Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование действия тестостерона, метандростенолона и экдистена на клетки тимуса и лимфоциты крови

РГб од

мянйсТё1^вЪ]Здравоохранения российской федерации

смоленский государственный медицинский институт

на правах рукописи

СЕМЕЙКИН Александр Владимирович

ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ ТЕСТОСТЕРОНА, МЕТАНДРОСТЕНОЛОНА И ЭКДИСТЕНА НА КЛЕТКИ ТИМУСА И ЛИМФОЦИТЫ КРОВИ

14.00.25—фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Смоленск—1993

Работа «шашена на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиология Российского государственного медицинского университета.

Научные руководители: академик РАМН, доктор медицинские наук, профессор Ц.Б.Сергеев,

доктор медицинских наук, дрофассор К. Л.Шимановский

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор П.И.Сцзое, доктор медицинских наук, профессор А.В.Смирнов

Ведущая организация - Ш1И фармакологии PAI.HL

Защита состоится ".....".....................1993 г.

е часов на заседании специализированного ученого совета

К.084.34.01 Смоленского государстЕешого медицинского института (г.Смоленск, ул. Крупской, 28).

С диссертацией мозшо ознакомиться е библиотеке Смоленского государственного медицинского института <214013, г.Смоленск, ул. Крупской, 28).

Автореферат разослан ...................1993 г.

Учений секретарь спешализированного ученого сохета, профессор

Н.к-.Фаращук

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы : Применение анаболических стероидных средств в клинической практике обусловлено их способностью стимулировать синтетические процессы в органах - мишенях . Однако, несмотря на несомненную терапевтическую эффективность этих стероидов, они вызывают нежелательные побочные реаадга .

Многими исследователями описаны иммунологические нарушения у дин , принимавши анаболические стероиды ( Сейфулла , 1989 , Sasson S. ,1986 , Kochakian , 1988 ). Известны факты , иммуносупрессивного действия анаболиков -андрогенов , (Pearsy Р., 1982) .

Ряд авторов указывает на участие андрогенов в половой дифференцировке иммунологической реактивности (Беляков , 1992 ; Assam al. ; 1S90 , Grossman , 1984 ; Stimson ,1987 ) . Вместе с тем механизм действия авдроген - анаболических стероидов (тестостерона , метандростенолона ) на иммунную систему изучен мало , что подчеркивает необходимость исследований в данной области .

Ключевым органом во взаимодействии эндокринной и иммунной систем является тимус ( Deschaux R. , 1987 } .

Влияние андроген - анаболических средств на эндокринную функцию вилочковой железы практически не исследовано .

Одним из новых анаболиков является препарат экдистен иэ группы фиюэкдястероидог , не имевший андрогенной активности (рис.1).

Сопоставление действия метандростенолона .тестостерона и -экдистена на тимус и лимфоциты периферической крови позволит выявить механизмы побочного действия этих соединений .

На основании изложенного выше были определены цель и задачи проведенного нами исследования .

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ .

Цель работы : Сравнительный анализ действия анаболических

стероидных средств на клетки тимуса и лимфоциты периферической крови .

Pxod

ОН

Задачи исследования :

1 . Исследовать зависимость величины тимолитического , анаболического и андрогенногс эффектов от дозы тестостерона , метандростенолона и зкдистена .

2 . Изучить влияние тестостерона , метандростенолона и экцистена на уровень сывороточного тимического фактора у крыс и величину тимзгиноиодобной активности среды инкубации культуры стромальных клеток тимуса .

3 . Оценить действие исследуемых препаратов на жизнеспособность и пролиферативную активность тимоцитов и лимфоцитов периферической крови .

4 . Установить характер связывания тестостерона , метанд-ростенолона и экдистена с тимусом и лимфоцитами крови .

Научная новизна работы.

Установлено , что анаболические стероидные средства югут влиять на эндокринную функцию вилочковой железы -тестостерон и кетандростенолон в высоких дозах уменьшают содержание сывороточного тимического ({актора ( СТФ )-у экспериментальных животных .

Показано , что длительное введение высоких доз андроген -анаболических стероидов мышам и крысам вызывает развитие иммунодефицита ; экдистен не снижает эндокринную функцию тимуса и не вызывает угнетения иммунной системы .

Установлено , что экдистен не взаимодействует с рецепторами зндрогенов вилочковой железы .

Впервые выявлен факт наличия участков специфического связывания андроген - анаболических стероидов с лимфоцитами , но не с тимоцитами крыс .

Предложена новая -,доступная исследователям модель для изучения эндокринной функции тимуса - первичная монослойная культура сторомальных клеток тимуса крысы .

Практическая ценность .

Полученные данные являются экспериментальным обоснованием необходимости оценки состояния иммунной системы у лиц , принимающих андроген - анаболические стероиды . Результаты исследо-

вания указывает на возможность развития иммунодефицита при применении этих препаратов в высоких дозах. В работе обращается внимание на возможное использование анаболических стероидов в качестве иммуношдулягоров и как одного из компонентов комплексной иммунодепрессивной терапии .

Показано , что новый стероидный препарат растительного происхождения экдистен является более предпочтительным для клинического использования по сравнению с андроген - анаболическими средствами , так как не вызывает иммунодефицита .

Проведенная работа свидетельствует о целесообразности включения в схемы скрининга стероидных соединенеий определения уровня сывороточного тимического фактора у животных и секреторной активности культуры клеток тимуса , что позволит найти новые вещества с иммуноыодуляторными свойствами . Указанный подход до последнего времени не использовался для оценки новых биологически активных веществ . Результаты настоящего исследования обосновывают его целесообразность .

Рекомендации для внедрения :

Рекомендуется изучение эндокринной функции тимуса подопытных животных в системе предклинического изучения новых потенциальных анаболических лекарственных средств , что может быть использовано лабораториями лекарственной токсикологии . Клиническая проверка закономерностей , установленных в экспериментах на лабораторных животных , может представить интерес для врачей - эндокринологов .

Апробация работы .

Основные результаты работы доложены и обсуждены на 1 Всесоюзной конференции " Проблемы иммунофармакологии " (Тбилиси, 1990 ) , а также на научных конференциях кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии МКС РГМУ .

Публикации . Ш материалам диссертации опубликовано 5 пе-

чатных работ.

Объем и структура диссертации .

Диссертация изложена на текста и состоит из введения

104 страницах машинописного , обзора литературы , описания

материалов и методов исследования , результатов исследования и их обсуждения , выводов и библиографического указателя , включающего 162 источника . Иллюстративный материал представлен 9 таблицами и 15 рисунками .

Материалы и методы исследования .

В работе использованы белые беспородные крысы-самцы массой 240 - 300 г (300 животных ) . , а таккже 3-4 недельные крысята , мыши - самцы С 57 BL/6 массой 14-16 г(200 шт). животные содержались на стандартной диете вивария .

Оперативные вмешательства ( кастрация , тимэктомия ) проводились под эфирным наркозом . Вещества вводили внутрибршинно В качестве растворителей использовали дистиллированную воду, диметилсулвфаксид ( 100 7. ) и этанол ( 10 X. ) Забой животных осуществляли под эфирным наркозом декапитацией ( крысы ) , либо мануальной дислокацией шейных позвонков ( мышей ) . До начала эксперимента получаемые образцы тканей хранили при- 25 С

Андрогенную и анаболическую активность тестостерона , ме-тандростенолона и зкдкстена оценивали по изменению массы предстательной железы и поперечнополосатых мышц неполовозрелых крыс . Указанные параметры определяли у крыс , получавших внутрибршинные инъекции растворов стероидов в течение 10 суток в дозах 5 , 10 и 20 мг/кг.

Для выявления действия тестостерона , метандростенолона и экдистена на эндокринную функцию тимуса была измерена величина титра сывороточного тимячеекого фактора у крыс по методу Bach 1975 при введении препаратов по указанной схеме и однократно Непосредственное влияние тестостерона , метандростенолона и экдистена на эндокринную функцию тимуса изучено в экспериментах с культурой стромальных клеток вилочковой делезы путем определения величины тимозиноподобной активности среды ,в которой инкубировали клеточные культуры в присутствии препаратов. Культуру стромальных клеток тимуса получали от молодых крыс массой 50-70 г.

Действие анаболических стероидных средств на пролифера-тивную активность тимоцитов и лимфоцитов крови оценивали по вкдючению^-тимидина в ДНК этих клеток . Жизнеспособность и синтетическая активность лимфоцитов определялась по включению в них Н уридина и витального красителя грипанового синего в

- б -

присутствии изучаемых препаратов . Оценивалась также по методу ('Трцмельгё^рйдичина реакции бласткой трансформации тимоцитов мышей , получавших инъекции тестостерона , метандростенолона и экдистенз .

Для изучения молекулярных механизмов действия анаболических стероидных средств изучали связывание тестостерона , метандростенолона и экдистена лимфоцитами и цитоеодем тимуса кастрированных крыс - самцов радиолигандным методом .

Полученные данные подвергались статистической обработке с при помощи стандартных программ математического.обеспечения с использованием критерия 1 Стыодента .

Собственные результаты .

1 . Влияние тестостерона , метандростенолона и экдисгена на массу органов крыс .

Установлено , что однократное внутрибришшное введение исследуемых стероидов крысам в дозе 5 , 10 , 20 мг / кг не вызывало достоверных отличий массы мышц , простаты и тимуса по сравнению с контролем С табд.1).

Введение тестостерона и метандростенолона в доге 5 ыт /кг в течение 10 суток повышало массу мышц и простаты соответственно на 15 и 40 X . Доза 5 мг / кг была эффективной по анаболическому действию для прооизводных андрогенов , но не экдистена . Экдистен достоверно увеличивал массу поперечнополосатых мышц только при дозе Ю мг / кг . Массу предстательной железы препарат не изменял лри всех изученных условиях введения , что указывает на-отсутствие у авдистена андрогенной активности .

Увеличение предстательной железы наблюдалось при введении тестостерона и метандростенолона в дозах 5 , 10, 20 мг/кг в/б Препараты , увеличивающие массу предстательной железы и в; , обладали выраженным тиммитическнм действием .

Тестостерон ( 10 мг/кг в/б ) уменьшал массу вилочковой железы крыс на 30 % при 10 - суточном введении . Метандросте-нолон в той же дозе тимолитического аффекта не вызывал . Достоверное уменьшение вилочковой железы на 2С- % наблодалось только при 10-дневном метандростенолона в лозе 20 мг/кг . Однократное и 10 - дневное введение экдистена не уменьшали массу тимуса у крыс и мышей во всех исследованных дозах ( Б ,Ю,

Таблиш £ Влияние тестостерона, метандростенолона, эвдистена на массу тимуса, простаты и поперечнополосатой мускулатуры крыс при 10 дневном введении.

Препараты, дозы :.1асса тела,г Масса тимуса, глг Масса предстательной железы, мг Масса } мг Масса

Контроль' 154,6+6,2 431,3+54,8 60,5±7,4 71,0±6,5 72,4+10,4

Тестостерон 5 :.;г/кг 10 ::г/кг 142,2 +10,3 153,0+4,7 389,8+42,7 244,7К±30,5 190,2*±23,0 150*1.10,2 Ю8,4Х±5,0 76,^,7 115,2^,7 88,1*+3,Э

Мзтаадостенодон 5 10 кг/кг. \:г/кг 176,2+11 141,7±6,3 140,4±15,2 493,4*49,4 ЗБ6,5*±25,? 2Б1,В*±30,4 9Э,4±13,0 Н6,8*±Б,9 Ш1в±8,3 82,5**1,9 90,6*^2,5 93,4*±4,7 9Э,3Х±5,0 ^ 103,2*4^.8 • Э£Ё±7,2

Экдистен . I 1.:г/кг 5 гг/вг 10 г.г/кг ■ 154,3±в,5 156,5+13,4 152,4±7,3 • 388,Ь±24,7 348,3±41,7 392,6+41,4 85,0±12,1 89,1±14,0 7а,3±9,2 64,3±2,5 63,0±4,7 97,5*±3,6 63,3±6,0 73,0+3,8 Ю9,1*+с.,7

Лр^'-ечаше; * - достоверное отлична от контроля при уровне значимости Р ^ 0,05 - П =10 число хивотиих в Группах

- 820 , 50 мг/кг ) .

2. Влияние анаболических' стероидов на прашферативную активность и жизнеспособность клеток тимуса .

Результаты исследования представлены в таблице N 2 .

Однократное введение анаболиков , а также их растворителя диметилсульфоксида мышам С 5 и 50 мг/кг , 40 мкл растворителя в/б } не вызывало достоверных отличий от контроля ни по массе тимуса , ни по количеству тимоцитов . 10 - дневное введение стероидов С 5 мг/кг в/б) также не оказывало тимолитического действия .

Масса тимусов животных , получавших тестостерон и метанд-ростенолон 10 суток в количестве 50 мг/кг , уменьшалась на 28 и 30 % . Экдистен в тех же условиях такого эффекта не вызывал .

Подсчет количества тимоцитов .проводившийся после 10-дневного введения препаратов из расчета 50 мг/кг , показал , что количество клеток в тимусе уменьшилось на 30 % , т.е. снижение содержания клеток было пропорционально изменению массы органа .

Для оценки действия анаболических стероидов на пролифера-тивную активность клеток тимуса определялось содержание ДНК в тимусах мьшей и включение в них3Я - тимидина . Результаты представлены в таблице N 3 ; 10- дневное введение тестостерона и метандростенолона ( 50 мг/кг ) уменьшало количества ДНК в тимусах соответственно на 27 и 30 7, .

Было выявлено , что однократная инъекция препаратов в •высокой дозе (50 мг/кг ) и 10-дневное введение малых количеств ( 5 мг/кг ) не изменяли включения3!! - тимидина в ТХУ - осаждаемый преципитат ткани вилочковой железы . При тимолитическом действии веществ имело место уменьшение включения метки , пропорциональное снижению количества клеток и содержания ДНК .

Для выявления прямых эффектов анаболических стероидных средств были проведены эксперименты т 'у^го ( рис . 2 ). Тестостерон и штандростенолон в концентрации 10 М угнетали включение Н- тимидина тимоциташ на 30 и 32 % соответственно . 10 *и 10'ы этих препаратов не угнетали пролиферацию тимоцитов . Экдистен в концентрациях 10*, 10е, 10 М включение тиимидина не изменял.

Так как известно , что гдюкокортикоиды обладают цито-токсическим действием на лимфоциты тимуса , то в качестве спе-

Таблица 2. ¿лкяже 10-дневного введения тестостерона, метандростенолона и ёядистена на массу тимуса и количество

тям01щт0е.

Груплы ЖИВОТНЫХ, УСЛОЕИЯ Есздения препаратов

касса тимуса : Число тимопитов, мг : 10е шт.

Контроль

45.9±6,0 ' 0,15+0,02 -1-

10 сут. ЕЕедение в дозе кг/кг

Тестостерон

27.7+2.5*

0.07+0.03;

3£

¡■¿етавдростенслон

20.6+4.7х

0.06+0.03х

Ьвдистен

52.3+4.0

0.14+0.03

10 сут. ЕЕедение е дозе 5 ыг/кг

Тестостерон

47.1+3.2

Метандростенолон

40.1+1.7

Примечания: ж - достовернкв отличия от контроля при уровне значимости Р^О.ОЬ п = 10 - число животных е группах

Таблица 3- влияние ГО-днезного Еведекия тестостерона, метандростенолона и эюЕсгена на содержание д1Ш и Еюшенпе 3Я-тиыидияа е тшуск минеи.

Груплн кмоткюс, услогия ЕЕедешя препаратов

Количество аНК е тшосигах

¿лшязние 3Н-тжлдаша е тимус „

Ю3 дш

_Щ1К_

лонтродь

1.9+0.20

¿/,1+0.6

-С с:/т, введение в дозе 50 ;,!г/кг

¿естос-героя

[,2е+-0.10

Л.^С+О.З*

..йТ£.ндростенаюн

0. ¿4+а. 16$

1.

-кзистен

¿.о+О.

З.Ь'+0.4

10 сут. ЕЕедедге е дозе о мг/кг

1есгостерон

2.1+0.23

о* ь+и.о

^етандростенояон

1.71+0.2ь

4.^+0.4

.1р;-кзчания: * - достоверные оглкчля от контроля при урозне значимости Р О.ОЬ п = 10 - число ;л1еотекс в группах

1

I

1

т

I

Г

7Г

т

I

2

г

2

Рис. 2. влияние тастосто'роиа, метандростзналона, эвдястена и дснсачетазона на включение 3Н тишдина г ташггатн.

л-

До оси абстасс: 1-ЯГ7Ы, 2-10"°;,;, 3-10'

Ш

- тзстосгарои,

- экдмтен,

-контроль

- :.к,!гандростенолон,

- дексаметазон

Ло оси ординат: происнт еклвдоняя

Зц

тпкядска

иржочанио:

Х- -статистически достоверные отличая от контроля.

я-

I

*

т

I

т

Т

тс к

*

к!

Рис.З. ^шшие тестостерона, .'.утаи-хос'/оиолоие, задетоня и доксаыетааона на блгетгг/у: чра.ю :о)л.;;>тг ..шс-'оиитос. Но оси ординат - индекс В ПрОГ -НТ£К С" ион'сролк.

Усдошио обозначения и до: ы лг, гот-л'ог л-з у.в, чуо я на рис.-;.

пифического ингибирушцаго реагента исследовали дексаметазон . Он снижал включение - тимвдина тимоцитами на 30 7. в концентрации 10 и 10 М . _£

Эффективность препарата в концентрации 10 М указывает на большую специфичность его действия по сравнению с тестостероном и метандростенолоном .

Для оценки действия изучаемых препаратов на регуляцию пролиферативной активности лимфоидных клеток тимуса была использована реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБГЛ).

Результаты представлены на рис. 3 . Наиболее выраженным угнетающим действием in vitro обладает дексаметазон , снижающий индекс стимуляции на 60 X . Экдистен не влиял на показатели РЕТЛ во всех изученных концентрациях ( 10 - 10 М ) . Тестостерон и метандростенолон достоверно уменьшали индекс стимуляции в концентрации 10'и 10 М на 20 и 50 X соответственно.

Введение тестостерона и метандростенолона мышам в дозах 50 мг/ кг в течение 10 суток вызывало уменьшение бластной трансформации их гишцитов ( табл 4 ) .

Тестостерон , метандростенолон и экдистен в концентрациях 10-10-10 М не снижали жизнеспособность тимоцитов in vitro , что свидетельствует об отсутствии у них прямого цитотокси-ческого действия.

3 . Влияние стероидов на секреторную активность вилочко-вой железы .

Крысам вводили препараты согласно схеме , описанной в разделе " Материалы и методы " . Однократное введение тестостерона , метандростенолона и экдистена во всех исследуемых дозах не вызывало достоверных изменений в содержании сывороточного тимического фактора ( СТО ).

Величины титра СТО у животных , получавших внутрибршинно тестостерон , метандростенолон и экдистен в течение Ю суток , представлены в табл5 .

Экдистен не снижал содержание СТФ . Тестостерон и метандростенолон в дозах , аффективных по анаболическому действию С 5 мг/ кг ) .также не изменяли этот показатель . Тестостерон , вводимый животным из расчета 10 мг/кг , уменьшал массу тимуса при этом наблюдалось падение титра СТФ .

При введении метандростенолона в дозе 10 мг/ кг масса ви-

Таблига1! . Гдияние ДО-дневного введения стероидных препаратов на бластную трансформацию лимфоштов тимуса.

Доза Индекс стимуляции {% ,от контроля)_

Тестостерон Метандростенолон Зкдистен

5 мг/кг 91+11 ье+ГО 101+3

50 кг/кг 1С+4* 24+5* 103±12*

Примечание: * достоверные отличия от контроля при уровне значимости Р й 0,05 п = 10 - число стеотикх £ группах

Таблица5 Влияние 10-дневного рредения тестостерона, метандро-

стеколона и эклистема на массу тимуса и содержание^УР у крыс.

Препарат, доза Масса 1фыс,г К'лсса тимуса, мг Содержание С Т¥

Цг титра

Тестостерон

5 мг/кг 147.444.7 444.0+27,0 3,00+0,30

10 мг/кг 143,8+5,9 331,1+31,4* 0,71+0,28*

Кетандростенолон

5 мг/кг 156,5+8,8 446,5+38,1 2,85+0,24

10 мг/кг 150,6+6,6 445,3+62,3 1,23+0,42*

20 мг/кг 145,1+4,8 364,8+22,0* 1,33+0,33*

Экдистен

5 мг/кг 141,7+6,3 490,3+31,5 3,14+0,26

10 мг/кг 145,3+7,7 457,3+27,2 3,18+0,25

контроль 137,7+5,5 466,1+22,7 3,00+0,37

Примечания: В табяиие приведены средние значения (М+т), полученные в 7 независимы*: экспериментах. * - статистически достоверное отличие от контролялри

лочковой железы достоверно не изменялась , однако титр СТО снижался . Достоверный тимолиткческий эффект стероида наступал при введении 20 мг/кг препарата . фи атом содержание СТО уменьшалось в большей степени . 10 - дневное применение ме-тандростенолона в дозе 10 мг/ кг приводило к достоверному угнетению эндокринной функции тимуса без уменьшения массы органа Для выявления прямого действия препаратов на секреторные клетки тимуса были проведены эксперименты с использованием культуры ткани вилочковой железы . В результате 14 - дневной инкубации фрагментов на поверхности чашки Петри был получен монослой клеток нелимфоидной природы , по форме сходных с эпителиальными . Наличие гранул в их цитоплазме говорит о возможной секреторной функции .

Для оценки секреторной активности культур в тесте восстановления чувствительности лимфоцитов селезенки тимэктомирован-ных шшей к азатиоприну использовались пробы среды инкубации на разных временных интервалах . Наблюдался постепенный рост т:ггра ТЕМсзинопсдсбной активности среды в течение инкубации .

Клеточные культуры инкубировались в присутствии - 10 - 10 М тестостерона , метандростенолона и экдистена в течение 14 суток . Пробы отбирали каждые 3 дня и исследовали на наличие специфической активности .

Тестостерон , метандростенолон и экдистен не вызывали достоверных отличий специфической тиюзиноподобной активности супернатанта клеточной культуры от контроля , что указывает на отсутствие прямого ингибирукнэго действия препаратов на эндокринную функцию еилочковой железы.

4 . Изучение связывания анаболических стероидов тимусом и лимфоцитами периферической крови крыс .

Полученные данные о влиянии тестостерона и метандростенолона на клетки тимуса позволили предположить наличие у них рецепторов для андроген - анаболических стероидов .

Первым этапом данной работы была оценка способности экдистена вытесняться - метандростенолон и3Н - тестостерон из участков связывания цитоэоля тимуса . Экдистен не вытеснял тестостерон и метандростенолон из участков связывания цитозоля тимуса , что свидетельствует об отсутствии взаимодействия экдистена с рецепторами андроген - анаболиков вилочковой железы Конкурентный анализ связывания 3Н - метандростенолона в

присутствии стократного избытка метандростенолона , тестостерона и дексаметаэона показал , что связывающая способность участков цитозоля тимуса , взаимодействующих с % - метанд-ростенолоном , уменьшается следующим образом : метандростено-лон дексаыетазон акдистен . Этот факт говорит о специфичности взаимодействия андроген - анаболических стероидов с участками связывания цитозоля тимуса .

Цитозоль тимуса содержит компоненты лимфоидных и "стро-мальных" элементов вшгачковай железы . Для выявления локализации участков специфического связывания андроген - анаболических стероидов был проведен эксперимент по оценке способности лимфоцитов крови , являвшихся зрелыми клетками , могущими присутствовать в тимусе и тимоцитов связывать андроген -анаболики с использованием критерия , описанного Vira and Шпс ( 1975 ) . Этот тест был предложен авторами для выявления прочно связанной фракции H - стероидов в биологических объектах . Предполагается , что увеличение данной фракции происходит при повышении сродства участков связывания к препарату .

Результаты эксперимента представлены на рис 4 . Тимоцит; накапливали значительно меньшее количество^!! - тестостерона лона по сравнению с лимфоцитами периферической крови . Повышение температуры среда инкубации с О -4°С до Z7°c не приводило к изменению количества включившейся метки .

Иная картина наблюдалась при изучении лимфоцитов периферической крови , являющихся зрелыми клетками . Они связывали сравнительно большее количество3!! - тестостерона, чем тимоциты С на 300% ) . При 37вС клетки практически полностью освобождались от включившегося стероида . Инкубация лимфоцитов в среде при 0-4°С не приводила к потере радиоактивности .

Разница в счете клеточного материала , обрабатывавшегося холодной С О -4?С) и теплой ( 37°С ) средой свидетельствует о прочном связывании H - тестостерона лимфоцитами . Этот результат указывает на наличие участков связывания тестостерона на лимфоцитах , имеющих большую аффинность , чем у тимоцитов . Для их выявления был использован синтетический высокоаффинный лиганд для рецепторов андрогенов 3Н -миболерон .

Результаты исследования представлены на рис 5 • Тестостерон вытеснял3Н - миболерон из связи с лимфоцитами крови кастрированных крыс . Степень аккумулирующей способности суспензии

Связывание, срм 500

I

10

Время,шш.

Рис» 4 . Оценка взаимодействия % - тестостерона с лимфоцитами крови и тимо датами по критерию ^ Мипс

О - лимфоциты Л- тниоц^ты

Свяэюшха метки,#

100 .

L

I

Г

I

Лшфодеы

X

т

1

Тхмодетгы

Рве. ^Взымодейстиш АН шбодероиа о танодогаш ж жшфоцитаих перефзрнческой крови крда.

3 -Í

1.3 - H мкболерон ю , 10 Ы

2.4 - H мибодерон Ю , 10 U в присутствии 100'

кратного избитka тестостерона.

лимфоцитов уменьшалась в присутствии избытка тестостерона на 32 % .

Таким образом , результаты конкурентного анализа и температурной диссоциации указывают на присутствие в цитозоле тимуса и лимфоцитах крови участков высокоаффинного связывания андрсгенов и их анаболических производных . Так как тимсциты не могут специфически связывать андроген - анаболические стероиды ,то выявленные высокоаффинные связывающие участки .вероятно, принадлежат нелимфоидкым компонентам вилочковой железы . "

*

* *

Нами исследовано действие тестостерона .метандростенолона и экдистена на центральный орган иммунитета - тимус .

Результаты работы свидетельствуют о наличии угнетающего влияния андроген-анаболических стероидов на структуру и функции вилочковой железы . Тимолитическое действие андроген- анаболических стероидов проявляется при их длительном введении в высоких дозах и выражается в уменьшении массы тимуса , снижении количества тимоцитов и падении их пролиферативной активности . Полученные данные позволяют предположить зависимость пгмолэтического эффекта от андрогенной активности препаратов . Фитоэкдистероид экдистен не проявляет свойств андрогена и не влияет на вилочковую железу .

Тестостерон и метандростенолон угнетают эндокринную функцию вилочковой железы . У животных , получавших инъекции высоких доз андроген - анаболических стероидов , снижено содержание сывороточного тимического фактора . После 10 - дневного введения тестостерона и метандростенолона наблюдается угнетение ответа лимфоцитов тимуса животных на мэтоген , что свидетельствует с развитии иммунодефицитного состояния. Этот факт необходимо учитывать при клиническом использовании тестостерона и метандростенолона . 1

Экдистен не снижает содержание СТФ и пролиферацию тимоцитов . Отсутствие тимолитического и иммунодепрессивного действия является преимуществом данного препарата перед тестостероном и метандростенолоном . . "

Для установления механизма действия тестостерона и метандростенолона на структуру и функции вилочковой железы иау-

Рас. б Схема действия акдроген-анаболнчесюпс стероидов на внлочковую железу

Авдроген-анаболические стероида

I

1 1 1 ! лшфз^ти 1 крош | 1 1 1

таиоц * «ты—-ретикудо-эгителиальные клетки вилочховая железа

-прямое влияние

---опосредованное действие

чено связывание препаратов с цитозолем и клетками тимуса .

Выявлено наличие участков специфического связывания анд-роген - анаболических стероидов в цитозоле тимуса и лимфоцитах периферической крови . Зкдкстен не взаимодействует с этими участками .

Тимолитичесий эффект тестостерона и метандростенолона полет быть представлен как суммарный результат угнетающего влияния препаратов на пролиферативную активность тимоцитов и эндокринную функцию тимуса ( рис 6) . Андроген - анаболические стероиды снижают полиферативную активность тимоцитов как непосредственно , так и опосредованно , через участки высокоаффинного связывания зрелых лимфоцитов , присутствующих в тимусе и влияющих на дифференцировку и пролиферацию тимоцитов.

Тестостерон и метандростенолон не уменьшзют специфическую секреторную активность культуры строгальных клеток тимуса . Вероятно , снижение титра СТО у животных при введении андроген - анаболических стероидов не связано с их непосредственным действием на секреторные клетки тимуса . Изжно полагать , что снижение функциональной активности этих клеток является следствием изменения их микроокружения , так как тестостерон и метандростенолон уменьшают массу тимуса и количество тимоцитов.

Угнетение эндокринной функции тимуса под действием тестостерона и метандростенолона вызывает нарушение процессов пролиферации и созревания тимоцитов , что приводит к уменьшению массы органа и иммунодефицитному состоянию .

Дальнейшее изучение действия анаболических стероидных средств на иммунные процессы позволит углубить и расширить наши знания о механизме их действия , создать новые препараты с иммунотропной и анаболической активностью .

ВЫВОДЫ

1. Андроген-анаболические стероиды метандростенолон и тестостерон в больших дозах и при длительном введении животным оказывают тимолитическое действие и могут приводить к развитию иммунодефицитных состояний ; анаболик растительного происхождения экдистен подобным влиянием не обладает.

2 . Тестостерон и метандростенолон в дозах 10 , 20 , и 50 мг / кг при внутрибрюшинном введении крысам и мышам в течении

10 дней уменьшают массу вилочковой железы . Экдистен не вызывает тишлитического аффекта .

3 . Тестостерон и метандростенолон в дозе 10 и 20 мг / кг /сут снижают титр сывороточного тиыического фактора у крыс при Ю - суточном введении . Экдистен не влияет на титр CTQ . „ Гертосуерон , метандростенолон , экдистен в концентрациях 10 10 lO'lf не изменяют секреторную активность культуры стромаль-ных клеток тимуса крыс .

4 . Тестостерон и метандростенолон в концентрации 10 И сюхлвго включение'Н - тимидина тимоцитами in vivo и in vitro . Зкдистен не угнетает пролиферативную активность тимоцитов .

5 . Тимоциты не имеют мест специфического связывания андроген - анаболических стероидов . Лимфоциты периферической крови могут специфически связывать андроген - анаболические стероиды . Экдистен не взаимодействует с участками связывания андрогенов вилочковой железы .

6 . Зкдистен имеет несомненное преимущество перед тестостероном и метаидростенолоном - он практически не влияет на функции вилочковой иелезы .

Список опубликованных работ по теме диссертации .

1. П. Б. Сергеев , А. Е Семейкин , А. С. Духанин ,Е. В. Соловьева " Оценка влияния анаболических стероидов на пролиферативную активность тимоцитов " // " Бюллетень экспериментальной биологии и медицины " . - 1991 . - N 10 . - с. 393-395.

2. Д Е Сергеев , А. С. Духанин, С. И. Огурцов, А. Е Семейкин " Тимус и стероидные гормоны : структурно- функциональная регуляция " // тез. 1 международного симпозиума " Проблемы иммуно-фармакологии " - Тбилиси . - 1990 . - с. 57.

3. А. В. Семейкин , Т. Ю. Станевская , Г. Н. Дьяков " Штод получения первичной культуры стромальных клеток тимуса крыс и исследование их секреторной функции " // " Иммунология " . -1S91 . - N 6 .- с. 30 - 31 .

4. А. а Семейкин , Т. Е Станевская , Е С. Чермных " Механизм тишлитического действия анаболических стероидов " // Аармако-логия и токсикология . - 1991 . - N 4 . - с. 37-38 .

5. к. Е Семейкин " Изучение связывания Н - тестостерона с лимфоцитами крыс " // в сб." 25 лет МВФ" . - Москва . - 1989 . - с. 153.