Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Исследование иммуногенетических, иммунологических и гормональных особенностей у больных с различными вариантами течения системной красной волчанки

I Г С 0 ДВШЮГУССКИП ИЛУЧЦО НССЛЕДОНЛ'ГКЛЬСКИЛ ИНСТИТУТ

КАРДИОЛОГИИ

1 1 МАР N96

УДК [610.5-002.625.21-073

ЛАЗАРЕВ Владимир Иосифович

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИХ, ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ И ГОРМОНАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ У БОЛЬНЫХ С РАЗЛИЧНЫМИ ВАРИАНТАМИ ТЕЧЕНИЯ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКИ

14.00.30 — ревматология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой сп-чеиц кандидата медицинских наук

Минск, 1998

1'нботи выполнена в Минском ордена Трудоиого Красного Ушшшш государственном медицинском институте

Научные руководители ааслуксенцый деятель науки Республики

Беларусь, доктор медицинских наук, профессор Г.Л.Мнтвейков

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник, Ю.М.Досин

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Н.И. Артишевская

доктор медицинских наук, профессор В.Г. Колб

Оппонирующая организация: Гродненский государственный медицинский

институт

Защита состоится 26 марта 1996 года в 13 часов на заседании Сонета но защите диссертаций Д 03.08.01 Белорусского научно-исследовательского института кардиологии (220036, г.Минск, ул.Розы Люксембург 110).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белорусского научно-исследовательского института кардиологии.

о у

Автореферат раиослан^^февраля 1996 года.

Учений секретарь Совета по защите диссертаций, кандидат медицинских наук, ведущий научный си) рудник

Л.Г.Гелис

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. СКВ относится к группе диффузных болезней соединительной ткани (ДВСТ). Дальнейшее изучение этиопатогенеза данного заболевания представляет одну из наиболее важных задач современной ревматологии не только в научном, теоретическом, но и в практическом и социальном плане, поскольку СКВ поражает лиц молодого, трудоспособного возраста; заболевание быстро прогрессирует, рано проявляются серьезные осложнения, наблюдается быстрая инвалидизация и высокая смертность среди больных (В.А.Насонова, Я.А.Сигидин, 1985; Е.Л.Насонов, В.В.Сура, 1988; В.А.Насонова, М.Г.Астапенко, 1989).

В последнее время получены данные о существенной значимости наследственной предрасположенности в возникновении заболевания (В.Б.Шаба-лип, Л.Д.Серова, 1986). Особый интерес представляет изучение главного комплекса гистосовместимости, системы, контролирующей специфику тканевых антигенов организма (Е.А.Зотиков, 1982; Ю.М.Заредкая, 1983; Р.В.Петров, Р.И.Атауллахаяов, 1991). Ассоциативная связь НЬЛ системы с предрасположеностью к возникновению СКВ может рассматриваться в различных аспектах: непосредственное участие НЬА антигенов, в том числе и Вг-микроглобулина (Вг-МГ), являющегося частью молекулы I класса главного комплекса гистосовместимости, в реализации иммунопатологического и аутоиммунного процессов; осуществляемый НЬА системой генетический контроль над уровнем гормонов; возникающие нарушения гормональной регуляции иммунных реакций.

Важен не только качественный, но и количественный подход к изучению составных частей Н1А молекул (в частности &2-МГ), исследование динамики его содержания в составе биологических жидкостей больных СКВ (сыворотке крови, моче) и культуре лимфоцитов в зависимости от тяжести патологического процесса и органной патологии.

Существенным в изучении этиопатогенеза СКВ является исследование функционального состояния коры надпочечников (уровня кортизола, корти-костерова и альдостерона в сыворотке крови больных СКВ), т.к. эти гормоны оказывают разнообразное влияние на иммунные процессы, водно-солевой обмен, сердечную деятельность, выделительную функцию почек и т.д..

Данная диссертационная работа является составной частью темы исследований, выполняемых на базе ревматологического центра Республики Беларусь.

Целью данной работы является выявление ассоциативной связи НЬА антигенов I класса локусов А и В, их сочетаний в фенотипе с тяжестью патологического процесса, выраженностью иммунологических и гормональных

изменений у больных с различными вариантами течения СКВ; исследование Кг-микроглобулина ((5г-МГ) — компонента Н1А молекул I класса, позволяющего говорить о количественных изменениях со стороны Н1А системы, а также функционального состояния коры надпочечников при данном заболевании.

Для реализации поставленной цели определены следующие задачи:

1. Исследовать распределение антигенов НЬА системы I класса локу-сов А и В у больных СКВ с различными клиническими вариантами течения и выраженностью иммунологических нарушений.

2. Изучить изменение содержания йг-микроглобулина в сыворотке крови, моче и культуре лимфоцитов (до и после их митогенной (фитогемаг-глютинин) стимуляции) у больных СКВ.

3. Исследовать базальный уровень альдостерона, кортизола и корти-костерона в сыворотке крови обследуемых больных с различными вариантами течения СКВ и особенности динамики данных гормональных параметров при проведении нагрузочного теста с кортикотропином.

4. Выявить наличие ассоциативной связи между определенными НЬА антигенами I класса локусов А и В и их сочетаниями с концентрацией &г-МГ и уровнем кортизола в сыворотке крови больных СКВ.

Научная новизна. Впервые проведено изучение взаимосвязи распределения НЬА антигенов I класса локусов А и В с количественным содержанием Ьг-МГ—легкой цепи НЬА молекул I класса.

Установлена ассоциативная связь между наличием определенных НЬА антигенов и сочетаний в фенотипе больных СКВ и тяжестью патологического процесса, выраженностью иммунологических и гормональных нарушений.

Изучен уровень &2-МГ в сыворотке крови, выведение из организма с мочой, впервые получены данные о синтезе его лимфоцитами у больных СКВ и доноров. Установлены существенные различия в его уровне у доноров и у больных с разными степенями активности заболевания, поражением почек, дозой получаемых кортикостероидных препаратов.

Показана целесообразность использования определения содержания &2-МГ в сыворотке крови и моче как прогностического показателя течения СКВ и возникновения осложений со стороны почек, а также, как одного из диагностических критериев степени активности патологического процесса.

Кроме этого исследование и сопоставление уровня 8г-МГ в культуре лимфоцитов у больных СКВ дает возможность судить о количественных параметрах Н1А. системы, что в совокупности с Ш-А фенотипом представляет ценную информацию для врача-ревматолога.

Установлено наличие функциональных изменений коры надпочечников на ранних стадиях. СКВ до начала стероидной терапии.

Практическая ценность работы. Из результатов проведенных исследований следует, что наличие в фенотипе определенных антигенов и их сочетаний предрасполагает к развитию СКВ; существует ассоциативная связь определенных HLA антигенов с выраженностью иммунологических и гормональных нарушений у больных СКВ.

Предложено использовать комплексное определение фенотипа по HLA системе, уровня Йг-МГ (в сыворотке крови, моче и культуре клеток) и кор-тикостероидов в сыворотке крови для более точной и ранней диагностики, прогнозирования характера течения СКВ; рекомендовано выделять группу больных с риском развития патологии со стороны почек.

Данные исследования можно проводить на уровне областных больниц.

Положения, выносимые на защиту:

1. Имеется ассоциативная связь определенных HLA антигенов I класса локусов А и В и их сочетаний с СКВ в целом — В8, А1В8, А2В7. При сравнении в подгруппах более позднее начало заболевания ассоциировалось с наличием в фенотипе HLA антигена А2; хроническое течение — В18, А1АЗ; острое и подострое — А2АЗ; минимальная степень активности — A3, А9, АЗА9; III степень активности — Al, А1В8; почечная патология — В17. Кроме того у больных с более тяжелым течением и выраженными изменениями со стороны иммунологических показателей возрастала частота экспрессии антигенов AI, В8, В16, В17, В27, А2АЗ, при более благоприятном течении — А2, В12, В18, А1АЗ.

2. У пациентов с более тяжелыми клиническими вариантами течения СКВ повышен уровень Вг-МГ в сыворотке крови, увеличен синтез Вг-МГ лимфоцитами. Определение уровня ß^-Mr в сыворотке крови и моче больных СКВ позволяет выявить наличие поражения почек при отсутствии кли-нико-лабораторых признаков патологии со стороны почек.

3. При СКВ имеют место изменения функционального состояния коры надпочечников, возникающие на ранних стадиях болезни и до назначения кортикостероидной терапии (обследовано 11 больных, не получавших кор-тикостероидов).

4. Существует ассоциативная связь между носительством определенных HLA антигенов, уровнем кортизола и В2-МГ в сыворотке крови больных СКВ.

Полученные данные по распределению НЬА антигенов, уровню бг-МГ в различных биологических жидкостях (позволяет судить о количественных параметрах НЬА молекул I класса), минералокортикоидной и глюкокорти-коидной функциях коры надпочечников у больных СКВ, могут помочь в оптимизации диагностики, прогнозировании характера течения и терапии данного заболевания.

Работа выполнена на базе ревматологического отделения 9-ой клинической больницы г.Минска и научно-исследовательской лаборатории колла-генозов Минского медицинского института под руководством заслуженного деятеля науки Республики Беларусь, доктора медицинских наук, профессора Г.П. Матвейкова и старшего научного сотрудника, кандидата медицинских наук Ю.М.Досина.

Определение Н1А антигенов проводилось в НИИ гематологии и переливания крови, остальных параметров (Вг-МГ, гормонов коры надпочечников) самостоятельно в проблемной лаборатории коллагенозов ДНИЛ Минского медицинского института.

Апробация диссертации состоялась на совместном заседании сотрудников 2-ой кафедры внутренних болезней, проблемной лаборатории коллагенозов ЦНИЛ Минского медицинского института с участием врачей терапевтических отделений 9-й клинической больницы г.Минска, клинических ординаторов, врачей-интернов 29 декабря 1994 года.

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ: тезисы на IV Всесоюзном съезде ревматологов, статья в журнале "Терапевтический архив", тезисы на конференции, посвященной 125-летию образования Белорусского научного общества терапевтов, тезисы и фиксированный доклад на III съезде Белорусского научного общества иммунологов и аллергологов.

Диссертация изложена на 111 страницах и состоит из введения, общей характеристики работы, 5 глав, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 88 работ отечественных и 107 работ иностранных авторов. В работе 28 рисунков (15 листов) и 18 таблиц (17 листов).

ОБОСНОВАНИЕ ТЕМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В данной главе рассмотрены современные подходы к изучению этиопа-тогенеза СКВ. Отражены основные механизмы патологического процесса при данном заболевании. Подчеркнута необходимость и перспективность интег-ративного исследования на грани различных наук: иммуногенетики, иммунологии, биохимии и эндокринологии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клиническая характеристика больных СКВ и здоровых лиц

Под нашим наблюдением находилось 177 больных СКВ я 50 практически здоровых лиц. Все больные проходили стационарное лечение в ревматологическом отделении 9-ой клинической больницы города Минска. 145 из них состояли под наблюдением в консультативно-диспансерном кабинете ревматологического центра Республики Беларусь.

Из 177 обследованных больных 152 были женщины, что составило 85,9%, в то время как мужчин было значительно меньше: 25 человек — 14,1%. Соотношение мужчин и женщин среди больных СКВ составляет 1:7,7. Приведенные данные свидетельствуют о том, что СКВ болеют в основном женщины. Среди доноров 38 были женщины — 76% и 12 мужчины — 24%, которые соответствовали по возрасту больным СКВ.

Пик начала заболевания у женщин приходится на промежуток от 21 до 30 лет: 54 женщины из 152 больных СКВ. А у 64,5% женщин заболевание началось до 30 лет. Это подтверждает данные о том, что основную группу больных СКВ составляют женщины детородного возраста. У мужчин пики начала заболевания приходятся на промежуток от 21 до 30 лет и от 51 до 60 лет. Средняя продолжительность СКВ от начала заболевания составила 4,9 года. Преобладали больные с длительностью заболевания до 5 лет (67,8%).

Для постановки диагноза использовались международные критерии американской ревматологической ассоциации (АРА).

Как видно из рисунка 1, среди больных СКВ преобладали больные со второй степенью активности и подострым течением процесса. У больных в возрасте до 30 лет СКВ протекала с более высокой клинической и лабораторной активностью процесса: 1-я степень активности была у 9% больных, 2-я у 45,5%, 3-я у 45,5%, хроническое течение процесса наблюдалось в 27,4%, подострое — 63,6%, а острое в 9% случаев заболевания.

У больных с началом заболевания после 30 лет 1-я степень активности была в 33,4% случаев, 2-я в 50%, 3-я в 16,6%, хроническое течение процесса наблюдалось у 50% больных, подострое — 50%, а с острое не встречалось совсем.

В таблице 1 представлены данные по частоте встречаемости при СКВ отдельных клинических проявлений и лабораторных показателей.

Распределение больных СКВ по степеням активности

активности 21,4%

Распределение больных СКВ по характеру течения

процесса

Острое течение — , ~ 5,7% ■ ____ Подострое течение >. 56,4%

Хроническое м

течение

37,9%

Рис.1 Распределение больных СКВ по степеням активности и характеру

течения процесса.

Таблица 1

Частота клинических и лабораторных проявлений при СКВ.

Критерий Частота, Частота

абс. %

Эритема лица, бабочка 103 58,2

Синдром Рейяо 25 14,1

Аллопеция 31 17,5

Артрит 70 39,5

Артралгия 69 38,9

Кардит 41 23,2

Миокардиодистрофия 116 65,5

Пневмонит 24 13,6

Нефрит 109 61,6

Потеря массы тела (более 5 кг) 39 22

Лимфоаденопатия 47 26,6

Лихорадка 38 21,5

Ускоренное СОЭ (более 20 мм час) 128 72,3

Лейкопения (количество лейкоцитов меньше 4*10®/л) 44 24,9

Анемия (количество эритроцитов меньше 4*10,2/л) 32 18,1

Гипергаммаглобулинемия (более 20%) 83 46,9

Криоглобулинемия 56 31,6

Антитела к ДНК (реакция Фарра более 12,5 ед) 109 61,6

Уровень комплемента (меньше 40 ед СН50) 121 68,4

ЬЕ-клетки 89 50,3

В таблице 2 приведены данные некоторых иммунологических показателей у больных СКВ и контрольной группе (55 доноров), обследованных в лаборатории коллагенозов Минского медицинского института.

Таблица 2

Некоторые иммунологические показатели у больных СКВ и доноров (М + ш).

Показатели Больные СКВ Доноры

п = 177 п = 55

Т-лимфоциты, % 47,97 + 1,29 61,18± 3,02

В-лимфоциты, % 10,4 + 0,54 9,53 + 0,25

Иммуноглобулин А, г/л 2,48 + 0,16 1,56 + 0,04

Иммуноглобулин С, г/л 17,68 + 1,14 10,9 + 0,51

Иммуноглобулин М, г/л 1,37 + 0,11 1,14 + 0,03

Иммунные комплексы, ед 0,199 + 0,017 0,134+ 0,05

Антитела к ДНК (Реакция Фарра), ед 16,45 + 1,0 .6,5 ± 0,4

Комплемент СНбо, ед 32,25 + 2,71 64,97+ 1,51

У больных СКВ имеется достоверное снижение количества Т-лимфоци-тов (р<0,001) и уровня комплемента (р<0,001). Статистически достоверным было увеличение уровней ^А (р<0,01), (р<0,001), IgM (р<0,02), антител к ДНК (р<0,001) по сравнению с группой доноров.

Методы исследования

Антигены системы НЬА локусов А и В определялись в двухэтапном тесте комплементзависимой цитотоксичности панелью из 119 стандартных анти-НЬА-сывороток. Изучаемые показатели сравнивались между общей группой больных СКВ, подгруппами больных и контрольными данными. Для определения значимости различий частот Н1А антигенов в сравниваемых группах использовали критерий X2 (Л.А.Певницкий, 1988). Материал по обследованию НЬА антигенов представляется в виде 4-х польной таблицы:

Антиген + —

Больные а в

Здоровые с (1, п=а+в+с+с1.

а — число больных с наличием данного антигена;

в — число больных с отсуствием антигена;

с — число здоровых лиц с наличием данного антигена;

<1 — число здоровых лиц с отсутствием антигена.

Величину X2 вычисляется по формуле:

(/а*<1-Ь*с/-0,5*п)2*п

X2 - -. (1)

(а+Ь)*(с+ф*(а+с)*(Ъ+<1)

Величину Р, соответствующую X2, находили из таблицы при одной степени свободы — с^=1. Если ожидаемые значения к наблюдаемым частотам а, Ь, с, (1 меньше 5, Р вычисляли с использованием точного метода Фишера:

(а+Ь)!(с+с!)!(а+с).'(Ь+<3)!

Р _ -. (2)

а!Ыс!<Ип!

Показателем силы ассоциации является величина так называемого относительного риска — которая вычисляется по формуле:

а*ё

ЯП --. (3)

Ъ*с

Для тех случаев, когда в одной из клеток четырехпольной таблицы на-

ходится 0, применяется модифицированная формула:

(a+0.5)*(d+0.5)

RR --. (4)

(b+0.5)*(c-l-0.5)

Определение уровня гормонов в сыворотке крови и &2-микроглобулина в сыворотке крови, моче и культуре лимфоцитов после проведения РБТЛ проводилось радиоиммуяным методом. Данный метод обеспечивает наиболее высокую точность и воспроизводимость результатов исследования. Определение содержания альдостерона в сыворотке крови проводилось с использованием радиоиммуппых наборов фирмы International CIS (Франция), а содержание кортизола и Вг-микроглобулина — наборов опытного производства института биоорганической химии АН РБ.

Для более полной оценки функционального состояния коры надпочечников проводился нагрузочный тест с кортикотропином (КТ). Препарат вводился внутримышечно в дозе 40 Ед.

Кровь для исследований брали из вены в 8.30—9.50 натощак и через 2 и 4 часа после стимуляции. Сыворотку крови после центрифугирования хранили при -20°С.

Исследование важнейших иммунологических показателей (уровня ЦИК, иммуноглобулинов, общей активности комплемента, содержание Т- и В-лимфоцитов) проводилось по общеизвестным методикам (Г.Фримель, 1987).

Статистическая обработка полученных данных выполнена на ПЭВМ с помощью пакета специальных программ.

ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БОЛЬНЫХ СКВ

Нами изучены HLA фенотипы у 135 больных с достоверной СКВ (123 женщины и 12 мужчин) и 40 доноров (неродственных лиц, жителей города Минска). Системная красная волчанка в целом ассоциировалась с наличием в фенотипе антигенов В8 (р<0,01; RR=4,32), сочетаний А1В8 и А2В7 (р<0,01 и р<0,05), при этом увеличивалась и величина относительного риска (RR=5,9 и RR=5,2). У больных с началом заболевания после 40 лет имелось достоверное увеличение частоты экспрессии антигена А2 (р<0,05), по сравнению с больными, у которых заболевание началось в возрасте до 25 лет. При изучении частоты встречаемости HLA антигенов у больных с различным характером течения патологического процесса были выявлены следующие закономерности: острое и подострое течение ассоциировалось с наличием в фенотипе сочетания А2АЗ, хроническое — антигена В18 и сочетания А1АЗ. Среди больных с I степенью активности достоверно чаще по срав-

нению со II степевью активности определялись антигены A3 (р<0,025), А9 (р<0,01), сочетание АЗА9; в подгруппе больных с III степенью активности более часто, чем у больных со II степенью активности встречались антигены А1 (р<0,025) и комплекс А1В8 (р<0,05).

Органная патология ассоциировалась с присуствием в фенотипе больных СКВ различных антигенов и их сочетаний. При наличии патологии со стороны почек достоверно чаще встречался антиген В17 (р=0,01) и сочетание А2АЗ (р=0,048), у больных с полиартралгией — антиген В22 (р=0,03).

Кроме того у больных с более тяжелым течением и выраженными изменениями со стороны иммунологических показателей возрастала частота экспрессии антигенов Al, В8, В16, В17, В27, А2АЗ, при более благоприятном течении — А2, В12, В18, А1АЗ. Также возрастает величина относительного риска (RR) — показателя силы ассоциации, при наличии в фенотипе антигенов и их сочетаний, неблагоприятных в плане возникновения СКВ и более тяжелого течения данного заболевания.

У 32 больных (23,7%) из 135 в фенотипе имеется сочетание антигенов А1 и В8. По литературным данным люди, имеющие в фенотипе эти антигены, более предрасположены к развитию аутоиммунных заболеваний, в частности СКВ. Нами был проведен анализ течения СКВ у больных с наличием в фенотипе данных антигенов и без них. Необходимо подчеркнуть, что лишь у 3 больных из 35 с выявленным антигеном В8 в фенотипе не был определен антиген А1.

Таблица 3

Характеристика течения патологического процесса у больных СКВ с наличием в фенотипе антигенов А1 и В8 и без них.

Параметры Фенотип с наличием антигенов AI и В8, (в %) Фенотип без антигенов AI и В8, (в%)

I ст. акт. 21,9 20,4

II ст. акт. 43,7 65,0

III ст. акт. 34,4 14,6

Острое течение 16,6 0,9

Подострое течение 53,1 57,3

Хроническое течение 31,3 41,8

С поражением почек 75,0 53,4

Без поражения почек 25,0 46,6

Полученные данные представлены в таблице 3. Достоверно чаще у больных СКВ с наличием в фенотипе комплекса А1В8 имелось поражение почек (р=0,02) и заболевание протекало с III степенью активности (р=0,03).

Ьг-МИКРОГЛОБУЛИН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК И МОЧЕ БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ

В данном разделе исследовательской работы представлены результаты определения содержания (5г-МГ у больных СКВ. Уровень Кг-МГ был исследован у 87 больных СКВ и 38 доноров в сыворотке крови, у 17 больных и 10 доноров в культуре лимфоцитов до и после постановки РБТЛ, у 35 больных и 10 практически здоровых лиц в моче.

Полученные нами данные о содержании (^г-МГ в сыворотке крови и моче больных СКВ и доноров представлены в таблице 4. Выявлены достоверные различия между уровнем Кг-МГ в сыворотке крови (р<0,001) и моче (р<0,001) больных СКВ и доноров.

Таблица 4

Уровень &2-МГ в сыворотке крови к моче больных СКВ и доноров

Исследуемый показатель Больные СКВ п=87 Доноры п=38

М п=10 НС п=77 Общая группа М п=18 п=20 Общая группа

йг-МГ мг/л (сыворотка крови) 9,54 ±0,71" 13,18 ±0,92" 11,48 ±0,69* 3,92 ±0,39 3,93 ±0,31 3,91 ±0,3*

п=35 п=10

и2-МГ мг/л (моча) 0,66 ±0,061* 0,31 ±0,030*

Примечание: * - различия достоверны между группами;

- различия достоверны в подгруппах.

У больных СКВ с содержанием в сыворотке крови и2-МГ>10 мг/л имеется достоверное снижение уровней кортизола 158,44 ± 20,28 нмоль/л (р<0,001) и альдостерона 95,27 ± 14,21 рё/т\ (р<0,05) по сравнению с пациентами с концентрацией 1$2-МГ < 10 мг/л (298,22 + 31,98 нмоль/л и 144,31

± 20,11 рг/ш1).

У больных с минимальной степенью активности процесса содержание &2-МГ составило 7,59 ± 0,75 мг/л, что достоверно ниже (р<0,01 и р<0,001), чем у больных со II степенью активности (10,57+ 0,85 мг/л) и с III степенью активности (17,67 + 1,45 мг/л). Достоверными были и различия между уровнем В2-МГ у больных со II и III степенями активности (р<0,001). При остром и подостром течении процесса имелось достоверное увеличение содержания &2-МГ в сыворотке крови по сравнению с хроническим (р<0,001) I

Рис. 2 Уровень Р2-МГ в сыворотке крови больных СКВ с различными клиническими вариантами течения.

(рисунок 2).

В нашем исследовании у больных, у которых имелись клинические и лабораторные данные, свидетельствующие о поражении почек, уровень МГ в сыворотке крови был достоверно выше 15,07 — 1,46 мг/л (р < 0,001), чем у больных без поражения почек (8,17 ± 0,73 мг/л).

У больных с концентрацией &2-микроглобулина > 10мг/л (п=25) достоверным было увеличение частоты встречаемости антигенов А1 (р<0,05), В8 (р<0,025) и фенотипа, в котором кроме других антигенов, имелся комплекс А1В8 (р<0,05), по сравнению с больными с концентрацией Вг-микроглобули-на < 10 мг/л (п=26).

У больных СКВ (рис.3 и 4) в культуре лимфоцитов до инкубации концентрация &2-МГ была достоверно выше, чем в группе здоровых лиц (р<0,05 и р<0,02), после РБТЛ и культивирования лимфоцитов без стимуляции эта закономерность сохранялась (р<0,01 в обоих случаях).

Полученные данные свидетельствуют о том, что исследование и сопоставление уровней &2-МГ в различных субстратах у больных СКВ дает возможность, во-первых, судить о количественных параметрах НЬА системы, что в совокупности с НЬА фенотипом представляет ценную информацию; во-

Рис. 3 Динамика концентрации Р2"МГ в культуре лимфоцитов доноров и больных СКВ без добавления ФГА до и после инкубации в течение 72 часов.

Рис. 4 Динамика концентрации Р2-МГ в культуре лимфоцитов доноров и больных СКВ с добавлением ФГА до и после РБТЛ.

2001

180-

160-

140-

"с\ а. 120-

s

а 100-

?

о ч 80-

5 60-

40-

20-

0-

190,97+26,03

189,59136,59

122,51±22,11

162,36i27,53

149,02±29.36

95,83i18.38

58,99±11,61

д

Доноры

Больные I степень II степень (К степень Острое и Хроническ. СКВ активности активности активности лодострое течение

Рис. 5 Содержание альдостерона в сыворотке крови доноров и больных СКВ с различными степенями активности и характером течения заболевания.

вторых, будет способствовать раннему выявлению и определению характера почечной патологии; в третьих, поможет при определении степени активности патологического процесса.

ИССЛЕДОВАНИЕ МИНЕРАЛОКОРТИКОИДНОЙ И ГЛЮКОКОР-ТИКОИДНОЙ ФУНКЦИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ У БОЛЬНЫХ СКВ

Исследование альдостерона в сыворотке крови больных СКВ выявило у них (рис.5) значительное снижение урочня этого гормона по сравнению с донорами (р<0,05). Концентрация альдостерона у больных СКВ с III степенью активности была достоверно ниже чем со II (р<0,01) I (р<0,01). При хроническом течении патологического процесса содержание альдостерона было достоверно выше (р<0,02), чем при остром и подостром (рис.5).

У больных с выраженной почечной патологией уровень альдостерона составил 61,27 ± 16,61 Рё/т1, что было достоверно ниже (Р<0,001), чем у больных без почечной патологии (172,24 + 31,49 pg/ml.

Данные о базальном уровне альдостерона у больных СКВ в общей группе, ГК+ и ГК-, доноров и динамика содержания при проведении нагрузочного геста с КТ представлены на рисунке 6.

Рис. 6. Динамика содержания альдостерона в сыворотке крови доноров и больных СКВ при проведении нагрузочного теста с _кортикотропином._

1200 т

1000 --

800 --

I 600 --

400 --

200 --

1109,4167,35

473,20132,7 328,63133,7 д' 191,95119,1 -

аГ-'

156,09±20,6 "

545,82153,02 • ^ 490,7168,83

^"Доноры ^Больные СКВ -Ь - -Больные СКВ (ГК-) Больные СКВ (ГК+)

4£5,53±80,76

О 4А4,80±51,34 п

" 1СП 57^.1(1 С

4 часа

2 часа

Рис. 7. Динамика содержания кортизола в сыворотке крови больных СКВ и доноров при проведении нагрузочного теста с КГ.

Данные исследования исходного уровня кортизола и его динамика при проведении нагрузочного теста с КТ представлены на рис.7. Выявлено достоверное снижение концентрации данного гормона у больных СКВ по сравнению с донорами (р<0,001). Уровень кортизола у больных ГК- достоверно превышал (р<0,01) концентрацию в подгруппе, получавших кортикостеро-иды (ГК+). Достоверно ниже было содержание кортизола в этих двух подгруппах по сравнению с контролем (р<0,02).

Кроме этого установлены определенные ассоциации уровня кортизола в сыворотке крови больных СКВ с HLA антигенами I класса локусов А и В, их сочетаниями к фенотипами.

Было выделено две подгруппы больных: 1-я с концентрацией кортизола в сыворотке крови < 100 нмоль/л;

2-я с концентрацией кортизола в сыворотке крови > 100 нмоль/л.

Наличие у больных СКВ антигена А9 асоциировалось с более высоким уровнем кортизола (р<0,025). Комплекс А1В8 в фенотипе встречался чаще у больных в первой подгруппе (23,7%).

ВЫВОДЫ

1. Комплексное обследование больных СКВ, включающее опре-деление фенотипа по HLA системе, содержания Ь2-МГ в сыворотке крови, моче и куль-туре лимфоцитов, базального уровня глюко- и минералокортикостерои-дов, функционального состояния коры надпочечников позволяет прогнозировать течение заболевания и способствует раннему выявлению поражения почек.

2. Установлены ассоциации СКВ с антигенами HLA I класса локусов А и В (Al, В8), и их сочетаниями (А1В8, А2В7), что свидетельствует об участии антигенов HLA системы в реализации предрасположенности к данному заболеванию. Более позднее начало заболевания ассоциировалось с наличием в фенотипе HLA антигена А2; хроническое течение — В18, А1АЗ; острое и подострое — А2АЗ; минимальная степень активности — A3, А9, АЗА9; III степень активности — Al, А1В8; почечная патология — В17.

3. Установлено, что в сыворотке крови и моче у больных СКВ повышено содержание Вг-МГ, синтез которого лимфоцитами нарастает с увеличением активности патологического процесса. Повышение содержания В2-МГ в сыворотке крови больше 10 мг/л ассоциируется с наличием в фенотипе HLA антигенов А1 и В8.

4. Определение содержания Й2-МГ в сыворотке крови и моче у больных СКВ позволяет более точно судить о структурных нарушених функции нефрона до клинических проявлений поражения почек.

5. У больных СКВ имеется исходная недостаточность минералокорти-коидной и глюкокортикоидной функции коры надпочечников, которая проявляется снижением базальных уровней и АКТГ- стимулированной секреции альдостерона, кортикостерона и кортизола. Увеличение экспрессии антигена А9 ассоциируется с менее выраженным подавлением глюкокортикостероид-ной функции коры надпочечников (уровень кортизола в сыворотке крови больше 100 нмоль/л).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В ревматологических учреждениях республики рекомендуется определение HLA антигенов I класса локусов А и В и уровня Вг-МГ в сыворотке крови и продукции его лимфоцитами для выделения группы больных СКВ с неблагоприятным прогнозом в плане тяжести течения заболевания. Определение концентра-ции !5г-МГ в сыворотке крови и моче дает возможность судить о более точных структурпых нарушениях функции нефрона и способствует раннему выявлении осложнений со стороны почек.

2. Определение содержания йг-МГ в сыворотке крови и продукция его лимфоцитами может быть использована как дополни-тельный диагностический критерий при установлении степени активности патологического процесса.

3. При назначении кортикостероидной терапии необходимо определение базального уровня кортизола и альдостерона, резервных возможностей коры надпочечников, что в совокупности с другими показателями позволит индивидуально подходить к подбору дозы гормональных препаратов для каждого больного.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследование взаимодействия имунной системы и системы гипофиз-кора надпочечников у больных СКВ и ССД. //Тез. докл. IV Всес. съезда ревматологов Минск, — 1991. — с. 145 /соавт. И.П.Григорчук/.

2. Исследование гетерогенности гормонального реагирования при проведении нагрузочных проб у больных СКВ и ССД //Тез. докл. IV Всесоюз. съезда ревматологов Минск, — 1991. — с.150 /соавт. Ю.М.Досин, В.Г.Апанасович, Н.Г.Болотина, В.И.Курченкова, И.П.Григорчук, В.Е.Ягур/.

3. Анализ гормонального реагирования ответа при проведении нагрузочных проб у больных СКВ и ССД //Тер. Архив 1992, — 1991. — № 5 — с.75-77 /соавт. Ю.М.Досин, В.Г.Апанасович, Н.Г.Болотина, - В.И.Курченкова, И.П.Григорчук/.

4. Исследование адренокортикотропной функции гипофиза и секреции минералокортикоидов корой надпочечников у больных СКВ //Тез. докл. IV юбил. конфер. посвященной 125-летию образования Белорусского научн. об-ва терап. — Минск, 1992. — с.118 /соавт. И.П.Григорчук/.

5. Исследование интеграции гипофизкортикоидной и иммунной систем у больных СКВ при нагрузке кортикотропином //Тез. докл. IV юбил. конфер. посвященной 125-летию образования Белорусского научн. об-ва терап. — Минск, 1992. — с.118 /соавт. И.П.Григорчук/.

6. Исследование содержания 15г-микроглобулина в сыворотке крови, моче и культуре лимфоцитов при системной красной волчанке //Тез. докл. III съезда Белорусского научного общества иммунологов и аллергологов — Гродно, 1995. — с.60 /соавт. Ю.М.Досин, Е.С.Калия, Н.П.Митьковская/.

РЕЗЮМЕ

Лазарев Владимир Иосифович

Исследование иммуногенетических, иммунологических и гормональных особенностей у больных с различными вариантами течения системной красной волчанки

Системная красная волчанка, HLA антигены, 152-микроглобулин,

гормоны коры надпочечников.

Объект исследования 177 больных системной красной волчанкой, 50 практически здоровых лиц.

Цель работы: выявление ассоциативной связи HLA антигенов I класса локусов А и В, их сочетаний в фенотипе с тяжестью патологического процесса, выраженностью иммунологических и гормональных изменений у больных с различными вариантами течения системной красной волчанкой (СКВ); исследование Кг-МГ — компонента HLA молекул I класса, позволяющего говорить о количественных изменениях со стороны HLA системы, а также функционального состояния коры надпочечников при данном заболевании.

Методы работы: клинический, лабораторный, радиоиммунный, статистический.

Использованная аппаратура: лабораторное оборудование, радиоиммунные наборы, у-счетчик.

Научная новизна работы заключается в интегративном исследовании иммуногенетических, иммунологических и гормональных параметров при СКВ.

Впервые проведено изучение взаимосвязи распределения HLA антигенов I класса локусов А и В с количественным содержанием Вг-МГ—легкой цепи HLA молекул I класса, а также функциональным состоянием коры надпочечников (при проведении нагрузочной пробы с кортикотропином в различных подгруппах больных СКВ).

Изучен уровень В^-МТ в сыворотке крови, впервые получены данные о синтезе его лимфоцитами, выведение из организма с мочой у больных СКВ. Установлены существенные различия в его уровне у доноров и у больных с разными степенями активности заболевания, поражением почек, дозой получаемых кортикостероидных препаратов.

Практическая ценность работы: предложено использовать комплексное определение фенотипа по HLA системе, уровня Кг-МГ (в сыворотке крови, мочи и культуре клеток) и кортикостероидов в сыворотке крови для более точной и ранней диагностики, прогнозирования характера течения СКВ.

РЭЗЮМЭ

Лазарау Уладз1М1р 1ос1фав1ч

Даследаванне i.wуиагеиетычиых, шуналапчных i гарманальных асаблгвасцей у хворых з розным! варыянтаод цячэкня мстэмнай чырвонай

ваучанш

Остэмная чырвоная ваучанка, HLA антыгены, &2-м1краглабул1н,

гармоны кары наднырачшкау.

Аб'ект даследавання 177 хворых на системную чырвоную ваучанку, 50 практычна здаровых асоб.

Мэта работы: выяуленне асацыятыунай сувяз1 HLA антыгенау I класа локусау A i В, ix спалучэнняу у фенатьше з цяжкасцю паталапчнага прадэсу, выяуленню 1муналапчных i гарманальных змяпенняу у хворых з розным! варыянтам1 цячэння сктэмнай чырвонай ваучанк1 (СЧВ); даследа-ванне Ь2-МГ — кампанента HLA малекул I класа, якое дазваляе казаць аб колькасных зменах з боку HLA йстэмы, а таксама функцыянальнага стану кары наднырачшкау пры дадзеным захворванш.

Метады работы: клШчны, лабараторны, радые1мунны, статыстычны.

Выкарыстаная апаратура: лабараторнае абсталяванне, радыя1мунные наборы, 7-л1чыльшк.

Навуковая нав1зна работы заключаедца у штэграцыйным даследаванш 1мунагенетычных, 1муналаичных i гарманальных параметра^ пры СЧВ.

Упершыню праведзена узаемасувязь размеркавання HLA антыгенау I класа локусау A i В з колькасным утрыманнем Вг-МГ—лёгкага ланцугу HLA малекул I класа, а таксама функцыянальным станам кары наднырачнжау (пры правядзенш нагрузачнай пробы с кортыкатрашнам у розных падгрупах хворых на СЧВ).

Вывучаны узровень Вг-МГ у сыраватцы крыв1, упершыню атрымана даныя аб сштэзе яго л1мфацытам1, вывядзенне яго з аргашзма з мачой у хворых на СЧВ. Установлены ктотныя адрозненш у яго узроуш у донарау i у хворых з розным1 ступеням! актыунасщ захворвання, пашкоджаннем нырак, дозай атрымл1ваемых кортыкастэроздных прэпаратау.

Практычная варгасць работы: прапанавана выкарыстоуваць комплекснае вызначэнне фенатыпу па HLA с1стэме, узроуню Вг-МГ (у сыраватцы крыв1, мачы i культуры клетак) i кортыкастэроцщу у сыраватцы крыв! для больш дакладнай i равняй дыягностыю, прагназавання характару цячэння СЧВ.

SUMMAK"Y

Vladimir I. Lazarev

Research into immunogenetical, immunological, and hormonal peculiarities by the cases of systemic lupus erythematosus with different variations of

progress

Systemic lupus erythematosus, HLA antigenes, ß2-microglobulin,

adrenocortical hormone.

Scope of research: 177 cases of systemic lupus erythematosus, 50 apparently healthy people.

The aim of the reseach: to reveal associated interrelation between the HLA antigenes of class I locus A and B, their combinations in a phenotype with the severity of pathological process, apparancy of immunological and hormonal changes by the cases with different variations of progress of systemic lupus erythematosus; to study ßrmicroglobulin component of HLA molecules of class I resulting in quantitative changes in HLA of the system and in the functional state of adrenal cortices in the course of the disease.

Approches: clinical practice, laboratory analyses, radioimmunoassay, statistics.

Equipment used: labequipment, radioimmunoassay-sets, gamma counter.

The scientific novelty of the work lies in the integral research into immunogenetical, immunological and hormonal parameters in the course of systemic lupus erythematosus.

A correlation between distribution of HLA antigenes of class I locus A and B and quantitative contents of ß2-microglobulin light chain of HLA molecules class I, as well as functional condition of adrenal cortices is studied for the first time (when conducting loading test with corticotropin in different subgroups of systemic lupus erythematosus cases).

The level of ß2-micro globulin in serum is studied; the data on the synthesis of ß2-mlcroglobulin by lymphocytes, its discharge from the body with urine by the systemic lupus erythematosus patients are gained for the first time. Essential differences of its levels by donors and patients at different stages of disease, by kidney lisions and different doses of corticosteroid preparations taken by patients are evaluated.

Practical value of work: It is proposed to use complex identification of phenotype by HLA system and assessment of the level of [^-microglobulin (in serum, urine, and culture of cells) and corticosteroids in serum to make diagnostics earlier and more accurate, and to forecast progress of systemic lupus erythematosus.