Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Гистохимия АТФаз капиллярного русла матки крыс при комбинированном действии лазерного облучения и женских половых органов

>|ШИ^Т|РСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВЛАДИВОСТОКСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

на правах рукописи УДК 59Г. 415:59Г. 466:615.849.19: 615.337

НЕДОБЬШЬСКАЯ Юлия Петровна

ШСТОХИМИЯ АТФаз КАПИЛЛЯРНОГО РУСЛА МАТКИ КРЫС ПРИ КОМБИНИРОВАННОМ ДЕЙСТВИИ ЛАЗЕРНОГО ОБЛУЧЕНИЯ И ЖЕНСКИХ! ПОЛОВЫ1 ГОРМОНОВ

Г4.00.23 - гистология, цитология и эмбриология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ГС!! 'Г! г

1994

Работа выполнена во Владивостокском государственном медицинском институте

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор В.М. Черток

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Б.Я. Рыжавский

доктор медицинских наук, профессор Б.В. Шерстюк

Ведущее учреждение: НИИ лазерной хирургии Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится "Зс?" Р/¿¿Р^/ьЛ 1994 г. на заседании специализированного совета Д 084.24.01 при Владивостокском государственном медицинском институте /690600, г.Владивосток, проспект Острякова, 2, тел. 25-Г7-06/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокско: государственного медицинского института /г. Владивосток, проспект Острякова, 2/.

Автореферат разослан 'Ф' " 1994 г.

7/

Ученый секретарь специализированного совета доцент

лолоденко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Использование лазерной техники достаточно прочно вошло в различные области медицины и является актуальным не только для хирургической, но и для терапевтической практики.Такие оптические свойства лазерного излучения, как высокая монохроматичность, когерентность, устойчивая поляризация, позволяют добиться высокой концентрации световой энергии во времени и пространстве и передачи ее на биологические объекты /козлов В.И. с соавт., 1989; Максимов В.А. с соавт., 1989; Van Den Ёлочек, Ue-vens, 1986/.

Однако многие аспекты использования лазера для лечения тех или иных заболеваний пока не выяснены. Несмотря на огромный интерес к проблеме клинического применения низкоинтенсивного лазерного излучения, в этой области наблюдается явное отставание фундаментальных исследований от прикладных /Древаль В.И. с соавт., 1982; Зубкова С.М. с соавт., 1976; Шахмейстер С.М. с соавт., 1972/. Это привело к тому, что усовершенствование методов низкоинтенсивной лазеротерапии в большинстве случаев носит чисто эмпирический характер, что весьма суживает область ее применения.

В работах последних лет /Немков Ю.К., 1991; Черток А.Г., с соавт., 1990; Черток В.М. с соавт., 1992/ показана высокая чувствительность капилляров матки к действии низкоинтенсивного лазерного излучения. Стимулируя транскапиллярный обмен, лазерный свет способствует улучшении трофики тканей, оказывая положительное влияние на лечение большинства дегенеративно-дистрофических заболеваний женской половой сферы /Полонский А.К., 1984/.

Вместе с тем, зачастую не учитывается, что реакция капилляров матки на низкоинтенсивное лазерное облучение, действующее на фоне медикаментозной и особенно гормональной терапии, может существенно меняться. Главную роль в этих изменениях могут играть транспортные ферменты капилляров /Мотавкин П.А. с соавт., 1977; Черток В.М. с соавт., 1991/, среди которых наименее изученными оказались АТФазы. Принимая непосредственное участие в переносе химических веществ против градиента концентрации, они существенно влияют на интенсивность транспорта веществ через стенку капилляров /Тарусов Б.Н., 1977; 1980/.

Цель исследования. С помощью гистохимических и морфометричес-ких методов выявить основные закономерности реакции капилляров матки на лазерное облучение, действующее на фоне предварительного введения женских: половых гормонов.

В работе решались следующие задачи:

1. Изучить строение микроциркуляторного русла матки неопери-розанных и овариоэктомированньк животных.

2. Исследовать преобразования капиллярного русла матки при воздействии половых стероидов: эстрогенов и прогестинов.

3. Изучить особенности реакции капиллярного русла матки при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения различной длительности световой экспозиции.

4. Изучить преобразование капиллярного русла матки при совместном воздействии лазерного облучения и половых стеровдов.

Научная новизна. В работе впервые представлена сравнительная характеристика АТФаз капиллярного русла матки неоперированных и овариоэктомированных животных. Морфогистохимическими и морфомет-рическими методами изучены преобразования капиллярного русла матки при воздействии, стероидных гормонов, низкоинтенсивного излучения и преобразования активности АТФаз при лазерном облучении на фоне действия кенских. половых гормонов. Новыми являются данные о реакции транспортных ферментов стенки капилляров на введение ова-риальных гормонов. При этом определены их гистохимические признаки, величина активности ферментов, суммарная длина, площадь обмеь ной поверхности и средний показатель активности фермента обменной поверхности капилляров /СПАЛ/ в эндометрии.

Впервые получены материалы о зависимости величины гистохимических показателей, использованных для характеристики капиллярного русла матки, от примененных гормонов и длительности лазерной экспозиции.

Впервые представлены данные о качественной и количественной перестройке структурно-функциональных показателей сосудисто-капиллярного русла латки при комбинированном воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения и венских половых гормонов. Показано, что реакция капилляров матки на лазерный свет во многом зависит от присутствия гормонов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные о морфогистохимии капиллярного русла дополняют и детализируют имеющиеся представления о микроциркуляторном русле матки. Вносят определенный вклад в изучение влияния овариальных гормонов на процессы проницаемости стенки капилляров. Результаты исследования преобразования капиллярного русла матки при воздействии овариальных. гормонов и лазерного излучения представляют интерес для специалистов экспериментальной и клинической медицины, указывают на необходимость учитывать полученные данные при проведении лечебных и профилактических, мероприятий в гинекологической практике.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Выраженность изменений морфогист-^химических показателей капилляров эндометрия матки крыс зависит от длительности лазерной экспозиции.

2. Качественные и количественные изменения микроциркуляторно-го русла зависят как от фермента, использованного для выявления капилляров, так и от вводимого гормона.

3. Введение гормональных препаратов перед облучением изменяет реакцию капиллярного русла, которая отличается от полученных при раздельном использовании гормональных препаратов и лазера.

4. При комбинированном воздействии лазера и гормонов более существенные изменения морфогистохимических показателей выявляются при использовании фолликулина.

Апробация диссертации. Материалы диссертации доложены на заседаниях Приморского отделения ВНОАГЗ /Владивосток, 1993, 1994/, Всероссийских научных конференциях "Актуальные вопросы теории и практики физической медицины" /Иваново, 1993/, "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов и тканей человека и животных" /Саратов, 1993/, на научно-практических конференциях "Здоровье и болезни человека на Дальнем Востоке" /Владивосток, 1993/, "Проблемы клинической, профилактической и экспериментальной медицины" /Владивосток, 1994/.

Публикации. По теме диссертации опубликовано Ю печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа содержит 183 страниц машинописного текста, 7 таблиц, 42 рисунков, включающих 34 микрофотографий и 16 графиков. Указатель литературы представлен 162 работами отечественных и 106 работами иностранных авторов. Диссертация изложена на русском языке.

'ДАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучено микроциркуляторное русло эндометрия аналогичных, учаса ков обеих маточных труб у 251 белой беспородной крысы. Животных, забивали декапитацией под тиопен^аловым наркозом из расчета 70 мг/кг /Батраков Г-Е., Кудрин А.Н., 1979/.

Экспериментальное исследование проводилось на двух группах жи вотных: неоперированных и овариоэктомированных крысах. У интакт-ных животных использовали образцы, взятые у половозрелых крыс, находящихся в стадии диэструс. Фазу эстрального цикла определяли путем изучения вагинальных смывов, окрашенных. 5%-ным раствором метиленового синего. Предварительное исследование вагинальных мазков проводили в течение 3 недель. Взятие материала осуществлю ли в последней<[ Фазе диэструса.

Для изучения изменений у овариоэктомированных животных исполь зовали крыс, которым в асептических условиях проводилось оперативное удаление обоих яичников. В качестве контроля использовались ложнооперированные животные. Перед экспериментальным исследованием ожидали полного заживления послеоперационного рубца в течение 7-10 дней.

С целью изучения морфометрических показателей, характеризующи транспортную активность капиллярного русла матки в зависимости о длительности лазерного излучения, проведено исследование на двух группах половозрелых белых крыс / неоперированной и овариоэктоми рованной/. Животным однократно облучали накожные биологически активные точки Я^Х!!!/12X1X1/ в правой паховой области, связанны с регуляцией функций матки / Нуос1о, 1975/, в течение I, 15, 30 мин. Для исследования капилляров на стороне, противоположной облучению, у кахдой экспериментальной крысы параллельно изучали аналогичный облученному участок левого рога матки.

Источником низкоэнергетического лазерного излучения служил оптический квантовый генератор ЛГН-105 с гелий-неоновой активной средой, работающей в непрерывном режиме с длиной волны 632,а нм и мощностью 2 мВт. Мощность излучения контролировали измерителем средней мощности и энергии лазерного облучения ИЧ0-2Н.

Для изучения изменений капилляров двум группам животных, за I - I,о. часа до взятия материала вводили женские половые гормоны. Животные одной группы получали 1%-ный масляный раствор прогестерона из.расчета 30 мг/кг массы тела /Попова Л.А., 1989/, животные второй группы - Фолликулин 0,05%-ный масляный раствор из расчета 450 ед /Абусуев С.А., Г97С/. Исследование проводилось на неоперированньсс и овариоэктомированных животных. Для исключения реакции микрососудов на инъекцию частз животных контрольной группы вводили 0,3 мл стерильного оливкового масла.

Для изучения изменений сосудов при комбинированном воздействии лазерного излучения и женских половых гормонов неоперирован-ным и овариоэктомированным животным за I час до начала облучения вводили масляные растворы: I группе - фолликулин /450 ед/, 2-й -прогестерон /30 мг/кг/. Животным облучали биологически активные точки матки в течение I, 15, 30 мин. При этом учитывались данные О.Н. Савченко с соавт. /1992/, что через 30 мин после введения препаратов их уровень в крови достоверно повышается и остается постоянным в течение двух часов.

Все животные контрольных и экспериментальных групп содержались вместе в стандартных условиях вивария. Учитывая данные о влиянии биоритмов на активность ферментов, взятие и обработку материала проводили в одно и то же время между 16 и Ш часами.

Гистохимическое исследование капиллярного русла проводили на криостатных срезах толщиной 20 мкм, приготовленных из нефиксированного, свежезамороженного материала, взятого непосредственно после декапитации животных. Выявляли активность транспортных фер-лентов: Ч -АТФазу, Са-АТФазу и Н-АТФазу. Ч -АТФазу /КФ 3,6.1.4./ з стенке сосудов определяли методом Коемд, /1973/. Образцы

тканей выдерживали в инкубационной среде 15 мин при 37 С /рН7,3/. :а-АТ'г>азу /к5 3.6.1.3/ в стенке сосудов определяли методом Р^у^ц-.а. Н«А*1ап,/19о5/ в модификации Моу1С.о?? еЬ 0.1., /1961/. Образ-!Ы тканей чкцор-.тааи з инкубат:ончо,- сх-де 25 мин при 37 С

/рН 9,2/. Н-АТфазу /КФ 3.6.1.3./ в стенке сосудов определяли методом Вахштейна и Мезеля /1962/ в модификации коеи.^,\/»а\., /1970/. Образцы тканей выдерживались в инкубационной среде 30 ми* при 37 С /рн 6,4/.

При изучении капиллярного русла матки животных определяли в эндометрии следующие метрические параметры: а/ средний диаметр капилляров; б/ длину капиллярного русла или относительную плотность капилляров в единице объема вещества органа /Блинков С.М., Моисеев Г.Д., 1961/, с использованием формулы для неравномерного распределения капилляров в тканях органов; в/ площадь обменной поверхности капилляров в I мм3 ткани; г/ оптическую плотность продукта гистохимической реакции /активность фермента/. Цитоспек-трофотометрию плотности преципитата,отклс^ывающегося в стенке мш рососудов при гистохимической реакции, осуществляли на сканирующем, интегрирующем монохроматическом микроденситометре " М85А". В каждом из 30 капилляров измеряли 7 точек, площадь зовда на препарате составляла 5,2 мкм^ при увеличении объектива микроскопа 40; д/ средний показатель активности фермента обменной поверхности капилляров /СПАД/. Значения СПАЛ определяли как произведение величины площади обменной' поверхности капилляров и средних значений активности фермента.

Количественные данные обрабатывали методом вариационной статис тики /Автавдилов Г.Г., 1990; Непомнящих Л.М. с соавт., 1981/. Оценку и сравнение средних величин проводили с учетом вариабельности первичных измеряемых объектов и индивидуальной изменчивости признака в пределах организма /Катинас Г.С. с соавт., 1969; Потапова И.Г. с соавт., 1983/. При проведении морфометрических исследовании особое внимание обращалось на соблюдение строгой стандартизации условий забора, подготовки и обработки материала для изучения.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I

Проведенные нами исследования показывают, что сосудистые сети с положительной реакцией на АТФазы определяются во всех оболочка матки, но лучше всего они выражены в эндометрии. Выявлены сосуды различного типа, которые,анастомозируя между собой, образуют в эндометрии густые сплетения.

Об отличии гистоэнзимологических. характеристик капилляров, выявленных Н-АТФазой, Мд-АТФазой, свидетельствуют результаты морфометрии этих сосудов. К числу наиболее информативных морфологических параметров микрососудов помимо активности ферментов относятся их суммарная длина и средний диаметр /Козлов В.И. с соавт., 1984; 1986; Куприянов В.В. с соавт., 1975/. Именной величиной этих показателей определяется функциональное состояние кровеносного русла. Анализ статистических данных, с необходимым уровнем достоверности показывает различия в значениях важнейших показателей, характеризующих состояние кровеносного русла, в частности его пропускную способность, величину рабочей поверхности, интенсивность обменных процессов. Установлено, что наибольший диаметр капилляров определяется в эндометрии среди капилляров, маркированных Са-АТФазой /Р<0,05/, наименьший - Н-АТФазой /Р< 0,001/. Та же зависимость прослеживается при изучении таких, параметров, как площадь обменной поверхности и СПАП. Показатели капилляров, выявленных с помощью т,Ц-АТФазы, занимают промежуточное положение.

Существенную роль в регуляции функций транспортных ферментов капилляров играют гормоны яичников. Подтверждением этому служат наша наблюдения организации капиллярного русла эндометрия после овариоэктомии. Удаление яичников вызывает значительное снижение в стенке сосудов активности всех исследованных АТФаз, а также других метрических показателей /Р<0,01-0,001/.

Не только авариоэктомия способна вызывать преобразования капиллярного русла, но и введение стероидных половых гормонов. Изменения морфогистохимических характеристик сосудов в значительной мере зависят от использованного гормона, наличия или отсутствия яичников, а также от фермента, использованного для выявления капилляров. Так, введение прогестерона неоперированным животным вызывает снижение активности ферментов, более выраженное у капилляров, маркированных Са-АТ'Базой /Рс0,05/. У овариоэктомирован-ных животных тот же гормон увеличивает активность ферментов, особенно при использовании Ч-АТФазы и Са-АТФазы /Р<0,05-0,01/. Так же резко уменьшаются у интактннх животных и другие метрические показатели: средни? диаметр капилляров /Р<0,001/, площадь обменной поверхности /°<0,0[-0,00Г/, СПАП /Р<0,001/. У крыс с удаленными яичниками, наоборот, прослеживается четкая тенденция к увеличению показателей /Р<0 ,П[-(),00 [/.

Введение фолликулина неоперированнш животнш снижает активность ферментов при использовании всех видов АТФаз. Наиболее чувствительна к введению гормона М^-АТФаза /Р<0,05-0,01/. У овариоэ: томированных животных наблюдается увеличение активности ферменто] /Р<0,05-0,01/.

Средний диаметр капилляров., независимо от группы животных, увеличивается. Наиболее чувствительна к введению гормона у интак ных животных Н-АТФаза /РсО.ООХ/, у овариоэктомированных -АТФаза /Р<0,01-0,001/.

В отличие от диаметра сосудов, плотность капилляров у неопери-рованных животных имеет тенденцию к снижению /Р<0,001/, а у овар; оэктомированных животных отмечается резкое увеличение суммарной длины капиллярного русла /Р<0,001/. Аналогичная зависимость отмечается и в изменениях таких параметров, как площадь обменной поверхности и СПАЛ.

Таким образом, если введение фолликулина и прогестерона у кры с сохраненными яичниками вызывает снижение морфогистохимических показателей капиллярного русла, то исследуемые гормоны у овариоэ томированных - увеличение.

Столь существенные различия в показателях неоперированных и овариоэктомированных дивотных, возможно, заключаются, в том, что дополнительное введение стероидных гормонов к уже имеющемуся соб ственному гормональному фоцу значительно изменяет липидный слой биомембран и приводит к конформационным изменениям самого фермен та, которые могут быть вызваны, в конечном счете, изменением жид ко-кристаллического состояния мембраны, в которую встроена АТФаз, /Ясуо Кагава, 1985; Хухо Ф., 1990/. В работе Н.Ю. Ткачевой /1993. показано, что при введении как эстрогенов, так и прогестинов изменяется спектр липидов и фосфолипидов плазматических мембран кл ток матки крыс.

Как известно, не только эндогенные, но и экзогенные раздражители способны значительно влиять на функции микроциркуляторного русла матки /Немков Ю.К., 1991; Черток А.Г., 1935; Черток А.Г. с соавт., [989/. Одним из таких раздражителей может быть излучение гелий-неонового лазера.

Установлено, что дозозависимая реакция организма на клеточног. и тканевом уровнях находится в сравнительно узком интервале. Г1р1 вышение оптимальной дозы фотостимуляции ведет к появлению альтерирующих поражений клеток и органов /Козлов В.И., 1989; Немкив Ю. К., 1991; Черток В - 'Л -, Ко^иба А.й., 19ЭЗ/.

Наши данные свидетельствуют об исключительно высокой чувствительности АТФаз к действию лазерного света, вместе с тем, выраженность изменений морфологических показателей во многом зависит от продолжительности облучения, условий проведения эксперимента, а также от энзима, использованного для гистохимического выявления капилляров. Так, при воздействии лазером на накожные биологически активные точки неоперированных животных в течение 1-30 мин достоверно не изменяется активность Н-АТФазы /Р>0,05/, плотность отложения продукта реакции Mg-АТФазы нарастает с первой по 15 мин воздействия, активность Са-АТФазы достоверно не изменяется вплоть до 30 мин облучения, когда происходит снижение показателя /Р<0,05/.

Местом приложения непосредственного влияния лазерного излучении на микрососуды является сократительный аппарат гладких миоцитов. Им присуща спонтанная активность, которая возникает в результате нестабильности мембранного потенциала. Благодаря миогенной активности в микрососудах поддерживается тоническое /констрикторное/ напряжение их стенки, которое рассматривается как базальный тонус / PoLkow еЛ <хЦ197х/. как отметили в своих работах P.C. Сонина с соавт. /1984/, лазер подавляет тонус гладких миоцитов в стенке микрососудов, что приводит к их дилатации. Нами установлено, что средний диаметр капилляров начинает увеличиваться с первой минуты облучения и остается на достаточно высоком уровне до 30 мин.' Наибольшие изменения показателя отмечаются у капилляров, маркированных Н-АТФазой /Р<0,001/. Заметим, что лазерное излучение активнее дилатирует капилляры с первоначально низким показателем диаметра /Н-АТФаза/ и менее резко изменяет поперечник капилляров, выявленных М^-АТФазой и Са-АТФазой, у которых в интактных сосудах бьи больший диаметр.

При лазерном воздействии уже с первой минуты облучения происходит увеличение протяженности сосудов. Они ветвятся, по ходу их стенки обнаруживаются сужения и выпячивания. К 15' мин облучения показатель повышается /Р<0,05/ и к 30 мин эксперимента снижается до исходного уровня у капилляров, маркированных Н-АТФазой и Са-АТФазой, и увеличивается - М^-АТФазой.

Значительные преобразования отмечаются и площади рабочей поверхности /рис. /. Наибольшее увеличение показателя установлено на 15 глин, к 30 мин облучения он несколько снижается. При итом облучение одного рога матки приводит к сидру¿еотьеалым реакциям с иеоблученнои стороны /рис. /. Содружественная реакция парных

органов позволяет предполагать нейрогуморальный путь стимуляции, в результате которого происходит повышение гистоморфохимических. показателей в капиллярах необлученного рога.

Нами установлено, что в отличие от капилляров облученного рок матки, повышение активности ферментов в стенке микрососудов прот! воположного рога происходит не столь быстро. Активность Н-АТФазы и Са-АТФазы хотя и повышается при I мин экспозиции, достоверной становится только на 30 мин облучения /Р<0,05/.

У овариоэктомированных животных облучение продолжительностью I мин достоверно не увеличивает активность шерментов /Р>0,05/. Только с 15 мин облучения и до 30 мин увеличивается плотность преципитата капилляров, маркированных Н-АТФазой и Са-АТФазой. Chi жение активности фермента отмечается на 30 мин воздействия при выявлении капилляров Ч^-АТФазой.

Средний диаметр капилляров прогрессивно увеличивается с первой пс 30 мин облучения при использовании всех видов АТФаз. Значения плотности капилляров претерпевают волнообразное изменение. С первой минуты облучения повышается суммарная длина капиллярного русла всех АТФаз. К 15 мин облучения изменения достигают своего пике при маркировании капилляров Н-АТФазой и Са-АТФазой /Р<0,001/. У капилляров, маркированных АТФазой, наибольший прирост показате ля зарегистрирован на 30 мин - 144% контрольного уровня /Р<0,001/ Так же изменяется и площадь обменной поверхности /рис. ■ /. Отмечается резкое увеличение СПАЛ, который достигает у капилляров, выявленных Са-АТФазой, 221% исходного уровня /Р<0,001/.

Изменения метрических показателей необлученной стороны происхо дят в той же последовательности, но отличаются в среднем на 5-3%.

Таким образом, заметно, что преобразования метрических показателей имеют волнообразный характер: с первой по 15 мин облучения - увеличение, а к 30 мин - их снижение. Размах колебаний исследованных параметров более выражен у овариоэктомированных животных.

Фотодинамическое действие лазерного излучения для терапевтических целей ограничено средней плотностью мощности, измеряемой несколькими ваттами. Усилить эффективность воздействия лазерного излучения можно введением в органлзм специальных веществ - фотосенсибилизаторов. Эти вещества, поглощая свет, переходят в активное состояние и при взаимодействии с кислородом, содержащимся в тканях, переводят его в активное синглентное состояние, в котором он действует на биологическую мемебрану /Байбеков И.Ч. с соавт., 1991/. В.И. Козлов /1971/ использовал в качестве ткаих веществ

витальные красители, а В.Н. Серов с соавт. /1986/ получили улучшение лечебного эффекта лазерного излучения,предварительно обработав пораженные ткани кортикостероидными препаратами.

Роль половых гормонов яичников в опосредовании энергии лазерного излучения верифицирована наш не только при облучении лазером матки овариоэктомированных животных, но и при комбинированном воздействии лазерного излучения и гормональных препаратов. Облучение продолжительностью 1-15 мин на фоне прогестерона при маркировании капилляров Н-АТФазой и Ч^-АТФазой достоверных изменений активности ферментов не дает. К 30 мин воздействия отмечается снижение плотности отложения продуктов реакции /Р<0,05-0,01/. Изменения активности Са-АТФазы носят иной характер. Уже с первой минуты облучения плотность преципитата снижается /Р<0,05-0,01/ и остается на достаточно низком уровне до 30 мин облучения.

Минутная экспозиция лазерного света резко уменьшает диаметр капилляров, маркированных Н-АТФазой /Р<0,001/, к 30 мин сосуды расширяются /Р<0,01Л Плотность капилляров начинает повышаться с 15 мин облучения у капилляров, маркированных Н-АТФазой и Са-АТФазой, и снижается к 30 мин облучения - у М^-АТФазы.

Изменения площади обменной поверхности /рис. I/ и СПАП в значительной мере зависят от энзима, использованного для выявления сосудов. Так, минутная экспозиция лазерного света на фоне прогестерона достоверно не изменяет показатели капилляров, маркированных Н-АТФазой и Са-АТФазой. С 15 по 30 мин облучения значения Н-АТФази увеличиваются /Р<0,01/, М^-АТФазы - снижаются /Р<0,05-0,01/. Площадь обменной поверхности Са-АТФазы несколько снижается к 15 мин, а затем увеличивается /Р<0,05/ - к 30 млн воздействия /рис. 1/. СПАП с первой по 30 мин облучения остается ниже контрольного уровня /Р<0,05/.

Облучение лазером овариоэктомированных животных на фоне введения прогестерона также снижает активность всех исследованных ферментов. Плотность капилляров с первой по 30 мин облучения увеличивается среди сосудов, маркированных Н-АТФазой и Са-АТФазой /Р< 0,05-0,01/. При выявлении Ч^-АТФазой отмечается снижение показателя, начиная с 15 мин облучения /Р<0,05/. Площадь обменной поверхности /рис. 2/ и СПАП достигают наивысших значений в первую мину-1 ту облучения при выявлении капилляров Р'Ц-АТ'&азой и Са-АТФазой, и на 30 мин - Н-АТФазой /Р<0,001/.

Несколько иные изменения капиллярного русла отмечаются цри облучении лазерным светом на фоне введения фолликулина. При воздействии лазерным светом на неоперированных животных, получавших фолликулин, активность Н-АТФазы снижается с первой минуты воздействия. Плотность отложения продуктов гистохимической реакции Са-АТФазы и Мд-АТФазы постепенно снижается, достигая к 30 мин своегс минимума /Р<0,05/. На первой минуте воздействия плотность капилляров, маркированных Н-АТФазой и Са-АТФазой /Р<0,05/ увеличивается и снижается у Ма-АТФазы. Площадь обменной поверхности /рис. 2/ и СПАП резко повышаются среди капилляров, выявленных Н-АТФазой /Р<0,001/ и остаются на высоком уровне до 30 мин облучения. Значе ния капилляров, маркированных Са-АТФазой, достигают пика к 15 миь /Р<0,05/. Значения М^-АТФазы с I по 30 мин облучения достоверно ниже контрольного уровня.

У овариоэктомированных животных облучение на фоне фолликулина вызывает увеличение активности всех исследованных ферментов /Р< 0,05-0,01/. Резко нарастает суммарная длина, площадь обменной поверхности /рис. 2/, СПАП. Изменения больше выражены со стороны ка пилляров, маркированных Н-АТФазой.

Таким образом, введение перед облучением гормональных препаратов может в значительной мере изменить реакцию капиллярного русла на воздействие лазерным светом. Заметно, что реакция сосудов зави сит не только от длительности лазерного облучения и от вводимого гормона, но и от фона, на котором вводился препарат. Наибольшим и менениям подвергается капиллярное русло при сочетании лазерного облучения и фолликулина.

Можно предполагать, что фолликулин, в отличие от прогестерона, выступает в роли фотосенсибилизатора и увеличивает эффект лазерно го излучения. Возможно, это связано с суммацией эффектов лазерног света и эстрогенов. Имеются данные Л.Л. Резниковой с соавт. /1991 что лазерное излучение увеличивает уровень гормонов. Так, в экспе рименте с крысами с сохраненными яичниками, дополнительно вводя гормональный препарат, мы, как было отмечено выше, усиливаем выра ботку гормонов, что снижает активность ферментов в среднем на ЗА и уменьшает интенсивность обменных процессов в органе. Это подтвс ждается данными по токсическому введению гормональных препаратов. Высокая доза гормонов приводит к резкому отеку ткани, уменьшени.0 суммарно-/ длины капиллярного русла в среднем на 25/<>, площади об:.и ной поверхности и резкому уменьшению до 80/ь контрильного уровня СПАП. 12

Рис. I. Преобразование площади обменной поверхности капиллярного русла матки в зависимости от длительности лазерного облучения

Н-АТФаза

А

/о

160 -•

140 -

к I мин Го мин 30 мин

Са-АТФаза

неоперировашше животные овариозктомированнне животные

Рис. 2. Преобразование площади обменной поверхности капиллярного русла матки в зависимости от длительности лазерного облучения и гормона

%

300 260 220 180 140 100

ч

"к I1 мин мин зЬ мйн

Н-АТФаза

140" 120" 100" 80

160 ■140 120 100 1"

"Тмин 1э мин зЬ мин

М -АТФаза

/ч.

ч.

ч-

I мин 15 мин 30 мин

(

- неоперир. (-гнюгестеэ.

--- неоперир.+цюлликул.

—•— овариоэк.+поогестер. — овариоок.+фолликул.

■14

Са-АТ'&аза

/

7о

V

В целом, приведенные в работе материалы показывают, что капиллярное русло матки активно изменяется под действием гормонов яичников, источников оптического диапазона, имеет существенные особенности реакций при совместном использовании лазерного излучения и гормональных, препаратов. Все эти изменения .можно хорошо проследить при использовании для выявления капилляров транспортных ферментов, таких, как АТФазы.

" ВЫВОДЫ

Г. Эндометрий крыс имеет хорошо развитую, густую сеть капилляров, которая наиболее полно гистохимическими методами выявляется с помощью Са-АТФазы. Наименьшая плотность микрососудов регистрируется при использовании для выявления Н-АТФазы.

2. Овариоэктомия вызывает достоверное снижение в стенке капилляров активности всех исследованных АТФаз, а также основных метрических показателей, характеризующих состояние капиллярного русла

3. Введение прогестерона неоперированным животным приводит к снижению активности Н-АТФазы и Са-АТФазы и достоверно не изменяет значения М^-АТФазы в стенке капилляров, но во всех случаях отмечается уменьшение суммарной длины и площади обменной поверхности капиллярного русла.

4. При овариоэктомии введение прогестерона стимулирует увеличение значений всех исследованных показателей, наиболее выракен-ное среди капилляров, маркированных с помощь» Н-АТФазы.

5. Введение фолликулина неоперированным животным снижает активность в стенке капилляров Са-АТФазы и М^-АТФазы, но не изменяет значения активности Н-АТФазы; наблюдается увеличение диаметра микрососудов, но уменьшение их суммарной длины.

6. Введение фолликулина овариоэктомированным животным не вызывает существенных изменений активности ферментов капилляров и их диаметра, но приводит к резкому увеличению суммарной длины и площади обменной поверхности.

7. При облучении накожных биологически активных точек матки как у неоперированных, так и у овариоэктомированных животных отмечается однотипный характер преобразован:!", капиллярного русла: с первой по 15 мин происходит увеличение метрических показателей, а на 30 мин облучения - их снижение. При этом величина отклонений исследуемых параметров более выражена у оптированных животных.

8. Лазерное облучение после предварительного введений женских половых гормонов, вызывает более выраженную ответную реакцию показателей капиллярного русла матка, чем действие только лазера: предварительное введение фолликулина резко увеличивает гистохимические показатели уже с первой минуты облучения, прогестерон на

I мин незначительно увеличивает метрические показатели, а при 15 и 30-минутном облучении отмечается их снижение.

9. Облучение, проводимое на фоне действия женских половых гормонов, вызывает сходный характер преобразований метрических параметров капилляров у неоперированных и овариоэктомированных животных, однако изменения капиллярного русла у крыс с удаленными яичниками выражены в большей степени.

ВНЕДРЕНИЕ Р ПРАКТИКУ

Материалы диссертации об особенностях архитектуры сосудисто-капиллярного русла эндометрия матки крыс,, его гистоэнзимологичес-кой характеристике в норме и после овариоэктомии, а также при во: действии источников излучения оптического диапазона, гормональны: препаратов и комбинированном воздействии лазера и гормонов испся: зуются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах гистологии и эмбриологии, анатомии человека Владивостоке» го медицинского института, в гинекологическом отделении родильно: дома № 3.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Недобыльская Ю.П., Немков Ю.К. Гистохимия АТФаз капилляров ма1 ки крыс при совместном воздействии лазерного облучения и прогестерона. - В кн.:"Актуальные вопросы теории и практики физической медицины": Тез.докл.Всерос.научн.-практ.конф. .Иваново,1993.-с.ХЬ-

2. Немков Ю.К., Недобыльская Ю.П. Функциональная морфология капи. лярного русла матки при воздействии лазерного излучения. - В кн. "Актуальные вопросы теории и практики физической медицины": Тез. докл.Всерос.научн.-практ.конф..Иваново,1993. - с. Г7-18.

3. Немков Ю.К., Недобыльовая Ю.П. Влияние источников оптического диапазона на капиллярное русло матки крыс. - В кн.:"Влияние антр< погенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных:Матер.2-й Всерос.конф..Саратов,1993. 4.2. с. 115.

4. Недобыльская ¡0. П., Быков Д.В. Влияние лазешого излучения на капилляры матки крыс. - В кн.:"Здоровье и болезни человека на Дальнем Востоке":Тез.докл..Владивосток,1993. - с.12.

5. Быков Д.В., Недобыльская г). П. Влияние лазерного излучения на капилляры головного мозга крыс. - В кн.:"Ьдоронье и болезни чело века на Дальнем Востоке":Тез.докл..Владивосток,1933. - с.13.

6. Недобыльская Ю.П. Гистохимическая характеристика капилляров матки при воздействии прогестерона. - »Л., 1994. - 7 с. - Деп. в ВИНИТИ 22.02.94, 1* 456-В94.

7. Недобыльская Ю.П. Гистохимия Са-АТФазы капилляров матки при воздействии прогестерона. - В кн.: "Проблемы клинической, профилактической, экспериментальной медицины на Дальнем Востоке": Тез.докл., Владивосток, 1994. - с. 50.

8. Недобыльская .У. П. , Немков 13. К. Гистохимия АТФаз капилляров матки при воздействии прогестерона на овашоэктомированных и неовариоэктомированных животных. - В кн.: "Проблемы клинической, профилактической, экспериментальной медицины на Дальнем Востоке": Тез. докл., Владивосток, 1994. - с. 51.

9. Немков Ю.К., Недобыльская Ю.П. Характеристика капилляров матки при лазерном облучении и совместном воздействии лазера и прогестерона. - В кн.: "Проблемы клинической, профилактической, экспериментальной медицины на Дальнем Востоке": Тез. докл., Владивосток, 1994. - с. 53.

10.Немков Ю.К., Недобыльская Ю.П., Каргалова Е.П. Гистохимическая характеристика капилляров матки при лазерном облучении и совместном воздействии лазера и прогестерона. - М., 1994. - 8 с. - Деп. в ВИНИТИ 23.04.94, х 724-В94.