Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Иммуногенетические механизмы патогенеза некоторых инфекционных заболеваний

На правах рукописи

Емельянова Альвина Николаевна

ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПАТОГЕНЕЗА НЕКОТОРЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Чита - 2015

1 9 ФЕВ 2015

005559329

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Читинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения РФ

Научный консультант:

Заслуженный работник высшей школы РФ, доктор медицинских наук, профессор Витковский Юрий Антонович

Официальные оппоненты:

Савченко Андрей Анатольевич - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера", заведующий лабораторией молекулярно-клеточной физиологии и патологии Аитов Курбавдурды - доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения РФ, профессор кафедры инфекционных болезней Цырендоржиев Дондок Дамдинович - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии", ведущий научный сотрудник лаборатории иммунобиологии стволовой клетки

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого" Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Красноярск.

Защита состоится " 16 " апреля 2015 года в 9.00 на заседании диссертационного совета Д 208.118.01 при ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Минздрава РФ (адрес: 672090, г. Чита, ул. Горького 39а)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Минздрава России, 672090, г.Чита, ул. Горького 39а, и на сайте http://chitgma.ru/nauka/ 2а&ЬсЬка-а18зег1а18ц?1азк=кет.у1е\у&1<1=9 Автореферат разослан "_"_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Д 208.118.01 д.м.н., профессор И.Н. Гаймоленко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

В связи с широким распространением среди трудоспособного населения возрастающей в последние годы заболеваемости, недостаточной эффективности современных методов диагностики, лечения и профилактики проблема инфекционных заболеваний не только не уменьшается, а становится все более актуальной в настоящее время. В РФ ежегодно регистрируется 30-50 млн. случаев инфекционных заболеваний. В структуре общей заболеваемости они составляют более одной трети, а среди детей до 14 лет - более половины всех случаев заболеваний [Онищенко Г.Г., 2002].

Общим признаком инфекционных заболеваний является широкая вариабельность устойчивости к инфекциям. Известно, что скорость развития инфекционного процесса определяется сложным комплексом взаимодействия патогена и организма. Особенности формирования и течение как вирусных, так и бактериальных инфекций обусловлены, с одной стороны, гетерогенностью патогена (вирулентность, контагиозность, устойчивость), с другой - индивидуальными особенностями макроорганизма-хозяина, которые являются отражением состояния его иммунной системы и генетической структуры [Richardson М.М., 2006; HoldenA.F. et al., 2007].

Степень разработанности темы исследования Известно, что возбудители инфекционных заболеваний обладают ■ иммуномодулирующей активностью, вызывая иммунодефицитные состояния, степень выраженности которых зависит от характера и тяжести инфекционного процесса и от преморбидного фона пациента [Новиков Д.К. и соавт., 2011].

Особую роль в дисрегупяции иммунной системы при инфекционном процессе играют нарушения межклеточной кооперации. Известно, что течение вирусных и бактериальных инфекций сопровождается цигокин-опос-редованной модификацией межклеточной кооперации иммуноцитов крови, характеризующейся выраженным дисбалансом продукции и рецепции основных иммунорегуляторных Th 1 /ТЬ2-цитокинов [Наследникова И.О. и соавт., 2009]. Дисбаланс медиаторов иммунного ответа занимает ведущее место в патогенезе инфекционных заболеваний [Притулина Ю.Г. и соавт., 2014]. Цитокинам присущ сложный характер функционирования, при котором продукция одного из них влияет на образование или проявление активности других [Симбирцев А.С, 2002 ].

Определение цитокинового статуса позволяет не только опреде-

лить и оценить характер течения инфекционного процесса, но и в последующем спрогнозировать возможный исход заболевания, оценить эффективность терапии, провести профилактику осложнений и формирования рецидивирующего течения [Демьянов А.В, 2003; Симбирцев A.C., 2007.].

Известно, что инфекционные заболевания являются мультифакто-риальной патологией [Коненков В.И., 2002; Пузырев В.П., 2007], и, помимо факторов внешней среды и свойств возбудителя, большую роль в их развитии играют особенности генома человека [Гончарова И.А., Фрейдин и др., 2006]. В настоящее время установлен факт влияния генетического состава индивида на восприимчивость и устойчивость к той или иной инфекции [Батаева Е.П., Витковский Ю.А., 2.011 ; Емельянова А.Н., Витковский Ю.А., 2012,2013 ; Епифанцева Н.В., Витковский Ю.А., 2011; Петров A.A. и соавт., 2011-2013].

Наследственная подверженность к инфекционным агентам связана с двумя факторами: относительно редкие генетические дефекты, приводящие к иммунодефицитам, а также сочетание (более распространенный вариант) у индивида "нормальных" аллелей и генов, по отдельности имеющих слабый эффект, но совокупность которых приводит к формированию особенностей иммунитета, предрасполагающих к развитию инфекционного заболевания [Пузырев В.П., 2007; ТаратинаО.В. и соавт., 2014; Casanova, Abel, 2002]. Согласно данным последних лет, различия в генах, контролирующих защитные реакции организма, могут влиять на уровень продукции кодируемых белков и, тем самым, на характер протекания иммунного ответа [Громова А.Ю., Симбирцев A.C., 2005]. Наиболее частым изменением структуры генов является полиморфизм единичных нуклеотидов (SNP). Именно SNP особенно важен для молекулярной диагностики болезней. [Ncbert D.W., 1997]. Функционирование цитокиновой сети при инфекционных заболеваниях зависит от многих причин, в число которых входят индивидуальные различия в продукции цитокинов, обусловленные рядом генетических особенностей [Громова А.Ю., Симбирцев А.А, 2005]. Генетический полиморфизм цитокинов выступает как предикторный фактор эффективности терапии инфекционных заболеваний [Al-Qahtani A.A. et al., 2014; Mi Y. étal, 2014; Omran M.H., 2013; Shaker O.G. et al., 2014; Yue M. et al., 2013].

В связи с вышеизложенным, изучение SNP генов цитокинов при различной инфекционной патологии является важным п теоретическом и практическом отношениях.

В связи с этим становится важным не только изучение механизмов развития иммунных нарушений при инфекционной патологии, но и поиск генетических полиморфизмов молекул, определяющих характер иммунологического реагирования, что позволит углубить представления о патогенезе и разработать новые эффективные методы прогнозирования и течения инфекционного процесса.

Учитывая, что течение как бактериальных, так и вирусных инфекций сопровождается цитокинопосредованной модификацией взаимодействия иммунокомпегентных клеток, а генетическая детерминированность дисбаланса продукции цитокинов в ответ на бактериальные и вирусные агенты определяется в том числе и аллельными вариантами генов цитокинов, немаловажное значение имеет необходимость идентифицировать общие прогностические иммуногенетические маркеры предрасположенности к целому ряду этиологически разнородных инфекционных заболеваний - рожи, гриппа A/H1N1 (2009), хронического вирусного гепатита С.

Индивидуальный генетический прогноз инфекционных заболеваний на основе аутентификации и распознавания иммуногенетических маркёров позволит формировать среди здоровых лиц группы риска подверженности к наиболее часто регистрируемым инфекционным заболеваниям с целью их профилактики, атакже прогнозировать характер течения, вероятность развития осложнений, скорость прогрессирования инфекционного процесса при развитии болезни у конкретного индивидуума.

Цель исследования Целью исследования явилось изучение роли полиморфизма IL-2 и IL-10 в иммунопатогенезе рожи, гриппа A/H1N1 (2009) и хронического вирусного гепатита С.

Задачи исследования

1. Исследовать частоту встречаемости аллельных вариантов полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G),IL-10 (С819Т) и IL-10 (G1082A) при первичной и рецидивирующей роже в зависимости от тяжести заболевания среди резидентов Забайкальского края.

2. Оценить влияние SNP генов IL-2 на содержание интерлейкина-2 при роже.

3. Изучить содержание провоспалительных цитокинов, функцию лим-фоцитарно-тромбоцитарной адгезии и экспрессию тканевого фактора моноцитами периферической крови у больных рожей при разных формах клинического течения.

4. Установить встречаемость SNP генов IL-2 (T330G) и IL-10 (С819Т) при гриппе A/H1N1 (2009) у жителей Забайкальского края.

5. Выявить влияние носительства SNP генов IL-2 (T330G) и IL-10 (С819Т) на концентрацию соответствующих цитокинов и функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии при гриппе A/H1N1 (2009) в период разгара (на 3-й день заболевания).

6. Исследовать встречаемость SNP промотора гена IL-2 (T330G), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082А) и CRP (СЗ 872Т) у больных хроническим вирусным гепатитом С при разных стадиях фибротических изменений.

7. Проследить влияние носительства SNP промотора гена IL-2 (T330G), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082А) на концентрацию соответствующих цитокинов у больных ХВГС при различной активности и оценить у них функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

8. Оценить ось: "SNP генов IL-2 и IL-10 - концентрация цитокинов -лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия" в иммунопатогенезе инфекционных заболеваний.

Научная новизна

Впервые описано общее звено иммунопатогенеза бактериальных и вирусных заболеваний, включающее систему SNP генов IL-2, IL-10, соответствующих цитокинов и лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию.

Впервые установлено носительство SNP промотора гена IL-2 (T330G), IL-10 (С819Т) и IL-10 (G1082A) у больных рожей. Показано, что у пациентов с первичной рожей превалирует гомозиготный вариант Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) по сравнению с рецидивирующим течением и здоровыми лицами. У больных рожей с равной частотой встречаются аллели G и Т в участке T330G промотора гена IL-2 с преобладанием гетерозиготного варианта T/G, особенно при рецидивирующем течении заболевания. В группе больных с первичной эритематозной формой рожи частота генотипа Т/Т выше, чем в группе больных с буллезно-геморрагической формой заболевания. Впервые показано, что при рецидивирующей роже генотип С/Т полиморфизма IL-10 (С819Т) и аллель Т выявлялась чаще, чем при первичном течении и среди здоровых лиц. Наличие аллели А полиморфизма IL-10 (G1082A) ассоциировано с первичной и рецидивирующей рожей.

Впервые обнаружено, что SNP промотора гена IL-2 (T330G) сказывается на содержании IL-2 у носителей различных генотипов при роже. При первичной и рецидивирующей роже максимальная концентрация IL-

2 выявляется у носителей генотипа Т/Т, а минимальная - генотипа G/G. У больных рожей независимо от ее формы и течения снижается лимфоци-тарно-тромбоцитарная адгезия и увеличивается экспрессия тканевого фактора моноцитами периферической крови пропорционально тяжести заболевания. Установлено, что у больных с гриппом A/H1N1 (2009) чаще встречалось носительство аллелей Т и генотипов Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) и гена IL-10 (С819Т).

Выявлено, что при гриппе A/H1N1 (2009), у пациентов с генотипом Т/Т полиморфизма промотора гена1Ь-2 (T330G) в крови выявляется максимальное содержание IL-2, а его минимальное - у больных с генотипом G/G. У носителей генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (С819Т), определяется минимальная, а у носителей генотипа Т/Т - максимальная концентрация IL-10. Впервые установлено, что у пациентов с гриппом A/H1N1 (2009) на 3-й день заболевания увеличивается лимфоцитарно-тромбоци-тарная адгезия, значения которой зависят от SNP промотора гена IL-2 (T330G) и гена IL-10 (С819Т). У носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) и генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (С819Т) параметры JÏTA имели максимальные значения.

Впервые обнаружено, что у больных с циррозом в исходе ХВГС генотип Т/Т полиморфизма гена IL-2 (T330G) встречается чаще, чем в группе пациентов с ХВГС с I-III стадиями фибротических изменений и у здоровых лиц. Установлено, что при ХВГС преобладают гомозиготные варианты С/С гена IL-10 (С819Т) и А/А IL-10 (G1082A). Доказано, что среди лиц с ХВГС при переходе процесса в цирроз встречаемость аллели Т полиморфизма гена IL-10 (С819Т) повышается, а аллели С - снижается. Частота аллели A SNP гена IL-10 (G 1082А) при ХВГС увеличивается по сравнению со здоровыми. Напротив, частота аллели G у больных ХВГС в 2,5 раза, а при циррозе печени - в 1,3 раза ниже контрольных значений.

Впервые установлено, что генотип С/С полиморфизма С3872Т гена CRP встречается в подавляющем числе случаев развития фиброза печени. В терминальной стадии развития фиброза обнаруживается только

носительство генотипа С/С.

Обнаружено, что у больных с ХВГС концентрация IL-2 зависит от носительства полиморфизмов промотора гена IL-2 (T330G) и активности патологического процесса. Максимальное содержание IL-2 наблюдалось у носителей генотипа Т/Т, а минимальное - у гомозиготых носителей G/G с высокой активностью. При высокоактивном течении хронического вирусного гепатита С концентрация IL-10 достигает мак-

симально высоких значений у больных-носителей генотипа С/С полиморфизма гена 11,-10 (С819Т). У таких пациентов выявляется максимальная концентрация цитокина среди носителей генотипа С/С}, а минимальная - среди носителей генотипа А/А полиморфизма гена 1Ь-10 (01082А). При минимальной активности инфекционного процесса наибольшее содержание 1Ь-10 наблюдается у носителей генотипа О/С, а наименьшее - у лиц с генотипом А/А. У пациентов и с минимальной,' и с высокой активностью патологического процесса снижена адгезия кровяных пластинок и лимфоцитов.

Теоретическая и практическая значимость

В ходе исследования установлены новые данные о распространенности различных аллельных вариантов 1Ь-2 (ТЗЗОО), 11-10 (С819Т), (1.-10 (С1082А), СИР (СЗ 872Т) среди здоровых резидентов Забайкальского края и у больных рожей, гриппом А/Н1Ш и хроническим вирусным гепатитом и установлены ассоциации отдельных БКР с их развитием.

Носительство БИР 1Ь-2 (ТЗЗОО), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А) оказывает влияние на продукцию соответствующих цитокинов и лим-фоцитарно-тромбоцитарную адгезию при инфекционных заболеваниях, что сказывается на предрасположенности к ним и особенностях их течения. ЭКР гена СЯР (С3872Т), наряду с БЫР 1Ь-2 (ТЗЗОО), И-10 (С819Т), 1Ь-10 (01082А), ассоциирован с развитием цирроза при хроническом вирусном гепатите С.

Полученные результаты могут послужить основой для разработки новых подходов к оценке риска, профилактике, прогнозированию развития болезни. Выявленные сведения о наличии полиморфизмов 1Ь-2 (ТЗЗОО), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А), С11Р(С3872Т) могут быть включены в генетический паспорт индивидуумов и совместно с другими полиморфизмами использоваться для оценки риска развития рожи, гриппа и хронического вирусного гепатита С.

Положения, выносимые на защиту 1. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия является звеном иммунопа-тогенеза бактериальных и вирусных заболеваний. Характер лимфо-цитарно-тромбоцитарных взаимодействий отличается при роже, гриппе и ХВГС. При роже независимо от ее формы и течения, а также при ХВГС при высокой и минимальной активности процесса снижена адгезия кровяных пластинок к лимфоцитам. У пациентов с гриппом А/Н1№ (2009) на 3-й день заболевания на фоне повышенного абсолютного числа лимфоцитов увеличивается лимфоцитарно-тром-

боцитарная адгезия, наибольшие параметры которой наблюдаются у носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (ТЗ 30G), генотипа С/С полиморфизма гена1Ь-10 (С819Т).

2. Полиморфизм генов IL-2 и IL-10 предрасполагает к развитию бактериальных и вирусных заболеваний и вовлекается в патогенез рожи, гриппа и ХВГС. Первичная и рецидивирующая рожа ассоциирована с аллелью Т промотора гена IL-2 (T330G) и гомозиготным носительством Т/ Т промотора гена IL-2 (T330G), а также с аллелью Т полиморфизма IL-10 (С819Т) и аллелью А полиморфизма IL-10 (G 10 82А). При гриппе A/H1N1 (2009) чаще встречаются носители аллели Т и генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) и аллели Т и генотипа Т/ Т полиморфизма IL-10 (С819Т). Развитие ХВГС ассоциировано с носительством аллели Т и генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) и гомозиготных вариантов С/С reHaIL-10 (С819Т) и А/А IL-10 (G1082А). Цирроз в исходе ХВГС связан с носительством аллели Т SNP промотора гена IL-2 (T330G), аллели A SNP гена IL-10 (G 10 82А), аллели С и генотипа С/С полиморфизма CRP (СЗ 872Т).

3. Полиморфизм генов IL-2 и IL-10 влияет на уровень цитокинов в крови больных рожей, гриппом и ХВГС. При роже, гриппе и ХВГС уобладателей генотипа Т/Т полиморфизма гена промотора IL-2 (T330G) максимально увеличивается концентрация IL-2. У больных гриппом А/ H1N1 (2009), ХВГС - носителей генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (С819Т), определялась минимальная, а у носителей генотипа Т/Т -максимальная концентрация IL-10. При ХВГС с высокой активностью процесса наибольшее содержание IL-10 выявляется у носителей генотипа G/G полиморфизма гена IL-10 (G 1082А).

4. Общее иммунопатогенетическое звено бактериальных и вирусных заболеваний включает систему полиморфизмов генов IL-2, IL-10, соответствующих цитокинов и лимфошггарно-тромбоцитарную адгезию. От SNP гена зависит концентрация транслируемого цитокина, активирующего (IL-2) или тормозящего (IL-10) контактные взаимодействия лимфоцитов и кровяных пластинок. При этом баланс интерлейкинов отражается на миграции иммунокомпетентных меток и направленности иммунного ответа при инфекционной патологии.

Внсдренне результатов исследования Результаты исследования по полиморфизму генов цитокинов при роже, гриппе и ХВГС внедрены в учебный процесс lia кафедрах инфекционных болезней в соответствующих разделах, нормальной фи-

зиологии ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия и внедрены в лечебно-диагностическую работу Краевой клинической инфекционной больницы Забайкальского края.

Апробация диссертации Результаты работы были доложены на региональной гепатошколе, Иркутск, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию ЧГМА, г. Чита, 2008; I Ежегодном всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 2009; II Ежегодном всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 2010; IV Тихоокеанском международном конгрессе по традиционной медицине, Владивосток, 2010; Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Чита, 2010; III Ежегодном всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 2011; межрегиональной научно-практической конференции "Инфекционные болезни взрослых и детей. Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики", Казань, 2011; IV Ежегодном всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 2012; 1П Межрегиональной научно-практической кон-фер енции "Инфекционные болезни взрослых и детей. Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики", Астрахань, 2012; 4 научно-практической конференции с международным участием "Актуальные вопросы инфекционной патологии на Дальнем Востоке", Хабаровск, 2012; V Ежегодном всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 2013; 1 съезде терапевтов Забайкальского края, Чита, 2013; на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 60-летию Читинской государственной медицинской академии, 2013; XVIII Российском конгрессе "Гепатология сегодня", Москва, 2013; межрегиональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы инфекционной патологии", Казань, 2014

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК, 7 статей в журналах, не входящих в перечень журналов, рекомендованных ВАК, 1 монография, 23 тезисов в сборниках международных, российских, краевых научных конференций, конгрессов и съездов.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 238 страницах и состоит из введения, обзора литературы, характеристики методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выво-

дов и указателя литературы, включающего 425 источников, из них 298 отечественных и 127 - зарубежных авторов; иллюстрирована 57 таблицами, 19 рисунками.

КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Общая характеристика обследованных групп

Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых. В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki 1964, 2000 ред.) и Правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.

В настоящей работе приведены результаты исследования пациентов с рожей, хроническим вирусным гепатитом С и гриппом A/H1N1(2Q09).

Клиническая характеристика пациентов с рожей. Верификацию диагноза проводили на основании клинико-анамнестических данных согласно классификации В.Л. Черкасова [1986].

Данную группу составили 200 пациентов (в возрасте 35-50 лет). Из них: больных с первичной эритематозной формой рожей - 34 человек; пациентов с первичной эритематозно-буллёзной рожей - 50 человек, больных с первичной буллезно-геморрагической рожей - 56 человек; пациентов с рецидивирующей формой рожи - 60 человек.

Клиническая характеристика пациентов с хроническим вирусным гепатитом С. Под наблюдением находилось 206 пациентов с хроническим вирусным гепатитом С (в возрасте - 35 - 45 лет).

Диагноз ХВГС устанавливали на основании клинико-эпидемиолога-ческих, биохимических, серологических (маркеры инфицирования HCV - HCV Ag, HCV Ag IgM, HCV AgNS3-5, HCV Ag IgG методом иммунофер-ментного анализа), вирусологических (определение РНК 1ICV методом полимеразной цепной реакции, генетического типирования и определения вирусной нагрузки), инструментальных (сцинтиграфическое, ультразвуковое исследование и эластометрия печени) методов обследования.

При постановке диагноза использовали международную классификацию хронических гепатитов, принятую всемирным конгрессом гастроэнтерологов в Лос-Анджелесе (1994 г.), основанную на этиологическом принципе, рабочую классификацию хронического гепатита с учетом степени активности и стадии болезни. Степень активности про-

цесса определялась на основании клинических и биохимических данных. Для этого всем пациентам исследовали биохимические показатели стандартными унифицированными методами

В исследование включены 40 больных с циррозом печени в исходе ХВГС от 3 0 до 55 лет, проживающих на территории Забайкальского края (28 мужчин и 12 женщин) (средний возраст 33±4 года). Диагноз цирроза печени поставлен в соответствии с классификацией по Чайлд-Пью на основании результатов объективного осмотра и инструментальных методов исследования.

Клиническая характеристика больных с гриппом А/НШ1 (2009). В исследование включены 50 пациентов с гриппом А/НШ1 (2009). Все больные находились на лечении в период с октября по декабрь 2009 года в Краевой клинической инфекционной больнице (ККИБ) г. Читы. Диагноз пандемического гриппа А/НШ1 верифицирован методом полимеразной цепной реакции.

Клинически и анамнестически у всех обследованных лиц были исключены инфекционные заболевания другой этиологии, выраженные аутоиммунные, проявления на фоне вирусной и бактериальной персис-тенции, обострение хронических воспалительных процессов, наследственные и психические болезни, у женщин - беременность и ранний послеродовый период.

Все обследованные - представители европеоидной расы, родившиеся и проживающие на территории Забайкальского края.

Контрольную группу составили 100 практически здоровых доноров с аналогичными характеристиками по полу и возрасту, не имеющие хронических инфекционных заболеваний, аллергических и аутоиммунных реакций, заболеваемости острыми вирусными и бактериальными инфекциями. По национальной принадлежности все объекты исследования, являлись русскими, родившимися и проживающими на территории Забайкальского края.

Лабораторные методы исследований

Методы определения количества иммунокомпетентных клеток. Подсчет общего числа лейкоцитов проводили стандартным методом в камере Горяева. Мазки крови фиксировали метанолом в течение 10 мин и окрашивали по Романовскому-Гимза. Подсчет клеток крови осуществляли под иммерсионным объективом х 90, окуляр х 15.

Определение субпопуляцнй лимфоцитов. Субпопуляций лимфоцитов определяли методом иммуногистохимии с использованием монок тональных антител ТОО "МедБиоспектр" (Москва) (А.Ю.Барышников, 1990).

Определение показателя лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии. Свежую гепаринизированную кровь обследуемых больных наслаивали на градиент урографин-фикол (плотность 1,077) и выделяли лимфоциты как описано выше. Собирали интерфазное кольцо, содержащие клетки и кровяные пластинки, однократно промывали фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3-4 мин. Надосадочную жидкость сливали, осадок микроскопировали в камере Горяева. Подсчитывали число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрега-тов на 100 клеток. Степень адгезии определяли как число кровяных пластинок, адгезированных на поверхности одного лимфоцита.

Определение уровней иммуноглобулинов. Определение концентрации иммуноглобулинов классов А, М, G проводили иммунофер-ментным методом с использованием тест-наборов ООО "Вектор-Бест" (Новосибирск).

Определение концентрации цитокинов. Для определения концентрации цитокинов (IL-la, IL-1 р, IL-2, IL-8, IL-10, TNFa) использовали наборы реагентов ООО "Вектор-Бест" (г. Новосибирск). Измерение уровня цитокинов проводили методом твердофазного ИФА.

Исследование экспрессии тканевого фактора. Исследование экспрессии тканевого фактора моноцитами осуществляли по методу, предложенному R.A.Santucci et al. [2000] в собственной модификации.

Выявление РНК ВГС, генотипирование вируса, определение вирусной нагрузки. Выделение РНК ВГС из сывороток крови пациентов проводили с помощью набора реагентов для выделения РНК ВГС "РеалБест РНК ВГС, (качественный вариант)" (ЗАО "Вектор-Бест", РФ). Вирусную нагрузку определяли с помощью коммерческой тест-системы "ОТ-гепатоген-С-количественный" ("ДНК-технология", Россия).

РНК вируса гриппа A(H!N1) в мазках из носа определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Полнмеразная цепная реакция. Определение полиморфизма генов (IL-2, IL-10, CRP) осуществлялось методом ПЦР с использованием праймеров ООО "Литех" (г. Москва). Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови или буккального эпителия с помощью реагента "ДНК-экспресс-кровь", затем проводилась реакция амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров.

Способы статистической обработки полученных результатов. Статистическая обработка осуществлялась при помощи электронных программ Microsoft Excel 2007, STATISTICA 6,0 (StatSoft Inc., США),

с определением статистической значимости различий при р<0,05. При нормальном распределении признака использовали параметрические методы статистики. Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (М±80), либо медиана (Ме) с интерквартиль-ным интервалом (25 и 75 персентили). Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью критерия х2 [Вейер Б.,1995]. Для сравнения групп по качественному бинарному признаку применялся критерий х2 (Пирсона). Вычислялась оценка взаимосвязи качественных признаков на принципе взаимной сопряжённости с использованием коэффициента Юла ((^-коэффициент) и сопряжённости Пирсона (С-коэффициент). Для оценки ассоциаций полиморфных вариантов генов с патологическим фенотипом рассчитывали показатель отношения шансов ((Ж). Предсказания значений ряда зависимых переменных по известным значениям других переменных осуществлялось с помощью множественного регрессионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Лимфоцитарно-тромбоцитариая адгезия, концентрация цитокинов и полиморфизм генов 1Ь-2,1Ь-10 у больных рожей

Установлено, что у больных с первичной эритемагозно-буллезной формой показатель ЛТА уменьшался на 12,0%, с первичной эритематозной -на 11,0%, тогда как у здоровых он составлял 14,0% (р<0,001). Соответственно этому изменялось абсолютное число лимфоцитов, присоединивших к себе кровяные пластинки у больных - в 6 раз меньше, чем у здоровых лиц (р<0,001). Параллельно этому уменьшалось среднее число тромбоцитов, адгезированных на поверхности лимфоцита (степень адгезии) -в 2,5 раза меньше, чем в группе здоровых лиц (р<0,001).

У пациентов с рожей мы не обнаружили существенных изменений в содержании абсолютного числа лимфоцитов в начале заболевания по сравнению со здоровыми лицами. Однако, показатель ЛТА уже в эти сроки резко снижался.

На 12-е сутки после проведенного лечения мы также не заметили разницы содержания абсолютного числа лимфоцитов по сравнению с началом заболевания и со здоровыми лицами (р1 ,>0,05). В то же время обнаружено, что показатель ЛТА существенно поднялся у больных с эритематозной формой рожи на 5,0%, в меньшей степени у пациентов с эритематозно-буллезной формой болезни - на 3,0% (р,<0,001). При этом степень адгезии

также увеличивалась - в 1,5 и 1,7 раз соответственно (р2<0,001). При обследовании пациентов с рецидивирующим течением оказалось, что при этой форме заболевания значительнее тормозится способность лимфоцитов к взаимодействию с тромбоцитами по сравнению с первичной рожей, причем более выражено приэритематозно-буллезной форме.

Обнаружено, что у пациентов с первичной булллезно-геморрагичес-кой формой рожи в 1 -е сутки заболевания общее содержание лимфоцитов также не имеет статистически значимых отличий от здоровых людей (р>0,05). При этом значительно изменяются их функциональные характеристики: существенно снижается способность лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты. Обнаружено, что у больных со средней степенью тяжести заболевания относительное число клеток, способных образовывать лимфоцитарно-тромбоцитарные агрегаты, снижается на 11,0%, а абсолютное - в 16 раз, тогда как в контроле показатель ЛТА составлял 14,0% и 0,69±0,02 х 107л соответственно (р<0,00.1). Подобные сдвиги выявлены и у больных с тяжелой формой рожи - относительное значение показателя ЛТА составило 2,8%, а абсолютное - 0,035±0,005 х 109/л (р<0,001). При заболевании уменьшалась степень адгезии - в 2,8 раза меньше в обеих группах пациентов, чем среди здоровых (р<0,001).

Таблица 1

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных с буллезно-геморрагической формой рожи (М±80)

Наблюдаемые группы Лимфоциты, абс. х Ю'/л ЛТА Степень адгезии

отн., % абс. х Ю'/л

Здоровые лица (п-55) 2,04+0,4 14.0±1,0 0,29±0,02 3,2+0,1

Бальные рожей средней степени тяжести (п=15) 1,42+0,33 р>0,05 3,1+0,2 р<0,001 0,044+0,007 р<0,001 1,2±0,05 р<0,001

Больные рожей тяжелой степени (п=10) 1,26±0,23 рХ),05 2,8+0,2 р<0,001 0,035+0,005 р<0,001 1,1 ±0,06 р<0,001

Примечание: р - статистическая значимость различий по сравнению со здоровыми лицами.

Таким образом, у больных рожей независимо от ее формы и течения снижается способность лимфоцитов контактировать с тромбоцитами, что указывает на снижение функциональной активности иммуно-компетентных клеток.

Установлено, что концентрация провоспалительных цитокинов резко увеличивается у больных разными формами рожи. Так, у пациентов с первичной эритематозно-буллезной формой уровень II,-1 а повышался в 8,5, а для 1Ь-1Р - в 8 раз, в то время как у здоровых он составлял 19,3±4,1 пкг/мл и 32,6±9,4 пкг/мл соответственно (р<0,001). При этом в 23 раза повышалось содержание Т№чх по сравнению с контролем (12,3+2,1 пкг/ мл, р<0,001); продукция хемокина1Ь-8 увеличилась в 12,5 раз(р<0,001). При первичной эритематозной форме у больных также выявлялись высокие значения концентраций провоспалительных цитокинов.

Установлено, что в ранние сроки у пациентов с буллезно-геморраги-ческой рожей повышалось содержание провоспалительных цитокинов. Так, у больных с рожей средней степени тяжести наблюдается увеличение концентрации 1Ь-1 р в 6,5, а при тяжелом течении - в 9 раз по сравнению со здоровыми лицами (3 2,6±9;4 пкг/мл) (р<0,001). Содержание хемокина !Ь-8 в контроле составляло 25,9±4,2 пкг/мл, тогда как при первичной буллез-но-геморрагической роже средней степени тяжести отмечается увеличение концентрации в 13, а при тяжелой - в 9 раз (р<0,001). Концентрация Т№а также увеличивалась среди пациентов обеих групп (р<0,001).

Мы изучили взаимосвязь между единичным полиморфизмом промотора гена 1Ь-2 (ТЗЗСЮ) и содержанием интерлейкина-2 в крови больных рожей при первичном и рецидивирующем течении (рис. 1).

Рис. 1. Частота встречаемости генотипов промотора гена 1Ь- 2 (ТЗЗОО) у здоровых и больных рожей.

Выявлено, чтоу пациентов с первичной рожей превалировал гомозиготный вариант Т/Т - 53 %, что в 2 раза чаще, чем при рецидивирующем течении, и в 18 раз, чем в контрольной группе (х2=34; р<0,001); ((Ж=36,38; 95% С1:9,60-13 7,78). В группе пациентов с рецидивирующим течением рожи преобладал гетерозиготный вариантТ/'О((Ж=0,064; 95% С1:0,02-0,17).

Исходя из того, что исследуемый БИР ТЗЗОО гена 1Ь-2 расположен в промоторной области, мы выяснили связь данного полиморфизма с уровнем продукции кодируемого цитокина (табл. 2).

Таблица 2

Содержание 1Ъ-2 в крови больных рожей в зависимости от генотипа полиморфизма гена 1Г-2 (ТЗ ЗОО). пкг/мл (Медиана [25й; 75й перцинтили])

Течение Время наблюдения

заболевания 1 супа! | 12 сутки

Генотип Т/Т

Здоровые лица 0,6 [0,4,0,9]

Пгрвичная рожа 10,7 [6.2;14,3] р,< 0,001 72 [61,5;89,4] р, <0,001;р2<0,001

Рецидив ируюпря рожа 12,4 [7,3; 15,6] р,<0,001 44,6 [35,2;58,4] р,0,001; р,<0,001

Генотип Т/С)

Контроль 0,9 [0,4;1,2]

Пгрвичная рожа 5,6 [4,3;5,9] р,0,001; р,<0,001 16,2 [13,2;19,4] р,<0,001; р,<0,001; р,<0,001

Рецидивируюпвя рожа 8,0 [6,2;10,5] р, <0,001 ;р,<0,001 22,4 [12,4;30,2] р,<0,001; р,<0,001; р,0,001

Генотип ОС

Контроль 1,1 [0,7;1,3]

Пгрвичная рожа 3,9 [2,7;4,6] р,<0,001; р3<0,001; р4<0,001 7,3 [6,9;7,8] р,<Ю,001; р2<0,001; р.<0,001; р4<0,001

Рецидивирующая рожа 4,5 [3,8;5,6] р,<0,001; р <0,001; р4<0,001 8,2 [6,2;10,7] р,<0,001; р2<0,001; р5 <0,001; р <0,001

Примечание: р, - значимость различий с контролем; р, - значимость различий с 1-ми сутками наблюдения; р3 - значимость различий по сравнению с гомозиготами Т/Т; р4 - значимость различий по сравнению с гетерозиготами Т/О.

Выявлено, что уже в 1 -е сутки наблюдения у пациентов с первичной и рецидивирующей рожей независимо от генотипа повышается концентрация иммунного IL-2 по сравнению с группой здоровых лиц при отсутствии антигенной стимуляции (р<0,001). Однако содержание ци-токина у больных - носителей разных генотипов различается между собой. Так, при первичной роже у обладателей генотипа Т/Т повышается концентрация иммунного IL-2 в 18 раз, что существенно выше, чем в группе здоровых лиц при отсутствии антигенной стимуляции (р< 0,001). У носителей гетерозиготного варианта T/G содержание IL-2 в крови выше в 9, а у гомозиготного G/G - в 6,5 раз.

Обращало на себя внимание, что при рецидивирующей роже у обладателей генотипа Т/Т в первые сутки заболевания отмечается повышение концентрации иммунного IL-2 до 12,4±4,1 пкг/мл, что в 2 раза выше, чем в группе здоровых при отсутствии антигенной стимуляции (р<0,001).

На 12-е сутки лечения у всех пациентов наблюдалось нарастание уровня IL-2 в крови. Максимальные значения концентрации IL-2 обнаружены у носителей генотипа Т/Т полиморфизма IL-2 (T330G) при первичной роже - 72± 14 пкг/мл, а при рецидивирующей - 44,6± 11,6 пкг/мл.

Присутствие аллели G существенно изменяло содержание цитоки-на в крови больных. Так у гетерозиготных носителей T/G его концентрация составила при первичной роже 16,2±3,1 пкг/мл, а при рецидивирующей - 22,4±8,9 пкг/мл.

Среди больных рожей - гомозиготных носителей G/G полиморфизма 1L-2 (T330G) - выявлялась минимальная концентрация IL-2. При первичной роже она составляла 7,3±0,45 пкг/мл, а рецидивирующей -8,2±2,36 пкг/мл.

Таким образом, полученные данные показывают, что аллельный полиморфизм T330G гена IL-2 взаимосвязан с уровнем IL-2 в крови больных первичной и рецидивирующей рожей.

Мы сравнили частоты встречаемости полиморфизмов гена IL-2 у больных эритематозной и буллезно-геморрагичеекой формами первичной рожи (рис. 2).

Установлено, что генотип T/G чаще встречается в контрольной группе и среди пациентов с буллезно-геморрагичеекой формой течения (OR=0,06; 95% CI: 0,02-0,17). При этом в группе больных с эритематозной формой рожи частота Т/Т варианта выше почти в 2 раза, чем в группе больных с буллезно-геморрагичеекой, и в 17,6 раз по сравнению с группой контроля (OR=36,38; 95% CI: 9,60-137,78) (р<0,001).

Рис. 2. Частота встречаемости генотипов ЗИР промотора гена 1Ь- 2 (ТЗЗСЮ) у здоровых и больных первичной эритематозной и буллезно-геморрагической формами рожи

С целью выявления ассоциации полиморфного маркера промотора 1Ь-2 в участке ТЗЗ(Ю с заболеванием первичной эритематозной и бул-лезно-геморрагической формами рожи изучено распределение аллелей и генотипов.

Обнаружено, что у больных первичной эритематозной и буллезно-геморрагической рожей аллели в и Т полиморфизма ТЗЗСЮ промо-торного участка гена 1Ь-2 встречаются практически с одинаковой частотой. Однако распределение наблюдаемого явления значительно отличается от ожидаемого позакону Харди-Вайнберга(^2=34; р<0,001).

При исследовании 8№ гена 11-10 в участках С819ТиСЖ)82Л отмечалось преобладание у больных рожей гетерозиготного варианта (рис. 3,4).

Установлено, что при первичной роже генотип С/Т полиморфизма С819Т в гене 1Ь-10 встречался у 38% обследованных больных (ОИН ,67; 95% С1: 0,74-3,80), тогда как при рецидивирующей роже - в 1,5 чаще (57%) (011=3,60; 95% С1: 1,81-7,18), а в контроле, напротив, в 1,5 реже (27%). При первичном заболевании мы не выявили ни в одном случае генотип Т/Т, а при рецидивирующем - он выявлялся в 13% случаев (ОЯ=4,62:95% С'1:1,14-18,65), в контроле - всего 3% (х2=32,79; р<0,001).

с/с с/т т/т

ЕЗ Перемчнзя рожа S Рецидивирующая рожа Здоровые лица

Рис. 3. Частота встречаемости генотипов БЫР С819Т в гене 1Ь-10 у больных рожей в Забайкальском крае.

Ш Перзичная рожа ЁЗ Рецидивирующая рожа В Здоровые лица

Рис. 4, Частота встречаемости SNP G1082A в гене IL-10 у больных рожей в Забайкальском крае.

Гетерозиготный вариант G/A другого полиморфизма G1082А в гене ILIO чаще обнаруживался при первичной роже (38,25%) (х2=12,97; р< 0,001) (OR=0,06; 95% Cl: 0,02-0,16), тогда как при рецидивирующем течении - в 1,8 раза реже (х2 =15,02; р<0,001 ) (<Ж=0,09; 95% CI: 0,09-0,22). У здоровых резидентов превалировал генотип G/G в 91 % наблюдений.

Уст ановлено, что у пациентов с первичной рожей чаще встречается аллель С полиморфизма С819Т IL-10 - 0,81, тогда как при реци-

дивирующей - 0,59. Наоборот аллель Т этого полиморфизма превалирует среди пациентов с рецидивирующим течением заболевания - 0,41.

У больных с первичной и рецидивирующей формами рожи примерно в одинаковом соотношении встречаются аллели G и Л полиморфизма Gl 082 А IL-10. При этом в контрольной группе равновесие аллелей по закону Харди-Вайнберга не нарушено.

Таким образом, полиморфизм генов цитокинов оказывает влияние на механизмы иммунологической защиты при роже, что в конечном итоге определяет индвидуальную предрасположенность к развитию заболевания и сказывается на характере его клинического течения. В связи с вышеизложенным, ключевым звеном патогенеза рожи являются аллельные вариан гы генов IL-2, IL-10 и транслируемые полиморфные молекулы цитокинов, функция которых отражается на кооперации клеток в процессе развития иммунного ответа и направленности сопряженных механизмов защиты.

Полиморфизм генов IL-2, IL-10, продукция цитокинов и лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных гриппом A/H1N1 (2009) Мы оценили частоту встречаемости полиморфизмов промотора гена IL-2 (T330G) среди здоровых лиц и больных гриппом A/H 1N1 (2009) (рис. 5). Установлено, что среди пациентов с гриппом A/H INI (2009) чаще встречались носители генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) в 48% случаев, тогда как среди здоровых он наблюдался только у 3% резидентов Забайкальского края (x2=18;p<0,001)(OR=29,84;95%Cl: 8,33-106,90).

100% -1—

Рис. 5. Частота встречаемости генотипов БМР промотора гена 1Ь-2 (ТЗЗ(Ю) у здоровых лиц и больных гриппом А/НШ1 (2009)

Обладатели гетерозиготного генотипа T/G среди пациентов выявлялись в 40% случаев, тогда как среди неболевших - в подавляющем большинстве наблюдений - 94% (х2=18; р<0,001) (OR=0,04; 95% CI: 0,020,12). В обеих группах встречаемость генотипа G/G отмечалась примерно одинаково- 3% (здоровые) и 2% (больные) (OR=4,40; 95% CI: 1,05-18,4).

Анализируя частоту аллелей полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G), можно утверждать, что наличие варианта Т располагает к вирусу гриппа A/HI N1. Среди больных он встречался с частотой 0,91, тогда как аллель G - только с частотой 0,09.

Обнаружено, что у больных гриппом A/H1N1 (2009) гомозиготные варианты С/С полиморфизма гена 1L-10 (С819Т) выявлялись реже - в 28%, тогда как среди здоровых - в 70% наблюдений (х2=19,27; р<0,001) (OR=0,17; 95% CI: 0,08-0,35) (рис. 6).

Обнаружено, что среди пациентов гетерозиготы С/Т преобладали над здоровыми и составляли 50% и 27% соответственно (х2=19,27; р<0,001) (QR=2,70; 95% CI: 1,33-5,49). Гомозиготы Т/Т обнаруживались в группе больных с частотой 22%, тогда как в контроле - всего 3% (х2=19,27: р<0,001) (OR=0,68; 95% CI: 2,41 -34,47). Среди заболевших гриппом A/H1N1 аллель Т наблюдалась с частотой 0,4, тогда как среди здоровых -только 0,02, ее и следует считать предрасполагающей к вирусному заболеванию.

Рис. й. Частота встречаемости 8ЫР гена 1Ь-10 (С819Т) у здоровых лиц и больных гриппом А/НШ1 (2009).

Мы однократно проследили концентрацию IL-2 и IL-10 у больных гриппом A/H1N1 (2009) в ранние сроки заболевания - на 3-й день. В нижеприведенных таблицах представлены концентрации иитерлейкинов в зависимости от генотипа соответствующего полиморфизма.

Установлено, что у пациентов с гриппом A/H1N1 (2009), которые обладают генотипом Т/Т полиморфизма промотора гена 1L-2 (T330G), в крови выявляется максимальное содержание IL-2 - 22,4±12,4 пкг/мл (р <0,001).'У обладателей гетерозиготТ/G концентрация IL-2 несколько ниже по сравнению с гомозиготами Т/Т - 13,2±7,2 пкг/мл (р2<0,01 ). При носительстве генотипа G/G полиморфизма промотора гена IL-2 уровень транслируемого цитокина составлял всего 6,9±4,2 пкг/мл (р3<0,01 ).

Таблица 3

Содержание IL-2 в крови больных гриппом A/H1N1 (2009) в зависимости от генотипа полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G), пкг/мл (Медиана [25й; 75й перцинтили])

Генотип Здоровые лица Больные гриппом Р

ТАГ 0,6 [0,4;0,9] 22,4 [12,5,37,1] р, <0,001

T/G 0,9 [0,4;1,2] 13,2 [8,6:22,7] р,<0,001;р2<0д)1

G/G 1,1 [0,7;1,3] 6,9 [2,2:10,6] р,<0,001; р,<0,001; р3<0,01

Примечание: р, - статистическая значимость различий с контролем; р2 - статистическая значимость различий по сравнению с гомозиготами Т/Т; р3 - статистическая значимость различий по сравнению с гетерозиготами Т/О.

Таким образом, концентрация 1Ь-2 зависит от носительства генотипа промотора гена 1Ь-2 (ТЗЗОО) - наибольшее ее значение обнаруживается у гомозигот Т/Т, а наименьшее - у гомозигот СЮ.

Обнаружено, что при носительстве генотипа С/С БЫР полиморфизма гена 1Ь-10 (С819Т) определялась минимальная концентрация 1Ь-10 - 6,8±6,3 пкг/мл. У носителей гетерозиготного генотипа С/Т чаще встречались варианты с более высоким содержанием цитокина, хотя статистически показатели не отличались от гомозигот С/С. У больных гриппом А/НШ1 (2009), носителей генотипа Т/Т, определялась максимальная концентрация 1Ь-10 -19,7±5,6 пкг/мл, которая отличалась от показателей гомозигот С/С (р,<0,01).

Таким образом, концентрация 1Ы 0 зависит от носительства алле-

лей полиморфизма гена IL-10 (С819Т) при стимуляции иммунокомпе-тентных клеток при гриппе A/H1N1 (2009).

Мы проследили функцию лимфоцигарноттромбощшрной адгезии у больных гриппом A/H1N1 (2009) в целой группе и в зависимости от генотипов изучаемых полиморфизмов генов IL-2 иП>10 наЗ-й деньзаболевания.

Выявлено что в общей группе таких больных повышается лимфо-цитарно-тромбоцитарная адгезия, о чем свидетельствуют относительные и, особенно,, абсолютные показатели функции. Так, абсолютное число лимфоцитов, способных образовывать агрегаты с тромбоцитами составило 0,69+0,08x107л, тогда как у здоровых людей оно находилось на уровне 0,23±0,26x107л (р<0,001). -

Установлено, что у носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) при гриппе A/H1N1 (2009) абсолютный показатель ЛТА достигал 0,92+0,24x107л (р,<0,001) против 0,26±0,07х 107 л у здоровых лиц (р,<0,001 ). При этом степень ЛТА также превышала контрольные значения и составила 4,1±0,72, тогда как у здоровых она находилась на уровне 3,3+0,66 (р,<0,05).

При гриппе у обладателей генотипа T/G SNP промотора гена IL-2 (T330G) абсолютный показатель ЛТА оказался ниже, чем у гомозиготных носителей и соответствовал 0,65+0,21 х 107л (р,<0,05). При этом степень ЛТА не отличалась по своему значению от таковых у гомозигот Т/Т.

У тех больных гриппом, у которых выявлялся генотип G/G полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G), абсолютный показатель ЛТА оказался наименьшим - 0,63 (0,43 - 0,86)х 107л, статистически отличался от гомозигот Т/Т, но соответствовал значениям гетерозиготных носителей.

Таким образом, показатели функции лимфоцитарно-громбоцитар-ной адгезии при гриппе A/H1N1 (2009) зависят от носительства генотипов полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G). Наивысшая способность лимфоцитов вступать в контакт с кровяными пластинками выявляется у носителей генотипа Т/Т указанного полиморфизма.

У больных гриппом A/H 1N1 (2009), у которых выявляется генсггип С/С SNP гена IL-10 (С819Т), способность лимфоцитов контактировать с тромбоцитами оказалась максимальной. В крови этих пациентов содержалось 0,98+0,26x107л коагрегатов, тогда как у здоровых - 0,28+0,06x107л (Р, <0,001 ). Одновременно с этим при гриппе улиц с генотипом С/С степень ЛТА оказалась бол ем высокой 4,0±0,42, чем в контроле - 3,3+0,72 (р<0,05).

Примерно такое же количество лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов обнаружено и у носителей генотипа С/Т полиморфизма гена IL-10

(С819Т) при гриппе - 0,85±0,26х107л, против значений у здоровых -0,27±0,07х107л (р <0,001). При этом также степень ЛТА существенно отличалась от показателя здоровых лиц 4,1 ±0,31 и 3,2±0,7 (р,<0,001).

При носительстве гомозиготного генотипа Т/Т полиморфизма гена 1Ь-10 (С819Т) у пациеитов с гриппом способность лимфоцитов к адгезии кровяных пластинок оказалась ниже - 0,65±0,16х107л по сравнению с таким же показателем у обладателей генотипа С/С (р,<0,05), но существенно выше, чем в контрольной группе - 0,27±0,06х107л (р,<0,001).

Таким образом, у лиц с гомозиготным носительством генотипа С/ С показатели лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии превышают аналогичные значения у гомозигот Т/Т полиморфизма гена НЛО (С819Т).

Сопоставив содержание 1Ь-2 и 1Ь-10 и значения лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии в зависимости от генотипа соответствующих генов, выявлено, что, чем выше концентрация 1Ь-2 и чем ниже уровень 1Ь-10, тем больше показатель и степень ЛТА.

Таким образом, наличие аллельных вариантов Т полиморфизма промотора гена 1Ь-2 (ТЗЗОО), и Т полиморфизма гена 1Ь-10 (С819Т) предрасполагают к вирусу гриппа А/НШ1. Содержание цитокинов зависит от генотипа полиморфизмов: наибольшее значение 1Ь-2 обнаружено у носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена 1Г-2 (ТЗЗОО) и генотипа Т/Т полиморфизма гена 1Ь-10 (С819Т). Способность лимфоцитов к образованию агрегатов с тромбоцитами максимально возрастает у носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена 1Г-2 (ТЗЗОО) и генотипа С/С полиморфизма гена 1Ь-10 (С819Т). Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и полиморфизм

цитокинов, при хроническом вирусном гепатите С Проведение исследований контактных взаимодействий клеток показало, что у больных ХВГС снижена интенсивность адгезии кровяных пластинок и лимфоцитов. Так, у пациентов с ХВГС с высокой активностью процесса выявлялось 11,16% коагрегатов (р,<0,01), с умеренной активностью -12,0% (р <0,05), с минимальной активностью -11,6%(р<0,01), тогда как у здоровых людей этот показатель находился на уровне 15,0%.

Таким образом, при ХВГС снижаются адгезивные свойства лимфоцитов. Функциональный показатель лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии может быть результатом развития как Т-клеточного иммунодефицита, так и феномена лейкоцитарной депрессии, который часто сопровождает тяжелое течение заболевания (Витковский Ю.А., 1997). На первом этапе наших исследований проведен сравнительный ана-

лиз частот встречаемости генотипов и соответствующих аллелей ТЗЗОО гена И-2, С819Т и в! 082А гена 1Ь-10;а также СЗ 872Т гена С-реактивно-го белка у больных ХВГС и здоровых. На втором этапе - анализированы внутри групповые различия генотипов и аллелей исследуемых генов только у больных ХВГС в зависимости от степени активности и воспалительного процесса в печени и стадии фиброза. На третьем этапе - проведено сравнение также внутригрупповых различий у больных ХВГС, но с учетом вирусной нагрузки. И заключительный этап - анализ внутригрупповых различий генотипов и аллелей ТЗЗОО гена ГЬ-2, С8! 9Т и С1082А гена 1Ь-10, а также С3872Т гена С-реактивного белка у больных ХВГС без признаков цирроза и у больных с циррозом печени в исходе ХВГС.

Установлено, что в контрольной группе гомозиготный вариант Т/Т полиморфизма 1Ь-2 (ТЗЗОО выявлялся лишь у 3%, в/С- - 3% лиц, но превалировал гетерозиготный тип Т/С - 94% (рис. 8). У жителей Забайкалья, заболевших ХВГС, превалировал гомозиготный вариант Т/ Т - 34% (х2=16,53; р<0,001) (СЖ=0,69; 95% С1: 4,34-66,05).

При этом в группе больных с циррозом в исходе ХВГС частота варианта Т/Т полиморфизма гена 1Ь-2 (ТЗЗОО) оказалась выше почти в 1,5 раза, чем в группе больных с ХВГС с 1-Ш стадиями фибротичес-ких изменений, и почти в 15 раз по сравнению с группой контроля (%2=10; р<0,05) (011=32,33; 95% С1: 8,76-119,29).

У больных ХВГС преобладали гомозиготные варианты С/С гена 1Ь-10 (С819Т) - 60% (х2=8,76; р<0.05) (011=0,63; 95% С1:0,27-1,43) и А/А 1Ь-10 (О! 082А) - 62% (х2=2,5; р<0,05) ((Ж-22,14; 95% С1:7,75-63,27) (рис. 7,8).

□ Цирроз ® ХВГС

Ш Здоровые лица

Рис. 7. Частота встречаемости генотипов Э^'Р промотора гена !Ь-2 (ТЗЗОС) у здоровых резидентов, больных ХВГС и циррозом печени в исходе ХВГС.

80%

13 Цирроз

н хвгс

а Здоровые лица

60%

40%

20%

0%

Рис. 8. Частота встречаемости генотипов БМР гена 1Г-10 (С819Т) у здоровых резидентов, больных ХВГС и циррозом печени в исходе ХВГС.

Обнаружено, что у больных с циррозом печени частота аллели Т гена 1Ь-2 (ТЗЗОО) несколько выше, чем в группе с ХВГС без признаков цирроза и составила 0,71, а аллели О ниже - 0,29.

Среди пациентов с ХВГС аллель А полиморфизма гена II,-10 (01082А) встречалась с частотой 0,63, а с исходом болезни в цирроз - 0,25, тогда как среди здоровых она составила 0,08 (р<0,05). Напротив частота аллели в у больных ХВГС находилась на уровне 0,37 и повышалась в группе с циррозом печени до 0,75 против контрольных значений - 0,92 (р<0,05).

У больных ХВГС и с переходом процесса в цирроз частота аллели Т полиморфизма гена 1Ь-10 (С819Т) составила 0,30 и 0,34, что существенно выше, чем в контрольной группе - 0,02 (р<0,05). При этом встречаемость аллели С у пациентов оказалась ниже - 0,70 и 0,66 против 0,98 у здоровых лиц (р<0,05).

Выявлено, что степень вирусной нагрузки определяется в том числе и аллельными вариантами генов цигокинов. Установлено, что у больных ХВГС с высокой степенью вирусной нагрузки преобладали гетерозиготный вариант С/Т гена 11,-10 (С819Т) - 53% (х2=12,86: р<0,05) (ОК=3,09; 95% С1: 1,337.17) и гомозиг отный вариант О/О гена 1Ь-10 (0 1082А) - 77% (х2=1,63; р<0,05) (ОЯ=0,33; 95% С1: 0,11 -0,97) (рис. 9, 10).

Обнаружено, что у пациентов с низкой степенью вирусной нагрузки преобладают гомозиготные варианты С/С гена 1Ь-10 (С819Т) и А/А

гена 1И0 (ОЮ82А) - 60% (СЖ=0,64; 95% С1: 0,28-1,50) и 64% (СЖ=22,95; 95% С1: 7,88-66,80) соответственно (х2=0,54; х2=12,5; р< 0,05). При этом гетерозиготный вариант &А гена 11-10 в группе пациентов независимо от степени вирусной нагрузки обнаружен не был.

Рис. 9. Частота встречаемости генотипов гена 1Ь-10 (С1082А)у здоровых резидентов, больных ХВГС и циррозом печени в исходе ХВГС.

100% 80% 60% 40% 20% 0%

0 Высокая нагрузка

Низкая нагрузка ^ Здоровые лица

Рис. 10. Частота встречаемости генотипов БЫР гена 1Г-10 (С819Т) у больных ХВГС с разной степенью вирусной нагрузки.

У больных ХВГС с высокой и низкой степенью вирусной нагрузки частота аллели Т полиморфизма гена 1Т-10 (С819Т) составила 0,11 и 0,07 соответственно, что существенно выше, чем в контрольной группе - 0,02 (р<0,05). При этом встречаемость аллели С у пациентов оказалась ниже - 0,89 и 0,93 против 0,98 у здоровых лиц (р<0,05).

Выявлено, что среди пациентов с ХВГС при низкой концентрации РНК ВГС в сыворотке крови аллель А полиморфизма гена 1Ь~10 (ОЮ82А) встречалась с частотой 0,74, с высокой нагрузкой - в 8 раз реже. При этом среди здоровых она составила 0,08 (р<0,05). Напротиз частота аллели Ст у больных ХВГС с низкой вирусной нагрузкой находилась на уровне 0,26 и повышалась в 3,5 раза в группе пациентов с высокой вирусной нагрузкой, против контрольных значений - 0,92 (р<0,05).

100% -80% -60% -

40% 20% 0%

в/а С/А А/А

Рис. 11. Частота встречаемости генотипов гена 1Ь-10 (в 1082А) у больных ХВГС с разной степенью вирусной нагрузки.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что у пациентов с ХВГС и переходом патологического процесса в цирроз частота встречаемости аллельных вариантов полиморфизма генов медиаторов иммунного ответа - И-2 (ТЗЗОО), 1Ь-10 (С819Т) и 1Ь-10 (01082А) существенно отличается от здоровых лиц.

Установлено, что у больных с ХВГС концентрация 1Ь-2 зависит от носительства полиморфизмов гена 1Ь-2 (ТЗЗОО) и активности патологического процесса. Максимальное содержание 1Ь-2 обнаруживалось у носителей генотипа Т/Т с высокой активностью и составляло

29

| Ш Высокая нагрузка

Низкая нагрузка а Здоровые лица

42,6±15,3 пкг/мл, тогда как у здоровых при отсутствии антигенной стимуляции оно находилось на уровне 0,7±0,25 пкг/мл (р<0,001). У гетерозиготных носителей T/G полиморфизма гена IL-2 (T330G) концентрация цитокина существенно снижалась на 45,6%, чем отличалась от контрольных значений и гомозиготных пациентов Т/Т (р <0,001, р2<0,05). Больные, у которых выявлено гомозиготное носительство G/ G полиморфизма гена IL-2 (T330G) также демонстрировали низкий уровень цитокина - 16,4±6,76 пкг/мл в момент высокой активности (р<0,001,р2<0,05).

В момент минимальной активности концентрация IL.-2 у пациентов снижалась, однако ее значения не зависели от носительства генотипа полиморфизмов гена IL-2 (T330G).

Обнаружено, что в момент выраженной активности ХВГС уровень IL-10 оказался максимально высоким у больных-носителей генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (С819Т) - 118,9 [63,4;158,6] пкг/мл (в контроле - 0,8 [0,5;0,9] пкг/мл) (р <0,001).

Установлено, что у больных ХВГС, носителей полиморфизма гена IL-10 (G1082А), максимальная концентрация цитокина в момент высокой активности обнаруживается у носителей генотипа G/G - 13 8,6 [8 8,2 ; 171,1 ] пкг/мл, тогда как у обладателей генотипа G/A -на 60,2%. а А/А - на 77,3 % меньше (pj<0,001 ). В момент минимальной активности у этих пациентов также наибольшее содержание IL-10 обнаруживалось у носителей генотипа G/G - 65,7 [45,5:84,2] пкг/мл, ау лиц с генотипами G/Аи А/А- 27,2 [15,3;47,6] пкг/мл и 21,7 [12,6;34,8] пкг/мл соответственно.

Полученные результаты являются подтверждением роли 1L-2 и IL-10 в патогенезе поражения печени при хронической HCV-инфекции.

Известно, что облигатными участниками воспалительного процесса являются IL-10 и CRP, однако остается мало изученным влияние полиморфизма генов этих белков на модифицирование скорости фиб-рогенеза при ХВГС.

Мы изучили частоту SNP гена CRP (С3872Т) у больных с циррозом печени в исходе ХВГС. Установлено, что полиморфизм гена С-реактивного белка (С3872Т) среди здоровых характеризовался преобладанием частоты аллели С - 0,93, тогда как аллель Т встречалась с частотой 0,07 (х2=5,32; р<0,05). Генотип С/С выявлен в 92%, С/Т - 2%, Т/Т -6% случаев. У больных с циррозом печени мы не выявили аллели Т. Все пациенты оказались гомозиготами С/С (р<0,05) (рис. 12).

Таким образом, у больных с циррозом печени в исходе ХВГС на-

блюдается носительство только С-аллели и генотип С/С полиморфизма гена CRP (С3872Т).

Установлено, что генотип С/С полиморфизма С3872Т гена CRP встречается в подавляющем числе случаев развития фиброза печени. Так при i-й стадии фибротического процесса генотип С/С выявлялся в 82,5% случаев (х2=0,625; р<0,05) (C>R=0,41; 95% CI: 0,14-1,22), при Ш-ей - в 100% наблюдений (х2=10; р<0,05).

ЕЗ Здоровые лица

Н ХВГС I стадия фибрс-тических изменений И ХВГС III стадия фибротических изменений 0 Цирроз

Рис. 12. Частота встречаемости генотипов SNP гена С3872Т в гене CRP у больных ХВГС в зависимости от стадии фибротических изменений.

Таким образом, присутствие только С-аллели и генотипа С/С полиморфизма гена CRP (С3872Т) у пациентов с впервые выявленным ХВГС может предрасполагать к развитию более быстрого и выраженного фибротического процесса в печени и более быстрому развитию стадии цирротических изменений.

В результате исследования трех инфекционных заболеваний с бактериальной и вирусной этиологией, острым, хроническим и рецидивирующим течением - рожи, гриппа и ХВГС - установлены генетические полиморфизмы цитокинов 1L-2 и IL-10, а при ХВГС дополнительно и CRP, которые могут предрасполагать к развитию заболевания, обусловливать различное его течение. Установлено, как влияет носительство SNP 1L-2 (T330G), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) на продукцию соответствующих цитокинов и лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию при инфекционных заболеваниях. На основании полученных данных мы считаем, что общим иммунопатогенетическим звеном бактериальных и вирусных за-

болеваний является ось: гены 1Ь-2, 1Ь-10 - цитокины - лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. От ЭЫР гена зависит концентрация транслируемого цитокина, активирующего (1Ь-2) или тормозящего (1Ь-10) контактные взаимодействия лимфоцитов и кровяных пластинок. При этом баланс 1Ь-2 и 1Ь-10 отражается на миграции иммунокомпетентных клеток и направленности иммунного ответа при инфекционной патологии.

Для доказательства этого положения мы провели многофакторный регрессионный анализ, в который включили носительство генотипов единичных полиморфизмов генов 1Ь-2 и 1Ь-10, концентрацию соответствующих цитокинов и показатели лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

В таблицах 4 и 5 представлены результаты многофакторного регрессионного анализа параметров, оказывающих влияние на функциональную активность лимфоцитов контактировать с тромбоцитами.

Таблица 4

Коэффициенты регрессии в многофакторной модели влияния концентрации 1Ь-2 и генотипа гена 1Ь-2 (ТЗЗОО) на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию

Шаг Показатель beta* OR (95% Q) Р

1 Содержание цитокина IL-2 0,52+0,07 [4,8; 103] р=0,028

2 Генотип Т/Г гена IL-2 (T330G) 0,48 ±0,04 [3,9;78] р=0,034

Примечание: * - beta - регрессионный коэффициент.

Таблица 5

Коэффициенты регрессии в многофакторной модели влияния концентрации IL-10 и генотипа SNP гена IL-10 (С819Т) на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию

Шаг Показатель beta* OR (95% Q) Р

1 Содержание цитокина 1Ы0 0,4±0,04 (0,4!; 0,86] р=0,039

2 Генотип Т/Г гена 1Ы0 (С8191) 0,22±0,07 [0,07;0,58] p=0,02i

Примечание; * - beta - регрессионный коэффициент.

При задании показателя ЛТА в качестве прогнозируемого критерия выявлено, что наибольшей значимостью обладает концентрация 1Ь-

2 и IL-10. Мощность модели увеличивалась при добавлении данных о генотипах SNP гена IL-2 (T330G) и гена IL-10 (С819Т) в соответствующую модель.

Для построенного уравнения регрессии коэффициент детерминации R2>0,5 и величина F-критерия составила 8,45 с уровнем значимости р<0,05, что свидетельствует о высокой чувствительности и достоверности данной математической модели.

Для построенного уравнения регрессии коэффициент детерминации R,>0,5 и величина F-критерия составила 6,43 с уровнем значимости р<0,05, что свидетельствует о высокой чувствительности и достоверности данной математической модели.

Таким образом, с помощью многофакторного регрессионного анализа подтверждена правомочность нашего положения, и установлено наличие общего иммунологического звена в патогенезе инфекционных заболеваний с участием единичных полиморфизмов генов 1L-2 и IL-10, соответствующих цитокинов и лмфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

Полученные результаты могут послужить основой для разработки новых подходов к оценке риска, профилактике, прогнозировашпо развития болезни. Выявленные сведения о наличии полиморфизмов IL-2 (T330G), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A), CRP (С3872Т) могут быть включены в генетический паспорт индивидуумов и совместно с другими полиморфизмами использоваться для оценки риска развития рожи, гриппа и хронического вирусного гепатита С.

ВЫВОДЫ

1. У пациентов с первичной рожей превалирует гомозиготный вариант Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G), что в 2 раза выше, чем при рецидивирующем течении, и в 18 раз, чем в контрольной группе. У больных рожей с равной частотой встречаются аллели G и Т в участке T330G промотора гена IL-2 с преобладанием гетерозиготного варианта T/G, особенно при рецидивирующем течении заболевания. При первичной эритематозной форме рожи частота генотипа Т/Т выше почти в 1,5 раза, чем в группе больных с буллезно-геморрагической и в 20 раз по сравнению с контролем.

2. При первичной роже генотип С/Т полиморфизма IL-10 (С819Т) встречается в 1,5 раза реже, чем при рецидивирующей. Аллель Т выявлялась чаще при рецидивирующем течении заболевания, чем при первичном течении и среди здоровых лиц. Аллель А полимор-

физма1Ь-10 (G1082A) в 5 раз чаще обнаруживалась у пациентов с первичной и рецидивирующей рожей, а также у них чаще встречались генотипы А/А и G/A. Среди здоровых лиц частота аллели G в 10 раз чаще, и преобладает гомозиготное носительство G/G полиморфизма IL-10 (G1082A).

3. При роже усиливается продукция провоспалительных цитокинов IL-1 ß, IL-8, TNFa пропорционально степени тяжести заболевания. У пациентов с первичной и рецидивирующей рожей в 1-е сутки повышение концентрации IL-2 зависит от генотипа полиморфизма промотора его гена. При первичной роже у обладателей генотипа Т/Т максимально увеличивается концентрация IL-2. При рецидивирующей роже у обладателей генотипа Т/Т в первые сутки заболевания в 2 раза выше становится уровень IL-2 по сравнению со здоровыми. На 12-е сутки наблюдения у всех пациентов нарастает уровень IL-2 в крови: у носителей генотипа Т/Т полиморфизма IL-2 (T330G) при первичной роже в 7 раз, а при рецидивирующей - в 4 раза по сравнению с исходными значениями. У гетерозиготных носителей T/G его концентрация повышалась в 5 раз, а при рецидивирующей - в 3 раза. Наименьшие показатели содержания IL-2 наблюдались у больных первичной и рецидивирующей рожей - гомозиготных носителей G/G полиморфизма IL-2 (T330G).

4. У больных рожей независимо от се формы и течения снижается способность лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты. При эритематозной форме рожи показатель лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии уменьшается в 4 раза, а при эритематозно-буллезной - в 7 раз. При буллезно-геморрагической форме рожи средней тяжести показатель JITA снижается в 15 раз, а при тяжелой - в 20 раз по сравнению со здоровыми. При этом степень адгезии становится меньше в 2,5 раза. При роже увеличивается экспрессия тканевого фактора моноцитами периферической крови пропорционально тяжести заболевания.

5. Среди пациентов с гриппом A/H1NI (2009) чаще встречались носители генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) - в 48% случаев, тогда как среди здоровых - только у 3% резидентов. Обладатели гетерозиготного генотипа T/G среди больных выявлялись в 40% случаев, тогда как в контрольной группе - в подавляющем большинстве наблюдений - 94%. Аллельный вариант Т встречался с наибольшей частотой - 0,91 у заболевших гриппом A/H1N1 (2009). У здоровых лиц чаще выявляется гомозиготное носитель-

ство С/С полиморфизма IL-10 (С819Т) - в 70%. Среди пациентов больных гриппом A/H1N1 (2009), по сравнению с контрольной группой, гетерозиготы С/Т преобладали и составляли 50%. Лица, несущие гомозиготы Т/Т полиморфизма IL-10 (С819Т), в 7 раз больше обнаруживались среди больных по сравнению с контролем. При этом аллель Т наблюдалась с частотой 0,40, тогда как среди здоровых -0,02.

6. При гриппе A/H1N1 (2009), у пациентов с генотипом Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) в крови выявляется максимальное содержание 1L-2. У больных гриппом A/H1N1 (2009), носителей генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (С819Т), определялась минимальная, а у носителей генотипа Т/Т - максимальная концентрация IL-10.

7. У пациентов с гриппом A/H1N1 (2009) на 3-й день заболевания на фоне повышенного абсолютного числа лимфоцитов увеличивается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. У носителей генотипа Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) при гриппе показатель ЛТА в 4 раза, а степень адгезии - в 1,5 раза превышали значения у обладателей генотипа T/G и G/G и группы контроля. У больных гриппом A/H1N1 (2009), с генотипом С/С полиморфизма гена IL-10, способность лимфоцитов контактировать с тромбоцитами выявлялась наибольшей: показатель и степень ЛТА превышали контрольные значения и аналогичные параметры у носителей генотипа Т/Т.

8. У лиц, заболевших ХВГС, гомозиготный вариант Т/Т полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) встречался в 11 раз чаще, чем в контроле. У больных с циррозом печени частота аллели 'Г полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) в 1,5 выше, а аллели G - ниже, чем в группе больных без признаков цирроза. В группе больных с циррозом в исходе ХВГС генотип Т/Т полиморфизма гена IL-2 (T330G) выявляется в 1,5 раза чаще, чем в группе больных с ХВГС с I—III стадиями фибротических изменений и почти в 15 раз по сравнению с группой контроля. У больных ХВГС преобладали гомозиготные варианты С/С гена IL-10 (С819Т) и А/А IL-10 (G1082A). У больных ХВГС и с переходом процесса в цирроз частота аллели Т полиморфизма гена IL-10 (С819Т) в 15 раз выше, а аллели С - в 1,5 ниже, чем в контрольной группе. Среди пациентов с ХВГС частота выявления аллели А полиморфизма гена IL-10 (G1082A) в 8 раз, ас исходом болезни в цирроз - в 3 раза выше, чем в группе здоровых. Напротив, частота аллели G у больных ХВГС в 2,5 раза, а при циррозе печени - в 1,3 раза ниже контрольных значений.

9. Генотип С/С полиморфизма С3872Т гена CRP встречается в подавляющем числе случаев развития фиброза печени: при 1-й стадии - в 82,5%, а при Ш-ей - в 100% наблюдений, тогда как в контроле - у 80% обследованных. Гетерозиготы С/Т и гомозиготы Т/Т встречались гораздо реже и только при фибротическом процессе 1-й стадии. В терминальной стадии развития фиброза обнаруживается только носительство генотипа С/С. У больных с циррозом печени аллель Т не выявляется.

10. У больных ç ХВГС максимальное содержание IL-2 обнаруживалось у носителей генотипа Т/Т, а минимальное - у гомозиготных носителей G/G полиморфизмов промотора гена IL-2 (ТЗ 3 0G) в период биохимической активности. В период биохимической ремиссии концентрация IL-2 у пациентов снижалась, однако ее значения не зависели от носительства генотипа полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G). В период биохимической активности ХВГС концентрация IL-10 достигает максимально высоких значений у больных-носителей.генотипа С/С полиморфизма гена IL-10 (С819Т). Максимальная концентрация IL-10 в период биохимической активности обнаруживается у носителей генотипа G/G полиморфизма гена IL-10 (G 1082А). В период биохимической ремиссии наибольшее содержание IL-10 обнаруживалось у носителей генотипа G/G. На протяжении всего периода биохимической активности и ремиссии у больных ХВГС снижена адгезия кровяных пластинок и лимфоцитов.

11. Общим иммунопатогенетическим звеном бактериальных и вирусных заболеваний является ось: гены IL-2, IL-10 - соответствующие цитокины - лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. От SNP гена зависит концентрация транслируемого цитокина, активирующего (IL-2) или тормозящего (IL-10) контактные взаимодействия лимфоцитов и кровяных пластинок. При этом баланс IL-2 и IL-10 отражается на миграции иммунокомпетентных клеток и направленности иммунного ответа при инфекционной патологии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Монография:

I. Емельянова, А.Н. Рожа (патогенез, особенности течения) /А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский. - Томск ; Чита : Иван Федоров, 2014. -132 с.

Статьи, опубликованные в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ

1. Анализ вспышки высокопатогенного гриппа A (H1N1) в Забайкальском крае в 2009 г. / Л.Б. Кижло, А.Н. Емельянова [и др.] // Журнал Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2011. - №6. - С. 50-52.

2. Емельянова, А.Н. Содержание противовоспалительных цитокинов, экспрессия тканевого фактора лейкоцитами и гемостаз у больных рожистым воспалением / А.Н.Емельянова, B.C. Едемская, Ю.А. Вит-ковский // Дальневосточный медицинский журнал. - 2008. - №3. -С.28-30.

3. Емельянова, А.Н. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и содержание противовоспалительных цитокинов у больных с буллезно-геморрагической формой рожи / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский / / Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - 2009. - №2. -С.23-25.

4. Емельянова, А.Н. Провоспалительные цитокины, лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и экспрессия тканевого фактора у больных рожистым воспалением / А.Н. Емельянова // Бюллетень СО РАМН. -2009.-№5(139).-С. 117-121.

5. Емельянова, А.Н. Эффективность препарата интерлейкина-2 в комплексной терапии рожи / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Инфекционные болезни. - 2011. - Т.З, №1. - С. 66-68.

6. Емельянова, А.Н. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и агрегация тромбоцитов у больных рожей / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Казанский медицинский журнал. - 2012. - №2. - С. 216-220.

7. Емельянова, А.Н. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и содержание провоспалительных цитокинов у больных рожей / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Сибирский медицинский журнал (Томск). - 2012. - №1. - С. 57-59.

8. Емельянова, А.Н. Генетический полиморфизм интерлейкина - 10 и CRP у больных с циррозом печени вирусной этиологии / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Сибирский медицинский журнал. -2013. - №4. - С. 39-41.

9. Емельянова, А.Н. ЛТА у больных рожей / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Медицинская иммунология. - 2013. - Т.15, №2. - С. 163-168.

10. Емельянова, А.Н. Полиморфизм генов цитокинов IL-2 (T330G), 1L-10 (С819Т), IL-10 (Gl082А) при хроническом вирусном гепа-

титеС / А;Н. Емельянова, Ю.А. Виткоаский // Молекулярная медицина. - 2013. - №3. - С. 41-44.

11. Емельянова, АН. Полиморфизм промотора гена интерлейкина - 2 (T330G) при роже / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Врач-аспирант. - 2013. - №4.1 (59).-С. 165-169.

12. Емельянова, А.Н. Генетический полиморфизм промотора гена IL-2 (T330G) и его влияние на содержание интерлейкина - 2 в крови больных рожей [Электронный ресурс] /А.Н. Емельянова, A.C. Емельянов, Ю.А. Витковский // Забайкальский медицинский вестник. -2014. - №2. - С. 1-5. - Режим доступа: http://medacadem.chita.ru/ zmv (4 дек. 2014)

13. Коррекция состояния иммунитета и гемостаза при рожистом воспалении / А.Н. Емельянова [и др.] // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2008. - №1. - С. 93-95.

14. Случай тяжелого течения заболевания, вызванного штаммом вируса гриппа А/Н INI, у молодой женщины в послеродовом периоде / A.A. Петров, А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни. - 2012. - Т.10, №2. - С. 90-93.

Прочие:

15. Анализ полиморфных вариантов генов цитокинов у пациентов при хронической HCV- инфекции / А.Н. Емельянова [и др.] // Журнал инфекционной патологии. - 2013. - Т.20, №1. - С. 58-60.

16. Влияние полиморфизма генов на клиническое течение гриппа А (Н1 N1) / А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни : материалы III Ежегодного конгресса по инфекционным болезням. -2011. - Т.9, Прил. №1. - С. 118.

17. Влияние полиморфизма промотора гена IL-2 (T330G) на содержание интерлейкина-2 в крови больных рожей / А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни : материалы VI ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. - М., 2014. - Т. 12, Прил. №1.-С. 96-97.

18. Генномолекулярный метод в диагностике Инфекционных заболеваний/ Л.Б. Кижло, А.Н. Емельянова [и др]. // Академический журнал Западной Сибири. - 2012. - №6. - С. 58-59.

19. Емельянова, А.Н. Изменение лимфоцитарно-тромбонитарной адгезии у больных рожей / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Забайкальский медицииский вестник. - 2010. -№2. - С. 17-20.

20. Емельянова, А.Н. Генетический полиморфизм IL-10 и CRP при цир-

розе печени вирусной этиологии / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковс-кий // Материалы I съезда терапевтов Забайкальского края. - Чита,

2013. -С. 119.

21. Емельянова, А.Н. Полиморфизм гена IL-10 (С819Т) при хроническом гепатите С / А.Н. Емельянова, Д.А. Сахарова, Ю.А. Витковс-кий // Инфекционные болезни : материалы V ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. - М., 2013. - Т. 11, Прял. №1.-С. 136.

22. Емельянова, А.Н. Полиморфизм генов IL-10 (С819Т) и IL-10 (G10 82А) при ХВГС у жителей Забайкальского края / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Материалы I съезда терапевтов Забайкальского края. - Чита, 2013. - С. 29-32.

23. Емельянова, А.Н. Роль полиморфизма гена IL-10 (С819Т) в развитии рецидивирующего течения рожи / А.Н. Емельянова, Л.Б. Киж-ло //Инфекционные болезни : материалы V ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. - М., 2013. - Т.11, Прил.№1,-С. 136-137.

24. Емельянова А.Н. Генетический полиморфизм CRP у больных с циррозом печени вирусной этиологии / А.Н. Емельянова, A.C. Емельянов, Ю.А. Витковский // Актуальные вопросы инфекционной патологии : материалы Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвящ. 200-летию Казанского гос. мед. ун-та и 90-летию каф. инфекционных болезней КГМУ (Казань, 8-10 окт. 2014 г.). -Казань, 2014.-С. 27.

25. Емельянова, А.Н. Прогностическое значение полиморфных вариантов генов цитокинов в развитии цирроза печени как исхода хронического вирусного гепатита С / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Материалы II съезда терапевтов Забайкальского края. - Чита,

2014.- С. 23-25.

26. Значение комплексной оценки уровня показателей перекисного окисления липидов и функционального состояния иммунной системы при роже / А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни : материалы II Ежегодного конгресса по инфекционным болезням. -М., 2010. - Т.8, Прил. №1. - С. 105.

27. Иммуногенетическис механизмы рожи / А.Н. Емельянова [и др.] / / Журнал инфектологии : материалы третьего конгресса Евро-азиатского общества по инфекционным болезням. - Екатеринбург, 2014. - Т.6, №2. - С. 37.

28. Клинико-эпидемислогически'е особенности течения циррозов печени различной этиологии / А.Н. Емельянова [др;] // Инфекционные болезни : материалы науч.- практ. конф. гепатошколы. - Иркутск, 2007. - С. 15-18.

29. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и содержание провоспали-тельных цитокинов при хроническом вирусном гепатите В / А.Н. Емельянова [и др.] // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - 2011.-№18. - С. 17-20.

30. Новая неинвазивная методика диагностики фиброза печени / Л.Б. Кижло, А.Н:1 Емельянова [и др.] // Медицинские технологии и оборудование : материалы межрегион, науч.-практ. конф. (Чита, 14 нояб. 2012 г.). - Чита, 2012. - С. 27-30.

31. Особенности клиники и лабораторных показателей пандемического гриппа А (НШ1) / Е.В. ШунЯева, А.Н. Емельянова [и др.] //Дальневосточный журнал инфекционной патологии.-2010. -№17.-С. 11-14.

32. Особенности лабораторных показателей и клиническая характеристика гриппа у беременных / А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни : материалы IV ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. - М., 2012.-Т. 10, Прил. №1,-С. 132.

33. Особенности течения гриппа А (НШ1) в условиях Забайкалья / Е.В. Шуняева, А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни : материалы II ежегодн. Всеросс. конгр. по инф. болезням. - М., 2010. - Т.8, Прил. №1. - С. 377.

34. Особенности течения пандемического гриппаА(НШ1) на территории Забайкальского края в эпидемические сезоны 2009-2010 и 20102011 / Л.Б. Кижло, А.Н. Емельянова [и др.] // Осложнения гриппа и ОРЗ в практике терапевта, тактика на амбулаторном этапе: материалы I и II региональной науч.-практ. конф. - С-Пб., 2012. - С. 50-51.

35. Оценка влияния состояния ПОЛ на иммунный статус больных парентеральными ВГВ и С/А.Н. Емельянова [и др.]//Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней : материалы VII Российского съезда инфекционистов. - Нижний Новгород, 2006. - С. 117.

36. Полимеразная цепная реакция в диагностике инфекционных заболеваний / А.Н. Емельянова [и др.] // Медицинские технологии и оборудование: материалы межрегион, науч.-практ. конф. (Чита, 14 нояб. 2012 г.). - Чита, 2012. - С. 24-27.

37. Прогностическое значение генетического полиморфизма молекул 1Ь-2 (ТЗЗ(Ю), 1Е-10 (С819Т)и1Ь-10 (ОЮ82А) у больных рожей в Забайкальском крае/ А Н. Емельянова [и др] // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. -2012.-№21.-С. 159-163.

38. Сахарова Д.А. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных хроническим вирусным гепатитом С/ Д.А. Сахарова, Ю.А. Витков-ский, А.Н. Емельянова // Гепатология сегодня : сборник XVIII Рос. конгр.-М..2013.-С. 41.

39. Сахарова, Д.А. Особенности клеточного иммунитета при хроническом гепатите С / Д.А. Сахарова, йитковский Ю.А., Емельянова А.Н. /У Инфекционные болезни : материалы V ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. - М., 2013.-T.il, Прил. №1.-С. 358.

40. Случай висцеральной формы Эпштейн-Барр вирусной инфекции у подростка / А.Н. Емельянова [и др.] // Сибирский медицинский журнал. - 2014. - Т.29, №1. - С. 64-68.

41. Содержание провоспалительных цитокинов, экспрессия тканевого фактора лейкоцитами и гемостаз при инфекционной патологии / А.Н. Емельянова [и др.] // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины : материалы Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 55-летию Читинской гос. мед. академии (Чита, 1-2 окт. 2008 г.). - Чита, 2008. - С. 9-10.

42. Содержание противовоспалительных цитокинов, экспрессия тканевого фактора лейкоцитами и гемостаз при вирусных гепатитах / А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни: материалы науч.-практ. конф. гепатошколы. - Иркутск, 2008. - С. 52-56.

43. Фиброскан - неинвазивная методика диагностики фиброза печени / Д.А. Сахарова, А.Н. Емельянова [и др.] // Академический журнал Западной Сибири. - 2012. - №6. - С. 17.

44. Цитокины в лечении хронических вирусных гепатитов С /' А.Н. Емельянова [и др.] // Инфекционные болезни : материалы науч.- практ. конф. гепатошколы. - Иркутск, 2007. - С. 9-15.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

JITA - лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия

РНК ВГС - рибонуклеиновая кислота вируса гепатита С

ХВГС - хронический вирусный гепатит С

CI - доверительный интервал

CRP - С-реактивный белок

IL - интерлейкин

OR - отношение шансов

SNP - однонуклеотидный полиморфизм

TNF - фактор некроза опухолей '

Thl -Т-хелпер 1-го клона

Th2 - Т-хелпер 2-го клона

Лицензия ИД № 03077 от 23.10.00. Подписано в печать 16.01.2015. Бумага офсетная. Формат 60 х 84 Чы. Усл.печл - 2,0 Тираж 100. Заказ № 5/2015.

Отпечатано в редакционно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, уп. Горького, 39 а.