Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование противоаритмической активности некоторых производных ариламидоаминов

Для служебного пользования Экз. №

ЛЕБЕДЕВ Аркадий Борисович

РГШ од

О 4 МДР 2001

ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОАРИТМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ АРИЛАМИДОАМИНОВ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Купавна, 2004

Работа выполнена в Тверской государственной медицинской академии и во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ )

Научный руководитель: д.м.н., профессор Г.А. Базанов Научный консультант: д.б.н., профессор Н.М. Митрохин Официальные оппоненты: д.м.н., профессор К.Н. Резников

д.м.н., профессор И.Е. Ковалев

Ведущая организация - Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится «_»_2004 года в «_» часов на заседании

диссертационного совета Д 217.004.01 ВНЦ БАВ (142450, Московская обл., пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ

Автореферат разослан «_»_2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук,

профессор Л.В. Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Проблема коррекции нарушений ритма сердечной деятельности остается на сегодняшний день важнейшей в кардиологии, что находит отражение в многочисленных публикациях отечественных и зарубежных авторов (Горбачев В.В., Мрочек А.Г., 2000; Сыркин A.JL, Добровольский A.B., 2001; Галенко-Ярошевский П.А., Шейх-Заде Ю.Р., Че-редник И.Л., 2001; Сулимов В.А., Калашников В.Ю., 2002; Сернов Л.Н., Блинов Д.С., Волкова Н.Д., Скачилова С.Я. и соавт., 2003; Смирнов Л.Д., Сернов Л.Н., 2003).

Нарушения ритма осложняют течение многих заболеваний сердца: ИБС, гипертрофическую, дилатационную кардиомиопатию, пролапс митрального клапана, миокардит (Розенберг В.Д., 1990; Гуревич М.А., Янковская М.О., 1992; Мурашко В.В., Струтынский A.B., 2001; Мутафьян O.A., 2002; Roy D., Talajic М,, Dorian Р. et а!., 2000); повышают опасность различных диагностических и лечебных манипуляций (Ардашев В.Н. и соавт., 1991; Bolli R. et al., 1985; Мухамеджанова Л.Р., Латфушшн И.А., Хитров В.Ю., 2002; Мандел Д., 1996; Кушаковский М.С., 1999; Priori S. et al., 1999).

Условия, предрасполагающие к появлению аритмии, могут возникать не только при болезнях сердца, но и при заболеваниях, оказывающих неблагоприятное воздействие на миокард и ведущих к его дистрофии (Катышкина Н.И., Овчинников ПЛ., 1992; Меерсон Ф.З. и соавт., 1992).

Большинством клиницистов основной причиной внезапной смерти у кардиологических больных признается фибрилляция желудочков (Белоконь H.A., 1989; Бокерия Л.А., 1989; Hohnloser S.H., 1988), развивающаяся вслед за желудочковой тахикардией (Мазур H.A., 1988; Домбровская Е.А. и соавт., 1989; Мазур H.A., 1989; Бакалов С.А. и соавт., 1992; Дощицын В.Л., 1992).

Учитывая опасность возникновения тяжелых аритмий, вполне естественна настороженность врачей к проявлению любых нарушений сердечного-ритма и стремление как можно быстрее их устранить (Чазов Е.И., 1975, 2003; Голухова Е.Р. и соавт., 1995).

Придается большое значение рациональному выбору антиаритмиков в соответствии с механизмом возникновения аритмий и учетом характера электрофизиологического действия препарата (Бердяев С.Ю., 1987; Бокерия Л.А., 1989; Каверина Н.В., Сколдинов А.П, 1990; Голицын С.П., 2000). Между тем, проблема эффективного безрецидивного фармакологического воздействия на нарушения сердечного ритма пока далека от полного решения. Возможности фармакотерапии нарушений сердечного ритма ограничены либо недостаточной эффективностью используемых препаратов, либо наличием у них ряда побочных эффектов (Голицын С.П., Савельев И.В., Бокалов С.А., 1998; Дощицин В.Л., 1993,1999; Каверина Н.В., 1994; Кушаковский М.С, 1998).

Все вышесказанное побуждает фармакологов и клиницистов к поиску новых противоаритмических препаратов, отличающихся не только высокой эффективностью, но и максимальной безопасностью (Голицын С.П., Савельев И.В., Бокалов С.А., 1998; Сулимов В.А., 1998).

Во Всероссийском научном центре по изучению безопасности биологически активных веществ (п. Старая Купавна, Московской области) под руководством профессора С.Я. Скачиловой была синтезирована серия веществ -производных ариламидоаминов, где в качестве аниона были использованы некоторые амино- и карбоновые кислоты. Ранее было показано, что некоторые производные ариламидоаминов могут проявлять антиаритмическую активность (Блинов Д.С., 2002). Поэтому вновь синтезированные соединения этого класса были выбраны нами для экспериментального исследования с целью анализа их токсических свойств и противоаритмической активности с тем, чтобы выделить наиболее перспективные вещества для последующих углубленных исследований и возможного внедрения их в медицинскую практику.

Цель работы: Изучить противоаритмическую активность новых синтезированных производных ариламидоаминов.

Задачи исследования. В соответствии с поставленной целью при выполнении данной работы были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать показатели острой токсичности изучаемых соединений.

2. Определить диапазон доз соединений, в которых проявляется антиаритмическая активность.

3. Провести изучение противоаритмического действия исследуемых соединений на моделях нарушений ритма сердца различного генеза, определить эффективность их купирующего действия и продолжительность противоаритмической активности.

4. На моделях ранних окклюзионных и реперфузионных аритмий изучить противоаритмическую и противофибрилляторную активность наиболее эффективных соединений, выделенных по результатам скринингового исследования.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное фармакологическое исследование оригинальных производных ариламидоаминов (8 соединений). Изучена их острая токсичность и противоаритмическая активность на моделях нарушений сердечного ритма различного генеза.

Впервые исследована противофибрилляторная активность испытуемых соединений на моделях желудочковых тахиаритмий, вызванных введением хлористого кальция, нитрата аконитина, адреналина гидрохлорида и сердечного гликозида - строфантина К.

Впервые установлена купирующая способность и продолжительность антиаритмического действия двух наиболее активных веществ из восьми изучаемых соединений: JIXT-13-91, JIXT-11-91 на моделях ранних окклюзи-онных и реперфузионных аритмий.

Практическая ценность работы. Основным результатом проведенного исследования фармакологических свойств восьми соединений из класса производных ариламидоаминов явилось выделение веществ JIXT-13-91, ЛХТ-11-91, превосходящих по противоаритмической, противофибриллятор-ной активности и продолжительности действия препараты сравнения, относящиеся к I классу (лидокаина гидрохлорид) и III классу (кватернидин) по классификации антиаритмических препаратов Vaugham - Williams Е.А. (1984). Соединение J1XT-13-91 представляет интерес для дальнейшего изучения в качестве потенциального противоаритмического средства, так как в меньшей степени, чем сравниваемые ангиаритмические препараты влияет на основные электрофизиологические параметры сердца, не ухудшая их.

Положения, выноснмые на защиту.

1. Производные ариламидоаминов являются перспективным классом соединений с потенциальной противоаритмической активностью.

2. Противоаритмическая активность производных ариламидоаминов на различных моделях сердечных аритмий выражалась неодинаково: на модели хлоридкальциевой аритмии активность проявили все соединения, кроме JIXT-3-91. При аконитиновых аритмиях - наиболее активны соединения ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91, при строфантиновых аритмиях - ЛХТ-6-95 и ЛХТ-11-91, при катехоламиновых аритмиях - ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91.

3. Наибольшим защитным противоаритмическим и противофибрилля-торным действием обладают соединения с шифрами ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91.

4. Перспективным для дальнейшего изучения является соединение с лабораторным шифром ЛХТ-13-91, содержащее в качестве аниона аминоуксусную кислоту, которое на различных моделях аритмий превосходит препараты сравнения лидокаина гидрохлорид, кватернидин и другие изученные производные ариламидоаминов по силе и длительности антиаритмического эффекта.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 6 глав, в которых изложены результаты собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Работа изложена на 118 страницах машинописного текста, иллюстрирована 49 рисунками и 9 таблицами. Библиографический список литературы содержит 315 источников, в том числе 154 работ отечественных и 161 — зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования послужили производные ариламидоаминов, синтезированные во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ под руководством проф. С.Я. Скачиловой: ЛХТ-13-91, ЛХТ-11-91, ЛХТ-52-91 ЛХТ 35-91, ЛХТ 6-95, ЛХТ 3-91, ЛХТ 7-97, ЛХТ 10-91.

В качестве препаратов сравнения использованы лидокаин и кватерни-дин. Характеристика экспериментальных животных представлена в табл. 1.

Таблица 1

Характеристика экспериментальных животных

№ Раздел исследования Вид животных Количество животных Масса, г

1. Изучение острой токсичности мыши 332 18-20

2. Ранние окклюзионные и ре-перфузионные аритмии кошки 18 1800-4500

3. Адреналиновые аритмии крысы 47 180-200

4. Аконитиновые аритмии крысы 45 180-200

5. Хлоридкальциевые аритмии крысы 42 180-200

6. Строфантиновые аритмии крысы 57 180-200

Все манипуляции, причиняющие животным боль, проводились под общим обезболиванием. Для этого использовали этаминал-натрий, которые вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг.

Острую токсичность исследуемых соединений определяли на белых нелинейных мышах обоего пола массой 18-20 г при внутрибрюшинном введении. Каждую дозу испытуемых веществ вводили группе из 4 животных в растворе, объем которого не превышал 0,5 мл. LD50 определяли табличным методом по таблице Прозоровского В.Б. (1980). Наблюдение за внешним видом, поведенческими реакциями и выживаемостью животных проводили непрерывно в течение одной недели.

Для изучения противоаритмической активности соединений использовали следующие экспериментальные методы:

1. Фибрилляция желудочков, моделированная внутривенным введением токсических доз хлористого кальция (Malinow M.R., Battle F.F., Malamud В., 1953). Белых нелинейных крыс обоего пола массой 180-200 гр. наркотизировали внутрибрюшинным введением этаминала натрия в дозе 50 мг/кг. Хлорид кальция вводили в хвостовую вену в дозе 250мг/кг в виде 10% раствора через 1 мин. после внутривенной инъекции тестируемых соединений. В контрольных опытах у 80-90% животных под влиянием раствора кальция хлори-

да развивается фибрилляция желудочков, которой предшествует нарастающая брадикардия. Данная модель отличается недостаточной адекватностью к клинической патологии, поэтому только в определенной мере позволяет судить об антифибрилляторной активности исследуемых соединений.

Гиперкальциемия, возникающая после введения токсической дозы хлористого кальция, приводит к полной дезорганизации процессов возбуждения, проведения и сокращения в миокарде. Последнее, видимо, является следствием нарушения кальциевой регуляции проницаемости клеточных мембран для ионов натрия и калия. Это приводит к деполяризации кардиомиоцитов, способствует образованию множественных эктопических очагов автоматии. На фоне частичной деполяризации возможен переход с натриевого на кальциевой электрогенез с существенным замедлением скорости проведения импульса и образованием micro re-entry, что и является причиной ФЖ (Гренадер А.К., 1987).

2. Предсердно-желудочковые аритмии, вызванные внутривенной инъекцией нитрата аконитина (Веденеева Э.И., 1955; Вихляев Ю.И., Каверина Н.В., 1958) в дозе 50 мкг/кг через 1 мин после внутривенной инъекции исследуемых соединений наркотизированным внутрибрюшинным введением эта-минала натрия белым нелинейным крысам обоего пола, массой 180-200 г.

Для этих аритмий характерно возникновение эктопических фокусов возбуждения. Генез аритмий, возникающих под влиянием аконитина, достаточно исследован (Юрявичкас И.А., Розеншграух Л.В., 1978, 1980; Валеев А.Е. и соавт., 1982). Установлено, что аконитин вмешивается в функциональную активность натриевых каналов кардиомиоцитов, нарушая инактивацию активированных каналов. В результате входящий ток будет превышать выходящий, уменьшается потенциал покоя, ускоряется медленная диастолическая деполяризация, замедляется скорость проведения импульса в сердечной мышце. Возникшие изменения потенциала действия и электрофизиологических параметров сердечной мышцы способствуют формированию гетеротоп-ных очагов автоматии, но могут также иметь место аритмии, возникшие по типу re-entry. На аконитиновой модели аритмий, исходя из особенностей ге-неза, будет обнаруживаться в большей мере активность тех соединений, про-тивоаритмическое действие которых связано с блокадой Na каналов и полагают, что их можно отнести к I классу антиаритмического действия.

3. Нарушения сердечного ритма, возникающие в результате гликозидной интоксикации строфантином К (Генденштейн Э.И., Лемкина С.М., 1984).

Экспериментальным животным, наркотизированным этаминалом натрия (40 мг/кг внутрибрюшинно) через 1 мин после введения исследуемых соединений в хвостовую вену вводили строфантин К в дозе 10 мг/кг.

В основе гликозидной аритмии лежит несколько механизмов. Три основных фактора определяют генез аритмий, возникающих при интоксикации

сердечным гликозндом: угнетение автоматии и уменьшение доминантной роли водителя ритма синоатриального узла, отрицательный дромотропный эффект и увеличение рефракторного периода атриовентрикулярного узла, и, конечно, повышение возбудимости миокарда желудочков вследствие электролитных нарушений. Логическим завершением этой триады является возникновение гетеротопных очагов автоматии. В результате ингибирования активного трансмембранного транспорта натрия и калия происходит повышение внутриклеточной концентрации ионов натрия и потеря калия, вследствие чего повышается возбудимость миокарда, активизируется режим работы натрий-кальциевой обменной системы и повышается содержание кальция. Внутриклеточное накопление ионов кальция приводит к повышению возбудимости миокарда, появлению осцилляторной активности эктопического очага, а в дальнейшем накопление ионов натрия в клетке способствует развитию локальных нарушений проводимости и появлению петли re-entry (Гацура В.В., Кудрин А.Н., 1983; Поротиков В.И. и соавт., 1989). Подавление этих нарушений является уязвимым параметром для действия фармакопрепара-тов, преимущество среди которых отдается блокаторам кальциевых и натриевых каналов (Егоров Д.Ф. и соавт., 1998), т. е. представителям IB и IV классов антиаритмиков.

4. Нарушения сердечного ритма, вызванные внутривенным введением адреналина гидрохлорида в виде 0,1% раствора в дозе 16 мг/кг крысам, массой 180-200 г, предварительно наркотизированных внутрибрюшинной инъекцией этаминала натрия в дозе 40 мг/кг. Испытуемые вещества вводили в хвостовую вену за 1 мин до инъекции аритмогенного фактора. На данной модели нарушений сердечного ритма у крыс противоаритмическую активность исследуемых веществ оценивали по их способности предупреждать появление преждевременных желудочковых комплексов или ослаблять их тяжесть, что выражалось в уменьшении ЧЭС. Запись ЭКГ проводили во II ст. отв. на протяжении всего эксперимента. Адреналиновая модель аритмий имеет определенное приближение к условиям клинической патологии. Известно, что нарушения сердечного ритма могут быть спровоцированы стрессовыми ситуациями и при этом в крови определяется повышенное содержание катехо-ламинов (Чазов Е.И., 1974, Малая Л.Г. и соавт., 1981, 1993, 1996). По мнению ряда авторов, нарушение функции САС, изменяя электролитный баланс, может играть важную роль в патогенезе некоторых форм нарушений сердечного ритма (Меерсон Ф.З., Скибицкий В.В., 1992). Под влиянием адреналина калий покидает клетку и выходит в межклеточное пространство, что может привести к повышению уровня калия в крови и падению потенциала покоя. Кроме того, катехоламины влияют на содержание в клетке ионов натрия и магния. Открытие кальциевых каналов и увеличенное вхождение ионов кальция в кардиомиоциты играет важную роль в развитии аритмий (Чечулин

Ю.С. 1975), активируя автоматию скрытых водителей ритма (Noble, 1984; Botting et al., 1985). Адреналиновая модель аритмии используется для отбора соединений со свойствами антиаритмиков II и IV классов.

5. В качестве методов, необходимых для изучения наиболее активных соединений - производных ариламидоаминов, использовали модель ранних окклюзионных и реперфузионных аритмий у кошек (Сторожук В.Г., 1985; Munning et al., 1986). Эти нарушения ритма моделировали на беспородных кошках обоих полов путем перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии с последующей (через 30 мин) ее реперфузией. Животных, наркотизированных раствором этаминал-натрия (40 мг/кг внут-рибрюшинно), интубировали и переводили на искусственное дыхание. Затем производили торакотомию в 4-ом межреберье слева, вскрывали перикард и накладывали лигатуру на коронарную артерию под ушком предсердия. Концы лигатуры пропускались через полиэтиленовую трубку с фиксатором. При подтягивании концов лигатуры возникала окклюзия коронарной артерии, при ослаблении - реперфузия. Изменения сердечной деятельности регистрировали с помощью ЭКГ на протяжении всей окклюзии и 10 мин. после репер-фузии. Главным достоинством этой модели является адекватность условиям клинической патологии (Сторожук Б. Г., 1985).

Согласно современным представлениям, механизм возникновения реперфузионных аритмий отличается от механизма возникновения нарушений ритма вследствие острой окклюзии и связан с перегрузкой кардиомиоцитов внутриклеточным кальцием и гибелью митохондрий. Существенную роль в этом механизме играют токсические эффекты свободных кислородных радикалов и перекисного окисления мембранных липидов и протеинов.

Реперфузионные аритмии, проявляющиеся чаще всего в виде желудочковой тахикардии и фибрилляции желудочков, обусловлены, главным образом, механизмами типа микро re-entry. Аритмии, развивающиеся по типу reentry, возникают при появлении участков с нарушением проведения волны возбуждения (Гренадер А.К. 1987., Beresewic Z.A., 1985, 1986; Lazzara R., Scherlag D.J., 1990). Отличительной особенностью этого механизма аритмий является отсутствие спонтанного возникновения новой волны возбуждения и перманентная циркуляция электрической активности вокруг областей, находящихся в рефрактерном состоянии (Гренадер А.К., 1987; Медвидинский А.К., Перцов A.M., 1989; Розенштраух J1.B. и соавт., 1990; Hopp H.W. et al., 1988).

Для регистрации сердечной деятельности и появления аритмий пользовались электрокардиографом "ЭК1Т-03М". Запись ЭКГ производилась во II стандартном отведении.

Результаты проведенных исследований обрабатывали статистическими вариационными методами (Беленький М.Л., 1963; Сернов Л.Н., Гацура В.В.,

2000). Для каждого вариационного ряда вычисляли среднюю арифметическую и стандартную ошибку. Достоверность различий оценивали с помощью параметрического критерия I Стьюдента и непараметрических критериев «-/"» и Уилкоксона. За достоверные принимали отличия при уровне вероятности р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Первым этапом настоящего исследования явилось изучение острой токсичности при внутрибрюшинном введении белым лабораторным мышам. Выявлено, что все изученные соединения относятся к малотоксичным веществам (табл. 2.).

Таблица1

Острая токсичность производных ариламидоаминов и лидокаина

гидрохлорида для мышей

№ п/п Название препарата, лабораторный шифр Количество животных LD50, мг/кг (М±ш) Доверительные границы при р=0,05

1. Лидокаина гидрохлорид 80 200,0 ±15

2. ЛХТ-13-91 110 280,0±14*

3. ЛХТ-35-91 80 3900,0 ±70*

4. ЛХТ-6-95 82 3300,0 ±110*

5. ЛХТ-52-91 90 1780,0 ±150*

6. ЛХТ-3-91 24 710,0±11*

7. ЛХТ-11-91 28 710,0 ± 11*

8. ЛХТ-7-97 50 830,0 ±20*

9. ЛХТ-10-91 30 390,0 ±16*

Примечания - * - различия по отношению к ЬО$о лидокаина достоверны при р<0,05

Таким образом, острая токсичность всех представленных производных ариламидоаминов существенно отличается от таковой у препарата сравнения - лидокаина гидрохлорида (рис. 1). Все изученные соединения обладают достоверно меньшей токсичностью. Острая токсичность соединений с лабораторными шифрами ЛХТ-35-91 и ЛХТ-6-95, резко отличалась от показателей 1Л)50 лидокаина и составила 3900,0±70,0 мг/кг и 3300,0±110,0 мг/кг, соответственно. Показатель токсичности соединения ЛХТ-13-91 незначительно отличался от показателя токсичности лидокаина и составил 280,0±14,0 мг/кг. Различия в токсичности других изученных нами соединений значимо отличались от таковой у препарата сравнения (были получены данные, находящиеся в диапазоне доз от 390,0 до 1780,0 мг/кг).

ПЛидокаин

■ ЛХТ-13-91

□ ЛХТ-10-91 ИЛХТ-3-91 МЛХТ-11-91

□ ЛХТ-7-97 О ЛХТ-52-91

■ ЛХТ-6-95

□ ЛХТ-35-91

Отношение 1.050 лидокаина к 1.050 исследуемых веществ

Рис. 1. Относительная токсичность производных ариламидоамииов н лидокаина гидрохлорида

По нашему мнению изменение токсичности в ряду производных ариламидоамииов связано с химической структурой аниона и, в частности, с его молекулярной массой и пространственной конфигурацией, что было также отмечено в работах Костина Я.В. (1988, 2000, 2002,2003), Напалковой С.М. (1994, 1999), Блинова Д.С. (2002). При увеличении молекулярной массы аниона и усложнении его структуры возрастает и показатель токсичности ЬО50. Кроме того, возможно, определенную роль играет и прочность ионных связи, показатель константы диссоциации молекулы.

Следующим этапом нашей работы явилось изучение противоаритмиче-ской активности соединений на моделях аритмий различного генеза.

В контрольной серии экспериментов, проведенных на 6 крысах, на 2,3±0,6 с после внутривенного введения хлористого кальция в виде 10% раствора в дозе 250 мг/кг в 83,3% наблюдений (5 животных) развивалась ФЖ, которая, перейдя в асистолию, приводила к гибели экспериментальных животных в 100% наблюдений. На модели фибрилляции желудочков у крыс, вызванной внутривенным введением токсических доз хлористого кальция, показано, что практически все производные ариламидоамииов в той или иной степени способны предупреждать развитие этого фатального аритмического осложнения.

Препараты сравнения по - разному повели себя в условиях кальциевой перегрузки. Так, лидокаина гидрохлорид оказался закономерно эффективным в дозах 12,5 и 10,0 мг/кг. Здесь он предотвращал ФЖ, снижал показатели экспериментальной летальности, удлинял продолжительность латентного без-

аритмического периода. В настоящее время известно, что введенный в терапевтической концентрации лидокаина гидрохлорид способен подавлять триг-герные ритмы, индуцированные ранними и задержанными постдеполяризациями (Кушаковский М.С., 1999). Именно подобные механизмы лежат в основе возникновения хлоридкальциевых аритмий.

У кватернидина противоаритмической активности не выявлено, но при его воздействии незначительно удлинялась продолжительность латентного безаритмического периода.

Таблица 3

Эффективные дозы и аитиаритмические индексы некоторых исследованных соединений на модели хлорндкальцневой фибрилляции

желудочков у крыс

№ п/п Исследуемое соединение ЭД50, мг/кг Антиаритмический индекс

1. Лидокаина гидрохлорид 6,6±1,2 30,3

2. ЛХТ-13-91 2,8±0,5* 87,4*

3. ЛХТ-11-91 35,5±1,0** 55,0*

4. ЛХТ-52-91 89,0±1,3** 34,4

5. ЛХТ-6-95 330,0±21,3** 32,4

6. ЛХТ-35-91 39,0±5,1** 41,4*

Примечания: * - различия с лидокаином достоверны при р<0,05 ** - различия с лидокаином достоверны при р<0,005

При сравнении показателей антиаритмических индексов (табл. 3) можно сделать вывод о том, что наибольшей профилактической и защитной активностью обладали соединения с лабораторными шифрами ЛХТ-13-91; ЛХТ-35-91 и ЛХТ-11-91. Этим же веществам была присуща и наибольшая широта терапевтического действия ввиду того, что они были способны предотвращать токсическую фибрилляцию желудочков после введения в дозах, значительно меньших, чем максимальная терапевтическая доза.

При изучении ЛХТ-13-91 обнаружено, что данное соединение высокоактивно по подавлению аритмогенеза в дозах от 2,8 - 28,0 мг/кг (рис. 2.). Эффективность здесь составила 100%. Вещество активно предупреждало наступление фибрилляции желудочков и последующую смертность экспериментальных животных. В целом на данной модели ЛХТ-13-91 можно охарактеризовать как самое эффективное противоаритмическое соединение, но имеющее достаточно высокую токсичность. По показателям токсичности и антиаритмической активности в отношении хлоридкальциевых аритмий ЛХТ-13-91 не уступало препарату сравнения лидокаину гидрохлориду.

о I

5 3

•5 К

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

□ Хлорид кальция □ 10% от 1.050 Ш 5% от 1.050

□ 2,5% от 1.050 □ 1% от1ЛЭ50 ■ 0,5% от 1.050

Рис. 2. Противофибрилляторная активность производных ариламидоа-минов и препаратов сравнения на модели хлоридкальциевых аритмий у

крыс.

Вещество с шифром ЛХТ-35-91 оказалось самым малотоксичным из исследованных соединений (табл. 2.), что позволило изучить это соединение в сравнительно высоких дозировках в четырех экспериментальных группах. Оказалось, что для данного производного ариламидоаминов в дозах, составляющих от 10 до 1% от 1ЛЭ50, свойственна сравнительно высокая противо-аритмическая эффективность (рис. 2). Продолжительность времени от инъекции хлористого кальция до развития нарушений ритма сердца под влиянием этого соединения была сравнима с таковой у препарата сравнения - лидокаи-на, но выживаемость животных была больше (рис. 3).

У соединения ЛХТ-11-91 обнаружена противофибрилляторная активность в дозах 3,55-71,0 мг/кг, что составило 10-0,5% от 1Л}50 (рис. 2). Латентный период до развития ФЖ соизмерим с таковым у лидокаина. Исследуемое вещество достаточно активно предотвращало наступление гибели экспериментальных животных (рис. 3). Даже при минимально вве-

денной дозе не было поголовной гибели животных (лишь в 83,3% наблюдений возникала летальная фибрилляция желудочков). Смерть крыс наступала от прогрессировавшей брадикардии с последующим переходом в асистолию.

Соединение с лабораторным шифром ЛХТ-3-91 само оказалось способным вызывать аритмии. Из дальнейших исследований это вещество было исключено.

Соединение ЛХТ-10-91 в дозе, составляющей 10% от иЭ5о - 39,0 мг/кг - не проявило противофибрилляторной активности (рис. 2). В 100% наблюдений соединение не остановило наступление грозного нарушения ритма - ФЖ, хотя время до наступления аритмии было больше, чем у ли-докаина. Не отмечалось и положительного влияния на летальность экспериментальных животных (рис. 3). В целом, ЛХТ-10-91 оказывало однотипное влияние на протекание хлоридкальциевых аритмий, как и препарат сравнения кватернидин.

Вещество с лабораторным шифром ЛХТ-6-95 обнаружило незначительную противофибрилляторную эффективность (рис. 2), которая проявлялась лишь после введения животным в максимальных дозах (10% и 5% от ЬО50), то есть, 330,0 мг/кг и 165,0 мг/кг. Выраженность эффекта была достаточной в обоих случаях и составляло 100% и 66,6%. Также значимой оказалась и активность вещества по предотвращению гибели животных: в первой серии опытов смертность отсутствовала, во второй составила 33,3% (рис. 3). При этом значительно удлинялся латентный безаритмический период (15±6 с).

Для соединений с шифрами ЛХТ-7-97 и ЛХТ-52-91 сравнительно высокая противоаритмическая эффективность проявлялась в дозах, составляющих 10% и 5% от 1Л}50(рис. 2). Кроме того, у веществ была выявлена способность снижать смертность экспериментальных животных (рис. 3).

□ Хлорид кальция □ 10% от LD50

□ 2,5% от LD50 □ 1% от LD50

■ 5% от LD50

■ 0,5% от LD50

Рис. 3. Предотвращение производными ариламидоаминов и препаратов сравнения летальности на модели хлоридкальциевых аритмий у

крыс.

Перечисленные соединения, очевидно, приводят к нормализации процессов возбуждения, проведения и сокращения в миокарде, что является следствием регуляции проницаемости клеточных мембран для ионов натрия и калия. На этом фоне невозможен переход с натриевого на кальциевый элек-трогенез и, следовательно, замедление скорости проведения импульса и образование очагов micro re-entry. Это приводит к стабилизации мембран кар-диомиоцитов, способствующее блокаде образования множественных эктопических очагов автоматии, являвшихся причиной ФЖ. Соединения, проявившие активность на данной модели, можно, по-видимому, отнести к веществам I и IV класса антиаритмического действия.

При изучении фармакотерапевтической активности производных ариламидоаминов в отношении нарушений ритма сердца, вызываемых воздействием на натриевые каналы использовалась аконитиновая модель аритмий. В контрольной группе животных предсердно-желудочковые нарушения ритма сердца развивались через 3l±l2 с после введения аритмогена с ЧЭС 282±32 в I минуту.

При воздействии препарата сравнения лидокаина гидрохлорида в дозах 10,0 и 5,0 мг/кг отмечалось как значительное снижение частоты возникнове-

ния аритмий - до 33% и 44%, соответственно, так и существенно подавлялась эктопическая импульсация (рис. 4).

Наибольшая антиаритмическая эффективность на аконитиновой модели была обнаружена у соединения с лабораторным шифром ЛХТ-13-91 (рис. 4). В максимальной терапевтической дозе это вещество оказалось активнее лидокаина: аритмия развивалась только у одного животного, время до наступления аритмии было почти в 2 раза больше, что составило 350 сек., при частоте эктопических сокращений 142 уд/мин. При снижении дозы вдвое, наблюдалась значительная потеря активности вещества. Этот эффект проявился как в увеличении количества животных с проявлением аритмией (50% в серии), так и в утяжелении характера нарушений ритма. После введения вещества время до наступления проявления аритмий уменьшилось до 250±64 сек., при частоте эктопических сокращений до 240±77 уд/мин. Также повело себя и соединение ЛХТ-11-91 (рис. 4.), но активность его было ниже, чем у ЛХТ-13-91 (увеличилось количество животных с аритмиями, время до наступления аритмий оставалось большим).

□ Нитрат аконитина П10% от 1.050

□ 2,5% от 1.050 □ 1 % от 1.050

■ 5% от 1.050 □ 0,5% от 1-050

Рис. 4. Частота возникновения аконитиновых аритмий на фоне введения испытуемых соединений и препарата сравнения - лидокаина гидрохлорида

Соединения с лабораторными шифрами ЛХТ-35-91 и ЛХТ-6-95 оказались неспособными к купированию предсердно-желудочковых аритмий у крыс (рис. 4), но вещество ЛХТ-6-95 почти в три раза увеличивало время до наступления аритмии (150±15 с) по сравнению с контролем. Мало эффективными оказались и соединения ЛХТ-7-97 и ЛХТ-10-91. Они лишь продлевали время наступления аритмий.

Следовательно, в проведенных экспериментах еще раз была продемонстрирована противоаритмическая активность лидокаина гидрохлорида как препарата из группы блокаторов Na-каналов. Причем противоаритмическая эффективность носила объективный дозозависимый характер: снижалась при уменьшении вводимой дозы. Аналогичными данными обладают и соединения с шифрами ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91. Предположительно, что для этих соединений противоаритмическое действие связано, в основном, с блокадой Na+ каналов (как у антиаритмиков I класса). В результате оказывается кар-диодепрессивное действие, уменьшается сократимость миокарда и снижается скорость распространения электрического возбуждения. Укорачивается эффективный рефрактерный период и длительность потенциала действия проводящей системы сердца. Возникшие изменения потенциала действия и электрофизиологических параметров сердечной мышцы способствуют угнетению гетеротопных очагов автоматии и участков re-entry.

Одним из немаловажных обстоятельств, существенно ограничивающих использование сердечных гликозидов в клинике, является наличие у них аритмических побочных эффектов, реализующихся посредством возникновения в миокарде очагов триггерной активности. Поэтому, попытка обнаружения противоаритмической активности в отношении гликозидных аритмий у исследуемых соединений давала надежду обнаружить вещества с ценными качествами и перспективными для дальнейшего изучения.

В контрольной серии опытов, выполненной на 9 белых крысах через 45±18 с после внутривенной гликозидной нагрузки строфантином К в дозе 150 мг/кг в 100% наблюдений развивалась сначала единичная, затем групповая, политопная желудочковая экстрасистолия, которая в подавляющем большинстве случаев трансформировалась в ЖТ со средней частотой эктопических сокращений 198±41 в минуту при частоте исходного ритма 378±27 в минуту. Продолжительность аритмий в группе составила 150±37 с. Гибель животных была поголовной.

Препарат сравнения лидокаина гидрохлорид, введенный в дозе 10,0 мг/кг, проявлял выраженную противоаритмическую активность. На его фоне значительно снижалась частота возникновения нарушений ритма сердца - до 22% (р<0,005) (рис. 5). Частота эктопических сокращений у животных с аритмией также интенсивно угнеталась. Более, чем в четыре раза по сравнению с исходными показателями возрастал латентный период

ЖЭ - до 293±54 (р<0,005). Продолжительность гликозидных аритмий составила 59±54 с (р<0,005). При снижении дозы препарата сравнения вдвое отмечалась незначительная потеря противоаритмической активности. Нарушения ритма сердца развивались в 33% случаев (р<0,005), а время их возникновения было увеличено по сравнению с контрольной группой до 207±28 с (р<0,005). Триггерная активность после введения лидокаина также угнеталась, о чем свидетельствует снижение частоты эктопических сокращений до 103±14 в минуту (р<0,005) при частоте исходного ритма 396±78 в минуту. Длительность же аритмического периода не отличалась от таковой в контроле - 103±18с.

Наибольшая антиаритмическая эффективность в отношении гликозидных аритмий обнаружена у соединения ЛХТ-6-95 (0,5% от ЬО50). Меньшую активность проявили вещества с лабораторными шифрами ЛХТ-35-91, ЛХТ-13-91, ЛХТ-7-97, их активность выявлялась при дозе, равной 1% от 1ЛЭ5о. Соединение ЛХТ-11-91 оказывало противоаритмический

□ Строфантин К □ 10% от 1ЛЭ50 В 5% от 1.050

□ 2,5% от 1.050 □ 1% от №50 □ 0,5% от 1.050

Рис. 5. Прогивоаритмическая активность производных ариламидоа-минов на модели строфантиновой желудочковой аритмии у крыс

Соединение с лабораторным шифром ЛХТ-10-91 оказалось неспособным к купированию гликозидных аритмий у крыс, а время начала аритмий соизмеримо с контролем и составило 56±21 сек.

Кроме того, у веществ была выявлена способность снижать смертность экспериментальных животных, кроме соединения с шифром ЛХТ-10-91, так как в максимальной исследованной дозе (39 мг/кг) не предотвратило гибели животных (рис. 6).

я о

□ Строфантин К □ 10% от 1050 ■ 5% от 1_Р50

□ 2,5% от Ю50 □ 1% отЮ50 ■ 0,5% от ЦЭ50

Рис. 6. Предотвращение производными ариламидоаминов и препарата сравнения летальности на модели строфантнновых аритмий у крыс

Под влиянием этих производных длительность аритмий, уровень эктопической активности, продолжительность латентного безаритмического периода сохраняли достоверные отличия с контролем. Возможно, что эти соединения препятствуют ингибированию активного трансмембранного транспорта натрия и калия, а, следовательно, не происходит повышение внутриклеточной концентрации ионов натрия, клетка не теряет калий. Ионы кальция не проникают внутрь клетки (проявляется активность, присущая для препаратов I и IV классов). Не угнетается автоматия и доминантная роль водителя ритма синоатриального узла, уменьшается рефрактерный период ат-риовентрикулярного узла, и, конечно, уменьшается возбудимость миокарда

желудочков вследствие электролитных нарушений. Это приводит к снижению возбудимости миокарда и угнетению развития локальных нарушений проводимости и появления петли возбуждения по типу re-entry.

Еще одним важным разделом фармакологического анализа механизма действия изучаемых соединений при интоксикационных аритмиях является катехоламиновая желудочковая тахиаритмия, провоцируемая внутривенным введением адреналина гидрохлорида (16,5 мг/кг) лабораторным крысам. Нарушения ритма сердца, развивающиеся в ответ на действие адреналина, имеют механизмом аномальную автоматик», micro re-entry, триг-герную активность.

Контрольная серия опытов выполнена на 9 наркотизированных эта-минал-натрием крысах. Внутривенная инъекция раствора адреналина гидрохлорида в дозе 16,5 мг/кг приводила к тому, что через 67±18 с у 5 животных (55,6%) развивалась желудочковая экстрасистолия с ЧЭС 198±46 в минуту при частоте исходного ритма 425±39 в минуту. В 22,2% наблюдений (2 крысы) отмечены блокады проведения волны возбуждения по миокарду. Экспериментальная летальность составила 77,8% (7 опытных животных).

Исследование препарата сравнения лидокаина гидрохлорида показало довольно скромную роль этого вещества в предотвращении возникновения адреналиновой ЖЭ.

Лидокаин в дозе 10,0 мг/кг не оказывал статистически значимых проти-воаритмических эффектов результатов в сравнении с контролем, а соединения ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91 хотя и оказались довольно активными при введении в дозах, составляющих 5% от LD50, были неэффективными уже при двукратном снижении дозы. Предположительно, что эти соединения препятствуют изменению электролитного баланса, возникающего при гиперкатехо-ламинемии (калий не покидает клетку, а значит ионов натрия, кальция и магния не проникают в клетку, следовательно, не изменяется потенциал покоя. Подавляется автоматия скрытых водителей ритма.

Остальные исследованные соединения не проявили противоаритмиче-ской активности в отношении гиперкатехоламинемиевых аритмий.

На основании проведенных исследований изучаемых соединений были выделены 2 наиболее активных соединения: ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91.

Следующим этапом работы было изучение противоаритмической активности выделенных производных в сравнении с эффективностью лидокаина и кватернидина на модели ранних окклюзионных и реперфузионных нарушений ритма у кошек. Эта экспериментальная модель наиболее полно отражает картину развития острого коронарного синдрома (Блинов Д.С., 2002).

В контрольной серии опытов на 18±3 минуте после лигирования коронарной артерии нарушения ритма сердца со средней частотой эктопиче-

ских сокращений 103±34 удара в минуту регистрировались у 85% животных (рис. 7), причем у 22% из них развивалась летальная ФЖ (рис. 8).

Однократное болюсное введение лидокаина за 1 минуту до коронаро-окклюзии в дозах 10,0 и 5,0 мг/кгне предупреждало развития ишемических и реперфузионных нарушений ритма сердца. Однако в высшей исследованной дозе - 10 мг/кг способствует уменьшению количества эктопического импуль-сообразования до 57±8 в 1 минуту. В обоих случаях регистрировался проти-вофибрилляторный эффект лидокаина после восстановления коронарного кровотока.

Кватернидин оказался надежным средством профилактики возникновения окклюзионных и реперфузионных аритмий вообще, и фибрилляции желудочков в частности, при введении как в дозе 4,0, так и 2,0 мг/кг (рис. 7, 8).

В последующих опытах было установлено, что наибольшую антиаритмическую и противофибрилляторную эффективность на модели окклюзионных аритмий показало соединение ЛХТ-13-91 (рис. 7). Оно сохраняло проти-вофибрилляторный эффект (рис. 8) и надежную противоаритмическую активность при введении в дозе (2,8 мг/кг). Так, инъецирование ЛХТ-13-91 в дозе 2,8 мг/кг (5% от ЬО50) полностью предотвращало развитие ишемических аритмий вообще и фибрилляций желудочков сердца в частности. Введение препарата вызывало заметное урежение частоты сердечных сокращений -163±10 в минуту против изначальной 196±19 в минуту в серии.

15

"22"

100

□ Контроль

■ Лидокаин

□ Кватернидин

□ ЛХТ-13-91

■ ЛХТ-11-91

Процент эффективности

Рис. 7. Оценка противоаритмической эффективности производных ариламидоаминов и препаратов сравнения на модели ранних окклюзионных аритмий у кошек

Проявление подобной активности и через 30 минут после введения соединения ЛХТ-13-91 косвенно может свидетельствовать о большей продолжительности противоаритмического действия изучаемого вещества по сравнению с лидокаином и позволяло проводить сравнительную характеристику данного производного ариламидоаминов и аминокислот по степени выраженности эффекта с изученным и внедренным в клинику высокоэффективным антиаритмическим препаратом кватернидином.

Полученные экспериментальные данные являются еще одним положительным аргументом в пользу предположения о стабильности молекулы ЛХТ-13-91, поступающего непосредственно в кровоток животного.

Профилактический антиаритмический эффект был обнаружен и при использовании соединения, имеющего лабораторный шифр ЛХТ-11-91 (рис. 7).

Вещество применялось в дозе 35,5 мг/кг (5% от ЪВ50). На протяжении всего наблюдения в эксперименте у животных сохранялся синусовый ритм (р<0,005). Достоверного снижения ЧСС после введения соединения не наблюдалось - 176±6 в минуту против 175±10 в минуту в исходном состоянии. В 33,3% случаев регистрировалась окклюзионная аритмия после введения ЛХТ-11-91. Эктопическая активность проявилась на 20-30 минутах после коронароокклюзии, на ЭКГ внеочередные комплексы возникали в среднем с частотой 65±23 в минуту. В проведенных экспериментах ни в одном случае ФЖ не регистрировалась (рис. 8).

□ Контроль

■ Л идо каин

□ Каатернидин

□ ЛХТ-13-91

■ ЛХТ-11-91

Процент эффективности

Рис. 8. Оценка противофибрилляторной активности производных ариламидоаминов и препаратов сравнения на модели ранних окклюзионных аритмий у кошек

Более злокачественными по своей природе являются реперфузионные нарушения ритма сердца. Испытуемое соединение ЛХТ-13-91, введенное в

дозе 2,8 мг/кг, приводило к возникновению через 9±1 с после реперфузии желудочковой экстрасистол ии со средней частотой эктопической активности 101±52 в минуту у трех животных (р<0,05) (рис. 9). ЖТ и ФЖ после инъецирования ЛХТ-13-91 не регистрировались (р<0,001) (рис. 10). Продолжительность нарушений ритма сердца составила в среднем 25±19 с.

.100.

100

80

60

40

20

50

А

□ Контроль ВЛидокаин

□ Кватернидин

□ ЛХТ-13-91 ■ ЛХТ-11-91

Процент эффективности

Рис. 9. Оценка противоаритмической активности производных ариламидоамннов и препаратов сравнения на модели реперфузионных аритмий

120 100 80 60 40 20 0

100

100

Процент эффективности

□ Контроль

□ Лидокаин

□ Кватернидин

□ ЛХТ-13-91 ■ ЛХТ-11-91

Рис. 10. Оценка противофибрилляторной активности производных дналкпламиноацстанплпда и препаратов сравнения на модели реперфузионных аритмий у кошек

Исследование вещества J1XT-11-91 при реперфузии осуществлялось в дозе 35,5 мг/кг. В этой серии опытов отсутствовал статистически достоверный противоаритмический эффект (рис. 9). Через 11±4 с у всех экспериментальных животных развилась ЖЭ с частотой эктопических сокращений 182±38 в минуту. Продолжительность аритмии составила 77±5 с. ЖЭ и эпизодическая ЖТ возникали в 16,6% случаев на 56 с наблюдения и продолжались 76 с, постепенно трансформируясь в ФЖ (рис. 10). Латентный период наступления нарушений ритма сердца не отличался от такового в контрольной группе.

Анализ частоты и характера эктопической активности указывал на более доброкачественный тип аритмий, развивающихся после введения ЛХТ-11-91.

Таким образом, проведенные исследования позволили установить, что различные модификационные изменения в молекуле производных арилами-доаминов приводят к появлению у веществ оригинальных фармакологических свойств в отношении экспериментальных аритмий различного генеза и выявить соединения ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91, обладающие выраженной про-тивоаритмической активностью, превышающей таковую у препаратов сравнения — лидокаина и кватернидина. "Указанные соединения, вероятно, можно отнести к антиаритмическим средствам IB и IV класса, поскольку они активны в отношении таких видов аритмий, которые купируются препаратами данных классов. У соединения ЛХТ-13-91 обнаруженная антиаритмическая активность в отношении реперфузионных аритмий, дает право предполагать наличие у этого вещества антиоксидантной активности.

Основным результатом проведенного исследования фармакологических свойств восьми соединений из класса производных ариламидоаминов явилось выделение веществ ЛХТ-13-91, ЛХТ-11-91, превосходящих по противоаритмической, противофибрилляторной активности и продолжительности действия препараты сравнения, относящиеся к I классу (лидокаина гидрохлорид) и III классу (кватернидин) по классификации антиаритмических препаратов Vaugham - Williams Е.А. (1984). Соединение ЛХТ-13-91, сочетающее свойства антиаритмиков нескольких классов, представляет интерес для дальнейшего изучения в качестве потенциального противоаритмического средства.

выводы

1. В ряду оригинальных производных ариламидоаминов выявлены 7 малотоксичных соединений (IV класс), обладающих противоаритмической активностью.

2. Все изученные производные ариламидоаминов, кроме ЛХТ-3-91, предупреждают развитие хлоридкальциевой фибрилляции желудочков у крыс. В условиях данной модели наиболее выраженную активность проявили соединения ЛХТ-13-91 в минимальной терапевтической дозе 2,8 мг/кг и ЛХТ-11-91 - 3,55 мг/кг.

3. На модели аконитиновой аритмии у крыс наибольшая антиаритмическая эффективность обнаружена у соединений ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91. Соединения с лабораторными шифрами ЛХТ-35-91 и ЛХТ-6-95 не купируют акони-тиновые предсердно-желудочковые аритмии.

4. В опытах со строфантиновыми аритмиями у крыс наиболее выраженный противоаритмический эффект выявлен у соединений ЛХТ-6-95 и ЛХТ-11-91.

5. Вещества ЛХТ-13-91 и ЛХТ-11-91 оказались эффективными в предотвращении как фибрилляции желудочков при передозировке хлорида кальция, при предсердно-желудочковых аконитиновых аритмиях, при желудочковых тахиаритмиях, вызванных гликозидной интоксикацией строфантином К, так и при катехоламиновых аритмиях, вызванных введением адреналина у крыс, способствуя более длительной противофибрилляторной защите, чем препарат сравнения лидокаина гидрохлорид.

6. Соединение ЛХТ-13-91 в минимальной терапевтической дозе 2,8 мг/кг наиболее активно из всех изученных веществ оказывает противоаритмиче-ское и противофибрилляторное действие на моделях ранних окклюзионных и реперфузионных аритмий у кошек, превосходя по силе и продолжительности противоаритмического действия лидокаин и кватернидин.

7. Аминокислотсодержащие производные ариламидоаминов ЛХТ-13-91 и ЛХТ 11-91 , одновременно обладающие свойствами I и IV классов антиаритмических препаратов, являются перспективными соединениями для дальнейшего изучения с целью создания оригинальных препаратов, угнетающих проявления сердечных аритмий.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О токсичности вновь синтезированных производных ариламидоами-нов и аминокислот // Тезисы докладов IX Российского национального конгресса "Человек и лекарство", Москва, 8-12 апреля 2002 г. - С. 574-575.(Соавт. Митрохин Н.М., Сернов Л.Н., Скачилова С .Я., Базанов Г.А.).

2. Острая токсичность и антиаритмическая активность производных ариламидоаминов и аминокислот // Сборник научных трудов Тверской областной клинической больницы. Тверь, 2002. - С. 91-92. (Соавт. Базанов Г.А.)

3. О токсичности вновь синтерзированных металлокомплексных соединений - производных ариламидоаминов и аминокислот и определение антиаритмической активности // Тезисы докладов X Российского национального конгресса "Человек и лекарство", Москва, 7-11 апреля 2003 г. - С. 577. (Соавт. Базанов Г.А., Макаров Д.А.).

4. О токсичности и антиаритмической активности вновь синтезированных производных ариламидоаминов и аминокислот // Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2003. - С. 274-276. (Соавт. Базанов Г.А.).

5. Антиаритмические средства, поиск новых соединений // Вопросы фармакологии и фармакотерапии. Сборник научных трудов, посвящ. 75-летию проф. Г.Н. Четверикова. Тверь, 2003. - С. 20-22. (Соавт. Базанов Г.А., Лебедева Е.Ю., Огурцова Ю.Ю).

6. О лекарственных веществах и соединениях, влияющих на сердечный ритм // Вопросы фармакологии и фармакотерапии. Сборник научных трудов, посвящ. 75-летию проф. Т.Н. Четверикова. Тверь, 2003. - С. 42-43. (Соавт. Базанов Г.А., Табакова Т.Д.).