80. Характеристика апоптотической и функциональной активности лимфоцитов у больных язвенной болезнью Текст. / А. А. Останин, А. И. Пальцев, А. Г. Лебедев [и др.] // Бюллетень СО РАМН.-2004.-№ 1 (111). С. 129-134.

81. Хомерики, С. Г. Helicobacter pylori индуктор и эффектор окислительного стресса в слизистой оболочке желудка традиционные представления иновые данные Текст. / С. Г. Хомернки // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2006. - № 1. - С. 37^6.

82. Хронический гастрит Текст. / Л. И. Аруин, П. Я. Григорьев, В. А. Исаков [и др.]. Амстердам, 1993. - 362 с.

83. Царегородцева, Т. М. Цитокины в гастроэнтерологии Текст. / Т. М. Ца-регородцева, Т. И. Серова. М.: «Анархис», 2003. - 96 с.

84. Цуканов, В. В. Helicobacter Pylori и язвенная болезнь у монголоидов высоких широт: северная загадка? Текст. / В. В. Цуканов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2001. - № 2 (13). -С. 109-111.

85. Цуканов, В. В. Распространенность и структура заболеваний желчевыво-дящих путей у сельского населения северных регионов Сибири Текст. / В. В. Цуканов // Терапевтический архив. 1997. - № 2. - С. 25-28.

86. Чертыков, В. К. Хакасы Текст. / В. К. Чертыков // Энциклопедия Республики Хакасия, 2008. Т. 2. - С. 250-251.

87. Шварц, В. Двойственная роль интерлейкина-6 в развитии инсулинорези-стентности Текст. / В. Шварц // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2010. - № 1. - С. 40-47.

88. Штыгашева, О. В. Клинико-морфологическая характеристика язвенной болезни у населения Хакасии Текст.: автореф. дис. д-ра. мед. наук / О. В. Штыгашева. Красноярск, 2005. - 48 с.

89. Штыгашева, О. В. Клинико-морфологические особенности гастродуоде-нальных заболеваний у сельского населения Хакасии Текст.: автореф. дис. канд-та. мед. наук / О. В. Штыгашева. Красноярск, 1999. - 24 с.

90. Штыгашева, О. В. Методология и методика построения клинического диагноза Текст.: учебное пособие / О. В. Штыгашева. Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова», 2010.-288 с.

91. Штыгашева, О. В. Распространенность инфекции Helicobacter pylori и частота диспептических жалоб у населения Хакасии Текст. / О. В. Штыгашева, В. В. Цуканов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2004. - № 2. - С. 33-36.

92. Ющук, Н. Д. Иммунный ответ при инфекции, вызванной Helicobacter pylori Текст. / Н. Д. Ющук, И. В. Маев, К. Г. Гуревич // Журнал Микробиологии. 2003.-№ 6. - С. 86-91.

93. Ющук, Н. Д. Что скрывается за нелеченной инфекцией Helicobacter pylori Текст. / Н. Д. Ющук, И. В. Маев // Терапевтический архив. 2008. -№ 11.-С. 72-77.

94. A proinflammatory genetic profile increases the risk for chronic atrophic gastritis and gastric carcinoma Text. / J. C. Machado, C. Figueiredo, P. Canedo [et al.] // Gastroenterology. 2003. - Vol. 125. - P. 364-371.

95. A revised annotation and comparative analysis of Helicobacter pylori genomes Text. / I. G. Boneca, H. de Reuse, J. C. Epinat [et al.] // Nucleic Acids Research.-2003.-Vol. 31.-P. 1704-1714.

96. Afford, S. Apoptosis Text. / S. Afford, S. Randhawa // Journal of Clinical Pathology. 2000. - № 53. - P. 55-63.

97. Agreus, L. Helicobacter Pylori seropositivity among Swedish adults with and without abdominal symptoms Text. / L. Agreus, L. Engstrand, K. Svardsuld // Scandinavian Journal of Gastroenterology. 1995. - Vol. 30, № 8. - P. 752-757.

98. Allen, R. T. Morphological and Biochemical Characterization and Analysis of Apoptosis Text. / R. T. Allen, W. J. Hunter, D. K. Agrawal // Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 1997. - Vol. 37, № 4. - P. 215-228.

99. Amieva, M. R. Host-Bacterial Interactions in Helicobacter pylori Infection Text. / M. R. Amieva, E. M. El-Omar // Gastroenterology. 2008. -Vol. 134(1).-P. 306-323.

100. Appelmelk, B. J. H. pylori and Lewis antigens Text. / B. J. Appelmelk, C. M. Vandenbroucke-Grauls // Gut. 2000. - Vol. 47, № 1. - P. 10-11.

101. Association between TNF-a promoter polymorphism and Helicobacter pylori cagA subtype infection Text. / S. S. Yea, Y.-I. Yang, W. H. Jang [et al.] // Journal of Clinical Pathology. 2001. - Vol. 54. - P. 703-706.

102. Association of cytokine polymorphic inheritance and in vitro cytokine production in anti-CD3/CD28-stimulated peripheral blood lymphocytes Text. / S. C. Hoffmann, E. M. Stanley, E. Darrin Cox [et al.] // Transplantation. 2001. -Vol. 72.-P. 1444-1450.

103. Association of IL-IB and IL-1 receptor antagonist haplotypes with rate of decline in lung function in smokers Text. / L. Joos, L. Mclntyre, J. Ruan [et al.] // Thorax. 2001. - Vol. 56. - P. 863-866.

104. Association of respiratory syncytial virus bronchiolitis with the interleukin 8 gene region in UK families Text. / J. Hull, A. Thomson, D. Kwiatlowski // Thorax. 2000. - Vol. 55. - P. 1023-1027.

105. Association of specific haplotype of TNFalpha with Helicobacter pylori-mediated duodenal ulcer in eastern Indian population Text. / M. Chakravorty, D. Datta De, A. Choudhury [et al.] // Journal of Genetics. 2008. - Vol. 87. -P. 299-304.

106. Audibert, C. Correlation between IL-8 induction, CagA status and VacA genotypes in 153 French Helicobacter Pylori isolates Text. / C. Audibert, B. Janvier, B. Grignon // Research in Microbiology. 2000. - Vol. 151, № 3. - P. 191-200.

107. Audibert, C. Implication of the structure of the Helicobacter Pylori Cagpatho-genicity island in induction of interleukin-8 secretion Text. / C. Audibert, C. Bu-rucoa, B. Janvier // Infection and Immunity.-2001.-Vol. 69, № 3. P. 1625-1629.

108. Axsen, W. S. Inhibition of heat shock protein expression by Helicobacter pylori Text. / W. S. Axsen, C. M. Styer, J. V. Solnick // Microbial Pathogenesis. -2009. Vol. 47, № 4. - P. 231-236.

109. Bindayana, K. M. VacA genotypes in Helicobacter pylori strains isolated from patients with and without duodenal ulcer in Bahrain Text. / K. M. Bindayana, A. Almahmeed // Ind. J. of Gastroenterology. 2010. - Vol.28, №5. - P. 175-179.

110. Blaser, M. J. Age at establishment of Helicobacter pylori infection and gastric carcinoma, gastric ulcer, and duodenal ulcer risk Text. / M. J. Blaser, P. H. Chyou, A. Nomura // Cancer Reserch. 1995. - Vol. 55. - P. 562-565.

111. Blaser, M. J. The amphibiotic relationship of Helicobacter Pylori and humans Text. / M. J. Blaser // Helicobacter Pylori. Basic Mechanisms to Clinical Cure, 2000-Dordrecht-Boston-London: Kluwer Academic Publishers, 2000, P. 25-31.

112. CagA+ H. pylori Induces Aktl Phosphorylation and Inhibits Transcription of p21wafi/cipi and p27KiPi via pi3K/Aktl Pathway Text. / L. I. Shu-Ping,

113. X.-J. Chen, A.-H. Sun et al. // Biomedical and Enviromental Science. 2010. -Vol. 23 (4).-P. 273-278.

114. Casanova, J.-L. Genetics dissection of immunity to micobacteria: the human model Text. / J.-L. Casanova, L. Abel // Annual Reviews Immunology. 2002. -Vol. 20.-P. 581-620.

115. Caspase-dependent and caspase-independent cell death pathways in yeast Text. / F. Madeo, D. Carmona-Gutierrez, J. Ring [et al.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2009. - Vol. 382 (2). - P. 227-231.

116. Castro, R. Clinical relevance of Helicobacter Pylori CagA-positive strains: ga-stroduodenal peptic lesions marker Text. / R. Castro, F. J. P. Bautista, J. H. Gutierrez // Revista Española de Enfermedades Digestivas. 2000. - Vol. 92, № 3. -P. 160-173.

117. Chaput, C. Characterization of Helicobacter pylori Lytic Transglycosylases Sit and MltD Text. / C. Chaput, A. Labigne, I. G. Boneca // Journal of Bacteriology. Vol. 189, № 2. - P. 422-429.

118. Childhood Hygienic Practice and Family Education Status Determine the Prevalence of Helicobacter pylori Infection in Iran Text. / M. Nouraie, S. Latifi-Navid, H. Rezvan [et al.] // Helicobacter. 2009. - Vol. 14 (1). - P. 40-46.

119. Circulating T-cell response to Helicobacter infection in chronic gastritis Text. / Z. Ren, G. Pang, R. Lee [et al.] // Helicobacter. 2000. - Vol. 5. -P. 135-141.

120. Classification of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2009 Text. / G. Kroemer, L. Galluzzi, P. Vandenabeele [et al.] // Cell Death Differ. 2009. - Vol. 16 (1). - P. 3-11.

121. Comparison of CXC chemokines ENA-78 and interleukin-8 expression in Helicobacter pylori-associated gastritis Text. / G. Rieder, W. Einsiedl, R. A. Hätz [et al.] // Infection and Immunity. 2001. - Vol. 69. - P. 81-88.

122. Core genome haplotype diversity and vacA allelic heterogeneity of Chinese Helicobacter pylori strains Text. / Y. L. Liao, G. Guo, X. H. Mao [et al.] // Current Microbiology. 2009. - Vol. 59 (2). - P. 123-129.

123. Correa, P. Helicobacter Pylori as a pathogen and carcinogen Text. / P. Correa // Journal of Physiology and Pharmacology. 1997. - Vol. 48, Suppl. 4.-P. 19-24.

124. Correlation between Helicobacter pylori OipA protein expression and oipA gene switch status Text. / T. Kudo, Z. Z. Nurgalieva, M. E. Conner [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 2004. - Vol. 42. - P. 2279-2281.

125. Covacci, A. Tyrosine-phosphorylated bacterial proteins: Trojan horses for the host cell Text. / A. Covacci, R. Rappuoli // Journal of Experimental Medicine. -2000. Vol. 191, № 4. - P. 587-592.

126. Cover, T. L. Acid-induced dissociation of VacA, the Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin, reveals its pattern of assembly Text. / T. L. Cover, P. I. Hanson, J. E. Heuser // Journal of Cell Biology. 1997. - Vol. 138. - P. 759-769.

127. Cover, T. L. Helicobacter pylori VacA, a paradigm for toxin multifunctional-ity Text. / T. L. Cover, S. R. Blanke // Nature Reviews Microbiology. 2005. -Vol. 3.-P. 320-332.

128. Crompton, M. The mitochondrial permeability transition pore and its role in cell death Text. / M. Crompton // J. Biochemistry.-1999. Vol. 15. - P. 233-249.

129. Cytokine gene polymorphisms influence mucosal cytokine expression, gastric inflammation, and host specific colonisation during Helicobacter pylori infection Text. / R. Rad, A. Dossumbekova, B. Neu [et al.] // Gut. 2004. - Vol. 53. -P. 1082-1089.

130. Cytotoxic T-lymphocyte antigene-4 inhibits GATA-3 but not T-bet mRNA expression during Th cell differentiation Text. / F. Nasta, V. Ubaldi, L. Pace, G. Doria [et al.] // Immunology. 2006. - Vol. 117. - P. 358-367.

131. D'Ellios, M. M. Helicobacter pylori Inflammation, Immunity, and Vaccines Text. / M. M. D'Ellios, L. P. Anderson // Helicobacter. 2007. - Vol. 12 (1). -P. 15-19.

132. Determinants of nontoxicity in the gastric pathogen Helicobacter pylori Text. / D. P. Letley, J. L. Rhead, R. J. Twells [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. 2003. - Vol. 278. - P. 26734-26741.

133. Diet as a factor in unexpectedly low prevalence of Helicobacter pylori infection Text. / T. H. Farag, J. W. Fahey, S. S. Khalfan [et al.] // Transaction of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 2008. - Vol. 102 (11). -P.1164-1165.

134. Differential regulation of gastric tumor growth by cytokines that signal exclusively through the coreceptor gpl30 Text. / M. Howlett, L. M. Judd, B. Jenkins [et al.] // Gastroenterology. 2005. - Vol. 129. - P. 1005-1018.

135. Discrimination between cases of duodenal ulcer and gastritis on the basis of putative virulence factors of Helicobacter pylori Text. / Y. Yamaoka, J. Souchek, S. Odenbreit [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 2002. - Vol. 40. -P. 2244-2246.

136. Distinct mechanism of Helicobacter pylori-mediated NF-kappa B activation between gastric cancer cells and monocytic cells Text. / S. Maeda, M. Akanuma, Y. Mitsuno [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. 2001. - Vol. 276 (48).-P. 44856-44864.

137. Distribution of Helicobacter pylori cagA, cagE, oipA and vacA in different major ethnic groups in Tehran, Iran Text. / H. Dabiri, P. Maleknejad, Y. Yamaoka [et al.] // J. Gastroenterology and Hepatology.-2009.-Vol. 24 (8). P. 1380-1386.

138. Dore, M. P. Pathogenesis of duodenal ulcer disease: the rest of story Text. / M. P. Dore, D. Y. Graham // Baillieres Best Practice and Research: Clinical Gastroenterology. 2000. - Vol. 12, № 1. - P. 97-107.

139. Dowd, J. B. Early origins of health disparities: burden of infection, health, and socioeconomic status in U.S. children Text. / J. B. Dowd, A. Zajacova, A. Aiello // Social Science and Medicine. 2009. - Vol. 68 (4). - P. 699-707.

140. Dual roles of CagA protein in Helicobacterpylori-induced chronic gastritis in mice Text. / M. Kido, N. Watanabe, N. Aoki [et al.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2011. - Vol. 412 (2). - P. 266-272.

141. Duodenal ulcer promoting gene of Helicobacter pylori Text. / H. Lu, P. I. Hsu, D. Y. Graham [et al.] // Gastroenterology. 2005. - Vol. 128. -P. 833-848.

142. Effect of interleukin 1 polymorphisms on gastric mucosal interleukin lbeta production in Helicobacter pylori infection Text. / I. R. Hwang, T. Kodama, S. Kikuchi [et al.] // Gastroenterology. 2002. - Vol. 123. - P. 1793-1803.

143. El-Omar, E. M. The importance of interleukin lbeta in Helicobacter pylori associated disease Text. / E. M. El-Omar // Gut. 2001. - Vol. 48. - P. 743-747.

144. Endogenously produced IL-4 nonredundantly stimulates CD8+ T cell proliferation Text. / S. C. Morris, M. H. Stephani, R. H. DeBroski [et al.] // The Journal of Immunology. 2009. -Vol. 182.-P. 1429-1438.

145. Essential Role for Caspase-8 in Transcription-independent Apoptosis Triggered by p53 Text. / H.-F. Ding, Y.-L. Lin, G. McGill [et al.] // Journal of Biological Chemistry. 2000. - Vol. 275, № 49. - P. 38905-38911.

146. Everhart, J. E. Seroprevalence and ethnic differences in Helicobacter Pylori infection among adults in the United States Text. / J. E. Everhart, D. Kruszon-Moran, G. I. Perez-Perez // Journal of Infectious Diseases. 2000. - Vol. 181, №4.-P. 1359-1363.

147. Expression of bacterial beta-glucuronidase in human bile: an in vitro study Text. / J. W. Leung, Y. L. Liu, P. S. Leung [et al.] // Gastrointestinal Endoscopy. -2001. Vol. 54, № 3. - P. 346-350.

148. Fenton, H. J. H. Oxidation of tartaric acid in the presence of iron / H. J. H. Fenton // J. Chemical Society. 1984. - Vol. 65. - P. 899-910.

149. Ferrero, R. L. Innate immune recognition of the extracellular mucosal pathogen, Helicobacter pylori Text. / R. L. Ferrero // Molecular Immunology. 2005. -Vol. 42.-P. 879-885.

150. Fischer, W. Outer membrane targeting of passenger proteins by the vacuolating cytotoxin autotransporter of Helicobacter Pylori Text. / W. Fischer, R. Buhr-dorf, E. Gerland // Infection and Immunity. 2001. - Vol. 69, № 11. -P. 6769-6775.

151. Fletcher, D. R. Peptic disease: can we afford current management? Text. / D. R. Fletcher // Australian and New Zealand Journal of Surgery. 1997. -Vol. 67, №2-3.-P. 75-80.

152. Frequency of cytokine polymorphisms in populations from western Europe, Africa, Asia, the Middle East and South America / A. Meenagh, F. Williams, O. A. Ross et al. // Human Immunology. 2002. - Vol. 63. - P. 1055-1061.

153. Frodham, A. J. Genetics of infectious disease Text. / A. J. Frodham, A. V. S Hill // Human Molecular Genetics. 2004. - Vol. 13 (2). - R187-R194.

154. Functional analysis of iceAl, a CATG-recognizing restriction endonuclease gene in Helicobacter pylori Text. / Q. Xu, R.D. Morgan, R.J. Roberts [et al.] // Nucleic Acids Research. 2002. - Vol. 30. - P. 3839-3847.

155. Galrniche, A. The N-terminal 34 kDa fragment of Helicobacter Pylori vacuolating cytotoxin targets mitochondria and induces cytocurome с release Text. / A. Galrniche, J. Rassow, A. Doye // Embo Journal. 2000. - Vol. 19, № 23. -P. 6361-6370.

156. Gastric mucosal recognition of Helicobacter pylori is independent of Toll-like receptor 4 Text. / F. Backhed, B. Rokbi, E. Torstensson [et al.] // Journal of Infectious Diseases: 2003. - Vol. 187, № 5. - P. 829-836.

157. GeneCard for gene IL8 Электронный ресурс. Режим доступа: http/bioinfo.weizmann.ac.il/cards-bin/carddisp?IL8&snpcount=28#snp (дата обращения 24.12.2010).

158. Genetic affinities of Helicobacter pylori isolates from ethnic Arabs in Kuwait Text. / M. J. Albert, H. M. Al-Akbal, R. Dhar [et al.] // Gut Pathogy. 2010. -Vol. 2(1).-P. 6.

159. Genetic polymorphism of interleukin-8 (IL-8) is associated with Helicobacter pylori-induced duodenal ulcer Text. / Z. Gyulai, G. Klausz, A. Tiszai [et al.] // European Cytokine Network. 2004. - Vol. 15. - P. 353-358.

160. Genetic polymorphism of interleukin-1 ß is associated with risk of type 1 diabetes mellitus in children Text. / D. Krikovsky, B. Vasarhelyi; A. Treszl [et al.] // European journal of Pediatry. 2002. - Vol. 161. - P. 507-508.

161. Genetic polymorphisms of interleukin (IL)-IB, IL-1RN, IL-8, IL-10 and tumor necrosis factor and risk of genetic cancer in a Chinese population Text. / W. Lu, K. Pan, L Zhang [et al.] // Carcinogenesis. 2005. - Vol. 26. - P. 631-636.

162. Genetic polymorphisms of NODI and IL-8, but not polymorphisms of TLR4 genes, are associated with Helicobacter pylori-induced duodenal ulcer and gastritis Text. / P. Hofner, Z. Gyulai, Z. F. Kiss [et al.] // Helicobacter. 2007. - Vol. 12. -P. 124-131.

163. Genetic Variants in T Helper Cell Type 1, 2 and 3 Pathways and Gastric Cancer Risk in a Polish Population Text. / R. Mahajan, E. M. El-Omar, J. Lissowska [et al.] // Japanese Journal of Clinical Oncology. 2008. - Vol. 38 (9). -P. 626-633.

164. Genotyping analysis of Helicobacter pylori using multiple-locus variable-number tandem-repeats analysis in five regions of China and Japan Text. / C. Guo, Y. Liao, Y. Li [et al.] // BMC Microbiology. 2011. - Vol. 11. - P. 197.

165. Geographic distribution of vacA allelic types of Helicobacter Pylori Text. / L. Y. van Doom, C. Figueiredo, F. Megraud [et al.] // Gastroenterology. -1999. -Vol. 116.-P. 823-830.

166. Go, M. F. Natural history and epidemiology of Helicobacter Pylori infection Text. / M. F. Go // Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 2002. -Vol. 16, № l.-P. 3-15.

167. Goodwin, C. D. Duodenal ulcer, Campylobacter Pylori and the «leaking roof» concept Text. / C. D. Goodwin // Lancet. 1988. - Vol. 2. - P. 1467-1469.

168. Gottlieb, R. A. Programmed cell death Text. / R. A. Gottlieb // Drug News Perspect. 2000. - Vol. 13, № 8. - P. 471-476.

169. Helicobacter pylori Alters Gastric Epithelial Cell Cucle Events and Gastrin Secretion in Mongolian Gerbils Text. / R. M. Peek, H.-P. Wirth, S. F. Moss [et al.] // Gastroenterology. 2000. - Vol. 118. - P. 48-59.

170. Helicobacter pylori and cholesterol gallstone formation in C57L/J mice: a prospective study Text. / K. J. Maurer, A. B. Rogers, Z. Ge [et al.] // American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 2006. - Vol. 290. -G175-G182.

171. Helicobacter pylori antigens as potential modulators of lymphocytes cytotoxic activity Text. / K. Rudnicka, M. Wlodarczyk, A. P. Moran [et al.] // Microbiology and Immunology. 2012 -Vol. 56 (1). - P. 62-75.

172. Helicobacter pylori colonization is inversely associated with childhood asthma Text. / Y. Chen, M. J. Blaser [et al.] // Journal of Infectious Diseases. -2008. Vol. 198. - P. 553-560.

173. Helicobacter pylori gamma-glutamyltranspeptidase induces cell cycle arrest at the Gl-S phase transition Text. / J. M. Kim, S. G. Lee, J. M. Kim [et al.] // The Journal of Microbiology. 2010. Vol. 48 (3). - P. 372-377.

174. Helicobacter pylori in peptic ulcer disease: the importance of smoking and ethnicity Text. / K. V. K. Pilay, M. Htun, N. N. Naing [et al.] // Santheast Asian Journal Tropical Medical Public Health. 2007. - Vol. 38 (6). - P. 1102-1110.

175. Helicobacter pylori increases expression of proapoptotic markers Fas and FasL on CD4 lymphocytes in children Text. / A. Kotlowska-Kmiec, A. Bakowska, A. Szarszewski [et al.] // Acta Biochimica Polonica. 2009. -Vol. 56(3).-P. 433^38.

176. Helicobacter pylori infection in mice: role of outer membrane proteins in colonization and inflammation Text. / Y. Yamaoka, M. Kita, T. Kodama [et al.] // Gastroenterology. 2002. - Vol. 123. - P. 1992-2004.

177. Helicobacter pylori neutrophil-activating protein stimulates tissue factor and plasminogen activator inhibitor-2 production by human blood mononuclear cells Text. / P. Montemurro, G. Barbuti, W. G. Dundon [et al.] // Journal of Infectious

178. Diseases.-2001.-Vol. 183.-P. 1055-1062.

179. Helicobacter pylori SabA adhesin in persistent infection and chronic inflammation Text. / J. Mahdavi, B. Sonden, M. Hurtig [et al.] // Science. 2002. -Vol. 297.-P. 573-578.

180. Helicobacter pylori seroprevalence in hepatitis C virus positive patients with cirrhosis Text. / R. Pellicano, N. Leone, M. Berutti [et al.] // Journal of Hepatol-ogy. 2000. - Vol. 33. - P. 648-650.

181. Helicobacter pylori VacA activates NF-kappaB in T cells via the classical but not alternative pathway Text. / E. Takeshima, K. Tomimori, R. Takamatsu [et al.] 11 Helicobacter. 2009. - Vol. 14 (4). - P. 271-279.

182. Helicobacter pylori virulence genes and host IL-1RN and IL-1 beta genes interplay in favouring the development of peptic ulcer and intestinal metaplasia Text. / Zambon, C. F., D. Basso, F. Navaglia [et al.] // Cytokine. 2002. -Vol. 18.-P. 242-251.

183. Hellmig, S. Helicobacter pylori infection in Africa and Europe: enigma of host genetics Text. / S Hellmig, J. Hampe, S. Schreiber // Gut. 2003. - Vol. 52 (12).-P. 1799.

184. High anti-Helicobacter pylori antibody seropositivity associated with the combination of IL-8-251TT and IL-10 -819 TT genotypes Text. / N. Hamajima, N. Katsuda, K. Matsuo [et al.] // Helicobacter. 2003. - Vol. 8. - P. 105—110

185. Hamajima, N. Persistent Helicobacter pylori infection and genetic polymorphisms of the host Text. / N. Hamajima // Nagoya Journal of Medical Science. -2003. Vol. 66 (3^). - P. 103-117.

186. Hold, G. L. Innate Immune Sensors and Gastrointestinal Bacterial Infections Text. / L. Hold, I. Mukhopadhya, T. P. Monie // Clinical and Developmental Immunology. -2011,- Vol. 2011. P. 1-11.

187. Hollegaard, M. V. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases, suppl. 3 Text. / M. V. Hollegaard, J. L. Bidwell // Genes and Immunity. -2006. Vol. 7, № 4. - P. 269-276.

188. Holtmann, G. H. pylori and functional dyspepsia: increased serum antibodies as an independent risk factor? Text. / G. Holtmann, J. Gschossmann, M. Holtmann // Digestive Diseases and Sciences. 2001. - Vol. 46, № 7. - P. 1550-1557.

189. Horizontal versus Familial Transmission of Helicobacter pylori Text. / S. Schwarz, G. Morelli [et al.] // PLoS Pathology. 2008. - Vol. 4 (10). - P. 1-10.

190. Host cell responses to genotypically similar Helicobacter pylori isolates from United States and Japan Text. / T. Ando, R. M. Peek, Y. C. Lee [et al.] // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 2002. - Vol. 9. - P. 167-175.

191. Host cytokine genotype is related to adverse prognosis and systemic inflammation in gastro-oesophageal cancer Text. / C. Deans, M. Rose-Zerilli, S. Wig-more [et al.] // Annals of Surgical Oncology. 2007. - Vol. 14. - P. 329-339.

192. Hyperactivation of Stat3 in gpl30 mutant mice promotes gastric hyperprolif-eration and desensitizes TGF-beta signaling Text. / B. J. Jenkins, D. Grail, T. Nheu [et al.] //Nature Medicine. -2005. Vol. 11. - P. 845-852.

193. Identification of strain-specific genes located outside the plasticity zone in nine clinical isolates of Helicobacter pylori Text. / G. Chanto, A. Occhialini, N. Gras [et al.] // Microbiology. 2002. - Vol. 148. - P. 3671-3680.

194. IL-IB (+3953 C/T) and IL-8 (-251 A/T) gene polymorphisms in H. pylori mediated gastric disorders Text. / S. Farshad, M. Rasouli, A. Jamshidzadeh [et al.] // Iranian Journal of Immunology. 2010. - Vol. 7 (2). - P. 96-108.

195. IL-lß -511 polymorphism I assotiated with increased host susceptibility to Helicobacter pylori infection in Chinese Text. / J.-M. Liou et al. // Helicobacter. -2007.-Vol. 12-P. 142-149.

196. IL2 -33 0G polymorphic allele is associated with decreased risk of Helicobacter pylori infection in adulthood Text. / D. M. Queiroz, I. E. Saraiva, G. A. Rocha [et al.] // Microbes Infect. 2009. - Vol. 11 (12). - P. 980-987.

197. Impaired antigen presentation by human monocytes during endotoxin tolerance Text. / K. Wölk, W. D. Docke, V. von Baehr [et al.] // Blood. 2000. -Vol. 96.-P. 218-223.

198. Importance of Helicobacter pylori oipA in clinical presentation, gastric inflammation, and mucosal interleukin 8 production Text. / Y. Yamaoka, S. Kiku-chi, H. M. el-Zimaity [et al.] // Gastroenterology. 2002. - Vol. 123. -p. 414-424.

199. Increase of antigen-presenting cells in the gastric mucosa of Helicobacter pylori-infected children Text. / S. Krauss-Etschmann, R. Gruber, K. Plikat [et al.] // Helicobacter. 2005. - Vol. 10 (3). - P. 214-222.

200. Increased Frequency of Antral CD4+ T and CD19+ B Cells in Patients with Helicobacter pylori-Related Peptic Ulcer Disease Text. / R. Göll, A. Husebekk, V. Isaksen, G. Kaurict [et al.] // Scandinavian Journal of Immunology. 2005. -Vol. 61.-P. 92-97.

201. Increased prevalence of precancerous changes in relatives of gastric cancer patient: critical role of HP Text. / E. M. El-Omar, K. Oien, L. S. Murray [et al.] // Gastroenterology. 2000. - Vol. 118. - P. 22-30.

202. Increased risk of noncardia gastric cancer associated with proinflammatory cytokine gene polymorphisms Text. / E. M. El-Omar, C. S. Rabkin, M. D. Gammon [et al.] // Gastroenterology. 2003. - Vol. 124. - P. 1193-1201.

203. Induction of gastric epithelial cell apoptosis by Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin Text. / T. L. Cover, U. S. Krishna, D. A. Israel [et al.] // Cancer Research. 2003. - Vol. 63. - P. 951-957.

204. Influence of cytokine gene polymorphisms on the development of prostate cancer / S. L. McCarron, S. Edwards, P. R. Evans et al. // Cancer Research. -2002. Vol. 62. - P. 3369-3372.

205. Interaction among ethnicity, socioeconomic status, and Helicobacter pylori seroprevalence in Israeli children and adolescents Text. / K. Muhsen, A. Nir,

206. A. Spungin-Bialik et al. // Journal Pediatr Gastroenterol Nutr. 2011. - Vol. 53 (5).-P. 524-527.

207. Interkeukin-8 Promotor Polymorphism Increases the Risk of Atrophic Gastritis and Gastric Cancer in Japan Text. / A. Taguchi, N. Ohmia, K. Shirai [et al.] // Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention. 2005. - Vol. 14. -P.2487-2493.

208. Interleukin lbeta polymorphisms increase risk of hypochlorhydria and atrophic gastritis and reduce risk of duodenal ulcer recurrence in Japan Text. / T. Fu-ruta, E. M. El-Omar, F. Xiao [et al.] // Gastroenterology. 2002. - Vol. 123. -P. 92-105.

209. Interleukin-1 gene polymorphisms and gastric cancer risk in a high-risk Italian population Text. / D. Palli, C. Saieva, I. Luzzi [et al.] // The American Journal of Gastroenterology. 2005. -Vol. 100. - P. 1941-1948.

210. Interleukin-1 polymorphisms associated with increased risk of gastric cancer Text. / E. M. El-Omar, M. Carrington, W. H. Chow [et al.] // Nature. 2000. -Vol. 404.-P. 398-402.

211. Interleukin-10 (-819 C/T) and tumor necrosis factor-alpha (-308 G/A) gene variants influence gastritis and lymphoid follicle development Text. /

212. Interleukin-10 genotypes associate with the risk of gastric carcinoma in Taiwanese Chinese Text. / M. S. Wu, C. Y. Wu, C. J. Chen [et al.] // Internal Journal of Cancer. 2003. - Vol. 104. - P. 617-623.

213. Interleukin-2 gene polymorphisms associated with increased risk of gastric atrophy from Helicobacter pylori infection Text. / S. Togawa, T. Joh, M. Itoh [et al.] // Helicobacter. 2005. - Vol. 10. - P. 172-178.

214. Interleukin-6 gene polymorphism -174G/C influences plasma lipid levels in women Text. / S. Henningsson, A. Hakansson, L. Westberg [et al.] // Obesity.2006.-Vol. 14(11).-P. 1868-1873.

215. Interleukin-6 Gene Polymorphism and Insulin Sensitivity Text. / J.-M. Fernandez-Real, M. Broch, J. Vendrell [et al.] // Diabetes. 2000. - Vol. 49. -P. 517-519.

216. Isomoto, H. Pleiotropic action of Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin, VacA Text. / H. Isomoto, J. Moss, T. Hirayama // Tohoku Journal of Experimental Medicine. 2010. - Vol. 220 (1). - P. 3-14.

217. Ito, Y. Sequence analysis and clinical significance of the IceA gene from Helicobacter Pylori strains in Japan Text. / Y. Ito, T. Azuma, S. Ito // Journal of

218. Clinical Microbiology. 2000. - Vol. 38, № 2. - P. 483-488.

219. Jang, S. Epidemiological Link between Gastric Disease and Polymorphisms in VacA and CagA Text. / S. Jang, K. R. Jones, C. H. Olsen // Journal of Clinical Microbiology. 2010. - Vol. 48 (2). - P. 559-567.

220. Jung, S. W. The intact dupA cluster is a more reliable Helicobacter pylori virulence marker than dupA alone Text. / S. W. Jung, M. Sugimoto, S. Shiota [et al.] // Infection and Immunity. 2012. - Vol. 80 (1). - P. 381-387.

221. Kandulski, A. Role of regulatory T-cells in H. pylori-induced gastritis and gastric cancer Text. / A. Kandulski, P. Malfertheiner, T. Wex // Anticancer Res. -2010.-Vol. 30(4).-P. 1093-1103.

222. Key importance of the Helicobacter pylori adherence factor blood group antigen binding adhesin during chronic gastric inflammation Text. / C. Prinz, M. Schoniger, R. Rad [et al.] // Cancer Research. 2001. - Vol. 61. -P. 1903-1909.

223. Kidd, V. J. Proteolytic regulation of apoptosis Text. / V. J. Kidd, J. M. Lahti, T. Teitz // Seminars in Cell and Developmental Biology. 2000. - Vol. 11, № 3. -P. 191-201.

224. Konturek, P. C. Gastric cancer and Helicobacter pylori infection Text. / P. C. Konturek, S. J. Konturek, T. Brzozowski // Journal of Physiology and Pharmacology. 2006. - Vol. 57. - P. 51-65.

225. Kountrek, P. C. Helicobacter pylori infection in gastric cancerogeneis Text. / P. C. Kountrek, S. J. Kountrek, T. J. Brzozowski // Journal of Physiology and Pharmacology. 2009. - Vol. 60 (3). - P. 3-21.

226. Kroemer, G. Introduction: mitochondrial control of apoptosis Text. /

227. G. Kroemer // Boichimie. 2002. - Vol. 84, № 2-3. - P. 103-104.

228. Kuhnlein, H. V. Lipid components of traditional Inuit foods and diets of Baffin Island Text. / H. V. Kuhnlein, S. Kubow, R. Souieda // Journal of Food Composition and Analysis. 1991. - Vol. 4, № 2. - P. 227-336.

229. Kuhnlein, H. V. Traditional and contemporary Nuxalk foods Text. /

230. H. V. Kuhnlein // Nutrition Research. 1984. - Vol. 4, № 4. - P. 789-809.

231. Kuipers, E. J. Helicobacter pylori and the risk and management of associated diseases: gastritis, ulcer disease, atrophic gastritis and gastric cancer Text. / E. J. Kuipers // Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 1997. - Vol. 11 (S. 1).-P. 71-88.

232. Küsters, J. G. Pathogenesis of Helicobacter pylori Infection Text. / J. G. Küsters, A. H. M. van Vliet, E. J. Kuipers // Clinical Microbiology Reviews. 2006. - Vol. 19 (3). - P. 449-490.

233. Labbé, K. Cell death in the host response to infection Text. / K. Labbé, M. Saleh // Cell Death and Differentiation. 2008. - Vol. 15. - P. 1339-1349.

234. Lack of association between pro-inflammatory genotypes of the interleukin-1 (IL-IB -31 C/C and IL-1RN *2/*2) and gastric cancer/duodenal ulcer in Korean population Text. / S. G. Lee, B. Kim, W. Choi [et al.] // Cytokine. 2003. -Vol. 21.-P. 167-171.

235. Li, J. The influences of interleukin-1 beta converting enzyme expression on the biologic characteristics of ovarian cancer cells Text. / J. Li, X. Kong, Q. Qian // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. 1999. - Vol. 34, № 2. - P. 113-115.

236. Ljungh, A. Helicobacter Pylori interactions with plasminogen Text. / A. Ljungh // Methods. 2000. - Vol. 21, № 2. - P. 151-157.

237. Lohoff, M. Helicobacter pylori gastritis: a Thl mediated disease Text. / M. Lohoff, M. Rollinghoff, F. Sommer // Journal of Biotechnology. 2000. -Vol. 83.-P. 33-63.

238. Long-term effect of Helicobacter pylori eradication on plasma homocysteine in elderly patients with cobalamin deficiency Text. / M. C. Abreu Marino, C. A. de Oliveira, A. M. Camargos Rocha [et al.] // Gut. 2007. - Vol. 56 (4). -P. 469-474.

239. Lucey D. R. Type 1 and type 2 cytokine dysregulation in human infectious, neoplastic, and inflammatory diseases Text. / D. R. Lucey, M. Clerici, G. M. Shearer // Clinical Microbiology Reviews. 1996. - Vol. 9 (4). -P. 532-562.

240. Malaty, H. M. Evidence from a nine-year birth cohort study in Japan of transmission pathways of Helicobacter Pylori infection Text. / H. M. Malaty, T. Kumagai, E. Tanaka // Journal of Clinical Microbiology. 2000. - Vol. 38, № 5.-P. 1971-1973.

241. McColl K. E. The role of H. pylori infection in the pathophysiology of duodenal ulcer disease / K. E. McColl, El.-Omar, D. Gillen // Journal of Physiology and Pharmacology. 1997. - Vol. 48 (3). - P. 287-295.

242. McHugh, M. L. The odds ratio: calculation, usage, and interpretation The Bi-ochemia Medica / M. L. McHugh // The journal of Croatian Society of Medical Biochemists. -2009. Vol.19 (2). - P. 120-126.

243. Meining, A. Differing degree and distribution of gastritis in Helicobacter Pylori-associated diseases / A. Meining, M. Stolte, R. Hätz // Virchows Archiv. -1997.-Bd. 431, № l.-S. 11-15.

244. Meyer, F. Modulation of innate cytokine responses by products of Helicobacter pylori / F. Meyer, K. T. Wilson, S. P. James // Infection and Immunity. -2000. Vol. 68. - P. 6265-6272.

245. Mitchell, H. Epidemiology and diagnosis of Helicobacter pylori infection Text. / H. Mitchell, F. Megraud // Helicobacter. 2002. - Vol. 7. - P. 8-16.

246. Miwa, H. H. Pylori and gastric cancer: the Asian enigma Text. / H. Miwa, M. F. Go, N. Sato // The American Journal of Gastroenterology. 2002. - Vol. 97, №5.-P. 1106-1112.

247. Miyaji, H. Helicobacter Pylori infection occurs via close contact with infected individuals in early childhood Text. / H. Miyaji, T. Azuma, S. Ito // Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2000. - Vol. 15, № 3. - P. 257-262.

248. Molecular definitions of cell death subroutines: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2012 Text. / L. Galuzzi, I. Vitale, J. M. Abrams [et al.] // Cell Death Differ. 2011. - online publication.

249. Negative Selection of T Cells by Helicobacter pylori as a Model for Bacterial Strain Selection by Immune Evasion Text. / J. Wang, E. G. Brooks, K. B. Bam-ford [et al.] // European Journal of Immunology. 2001. - Vol. 167, № 2. -P. 926-934.

250. New pathogenicity marker found in the plasticity region of the Helicobacter pylori genome Text. / A. Santos, D. M. Queiroz, A. Menard [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. -2003. Vol. 41. - P. 1651-1655.

251. Nguyen, T. L. Helicobacter pylori infection and gastroduodenal diseases in Vietnam: a cross-sectional, hospital-based study Text. / T. L. Nguyen, T. Uchida, Y. Tsukamoto [et al.] // BMC Gastroenterology. 2010. - Vol. 10. - P. 110-114.

252. Nguyen, V. Q. Carboxy-terminal proteolytic processing of Helicobacter Pylori vacuolating toxin Text. / V. Q. Nguyen, R. M. Caprioli, T. L. Cover // Infection and Immunity. 2001. - Vol. 69, № 1. - P. 543-546.

253. Nishiya, D. Evaluation of the clinical relevance of the IceAl gene in patients with Helicobacter Pylori infection in Japan Text. / D. Nishiya, T. Shimoyama, S. Fukuda // Scandinavian Journal of Gastroenterology. 2000. - Vol. 35, № 1. -P. 36-39.

254. Nogueira, C. Helicobacter Pylori genotypes may determine gastric histopa-thology Text. / C. Nogueira, C. Figueiredo, F. Carneiro // The American Journal of Pathology. 2001. - Vol. 158, № 2. - P. 647-654.

255. Papini, D. In search of the Helicobacter Pylori VacA mechanism of action Text. / D. Papini, M. Zoratti, T. L. Cover // Toxicology. 2001. - Vol. 39, № 11.-P. 1757-1767.

256. Parsonnet, J. Factors associated with disappearance of Helicobacter Pylori in the West Text. / J. Parsonnet // Helicobacter Pylori. Basic mechanisms to clinical cure 2000. Dordrecht-Boston-London: Kluwer Academic Publishers, 2000. -P. 45-53.

257. Paterns of Helicobacter Pylori infection in households in Bangladesh determined by immunological analysis Text. / R. J. Owen, J. Nessa, B. Drasar // European Journal of Gastroenterology. 2000. - Vol. 47, № 10 (Suppl. 1). - P. A 49.

258. Perez-Perez, G. I. Epidemiology of Helicobacter pylori Infection Text. / G. I. Perez-Perez, D. Rothenbacher, H. Brenner // Helicobacter. 2004. - Vol. 9. -P. 1-6.

259. Polymorphism in the CagA EPIYA Motif Impact Developmentof Gatric Cancer Text. / K. R. Jones, Y. M. Joo, S. Jang, Y.-J. Yoo [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 2009. - Vol. 47 (4). - P. 959-968.

260. Polymorphism of IL-8 in 251 allele and gastric cancer susceptibility: a metaanalysis Text. / J. Wang, H. F. Pan, Y. T. Hu [et al.] // Digestive Diseases and Sciences. 2010. - Vol. 55 (7). - P. 1818-1823.

261. Polymorphisms in inflammation-related genes and risk of gastric cancer (Finland) Text. / F. Kamangar, C. C. Abnet, A. Allen [et al.] // Cancer Causes Control. 2006. - Vol. 17. - P. 117-125.

262. Polymorphisms of Helicobacter pylori HP0638 reflect geographic origin and correlate with cagA status Text. / T. Ando, R. M. Peek, D. Pride [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 2002. - Vol. 40. - P. 239-246.

263. Polymorphisms of IL-IB, IL-1RN, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, and IFN-gamma genes in the Korean population Text. / C.W. Pyo, S. S. Hur, Y. K. Kim [et al.] // Human Immunology. 2003. - Vol. 64. - P. 979-989.

264. Polymorphisms of interleukin-1 and interleukin-2 genes in patients with gastric cancer in Korea Text. / W. G. Shin, J. S. Jang, H. S. Kim [et al.] // European Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2008. - Vol. 23. - P. 1567-1573.

265. Pride, D. T. Allelic variation within Helicobacter Pylori BabA and BabB Text. / D. T. Pride, R. J. Meinersmann, M. J. Blaser // Infection and Immunity. -2001.-Vol. 69, №2.-P. 1160-1171.

266. Pro- and anti-inflammatory cytokine gene polymorphisms and Helicobacter pylori infection: interactions influence outcome Text. / C. F. Zambon, D. Basso, F. Navaglia [et al.] // Cytokine. - 2005. - Vol. 29. - P. 141-152.

267. Promoter polymorphisms in the chromosome 5 gene cluster in asthma and atopy Text. / L. J. Rosenwasser, D. J. Klemm, J. K. Dresback [et al.] // Clinical and Experimental Allergy. 1995. - Vol. 2. - P. 74-78.

268. Promoter polymorphisms of IL2, IL4, and risk of gastric cancer in a high-risk Chinese population Text. / J. Wu, Y. Lu, Y. B. Ding [et al.] // Molecular Carcinogenesis. 2009. - Vol. 48. - P. 626-632.

269. Promoter polymorphisms of tumor necrosis factor-alpha are associated with risk of gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma Text. / M. S. Wu, L. T. Chen, С. T. Shun [et al.] // International Journal of Cancer. 2004. -Vol. 110.-P. 695-700.

270. Pylori Gene World Wide Web Server Institut Pasteur. - Геном H. pylori штаммов 26695 и J99 (дата посещения - 22.12.2009).

271. Rasko, D. A. Lewis antigen expression by Helicobacter Pylori Text. / D. A. Rasko, M. Keelan, T. J. Wilson // Journal of Infectious Diseases. 2001. -Vol. 184, № 3.-P. 315-321.

272. Risks of interleukin-1 genetic polymorphisms and Helicobacter pylori infection in the development of gastric cancer Text. / A. Chen, C. N. Li, P. I. Hsu [et al.] // Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 2004. - Vol. 20. -P. 203-211.

273. Role of cagA-Positive Helicobacter pylori on Cell Proliferation, Apoptosis, and Inflammation in Biliary Cells Text. / W. Boonyanugomol, C. Chomvanin, S. C. Baik [et al.] // Digestive Diseases and Sciences. 2010. - P. 1-10.

274. Role of Helicobacter pylori infection in the Treatment and outcome of chronic urticaria Text. / S. Hellmig, K. Troch, S. J. Ott [et al.] // Helicobacter. 2008. -Vol. 13.-P. 341-345.

275. Role of IL-10 promoter haplotypes in Helicobacter pylori associated gastric inflammation Text. / S. Hellmig, J. Hampe, U. R. Folsch [et al.] // Gut. 2005. -Vol. 54.-P. 888.

276. Role of the alpAB proteins and lipopolysaccharide in adhesion of Helicobacter pylori to human gastric tissue Text. / S. Odenbreit, G. Faller, R. Haas // International Journal of Medical Microbiology. 2002. - Vol. 292. - P. 247-256.

277. Role of the Helicobacter pylori outer-membrane proteins AlpA and AlpB in colonization of the guinea pig stomach Text. / R. de Jonge, Z. Durrani, S.G. Rijp-kema [et al.] // Journal of Medical Microbiology. 2004. - Vol. 53. - P. 375-379.

278. Schwesinger, W. H. Operations for peptic ulcer disease: paradigm lost Text. / W. H. Schwesinger, C. P. Page, K. R. Sirinek // The Journal of Gastrointestinal

279. Surgery. 2001. - Vol. 7-8, № 4 (Suppl. 5). - P. 438-443.

280. Seroprevalence of Helicobacter pylori in New York City populations originating in East Asia Text. / G. I. Perez-Perez; A. Z. Olivares; F. Y. Foo [et al.] // Journal of urban health. 2005. - Vol. 82. - P. 510.

281. Sewald, X. PKC-dependent endocytosis of the Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin in primary T lymphocytes Text. / X. Sewald, L. Jimenez-Soto, R. Haas // Cell Microbiology. 2011. - Vol. 13 (3). - P. 482-496.

282. Skulachev, V. P. Programmed death phenomena: from organelle to organism Text. / V. P. Skulachev // Annals of the New York Academy of Sciences. -2002.-Vol. 959.-P. 214-237.

283. Suares, G. Immune response to H. pylori Text. / G. Suares, V. E. Reyes, E. J. Beswick // World Journal of Gastroenterology. 2006. - Vol. 12 (35). -P. 5593-5598.

284. Suares, G. H. pylori and host interaction that influence pathogenesis Text. / G. Suares, E. J. Beswick, V. E. Reyes // World Journal of Gastroenterology. -2006. Vol. 12 (35). - P. 5599—5605.

285. Subjects with TNF-A -857 TT and -1031 TT genotypes showed the highest Helicobacter pylori seropositive rate compared with those with other genotypes Text. / N. Hamajima, A. Shibata, N. Katsuda [et al.] // Gastric Cancer. 2003. -Vol. 6.-P. 230-236.

286. Suerbaum, S. Helicobacter pylori infection Text. / S. Suerbaum, P. Michetti // New England Journal of Medicine. 2002. - Vol. 347. -P. 1175-1186.

287. Suerbaum, S. Helicobacter pylori: recombination, population structure and human migration Text. / S. Suerbaum, M. Achtman // International Journal of Medical Microbiology. 2004. - Vol. 294 (2-3). - P. 133-139.

288. Sugimoto, M. Influence of interleukin polymorphisms on development of gastric cancer and peptic ulcer Text. / M. Sugimoto, Y. Yamaoka, T. Furuta // World Journal of Gastroenterology. -2010. Vol. 16 (10). - P. 1188-1200.

289. Swidsinski, A. The role of bacteria in gallstone pathogenesis Text. / A. Swid-sinski, S. P. Lee // Frontiers in Bioscience. 2001. - Vol. 1, № 6. - P. 93-103.

290. Tannaes, T. High relative content of lysophospholipids of Helicobacter pylori mediates increased risk for ulcer disease Text. / T. Tannaes, I. K. Bukholm, G. Bukholm // FEMS Immunology and Medical Microbiology. 2005. -Vol. 44.-P. 17-23.

291. Tham, K. T. Helicobacter Pylori genotypes, host factors, and gastric mucosal histopathology in peptic ulcer disease Text. / K. T. Tham, R. M. Peek, J. C. Ather-ton // Human Pathology. 2001. - Vol. 32, № 3. - P. 247-249.

292. The C Allele of rs5743836 Polymorphism in the Human TLR9 Promoter Links IL-6 and TLR9 Up-Regulation and Confers Increased B-Cell Proliferation Text. / A. Carvalho, N. S. Osörio, M. Saraiva [et al.] // PLoS One. 2011. -Vol. 6(11).-P. 1-5.

293. The effects of genetic polymorphisms of IL-1 and TNF-A on Helicobacter pylori-induced gastroduodenal diseases in Korea Text. / N. Kim, S. I. Cho, J. M. Yim [et al.] // Helicobacter. 2006. - Vol. 11, № 2. - P. 105-112.

294. The effects of genetic polymorphisms of IL-6, IL-8 and IL-10 on Helicobacter pylori-induced gastroduodenal diseases in Korea Text. / J. M. Kang, N. Kim, D. H. Lee [et al.] // Journal of Clinical Gastroenterology. 2009. - Vol. 43, № 5. -P. 420^28.

295. The functional status of the Helicobacter pylori sabB adhesin gene as a putative marker for disease outcome Text. / R. de Jonge, R.G. Pot, R.J. Loffeld [et al.] // Helicobacter. 2004. - Vol. 9. - P. 158-164.

296. The Helicobacter pylori blood group antigen-binding adhesin facilitates bacterial colonization and augments a nonspecific immune response Text. / R. Rad, M. Gerhard, R. Lang [et al.] // J. Immunology.-2002. Vol. 168. - P. 3033-3041.

297. The IL-4/IL-13/Stat6 signalling pathway promotes luminal mammary epithelial cell development Text. / W. T. Khaled, E. K. C. Read, S. E. Nicholson [et al.] //Development. 2007. - Vol. 134 (15). - P. 2739-2750.

298. The interleukin-8-251*T/* A polymorphism is not associated with risk for gastric carcinoma development in a Portuguese population Text. / P. Canedo,

299. A. J. Castanheira-Vale, N. Lunet et al. // European Journal of Cancer Prevention. 2008. - Vol. 17. - P. 28-32.

300. The Mouthwash: A Non-Invasive Sampling Method to Study Cytokine Gene Polymorphisms Text. / M. L. Laine, M. A. Farre, J. B. A. Crusius [et al.] // Periodontol. 2000. - Vol. 71, № 8. - P. 1315-1318.

301. The polymorphism interleukin 8 -251 A/T influences the susceptibility of Helicobacter pylori related gastric disease in the Japanese population Text. / M. Ohyauchi, A. Imatani, M. Yonechi [et al.] // Gut. 2005. - Vol. 54. -P. 330-335.

302. The role of interleukin-8 in cancer cells and microenvironment interaction Text. / A. Yuan, J. J. Chen, P. L. Yao [et al.] // Frontiers in Bioscience. 2005. -Vol. 10.-P. 853-865.

303. The sialic acid binding SabA adhesin of Helicobacter pylori is essential for nonopsonic activation of human neutrophils Text. / M. Unemo, M. Aspholm-Hurtig, D. liver [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. 2005. -Vol. 280.-P. 15390-15397.

304. TNF gene polymorphisms and Helicobacter pylori infection in gastric carcinogenesis in Chinese population Text. / C. Li, B. Xia, Y. Yang [et al.] // The American Journal of Gastroenterology. 2005. - Vol. 100. - P. 290-294.

305. Toll-like receptor 2-mediated gene expression in epithelial cells during Helicobacter pylori infection Text. / S. Z. Ding, A. M. Torok, M. F. Jr. Smith [et al.] // Helicobacter. -2005. Vol. 10 (3). - P. 193-204.

306. Two distinct aetiologies of cardia cancer; evidence from premorbid serological markers of gastric atrophy and Helicobacter pylori status Text. / S. Hansen, S. E. Vollset, M. H. Derakhshan [et al.] // Gut. 2007. - Vol. 56 (7). - P. 918-925.

307. Wada, A. Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin, VacA, is responsible for gastric ulceration Text. / A. Wada, E. Yamasaki, T. Hirayama // The Journal of Biochemistry (Tokyo). 2004. - Vol. 136. - P. 741-746.

308. Wisniewski, P. Cloning and purification of functionally active Fas ligand interfering protein (FIP) expressed in Escherihia coli Text. / P. Wisniewski, A. Master, B. Kaminska // Acta Biochimica Polonica. 2008. - Vol. 55. - P. 51-56.

309. Yamaguchi, H. Immune response against a cross-reactive epitope on the heat shock protein 60 homologue of Helicobacter Pylori Text. / H. Yamaguchi, T. Osaki, M. Kai // Infection and Immunity. 2000. - Vol. 68, № 6. -P. 3448-3454.

310. Youle, R. J. The BCL-2 protein family: opposing activities that mediate cell death Text. / R. J. Youle, A. Strasser // National Review Molecular Cell Biology. 2008. - Vol. 9 (1). - P. 47-59.

311. Zajacova, A. Socioeconomic and Race/Ethnic Patterns in Persistent Infection Burden Among U.S. Adults Text. / A. Zajacova, J. B. Dowd, A. E. Aiello // J Gerontol A Biol Sei Med Sei. 2009. - Vol. 64A (2). - P. 272-279.