Функциональное состояние и параметры апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе

Мамалыга, Ирина Николаевна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Функциональное состояние и параметры апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Мамалыга, Ирина Николаевна Москва 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Функциональное состояние и параметры апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе

На правах рукописи

МАМАЛЫГА Ирина Николаевна

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ И ПАРАМЕТРЫ АПОПТОЗА ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ КЛЕТОК С ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПРИ ГЕСТОЗЕ

14.00.36 - аллергология и иммунология

- 8 ОКТ 2009

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 2009

003478738

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Научный руководитель:

Заслуженный врач РФ

доктор медицинских наук,

профессор Сотникова Наталья Юрьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Стенина Марина Александровна

Заслуженный деятель науки РУз

доктор медицинских наук,

профессор Гариб Фируз Юсуфовнч

Ведущая организация:

ФГУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени В.И.Кулакова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Защита состоится <<(_9у> Р^С^Г • 2009 года в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.072.05 при ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Кузнецова Т.Е.

АКТУАЛЬНОСТЬ НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Гестоз является одним из наиболее грозных осложнений беременности, представляющих опасность для матери и плода (Кулаков, В.Н. и др., 2005; Савельева, Г.М. и др., 2005). Несмотря на постоянное внимание к проблеме гестоза во всем мире, до настоящего времени вопросы этиологии и механизмы развития данной акушерской патологии остаются спорными.

Накопленные к настоящему времени сведения дают возможность полагать, что важную роль в патогенезе гестоза играет иммунный компонент (Сухих, Г.Т. и др., 1997; Сотникова Н.Ю. и др., 2005; Sargent, I.et. al., 2004; Xia, Y., 2007; Zhou, L.L. et. al., 2008), причем клеткам, обладающим цитотоксическими свойствами, отводится ведущая роль в этих процессах (Соколов Д.И., и соавт., 2007 Mahmoud, F. et. al., 2003; Dimitrakova-Dzhambazova, E. et. al.„ 2005; Bachmayer, N. et. al., 2006).

Имеющиеся данные об изменениях в содержании цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и NK клеток в периферической крови женщин с гестозом носят весьма противоречивый характер (Van Wijk M.J. et. al., 2001; Borzychowski, A.M. et. al., 2005; Dimitrakova-Dzhambazova, E. et. al., 2005; Paeschke, S. et. al., 2005; Bachmayer, N. et. al., 2006). Вклад ЦТЛ и NK клеток в суммарную продукцию цитокинов при гестозе остается мало изученным. Имеются лишь отдельные сведения об отсутствии достоверных различий в характере продукции IL-2 и IFNy цитотоксическими Т-лимфоцитами при неосложненной беременности и гестозе, и о повышенной продукции IFNy CD 16+ клетками у женщин с гестозом (Darmochwal-Kolarz, D. et. al., 2002). Некоторые авторы не отметили изменений в относительном содержании IFNy+ и IL-2+ NK клеток у женщин с неосложненным течением беременности и с преэк-лампсией (Van Nieuwenhoven, A.L. et. al., 2008).

В литературе имеются противоречивые сведения об экспрессии рецепторов к IL-2 ЦТЛ при гестозе (Астраух, Н.В., 2002; Abe, E. et. al., 2003; Ни D, et. al., 2008; Paeschke, S. et. al., 2005; Darmochwal-Kolarz, D. et. al., 2007), и практически полностью отсутствуют данные об экспрессии рецепторов к IFNy на поверхности клеток с цитотоксической активностью. Остаются неизученными вопросы, касающиеся продукции цитолитических молекул как при неосложненном течении беременности, так и при гестозе. Также немногочисленны работы, посвященные изучению процессов апоптоза клеток с цитотоксической активностью и роли самих цитотоксических лимфоцитов в регуляции Fas-индуцированного апоптоза при гестозе. Таким образом, сведения об

особенностях функционального состояния клеток с цитотоксической активностью, а так же параметрах апоптоза периферических цитоток-сических Т-лимфоцитов и естественных киллеров при гестозе малочисленны и достаточно противоречивы. В то же время, изучение роли данных популяций клеток в развитии характерных для гестоза осложнений, поможет лучше понять патогенез данной акушерской патологии.

Цель научного исследования

На основании определения особенностей активации, апоптоза, продукции и рецепции цитокинов, экспрессии Огапхуше В периферическими лимфоцитами с цитотоксической активностью при беременности установить особенности их функционирования при гестозе.

Задачи научного исследования

1. Установить особенности содержания и активации периферических клеток с цитотоксической активностью у женщин с гестозом.

2. Оценить спонтанную и стимулированную внутриклеточную продукцию Огапгуте В периферическими клетками с цитотоксической активностью при гестозе.

3. Выявить особенности продукции и рецепции 1Р№/ и 1Ь-2 периферическими клетками с цитотоксической активностью при гестозе.

4. Оценить особенности параметров Раэ-зависимого апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью у женщин с гестозом.

Научная новизна исследования

- Выявлены новые иммунные механизмы развития гестоза, заключающиеся в накоплении клеток с повышенной цитотоксической активностью, включая ЦТЛ, ИК и >Ж-Т, активно продуцирующих ГРЫу, 1Ь-2 и ОгапгушеВ, обладающих повышенной апоптоз индуцирующей способностью.

- Впервые установлены особенности ранней активации периферических клеток с цитотоксической активностью у женщин с гестозом, характеризующиеся усилением экспрессии С069 и С011Ь молекул на поверхности клеток с фенотипом СИ56+.

- Впервые выявлены особенности спонтанной и стимулированной внутриклеточной продукции ОгапгушеВ периферическими клетками с цитотоксической активностью при гестозе, проявляющиеся увеличением содержания в крови женщин С08+0гВ+ лимфоцитов и усилением стимулированной ОгапгушеВ -продуцирующей способности С08+ и СО 16+клеток.

- Установлены закономерности изменений спонтанной внутриклеточной продукции и рецепции ШЫу и 1Ь-2 периферическими лимфот цитами у женщин с гестозом, проявляющиеся повышением содержа-

ния Ш^у-продуциругощих цитотоксических Т-лимфоцитов, 1Ь-2-продуцирующих СБ8+ и СБ56+ клеток, количества СБ8+ и СБ 16+ клеток, экспрессирующих рецепторы к 1Ь-2, и снижением уровня СБ 16+ и СБ56+ клеток, экспрессирующих рецепторы к 1РЫу.

- Установлено, что при гестозе стимуляция ФМА и иономицином через 5 часов инкубации индуцирует усиленную внутриклеточную продукцию 1РЫу СЕ)8+, С016+ и СБ56+ клетками, через 24 часа - 1Ь-2 цитотоксическими Т-лимфоцитами.

- Выявлено, что при гестозе повышается апоптоз индуцирующая активность СБ 16+ и С056+ ЫК клеток, усиливается готовность ЦТЛ и С016+ МС клеток к апоптозу, увеличивается содержание СБ16+ и С056+ №С клеток вступивших в апоптоз, но при этом возрастает количество аннексии негативных клеток с цитотоксической активностью всех типов.

Практическая значимость исследования

- Установлен комплекс нормативных параметров с оценкой фенотипа, функционального состояния и апоптоза лимфоцитов с цитотоксической активностью, который рекомендуется использовать для мониторинга течения беременности.

- Уточнена роль клеток с цитотоксической активностью в патогенезе гестоза, что позволяет лучше понять механизм развития данной акушерской патологии.

Реализация результатов работы

Нормативные данные функционального состояния и параметров апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе используются в работе врачей аллергологов-иммунологов КДП ФГУ «Ив НИИ МиД им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» и в учебном процессе на кафедре акушерства, гинекологии и медицинской генетики ГОУ ВПО «Ив ГМА Росздрава».

Апробация работы

Основные положения работы доложены на Республиканской конференции «Иммунология репродукции» (Иваново, 2005); Международной научно-практической конференции «Иммунологические аспекты репродукции человека» - Новосибирск, 2008; 13 Всероссийском форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту

Иммунные механизмы развития гестоза связаны с накоплением клеток с повышенной цитотоксической и апоптоз индуцирующей активностью на фоне нарушения их элиминации путем апоптоза. В периферической крови беременных женщин с гестозом повышено содержание

активированных цитотоксических лимфоцитов, >Ж и ЫК-Т, активно продуцирующих 1Ь-2, №N7 и ОгапгушеВ, экспрессирующих молекулы адгезии. Для гестоза характерно изменение рецепции цитокинов, проявляющееся увеличением содержания СБ25 позитивных ЦТЛ и СБ 16+ ТЧК и снижением ИК-клеток, экспрессирующих рецепторы к №N7. У женщин с гестозом наблюдается усиленный ответ клеток с цитотокси-ческой активностью на стимуляцию ФМА и иономицином.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 4 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 125 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 3 глав собственных исследований, главы «Обсуждение результатов», выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 255 источников отечественных и зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 6 рисунками и 19 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Исследования проводились на базе акушерской и гинекологической клиник Федерального государственного учреждения «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» (директор - заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., профессор Посисеева Л.В.).

Обследованы: 141 женщина в III триместре гестации, в том числе -63 беременных женщины, у которых течение гестационного процесса не было осложнено развитием гестоза (контрольная группа) и 78 беременных женщин с гестозом.

Иммунологические исследования проводились в лаборатории клинической иммунологии ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» (зав. лабораторией заслуженный врач РФ, д.м.н., профессор Сотникова Н.Ю.).

Материалом для исследования у женщин служила периферическая венозная кровь.

Для проведения иммунологических исследований выделяли обогащенную популяцию лимфоцитов периферической крови стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в градиенте плотности фиколл-урографина (d-1,078).

Поверхностный фенотип лимфоцитов и внутриклеточную экспрессию цитокинов определяли с помощью моноклональных антител (мАТ) методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickinson, США). В качестве флюорохромных меток использовали флюоресцеин изотиоционат (FITC) и фикоэрит-рин (РЕ). Процедуру окрашивания и фиксации клеток проводили стандартным способом в соответствии с указаниями фирмы-разработчика. Д ля анализа неспецифического окрашивания использовали Simultest Contml (мышиные IgGl-FlTC + IgG2a-PE) ("Becton Dickinson", США). Исследования проводили в лимфоцитарном гейте. При анализе лимфоцитарный гейт включал не менее 95-98% клеток с фенотипом CD45+CD14-. В каждом образце анализировали не менее 10000 клеток. Анализ результатов проводили в программе "LYSYS П".

Фирма-производитель и клон, использованных в исследовании мАТ, указаны в таблице 1.

Таблица 1

Характеристика моноклональных антител, использованных в работе

МАТ Клон Фирма-производитель Флюорохром

CD3 ICO-90 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC, РЕ

CD8 ICO-31 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC, РЕ

CD 16 ICO-116 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC, РЕ

CD56 ICO 186 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC

CD56 MEM-188 «Caltag Laboratories», США РЕ

CD69 TP1.55.3 «Immunotech», Франция РЕ

CD25 ICO-124 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC

CD95, Fas ICO-160 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC

CD95L, FasL Alf-2.1 «Caltag Laboratories», США FITC

CD119 92101 «R&D Systems», США FITC

CD] lb ICO-GM1 НПЦ «МедБиоСпектр», Россия FITC

CDllc HC1-3 «Becton Dickinson», США РЕ

Recombinant Annexin V «Caltag Laboratories», США FITC

Для определения количества клеток, вступивших в апоптоз, проводили тест с одновременным окрашиванием клеток моноклональны-ми AT анти-CDl 6+, анти-СБ56+ или airra-CD8+ и Annexin V. Для этого на нервом этапе проводили стандартную процедуру окрашивания клеток моноколональными антителами к соответствующей популяции. После 30 минутной инкубации клетки отмывали центрифугированием в 1 мл PBS. Клетки ресуспендировали в 50 мкл PBS, добавляли 5 мкл Annexin V, конъюгированного с FITC, инкубировали 15 мин в темноте. Затем добавляли 200 мкл стабилизирующего буфера (CALTAG Laboratories, США), и не более чем в течение 30 мин анализировали на проточном цитофлюориметре.

Стимулированную внутриклеточную продукцию цитокинов исследовали в клеточной суспензии инкубировавшейся при 37°С и 5%С02 в течение 5 и 24 часов в среде RPMI-1640, содержащей 10% инактивированной телячьей эмбриональной сыворотки, 2 mM L-глютамина, 40 мкг/мл гентамицина, 10 нг/мл форболмиристатацетата (ФМА) (Sigma, США), 1|аМ иономицина (Sigma, США) в присутствии 2 )лМ моненсина (Sigma, США). Затем клетки отмывали от препаратов физиологическим раствором центрифугированием при 1500 об/мин 5 мин. В качестве контроля использовали показатели исходного уровня клеток внутриклеточно продуцирующих IL-2, IFNy и GranzymeB в периферической крови. Подсчет концентрации и жизнеспособности лимфоцитов до и после инкубации показал, что гибель клеток во всех случаях составила менее 8%.

Внутриклеточную процедуру окрашивания клеток-продуцентов IFNy, IL-2 и GranzymeB проводили в соответствии с инструкциями фирмы-производителя, используя коммерческий набор FIX & PERM cell permeabi-lization kit (CALTAG Laboratories, США) для пермеабилизации клеточной мембраны.

Характеристика моноклональных антител, использованных для определения внутриклеточной продукции цитокинов, представлена в таблице 2.

Таблица 2

• Характеристика моноклоналъных антител, использованных для определения внутриклеточного содержания цитокинов_

МАТ Клон Фирма-производитель Флюорохром

Ahth-IL-2 MQ1-17Н12 CALTAG Laboratories, CILIA РЕ

Анти-GranzymeB GB-12 CALTAG Laboratories, США РЕ

Анти-IFNy В27 CALTAG Laboratories, США РЕ

Внутриклеточный синтез цитокинов и GranzymeB оценивали в популяции CD8+, CD 16+, CD56+ лимфоцитов (CD8+GrB+, CD16+GrB+, CD56+GrB+, CD8+IL-2+, CD16+IL-2+, CD56+IL-2+, CD8+IFNy+, CD16+ IFNy+, CD56+IFNy+ клетки). При проведении процедуры окрашивания клетки сначала инкубировали с мАТ к поверхностным маркерам клеток в соответствии со стандартным протоколом. Затем клетки фиксировали в течение 15 мин в 100 мкл фиксирующего буфера А из набора FIX & PERM cell permeabilization kit. Клетки отмывали от фиксирующего буфера в 2 мл PBS центрифугированием в течение 5 мин при 1500 об/мин, надосадочную жидкость сливали. Отмытые клетки инкубировали со 100 мкл пермеабилизирующего буфера Вис мАТ для внутриклеточного окрашивания.

Статистическая обработка данных проводилась с расчетом среднего арифметического и ошибки среднего арифметического с использованием программы Microsoft Excel из комплекта Microsoft Office 2000 и программы STUD ВАТ из комплекта «Statistica». Достоверность различий сравниваемых показателей определялась по t-критерию Стыодента.

Результаты работы н их обсуждение

Нами была проведена оценка особенностей функционального состояния и параметров апоптоза периферических клеток с цитотокси-ческой активностью при гестозе.

Исследование содержания в периферической крови беременных женщин клеток с цитотоксической активностью выявило достоверное повышение при гестозе уровня всех популяций исследуемых клеток, включая цитотоксические Т-лимфоциты (р<0,001), NK-T клетки (р<0,001) и NK клетки с фенотипом CD 16+ (р<0,02) и CD56+ (р<0,001). Вероятно, увеличение пула NK-T клеток происходило за счет увеличе-

ния популяции CD16+CD56- лимфоцитов, поскольку в периферической крови женщин с гестозом отмечалось достоверное повышение лишь этой популяции. Отмеченное нами повышение уровня цитотоксических лимфоцитов в периферической крови женщин с гестозом могло быть обусловлено высоким уровнем сывороточного содержания провоспали-тельных цитокинов, которое отмечается большинством авторов при гестозе (Лукина Н.С. и др., 2005; Медвинский, И.Д., 2004; Пелевина М.И. и др., 2006; Сотникова Н.Ю. и др., 2007; Чистякова, Г.Н. и др., 2006; López-Jaramillo, Р. et. al., 2008).

Важную информацию о функционировании клеток дает степень их активации (Ярилин, A.A., 1999).

Данные, характеризующие функциональное состояние лимфоцитов с цитотоксической активностью, приведены в таблице 3.

Таблица 3

Сравнительная характеристика функционального состояния периферических клеток с цитотоксической активностью у женщин с физиологической беременностью и гестозом

Показатель ФБ Гестоз

n=19 п=35

CD56+CD69+ 1,24+0,10 1,82+0,19***

CD56+CD11Ь+ 2,03+0,40 4,47+0,67*

GrB+ 19,71+1,19 23,22+0,79*

CD8+Gr В+ 6,39+0,3 10,15+0,83****

IL-2+ 16,99+0,80 23,38+1,28****

CD8+IL-2+ 4,80+0,67 7,84+1,23*

CD56+IL-2+ 1,90+0,16 2,56+0,27*

IFNy+ 16,83+0,69 22,48+1,46***

CD8+IFNy+ 2,97+0,67 5,89+0,83**

CD25+ 5,52+0,11 7,16+0,34****

CD8+CD25+ 0,62+0,07 1,04+0,18*

CD16+CD25+ 0,27+0,02 0,55+0,07****

CD119+ 11,05+0,94 6,86+0,64****

CD16+CD119+ 2,18+0,13 1,14+0,17****

CD56+CD119+ 2,08+0,33 1,27+0,16*

*- коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с показателями у женщин с ФБ (*- р<0,05, ** - р<0,02, *** -р<0,01**** -р<0,001).

Нами проведено исследование особенностей экспрессии маркера ранней активации СО69 на поверхности ЦТЛ и "ЫК у беременных женщин с гестозом по сравнению с аналогичными показателями женщин с нормально протекающей беременностью. При гестозе мы отметили повышение содержания СВ56+ 1ч[К, экспрессирующих молекулу СБ69 (р<0,01).

У женщин с гестозом по сравнению с таковым у женщин с физиологически протекающей беременностью было выявлено увеличение общего количества лимфоцитов, экспрессирующих СВ11Ь молекулу, (р<0,05). При этом в крови женщин с гестозом достоверно выше, чем при неосложненной беременности, был уровень естественных киллеров с фенотипом С056+, экспрессирующих СОНЬ (р<0,05).

Известно, что молекулы адгезии участвуют в реализации межклеточных взаимодействий по типу клетка-клетка и клетка-межклеточный матрикс, вовлекаясь, таким образом, в осуществление процессов миграции клеток и взаимодействие цитотоксических клеток с клетками-мишенями (Пальцев, М.А., 1995). Взаимодействие СБ! 1Ь-позитивных Ж клеток с клетками мишенями приводит к усилению продукции различных цитокинов и цитолитических веществ, которые опосредуют цитотоксическую активность ЫК клеток (Пальцев, М.А., 1995), что может играть непосредственную роль в развитии системного воспалительного иммунного ответа у женщин с гестозом.

Поскольку в основе развития любого иммунного ответа, в том числе и материнского иммунного ответа на развивающийся плод, лежит цитокиновая регуляция [Ковальчук Л.В. и др., 2001], мы предположили, что изучение продукции важнейшего провоспалительного цитокина №N7, а также 1Ь-2, отвечающего за пролиферативный ответ иммунокомпетентных клеток, представляет несомненный интерес.

Установлено, что для гестоза характерно значительное увеличение количества периферических лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих 1Ь-2, по сравнению с таковым при нормально протекающей беременности (р<0,001). Повышение содержания 1Ь-2 позитивных клеток при гестозе происходило за счет увеличением пула ЦТЛ и СЭ56+ Ж (р<0,05 в обоих случаях).

Известно, что 1Ь-2 является цитокином, активирующим пролиферативный и дифференцировочный ответы Т-лимфоцитов (Ковальчук Л.В. с соавт., 2001; Белоцкий, С.М. с соавт., 2008). 1Ь-2 индуцирует экспрессию перфорина и СгапгутеВ ЦТЛ, усиливая цитотоксическую активность С08+лимфоцитов (Белоцкий, С.М. с соавт., 2008) и увеличивает экспрессию антиапоптотического гена Вс1-2, оказывая угнетающее

влияние на апоптоз клеток (Akbar, A.N. et.al., 1996; Gupta, S. et.al., 2005). Это позволяет предположить, что повышение продукции 1L-2 цитотоксическими лимфоцитами свидетельствует о важной регулятор-ной функции клеток с цитотоксической активностью при гестозе.

Одновременно при гестозе повышалось содержание IFNy-синтезирующих лимфоцитов по сравнению с аналогичным параметром женщин с неосложненной беременностью (р<0,01) за счет увеличения пула IFNy-позитивных ЦТЛ (р<0,02).

Известно, что IFN-y оказывает потенциально опасное воздействие на беременность за счет индукции апоптоза трофобласта (Aban, М. et.al., 2004) и активации гранзим-перфоринового механизма уничтожения клетки-мишени (Tobias, М. et.al., 2007). IFNy непосредственно стимулирует экспрессию рецепторов к ангиотензину II в стенке кровеносных сосудов (Fernandez-Castelo, S. et. al., 1987; Horiuchi M. S. et.al., 2000), что может провоцировать развитие гипертензии, которая является характерным симптомом гестоза. В работах последних лет было показано, что при преэклампсии повышается сывороточная концентрация IFNy-индуцибельного протеина CXCL10/IP-10, обладающего не только провоспалительными, но и выраженными анти-ангиогенными свойствами (Gotsch, F. et.al., 2007). Одновременно с этим доказана способность IFNy стимулировать адгезию клеток на поверхности эндотелия (Белоцкий, С.М. с соавт., 2008). Повышение IFNy-продуцирующей способности клеток с цитотоксической активностью у женщин с осложненным течением гестационного процесса, вероятно, может обуславливать клинические проявления гестоза.

У беременных женщин с гестозом было выявлено значительное увеличение количества лимфоцитов, внутриклеточно экспрессирующих GranzymeB, по сравнению с показателями женщин с неосложненным течением беременности (р<0,05). Достоверно более высокое содержание GranzymeB позитивных лимфоцитов отмечалось в популяции CD8+ клеток (р<0,001). GranzymeB представляет специфичную к остатку ас-парагиновой кислоты сериновую протеазу, принимающую активное участие в гранзим-перфориновом механизме уничтожения клетки-мишени активированными ЦТЛ. Этот механизм подразумевает образование в зоне контакта с клеткой-мишенью трансмембранных каналов с помощью белка перфорина. Через этот канал внутрь клетки поступают гранзимы, представляющие протеолитические ферменты, основным из которых является GranzymeB, превращающий прокаспазу-3 в каспазу-3. Включение последней приводит к разрушению белков цитоскелета и ядра клетки (Белоцкий, С.М. с соавт., 2008). Можно предположить, что

повышение уровня GranzymeB-позитивных ЦТЛ при геетозе ведет к развитию цитотоксических реакций против тканей материнских органов, плаценты и плода, что может обуславливать клинические проявления гестоза. Это предположение согласуется с имеющимися в литературе данными о том, что активированные ЦТЛ могут опосредованно через перфорин-гранзимовый путь повреждения клеток разрушать ау-тологичные тромбоциты (Zhang, F. et.al., 2006), вызывая характерную для гестоза тромбоцитопению (Zhang, F. et.al., 2006).

Характер продукции цитокинов и цитотоксических молекул цитоток-сическими Т-лимфоцитами изменяется в динамике их дифференцировки. Известно, что наивные клетки не способны выполнять эффекторные функции и не способны к высокому уровню продукции цитокинов (Tobias, М. et.al., 2007), тогда как наиболее мощными продуцентами ÍL-2, IFN-y и GranzymeB являются претерминально-дифференцированные и терминально-дифференцированные эффекторные CD8+ клетки памяти (Талаев В.Ю. с соавт., 2005; Maldonado A. et.al., 2003).

По-видимому, при геетозе усилен процесс дифференцировки цитотоксических Т-лимфоцитов, и основной пул CD8+ лимфоцитов представлен популяциями эффекторных клеток памяти, способными к быстрому реагированию на повторное поступление антигена усилением цитотоксических реакций.

Изучение особенностей рецепции IL-2 и IFNy лимфоцитами с ци-тотоксической активностью выявило, что у женщин с гестозом по сравнению с аналогичными показателями женщин с нормально протекающей беременностью в целом было значительно повышено содержание лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы к IL-2 (р<0,001), за счет CD8+ лимфоцитов (р<0,05) и CD 16+ NK (р<0,001).

Повышение количества лимфоцитов с цитотоксической активностью, экспрессирующих на своей поверхности рецепторы к IL-2, по-видимому, свидетельствует о готовности клеток к быстрому реагированию под влиянием цитокинового сигнала и об активированном состоянии ЦТЛ и NK клеток при геетозе. В качестве такого сигнала может выступать усиленная продукция IFNy, способствующая пролиферации и дифференцировке клеток с цитотоксической активностью.

Проведенные исследования показали, что у женщин с гестозом нарушена рецепция IFNy, у них было достоверно снижено содержание CD119+ лимфоцитов по сравнению с аналогичными показателями женщин с физиологической беременностью (р<0,001). Кроме того, при геетозе было ниже, чем у женщин с физиологической беременностью, содержание NK клеток с фенотипом CD 16+ и CD56+, экспрес-

сирующих рецепторы к №N7 (р<0,001 и р<0,05 соответственно), что может способствовать освобождению ¡РИу в среду, не вызывая его последующего повторного связывания с лимфоцитами и, вопреки ан-типролиферативному действию №N7 (Ковальчук Л.В. и др., 2001), усиливать пролиферацию клеток в процессе развития иммунного ответа при гестозе.

Наибольшие изменения при гестозе наблюдались в популяции ЦТЛ, и заключались в значительном повышении содержания СБ8+ лимфоцитов, продуцирующих провоспалительные цитокины и цитолитические молекулы. Это может быть обусловлено усиленным поступлением в материнский кровоток антигенов плодового происхождения за счет повышения проницаемости плаценты, обусловленной характерным для гестоза усилением апоптоза клеток трофобласта с последующей активацией реакций адаптивного иммунитета (З^азгехузкьСИауег, Б.Ь. е1.а!., 2004). Одновременное увеличение уровня цитотоксических Т-лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих 1Ь-2 и экспрессирующих рецепторы к нему, может запускать процесс аутоактивации, поддерживая тем самым высокий уровень пролиферации и дифференцировки клеток с цитотоксической активностью при гестозе.

Увеличение содержания ЦТЛ, внутриклеточно продуцирующих ОгапгушеВ, свидетельствует об их высоком цитолитическом потенциале и усилении активации гранзим-перфоринового механизма уничтожения клеток-мишеней. Повышение цитолитической способности ЦТЛ может обуславливать повреждение клеток организма беременной женщины и вызывать характерные для гестоза проявления полиорганной недостаточности. Увеличение продукции №N7 может способствовать развитию гипертензивного синдрома и нарушению функции почек при гестозе. Наблюдавшееся при гестозе повышение содержания С056+ МК клеток, находящихся на ранних этапах активации и экспрессирующих адгезионные молекулы, может повышать миграционную способность клеток с последующим их участием в нарушении функции эндотелия и развитии полиорганной недостаточности. При гестозе отмечалось также увеличение в крови количества СБ 16+ ЫК клеток, экспрессирующих рецепторы к 1Ь-2, на фоне снижения содержания С016+СБ119+ клеток.

Важную информацию о функциональном состоянии клеток дает оценка их способности отвечать на дополнительную стимуляцию. Именно способность к адекватному иммунному ответу определяет характер течения беременности. Для оценки потенциальных возможностей клеток с цитотоксической активностью продуцировать цитокины

и цитолитические молекулы клетки инкубировали с неспецифическими стимуляторами ФМА и иономицином в течении 5ч и 24ч, после чего оценивали изменение содержания клеток, внутриклеточно продуцирующих 1Ь-2, или ОгапхутеВ. в сравнении с их исходным уровнем. Анализ полученных результатов показал, что при гестозе неспецифическая стимуляция способствовала более быстрому и значительному повышению содержания всех популяций цитотоксических клеток, внутриклеточно продуцирующих №N7, по сравнению с таковым в контрольной группе. При этом наибольшие изменения продукции №N7 под влиянием стимуляции при гестозе наблюдались в популяции С056+ ЫК клеток.

При физиологической беременности (рис. 1) после инкубации лимфоцитов с ФМА и иономицином уже через 5 часов наблюдалось значительное увеличение количества 1РЫу+ лимфоцитов, в том числе и СВ8+1РКу+ клеток, по сравнению с исходным уровнем до инкубации (р<0,001 и р<0,05 соответственно). Это увеличение было более выраженным после 24 ч стимуляции (р<0,001 в обоих случаях).

36-, *л

^Ыд С08-ИРМд С016+^д С056+1РЫд

0 спонтанная продукция Виикубация 5 ч О инкубация 24 ч

Ш спонтанная продукция 0 инкубация 5 ч □ инкубация 24 ч

Рис. 1. Сравнительная характеристика спонтанной и индуцированной внутриклеточной продукции 1РЫу периферическими лимфоцитами, ЦТЛ и ]ЧК при физиологической беременности

* - различия между показателями исходного и стимулированного ФМА и иономицином содержания 1РЫу продуцирующих и I сто к статистически достоверны.

А - различия между показателями содержания ШТУу продуцирующих клеток после 5-часовой и 24-часовой стимуляции статистически достоверны.

Следует отметить, что при неосложненной беременности уровень С016+]Т№/+ ЫК не изменялся после 5 часов инкубации с ФМА и ио-номицином (р>0,05), но увеличивался через 24 часа стимуляции (р<0,05) по сравнению с исходными значениями до инкубации. Достоверные различия в содержании С056+1РТМу+ >Ж после 5 и 24 часовой инкубации отсутствовали (р>0,05).

При гестозе (рис.2) только 24-часовая стимуляция ФМА и иономи-цином приводила к увеличению уровня 1РЫу+ клеток в общей популяции лимфоцитов (р<0,001). Однако уже через 5 часовой стимуляции возрастало количество всех типов клеток с цитотоксической активностью, внутриклеточно продуцирующих ШЧу (р<0,02; р<0,05 и р<0,05 соответственно), и оставалось высоким после 24 часов инкубации.

35 л

1РЫд С08+1РЫд С016+1РЫд С056+^д

Ш спонтанная продукция Я инкубация 5 ч □ инкубация 24 ч

Рис. 2. Сравнительная характеристика спонтанной и индуцированной внутриклеточной продукции 1РЬту периферическими лимфоцитами, ЦТЛ и КК при гестозе

* - различия между показателями исходного и стимулированного ФМА и иономицином содержания 1РЬ'упроду пирующих клеток статистически достоверны.

л -- различия между показателями содержания 1Р№/ продуцирующих клеток после 5-часовой и 24-часовой стимуляции статистически достоверны.

Выявленная нами способность к более раннему цитотоксическому ответу МК клеток в виде усиления продукции №N7 при гестозе в ответ на дополнительное воздействие может способствовать более быстрому срыву компенсаторно-защитных механизмов организма беремен-

ной женщины с гестозом и повреждению плода под влиянием дополнительной антигенной нагрузки.

Данные по ответу лимфоцитов с цитотоксической активностью на неспецифическую стимуляцию продукцией 1Ь-2 представлены на рисунке 3.

-1. ..... ...г-- --1---

11.-2+ СР8+1Ь2+ С016+<1--2+ С056+!1_-2+

ЕЗ спонтанная продукция В инкубация 5 ч О инкубация 24 ч

Рис. 3. Сравнительная характеристика спонтанной и индуцированной внутриклеточной продукции 1Ь-2 периферическими лимфоцитами, ЦТЛ и ТЧК при физиологической беременности

* - различия между показателями исходного и стимулированного ФМА и иономицином содержания 11,-2 продуцирующих клеток статистически достоверны.

А - различия между показателями содержания 11-2 продуцирующих клеток после 5-часовой и 24-часовой стимуляции статистически достоверны.

При физиологической беременности после инкубации лимфоцитов с ФМА и иономицином уже через 5 часов наблюдалось значительное увеличение содержания клеток, внутриклеточно продуцирующих 1Ь-2, в общей популяции лимфоцитов (р<0,001), в популяциях С08+ и СО 16+ клеток (р<0,01 и р<0,02. соответственно) по сравнению с исходным уровнем. Оно оставалось таким же высоким и после 24-часовой инкубации. При физиологической беременности количество СБ56+ клеток, продуцирующих 1Ь-2, увеличивалось по сравнению с исходным уровнем лишь через 24 часа после инкубации с ФМА и иономицином (р<0,001).

При гестозе наблюдались сходные с физиологической беременностью закономерности ответа клеток на стимуляцию за исключением ЦТЛ, которые медленнее, чем при физиологической беременности, отвечали усилением внутриклеточной продукции 1Ь-2 на неспецифическую стимуляцию (рис.4).

35-,

11.-2+ С08+11.-2+ С016+11--2+ С055+И.-2+

□ спонтанная продукция В инкубация 5 ч □ инкубация 24 ч

Рис. 4. Сравнительная характеристика спонтанной и индуцированной внутриклеточной продукции 1Ь-2 периферическими лимфоцитами, ЦТЛ и 1ЧК при гестозе

л - различия между показателями содержания 1Ь-2 продуцирующих клеток после 5-часовой и 24-часовой стимуляции статистически достоверны.

Показатели содержания С08+1Ь-2+ и С Г) 56+11,-2+ после 24 часовой инкубации с ФМА и иономицином при гестозе были достоверно выше, чем при 5 часовой инкубации (р<0,05 в обоих случаях).

Стимулированная вгаптутеВ-продуцирующая способность клеток с цитотоксической активностью при гестозе была не нарушена, имела сходный характер с таковой при физиологической беременности, но, независимо от длительности стимулирующего воздействия, оставалась всегда более высокой, чем при неосложненной беременности. При физиологической беременности (рис.5) 5 часовая стимуляция ФМА и иономицином достоверно повышала общее количество лимфоцитов, внутриклеточно синтезирующих вгапгутеВ (р<0,001), а

также увеличивала содержание С08нЗгВ+ ЦТЛ и С016+вгВ+ ЫК (р<0,001, р<0,02, соответственно) по сравнению с исходным уровнем.

вгВ+ С08+СгВ+ С016+СгВ+ С056+ЭгВ+

О спонтанная продукция В инкубация 5 н □ инкубация 24 ч

Рис. 5. Сравнительная характеристика спонтанной и индуцированной внутриклеточной продукции ОгапгушеВ периферическими лимфоцитами, ЦТЛ и ЫК при физиологической беременности

* - различия между показателями исходного и стимулированного ФМА и иономицином содержания Огап/утеВ продуцирующих клеток статистически достоверны.

А - различия между показателями содержания Огап/л'теВ продуцирующих клеток после 5-часовой и 24-часовой стимуляции статистически достоверны.

Повышение содержания СгВ+ клеток в общей популяции лимфоцитов, в популяциях СЭ8+ и СО 16+ клеток отмечалось и через 24 часа инкубации по сравнению с исходным уровнем (р<0,001; р<0,001 и р<0,05 соответственно). При физиологической беременности стимуляция ФМА и иономицином не влияла на содержание С056+ Т^К клеток, внутриклеточно продуцирующих С га п гуте В как после 5 ч, так и после 24 ч инкубации клеток (р>0,05 в обоих случаях).

При гестозе наблюдалась сходная динамика изменений показателей в процессе стимуляции клеток ФМА и иономицином. (рис.6). При гестозе после инкубации клеток с ФМА и иономицином увеличивалось общее содержание лимфоцитов, а также ЦТЛ и СО 16+ клеток, внутриклеточно продуцирующих ОгапгутеВ, по сравнению с исходным уровнем как после 5 часовой стимуляции клеток (р<0,001, р<0,02 и р<0,001 соответственно), так и после 24 часовой стимуляции

клеток (р<0,001, р<0,01 и р<0,01 соответственно). Стимуляция ФМА и иономицином не влияла на содержание С056+ ЫК, внутриклеточно продуцирующих СгапхутеВ, как после 5 часовой, так и после 24 часовой инкубации клеток по сравнению с исходным уровнем до инкубации (р>0,05 в обоих случаях).

GrB+ CD8+GrB+ CD16+GrB+ CD56+GrB+

□ исходный уровень И инкубация 5 ч □ инкубация 24 ч

Рис. 6. Сравнительная характеристика спонтанной и индуцированной внутриклеточной продукции GranzymeB периферическими лимфоцитами, ЦТЛ и NK при гестозе

* - различия между показателями исходного и стимулированного ФМА и иономицином содержания GranzymeB продуцирующих клеток статистически достоверны.

Таким образом, неадекватность иммунного ответа у женщин с гес-тозом, по нашим результатам, заключается в усилении цитотоксических реакций со стороны ЦТЛ и NK клеток под влиянием стимуляции, о чем свидетельствует выявленное нами повышение уровня цитотоксических лимфоцитов, внутриклеточно продуцирующих IFNy и GranzymeB.

Клетки осуществляют свою цитотоксическую функцию, в том числе и за счет индукции апоптоза. О способности индуцировать апоптоз свидетельствует экспрессия молекул FasL, которая осуществляет запуск Fas-зависимого пути апоптоза (Ярилин A.A., 2000; Nagata, S., 1999). В литературе имеются данные, что процесс взаимодействия Fas-FasL сопровождается секрецией провоспалительных цитокинов TFN, IFNy и IL-l (Rescígno, M.et. al., 2000). Кроме того, взаимодействие Fas и FasL может способствовать активации нейтрофилов, развитию нейтропении и повреждению сосудистого эндотелия, которые наблюдаются при гестозе (Nagata, S., 1999; Waring, P., 1999).

Данные по изучению апоптоза клеток с цитотоксической активностью приведены в таблице 4. При гестозе было выявлено повышение уровня лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности FasL молекулу (р<0,01), а также FasL экспрессирующих клеток в популяции NK с фенотипом CD 16+ (р<0,05) и CD56+ (р<0,05) по сравнению с аналогичными показателями у женщин с нормально протекающей беременностью. Повышение при гестозе уровня периферических CD16+FasL+ и CD56+FasL+ NK может быть обусловлено высокой концентрацией в крови женщин с гестозом IL-2 (López-Jaramillo, Р. et. ah,2008; Madazli, R. et. al.,2003). Известно, что IL-2 индуцирует экспрессию Bcl-2 генов и способствует усилению поверхностной экспрессии FasL (Xiao S. et. al., 1999), препятствуя развитию апоптоза (Akbar, A.N. et. al., 1996). Эти результаты также хорошо согласуются с выявленным нами снижением уровня NK клеток как с фенотипом CD56+, так и с фенотипом CD 16+, экспрессирующих рецепторы к IFNy, который является одним из индукторов апоптоза (Tobias, М. et. al., 2007).

Экспрессия Fas молекул свидетельствует о готовности самих клеток к вступлению в апоптоз (Waring, Р. et. al., 1999). Повышение при гестозе уровня клеток, готовых к апоптозу, мы наблюдали только в популяции CD 16+ NK (р<0,01). Учитывая, что в целом при гестозе содержание CD 16+ NK было повышено, увеличение количества Fas-позитивных CD 16+ NK можно расценивать как естественный процесс элиминации активированных клонов клеток. Отсутствие накопления CD 16+ NK клеток может свидетельствовать о менее значимой роли данной популяции клеток в патогенезе гестоза.

Таблица 4

Особенности параметров апоптоза у женщин с гестозом

Показатель ФБ n=22 Гестоз n=31

CD95+ 17,21+1,31 21,95+1,49 **

CD16+CD95+ 3,73+0,66 7,33+1,08***

CD95L+ 18,59+1,40 24,38+1,24 ***

CD16+CD95L+ 5,54+0,68 8,24+0,84*

CD56+CD95L+ 5,09+0,54 7,68+0,95*

CD8+AnnexinV- 17,08+0,54 21,88+1,70*

CD16+Annexin V+ 3,06+0,19 4,69+0,44***

CD 16+AnnexinV- 7,56+0,62 12,49+1,35***

CD56+Annexin V+ 4,32+0,53 6,33+0,66*

CD5 6+AnnexinV- 7,04+0,92 11,10+1,07**

С целью определения уровня апоптирующих клеток, мы оценивали параметры аннексинового теста. Анализ полученных результатов показал, что при гестозе, наряду с повышением уровня СЮ 16+ и СБ56+Аннексин+ ГЖ (р<0,01 и р<0,05 соответственно), наблюдалось увеличение содержания Аннексин-негативных лимфоцитов с цитоток-сической активностью в популяциях ЦТЛ (р<0,05), СБ 16+ (р<0,01) и СЭ56+Ж (р<0,02).

Таким образом, развитие гестоза сопровождается накоплением в периферической крови беременных женщин ЦТЛ, ИК и №С-Т клеток, активно продуцирующих ШИу, 1Ь-2 и ОгапгутеВ, и обладающих повышенной апоптоз-индуцирующей способностью, что свидетельствует о высоком уровне их цитотоксической активности. Это может обуславливать непосредственное участие данных популяций лимфоцитов в развитии синдрома полиорганной и эндотелиальной дисфункции у женщин с гестозом. Отличительной чертой системного материнского иммунного ответа при беременности, осложненной гестозом, являлось наличие более выраженных изменений со стороны реакций адаптивного иммунитета. Именно в популяции ЦТЛ значительно возрастало число клеток, внутриклеточно продуцирующих №N7, 1Ь-2 и ОгапгутеВ. С056+ ЫК при гестозе, по-видимому, выполняют в большей степени риуляторные функции, однако, именно данная популяция клеток может способствовать развитию эндотелиальной дисфункции, о чем свидетельствует усиление экспрессии адгезионных молекул. Было отмечено, что при гестозе периферические цитотоксические Т-лимфоциты и 1чГК способны отвечать резким усилением функциональной активности в ответ на дополнительную антигенную нагрузку. Выявленные нами нарушения параметров апоптоза при гестозе свидетельствуют о накоплении в периферической крови беременных женщин с гестозом клеток, обладающих высоким цитотоксическим потенциалом, что способствует пролонгированию патологического иммунного ответа.

выводы

1. В развитии гестоза важную роль играет накопление клеток с цитотоксической активностью с повышенным цитотоксическим потенциалом при одновременном усилении их апоптоз-индуцирующей способности и функциональной активности в ответ на неспецифическую стимуляцию.

2. Установлено, что при гестозе в периферической крови повышается содержание клеток с цитотоксической активностью, включая ЦТЛ, 1ЧК и ЫК-Т. Для женщин с гестозом характерно высокое содержание СЭ56+ экспрессирующих молекулы СЭ69 и СЭ11Ь.

3. Выявлено, что при гестозе в крови повышается количество С08+ клеток, продуцирующих СгапгутеВ. Стимуляция ФМА и ио-номицином в равной степени усиливает ОгапгушеВ-продуцирующую способность СБ8+ и СБ 16+ лимфоцитов как при неосложненной беременности, так и при гестозе, но при гестозе повышение уровня СгапгутеВ-продуцирующих клеток более выражено.

4. Установлено, что у женщин с гестозом усиливается спонтанная внутриклеточная продукция №N7 периферическими цитотоксиче-скими Т-лим-фоцитами и 1Ь-2 С08+ и С056+ клетками, при этом рецепция №N7 СБ 16+ и СЭ56+ №< снижена, а рецепция (Ь-2 СБ8+ и СЭ16+ клетками повышена по сравнению с показателями неосложненной беременности.

5. Установлено, что при гестозе неспецифическая стимуляция ФМА и иономицином уже через 5 часов индуцирует усиленный внутриклеточный синтез П:№/ всеми типами исследованных клеток с цитотоксической активностью, тогда как при неосложненной беременности повышение ШКу-продуцирующей способности СБ 16+ 1МК клеток наблюдается только после 24-часовой стимуляции. Внутриклеточная продукция 1Ь-2 СБ8+ лимфоцитами при гестозе в отличие от неосложненной беременности, усиливается только через 24 часа инкубации.

6. При гестозе повышается готовность СО 16+ N1^ клеток к апоп-тозу, одновременно увеличивается апоптоз-индуцируюшая активность СБ 16+ и СБ56+ >Ж клеток, возрастает количество аннексин-негативных клеток с цитотоксической активностью всех типов, при этом повышение количества клеток, вступивших в апоптоз, отмечается только в популяциях СО 16+ и С056+ ]\ГК.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

- Дополнительно к стандарту иммунологического обследования беременной женщины с гестозом рекомендуется проводить оценку параметров активации и апоптоза периферических клеток с цитоток-сической активностью.

- Врачам аллергологам-иммунологам рекомендуется определять содержание периферических цитотоксических лимфоцитов, продуцирующих ОгапгушеВ, и использовать результаты в комплексной оценке цитолитического потенциала иммунной системы женщин с гестозом.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Фенотип лимфоцитов с цитотоксической активностью у беременных женщин с гестозом и возможности цитокинотерапии [Текст] / И. Н. Мамалыга, Н. Ю. Сотникова, И. А. Панова, Н. Г. Коряковская // Медицинская иммунология. — 2005. — Т. 7, № 2—3. — С. 310—311.

2. Особенности влияния препарата «Суперлимф» на фенотип лимфоцитов с цитотоксической активностью in vitro у беременных женщин с гестозом [Текст] / И. Н. Мамалыга, Н. Ю. Сотникова, И, А. Панова, Н. Г. Коряковская // Russian Journal of Immunology. — 2005. — Vol. 9, Suppl. 2. — P. 242—243.

3. Параметры активации периферических естественных киллеров при гестозе [Текст] / Н. Ю. Сотникова, И. Н. Мамалыга, Н. Г. Коряковская, И. А. Панова, А. В Кудряшова И Russian Journal of Immunology. — 2007. — Vol. 9, Suppl.4. — P. 100

4. Продукция и рецепция IL-2 и IFNy естественными киллерами при гестозе [Текст] / Н. Ю. Сотникова, А. В. Кудряшова, И. Н. Мамалыга, И. А. Панова // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. —2008. —Приложение 1. — С. 75—79.

5. Параметры активации естественных киллеров при гестозе [Текст] / И. Н. Мамалыга, Н. Ю. Сотникова, И. А. Панова, А. В. Кудряшова // Материалы международной научно-практической конференции «Иммунологические аспекты репродукции человека». — Новосибирск, 2008. — С. 27—28.

6. Особенности состояния периферических ЕК при гестозе [Текст] / Н. Ю. Сотникова, А. В. Кудряшова, И. А. Панова, И. II. Ма-

малыга, Л. Ю. Мальгина // Российский иммунологический журнал. — 2008, —Т. 2 (И), №2—3.—С. 291.

7. Влияние препарата «Суперлимф» на параметры активации ци-тотоксических клеток беременных женщин [Текст] / Н. Ю.Сотникова, И. Н. Мамалыга, А. В.Кудряшова, И. А, Панова // Материалы IV съезда акушеров-гинекологов России. — М., 2008. — С. 241.

8. Нарушение продукции и рецепции 1КЫу при гестозе [Текст] / И. Н. Мамалыга, Н. Ю. Сотникова, А. В. Кудряшова, И. А. Панова // Бюллетень Военно-Медицинской академии. — 2009. — Приложение 1 (25). —С. 499—500.

9. Нарушение регуляции апоптоза лимфоцитов при гестозе [Текст] / А. В. Кудряшова, Н. Ю. Сотникова, И. А. Панова, Л. Ю. Мальгина, И. Н. Мамалыга // Медицинская иммунология. — 2009. — Т. 11, №4—5. — С. 411

10. Характеристика дифференцировки и функциональной активности цитотоксических Т-лимфоцитов при гестозе / Н. Ю. Сотникова, А. В. Кудряшова, Ю. Ю. Лазарева, И. Н. Мамалыга, И. А. Панова // Медицинская иммунология. — 2009. — Т. 11, № 4—5. —С. 421.

МАМАЛЫГА Ирина Николаевна

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Формат 60х84'/16. Печ. л. 1,75. Усл. печ. л. 1,6. Тираж 70 экз.

Оглавление диссертации Мамалыга, Ирина Николаевна :: 2009 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Современные представления об этиологии и патогенезе гестоза.

1.1. Особенности состояния иммунной системы при гестозе.

1.2.1. Характеристика функционального состояния цитотоксических лимфоцитов при гестозе.

1.2.2. Роль естественных киллеров в патогенезе гестоза.

ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛЫ* И МЕТОДЫ'ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клинические группы наблюдений.

2.2. Методы исследования.

ГЛАВА 3. ФЕНОТИП, ПАРАМЕТРЫ АКТИВАЦИИ И АПОПТОЗА КЛЕТОК С ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙЖРОВИ ПРИ ГЕСТОЗЕ.

3.1. Особенности,содержания периферических цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллеров при гестозе.

3.2. Параметры активации и экспрессии адгезионных молекул периферическими цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными киллерами при физиологической беременности и гестозе.

3.3. Содержание периферических цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллеров, продуцирующих GranzymeB при физиологической беременности и гестозе.

3.4. Параметры апоптоза периферических цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллеров при физиологической беременности и гестозе.

ГЛАВА 4. ВНУТРИКЛЕТОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ И РЕЦЕПЦИЯ ЦИТОКИНОВ ЦИТОТОКСИЧЕСКИМИ Т-ЛИМФОЦИТАМИ И ЕСТЕСТВЕННЫМИ КИЛЛЕРАМИ ПРИ НЕОСЛОЖНЕННОМ ТЕЧЕНИИ БЕРЕМЕННОСТИ И ГЕСТОЗЕ.

4.1. Внутриклеточная продукция IL-2 и IFNy цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными киллерами при физиологической беременности и гестозе.

4.2. Рецепция IL-2 и IFNy цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными киллерами при физиологической беременности и гестозе

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ СТИМУЛЯЦИИ ФОРБОЛМИРИСТАТ АЦЕТАТОМ И

ИОНОМИЦИНОМ НА ВНУТРИКЛЕТОЧНУЮ ПРОДУКЦИЮ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ МОЛЕКУЛ ЛИМФОЦИТАМИ С ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И ГЕСТОЗЕ.

5.1. Влияние форболмиристатацетата и иономицина на внутриклеточную продукцию IL-2 цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными киллерами при физиологической беременности и гестозе.

5.2. Влияние форболмиристатацетата и иономицина на внутриклеточную продукцию IFN^цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными киллерами при физиологической .беременности и гестозе.

5.3. Влияние стимуляции форболмиристатацетатом и иономицином на внутриклеточную продукцию GranzymeB цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными киллерами при физиологической беременности и гестозе.

ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Мамалыга, Ирина Николаевна, автореферат

Актуальность научного исследования:

Гестоз является одним из наиболее грозных осложнений беременности, представляющим опасность для матери и плода [29, 61]. Несмотря на постоянное внимание к проблеме гестоза во всем мире, до настоящего времени вопросы этиологии и механизмы развития данной акушерской патологии остаются спорными.

Накопленные к настоящему времени сведения дают возможность полагать, что важную роль в патогенезе гестоза играет иммунный компонент [18, 77, 237, 242, 243, 253], причем клеткам, обладающим цитотоксическими свойствами, отводится ведущая роль в этих процессах [18, 76, 94, 112, 169, 184, 189].

Имеющиеся данные об изменениях в содержании цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и NK клеток в периферической крови женщин с гестозом носят весьма противоречивый-характер [18; 76, 94, 103, 112, 141, 184, 211, 238]. Вклад ЦТЛ и NK клеток в суммарную продукцию цитокинов при гестозе остается мало изученным. Имеются лишь отдельные сведения об отсутствии достоверных различий в характере продукции IL-2 и IFNy цитотоксическими Т-лимфоцитами при неосложненной беременности и гестозе, и о повышенной продукции IFNy CD 16+ клетками у женщин с гестозом [238]. Ряд авторов не отметили изменений в относительном содержании IFNy+ и IL-2+ NK клеток у женщин с неосложненным течением беременности и с преэк-лампсией [125].

В литературе имеются противоречивые сведения об экспрессии рецептора к IL-2 ЦТЛ при гестозе [2, 96, 99, 138, 211, 222] и практически полностью отсутствуют данные об экспрессии рецепторов к IFNy на поверхности клеток с цитотоксической активностью. Остаются неизученными вопросы, касающиеся продукции цитолитических молекул как при неосложненном течении беременности, так и при гестозе.

Следует также отметить, что немногочисленны работы, посвященные изучению процессов апоптоза клеток с цитотоксической активностью и роли самих цитотоксических лимфоцитов в регуляции Fas-индуцированного апоптоза при гестозе. Таким образом, сведения об особенностях функционального состояния клеток с цитотоксической активностью, а так же параметрах апоптоза периферических цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллеров при гестозе малочисленны и достаточно противоречивы. В то же время, изучение роли данных популяций клеток в развитии характерных для гестоза осложнений, поможет, лучше понять патогенез данной акушерской патологии.

Цель научного исследования:

На основании определения особенностей активации, апоптоза, продукции и рецепции цитокинов, экспрессии GranzymeB периферическими лимфоцитами с цитотоксической активностью при беременности установить особенности их функционирования при гестозе.

Задачи научного исследования:

2. Оценить спонтанную и стимулированную внутриклеточную продукцию GranzymeB периферическими клетками с цитотоксической активностью при гестозе.

3. Выявить особенности продукции и рецепции IFNy и IL-2 периферическими клетками с цитотоксической активностью при гестозе.

4. Оценить особенности параметров Fas-зависимого апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью у женщин с гестозом.

Научная; новизна исследования:

- Выявлены новые иммунные механизмы, развития гестоза, заключающиеся?^; накоплении клеток с повышенной цитотоксической активностью, включая ЦТЛ, NK и NK-T, активно продуцирующих IFNy, IL-2 и GranzymeB, обладающих повышенной апоптоз-индуцирующей способностью.

- Впервые установлены; особенности ранней активации < периферических клеток с цитотоксической активностью- у женщин с гестозом; характеризующиеся, усилением: экспрессии?.CD69 и CD1 lb молекул на поверхности NK клеток с фенотипом GD56+.

-: Впервые выявлены; особенности; спонтанной и стимулированной внутриклеточной продукции5 GranzymeB периферическими;клетками' с; цитотоксической; активностью при гестозе, проявляющиеся? увеличением* содер-. жания в крови женщин CD8+GrB+ лимфоцитов и усилением стимулированной GranzymeB -продуцирующей способности CD8+ и CD 16+ клеток.

- Установлены закономерности изменений спонтанной; внутриклеточной продукции: и рецепции IFNy и IL-2 периферическими лимфоцитами у женщин с: гестозом; проявляющиеся: повышением содержания IFNy-продуцирующих цитотоксическихг Т-лимфоцитов,, IL-2-продуцирующих CD8+ и5 CD56+клеток, количества CD8+ и CD 16+клеток, экспрессирую-щих рецепторы к IL-2, и снижением ур овня CD 16+ и CD56+ NK клеток, экс-прессирующих рецепторы к IFNy.

- Установлено; что при гестозе стимуляция ФМА и иономицином через 5 часов инкубации индуцирует усиленную внутриклеточную продукцию IFNy CD8+, CD 16+ и CD56+ клетками, через 24 часа - IL-2 цитотоксическими Т-лимфоцитами.

- Выявлено, что при гестозе повышается апоптоз индуцирующая активность CD 16+ и GD56+ NK, усиливается готовность ЦТЛ и CD 16+ NK клеток к апоптозу, увеличивается содержание CD 16+ и CD56+ NK клеток, вступивших в апоптоз, но при этом возрастает количество аннексин-негативных клеток с цитотоксической активностью всех типов.

Практическая значимость исследования:

Реализация результатов работы:

Нормативные данные функционального состояния и параметров апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе используются в работе врачей аллергологов-иммунологов КДП «Ив НИИ МиД им. В.Н.Городкова Росмедтехнологий» и в учебном процессе на кафедре акушерства, гинекологии и медицинской генетики ГОУ ВПО «Ив ГМА Росздрава».

Апробация работы:

Основные положения, выносимые на защиту:

Иммунные механизмы развития гестоза связаны с накоплением клеток с повышенной цитотоксической и апоптоз-индуцирующей активностью на фоне нарушения их элиминации путем апоптоза. В периферической крови беременных женщин с гестозом повышено содержание активированных ци-тотоксических лимфоцитов, NK и NK-T, активно продуцирующих IL-2, IFNy и GranzymeB, экспрессирующих молекулы адгезии. Для гестоза характерно изменение рецепции цитокинов, проявляющееся увеличением содержания CD25 позитивных ЦТЛ и CD 16+ NK и снижением NK-клеток, экспрессирующих рецепторы к IFNy. У женщин с гестозом наблюдается усиленный ответ клеток с цитотоксической активностью на стимуляцию ФМА и ионо-мицином.

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Структура и объем диссертации:

Материалы диссертации изложены на 125 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 3 глав собственного исследования, главы «Обсуждение результатов», выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 255 источников. Работа иллюстрирована 6 рисунками и 19 таблицами.

Заключение диссертационного исследования на тему "Функциональное состояние и параметры апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе"

ВЫВОДЫ

1 .В развитии гестоза важную роль играет накопление клеток с цитотоксической активностью с повышенным^ цитотоксическим потенциалом при одновременном усилении их апоптоз-индуцирующей способности и функциональной активности в ответ на неспецифическую стимуляцию.

2.Установлено, что при гестозе в периферической крови повышается содержание клеток с цитотоксической активностью, включая ЦТЛ, NK и NK-Т. Для женщин с гестозом характерно высокое содержание CD56+ NK, экспрессирующих молекулы CD69• и CD1 lb.

3 .Выявлено, что при гестозе в крови повышается количество CD8+ клеток, продуцирующих GranzymeB. Стимуляция ФМА и иономицином в равной степени усиливает GranzymeB-продуцирующую способность CD8+ и CD 16+ лимфоцитов как при неосложненной беременности, так и при гестозе, но при гестозе повышение уровня GranzymeB - продуцирующих клеток более выражено.

4.Установлено, что у женщин с гестозом усиливается спонтанная внутриклеточная продукция IFNy периферическими цитотоксическими Т-лимфоцитами и IL-2 CD8+ и CD56+ клетками, при этом рецепция IFNy CD 16+ и CD56+ NK снижена, а рецепция IL-2 CD8+ и CD 16+ клетками повышена по сравнению с показателями неосложненной беременности.

5.Установлено, что при гестозе неспецифическая стимуляция ФМА и иономицином уже через 5 часов индуцирует усиленный внутриклеточный синтез IFNy всеми типами исследованных клеток с цитотоксической активностью, тогда как при неосложненной беременности повышение IFNy-продуцирующей способности CD16+ NK наблюдается только после 24-часовой стимуляции. Внутриклеточная продукция IL-2 CD8+ лимфоцитами при гестозе в отличие от неосложненной беременности, усиливается только через 24 часа инкубации.

6. При гестозе повышается готовность CD 16+ NK к апоптозу, одновременно увеличивается апоптоз-индуцируюшая активность CD 16+ и CD56+ NK, возрастает количество аннексин-негативных клеток с цитотоксической активностью всех типов, при этом повышение количества клеток, вступивших в апоптоз, отмечается только в популяциях CD 16+ и CD56+ NK.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

- Врачам аллергологам-иммунологам рекомендуется определять содержание периферических цитотоксических лимфоцитов, продуцирующих GranzymeB и использовать результаты в комплексной оценке цитолитическо-го потенциала иммунной системы женщин с гестозом.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Мамалыга, Ирина Николаевна

1. Абрамченко, В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. (Окси- дативный стресс в акушерстве и его терапия антиоксидантами и антиги-поксантами) Текст. / В.В. Абрамченко. - СПб.: Изд-во ДЕАН, 2001.-400с.

2. Астраух, Н.В. Особенности фенотипа и цитокинового профиля дециду- альных лимфоидных клеток при гестозе Текст.: автореф. дис. ... канд. мед. наук / Астраух Наталья Владимировна . - Москва. - 2002. - 23с.

3. Белоцкий, СМ, Воспаление. Мобилизация клеток и клинические эффекты Текст. / СМ. Белоцкий, P.P. Авталион -М.: Издательство БИНОМ, 2008.-240 с илл.

4. Беньяминова, А.Б. Клиническо-гемостазиологические особенности у беременных с гестозами, циркуляцией антифосфолипидных антител и анти-фосфолипидным синдромом Текст.: автореф. канд.... мед. наук / Беньяминова, А.Б. - Москва. - 2006.- 23с.

5. Боровская, Т.Ф. Особенности иммунных взаимоотношений в системе мать - плацента- новорожденный при угрозе прерывания беременности и ОПГ-гестозе Текст. / Т.Ф.! Боровская, Е.А. Ганьчева, В.К. Козлов // Иммунология.- 1998.-№4.-С46-48.

6. Быстрицкая, Т.С. Ранняя диагностика и профилактика ОПГ-гестозов Текст.: автореф. дис...докт. мед.наук / Быстрицкая Т.С- М.,- 1991.- 23с.

7. Васильева, З.Ф. Иммунологические основы акушерской патологии Текст. / З.Ф. Васильева, В.Н. Шабалина - М.,1984.- 95-101.

8. Гестоз- болезнь адаптации Текст. / В.Н.Серов, Н.М. Пасман, М.Ю. Бородин, А.Н. Барухина -Новосибирск: РИПЭЛ плюс, 2001.-208 с.

9. Говалло, В.И. Иммунология репродукции Текст. / В.И. Говалло. - М.- 1987.-3 04с.

10. Действие цито- и синцитиотрофобласта плаценты человека на Т- лимфоциты в условиях культуры клеток Текст. / В.Ю Талаев, И.Е. Заи-ченко, О.Н. Бабайкина., М.А. Ломунова., Е.Б. Талаева // RJL- 2005.- Vol.9, Suppl.2.-C.108-114

11. Иммунные механизмы развития гестоза Текст. / Л.В. Посисеева, Н.Ю. Сотникова, И.А. Панова и др. - Иваново: ОАО «Издательство «Иваново», 2008.-240c.

12. Иммунологическая загадка беременности Текст. / Н.Ю. Сотникова, Ю.С. Анциферова, А.В.Кудряшова и др. - Иваново: Издательство МИК.- 2005. -276 с.

13. Инвазия трофобласта и ее роль в патогенезе гестоза Текст. / И.М. Поздняков, Н.В. Юкляева, Л.Ф. Гуляева, Э Красильников // Акушерство и гинекология. - 2008. - № 6. - 3-6.

14. Ковальчук, Л.В. Иммунорегуляторная роль моноцитов в норме и иммунопатологии Текст. / Л.В., Ковальчук, А.Н. Чередеев // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Иммунология.- 1991.-T.27.-217

15. Ковальчук, Л.В. Цитокины в иммунопатологии // Аллергия и иммунопатология (иммунные механизмы формирования, принципы терапии) Текст. / Л.В. Ковальчук, А.Н. Чередеев; под общ. Ред. проф. Г.В. Поря-дина. - М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. - 282 с.

16. Ковальчук, Л.В. Апоптические иммунодефициты Текст. / Л.В., Коваль- 99' чук, А\№Чередеев. // Сб:тр. 2-го Национального конгресса РААКИ «Go-временные проблемы аллергологии, клинической, иммунологии и* имму-нофармакологии».-Москва'.-1998.-С.615-620

17. Лукина, H.G. Значение определения инфекционного и цитокиновот статуса у женщин в; прогнозе развития осложнений- беременности; и перинатальной патологии • Текст.: автореф. дис. ... канд. мед. наук /Лукина-Надежда Сергеевна. - Иваново. - 2008. - 27с.

18. Мурашко, Л.Е. Новые подходы к патогенезу и диагностике гестоза Текст. / Л.Е. Мурашко // Новые технологии в акушерстве и гинекологии: Материалы научного форума.- Москва.- 1999.- 96-99.

19. Нагорная, В.Ф. Новые подходы к терминологии, профилактике и лечению гестозов. Роль спиральных артерий в патогенезе гестоза Текст. /В.Ф. Нагорная // Матер. 1-го международн. Симпозиума Рос. ассоциации гестозов. - Москва.- 1997.-С.44-45.

20. Назаров, П.Г. Реактанты острой фазы воспаления Текст. / П.Г. Назаров. - СПб.: Наука, 2001.-423с.

21. Особенности гуморального иммунитетами дифференцировки Т-хелперов при гестозе и синдроме задержкифазвития плода. Текст.. / Н.Ю}Сотникова, А.В: Кудряшова, И;А. Панова и др.. //Russian* Journal1 of Immunolbgy.-2005.-V.9vSupph 2:-РП67-Г68.

22. Особенности дифференцировки Т-хелперов при: синдроме задержки?развития плода-и гестозе Текст.-/ Н.Ю. Сотникова, А.В. Кудряшова, И.А. Панова и др. // Нижегородский' медицинский журнал — 2004. - №4. — 160-162.

23. Особенности иммунного ответа беременных на ранних сроках,гестации с впоследствии.развившемся гестозом Текст. / Н:В. Крошкина, НЮ; Сот-никова, И.Ю. Скрипкина и др. // Ж. Медицинская иммунология.- 2004. -т.6.-№3-5.-с. 381.

24. Особенности продукции IL-12 в зависимости от характера течения беременности Текст. / И;А. Панова, Л.В. Посисеева, Н.Ю. Сотникова и др. // Russian Journal of Immunology.- 2005.-V. 9, Suppl. 2.- P. 174.

25. Особенности синтеза IL-ip и его рецепторов в децидуальной оболочке плаценты при гестозе Текст. / С. Мание, Н.Ю. Сотникова, Н.Ю. Борзо-ва, А.В. Кудряшова // Russian Journal of Immunology.- 2005.-V.9, Suppl. 2.-P.170-171.;

26. Особенности функционирования иммунной системы при беременности, осложненной поздним гестозом Текст. / Е.Р. Черных, О.Ю. Леплина, А.А. Шевела и др. // Акушерство и гинекология.- 1996.- №2.- 21-23.

27. Патогенез гестоза как проявление иммунокомплексной патологии эндотелия (острый иммунный эндотелиоз) Текст. / И.С. Сидорова, О.И. Турина, А.П. Милованов и др. // Акушерство и гинекология. - 2008. - № 6. - 13-

28. Петрищев, Н.Н. Физиология и патофизиология эндотелия Текст. / Н.Н. Петрищев // Дисфункция эндотелия. Причины, механические повреждения, фармакологическая коррекция / Н.Н. Петрищев, Т.Д. Власов. - Ст-Петербург. 2003. 4-38.

29. Пинегин, Б.В. NK-клетки: свойства и функции Текст. / Б.В. Пинегин, В.Дамбаева // Иммунология. - 2007. - № 2. - С - 105-113.

30. Прогностическое значение некоторых показателей клеточного иммунитета при позднем гестозе Текст. / О.В. Макаров, З.В. Васильева, О.П. Сластен, // Проблемы ОПГ-гестозов: Тезисы докладов.-Чебоксары.-1996.-С.59.

31. Продукция и рецепция IL-lp различными типами клеток на системном и локальном уровне при гестозе Текст. / Н.Ю. Сотникова, А.В. Кудряшова, CС. Мание, Н.Ю. Борзова // Российский иммунологический журнал.-2008.- T.2(l 1).-№2-3.- 297.

32. Ранние нарушения продукции цитокинов при патологии беременности Текст. / Н.Ю. Сотникова, А.В..Кудряшова, Н.В. Крошкина и др. // Russian Journal of Immunology.- 2007.-V. 9, Suppl.4.- P.94;

33. Рожковская, H.H. Состояние иммунного и энзимного гомеостаза у беременных с гестозами Текст. / HIH. Рожковская // Вестн. Рос. ассоциации акуш.-гин.-1998.-К4.-с.30-33.

34. Савельева, Г.М. Некоторые актуальные вопросы акушерства. Современные подходы Текст. / Г.М. Савельева // Мать и дитя: материалы VII Российского форума. - М., 2005. - 222-223.

35. Сельков, А. Плацентарные макрофаги Текст. / А. Сельков, О.В. Павлов. -М.Товарищество научных изданий КМК, 2007.-186 с.+8с. цв.вклейка i

36. Серов, B.H. Гестоз - болезнь адаптации Текст. / В.Н. Серов // Проблемы ОПГ-гестозов: Новосибирск: РИПЭЛ плюс, 2001.-208 с.

37. Серов, В.Н. Особенности функционирования иммунной системы при беременности, осложненной поздним гестозом Текст. / В.Н. Серов // Акушерство и гинекология.- 1996.- №2,- 21-23.

38. Серов, В.Н. Руководство по практическому акушерству Текст. / В.Н. Серов, А.Н. Стрижаков, А Маркин. - М.гООО «МИА», 1997.-440с.

39. Сидорова, И.С. Поздний гестоз Текст. / И.С. Сидорова.- М.- 1996.- 236 с.

40. Сидорова, И.С. Эндотелиальная дисфункция в развитии гестоза Текст. / И.С. Сидорова, И.Л. Галинова // Вопросы гинекологии, акушерства и пе-ринатологии. - 2006. - том5. - №1. -С.75-81.

41. Система цитокинов, коплемента и современные методы иммунного анализа Текст.: учебное пособие / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская, М.В. Хо-рева, Е.В Соколова. - М.: Российский Государственный университет, 2001.-158 с.

42. Системная эндотоксемия в патогенезе ОПГ-гестозоа Текст. / В.Н.Серов, Д.В. Добронецкая, Р.А.Уразаев и др. // Вестник Рос. ассоциации акушеров гинекологов,- 1995.-№4.- С12-17.

43. Скрипкина, И.Ю. Участие различных субпопуляций Т-хелперов, естественных киллеров и катепсина D в механизме развития гестоза Текст.: автореф. дис. ... канд. мед. наук / Скрипкина Инна Юрьевна. - Иваново. -2004. - 22с.

44. Современные аспекты патогенеза, клинических проявлений и диагностики гестоза Текст. / А.Н. Иванян, СБ. Крюковский, А.П. Гордиловская и др. //Вестн. Рос. ассоциации акуш.-гинек.-1998.-№3.-С.104-109.

45. Сотникова, Н.Ю. Возможности использования иммунологических параметров для раннего прогнозирования осложнений беременности Текст. / ' Н.Ю. Сотникова, М.И>. Пелевина, А.В. Кудряшова // Медицинская иммунология.- 2005. - Том 7. - № 2-3. - 190-191.

46. Спектр антифосфолипидных антител у беременных с гестозом Текст. / Г.Т Сухих, И.В. Пономарева, Ж.А. Городничева и др.// Акуш. и гинек.-1998.-№5.-С.22-25.

47. Субпопуляционный состав лимфоцитов переферической крови беременных женщин с гестозом Текст. / Д.И. Соколов, А.В. Селютин, М.В. Лес-ничия, и др. // Журнал акушерства и женских болезней . — 2007. - том

49. Сухих, Г.Т. Иммунитет и генитальный герпес Текст. : учеб. пособие для вузов / Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько, В.И Кулаков.- Н. Новгород: Изд-во НГМА, 1997.-224с.

50. Токова, 3.3. Гестоз и материнская летальность Текст. / 3.3. Токова, О.Г. Фролова // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2005. - том5. - №3. -С.52-55.

51. Участие системы Fas/Fas-лиганд в регуляции гомеостаза и функционировании клеток иммунной системы Текст. / А.А.Фильченков, Ю.М. Степа-нов, В.М. Липкин, Н.Е. Кушлинский // Аллергология и иммунология.-2002.-Т.З.-№1.-С.24-35.

52. Филинова, Н.Ю. Участие плацентарных иммунологических и белковых факторов» в патогенезе задержки внутриутробного развития плода у беременных с гестозом Текст.: автореф. дис. ...канд. мед. наук / Филинова Наталья Юрьевна. - Иваново, 2000. - 24 с.

53. Фрейдлин, И.С. А.А. Клетки иммунной системы Текст. / И.С. Фрейдлин. А.А. Тотолян, - СПб.: Наука, 2000.- Т. 1-2.- 231 с.

54. Царькова, Р.Х. Особенности иммунного ответа на системном и локальном уровнях у женщин с гестозом и хламидийно-вирусной инфекцией Текст.: автореф. дис. ... канд. мед. наук / Царькова Рамиля Харисовна. - Иваново.- 2003.-23 с.

55. Чистякова, Г.Н. Оценка системы цитокинов.при беременности, осложненной гестозом Текст. / Г.Н. Чистякова, И.А. Газиева, И.И. Ремизова //Акушерство и гинекология. - 2006.- №2. - 25-28.

56. Шалина, Р.И. Патогенетическое обоснование терапии и профилактики гестозов Текст. / Р.И. Шалина // Материалы, II Российского форума «Мать и дитя»: Тезисы докладов.- М.,- 2000.-С.171-172.

57. Шифман, Е.М. Преэклампсия, эклампсия и HELLP-синдром Текст. / Е.М. Шифман. - Петрозаводск: Интеллект, 2000.- 430с.

58. Щербавская, Е.А Изменение цитокинового профиля как адаптивный про- цесс в ходе прогрессирования гестоза Текст. / Е.А. Щербавская // Проблемы репродукции.- 2003.- том 9.- №3.- 49-53.

59. Юркевич, О.И. Эндогенная интоксикация при гестозе и дифференцированные методы эфферентной терапии Текст.: автореф. дис. ...канд. мед наук /Юркевич О.И. - СПб.-1996.-24с.

60. Ярилин, А.А. Основы иммунологии Текст. : учеб. пособие для вузов / А.А. Ярилин. - М.: Медицина, 1999.- 608с.

61. A deficiency of placental IL-10 in preeclampsia Text. / A. Hermessy et al. // J. Immunol.- 1999 .- Sep.- 15.- Vol. 163(6).- P. 3491-5.

62. A novel population of T-cell receptor a|3-bearing thymocytes which predominantly express a single V 3 gene famili [Text. / BJ . Fowlkes et al. // Nature.-1987.-Vol.329.-P.251-254.

63. Aberrant positioning of trophoblast and lymphocytes in the feto-maternal interface with pre-eclampsia Text. / T. Stallmach et al. // Virchows Arch.-1999.- Mar. - Vol.434(3). - P. 207-11.

64. Ackerman, M. Systemic inflammatory Response Syndrom, Sepsis and nutritional support Text. / M. Ackerman, N. Evans, M. Eclund // Crit. Care Nuts Clin, of North Am.- 1994.- Vol. 6.- P.321-340.

65. Activated T Lymphocytes in Pre-Eclampsia Text. / D. Darmochwal-Kolarz et al. // American Journal of Reproductive Immunology.- 2007.- Vol.58 (1).- P. 39-45.

66. Agonistic antibodies directed at the angiotensin II, ATI receptor in preeclamp- sia Text. / R. Dechend et al. // J. Soc. Gynecol. Investig.- 2006.- Feb.-Vol.-13(2).-P. 79-86.

67. Alanen, A. Deficient natural killer cells function in preeclampsia Text. / A. Alanen, O. Lassila // J. Obstet. and Gynec-1982.- Vol.60 . - P. 631- 634.

68. Alteration of peripheral CD4+CD25+ regulatory T lymphocytes in pregnancy and pre-eclampsia Text. / Hu. Dongxiao et al. // Acta Obstetricia et Gyne-cologica Scandinavica.- Vol.87, -Issue 2.- 2008.- P. 190 - 194.

69. Alteration of peripheral CD4+CD25+ regulatory T lymphocytes in pregnancy and pre-eclampsia Text. / D. Hu et al. // Acta Obstet. Gynecol. Scand.- 2008.-Vol.87(2).-P. 190-4.

70. Angiotensin II regulates interferon-gamma production Text. / S. Fernan- dez-Castelo et al. // J. Interferon. Res. - 1987.- Vol.7.- №3.- P.261-268.

71. Azizieh, F. Maternal cytokine production patterns in women with preeclampsia Text./ F. Azizieh, R. Raghupathy, M*. Makhseed// AJRL- 2005.-54.- P. 30-37.

72. Bidirectional cytokine interactions in the maternal-fetal relationship: is successful pregnancy a Th2 phenomenon? Text. / T.G. Wegmann et al. // Immunol. Today.- 1993.- Vol.14.- P.353-356.

73. Bjercke, S. Normal implantation is important in order to avoid pregnancy complications and diseases later in life Text. / S. Bjercke // Tidsskr. Nor. 1.aegeforen.- 1999.- Vol.119.- №26.- P.3903-3908.

74. Brown, M.A. The physiology of pre-eclampsia Text. / M.A. Brown // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.-1995.- Vol.22.- №.11.- P.781-791.

75. Bulmer, J.N. Immune aspects of pathology of the placental bed contributing to pregnancy pathology Text. / J.N. Bulmer // Baillieres Clin. Obstet. Gynaecol.- 1992.- Vol.6.- №3.- P.461-48.

76. Casart, Y.C. Serum levels of interleukin-6, interleukin-lbeta and human chorionic gonadotropin in pre-eclamptic and normal pregnancy Text. / Y.C. Casart, K. Tarrazzi, M.I. Camejo // J. Gynecol Endocrinol. - 2007.- May.-Vol. -23(5) . -P . 300-3.

77. Cause-effect relatioships between circulating placental angiogenic proteins and serum IL-2, IL-6 and IL-10 levels in pregnant women with preeclampsia Text. / E. Dimitrakova et al. // Akush Ginekol (Sofiia).- 2007.- Vol.- 46(9).-P.4-8.

78. CD Id and invariant NKT cells at the human maternal-fetal interface Text. / J.E. Boyson et al. // Proc. Natl. Acad. Sci U S A.- 2002.- Oct 15.- Vol. 99(21). -P.13741-6.

79. CD4(+) Valphal4 natural killer T cells are essential for acceptance of rat is let xenografts in mice Text. / Y. Ikehara et al. // J. Clin Invest.- 2000.-Jun.-Vol. 105(42).- P. 1761-7.

80. Cell-mediated lysis of autologous platelets in chronic idiopathic thrombocy topenic purpura Text. / F. Zhang et al. // Eur. J. Haematol. - 2006.-Vol.76.-P.427-431

81. Changes in systemic type 1 and type 2 immunity in normal pregnancy and pre-eclampsia may be mediated by natural killer cells Text. / A.M. Borzychowski et al. // Eur. J. Immunol. - 2005.- Oct. - Vol. 35(10). - P. 3054-63.

82. Changes of activation in T-lymphocyte subpopulations in peripheral blood during pregnancy Text. / E.I. Ivanova-Todorova, et al. // J. Akush. Gine kol. (Sofiia). -2007.- Vol.46(2).- P. 3-8.

83. Characterization of NKT cells in human peripheral blood and decidual lym phocytes Text./ H. Tsuda et al. // Am. J.Reprod.Immunol.-2001. -Vol.45. -P.295-302.

84. Ghemokine receptor expression identifies Pre-T helper (Th)l, Pre-Th2, and nonpolarized cells among human CD4+ central memory T cells Text.;/ Laura Rivino Mara Messi et al. , // J. Exp. Med.- 2004.- Sep.- 20.-Vol. 200(6).- P; 725-35;

85. Chen, H. The. immuno-pathological damage of placenta and its types: in, pregnancy induced hypertension Text.,,/H^, Ghen;. Y..Huang, T. Ma //-1996.-Voll31.-№.9.-P:540-541:.

86. Combinations of maternal RIR and fetal HL A- G genes influence the risk of preeclampsia and-reproductive success Text. 7 S.E. Hiby et al; .•// J;,Exp: Med. -2004.- Oct.- 18.- Vol'.200(8).-P. 957-65.

87. Control of fetal survival in CBAxDBA/2 mice by lymphokine therapy Text. / G. Chaouat et al; // J.Reprod.Fertil.-1990.-Vol.89.-P.447-458.

88. Control of NK cell functions, by CD4+CD25+regulatory T cells Text. / N. Ralainirina et aL // J. Leukoc. Biol. -2007.- Jan.-Vol. 81(1).-P. 144-53.

89. Croy, B.A. In vivo models for studying homing and function of murine uterine natural killer cells Text. / B.A. Croy, X. Xie // Methods Mol. Med. -2006.-Vol.- 122.- P. 77-92.

91. Cytokine production by monocytes, NK cells, and; lymphocytes is different in preeclamptic patients as;compared with normal pregnant women Text.;/ A.t. vanNieuwenhovenet al: // Hypertens Pregnancy,- 2008;- Vol; 27(3).-P. 207-24..

92. Cytolytic mechanisms and expression; of activation-regulating receptors on effector-type CD84-GD45RA+CD27- human T cells Text. / P.A. Baars et al. III. Immunol. -2000-- Aug I5.-VoM65(4). P: 19Ш7.

93. Decreased number of FoxP3+ regulatory T cells in preeclampsia Text.7 G Toldi et al. // Acta Obstet Gynecol Scand.- 2008.- Vol. 87(11).- P. 1229-33.

94. Dekker, G.A. Endothelial dysfunction in preeclampsia Part I: Primary prevention. Therapeutic perspectives. Text.7 G.A.Dekker, H.P. van Geijn // J. Perinat.Med.-1996.- Vol.24.-№.2.-P.99-l 17.

95. Dekker, G.A. Etiology and pathophysiology of preeclampcia Text. / G.A. Dekker // Gbl. Gynecol.-1994.-Vol. 116,- Ж2.-Р.57-60.

96. Dekker, G.A. The immunology of preeclampsia Text. / G.A. Dekker, B.M. Sibai // Semin Perinatal.- 1999.- Vol.23.- №1.- P. 24-33.

97. Different effects of Nef-mediated HLA class I down-regulation on human immunodeficiency virus type 1-specific CD8(+) T-cell cytolytic activity and cytokine production Text. / H. Tomiyama et al. // J. Virol. -2002.- Aug.-Voh 76(15).-P. 7535-43:

98. Elevated levels of adhesion molecules derived from.leukocytes and endothelial cells in patients withpregnancy-induced'hypertension Text. /E. Abe et al. //Hypertens Pregnancy.- 2003.- Vol. 22(l).-P.31-43

99. Elizabeth A. Bonney Preeclampsia: A view through the danger model Elizabeth A. Bonney Text. / Elizabeth A. Bonney // J. Reprod. Immunol.-2007.- December.- Vol.76(l-2).- P. 68-74.

100. Elmore S. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death Text. Susan Elmore // Toxicologic Pathology.-Vol. 3 5 . - P . 495-516.

101. Endothelial function in myometrial resistance arteries of normal pregnant women perfused with syncytiotrophoblast microvillous membranes Text. / MJ. Van Wijk et al. // BJOG.- 2001.- Sep.- Vol. 108(9).- P. 967-72.

102. Evaluation of circulating T-lymphocytes in epithelial tumors of the ovary and during chemotherapy Text. / P.F. Bolis et al. // Ann. Ostet Ginecol. Med Perinat. -1982.- May-Jun.- Vol. 103(3). - P . 202-5.

103. Evidence for an elevation in serum interleukin-2 and tumor necrosis factor- alpha levels before the clinical manifestations of preeclampsia Text. / Y. Hamai et al. //Am. J. Reprod. Immunol.- 1997.-Vol.38.- №2.-P.89-93.

104. Expansion of the fraction of Thl cells in women with preeclampsia: inverse correlation between the percentage of Thl cells and the plasma level of PAI-2 Text. / A. Ohkuchi et al. // Am. J. Reprod.Tmmunol.- 2001.- Oct.-Vol. 46(4).-P. 252-9.

105. Expression of inflammation-related genes in endothelial cells is not directly affected by microparticles from preeclamptic patients Text. / C.A. Lok et al. // J. Lab. Clin. Med.- 2006. -Vol.147.- №6. -P.310-320.

106. Expression of nuclear factor-kappa B^and placental apoptosis in pregnancies complicated with intrauterine growth restriction and preeclampsia: an immuno-histochemical study Text. / M. Aban et al. //J. Exp. Med.-2004.- Vol. 204(3).-P.195-202.

107. Expression of the placental cytokines tumor necrosis factor alpha, inter- leukin lbeta, and interleukin 10 is increased in preeclampsia Text. / B.K. Rinehart et al. // Am. J. Obstet. Gynecol.-1999.- Oct.-Vol. 181(4).-P. 915-20.

108. Fas and Fas ligand expression in maternal blood and in umbilical cord blood in preeclampsia Text. / T.B. Kuntz et al. // Pediatr. Res.- 2001.- Dec.-Vol. 50(6).- P. 743-9.

109. Fas and Fas ligand expression on human peripheral blood leukocytes Text. / M.Mincheffetal. // Vox Sang.-1998.-Vol. 74(2).-P. 113-21.

110. FasL promoter activation by IL-2 through SP 1 and NFAT but not Egr-2 and Egr-3 Text. / S. Xiao et al. // Eur. J. Immunol. -1999.- Nov.-Vol. 29(11).-P. 3456-65.

111. Fetal cells in maternal plasma are found in a late state of apoptosis Text. / A. Kolialexi et al. // Prenat. Diagn.-2004.-Sep.-Vol.24(9).-P. 719-21.

112. Fishman, M.A. Thl/Th2 cross regulation Text. / M.A. Fishman, A.S. Perelson // J. Theor. Biol.-1994.-Sep 7.-Vol.l70(l).-P. 25-56.

113. Four functionally distinct populations of human effector-memory CD8+ T lymphocytes Text. / P. Romero et al. // J. Immunol.- 2007.- Apr.- 1.-Vol.l78(7).-P.4112-9.

114. Genes regulated by interferon-gamma in human uterine microvascular endo thelial cells Text. / K. Kitaya et al. // Int. J. Mol. Med.- 2007.- Nov.-Vol. 20(5).-P. 689-97.

115. Genome wide transcriptional analysis of resting and IL2 activated human natural killer cells: gene expression signatures indicative of novel molecular signaling pathways Text. / K. Dybkaer et al. // BMC Genomics. -2007.-Jul.-Vol.- 10.-P. 8:230.

116. Gestational effects on host inflammatory response in normal and pre eclamptic pregnancies Text. / J.A. Brewster et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol . -2008.- Sep. - Vol . l40(l) . -P. 21-6.

117. Goldman-Wohl, D. NK cells and pre-eclampsia Text. / D. Goldman- Wohl, S. Yagel // Reprod. Biomed. Online. 2008.- Feb.-Vol. 16(2).- P. 227-

118. Granzyme В production distinguishes recently activated CD8+ memory cells from resting memory cells Text. / M. Tobias et al. // Cell Immunol.-2007.- May .-Vol. 247(1).- P. 36-48.

119. Huang, Y. Ischemia-reperfusion and immediate T cell responses Text. / Y. Huang, H Rabb, K.L.Womer // J. Cell. Immunol.- 2007.- July .-Vol. 248(1).-P.4-11.

120. Human decidual NK cells: unique phenotype and functional properties Text. / J. Tabiasco et al. // Placenta.- 2006.- Apr.- Vol. 27 Suppl A.- P. 34-9. Epub 2006 Mar 3. Review. Erratum in: Placenta. 2006 Sep-Oct;27(9-10):1034-5.

121. Human natural killer cells: a unique innate immunoregulatory role for the CD56(bright) subset Text. / M.A. Cooper et al. // Blood.- 2001.- May.- Vol. 97(10).-P. 3146-51.

122. Imbalance of serum T helper 1- and 2-type cytokines in preeclampsia and gestational hypertension Text. / M.Y. Dong et al. // Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. -2005.- NovVol.- 34(6).- P. 488-91.

123. Immunology of Preeclampsias Text.,/ Leif Matthiesena et al. //Markert UR (ed): Immunology of Pregnancy. Chem Immunol Allergy. Basel, Karger.-2005.- Vol; 89;-P: 49-61.

124. Immunomodulation in Normal Pregnancy and Pre-Eclampsia Text.;/ I.E. Sargent et;ah II In: Reproductive Immunology,. Satish; K. Gupta (eds),,Narosai Publishing House. - 1999. - P.198-205.

125. Inadequate tolerance induction may induce pre-eclampsia Text.7 S. Saito etal; // J.Reprod.Immunol.-2007.-Dec.rVoh76(l-2).-P.

126. Increased* serum concentrations 'of interleukin-2 receptor in the first trimester in; women who later developed-severe preeclampsia Text./ E. Enerothet al; II Acta Obstet. Gynecol; Scand,-1998ю- Jul;- Vol.77(6).- P. 591-3.

127. Interferon-gamma induces AT(2); receptor expression in fibroblasts by Jak/STAT pathway and interferon regulatory factor-1 Text.:/ M. Horiuchi et al. //Girc. Res.-2000.-Vol,48;-№;2.-P.233-240.

128. Interleukin-12 secretion by peripheral blood mononuclear cells is decreased in normal pregnant subjects and increased in preeclamptic patients Text./ M. Sakaiet al. II Am. J. Reprod. Immunol;- 2002.-Vol.47.- №.2.- P.91-97.

129. Involvment of decidual VI14 NKT cells in abortion Text. / K. Ito et al. // Proc.Natl.Acad.Sci.Usa.-2000.- Vol.97.-P.740-744.

130. Kaminski, K. Natural cytotoxicity of CD 16+ lymphocytes in women with selected states of pregnancy pathology Text. / K. Kaminski, H. Wiktor, J. Oleszczuk// Ginekol. Pol,- 1995.- Vol.66.- №4.- P. 193-197.

131. Kaufmann, P. Endovascular trophoblast invasion: implications for. the pathogenesis of intrauterine growth retardation and preeclampsia Text., / P. Kaufmann, S. Black, B. Huppertz // Biol. Reprod.- 2003.- Vol.69.- №1.- P.l-7.

132. Kwak-Kim, J. Clinical implication of natural'killer cells and reproduction Text. / J. Kwak-Kim, A. Gilman-Sachs // Am. J. Reprod. Immunol.- 2008.-May.- Vol.- 59(5).-P. 388-400. Review.

133. Lanier, L.L. Activating and inhibitory NK cell receptors Text. / L.L. 1.anier // Adv. Exp. Med. Biol. -1998.- Vol. 452.- P. 13-8.

134. Levine, R.J. Circulating angiogenic factors in preeclampsia Text. / R.J. 1.evine, S.A. Karumanchi // Clin. Obstet. Gynecol.- 2005.- Jun.-Vol. 48(2).-P. 372-86.

135. Life and death of lymphocytes: a role in immunesenescence Text. / S. Gupta et al. // Immum Ageing.- 2005.- Aug.-Vol. 23;2:12

136. Linfert, D. Lymphocytes and ischemia-reperfiision injury Text. / D. Lin- fert T. Chowdthry, H. Rabb // Transplant Rev (Orlando). -2009.- January .-Vol. 23(1).-P. 1-10. doi:10.1016/j.trre.2008.08.003.

137. Ljunggren, H.G. In search of the missing self: MHC molecules and NK cell recognition Text. / H.G. Ljunggren, K. Karre // J. Immunol.Today.-1990.-Vol.ll.-P.23 7-244.

138. Lymphocyte populations and subpopulations in peripheral blood of pregnant women with pre-eclampsia Text. / E. Dimitrakova-Dzhambazova et al. // Akush. Ginekol. (Sofiia). -2005.- Vol.- 44(1).- P. 40-4.

139. Lymphocyte subset distribution and cytokine secretion in third trimester de- cidua in normal pregnancy and preeclampsia Text. / J.R. Wilczynski et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.- 2003.- Vol.109.- P.8-15.

140. Lymphocyte subsets and autoantibodies in pregnancies complicated by placental disorders Text. / L. Matthiesen et al. // Amer. J. Reprod. Immunol.-1995.-Vol.33.-№l.-P.31-39.

141. Lymphocyte subsets and mitogen stimulation of blood lymphocytes in.pree- clampsia Text. / L. Matthiesen et al. // Am. J. Reprod.- Immunol.- 1999.-Mar.-Vol. 41(3).-P. 192-203.

142. MacFarlane, A.W. Signal transduction in natural killer cells Text./ A.W. MacFarlane, K.S. Campbell // Curr Top Microbiol Immunol. -2006.- Vol. 298.-P. 23-57. Review.

143. Mahmoud, F. Lymphocyte subpopulations in pregnancy complicated by hypertension Text. / F. Mahmoud, A. Omu, H. Abul // J. Obstet. Gynecol.-2003.-Vol.23.-№1. -P.20-26.

144. Maternal lymphocyte subpopulations (CD45RA+ and CD45RO+) in preeclampsia Text. / T. Chaiworapongsa et al. // Am. J. Obstet. Gynecol.-2002.-Vol.l87.-№4.-P.889-893.

145. Maternal peripheral T-helper 1-type and T-helper 2-type immunity in non- preeclamptic twin pregnancies Text. S. Suzuki et al. // Gynecol. Obstet. Invest.- 2002.- Vol.53.- №3.- P.140-143.

146. Maternal plasma levels of cytokines in nonnal and preeclamptic pregnancies and their relationship with diastolic blood pressure and fibronectin levels Text. / R. Madazli et al. // Acta Obstet Gynecol Scand.- 2003.- Sep.-Vol. 82(9).-P. 797-802.

147. Maternal serum interleukin-10, interleukin-2 and interleukin-6 in preeclampsia and eclampsia Text. / B. Borekci et al. // Am. J. Reprod Immunol. -2007.- Jul.- Vol. 58(1).-P. 56-64.

148. Maternal serum levels of pro-inflammatory cytokines in missed and threatened abortion Text. / R. Paradisi et al. // Am. J. Reprod Immunol.- 2003.-Vol.50.-№4.-P.302-308.

149. Mechanisms underlying immunologic states during pregnancy: possible association of the sympathetic nervous system Text./ M. Minagawa et al. // Cell. Immunol. -1999.- Aug 25.-Vol. 196(1).-P. 1-13.

150. Mejia, R. Physiopathology of preeclampsia Text. / R. Mejia, A. Sarto // Medicina (B Aires). -1996.- Vol.56.- № 3.- P.308-312.

151. Moffett-King, A. Natural killer cells and pregnancy Text. / A. Moffett- King //Nat. Rev. Immunol.- 2002.- Sep.-Vol. 2(9).-P. 656-63.

152. Murine fetal resorption and" experimental pre-eclampsia are induced by both excessive Thl and Th2 activation Text. / S. Hayakawa et al. // J. Reprod. Immunol.- 2000.-Vol.47.- №2.- P.121-138.

153. Myatt L. Role of placenta in preeclampsia Text. / L. Myatt // Endocrine.-2002.-Vol.19.-№1.-P 103-111.

154. Nagata, S. Fas ligand-induced apoptosis Text. / S. Nagata // Annu Rev Genet.- 1999.-Vol. 33.-P. 29-55. Review.

155. Natural killer cell activity and antibody dependent cell-mediated cytotoxicity in preeclampsia Text. / J.A. Hill et al. // J. Reprod. Immunol.- 1986.- Vol.9.-№3.-P.205-212.

156. Nikhil, S. Effector CD8 T Cell Development: A Balancing Act between Memory Cell Potential and Terminal Differential and Terminal Differentiation Text. / S. Nikhil, Joshi and Susan M. Kaech // The Journal of Immunology.-2008.-Vol. 180.-P. 1309-1315.

157. NKT cells: facts, functions and fallacies Text. / D.I. Godfrey et al. // Immunol. Today.- 2000.- Nov.-Vol. 21(11).- P. 573-83. Review.

158. NKT cells: facts, functions and fallacies Text. / A.G. Baxter et al. // J. Immunol. Today. -2000.- Nov.- Vol.21(ll). - P. 573-83.

159. Parham, P: NK cells and trophoblasts: partners in pregnancy Text. / P. Par- ham // J. Exp. Med.- 2004.- Oct.- 18,-Vol. 200(8).-P. 951-5. Review.

160. Physiopathology of pre-eclampsia: the role of immunology Text. / D. Vinatier et al. // J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod.-1995.-Vol.24.- №4.-P.387-399.

161. Placental deficiency of interleukin-10 (IL-10) in preeclampsia and its relationship to an IL10 promoter polymorphism Text. / A Makris et al. // Placenta. -2006 Apr.-May.- Vol. 27(4-5).-P. 445-51.

162. Plasma granulysin concentrations and preeclampsia risk' Text. / С Qiu et al. // Clin Biochem.-2006.-Oct-Vol. 39(10).-P. 1016-21.

163. Plasma soluble endothelial selectin is elevated in women with pre-eclampsia Text. / Y.Daniel et al. // Hum. Reprod.- 1998.- Dec- Vol.- 13(12).- P. 3537-41.

164. Preeclampsia is associated with reduced serum levels of placenta growth factor Text. / D.S. Torry et al. // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1998.- Dec.-Vol. 179(l).-P.1539-44.

165. Pre-eclampsia is not associated with changes in the levels of regulatory T cells in peripheral blood Text. / S. Paeschke et al. // Am. J. Reprod. Immunol. -2005.- Dec.-Vol. 54(6).-P. 384-9.

166. Preeclampsia: current understanding of the molecular basis of vascular dysfunction Text. / S. Sankaralingam et al. // Expert. Rev. Med. - 2006. -Vol.26.-P.l-20.

167. Procalcitonin values in preeclamptic women are related to severity of disease Text. / M. Montagnana et al. // Chem. Lab. Med. -2008.- Vol. 46(7).-P. 1050-1.

168. Proliferation requirements of cytomegalovirus-specific, effector-type human CD8+ T cells Text. / E.M. van Leeuwen et al. // J. Immunol. - 2002.- Nov .- 15.-Vol. 169(10).-P. 5838-43.

169. Quantitative analysis of peripheral blood ThO, Thl, Th2 and the Thl:Tli2 cell ratio during normal human pregnancy and preeclampsia Text. / S. Saito, et al. // Clin. Exp. Immunol. - 1999.- Vol.117.- № 3.- P.550-555.

170. RCASl decidual immunoreactivity in severe pre-eclampsia: immune cell presence and activity Text. / L. Wicherek et al. // Am. J. Reprod. Immunol. -2007.-Vol.58(4).-P. 358-366.

171. Regulation by interleukin-2 (IL-2) and interferon gamma of IL-2 receptor gamma chain gene expression in human monocytes Text. / M.C. Bosco et al. //Blood. -1994.- May 15.- Vol. 83(10). - P . 2995-3002.

172. Relationship between adenosine deaminase activity and cytokme-secreting T cells in normal pregnancy Text. / Y. Yoneyama et al. // Obstet Gynecol.-2002 .-Oct-Vol. 100(4).-P. 754.

173. Sallusto, F. Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance Text. / F. Sallusto, J. Geginat, A. Lanzavec-chia // Annu Rev Immunol. -2004. - Vol. 22. - P .745-63.

174. Schjrtlein, R. Hemostatic variables as independent predictors for fetal growth retardation in preeclampsia Text. / R. Schjrtlein, M. Abdelnoor, G. Haugen // Acta Obstet Gynecol Scand.-2003.-Vol.l78.-P.191-197.

175. Serum levels of neopterinand interleukin-2 receptor in ^ women with severe preeclampsia Text. / I. Kaleli et al. // J. Clin.Lab Anal.- 2005.- Vol. 19(2).-P.36-9.

176. Serum soluble Fas levels in preeclampsia Text. / C D . Hsu et al. // J. Ob- stet. Gynecol. -200L- Apr.-Vol.97(4).-P. 530-2.

177. Shed membrane fragment modulation of CD3-zeta during pregnancy: link with induction of apoptosis Text. / С Gercel-Taylor et al. // J. Reprod. Immunol. 2002 Jul-Aug.- Vol; 56(1-2).- P. 29-44.

178. Soluble vascular endothelial growth factor receptor-1 (sFlt-1) is increased throughout gestation in-patients who*have preeclampsia^ develop Text. / G.C. McKeeman et al. // Am. J. Obstet. Gynecol.- 2004.- Oct.-Vol. 191(4).-P. 1240-6.

179. Structure and function of major histocompatibility complex (MHC) class I specific receptors expressed on human natural" killer (NK)' cells Text. / F.Borrego et al. // Mol.Immunol.-2001.-Vol:38.-P.637-660.

180. Studies of natural killer cells in pregnancy-induced hypertension Text. / J.C Peracoli et al. // Braz. J. Med. Biol. Res.- 1995.- Vol.28.- P.655-661.

181. Subclinical infection as a cause of inflammation in preeclampsia Text. / P. 1.opez-Jaramillo et al. // Am. J. Ther.- 2008.- Jul-Aug.- VOL 15(4).- P. 373-6.

182. Systemic Inflammatory Priming in Normal Pregnancy and Preeclampsia : The Role of Circulating Syncytiotrophoblast Microparticles Text. / J. Sarah etal. // The Journal of Immunology.- 2007.-Vol. 178 . - P . 5949-5956.

183. Systemic Thl/Th2 cytokine responses to paternal and vaccination antigens in preeclampsia: no differences compared with normal pregnancies Text. / Y. Jonsson et al. // Amer. J. Reprod. Immunol.- 2004.- Vol.- 51.- P.302-310.

184. T helper 1- and T helper 2-type cytokine imbalance in pregnant women with pre-eclampsia Text. / D. Darmochwal-Kolarz et al. // J. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. -1999.- Oct.- Vol.86(2).- P. 165-70.

185. Takada, Y. The integrins Text. / Y. Takada, X. Ye, S. Simon // Genome Biology.- 2007.- Vol.8.- 215.

186. Taylor, R.N. Review: immunobiology of preeclampsia Text. / R.N. Taylor // Am. J. Reprod. Immunol- 1997.- Vol.37.- №1.- P.79-86.

187. Thl/Th2 predominance and proinflammatory cytokines determine the clini- copathological severity of IgA nephropathy Text. / C.S. Lim et al. // Nephrol. Dial. Transplant.- 2001.- Vol.16.- № 2.- P.269-275.

188. The cytokine basis for cross-talk between* the maternal immune and reproductive systems Text. / T.G. Wegmann et al. //Curr. Opinion Immunol.-1990.-Vol.2.-P.765-769.

189. The expression and concentrations of Fas/APO-1 (CD95) antigen in patients with severe pre-eclampsia Text. / D. Darmochwal-Kolarz et al. // J. Reprod. Immunol-2001.-Feb.-Vol.- 49(2).-P. 153-64.

190. The expression of apoptosis related genes Bcl-2 and Bax protein in dysfunctional uterine bleeding Text. / L.L. Zhou et al. // 2008.- Dec.-Vol. 22(6).-P. 455-7.

191. The expressions of intracellular cytokines in the lymphocytes of preeclamptic patients Text. / D. Darmochwal-Kolarz et al. // Am. J. Reprod. Immunol. -2002.- Dec- Vol.- 48(6).- P. 381-6.

192. The fetal inflammatory response syndrome Text. / F. Gotsch et al. // Clin. Obstet. Gynecol. 2007.- Sep.- Vol. 50(3).- P.652-83. Review.

193. The molecular basis of natural killer (NK) cell recognition and function Text. / L. Moretta et al. // J.Clin.ImmunoL- 1996.-Vol.l6.-P.243-253.

194. The role of cytokines in Thl/Th2 balance in pregnant women with transient hypertension Text. / J.R. Wilczynski et al. // Ginekol. Pol.- 2000.- Vol.71.-№6.- P.464-468.

195. The role of invariant NKT cells in pre-eclampsia Текст. / E. Miko et al. // Am. J: Reprod. Immunol.- 2008.- Aug.-Vol. 60(2).-P. 118-26.

196. The role of the innate immune system in type 1/type 2 immunity shifts in normal pregnancy and pre-eclampsia Text. / I. Sargent et al. // AJRI. -2004.-V.51.-P.460-461.

197. Tomiyama, H. Differentiation of human CD8(+) T cells from a memory to memory/effector phenotype Text. / Hiroko Tomiyama, Tomoko Matsudaand Masafuml Takiguchi // J. Immunol.- 2002.- Jun l.-Vol.l68(ll).- P. 5538-50.

198. Urinary angiogenic factors cluster hypertensive disorders and identify women with severe preeclampsia Text. / C.S. Buhimschi et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. -2005.- Mar. -Vol. 192(3). - P . 734-41.

199. Van Beck, E. Pathogenesis of preeclampsia: a comprehensive model Text. / E. Van Beck, L.L. Peeters // Obstet. Gynecol. Surv.-1998.- Vol.53 .-№4.-P.233-239.

200. Varla-Leftherioti M. The significance of the women's repertoire of natural killer cell receptors in the maintenance of pregnancy Text. / M. Varla-1.eftherioti // Chem. Immunol. Allergy.- 2005.- Vol. 89.- P. 84-95. Review.

201. Vinatier, D. Pre-eclampsia: physiology and immunological aspects Text. / D. Vinatier, J.C Monnier // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.-1995.-Vol.61.-№.2.-P.85-97.

202. Waring, P. Cell death induced by the Fas/Fas ligand pathway and its role in pathology Text. / P. Waring, A. Mullbacher // Immunol. Cell Biol. -1999 .-Aug.-Vol. 77(4).-P. 312-7. Review.

203. Wiktor, H. Histocompatibility antigens in pregnant women with preeclampsia ahd in their husbandsn Text. / H. Wiktor, P. Koziol // Gynekol. Pol.-& Vol.69.-№12.-P.937-942.

204. Williams, M.A. Maternal second trimester serum tumor necrosis factor- alpha-soluble receptor 55(sTNFp55) and subsequent risk of preeclampsia Text. / M.A. Williams, A. Farrand, R. Mittendorf // Am. J. Epidemiol.- 1999. -Vol.149.- №4. -P.323-329.

205. Wold, A.S. Natural killer cells and reproductive failure Text. / A.S. Wold, A. Arici // Curr Opin Obstet Gynecol.- 2005.- Jun.-Vol. 17(3).-P. 237-41

206. Xia, Y. Pregnancy-related pruritic rash Text. / Y. Xia, D.W. Bray // Am Fam Physician.- 2007.- Oct l.-Vol. 76(7).-P. 1019-20.

207. X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) confers human trophoblast cell resistance to Fas-mediated apoptosis Text. / S.L.Straszewski-Chavez et al. // Mol. Hum. Reprod.- 2004.- Jan. -Vol .10(1). - P.33-41.

208. Yersinia pseudotuberculosis carrier vaccine for simultaneous antigen- specific CD4 and CD8 T-cell induction Text. / H. Riissmann et al. // Attenuated Infect. Immun.- 2003.- Jun.-Vol. 71(6). - P.3463-72. ^

Автореферат диссертации по медицине на тему Функциональное состояние и параметры апоптоза периферических клеток с цитотоксической активностью при гестозе

Оглавление диссертации Мамалыга, Ирина Николаевна :: 2009 :: Москва

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Мамалыга, Ирина Николаевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Мамалыга, Ирина Николаевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций