Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Функциональные и иммуногенетические особенности системы интерлейкина-1 у больных псориазом

На правах рукописи

ЧАПЛЫГИН Алексей Владимирович

ФУНКЦИОНАЛЬ НЫЕ И ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СИСТЕМЫ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ

14.00.11 -кожиые и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□ОЗ170036

Санкт-Петербург 2008

003170836

Работа выполнена в Военно-медицинской академии им С М Кирова

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор Самцов Алексей Викторович Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Данилов Сергей Иванович доктор медицинских наук профессор Королькова Татьяна Николаевна

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им акад И П Павлова Росздрава»

Защита состоится«_»июня 2008 г в 10 часов на заседании совета

по защите докторских и кандидатских диссгртаций Д 215 002 01 при Военно-медицинской академии им С М Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Акад Лебедева, д 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им С М Кирова

Автореферат разослан «_» мая 2008 года

Ученый секретарь совета доктор медицинских наук профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Псориаз - хроническое заболевание с преимущественным поражением кожи, которое характеризуется гиперпролиферацией эпидермиса, нарушением ьератшшзации и наличием воспалительного инфильтрата в дерме (Самцов А В , Барбинов В В , 2002, Barker JN, 1991), значительно снижающий качество жизни больных, что в первую очередь связано с отсутствии t эффективной терапии заболевания (Кубанова А А , 2004, Weiss S С et al, 2002) Псориаз является одним из самых распространенных дерматозов, им страдает окото 2-3% населения развитых стран Он характеризуется частыми рецидивами, тенденцией к прогрессированию, формированию резистентности к лечебным мероприятиям и зачастую - к ин-валидизации пациентов (Мордовцев ВН 1995, Милевская С Г и соавт, 1997, Кунгуров HB и соавт , 2002, Самцов AB , Барбинов В В , 2002, Ro-enigk jr Н Н , Maibach Н J , 1985, Farber Е М , Nail MI, 1991) При этом особенно тяжелой формой псорш1за является псориатический артрит (ПА), который развивается у 5-12% больных (Кубанова А А , 2004, Kammer G М et al, 1979, Helhwell Р S , Wright V , 1998, Ashcroft DM et al, 2000)

Однако, несмотря на большое количество исследований, посвященных псориазу, остается нерешенным ряд вопросов патогенеза и лечения этого заболевания В литературе последних лет обсуждается роль регуляторных факторов иммунной системы - цитокинов в патогенезе псориаза Функционирование ци1 окиновой системы при псориазе может определяться разными факторами, в числе которых - индивидуальные различия в продукции цитокинов, обусловленные рядом генотипических и фенотипических особенностей (Tarlow J К et al, 1997, Hurms M, Santtila S , 1998, Hulkkonen J et al, 2000, Reich К et al, 2002) Ключевое место в регуляции реакции воспаления принадлежит цитокинам семейства интерлейкин-1 (IL-1) Равновесие между продукцией, экспрессией и ингибицией синтеза белков семейства IL-1 играет важную роль в развитии воспалительного процесса В связи с этим, нарушение экспрессии генов регулирующих синтез белков семейства IL-1, способ-

ное необоснованно увеличить или снизить синтез соответствующего продукта, приводят к дисбалансу IL-1-ответа в целом, а, значит, может играть роль кофактора ряда заболевании (Tarlow J К et al, 1997, Reich К et al, 2002) Это в полной мере относится и к псориазу, который рядом авторов рассматривается как болезнь кератиноцита, активированного IL-1 (Blanton RA et al, 1989, Kupper TS, 1989)

Анализ литературных данных свидетельствует о необходимости проведения комплексного исследования IL-1-ответа при псориазе с учетом клинических форм, тяжести течения и аллельных генотипов IL-1 больного (Kapp А , 1993, Debets R et al, 1997, Reich К et al, 2002, Nickoloff В J , Nestle F 0, 2004) Решение вопросов иммунопатогенеза псориаза может обосновать патогенетический подход к лечению этого заболевания, способствовать совершенствованию прогноза, рациональному использованию современных, в том числе иммунотропных, лекарственных средств, поиску новых путей терапии этого распространенного заболевания

Цель работы на основе комплексного изучения показателей воспалительного ответа, иммунного статуса и иммуногенетических характеристик выявить особенности функционирования системы интерлеикина-1 у больных различными формами псориаза Задачи исследования

1 Провести комплексную оценку показателей воспалительного ответа и иммунного статуса пациентов, страдающих распространенным псориазом и псориатическим артритом

2 Изучить полиморфизм генов системы интерлейкина-1 (интерлейкина-1а (IL-Ia), интерлейкипа-lß (IL-lß), рецептора интерлейкина-1 (IL-lRe), рецепторною антагониста интерлейкина-1 (IL-lRa)) в лейкоцитах периферической крови у больных распространенным вульгарным псориазом и псориатическим артритом

3 Оценить характер экспрессии белков системы интерлейкина-1 (IL-Ia, IL-lß, IL-1 Re, IL-1 Ra) в кератиноцитах больных распространенным вульгар-

ным псориазом и псориатическим артритом

4 На основании анализа полученных результатов определить взаимосвязь состояния системы интерлейкина-1 с формой и тяжестью течения псориаза

Научная новизна Обнаружено усиление сверхэкспрессии функционально незрелого 1Ь-1(3 и снижение продукции 1Ь-1а у больных псориатическим артритом по сравнению с пациентами, страдающими вульгарным псориазом

Среди пациентов с вульгарным псориазом преобладают гомозиготы по высокопродуцируюгцему варианту гена И.-1Ка*2, что обусловливает формирование «противовоспалительного генотипа», ответственного за повышенную продукцию рецептурного антагониста 11.-111а

Высокопродуцируюший чллель 1Ь-1[3 (+3953)+ в гомозиготном состоянии всегда отсутствует у пациентов с вульгарным псориазом и встречается только среди больных псориати «ским артритом, что обусловливает формирование «провоспали гельнси о генотипа», определяющего преобладание продукции 1 р

Практическая значимость. Результаты генотипирования полиморфных генов системы 1Ь-1 у больных псориазом позволят

- прогнозировать интенсивность воспалительной реакции у больных различными формами псориаза,

- прогнозировать вероятность развитая у пациента тяжелых форм псориаза и склонности к поражению сусывов,

- персонализировать направление предполагаемой терапии псориаза, в том числе иммуномодулирукнцей

Личное участие автора в получешш результатов. Автором лично проведен отбор пациентов, выполнен весь обьем клинических и инструментальных исследований, организовано проведение лабораторных исследований, разработана формализованная история болезни, сформирована база данных, проведен анализ медицинской документации и статистическая обработка полученных результатов

Основные положения, выносимые на защиту.

1 В зависимости от функционального полиморфизма генов системы IL-1 для больных вульгарным псориазом наиболее характерен «противовоспалительный генотип» (генетически обусловленный перевес в сторону выработки IL-IRa), для больных псориатическим артритом - «провоспалительный генотип» (генетически обусловленный перевес в сторону выработки IL-ip)

2 Экспрессия генов семейства IL-1 в кератиноцитах больных псориазом носит аномальный характер, выражающийся в снижении продукции ÍL-la и сверхэкспрессии функционально незрелого IL-ip

3 Степень аномальности экспрессии цигокинэв семейства IL-1 у больных псориатическим артритом, сопровождающимся активными проявлениями системной иммуновоспалитсльной реакции, ма? симальна

Реализация и внедрение полученных результатов работы. Материалы работы нашли применение в учебном и лечебном процессах на кафедре кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии им С М Кирова и кожно-венерологических отделениях ФГУ «442 Окружной военный клинический госпиталь ЛенВО»

Апробация и публикация материалов исследования. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматологии» (Санкт-Петербург, 2002), VI Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2003), На>чно-практическои конференции «Актуальные вопросы дерматологии» (Санкт-Петербург, 2006), Научно-практической конференции, посвященная 110-летию со дня рождения С Т Павлова (Санкт-Петербург, 2007), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007)

По теме диссертации опубликовано 23 печатные работы, в том числе две статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки Рос-

сийскои Федерации Оформлены 4 рационализаторских предложения

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов и практических рекомендаций Текст диссертации изложен на 91 странице, включает 9 таблиц и 2 рисунка Библиографический указатель содержит 119 наименований, включая 21 отечественный и 98 зарубежных источников

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования. Исследование выполнено на 71 пациенте с различными формами псориаза, из них мужчин - 43 (60,6%), женщин - 28 (39,9%) Возрасг пациентов составлял от 18 до 83 (в среднем -40,4±1,5) лет Продолжительность болезни составила от 1 до 63 (в среднем 15,9±1,3) лет Среди обследованных бочьных у 43 (60,6%) была выявлена зимняя форма заболевания, у 9 (12,7%) - летняя, а у 19 (26,7%) больных -возникновение или рецидив заболевания не зависели от времени года Диагноз псориаза устанавтивали на основании клинической картины заболевания У всех обследованных больных псориазом поражение кожи носипо распространенный характер Распространенность и выраженность поражения кожи оценивали по индексу PASI Диагноз ПА устанавливали на основании диагностических критериев по Moll JM и Wright V (1973) и классифицировали по степеням активности, определяли индекс боли в баллах по 10 бальной шкале, суставной индекс, время утренней тугоподвижности в суставах Все больные были распределены на 3 группы

группа РВП 45 пациентов с распространенным вульгарным псориазом (РВП),

- группа ПА1 14 пациен"ов, страдавших распрос граненным псориазом в сочетании с псориатическим артритом 1 степени активности (ПА1),

группа ПА2 12 пациентов с распространенным псориазом в сочетании с псориатическим артритом 2 степени активности (ПА2)

Среди бочьных ПА артралгическая форма диагностирована у 7 пациентов, дистальный вариант псориатического артрита с поражением суставов

кистей и стоп наблюдался у 9 пациентов (у 3-х в сочетании со спондилоартритом), ревматоидноподобный вариант ПА у 4 пациентов, псориатический олигоартрит у 2 пациентов, псориатический полиартрит у 4 больных ПА Контрольную группу составили 104 относительно здоровых людей в возрасте от 18 до 62 лет (средний возраст 38,0 ± 2,0 лет)

Изучали рутинные общеклинические, биохимические и иммунологические показатели, параметры неспецифической резистентности, соотношения субпопуляций лимфоцитов периферической крови, продукцию цитокинов, а также полиморфизм генов цитокинов семейства 1Ь-1 и их экспрессию в кератиноцитах из очагов поражения и в интактных клетках эпидермиса у больных псориазом

Для оценки состояния клеточной неспецифической защиты было проведено изучение показателей респираторного взрыва в нейтрофилах периферической крови у больных различными формами псориаза методом люминал-зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) цельной крови В качестве индукторов ЛЗХЛ использовали зимозан, опсонизированный (03) свежей сывороткой крови человека (в концентрации 10 мг/мл) и форбол-миристат ацетат (ФМА) (в концентрации 10 нг/мл)

С помощью тест-систем производства ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург) исследовали иммуноферментным методом спонтанную и митоген-индуцированную (ЛПС) продукцию цитокинов клетками крови в кондиционных средах до проведения терапии

Исследование экспрессии генов цитокинов семейства 1Ь-1 и каспазы или конвертазы (1СЕ) проводилось по следующей методике - до проведения терапии у пациентов были взяты биоптаты кожи диаметром 6 мм методом панч-биопсии с края псориатических бляшек и с участков неизмененной кожи Биоптаты немедленно помещали в раствор для сохранения РНК (Силекс, Москва) для оценки экспрессии генов или замораживали в азоте с целью дальнейшего проведения иммуногистохимического анализа продукции 1Ь-1а В качестве контроля использовали биоптаты здоровой кожи

Экспрессию генов IL-la, IL-lß, IL-lRa, IL-lRe и ICE на уровне мРНК гесшровали методом ПЦР с конечной электрофоре гической детекцией количества полученного амплификата, с использованием праимеров, синтезированных в НПО «Литех», соответствующих параметров температурных циклов и ферментов рестрикции (TriReagent «Sigrna», Греция)

Характер продукции IL-la оценивали иммуногистохимически по ранее описанной методике (Kristcnsen М et al, 1992) на криосрезах невоспаленного и пораженного эпидермиса (в 5 участках для каждого препарата) с использованием набора антител и реагентов для выявления и окрашивания этого белка (R&D Systems, Англия)

Материалом для молекулярно-генешческого анализа полиморфизма генов семейства IL-1 служили образцы высокомолекулярной ДНК, ьыделен-ные из лимфоцитов периферической крови больных и здоровых лиц с использованием реагента для выделения ДНК (TriReagent «Sigma») Варианты генов, несущие точечные замены нуклеотадов IL-la (-889)+ в промотерном регионе, IL-lß (-511)+ в промотерном регионе и IL-lß (+3953)+ в районе 5-го экзона, определяли методом ПДРФ-анализа продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома, с использованием праймеров, синтезированных в НПО «Литех», соответствующих параметров температурных цик-тов и ферментов рестрикции (TriReagent «Sigma», Греция)

Генотипирование IL-lRa проводили методом ПЦР «модифицировали участок ДНК, содержащий тандемные повторы по 86 п о в районе интрона 2, аллельный тип определяли по д'шне получаемого продукта амплификации при элсктрофоретическом разделении Нормальный, более часто встречающийся, вариант гена IL-lRa содержит четыре таких повтора, наиболее значимым яз полиморфных вариантов является аллель IL-]Ra*2, несущий два повтора, остальные варианты этого гена встречаются крайне редко - суммарно менее чем у 1% популяции (Wierenga ЕА, Messer G, 2000) и в данной работе не рассматривались Для краткого обозначения аллелей были приняты следующие сокращения нормальный, не несущий

мутацию, аллель обозначался цифрой 1, полиморфный - 2, «1/1» - ген, гомозиготный по нормальному варианту аллеля, «2/2» - ген, гомозиготный по полиморфному варианту, гетерозиготный — «1/2» Варианты «2» генов IL-lp (+3953)+ и IL-lRa*2 в дальнейшем именуются как высокопродуцирующие, варианты «1» генов IL-ip и IL-IRa- низкопродуцирующие

Статистический анализ результатов исследования выполняли с помощью персонального компьютера IBM PC, используя пакет статистических программ Statistica 6, включавших первичный статистический анализ, а также точный метод Фишера, критерли Манна Уитни и Крускала-Уоллеса

Результаты исследований и их обсуждение. Обследованные группы больных отличались между собой клинически только по наличию и степени выраженности суставных поражений (1абл 1) Соответственно, выявленные различия в воспалительном ответе между обследованными группами пациентов взаимосвязаны, главным образом, со степенью поражения суставов

Таблица 1

Различия клинических показателей в группах обследованных

пациентов (М±ш)

Группа РВП Группа ПА 1 Группа ПА 2

Средняя длительность заболевания, лет 16,0±1,3 12,2±1,2 16,1±1,5

Болевой индекс, отн ед 0,09±0,04 4,¿±0,1 5,5±0,2

Время утренней тугоподвижности, мин 0 37,3±0,9 65,2±4,5

Суставной индекс, отн ед 0,10±0,05 9,£±0,6 13,2±1,0

Индекс РАвГ, отн ед 15,9±1,0 13,5±1,0 15,0±1,2

При анализе различий между показателями системной иммуновоспалителыюй реакции в обследованных группах больных (табл 2)

было выявлено, что в группе РВП системная воспалительная реакция у данных пациентов практически отсутствовала У больных ПА1 отмечено ста-

Таблица 2

Показатели системной иммуновоспалительной реакции

у больных псориазом (М±т)

Группа РВП Группа ПА 1 Группа ПА 2

Лейкоциты, хЮ /л 6,69± 0,18 7,09±0,18* 7,80±0,30**

Нейтрофилы, отн ед 59,9±0,7 59,2±0,8 62,5±0,7**о°

Нейтрофилы, х 10 /л 4,0±0,1 4,2±0,1 4,9±0,2***°°

БХЛ спонтанная, имп/с 4,7±0,1 4,3±0,1* 4 8±0Д°°

БХЛ с ФМА, имп/с 28,1±2,1 30,5±2,0 4\,6±4,в**°

БХЛ с зимозаном, имп/с 37,3±3,7 43,5±4,9 100,8±8,9***°°°

СОЭ, мм/ч 7,б±0,4 18,2±0,7**> 23 ^л-] 5***000

Фибриноген, г/л 3,2±0,1 4 2±0 1*** 5 4±0 2***°°°

^А, г/л 2,9±0,1 3,0±0,2 3,6±0,2->"*0

г/л 12,6±0,5 ( 17,1±0,9*** 20,Ш,6***°

1яМ, г/л 1,5±0,1 1,7±0,1* 1,7±0,1*

ЦИК, отн ед 63,0±3,9 78,б±5,1** 80,0±5,1**

Символами * обозначаются достоверные различия значении с показателями у группы РВП, символами ° - различия между значениями у групп ПА1 и ПА2, количество символов означает уровень достоверности различии ', 0 - р<0,05, - р<0,01, -

р<0,001

тистически достоверное возрастание значении иммуноглобулинов, главным образом 1В0, и ЦИК Имело место резкое повышение СОЭ (р<0,001) В группе ПА2 обнаружено статистически досговерное повышение практически всех показателей ответа острой фазы относительно отих значений у больных вульгарным псориазом Кроме того, группа ПА2 по ряду параметров значимо отличалась и от группы ПА1 Имела место тенденция к росту общего количества лейкоцитов за счет числа нейтрофилов (как относительного, так и абсолютного), что сопровождалось повышением их кислородзависимой функциональной активности, маркерами которой являются показатели био-хемилюминесценции Особенно чусствительным показателем респираторного взрыва нейтрофилов оказалась ЛЗХЛ, индуцированная ОЗ

Таким образом, показано, что тяжесть клинических проявлении поражения суставов у больных ПА сопровождается повышением активности вос-

палительного ответа организма, в то время как для больных РВП выраженная системная иммуновоспалительная реакция является нехарактерной Данная закономерность хорошо известна и описана в различных литературных источниках (Кунгуров Н В и соавт , 2002, Fmlay A Y, Coles Е С , 1995, Gupta MA, Gupta АК, 1997)

Результаты исследования показали, что количественные соотношения основных субпопуляций лимфоцитов, а также показатели секреции некоторых цитокинов в крови обследованных пациентов в разных группах практически не зависели от степени активности заболевания и не претерпевали сколъ-ниб}дь значимых изменений Оказалось, что наиболее четкую устойчивую тенденцию к росту в зависимости от степени выраженности заболевания имело как абсолютное, так и относительное количество клеток с фенотипом CD4+ (р<0,01) Тенденцию к разнонаправленным колебаниям имело общее содержание лимфоцитов (р<0,01, р<0,05), а также клеток с поверхностным маркером HLA DR+ (р<0,05) Спонтанная секреция IL-1J3 и IL-2 была следовой, находилась в пределах нормальных значений Однако уровень спонтанной секреции IL-8 превышал норму в 2,8 раза в группе РВП (281,4±66,8 пг/л) и в 5-8 раз у больных псориатическим артритом (ПА1 853,6±272,3, ПА2 538,8±150,1 пг/л) Индуцированная секреция цитокинов была достаточно активной значения IL-ip и IL-2 были сопоставимы с таковыми у здоровых лиц, IL-8 превышал норму (1000 - 5000 пг/л) в группе РВП в 1,5 раза, в группах ПА1 и ПА2 в 2,4 и 2,2 раза соответственно (8853,6±1199,6, 12439,4±1709,0, 11471,8±1301,6 пг/л) Полученные результаты демонстрируют функциональную сохранность иммунокомпетентных клеток у больных как вульгарным псориазом, так и псориатическим артритом Однако гиперпродукция IL-8 при нормальной секреции IL-ip и IL-2 может указывать на имеющий место дисбаланс в системе цитокинов при псориазе, который нарастает в зависимости от степени тяжести заболевания (либо, что, по-видимому, явчяется более точным, обусловливает нарастание тяжести псориаза)

Полиморфизм генов семейства интерленкниа-1 у пациентов с псориазом и псорнагичсским артритом При исследовании распределения аллельных вариантов генов IL-la, IL-lß и IL-lRa значительно чаще выявлялись гомозиготные генотипы по полиморфным аллелям этих генов у обследованных пациентов (п=71) в сравненил с донорами (табл 3) в 9 раз чаще - вариант IL-la (-889), в 7,5 раз - вариаш IL-lß (-511), в 1,6 раз - IL-lß (+3953), в 2 раза - IL-lRa*2 При разделении всех обследованных пациентов на лиц, имеющих только кожные проявления псориаза (ПК), и больных с поражением суставов (ПА), было обнаружено, что встречаемость тестируемых по указанным маркерам аллелей генов семейства IL-1 различается между этими группами Гак, у пациентов с ПК гомозиготность по аллелю IL-la (889) встречается почти в б раза чаще, чем при ПА Кроме того, среди больных с ПА почти в 2 раза чаще определялся генотип, гомозиготный по нормальному (не несущему мутацию) варианту гена IL-la и в 4 раза чаще -по аллелю гена IL-lß без замены нуклеотидов в позиции (-511) С другой стороны, гегерозигот по аллелю IL-lß (-511) среди лиц с ПА было почти в 2 раза меньше, чем среди пациентов с ПК

Особое внимание обращает на себя распределение аллелей IL-lß (+3953) и IL-lRa^?, ответственных, согласно данным литературы, за повышенную выработку соответствующих белков (Pociot F et al, 1992, Hurme M., Santtiia S , 1998) Согласно полученным нами данным, присутствие гомозиготных вариантов IL-lß (т3953) и IL-lRa*2 у всех пациентов определялось чаще, чем у доноров, в 1,6 и 2 раза соответственно Однако при разделении больных на группы ПК и ПА выявлена следующая тенденция гомозиготность по высокопродуцир>ютцему варианту IL-lß (+3953) присутствовала только среди ботьных с поражением суставов при псориазе (13,6%), у лиц, имеющих только кожные проявления болезни, такое состояние в 100% случаев отсутствовало Напротив, гомозиготное состояние по высокопродуцирующему варианту гена IL-lRa*2 отсутствовало среди пациентов с ПА и в 23,3% случаев выявлялось у пациентов с ПК.

Среди больных и доноров ни разу не встречалось совместное носительство гомозиготных вариантов «2/2» генов 1Ь-1(3 (+3953) и 1И11а*2 («2/2» П,-1Р (+3953) + «2/2» 1Ь-1Яа*2) и сочетаний гаплотипов 1Ь-1Р*2 + 1Ь-111а*2 и 11,-10*2 + 1Ь-1ЯаЧ («2/2» 1Ы р (+3953) + «1/2» 1Ь-1Яа*2) Гаплотип

Таблица 3

Носительство полиморфных и нормальных аллелей генов 1Ь-1а, 1Ь-1Р и 1Ъ-111а у больных псориазом и доноров

Частота встречаемости (%) Аллельиые варианты генов

1Ь-1а (-889) 1Ь-1р (-511) 1Ь-1Р (+3953) 1Ь-1Яа*2

1/1 1/2 2/2 1/1 1/2 2/2 1/1 1/2 2/2 1/1 1/2 2/2

Доноры 47,8 51,1 1,1 44,6 54,3 1,1 46,7 50,0 3,3 58,7 34,8 6,5

Больные с ПК и ПА (п=71) 46,7 43,3 10 27,3 64,5 8,2 62,5 32,1 5,4 50 36,5 13,5

Больные с ПК (п=45) 33,3 41,7 25 11,1 82,2 6,7 75,8 24,2 0 43,3 33,3 23,3

Больные с ПА (11=26) 61,9 33,8 4,3 46,7 43,3 10 40,9 45,5 13,6 61,9 38,1 0

РВП (п=31) 50 31,3 18,8 20 80 0 8' 13 0 27,8 44,4 27,8

РЭП (п=12) 0 83,3 16 7 0 66,7 33,3 62,5 37,5 0 60 20 20

РВП+артрит 1 ст (п=15) 66,7 16,7 16,7 54,5 36,4 9,1 50 33,3 16,7 66,7 33,3 0

РВП+ артрит 2 ст (п—11) 55,6 33,3 П,1 25 25 50 30 60 10 55,6 44,4 0

1Ь-1р*(+3953) + 1Ь-Ша+2 встречался у 2% доноров и больных в виде сочетания гетерозиготного гена1Ь-1р*1/1Ь-1р*2 и гомо ¡иготного по полиморфному аллелю гена 1Ь-Ша*2 («1/2» 1Ыр (+3953) + «2/2» 1Ь-111а*2)

Следует отметить, что при разде тении пациентов, имеющих только поражение кожи, на группы больных с распространенным вульгарным псориа-

зом (РВП) и распространенным экссудат ивным псориазом (РЭП), было выявлено, что среди больных РЭП в 100% случаев отсутствовали гомозиготы по нормальным вариантам генов 1Ь-1а(-889) и 1Ь-1р(-5!1) А среди лиц с РВП отсутствовали пациенты с гомозиготным вариантом 1Ь-1р (-511) Таким образом, среди пациентов с ПК в зависимости от характера кожных поражений также наблюдались различия в носительстве тестируемых вариантов генов Та же тенденция наблюдалась при разделении пациентов с ПА в зависимости от тяжести поражения суставов например, у лиц с ПА 2 степени в 2,2 раза реже определялась юмозиготность по нормальному варианту и в 5,5 раз чаще гомозиготность по полиморфному варианту 1Ь-1р (-511) Таким образом, полиморфизм генов семейстьа 1Ь-1, по-видимому, способен оказывать влияние на предрасположенность к различным формам заболевания, а также на характер поражений как кожи, так н суставов

Учитывая, что выраженность системною воспалительного ответа прямо зависит от преобладания активности провоспалительных цитокинов, а 1Ь-1 является ключевым регугоь ором религии воспаления, был изучен характер спонтанной и индуцированной продукции белков системы 11.-1 у больных псориазом в зависимости от ноеительства различных аллелей исследованных генов Анализ продукции 1Ь-1Р клетками крови при ПК и ПА (табл 4) показал, что у всех лиц с ПК, являющихся носителями аллеля 1Ь-1Ка*2 в гомозиготном состоянии значения спонтанной продукции этого цитокина в 100% случаев не превышают значения нормы (0 пг) А среди лиц с ПА, являющихся гомозиготами по аллелю 1Ь-1р (+3953) 72% имеют этот показатель выше нормы С другой стороны, при ПК способность клеток к продукции 1Ь-1Р (индуцированная прод>кция) достоверьо выше у носителей нормального варианта ГИр (+3953) «1/1», чем у носите чей гетерозиготного варианта (+3953) «1/2» Та же тенденция наблюдалась и при ПА у носителей варианта 1С-1р (+3953) «2/2» уровень индуцированной продукции 1Ь-1р достоверно ниже, чем у лиц с вариантом 1Ь-1р(+3953) «1/1» Однако у носителей варианта 1Ь-1Ка «2/2» уровень индуцированной продукции 1Ь-1р

и

достоверно выше, чем у лиц с вариантом 1Ь-1Г1а «1/1» Таким образом, имеет место тенденция к обратной зависимости между значениями спонтанной и индуцированной продукции 1Ь-1р

Таблица 4

Показатели продукции IL-ip m vitro клетками крови обследуемых больных

Вариант гена Уровень IL-ip

Спонтанная продукция (% пациентов со значениями выше нормы) Индуцированная продукция (значения в пг)

ПК ПА ПК ПА

IL-ip(+3953) «1/1» 43 67 1254+594* 1190+575*

IL-ip (+3953) «1/2» 20 50 742+551* 1064+515

IL-lp (+3953) «2/2» - 72 - 649+196*

IL-IRa «1/1» 33 54 804+549* 1021+474

IL-IRa «1/2» 43 63 1118+341 1081+627

IL-IRa «2/2» 0 - 1288+578* -

Примечание * - различия достоверны при р<0,05 относительно нормальных гомозигот 1Ь-1р (+3953)«!/!» и 1Ь-Жа «1/1»

Показатели воспалительного ответа в коже у пациентов с распространенным вульгарным псориазом и псориатическим артритом. При

определении показателей экспрессии генов семейства 1Ь-1 было выявлено, что в эпидермисе у всех обследованных пациентов (рис 1) в сравнении со здоровой кожей была достоверно (р<0,05) снижена способность кера-тиноцитов к экспрессии 1Ь-1а, что выявлено как в непораженном, так и в пораженном эпидермисе При этом в норме доминантной формой 1Ь-1 в эпидермисе является 1Ь-1 а (Ригш Ь е( £11, 1998) В кератиноцитах из очагов поражения наблюдалась сверхэкспрессия 1Ь-1Р Индексы экспрессии внутриклеточной и секреторной формы 1Ь-111а достоверно снижались в непораженной и пораженной коже в сравнении со здоровой кожей В кератиноцитах из очагов поражения определялся достоверно более высокий уровень 1Ь-ШеЛ, чем в коже здоровых лиц При определении характера экспрессии 1СЕ

в эпидермисе обследованных больных было выявлено, что в сравнении со здоровой кожей способность клеток к экспрессии этого фермента у больных снижена не только в пораженном эпидермисе, но и во внешне неизмененной коже (см. рис. 1). Полученные данные являются подтверждением гипотезы о

□ здоровая кожа

3,00

2,50

* 2,00 £ О

0 й> о.

1 1,50

С! О ¥ О

5

5 1,00

0,50 в, 00

На НЬ 1-1 Иа ¡с И-ИЧаБ !!_-11Че/1 ЮЕ

Рис. 1. Экспрессия генов семейства 11,-1 в эпидермисе здоровых лиц и невоспаленном и пораженном эпидермисе при псориазе.

том, что, несмотря на высокие значения экспрессии 1Ь-1[3, функциональная активность этого цитокина в коже при псориазе снижена. 1Ь-1р в псориати-ческом эпидермисе не может продуцироваться в зрелом виде вследствие недостаточной выработки фермента, осуществляющего его процессинг. Тем не менее, в пораженной коже отмечен высокий уровень экспрессии рецепторов к 1Ь-1.

Анализ значений экспрессии генов семейства 1Ь-1 в эпидермисе пока-

Ш невоспаленная кожа ё пораженная кожа

зал, что в группе ПА2 наблюдаются достоверно (р<0,05) более низкие индексы экспрессии 1Ь-1|3, ГЬ-Ша и 1СЕ в кератиноцитах из очагов поражения, чем у пациентов с РВП (рис. 2). Та же тенденция наблюдается и в непораженном эпидермисе. Это свидетельствует о том, что у пациентов группы ПА выраженность системного воспалительного ответа организма, по-видимому, взаимосвязана с неадекватной экспрессией генов системы 1Ь-1 непосредственно в эпидермисе. Обращает на себя факт, что в непораженном эпидермисе у пациентов с ПА2 показатель экспрессии гена 1Ь-1а соответствуют индексу экспрессии этого цитокина в клетках пораженного эпидермиса при РВП, не осложненном артритом.

SIL.-1a , illL-lb GDIL-1 Raic @ IL-1 Ras HICE

РВП Артрит 1 ст. Артрит 2 ст.

Рис. 2. Показатели экспрессии генов семейства IL-1 и ICE в невоспаленной (А) и пораженной (Б) коже пациентов с РВП и в сочетании с артритом 1 и 2 степени.

На настоящем Diane факт снижения экспрессии IL-lß сложно объяснить Нарастание неадекватности экспрессии генов семейства IL-1 в эпидермисе в зависимости от степени тяжести заболевания может приводить к более выраженному нарушению созревания IL-lß Однако, снижение экспрессии как IL-lß, так и IL-la должно вызывать уменьшение выраженности системной иммуновоспалительной реакции На самом деле имеет место обратная картина несмотря на снижение экспрессии IL-Iß и IL-la в эпидермисе больных ПА2 по сравнению с теми же показателями у больных РВП, системная иммуновоспалнтельная реакция возрастает Можно сделать предположение, что функцию регуляции воспаления взамен утраченной способности системы IL-1 берет на себя система его синергиста TNF Согласно современным представлениям, с изменением фушеционированшт системы именно этого цитокина связывают патогенез псориаза (Tarlow J К et al, 1997, Hulkkonen J et al, 2000, Reich К et al, 2002, Nickoloff В J , Nestle F О, 2004)

ВЫВОДЫ

1 Выявлено отсутствие системной иммуновоспалительной реакции в группе ботьных вульгарным псориазом У больных псориатическим артритом низкой степени активности отмечено статистически достоверное возрастание значений иммуноглобулинов IgG, циркулирующих иммунных комплексов, наличие явлений дисиротеинемии У пациентов с псориатическим артритом средней степени активности обнаружено статистически достоверное повышение практически всех показателей системной иммуновоспалительной реакции Следовательно, изменения иммунного статуса, неспецифической резистентности и динамика ответа острой фазы у больных псориазом носят количественный характер в зависимости от степени тяжести заботевания

2 Анализ полиморфизма генов системы интерлейкина-1 (IL-la, IL-lß, IL-lRe, IL-lRa) в лейкоцитах периферической крови у больных распространенным вульгарным псориа:ом и псориатическим артритом выявил следую-

щую тенденцию гомозиготы по высок опродуцирующему варианту гена 1Ь-1Р (+3953) встречаются исключительно среди больных с поражением суставов при псориазе (13,6%), у лиц, имеющих только поражение кожи, такой ген в 100% случаев отсутствовал Напротив, генотипы, гомозиготные по высокопродуцирующему варианту гена \Ь-П<л*2, не встречались среди пациентов с ПА и в 23,3% случаев выявлялись среди пациентов с ПК Следовательно, полиморфизм генов системы интерлейкина-1 может определять склонность индивидуума к преобладанию продукции либо провоспалительного цитокина 1Ь-1р, либо его противовоспалительного рецепторного антагониста 1Ь-1Ка, что, в свою очередь, оказывает влияние на тяжесть заболевания

3 У больных псориазом, как в кератиноцитзд из очагов поражения, так и в интактных клетках эпидермиса снижена продукция 1Ь-1а и установлена сверхэкспрессия 1Ь-1р Отмечено достоверное уменьшение активности кас-пазы 1СЕ (вследствие чего нарушено созревание 1Ь-1Р) и снижение продукции рецепторного антагониста 1Ь-Жа Количество рецепторов 1Ь-1Ие у больных псориазом повышено Выявленные изменения типичны для любой формы псориаза У лиц с псориатическим артритом средней степени активности наблюдаются достоверно более низкие индексы экспрессии 1Ь-1р, 1Ь-1 Ка и 1СЕ как во внешне неизмененном, так и пораженном эпидермисе по сравнению с пациентами с вульгарным псориазом

4 Выявлены взаимосвязи состояния системы II.-1 с формой и тяжестью течения псориаза Для больных вульгарным псориазом наиболее характерны отсутствие значимых проявлений системной иммуновоспалительной реакции и наличие «противовоспалительного генотипа» (генетически обусловленного перевеса в сторону выработки 1Ь-1Яа) Для больных псориатическим артритом более свойственно развитие признаков системной иммуновоспалительной реакции с преобладанием «провоспалительного генотипа» (генетически обусловленного перевеса в сторону выработки 1Ь 1 р) При любой форме псориаза отмечен аномальный характер экспрессии цитокинов семейства 11.-1 в

кератиноцитах из очагов поражения Аномалия экспрессии цитокинов семейства 1Ь-1 нарастает у больных псориагическим артритом

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 С целью прогнозирования тяжести течения псориаза, склонности к поражению суставов, рекомендовано проводить генетическое исследование крови пациентов на изучение функционального полиморфизма генов 1Ь-1Р и 1Ь-1Иа

2 Основным фактором риска развития псориатическот о артрита является носительство в гомозиготном состоянии высокопродуцирующего аллеля 1Ь-1р (+3953)

3 Наличие полиморфного варианта гена 1Ь-1Г1а*2, ответственного за гиперпродукцию рецепторного антагониста 1Ь-1Яа свидетельствует о крайне низкой вероятности развития псориатического артрита

СПИСОК РАБОТ, ОПУЬ ЛИКОВ А ИНЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Чаплыгин А В Изме нение показателей гуморального иммунитета у больных псориатической артропатией / А В Чаплыгин // Тез докл итог конф военно-науч общества слушатетей I факультета - СПб, 2002 - С 159

2 Полозов Ю Р Сравнительная характеристика эффективности терапии больных псориагическим артритом при использовании сульфасалазина, препаратов золота и нестероидных, противовоспалительных средств / Ю Р Полозов, А В Чаплыгин // Тез науч работ научно-прак конф «Актуальные вопросы терапии инфекций, передаваемых половым путем и хронических дерматозов» - Екатеринбург, 2002 - С 168

3 Полозов Ю Р Сравнительная характеристика эффективности лечения больных псориатическим артритом при использовании сульфасалазина, препаратов золота и нестероидны^ противовоспалительных средств / Ю Р Полозов, А В Чаплыгин // Тез науч работ VI Всерос научно-прак

конф «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении» - СПб, 2003 - С 256

4 Полозов Ю Р Комплексная оценка эффективности терапии псориатического артрита / Ю Р Полозов, А В Чаплыгин // Тез науч работ VI Всерос научно-прак конф «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении» - СПб, 2003 - С 256

5 Чаплыгин А В Изучение эффективности лечения сульфасалазином больных псориатическим артритом / А В Чаплыгин // Тез докл итог конф военно-науч общества слушателей I факультета и клинических ординаторов -СПб, 2003 -С 143

6 Чаплыгин А В Методы оценки эффективности терапии псориатического артрита / А В Чаплыгин // Тез докл итог конф военно-науч общества слушателей I факультета и клинических ординаторов - СПб,

2003 -С 149

7 Полозов Ю Р Показатели люминал-зависимой хемолюминесценции как маркер системной иммуновоспалительной реакции у больных распространенным вульгарным псориазом и псориатическим артритом / Ю Р Полозов, В Г Конусова, А В Чаплыгин, В О Матыцин // Журн дерматовенерологии и косметологии - 2004 - №1 - С 9 - 11

8 Полозов Ю Р Люминал-зависимая хемилюминесценция нейтрофилов периферической кропи у больных псориатическим артритом /ЮР Полозов, А В ЧаплЕ.1гин // Тез науч работ Всерос конф «Современные направления диашостики, лечения и профилактики ИПГ1П и дерматозов» - Н Новгород,

2004 - С 37

9 Хайрутдинов В Р Особенности гуморального и клеточного звеньев иммунитета у больных псориазом при лечении циклоспорином / В Р Хайрутдинов, ЮР Полозов, А В Чаплыгин и др // Мат итог конф военно-науч общества слушателей I факультета и клинических ординаторов - СПб, 2004 - С 154

10 Чаплыгин Л В Оценка эффективности различных методов терапии псориатического артрита / А В Чагшыпш //Мат и^ог конф военно-рауч общества слушателей I факультета и клин ординаторов - СПб, 2004 - С 159

11 Чаплыгин Л В Изменение показателей люминал-зависимой хемолгоминесценции у больных псориатическим артритом / А В Чаплыгин // Мат итог конф военно-науч общества слушателей I факультета и клинических ординаторов - СПб, ¿004 - С 160

12 Чаплыгин А В Изучение показателей люминал-зависимой хемолгоминесценции у больных псориазом / А В Чаплыгин, Ю Р Полозов // Мат итог конф военно-науч общества слушателей I факультета и клинических ординаторов - СПб, 2004 - С 161

13 Громова А Ю Различие показателей воспалительного ответа в коже при распространенном вульгарном псориазе и псориатическом артрите / А Ю Громова, А В Чаплыгин, А В Самцов н др // Российский журнал кожных и венерических болезней - 2005 - №5 - С 23 - 27

14 Мошкалов А В Особенности распределения аллелей генов рецепторов апоптоза семейства каспаз у ботьных псориазом / А В Мошкалов, М С Лобкова, Е Н Имянитов, А В Самцов, А В Чаплыгин // Мат науч -практ конф «Актуальные вопросы дерматовенерологии» - Иркутск, 2006 - С 45

15 Мошкалов А В Особенности распределения аллелей генов рецепторов апоптоза TNFR1 и DR4 у больных псориазом / А В Мошкалов, М С Лобкова, Е Н Имянитов, А В Самцов, А В Чаплыгин // Мат науч -практ конф «Актуальные ьопросы дерматовенерологии» Иркутск, 2006 - С 43

16 Шейко А В Особенности динамики иммунологического статуса больных псориазом при лечении циклоспорином / А В Шейко, Л В Костюченко, В Р Хайрутдинов, А В Чаплыгин // Сб науч тр 1062 ОВКГ - Ростов-нг-Дону, 2006 - С 204 - > 05

17 Громова А Ю Разяичие в носительстве полиморфных вариантов генов семейства интерлейкина-1 при псориазе и псориатическом артрите /

А10 Громова, А В Чаплыгин, В О Матыцин и др // Российский журнал кожных и венерических болезней - 2007 - №3 - С 4 - 8

18 Чаплыгин А В Показатели системы интерлеикина-1 в коже больных вульгарных псориазом и псориатическим артритом / А В Чаплыгин, В Р Хайрутдинов, А Ю Громова и др // Сб науч тр врачей Ленинградского военного округа - СПб, 2007 - С 186

19 Чаплыгин А В Распределение полиморфных генов системы интерлейкина-1 у больных псориазом / А В Чшльп ин, В Р Хайрутдинов, В О Матыцин и др // Сб науч тр врачей Ленинградского военного округа -СПб, 2007 - С 188

20 Хайрутдинов В Р Распределение аллелей полиморфных генов апоптоза семейства каспаз у больных псориазом / В Р Хайрутдинов, А В Чаплыгин, А В Мошкалов и др // Сб науч тр врачей Ленинградского военного округа -СПб, 2007 -С 169

21 Хайрутдинов ВР Распределение аллелей полиморфных генов рецепторов апоптоза TNFR1 и DR4 у больных псориазом / В Р Хайрутдинов, А В Чаплыгин, А В Мошкалов и др // Сб науч тр врачей Ленинградского военного округа - СПб, 2007 - С 171

22 Чаплыгин А В Особенности функционирования системы интерлейкина-1 у больных различными формами псориаза / АВЧанлыгии, А Ю Громова, Ю Р Полозов, В О Матыцин // Вес гник Рос Воен-мед акад -2007 - Т 17, №1 - С 355

23 Пономарев И А Роль полиморфного аллеля His кодона 302 гена апоптоза каспаза-8 в формировании риска развития псориатического артрита / И А Пономарев, А С Жуков, В Р Хайрутдинов, А В Чаплыгин и др // Тез науч работ II Всерос конгресса дерматовенерологов - СПб, 2007 - С 89

Формат 60x84 7,É Заказ № '60

Подписано в печать 5,05 08

Объем 1 пл_Тираж i 00 экз

Типография ВМедА, 194044, СПб , ул Академика Лебедева, 6

Актуальность проблемы.

Псориаз является одним из самых распространенных дерматозов, им страдает около 2-3% населения развитых стран. Он характеризуется хроническим течением, частыми рецидивами, тенденцией к прогрессированию, формированию резистентности к лечебным мероприятиям и зачастую - к инвалидизации пациентов (Мордовцев В.Н. 1995; Милевская С.Г. и соавт., 1997; Кунгуров Н.В. и соавт., 2002; Roenigk jr.H.H., Maibach H.J., 1985; Farber E.M., Nail M.I., 1991). При этом особенно тяжелой формой псориаза является псориатический артрит, который развивается у 5-12% больных (Kammer G.M. et al., 1979; Helliwell P.S., Wright V., 1998; Ashcroft D.M. et al., 2000).

Однако, несмотря на большое количество исследований, посвященных псориазу, остаётся нерешенным ряд вопросов патогенеза и лечения этого заболевания. В литературе последних лет обсуждается роль4 регуляторных факторов иммунной системы - цитокинов в патогенезе псориаза. Функционирование цитокиновой системы при псориазе может определяться разными факторами, в числе которых - индивидуальные различия в продукции цитокинов, обусловленные рядом генотипических и фенотипических особенностей (Tarlow J.K. et al., 1997; Hurme M., Santtila S., 1998; Hulkkonen J. et al., 2000; Reich K. et al., 2002). Ключевое место в регуляции реакции воспаления принадлежит цитокинам семейства IL-1. Равновесие между продукцией, экспрессией и ингибицией синтеза белков семейства IL-1 играет важную роль в развитии воспалительного процесса. В связи с этим, нарушение экспрессии генов, регулирующих синтез белков семейства IL-1, способное необоснованно увеличить или снизить синтез соответствующего продукта, приводят к дисбалансу IL-1-ответа в целом, а, значит, может играть роль кофактора ряда заболеваний (Tarlow J.K. et al., 1997; Reich К. et al., 2002). Это в полной мере относится и к псориазу, который рядом авторов рассматривается как болезнь кератиноцита, активированного IL-1 (Blanton R.A. et al., 1989; Kupper T.S, 1989).

Анализ литературных данных свидетельствует о необходимости проведения комплексного исследования IL-1-ответа при псориазе с учетом клинических форм, тяжести течения и аллельных генотипов IL-1 больного (Карр А., 1993; Debets R. et al., 1997; Reich К. et al., 2002; Nickoloff В. J., Nestle F.O., 2004). Решение же вопросов иммунопатогенеза псориаза может обосновать патогенетический подход к лечению этого заболевания, способствовать совершенствованию прогноза, рациональному использованию современных, в том числе иммунотропных, лекарственных средств, поиску новых путей терапии этого распространенного заболевания.

Цель настоящей работы: на основе комплексного изучения показателей воспалительного ответа, иммунного статуса и иммуногенетических характеристик выявить особенности функционирования системы интерлейкина-1 у больных различными формами псориаза.

Задачи:

1. Провести комплексную оценку показателей воспалительного ответа и иммунного статуса пациентов, страдающих распространенным псориазом и псориатическим артритом.

2. Изучить полиморфизм генов системы интерлейкина-1 (IL-la, IL-1(3, IL-1 Re, IL-IRa) в лейкоцитах периферической крови у больных распространенным вульгарным псориазом и псориатическим артритом.

3. Оценить характер экспрессии белков системы интерлейкина-1 (IL-la, IL-lp, IL-1 Re, IL-IRa) в кератиноцитах больных распространенным вульгарным псориазом и псориатическим артритом.

4. На основании анализа полученных результатов определить взаимосвязь состояния системы интерлейкина-1 с формой и тяжестью течения псориаза.

Научная новизна:

Обнаружено усиление сверхэкспрессии функционально незрелого IL-ip и снижение продукции IL-la у больных псориатическим артритом по сравнению с пациентами, страдающими вульгарным псориазом.

Среди пациентов с вульгарным псориазом преобладают гомозиготы по высокопродуцирующему варианту гена IL-lRa*2, что обусловливает формирование «противовоспалительного генотипа», ответственного за повышенную продукцию рецепторного антагониста IL-lRa.

Высокопродуцирующий аллель IL-ip (+3953) в гомозиготном состоянии всегда отсутствует у пациентов с вульгарным псориазом и встречается только среди больных псориатическим артритом, что обусловливает формирование «провоспалительного генотипа», определяющего преобладание продукции IL-1(3.

Практическая значимость:

Результаты генотипирования полиморфных генов системы IL-1 у больных псориазом позволят:

- прогнозировать интенсивность воспалительной реакции у больных различными формами псориаза;

- прогнозировать вероятность развития у пациента тяжелых форм псориаза и склонности к поражению суставов;

- персонализировать направление предполагаемой терапии псориаза, в том числе иммуномодулирующей.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. В зависимости от функционального полиморфизма генов системы IL-1 для больных вульгарным псориазом наиболее характерен противовоспалительный генотип» (генетически обусловленный перевес в сторону выработки IL-IRa); для больных псориатическим артритом - «провоспалительный генотип» (генетически обусловленный перевес в сторону выработки IL-1(3).

2. Экспрессия генов семейства IL-1 в кератиноцитах больных псориазом носит аномальный характер, выражающийся в снижении продукции IL-la и сверхэкспрессии функционально незрелого IL-ip.

3. Степень аномальности экспрессии цитокинов семейства IL-1 у больных псориатическим артритом, сопровождающимся активными проявлениями системной иммуновоспалительной реакции, максимальна.

Практическая реализация.

Основные результаты диссертации отражены в 23 опубликованных работах, в том числе две статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки Российской Федерации. Оформлены 4 рационализаторских предложения. Материалы работы нашли применение в учебном и лечебном процессах на кафедре кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова и кожно-венерологических отделениях ФГУ «442 Окружной военный клинический госпиталь ЛенВО» Министерства обороны Российской Федерации. Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматологии» (Санкт-Петербург, 2002); VI Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2003); Научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматологии» (Санкт-Петербург, 2006); Научно-практической конференции, посвященная 110-летию со дня рождения С.Т. Павлова (Санкт-Петербург, 2007); VIII Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007).

ВЫВОДЫ

1. Выявлено отсутствие системной иммуновоспалительной реакции в группе больных вульгарным псориазом. У больных псориатическим артритом низкой степени активности отмечено статистически достоверное возрастание значений иммуноглобулинов IgG, циркулирующих иммунных комплексов, наличие явлений диспротеинемии. У пациентов с псориатическим артритом средней степени активности обнаружено статистически достоверное повышение практически всех показателей системной иммуновоспалительной реакции. Следовательно, изменения иммунного статуса, неспецифической резистентности и динамика ответа острой фазы у больных псориазом носят количественный характер в зависимости от степени тяжести заболевания.

2. Анализ полиморфизма генов системы интерлейкина-1 (IL-la, IL-lp, IL-1 Re, IL-IRa) в лейкоцитах периферической крови у больных распространенным вульгарным псориазом и псориатическим артритом выявил следующую тенденцию: гомозиготы по высокопродуцирующему варианту гена IL-1(3 (+3953) встречаются исключительно среди больных с поражением суставов при псориазе (13,6%), у лиц, имеющих только поражение кожи, такой ген в 100% случаев отсутствовал. Напротив, генотипы, гомозиготные по высокопродуцирующему варианту гена IL-lRa*2, не встречались среди пациентов с ПА и в 23,3% случаев выявлялись среди пациентов с ПК. Следовательно, полиморфизм генов системы интерлейкина-1 может определять склонность индивидуума к преобладанию продукции либо провоспалительного цитокина IL-1 (3, либо его противовоспалительного рецепторного антагониста IL-IRa, что, в свою очередь, оказывает влияние на тяжесть заболевания.

3. У больных псориазом, как в кератиноцитах из очагов поражения, так и в интактных клетках эпидермиса снижена продукция IL-la и установлена сверхэкспрессия IL-ip. Отмечено достоверное уменьшение активности каспазы ICE (вследствие чего нарушено созревание IL-1J3) и снижение продукции рецепторного антагониста IL-IRa. Количество рецепторов IL-IRe у больных псориазом повышено. Выявленные изменения типичны для любой формы псориаза. У лиц с псориатическим артритом средней степени активности наблюдаются достоверно более низкие индексы экспрессии IL-ip, IL-IRa и ICE как во внешне неизмененном, так и пораженном эпидермисе по сравнению с пациентами с вульгарным псориазом.

4. Выявлены взаимосвязи состояния системы IL-1 с формой и тяжестью течения псориаза. Для больных вульгарным псориазом наиболее характерны 4 отсутствие значимых проявлений системной иммуновоспалительной реакции и наличие «противовоспалительного генотипа» (генетически обусловленного перевеса в сторону выработки IL-IRa). Для больных псориатическим артритом более свойственно развитие признаков системной иммуновоспалительной реакции с преобладанием «провоспалительного генотипа» (генетически обусловленного перевеса в сторону выработки IL-ip). При любой форме псориаза отмечен аномальный характер экспрессии цитокинов семейства IL-1 в кератиноцитах из очагов поражения. Аномалия экспрессии цитокинов семейства IL-1 нарастает у больных псориатическим артритом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью прогнозирования тяжести течения псориаза, склонности к поражению суставов, рекомендовано проводить генетическое исследование крови пациентов на изучение функционального полиморфизма генов IL-lp и IL-IRa.

2. Основным фактором риска развития псориатического артрита является носительство в гомозиготном состоянии высокопродуцирующего аллеля IL-ip (+3953).

3. Наличие полиморфного варианта гена IL-IRa*2, ответственного за гиперпродукцию рецепторного антагониста IL-IRa свидетельствует о крайне низкой вероятности развития псориатического артрита.