Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение семян различных сортов амаранта печального (Amaranthus hypochondriacus L.)

005049159

КОРЕЙСКАЯ ИРИНА МИХАЙЛОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕМЯН РАЗЛИЧНЫХ СОРТОВ АМАРАНТА ПЕЧАЛЬНОГО

(лмлклтнт тросноттлст ь.)

Специальность 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

31 ЯНВ 2013

Пермь-2013

005049159

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Воронежский государственный университет» Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Фурса Николай Сергеевич

ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Минздрава России

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Белоногова Валентина Дмитриевна

ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России заведующий кафедрой фармакогнозии с курсом ботаники

доктор фармацевтических наук, доцент Гейн Людмила Федоровна

ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия» Минздрава России, заведующий кафедрой общей и биоорганической химии

Ведущая организация: ГБОУ ВПО « Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России

Защита состоится «26» февраля 2013 г. в 15 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая, д. 2.

С диссертацией' можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, д. 46.

Отзыв на автореферат просьба отправлять по адресу Диссертационного совета.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте Министерства образования и науки Российской Федерации Ьйрл//\у*у\у.топ.§оу.ги «_» января

2013 г. и на сайте ПГФА http://www.pfa.ru «_» января 2013 г.

Автореферат разослан «_»_2013 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.068.01, кандидат фармацевтических наук, доцент

И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Поиск растительных источников, содержащих различные биологически активные вещества и имеющих надежную сырьевую базу, является социально и экономически значимым направлением фармации.

Исследования видов рода Щирица (Амарант) свидетельствуют о том, что в них содержится уникальный сбалансированный комплекс БАВ (углеводы, белки, жирные кислоты, фосфолипиды, токоферолы). Отдельные представители рода достаточно изучены для нужд пищевой технологии (Е. Н. Офицеров, В. И. Костин, 1999; И. М. Магомедов, 2002.; Е. Г. Иоргачева, 2002;), в области селекции и интродукции (И. А. Чернов, 1992; П. Ф. Кононков, В. К. Гинс, М. С. Гинс, 2001; Т. И. Гопций, 2001; О. И. Криворученко, A.B. Железнов, Н. В. Бур-макина, 2009), биологии (JI. А. Мирошниченко, 2008). Вместе с тем они не являлись объектом углублённого фитохимического исследования для выявления возможностей их медицинского использования.

Семена различных сортов (Воронежский, Кизлярец, Кинельский, Крепыш, Янтарь) амаранта печального (А. hypochondriacus L.), шггенсивно культивируемых в России, в том числе в Центральном федеральном округе, заслуживают внимания в качестве потенциального лекарственного растительного сырья, богатого природными БАВ, в частности, самым высококачественным растительным белком. Вместе с тем до настоящего времени в достаточной мере не изучено их качественное и количественное содержание, не исследован элементный состав, не определены физико-химические характеристики сырья и продуктов его переработки, в том числе жирного масла, реализуемого в качестве пищевой добавки. В связи с чем фармакогностическое изучение семян пяти сортов амаранта печального представляется весьма актуальным. Цель и задачи исследования

Целью работы явился сравнительный анализ природных соединений 5 сортов амаранта печального с использованием современных методов, разработка нормативной документации на них и на мазь с амарантовым маслом.

Для достижения поставленной цели следовало решить следующие задачи:

- провести изучение веществ первичного (углеводы, аминокислоты, жирные кислоты, витамины) и вторичного обмена (терпены, стерины, фенольные соединения, органические кислоты) 5 сортов амаранта печального;

- сравнить элементный состав анализируемых образцов до и после экстракции жирного масла и оценить их экологическую чистоту;

- определить масличность и компонентный состав жирного масла семян различных сортов амаранта и установить показатели его качества;

- выявить характерные морфолого-анатомические признаки и провести определение товароведческих показателей семян пяти сортов;

- предпринять изучение ряда фармакологических свойств масла амаранта;

- исследовать технологические и фармакологические свойства парафармацевтической модели мази с амарантовым маслом для наружного применения;

- составить проекты ФСП на семена и мазь с маслом амаранта.

\

Научная новизна. С использованием современных физико-химических методов исследования (хромаго-масс-спектрометрия (ГХ/МС), масс-спектрометрия (МС) с индуктивно связанной плазмой, капиллярный электрофорез, УФ-спектрофотометрия, ВЭЖХ и др.) впервые проведено сравнительное фитохимическое изучение семян амаранта печального. При этом в ходе их стандартизации выявлены микродиагностические признаки и дано описание внешних признаков. Наряду с этим показана перспективность использования семян амаранта как важного природного комплекса различных БАВ (углеводов, белков, отличительным признаком которых является значительное количество лизина, жирного масла с высоким содержанием эссенциальных жирных линолевой и линоленовой кислот, сквалена, фосфолипидов (фосфатидил-холина), стеринов, токоферолов и органических кислот).

Методом МС впервые определен 61 элемент в семенах 5 сортов амаранта печального, которые имеют определенное значение в экологическом, токсикологическом, медицинском и хемотаксономическом аспектах.

С использованием метода ГХ/МС впервые проанализирован состав эта-нольного извлечения из семян и шрота амаранта печального, в результате которого идентифицировано 67 соединений, из которых 57 до и 60 после экстракции жирного масла гексаном с пищевым нефрасом.

Методом ВЭЖХ определено содержание жирных кислот, фосфолипидов и сквалена в жирных маслах, полученных из анализируемого сырья.

Для качественного и количественного определения токоферолов и фосфолипидов в жирном масле семян амаранта адаптирован метод ТСХ.

Проведено изучение раздражающего действия, острой и хронической токсичности, гипохолестеринемического действия и бактерицидной активности жирного масла, исследованы технологические и фармакологические свойства парафар-мацевтической модели мази е амарантовым маслом для наружного применения.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований положены в основу проектов ФСП «Амаранта семена» и «Мазь с маслом амаранта». Данные по товароведческому анализу семян амаранта печального использованы при разработке ТУ 9719-003-77872064-2011 «Зерно амаранта», введенных 24.10.2011, ООО «Русская олива».

Методики качественного и количественного анализа отдельных групп БАВ семян различных сортов амаранта внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической химии и клинической фармации ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко» (акт о внедрении от 19.03.12 г.), кафедры фармацевтической химии и фармацевтической технологии ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет» (акт о внедрении от 04.05.12 г.), кафедры фармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» (акт о внедрении от 23.01.12 г.), в производственный процесс ООО «Русская Олива» (акт о внедрении от 20.05.12 г.).

' Впервые на доклиническом этапе исследований обоснована целесообразность использования амарантового масла в качестве гипохолестеринемического и противоожогового средства, что позволяет в известной мере реализовать возможность применения семян амаранта печального в медицине.

Осиовные положения, выносимые н;а защиту:

1. Данные сравнительного изучения веществ первичного и вторичного обмена пяти сортов амаранта печального.

2. Итоги определения элементного составе! и оценки экологической чистоты анализируемого сырья до и после экстракции жирного масла.

3. Результаты изучения компонентного состава экстракционного амарантового масла и обоснования возможностей его применения в медицине.

4. Характеристика морфолого-анатомических признаков семян амаранта печального и их товароведческих показателей.

5. Особенности фармакологического дєйстеіия амарантового масла.

6. Результаты исследования фармацевтической модели мази с маслом амаранта.

7. Разработанные нормативные документы - проекты ФСП «Амаранта семена» и «Мазь с маслом амаранта».

Апробация и публикация результатов исследования Основные результаты исследований доложены и обобщены на следующих межрегиональных и международных научно-методических конференциях: «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования» (ВГУ, Воронеж 2003, 2005, 2007, 2010 гг.), «Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации» (ВГУ, Воронеж 2008, 2011), «Разработ ка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (ПГФА, Пятигорск 2010, 2011, 2012), «Науково-технічний прогрес і оптимізація технологічних процесів створення лікарських препаратів» (ТДМУ, Тернопіль 2011); «Мосіеті \-ymozenosti уссіу» (РгаЬа, 2012); «Бъдещите изеледвания» (София, 2012); «Тїигорфка пайка XXI рошіска -2012» (Ргеетуві)» (2012), на научных конференциях студентов и молодых учёных ГБОУ ВПО ЯГМА (2010 - 2012), на ежегодных научных сессиях ФГБОУ ВПО ВГУ в период 2005-2012 гг.

Связь задач исследований с проблемным планом. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГБОУ ВПО ВГУ (код по ГРНТИ: 31.23). Тема диссертационной работы утверждена на заседании Ученого совета фармацевтического факультета ВГУ (протокол № 09 от 27.10.05 г.).

Личный вклад автора. Автор непосредственно участвовал в проведении научных экспериментов, обработке и интерпретации экспериментальных данных по изучению элементного, углеводного, аминокислотного, липидного и фенольного состава семян 5 сортов амаранта печального, в проведении сравнительной характеристики жирных масел из этих семян, в определении микродиагностических признаков семян амаранта печального, в исследовании отдельных фармакологических свойств амарантового масла, в апробации результатов исследования, в составлении 2 проектов ФСП и подготовке публикаций по выполненной работе.

Публикации материалов исследования. По теме диссертации опубликованы 42 научные работы, из них 10 в журналах, в том числе 8 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Обьем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 176 страницах текста компьютерной верстки и состоит из «Введения». «Обзора литературы» (1 глава), «Экспериментальной части» (5 глав), выводов, списка литературы, включающего 244 источника, в том числе 46 на иностранных языках, и приложений. Диссертация содержит 51 таблицу, 31 рисунок, в том числе 15 фотографий.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы. В первой главе обобщены данные литературы по ботанической характеристике и химическому составу видов рода щирица (Amaranthus) семейства амарантовые (Amaranthaceae), их применению в медицине, а также дана характеристика, классификация, физико-химические свойства и методы анализа жирных масел. Вторая глава посвящена матер иалам и методам исследования. Третья глава включает результаты определения элементного состава и исследования веществ первичного и вторичного обмена 5 сортов семян амаранта печального. В четвертой главе отражены результаты изучения амарантового масла и характеристика его качества. Пятая глава содержит данные по стандартизации семян амаранта печального. В шестой главе приведены результаты по исследованию раздражающего действия, определению острой и хронической токсичности, по изучению про-тивомикробного и гипохолестеринемического действия амарантового масла. Приложения включают отдельные масс-спектры идентифицированных веществ, проекты фармакопейных статей, приведены результаты по исследованию парафармацевтической модели мази с маслом амаранта, а также материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Для сравнительного анализа нами использованы семена зерновых и овощных сортов (Воронежский, Кинепьский, Крепыш, Кголярец, Янтарь) амаранта печального (Amaranthus hypochondriacus L.), интродуцированных в Украине, в Российской Федерации (Центральный и Сибирский ФО) и интенсивно культивируемых в Воронежской, Белгородской и Липещсой областях.

Анализ БАВ проводили классическими и современными методами исследований, в частности бумажной (БХ) и тонкослойной хроматографией (ТСХ), методом капиллярного электрофореза (прибор Applied Biosystem 273 Т, США), хромато-масс-спектрометрией (ГХ/МС) (i-азовый хроматограф 6850 с масс-селективным детектором 5973 фирмы Agilent Technologies, США), ВЭЖХ с фотометрической детекцией (аминокислотные анализаторы: ААА-400, Чехия и Hitachi 835, Япония), масс-спектрометрией с индуктивно связанной плазмой (масс-спектрометр ELAN-DRC-e, США), титриметрией, УФ-спектрофотометрией (СФ-56), товароведческого аналии, фармакологическими методами оценки острой и хронической токсичности, моделирования раздражающего, гипохолестеринемического, антибактериального действия, используя унифицированные биохимические методы исследования крови. При этом в работе использовали реактивы, стандарты, растворители, отвечающие требованиям

соответствующей нормативной документации. Статистическую обработку данных проводили общепринятыми методами и с помощью программы «81а&йса - 6,0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ЭЛЕМЕНТНЫЙ СОСТАВ

Определение макро-, микро- и ультрамикроэлементов в семенах пяти сортов амаранта печального и их шрота (после экстракции: жирного масла гехсаном с пищевым нефрасом) проводили методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой на приборе ЕЬА1Ч-ОЯС-е (США). Для ко1ггроля точности определений применяли метод добсивок.

В анализируемых образцах нами выявлен 61 элемент, среда которых 7 макро-, 54 микро- и ультрамикроэлемента (табл. 1), третья часть из которых является эссён-циальными. Каждый образец характеризовался индивидуальными особенностями в накоплении отдельных элементов. Среди макроапемеитов в семенах амаранта сорта Воронежский до и после экстракции преобладали калий и кальций, сорта Кизлярец, Юшельский и Янтарь — фосфор, калий, кальций, сорта Крепыш — фосфор, кальции и магний. Из микроэлементов во всех анализируемых образцах доминировало железо, затем в значительных количествах накапливались марган ец, цинк, несколько меньше рубидий, титан, медь, стронций, барий и др.

Из приведённых в таблице 1 данных видно, что до экстракции жирного масла гексаном с пищевым нефрасом содержание половины элементов было большим, чем после неё, и наоборот. Содержание доминирующих элементов в семенах амаранта коррелировало с таковым в семенах льна (М.А. Гарумова, 2005), семенах гречихи (Л.И. Бутенко, 2010) и плодах расторопши пятнистой (А.В. Волоцуева, 2004.; В.М. Рыжов, 2009).

Накопление токсичных элементов (РЬ, Аз, Сс1, в семенах 5 сортов амаранта печального не превышало предел допустимых концентраций на период заготовки и исследования сырья (СанПиН 2.3.2.1078-01 от 2001 года). В связи с чем их следует считать экологически безопасными. Отмеченное послужило основанием к дальнейшему исследованию семян и получению из них жирного масла.

Из изложенного следует, что семена амаранта печального и, что важно, его шрота — источник многих эссенциальных элементов, недостаток которых в оргапизме человека приводит к различным заболеваниям.

ВЕЩЕСТВА ПЕРВИЧНОГО И ВТОРИЧНОГО ОБМЕНА

Углеводы. Наличие углеводов в водных извлечениях из семян подтверждали обработкой трехкратным объемом 96% спирта этилового. Полученные рыхлые бело-серые осадки использовали для проведения реакции с реактивом Фелиыга, подтвердившим присутствие в исследуемых образцах Сахаров в связанном виде. Гравиметрическим методом определено содержание водорастворимых полисахаридов, пектинов, гемицеллюлозы А и В 5 сортов изучаемых семян. Отмечено наиболее высокое суммарное содержание углеводов в семенах амаранта печального сорта Воронежский (57 %), использованных для

Таблица 1 - Элементный состав семян пяти сортов амаранта печального до экстракции жирного масла (мкг/г)

Элемент Воронежский Крепыш Кизля-рец Кинель-ский Янтарь Элемент Воронежский Крепыш Кизлхрец Кинель-ский Янтарь

Макроэлементы Микро- и ультрамикроэлементы

Алюминий (А1) 403,000 169,000 282,000 252,000 128,000 Гольмий (Но) 0,0039 0,0023 0,0057 0,0076 0,0152

Калий (К) 8303,000 2506,400 7381,700 4832,000 7802,500 Иод (I) 0,1225 0,3977 0,0386 0,2926 0,3788

Кальций (Са) 4738,800 4249,300 4268,600 2616,000 3371,000 Лантан (Ьа) 0,3577 0,7160 0,0997 0,3342 0,7869

Магний (М§) 2702,600 3997,700 4202,200 1907,100 3279,000 Литий (Ц) 0,2855 0,2889 0,2107 0,0255 0,2829

Натрий (№) 49.282 41.758 61.860 64,721 50,563 Лютеций (Ілі) 0,0062 0.0080 0,0042 0,0036 0,0074

Фосфор (Р) : 3015,600 9197,000 5545,800; 8304,400 8303,300 Марганец (Мп) 73,1890 114,8700 :: 71,1740 124,6100 30,3200

Кремний (Бі) 346,390 281,580 885,000 429,640 990,720 Молибден(Мо) 0,2294 1,8287 0,2335 1,0227 1,8641

шИКрО- И УльТра.иик|іОЗЛЄМЄНТЬІ Ниобий (№>) 0,0811 0,2197 0,0120 0,3217

Серебро (Ая) 0,0340 0,0170 0,0610 0,0340 0,0570 Неодим (N(1) 0,2671 0,1899 0,0260 0,1586 0,0141

Мышьяк (А?) - 0,0010 0.0030 0,0010 0,0030 0.0040 Никель (№) 2,6031 0,9807 4,4831 5,0372 4,6971

Золото (Аи) 0,0020 0,0150 0,0200 0,0120 0,0190 Свинец (РЬ) '0,3971 0,2507 ' 0,2136 0,5685

Бор (И) 31,5000 31,2000 31,4000 43,5000 20,4000 Празеодим (Рг) 0,0125 0,17УЗ 0,0352 0,1474 0,1576

Барий (Ва) 9,8000 44,7000 30,9000 31,6000 16,6000 Рубидий (Шэ) 20,0740 1,6871 37,2200 35,1420 29,2610

Бериллий (Ве) 0,0089 0,0001 0,0040 0.0071 0,0054 Сурьма (5Ь) 0,0177 0,0188 0,0645 0,0115 0,0168

Висмут (ВІ) 0,0094 0,0035 0,0055 0,0123 0,0137 Селен (Бе) 0,7224 0,4204 0,2358 0,7903 0,5952

Бром (Вг) 9,2000 5,7000 2,000 0,9000 6,4000 Самарий (Бт) 0,1402 0,0361 0,0614 0,1757 0,0790

Кадмий (С4) ■ - 0,0122 0.0451 0,0515 0,0187 0,0324 Олово(Бп) 0,0206 0,0531 0,0756 0,0454 0,1973

Церий (Се) 0,8680 0,8237 0,3000 0,9044 0,4092 Стронций (Бг) 26,8260 19,5490 1,6005 31,0580 5,0614

Кобальт (Со) 0,1607 0,0575 0,1085 0,7506 0,7810 Тантал (Та) 0,0051 0,0179 0,0051 0,0066 0,0007

Хром (Сг) 6,5778 1,4225 4,9876 2,2861 0,6382 Тербий (ТЬ) 0,0181 0,0115 0,0072 0,0064 0,0202

Цезий (С») 0,2554 0,2490 0,2186 0,1655 0,2232 Торий (Пі) 0,0874 0,2144 0,1432 0,1105 0,0604

Медь (Си) 16,1390 37,9430 7,8438 36,3360 16,6730 Титан (Ті) 34,8400 24,3640 31,5710 36,6270 8,7518

Диспрозий(ІЗу) 0,0693 0,0508 0,1126 0,0229 0,0820 Таллий (Т1) 0,0046 0,0098 0,0193 0,0129 0,0203

Эрбий (Ег) 0,0383 0,0461 0,0514 00514 0,0213 Тулий (Тт) 0,0013 0,0042 0,0071 0,0057 0,0068

Европий (Ей) 0,0077 0,0127 0,0321 0,0040 0,0022 Уран(и) 0,0550 0,0296 0,0307 0,0573 0,0717

Железо (Ре) '- 510,4200 479,0700 364,7400 416,4300 286,1900 Ванадий (V) 0,2102 1,1037 1,4670 1,3551 0,2919

Галлий (Єа) 0,1223 0,0682 0,6711 0,1893 0,2867 Вольфрам (\У) 0,0638 00585 0,0099 0,0797 0,0545

Гадолиний(Ссі) 0,0893 0,0420 0,0899 0,0900 0,700 Итгрий (У) 0,0174 0,5077 0,2573 0,6052 0,4579

Германий (Єє) 0,0451 0,0631 0,0076 0,0171 0,0075 Иттербий (УЬ) 0,0377 0,0046 0,0475 0,0262 0,0362

Гафний (НО 0,0104 0,0676 0,0460 0,0451 0,0481 Цинк(2п) : 31,2800 23,6000 29,3200 65,4600; 55.3000

Ртуть (Щ)' ■ 0,0001- 0,0010 Ї « 0,0003 0,0005 0,0001: Цирконий (7х) 2,2100 0,9600 0,6400 0,9200 1,0300

углубленного изучения состава моносахаров. Методом прямофазной ВЭЖХ нами не обнаружены моносахариды в свободном состоянии, а из связанных Сахаров методом капиллярного электрофореза определено довольно значительное содержание глюкозы (9,8 %).

Более разнообразный состав моносахаров (девять) обнаружен методом ГХ/МС. При анализе семян и шрота амаранта печального (сорт Воронежский) отмечено, что среди углеводов доминировали сахароза (89,98 % и 70,67 % от общей суммы углеводов) и галактоза в фуранозной форме (7,97 и 9, 46 %). В шроте идентифицирована пентоновая (ксилоновая) кислота (табл. 2).

Таблица 2 — Содержание углеводов в этапольных извлечениях семя» амаранта печального (сорт Воронежский) до и после экстракции жирного масла

Углевод Время удерживания, мин Содержание, % отн.

семена шрот

Арабиноза 8,40 0,55 0,58

Галактоза 9,55 5,71 2,75

Галактофураноза 9,76 7,97 9,46

Глюкопираноза 9,22 2,16 1,75

Ксилит 8,32 0,24 4,49

Ксилоновая кислота 8,61 не обн. 8,44

Рибоза 8,42 0,56 0,75

Сахароза 11,80 89,98 70,67

Фруктоза 8,41 1,36 1,11

Аминокислоты. Для первоначального обнаружения белкового комплекса семян использовали нингидриновую пробу. Содержание протеина в них варьировало в зависимости от сорта (11,61-15,34 %). Количественное определение аминокислот в семенах проводили с помощью аминокислотного анализатора Hitachi (Япония) в стандартных условиях после гидролиза (табл. 3 и рис. 1).

В результате исследований обнаружили 18 аминокислот, из них 7 заменимых (Ala, Gly, Ser, Cys, Asp, Glu, Pro), 3 - условно заменимых (Туг, His, Arg) и 7 - незаменимых (Val, Ile, Leu, Met, Phe, Thr, Lys). Орнитин выявлен в следовых количествах. Доля незаменимых аминокислот (в среднем по сортам около 33 % в общей сумме) значительно ниже (более чем в 2 раза), чем заменимых (около 67 %). По мере убывания содержания отдельные аминокислоты можно расположить в следующий ряд: Glu > Arg > Asp > Gly > Lys > Leu > Ser > Val > Phe > Thr > Pro > Ala > lie > His > Туг > Cys > Met От общей суммы аминокислот доля глютаминовой кислоты, аргинина, аспарагиновой кислоты, глицина, лейцина, лизина и серина составляла около 65%.

По содержанию лизина, лейцина, феиилаланина и других незаменимых аминокислот протеины семян амаранта превосходят белки семян льна (М.А. Гарумова, 2005) и плодов расторотни пятнистой (A.B. Волоцуева, 2004). Возможно, это свидетельствует о значительной биологической ценности семян амаранта печального. Аналитическими исследованиями подтвержден уникальный сбалансированный аминокислотный состав белков в семенах амаранта,

Таблица 3 - Аминокислотным состав пяти сортов семян амаранта нечалыюго (п = 5, р < 0,05)

Аминокислота Воронежский Кинельский Крепыш Янтарь . Кизлярец

мг/г % мг/г % мг/г % мг/г % мг/г %

Аїр Аспаратиновая кислота 1,37 8,54 1,35 8,46 1,71 7,99 1,49 8,57 1,21 9,43

Пг Треонин* 0,62 3,87 0,63 3,95 0,71 3,32 0,58 3,36 0,40 3,12

Со* Серии п ПО 6 11 0,93 с 83 1,33 6 22 1 П1 "І" П Ті V/, 1 с

01и Глутаминовая кислота 2,51 15,66 2,91 18,24 3,95 18,47 3,08 17,71 2,14 16,67

Рго Пролин 0,58 3,62 0,53 3,32 1,22 5,70 0,84 4,83 0,35 2,73

01у Глицин 1,29 8,05 1,25 7,87 1,60 7,48 1,38 7,93 1,09 8,49

А1а Алании 0,58 3,62 0,68 4,26 0,88 4,11 0,72 4,14 0,57 4,43

С\'Б Цистеин 0,36 2,25 0,26 1,63 0,47 2,21 0,31 1,76 0,20 1,55

Кд/ Валии * 0,82 5,12 0,72 4,51 0,90 4,21 0,76 4,37 0,60 4,67

Мег Метионин* 0,36 2,24 0,39 2,45 0,49 2,29 0,40 2,30 0,24 1,87

Не Изолейцин* 0,55 3,43 0,61 3,82 0,76 3,55 0,65 3,74 0,52 4,05

Ьеи Лейцин* 1,02 6,36 0,97 6,08 1,24 5,80 1,06 6,10 0,81 6,31

Туг Тирозин 0,53 3,31 0,50 3,12 0,68 3,18 0,55 3,16 0,42 3,27

Рке Фенилаланин * 0,74 4,62 0,70 4,39 0,88 4,11 0,77 4,43 0,61 4,75

НІБ Гистидин 0,55 3,43 0,51 3,20 0,67 3,13 0,58 3,34 0,44 3,43

/,_ул' Лизин* 1,18 7,36 1,08 6,77 1,33 6,22 1,11 6,38 0,91 7,09

Аг§ Аргинин 1,99 12,41 1,93 12,10 2,57 12,01 2,08 11,96 1,60 12,46

Сумма кислот 16,03 100 15,95 100 21,39 100 17,39 100 12,84 100

в т. ч. заменимых 10,74 67 10,85 68,03 15,08 70,5 12,06 69,32 8,75 68,14

незаменимых 5.29 33 5.10 31.97 6.31 29.5 5.33 30.68 4.09 31.86

который имеет наибольшее совпадение с теоретически рассчитанным идеаль-

Рисунок 1 - Хромагограмма аминокислот семян амаранта печального (сорт Воронежский)

Липофильная фракция. При анализе методом ГХ/МС этанольного извлечения семян сорта Воронежский обнаружено 31, а в шроте - 30 соединений липофильной природы (табл. 4 и 5).

Таблица 4 - Жирнокислотный состав этанольного извлечения семян сорта _____Воронежский до и мосле экстракции жирного масла__

Насыщенные жирные кислоты Содержание,%* Насыщенные жирные кислоты Содержапие,%*

семена шрот семена шрот

Капроновая (6:0) 0,40 0,10 Лигноцериповая (24:0) не оби. 0,37

Каприловая (8:0) 0,80 0,18 Церотиновая (26:0) не обн. 0,05

Пеларгоновая (9:0) 0,32 0,08 Всего: 29,78 55,83

Каприновая (10:0) 0,74 0,13 Ненасыщенные жирные кислої ы

Лауриновая (12:0) не обн. 0,27 Пал ьм итол си і ю вая( 16:1 ш 7) 1,47 1,45

Пентадекановая( 15:0) 3,53 3,21 Олеиновая (18:1 ю9) 19,09 2,00

Пальмитиновая (16:0) 9,57 0,89 Гадолеинопая (20;1ш11) 0,24 13,05

Маргариновая (17:0) 7,28 22,04 Эруковая (22: к со 13) 0,24 9,92

Стеариновая (18:0) 6,49 19,05 Нервоновая (24: і со9) не обн. 0,27

Нонадекановая (19:0) 0,24 2,00 Линолевая (18:2о)6^ 26,98 13,51

Арахиновая (20:0) 0,27 7,15 Докозадиеновая (22;2со6) і 0,08 0,10

Генэйкозановая (21:0) 0,14 0,26 Линоленовая (18:ЗсоЗ ) 22,12 3,87

Бегеновая (22:0) не обн 0,05 Всего: 70,22 44,17

Примечание: * - содержание компонента относительно общей суммы всех идентифицированных жирных кислот

Из данных, приведенных в таблице 4, следует, что в семенах до экстракции жирного масла идентифицировано 18 жирных кислот, доля которых равнялась более 75 % ог общей суммы, после неё - 23 (52%). Содержание ненасыщенных жирных кислот в семенах в 2 раза больше, чем насыщенных. В шроте увеличилось содержание насыщенных жирных кислот (почти на 87 %), в основном за счет маргариновой и стеариновой кислот. Кроме того, в нём идентифицировано еще 4 насыщенные жирные кислоты: лауриновая, бегеновая, лигноцериновая, церотиновая.

Из ГХ/МС-анализа липофилъных соединений видно, что среди них больше всего содержалось сквалена (табл. 5, рис. 2). Кроме того, в значительных количествах обнаружен витамин Е. Причем их содержание в семенах до экстракции более значимо. После экстракции в шроте количество сквалена уменьшилось почти в 3, а а-токоферола - в 25 раз. Весьма разнообразен набор стероидных соединений семян (табл. 5), среди которых доминировал ситостерин, который, как известно, вызывает понижение холестерина плазмы и ингибирует адсорбцию холестерина. В семенах и шроге отмечено наличие глицерина и его сложных эфиров (табл. 5) с органическими (пальмитиновая, стеариновая, линолевая, линоленовая) и неорганическими (фосфорная) кислотами. Доля каждого из них в значительной мере увеличилась в шроге (глицерина - более чем в 50 раз).

!*.<>?! алозооэ-воооооэ «¿ооооо воооооо

: 7500000: ПХОСОО; О&СООООI аососоо; ЬбСОСОО)

ьососоэ-ч&оосоо; «оооооо заооооо зооссоо^ з*>осооо-.

I

«ЬОООО<>! 1000000^ ьсоооо|

■даю. «хч»- ----------- .. -т |. м :м г: ?, ь * я = з г ?

■нмо- ИХ)«1 и .»(КИК НХ*1-1). И -—17 ,, йг. я й ;

I

-г

П!

I ;

-у ...).......к ' < }■■ К А

И «О 11 СЧ> м'»о I' во Ч (« >300 »?■;> ито • 2 ЭО '3 60 ' Э СО 13 >Я>

Рисунок 2 - Масс-спектр сквалена и участок хроматограммы этанольного извлечения шрота амаранта -

Таблица 5 - Содержание отдельных линофильных веществ этанолыюго извлечения семян сорта Воронежский до и после экстракции

Вещество Содержание, %*

семена шрот

Глицерин 0,85 45,17

Глицеролфосфат 1,18 21,20

Эфир пальмитиновой кислоты с глицерином 0,45 2,06

Эфир стеариновой кислоты с глицерином 0,09 0,75

Эфир линолевой кислоты с глицерином 0,12 5,36

Эфир линоленовой кислоты с глицерином 0,05 не обн.

Стигмастерин 2,06 не обн.

Ситостерин 22,57 не обн.

Фукостерин 0,32 не обн.

Стигмастенон 0,01 , не обн.

Фриделанон 0,76 не обн.

Сквален 67,55 25,39

а -Токоферол 3,99 0,16

100 •100

Примечание: * - содержание компонента относительно общей суммы идентифицированных лииофильных соединений

Следовательно, при получении жирного масла гексаном с пищевым нефрасом большая часть жирных кислот, особенно эссенциапьных и а-токоферолов, экстрагировалась в жирное масло. Стсрины и сапонин фриделанон извлекались полностью.

Фенольные соединения. Наличие фенольных соединений в семенах амаранта печального обнаруживали качественными реакциями и бумажной хроматографией (БХ). При этом отметили наличие кофейной и феруловой кислот.

Органические кислоты. При ТСХ-анализс в семенах амаранта печального выявлено 2 органические (янтарная и аскорбиновая), а методом ГХ/СМ в семенах и шроге - 6 органических кислот (молочной, бензойной, янтарной, яблочной, фумаровой, коричной) с преобладанием фумаровой.

АМАРАНТОВОЕ МАСЛО

Масло из семян амаранта получали экстракционным способом по запатентованной технологии (A.M. Макеев с соавторами, 1997), рачработанной в Воронежском государственном университете.

Содержание жирного масла и его физико-химические показатели в семе- ' нах 5 сортов амаранта печального определяли согласно^ ГФ X издания. • Наибольшая масличность (6%) отмечена- в сортах Воронежский, Крепыш и Кизлярец. Анализируемые жирные масла характеризовались сходными физико-химическими показателями (табл. 6). По величине йодного числа они отнесены к группе полувысыхающих жирных Масел: Установлен срок их годности но показателям кислотного, перекиснйго и йодного чисел 1,5 года. .......-

Таблица 6 - Физико-химические показатели жирного масла семян пяти сортов амаранта печального

Показатели Воронежский Кинельский Крепыш Янтарь Кизлярец

Плотность, р2", г/см3 0,936*0,06 0,930*0,08 0,928*0,07 0,924*0,04 0,935*0,06

Показатель преломления, П2°1 1,469±0,066 1,469*0,073 1,470*0,056 1,469*0,045 1,469*0,078

Кислотное число, мг КОН/г 3,01*0,12 3,55*0,14 3,36*0,09 3,64*0,18 3,28*0,15

Число омыления, мг КОН/г 185,4±2,02 189,58*1,29 186,51*3,65 188,19*1,21 189,86*1,02

Йодное число, 12/100 г 101,15*1,62 103,67*1,02 98,98*3,46 93,89*4,55 95,01*3,98

Перекисное число, ммоль/кг Ог 1,3*0,08 1,2*0,06 1,4*0,06 1,2*0,05 1,3*0,06

Цветное число, мг/1г 50±2 50*3 50*2 50*2 50*3

Массовая доля золы, % 0,27*0,02 0,29*0,02 0,29*0,01 0,28*0,03 0,27*0,02

Неомыляемые вешества, % 2,90*0,t8 2,50*0,12 2,80*0,14 2,70*0,09 2,50*0,14

Массовая доля влаги и летучих веществ, % 0,13±0,01 0,15*0,01 0,16*0,01 0,10*0,01 0,14*0,01

Содержание фосфора в пересч. на Р2О5, % 0,50*0,01 0,60*0,02 0,70*0,02 0,50*0,01 0,50*0,01*

Методом ВЭЖХ проанализирован состав жирных кислот и сквалена в маслах из семян различных сортов амаранта печального (табл. 7). При этом в них обнаружено 10 жирных кислот и сквален. Амарантовые масла из семян разных сортов различались содержанием жирных кислот. Причем, сорта Воронежский и Кинельский наиболее богаты также по содержанию суммы эссенци-альных кислот (линолевой и линоленовой) - до 45% и сквалена (до 7%).

При исследовании компонентного состава амарантового масла семян сорта Воронежский методом ГХ/МС идентифицировано 20 соединений (вероятность более 85 %), среди которых выявлено 12 жирных кислот, 3 этиловых эфира отдельных кислот, 2 спирта, пропиловый эфир пальмитиновой кислоты, дисахарид и ациклический тритерпен - сквален.

При анализе фосфолипидов и токоферолов методом ТСХ с последующей обработкой полученных зон проіраммой Sorbfil Videodensitometer в анализируемых жирных маслах определено содержание суммы токоферолов (в пределах 0,312 - 0,401%) и фосфолипидов (от 2,5 до 3,5%). При анализе последних идентифицированы фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, фосфагидовая кислота. Наиболее богато по содержанию суммы токоферолов и фосфолипидов, особенно фосфатидилхолина, жирное масло семян амаранта печального copra Воронежский.

Таблица 7 — Компонентный состав жирного масла семян анализируемых сортов амаранта печального, полученного экстракцией гексаном

Жирные кислоты Содержание, %

Воронежский Кинсльский Крепыш Янтарь Кизлярсц

Масличносгь, % 6,05*0,12 4,92*0,17 5,95*0,21 4,54*0,14 5,96*0,20

Насыщенные жирные кислоты

Лауриновая (12:0) 0,76*0,02 0,14*0,01 0,55*0,03 1,30*0,05 0,80*0,02

Миристиновая (14:0) 1,24±0,05 0,49*0,02 1,61±0,07 3,94*0,14 3,05*0,15

Пальмитиновая (16:0) 20,80*1,09 20,60*1,12 22,15*1,20 26,81*1,52 24,27*1,07

Стеариновая (18:0) 3,88*0,12 3,70*0,18 5,57*0,19 5,81*0,23 5,79*0,26

Арахиновая (20:0) 0,48*0,03 0,11±0,01 0,41*0,03 0,88*0,02 0,61*0,02

Сумма 27,16 25,04 30,29 38,74 34,52

Ненасыщенные жирные кислоты

Пальмитолеиновая (16:1) 0,78*0,01 0,35±0,01 0,79*0,03 2,25*0,12 1,53*0,04

Олеиновая (18:1) 27,37*1,47 31,11±1,17 33.86*1,02 31,69*1,92 32,50*1,02

Линолевая (18:2) 40,04*2,02 40,43*2,19 32.95*1,42 22,62*0,93 26,36*1,02

Линоленовая (18:3) 3,45*0,06 3,01 ±0,03 1,39*0,02 1,80*0,03 1,79*0,02

Эйкозеновая (20:1) 1,20±0,01 0,06±0,01 0,72*0,01 2,90*0,11 2,30*0,12

Сумма 72,84 74,96 69,71 61,26 64,48

Сквален 7,0*0,3 6,9*0,4 6,4*0,3 6,3*0,4 6,3*0,2

РАЗРАБОТКА НОРМАТИВНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ

В настоящее время семена амаранта печального (Amaranlhi hypochondriaci semina) в РФ не находят применения в официналыюй медицине, поэтому отсутствует нормативная документация на них, что явилось основой изучения их морфолого-анатомических особенностей. Из результатов микродиагностического изучения следует, что кожура семян большей частью однослойная со слегка утолщенными стенками клеток, хорошо развитый зародыш, расположенный кольцом по краю семени (диска) вокруг эндосперма. При проведении товароведческого анализа семян определены такие числовые показатели, как влажность (8,13-10,55 %), общая зола (3,78-4,48 %), зола, нерастворимая в 10% НС1 (0,08-0,1 %), а также примеси (другие части растения), содержание которых может быть в пределах — 0,52-0,95%, органической примеси (0,67-0,95 %), минеральной примеси (0,16-0,26 %), положенные в основу проекта ФСП «Амаранта семена».

Материалы фитохимического и товароведческого исследования нами использованы также при разработке ТУ 9719-003-77872064-2011 «Зерно амаранта», введенных 24.10.2011, ООО «Русская олива».

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА АМАРАНТОВОГО МАСЛА

При проведении изучения раздражающего, токсического, гипохолестери-немического и бактерицидного действия масла из семян амаранта в экспериментах использованы лабораторные животные (6 кроликов породы шиншилла,

140 белых беспородных крыс обоих полов, массой 200-230 г). При исследовании общетоксического и гипохолестеринемического действия исследуемое масло вводили через зонд внутрижелудочно в различных дозах. Интактные животные вместо масла получали в тех же дозах воду очищенную.

Раздражающее действие масла амаранта оценивали по тесту Драйза по изменению состояния слизистой оболочки глаза кролика. Выявлено, что оно практически не оказывало раздражающего дей ствия на конъюнктиву глаза кролика.

Острую токсичность масла амаранта изучали в дозах 10, 20, 30 мл/кг. Летальность не выявлена ни для одной из доз при наблюдении в течение 14 дней. Масло из семян амаранта при однократном введении в желудок крысам являлось достаточно безопасным и может быть отнесено к IV классу токсичности по классификации Сидорова К.К. (1977).

Хроническую токсичность масла амаранта определяли в дозах 10 мл/кг (2 мл/200 г) и 0,5 мл/кг (0,1 мл/200 г) при ежедневном внутрижелудочном введении па протяжении 3 месяцев. Проведенное в конце эксперимента патолого-анатомическое и морфометрическое изучение внутренних органов животных, исследование показателей общего анализа крови не выявило значимых специфических патологических изменений. При сравнении показателей биохимического анализа крови животных отмечены достоверно значимые отклонения от физиологической нормы только в отношении повышения АсАТ, АлАТ и Ш,Ф при введении амарантового масла в дозе в 2 раза превышающей терапевтическую (10,0 мл/кг). Так, в сыворотке крови существенно увеличилась активность АлАТ (на 70,8 %), активность АсАТ (на 15,8 %), а коэффициент де Ритиса при этом уменьшился (на 32,1 %). Аиивность ЩФ возросла в 2,16 раза. Вероятно, эти изменения следует расценивать как начальные проявления синдромов цитолиза и холестаза при данной дозе.

Гилохолестеринемическое действие масла из семян амаранта проводили в условиях дополнительной алиментарной холестериновой нагрузки в сравнении с подсолнечным и льняным маслами на 40 беспородных крысах-самцах, разделешгых на 4 группы (1 — контроль, 2, 3, 4 — экспериментальные). При этом выявлено, что, несмотря на дополнительную холестерин-ЖК нагрузку, в сыворотке крови животных опытных групп отсутствовало достоверное увеличение активности печеночных ферментов, что, возможно, указывает на наличие элементов гепатопротекторной активности исследуемого масла. Пероральное применение раствора 1% холестерина в подсолнечном масле в дозе 5 мл/кг привело к достоверному увеличению общего холестерина (ОХ) почти в 4 раза, тогда как на фоне применения раствора холестерина в амарантовом масле не отмечено достоверного повышения в содержании ОХ по сравнению со здоровыми животными, а на фоне введения 1% раствора холестерина в льняном масле зафиксировано его достоверное снижение по сравпсниго с интактом (табл. 8).

Содержание атерогенных дипопротеидов (ЛПНП) в контрольной группе увеличилось более чем в 5,5 раз, в то время как введение амарантового и льняного масла вызвало снижение ЛПНП на 46% и 66% соответственно по

сравнению со здоровыми животными. Изложенное позволяет судить о наличии гилохолестерннемического эффекта у амарантового масла.

Таблица 8 - Влияние 1% раствора холестерина в исследуемых маслах на основные показатели лимидиояо обмена животных

Показатели липлдного обмена Группа животных

Интактная группа 1 % раствор холестерина в масле

подсолнечном амарантовом льняном

Общий холестерин (мМ/л) 1,53+0,04 5,92+0,88* 1,69+0,07 1,32+0,05*

Триглицериды (мМ/л) 0,61+0,03 0,27+0,01* 0,79+0,04* 0,41±0,06*

ЛПВП (мМ/л) 0,44+0,01 1,09+0,05* 0,87+0,02* 0,84+0,07*

ЛПНП (мМ/л) 0,83+0,05 4,71 ±0,85* 0,45±0,05* 0,29±0,06*

Коэффициент Етерогенности 2,47+0,22 4,45+0,68 0,93±0,04* 0,56±0,03*

Примечание: * - р<0,05 - достоверность различий при сравнении между опытными и показателями интактной группы

Аитиоксидантную актишюсть оценивали в условиях проведения предыдущего опыта путем определения содержания азота оксида в сыворотке крови экспериментальных животных спектрофотометрическим методом. При этом отмечено его повышение после введения растворов холестерина в амарантовом или льняном маслах, что указывало на наличие данной активности.

Антибактериальная активность масла семян амаранта определялась в отношении грамположительных и грамотр л дательных микроорганизмов ш vitro. Выраженное противомикробное действия выявлено по отношению к музейным штаммам кишечной и синегнойной палочки.

С учётом выявленной фармакологической активности исследована пара-фармацевтическая модель мази с маслом амаранта, проведены ее реологические, биофармацевтические и предварительные фармакологические испытани-ия. При этом определены нормы качества данной модели в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» и установлен срок ее годности - 12 месяцев, при хранении при температуре +10 °С. На основе этих исследований предложен проект ФСП «Мазь с маслом амаранта».

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. С использованием современных методов впервые проведён сравнительный анализ отдельных веществ первичного (углеводен, аминокислот, ли-пидов), вторичного (стеринов, терпенов, фенольных соединений, органических кислот) обмена и элементного состава 5 сортов (Воронежский, Кинельский, Кизлярец, Крепыш, Янтарь) амаранта печального, выявлены их мшеродиагно-стические признаки и изучены некоторые фармакологические свойства амарантового масла.

2. Методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой в семенах 5 сортов амаранта печального определен 61 элемент, из них 7 макро-(А1, Са, К, Mg, Na, Р, Si), 54 микро- и ультрамикроэлемента (Ag, As, Au, В, Ва, Be, Bi, Вг, Ce, Cd, Со, Cs, Cr, Cu, Dy, Er, Eu, Fe, Ga, Gd, Ge, Hf, Hg, Но, I, La, Li, Lu, Mn, Mo, Nb, Nd. Ni, Pb, Pr, Rb, Sb, Se, Sm, Sn, Sr, Ta, Tb, Th, Ti, TI, Tm, U, V, W, Y, Yb, Zn, Zr), имеющих определенное значение в хемосистематическом, экологическом, токсикологическом и медицинском аспектах; содержание токсичных элементов (As, Cd, Hg, Pb) в них не превышало допустимый уровень в нормативной документации.

3. При количественном определении аминокислот семян 5 сортов амаранта печального с использованием аминокислотного анализатора обнаружено 18 аминокислот, среди них 7 заменимых (Ala, Gly, Ser, Cys, Asp, Glu, Pro), 3 условно незаменимых (Туг, His, Arg) и 7 незаменимых (Val, lie, Leu, Met, Phe, Thr, Lys), среди которых преобладали Glu (15,66 -18,47 %), Arg (11,96 - 12,46 %), Asp (7,99 - 9,43 %), Gly (7,48 - 8,49 %), Lys (6,22 - 7,36 %). Орнитин выявлен в следовых количествах.

4. Установлена масличность семян исследуемых сортов амаранта печального (Воронежский - 6,05 %, Кинельский - 4,92 %, Крепыш - 5,95 %, Янтарь - 4,5 %, Кизлярец - 5,9 %) и близость их физико-химических показателей, методами ВЭЖХ и ТСХ определен компонентный состав жирных масел, представленный насыщенными (25-28 %) и полиненасыщенными жирными кислотами (61-74 %), токоферолами (0,55-1,30 %), фосфолипидами (2,48-3,85 %) в зависимости от сорта и отмечено, что по содержанию эссенциальных жирных кислот доминировали сорта Воронежский и Кинельский, по содержанию токоферолов и фосфолипидов - сорт Янтарь.

5. В этанольном извлечении семян сорта Воронежский хромато-масс-спектрометрией идентифицировано 67 соединений, из которых 57 (жирных кислот 18, аминокислот 13, углеводов 6, глицерина и его сложных эфиров 6, витамин Е, сквален, стеринов 4, органических кислот 7, тритерпеновых сапонинов 1 - фриделанон) до и 60 (жирных кислот 23, аминокислот 14, углеводов 9, глицерина и его сложных эфиров 5, витамин Е, сквален, органических кислот 7) после экстракции жирного масла гексаном с пищевым нефрасом. Определено, что до экстракции в семенах в общей сумме наиболее значима доля (более 75 %) жирных кислот и сквалена (свыше 10 %), гораздо меньше углеводов (до 6 %) и стеринов (свыше 4 %), в незначительных количествах обнаружены органические кислоты (менее 1 %), глицерин и его сложные эфиры (более 0,3 %) и аминокислоты (в пределах 0,3 %) и отмечено, что содержание жирных кислот после экстракции уменьшилось в 1,5 раза, сквалена - в 2,5 раза, витамина Е - в 25 раз, стерины и фриделанон извлеклись полностью.

6. В результате фармакогностического изучения семян амаранта печального выявлены их основные микродиагностические признаки (кожура — большей частью однослойная со слегка утолщенными стенками клеток, хорошо развитый зародыш, расположенный кольцом по краю семени (диска) вокруг эндосперма), определены нормы качества семян амаранта печального и

составлен проект ФСП «Амаранта семена» и ТУ 9719-003-77872064-2011 «Зерно амаранта».

7. В эксперименте на животных изучено шперхолестеринемическое, антиоксидантное, бактерицидное действие гмарантового масла и установлено, что оно не обладало практически раздражающим действием и относится к безопасным соединениям (IV класс токсичности).

8. Исследована парафармацевтичсская модель «Мазь с маслом амаранта», которая обладала вязкопластичпостью, тиксотропностью. структурированностью и оказывала выраженный ранозаживляющий эффект, вероятно, обусловленный антиоксидантным и бактерицидным действием, определены нормы ее качества, положенные в основу проекта ФСП «Мазь с маслом амаранта».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Корейская, И.М. Изучение фосфолипидного состава отходов амарантового масла / И.М. Корейская, Е.Ф. Сафонова, A.M. Макеев и др. // Новые и нетрадиционные растения и перспектива их использования: мат-лы IV Меж-дун. симп. (20-24 июня 2001г., Пущино). - Москва, 2001. - С. 99-101.

2. Макеев, A.M. Амарантовое масло - уникальное природное лекарственное средство / A.M. Макеев, И.М. Корейская, A.A. Кунин, и др. // Растительные ресурсы для здоровья человека (возделыв.щие, переработка, маркетинг): мат-лы I Междуп. пауч.-практ. конф. 23-27 сентября 2002 г. — Москва, Сергиев Посад, 2002. - С. 255-266.

3. Корейская, И.М. Влияние различных доз амарантового масла на активность аминотрансфераз и щелочной фосфатазы в сыворотке крови крыс / И.М. Корейская, А.П. Салей, З.Д. Мухаммед // Физиология и психофизиология мотиваций: межрегиональный сборник научных работ, поев. 85-летию образования ВГУ. - Воронеж, 2003. - С. 117-119.

4. Корейская, И.М. Амарантовое масло снижает содержание общего холестерина в крови / И.М. Коренская, А.П. Салей, A.M. Макеев // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования: мат-лы Межрегиоп. науч.-мет. конференции «Фармобразование 2003» (21-23 апр. 2003). — Воронеж, 2003. -С. 178-180.

5. Близнецова, Г.Н.Изучение антиоксидантного действия амарантового и льняного масел в эксперименте / Г.Н. Близнецова, И.М. Коренская, А.Н. По-стыка // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования: мат-лы. 2-й Всеросс. науч.-мет. конф. «Фармобразование 2005» (20-22 апр. 2005). - Воронеж, 2005. - С. 300-301.

6. Коренская, И.М. Исследование противоожоговой активности амарантового масла в эксперименте / И.М. Коренская, Н.П. Ивановская, И.Е. Измалко-ва II Пути и формы совершенствования фармацевтического образования: ма-тер.2-й Всерос. науч.-мет. конференции «Фармобразование 2005» (20-22 апр. 2005). - Воронеж, 2005. - С. 346-347.

7. Корейская, И.М. Сравнительный фармакологический анализ влияния амарантового и льняного масел на динамику липидного обмена крыс в условиях холестернповой нагрузки / И.М. Коренская, В.Ю. Сулин, Е.Ф. Сафонова, А.Н. Постыка II Вестник Воронеж, гос. ун-та: серия химия, биология, фармация, 2006. - № 1. - С. 204-208.

8. Сафонова, Е.Ф. Изучение стабильности и сроков годности масла семян амаранта / Е.Ф. Сафонова, И.М. Коренская, А.И. Сливкин, О.В. Фролова // Вестник Воронеж, гос. ун-та: серия химия, биология, фармация, 2006. -№ 1. - С. 213-215.

9. Близнецова, Г.Н. Роль процессов свободнорадикального окисления в механизме гепатопротекторного действия масла из семян амаранта / Г.Н. Близнецова, М.И. Рецкий, И.М. Коренская и др. // Биомедиципа, 2006. - №2.-С. 105-112.

10. Коренская, И.М. Изучение элементного состава семян амаранта гибридного / И.М. Коренская, Н.П. Ивановская // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ: мат-лы. 3-й Всерос. науч.-мет. конференции ( 22-24 марта 2007). -Воронеж, 2007. - С. 175-176.

11. Коренская, И.М. Фармакогностический анализ семян амаранта гибридного / И.М. Коренскал, И.Е. Измалкова //' Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ: мат-лы 3-й Всерос. науч.-мет. конференции (22-24 марта 2007). — Воронеж, 2007. - С. 177-179.

12. Дзгоба, В.Ф. Бмофармацевтические аспекты разработки мази с маслом амаранта для лечения ожоговых инфицированных ран / В.Ф. Дзю-ба, Е.Ф. Сафонова, И.М. Коренская, И.А. Свешникова // Вестник Воронеж, гос. ун-та: серия химия, биология, фармации, 2007. - № 1. - С. 142-146.

13. Коренская, И.М. Биофармацевтическое исследования лекарственных форм с маслом амаранта / И.М. Коренская, В.Ф. Дзюба, Е.Ф. Сафонова П Мед.-фармац. конгресс и 14-я междун. фармац. выставка «Аптека 2007» (23-26 октября 2007). - Москва, 2007. - С. 128-130.

14. Коренская, И.М. Изучение антибактериальной активности амарантового масла / И.М. Коренская, И.Е. Измалкова // Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые науч. тенд. в медицине и фармации: мат-лы Междун. конф. (6-7 февраля 2008). - Воронеж, 2008. - С. 226-227.

15. Коренская, И.М. Изучение ранозаживляющего действия масла из семян амаранта / И.М. Коренская, Н.П. Ивановская // Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые науч. тенденции в медицине и фармации: мат-лы междун. конф. (6-7 февраля 2008). - Воронеж, 2008. - С. 223-225.

16. Коренская, И.М. Создание ректальных суппозиториев с маслом амаранта / И.М. Коренская, Ж.М. Козлова, И.А. Девяткина и др. // Вестник ВГУ: серия химия, биология, фармация, 2008. - № 1. — С. 145-150.

17. Коренская, И.М. Сравнительное изучение содержания белка и аминокислотного состава семян различных сортов амаранта гибридного / И.М. Коренская, Л.А. Мирошниченко, И.Е. Измалкова // Пути и формы совершенство-

вания фармацевтического образования. Поиск новых физиологически активных веществ: мат-лы 4-й Всерос. с междун. участием науч.-мет. конф. (20-22 апреля 2010). - Воронеж, 2010. - С. 209-212.

18. Золоедов, В.И. Амарантовое масло и диетотерапии сахарного диабета 2 типа / В.И. Золоедов, E.H. Офицеров, JI.A. Мирошниченко, И.М. Корейская // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Поиск новых физиологически активных веществ: мат-лы 4-й Всерос. с междун. участием науч.-мет. конф. (20-22 апреля 2010). - Воронеж, 2010. - С. 159-161.

19. Корейская, И.М. Анатомо-морфол гіги чес кое изучение семян амаранта печального / И.М. Корейская, H.H. Сапронова // Вестник Воронеж, гос. ун-та: серия химия, биология, фармация, 2010. - № 2. - С. 150-153.

20. Коренская, И.М. Исследование состава и физико-химических показателей жирного масла, полученного из различных сортов семян амаранта печального / И.М, Корейская, Н.С. Фурса, A.A. Назарова и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. — Штигорск: Пятигорская ГФА, 2011. - Вып. 66. - С. 119-121.

21. Корейская, И.М. Жирнокислотиый состав масла, полученного из различных сортов семян амаранта печального / И.М. Керенская, Н.С. Фурса, И.Е. Измалкова, и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2011. - Вып. 66.-С. 118-119.

22. Корейская, И.М. Сравнительная характеристика жирнокислотного состава и отдельных биологически активных веществ жирного масла различных семян амаранта / И.М. Коренская, В.Д. Ефремова // Актуальные вопросы медицинской науки: сб. науч. тр. — Ярославль, 2011. — С. 310-311.

23. Коренская, И.М. Элементный состав и липофильные вещества шрота семян сорта Воронежский амаранта угрюмого / И.М. Коренская, В.Г. Корни-евская, Н.С. Фурса // "Науково-технічний проірес і оптимізація технологічних процесів створення лікарських препаратів: мат-ли 4-ої науково-технічної Конф. з міжнар. участю (29-30 вересня 2011 року). - Тернопіль: ТДМУ "Укр-медкпига", 2011. - С. 42.

24. Коренская, И.М. Изучение аминокислотного и углеводного состава семян сорта Воронежский амаранта печального, выращиваемого в Воронежской области / И.М. Коренская, Н.С. Фурса, JI.A. Мирошниченко // Вестник ВГУ: серия химия, биология, фармация, 2011. - № 2 — С. 192198.

25. Коренская, И.М. Хрюмато-масс-снектрометрическое изучение жлірного масла из семян растения Amaranthus hypochondriacus LJ И.М. Коренская, U.C. Фурса, J1.A. Мирошниченк о // Фа рмации, 2011. - № 8. — С. 16-18.

26. Джурко, Ю.А. Физико-химическое изучение липофильных веществ семян амаранта печального сорта Воронежский до и после экстракции гексаном / Ю.А. Джурко, A.A. Парфенов, И.М. Коренская и др. // Materiâly VIII mezinârodni vëdesko-praktikâ konference «Modemi vymozenosti vëdy - 2012» . -Praha, 2012.-S. 3-6.

-2227. Парфенов, А.А. Изучение аминокислотного состава семян амаранта печального сорта Воронежский до и после экстракции гексаном / А.А. Парфенов, Ю.А. Джурко, И.М. Корейская и др. // Материали за 8-а международна научна практична конференция: «Бъдещите изследвания». - София, 2012.-Т. 28.-С. 49-50.

28. Парфенов, А.А. ГХ-МС-анализ жирнокислотного состава шрога семян сорта Воронежский амаранта красноколосого / А.А. Парфенов, Ю.А. Джурко, И.М. Корейская, A.JI. Исаханов, Н.С. Фурса // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. — Пятигорск: Пятигорская ГФА. - 2012. - Вып. 67. - С. 264-265.

29. Корейская, И.М. Изучение противоожогового действия мази с маслом амаранта / И.М. Корейская, В.Ф. Дзюба, Н.С. Фурса, Н.П. Ивановская // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. — Пятигорск: Пятигорская ГФА. — 2012. - Вып. 67. - С. 337-338.

30. Джурко, Ю.А. Хромато-масс-спектрометрический анализ жирно-кислотного состава шрота семян амаранта печального сорта Воронежский / Ю.А. Джурко, А.А. Парфенов, И.М. Корейская // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - 2012. - № 9 - С. 167-168.

31. Парфенов, А.А. Исследование углеводного состава семян двух сортов амаранта печального // А.А. Парфенов, Ю.А. Джурко, И.М. Корейская // Вестник Пермской государственной фармац. академии. — 2012. - № 9 -С. 200-201.

32. Корейская, И.М. Изучение веществ первичного и вторичного обмена семян сорта Воронежский амаранта печального / И.М. Корейская, С.Н. Соленникова, Л.И. Бородин, Н.С. Фурса // Materialy VIII Miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji «Strategiczne pytania swiatowej nauki - 2012» . - Praha, 2012. - V. 25. - S. 6-8.

33. Фурса, Н.С. Масс-спектрометрическое определение химических элементов семян сорта Воронежский амаранта печального до и после экстракции гексаном / Н.С. Фурса, Д.С. Круглое, И.М. Корейская, В.Г. Корни-евская В.Г. // Materialy VIII mezinârodni vëdesko-praktikâ konference «Vëda a technologie: krok do budoiicnosti - 2012» . - Praha, 2012. - S. 6-9.

34. Фурса, Н.С. Масс-спектрометрическое определение химических элементов семян сортов Янтарь и Крепыш амаранта печального / Н:С. Фурса, Д.С. Круглов, И.М. Корейская и др. // Efektivni nactrole modernich ved — 2012 : Materyâly VIII mezinârodiri vëdesko-praktikâ conférence. Dil 28. Biolog-iche vedy. Structurai Botanica a Biochemie Rostein. - Praha : Publishing House «Eduction and Science», 2012. - S.2-4. '

35. Корейская, И.М. Выявлепие гипохолестеринемического эффекта амарантового масла / И.М. Корейская, С.Н. Соленникова, Ю.И. Корниев-ский, Н.С. Фурса // Efektivni nactrole modernich ved - 2012 : Materyâly VIII mezinârodni vëdesko-praktikâ conférence. Dil 28. Biologiche vedy. Structurai Botanica a Biochemie Rostein. — Praha : Publishing House «Eduction and Sci- • ence», 2012. - S. 65-67.

36. Рахмалиева, Б.М. Масс-спектрометрическое определение химических элементов семян сорта Янтарь амаранта печального / Б.М. Рахмалиева, И.М. Корейская, О.В. Корчагина // Актуальные вопросы медицинской науки: сб. науч. тр. ст-ов и мол. уч-х Всерос. научно-практ. конф. с междун. участием, поев. 70-летию проф. A.A. Чумакова. - Ярославль : ЯГМА 2012 -С. 337.

37. Фурса, Н. С. Масс-спектрометрическое определение химических элементов сортов Кинельский и Кизлярец амаранта печального / Н. С. Фурса, Д. С. Круглов, И. М. Корейская и др. // Vedecky pokrok na prelomu tysyachalety - 2012: Materialy VIII Mezinarodni vedecko-practicka conference. 27 kvetna - 05 cervna 2012 roku. Dil. 24. Lekarstvi Biologicke vedy. - Praha: Publishing House "Education and Science" s. r. o„ 2012 - S. 54-56.

38. Корейская, И. M. Изучение компонентного состава жирного масла семян 5 сортов амаранта печального / И. М. Корейская, С. Н. Соленникова, Т. А. Горохова и др. // Там же. - С. 57-59.

39. Парфёнов, А. А. Хромато-масс-спектрометрический анализ стеринов и других липофильных соединений жирного масла амаранта печального сорта Воронежский / А. А. Парфёнов, Ю. А. Джурко, И. М. Корейская и др. // Найновите постижения на европейската наука - 2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 17-25 юни 2012 г. // Т. 16. Биологи. Химия и химически технологии. - София: «Бял ГРАД-БГ» ООД, 2012. - С. 3-4.

40. Корейская, И. М. Сравнительная физико-химическая характеристика амарантового и других масел, применяемых в медицине / И. М. Корейская, Т. А. Горохова, Ю. Н. Корниевский, Н. С. Фурса И Там же. - С. 4-6.

41. Круглов, Д. С. Шрот амаранта - источник жизненно важных элементов / Д. С. Круглов, И. М. Корейская, Т. А. Горохова и др. // Aktualni vymozenosti vedy - 2012: Materialy VIII Mexinorodni vedecko-practicka konference. 27.06.2012 -05.07.2012 Dil. 17. Biologicke vedy Chemie a chemicka technologiei. - Praha: Publishing House "Education and Science" s. r. o., 2012 - S. 5-6.

42. Корейская, И. M. Амарантовое масло как противоожоговое средство / И. М. Корейская, Т. А. Горохова, С. Н. Соленникова и др. // Там же. - С. 3-4.

Коренская Ирина Михайловна (Россия)

Фармакогностическое изучение семян различных сортов амаранта печального (Amaranthus hypochondriacus L.)

Работа посвящена сравнительному фитохимическому исследованию семян 5 сортов (Воронежский, Кизлярец, Кинельский, Крепыш, Янтарь) амаранта печального с использованием масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой, ВЭЖХ, капиллярного электрофореза, ГХ/МС, спектрофотометрии и других современных методов, а также проведению физико-химической характеристики амарантового масла, разработке нормативной документации на семена и на мазь с маслом амаранта. Изучен элементный, углеводный, аминокислотный, липидный и фенольный состав семян упомянутых сортов, выявлены их микродиагностические признаки, определены показатели качества семян и жирного масла, изучены его некоторые фармакологические свойства, разработана и исследована модель мази с маслом амаранта.

Korenskaya Irina (Russia)

The pharmacognostic study of several Amaranthus hypochondriacus L. cultivars seeds

The work is devoted to the comparative phytochemical research of 5 Amaranthus hypochondriacus cultivars (Voronezhsky, Kizlyarets, Kinelsky, Krepysh, Yantar) seeds with the use of mass-spectrometry with inductively bound plasma, HPLC, capillary electrophoresis, gas chromatography, spectrophotometry and other up-to-date methods, as well as to the physical and chemical characterization of Amaranthus oil and to working out of the normative documents for seeds and for the ointment with Amaranthus oil. Element, carbohydrate, amino acid, lipid and phenolic composition of the mentioned cultivars were studied, their microdiagnostic features were revealed, the quality criteria for seeds and fatty oil were determined, several pharmacological effects of the oil were studied and the model of ointment with Amaranthus oil developed and investigated.

Подписано в печать 13.12.12. Формат 60*84 1/16. Усл. печ. л. 1,4. Тираж 100 экз. Заказ 1185.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии Издательско-полиграфического центра Воронежского государственного университета. 394000, Воронеж, ул. Пушкинская, 3

Актуальность работы

Поиск растительных источников, содержащих различные биологически активные вещества и имеющих надежную сырьевую базу, является социально и экономически значимым направлением фармации.

Исследования видов рода Щирица (Амарант) свидетельствуют о том, что в них содержится уникальный сбалансированный комплекс БАВ (углеводы, белки, жирные кислоты, фосфолипиды, токоферолы). Отдельные представители рода достаточно изучены для нужд пищевой технологии (E.H. Офицеров, В.И. Костин, 1999; И.М. Магомедов, 2002.; Е.Г. Иоргачева, 2002;), в области селекции и интродукции (И.А. Чернов, 1992; П.Ф. Кононков, В. К. Гинс, М.С. Гинс, 2001; Т.И. Гопций, 2001; О.И. Криворучеико, A.B. Железнов, Н.В. Бурмакина, 2009), биологии (Л.А. Мирошниченко, 2008). Вместе с тем они не являлись объектом углублённого фитохимического исследования для выявления возможностей их медицинского использования.

Семена различных сортов (Воронежский, Кизлярец, Кинельский, Крепыш, Янтарь) амаранта печального (А. hypochondriacus L.), интенсивно культивируемых в России, в том числе в Центральном федеральном округе, заслуживают внимания в качестве потенциального лекарственного растительного сырья, богатого природными БАВ, в частности, самым высококачественным растительным белком. Вместе с тем до настоящего времени в достаточной мере не изучено их качественное и количественное содержание, не исследован элементный состав, не определены физико-химические характеристики сырья и продуктов его переработки, в том числе жирного масла, реализуемого в качестве пищевой добавки. В связи с чем фармакогностическое изучение семян пяти сортов амаранта печального представляется весьма актуальным.

Цель и задачи исследования

Целью работы явился сравнительный анализ природных соединений 5 сортов амаранта печального с использованием современных методов, разработка нормативной документации на них и на мазь с амарантовым маслом.

Для достижения поставленной цели следовало решить следующие задачи:

- провести изучение веществ первичного (углеводы, аминокислоты, жирные кислоты, витамины) и вторичного обмена (терпены, стерины, фенольные соединения, органические кислоты) 5 сортов амаранта печального;

- сравнить элементный состав анализируемых образцов до и после экстракции жирного масла и оценить их экологическую чистоту;

- определить масличность и компонентный состав жирного масла семян различных сортов амаранта и установить показатели его качества;

- выявить характерные морфолого-анатомические признаки и провести определение товароведческих показателей семян пяти сортов;

- предпринять изучение ряда фармакологических свойств масла амаранта;

- изготовить парафармацевтическую модель мази с амарантовым маслом для наружного применения и оценить ее технологические и фармакологические свойства;

- составить проекты ФСП на семена и мазь с маслом амаранта.

Научная новизна. С использованием современных физико-химических методов исследования (хромато-масс-спектрометрия (ГХ/МС), масс-спектрометрия (МС) с индуктивно связанной плазмой, капиллярный электрофорез, УФ-спектрофотометрия, ВЭЖХ и др.) впервые проведено сравнительное фитохимическое изучение семян амаранта печального. При этом в ходе их стандартизации выявлены микродиагностические признаки и дано описание внешних признаков. Наряду с этим показана перспективность использования семян амаранта как важного природного комплекса различных

БАВ (углеводов, белков, отличительным признаком которых является I значительное количество лизина, жирного масла с высоким содержанием эссенциальных жирных линолевой и линоленовой кислот, сквалена, фосфолипидов (фосфатидилхолииа), стеринов, токоферолов и органических кислот).

Методом MC впервые определен 61 элемент в семенах 5 сортов амаранта печального, которые имеют определенное значение в экологическом, токсикологическом, медицинском и хемотаксономическом аспектах.

С использованием метода ГХ/МС впервые проанализирован состав отанольного извлечения из семян и шрота амаранта печального, в результате которого идентифицировано 67 соединений, из которых 57 до и 60 после экстракции жирного масла гексаном с пищевым нефрасом.

Методом ВЭЖХ определено содержание жирных кислот, фосфолипидов и сквалена в жирных маслах, полученных из анализируемого сырья.

Для качественного и количественного определения токоферолов и фосфолипидов в жирном масле семян амаранта адаптирован метод ТСХ.

Проведено изучение раздражающего действия, острой и хронической токсичности, исследовано гипохолестеринемическое действие и бактерицидная активность жирного масла из семян амаранта печального.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований положены в основу проектов ФСП «Амаранта семена» и «Мазь с маслом амаранта». Данные по товароведческому анализу семян амаранта печального использованы при разработке ТУ 9719-003-77872064-2011 «Зерно амаранта», введенных 24.10.2011, ООО «Русская олива».

Методики качественного и количественного анализа отдельных групп БАВ семян различных сортов амаранта внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической химии и клинической фармации ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. H.H. Бурденко» (акт о внедрении от 19.03.12 г.), кафедры фармацевтической химии и фармацевтической технологии ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный университет» (акт о внедрении от 04.05.12 г.), кафедры фармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» (акт о внедрении от 23.01.12 г.), в производственный процесс ООО «Русская Олива» (акт о внедрении от 20.05.12 г.).

Впервые на доклиническом этапе исследований обоснована целесообразность использования амарантового масла в качестве гипохолестеринемического и противоожогового средства, что позволяет в известной мере реализовать возможность применения семян амаранта печального в медицине.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Данные сравнительного изучения веществ первичного и вторичного обмена пяти сортов амаранта печального.

2. Итоги определения элементного состава и оценки экологической чистоты аЕіализируемого сырья до и после экстракции жирного масла.

3. Результаты изучения компонентного состава экстракционного амарантового масла и обоснования возможностей его применения в медицине.

4. Характеристика морфолого-анатомических признаков семян амаранта печального и их товароведческих показателей.

5. Особенности фармакологического действия амарантового масла.

6. Результаты исследования фармацевтической модели мази с маслом амаранта.

7. Разработанные нормативные документы - проекты ФСП «Амаранта семена» и «Мазь с маслом амаранта».

Апробация и публикация результатов исследования Основные результаты исследований доложены и обобщены на следующих межрегиональных и международных научно-методических конференциях: «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования» (ВГУ, Воронеж 2003, 2005, 2007, 2010 гг.), «Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации» (ВГУ, Воронеж 2008, 2011), «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (ПГФА, Пятигорск 2010, 2011, 2012), «Науково-технічний прогрес і оптимізація технологічних процесів створення лікарських препаратів» (ТДМУ, Тернопіль 2011); «Мосіеті уутогепози уесіу» (РгаЬа, 2012); «Бъдещите изследвания» (София, 2012); «Еигоре]8ка пайка XXI ро\уіека - 2012» (РггетуБІ)» (2012), на научных конференциях студентов и молодых учёных ГБОУ ВПО ЯГМА (2010 - 2012), на ежегодных научных сессиях ФГБОУ ВПО ВГУ в период 2005-2012 гг.

Связь задам исследований с проблемным планом. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГБОУ ВПО ВГУ (код по ГРНТИ: 31.23). Тема диссертационной работы утверждена на заседании Ученого совета фармацевтического факультета ВГУ (протокол № 09 от 27.10.05 г.).

Личный вклад автора. Автор непосредственно участвовал в проведении научных экспериментов, обработке и интерпретации экспериментальных данных по изучению элементного, углеводного, аминокислотного, липндного и фенольного состава семян 5 сортов амаранта печального, в проведении сравнительной характеристики их микродиагностических признаков, в исследовании отдельных фармакологических свойств амарантового масла, в апробации результатов исследования, в составлении 2 проектов ФСП и подготовке публикаций по выполненной работе.

Публикации материалов исследования. По теме диссертации опубликованы 42 научные работы, из них 10 в журналах, в том числе 8 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 175 страницах текста компьютерной верстки и состоит из «Введения», «Обзора литературы» (1 глава), «Экспериментальной части» (5 глав), выводов, списка литературы, включающего 244 источника, в том числе 46 на иностранных языках, и приложений. Диссертация содержит 51 таблицу, 31 рисунок, в том числе 15 фотографий.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы. В первой главе обобщены данные литературы по ботанической характеристике и химическому составу видов рода щирица (/tinaranthus) семейства амарантовые (Amaranthaceae), их применению в медицине, а также дана харак1еристика, классификация, физико-химические свойства и методы анализа жирных масел. Вторая глава посвящена материалам и методам исследования. Третья глава включает результаты определения элементного состава и исследования веществ первичного и вторичного обмена 5 сортов семян амаранта печального. В четвертой главе отражены результаты изучения амарантового масла и характеристика его качества. Пятая глава содержит данные по стандартизации семян амаранта печального. В шестой главе приведены результаты по исследованию раздражающего действия, определению острой и хронической токсичности, по изучению противомикробного и гипохолестеринемического действия амарантового масла. Приложения включают отдельные масс-спектры идентифицированных веществ, проекты фармакопейных статей, приведены результаты по исследованию фармацевтической модели мази с маслом амаранта, а также материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. С использованием современных методов впервые проведён сравнительный анализ отдельных веществ первичного (углеводов, аминокислот, липидов), вторичного (стеринов, терпенов, фенольных соединений, органических кислот) обмена и элементного состава 5 сортов (Воронежский, Кинельский, Кизлярец, Крепыш, Янтарь) амаранта печального, выявлены их микродиагностические признаки и изучены некоторые фармакологические свойства амарантового масла.

2. Методом масс-спектромстрии с индуктивно связанной плазмой в семенах 5 сортов амаранта печального определен 61 элемент, из них 7 макро- (Al, Са, К, Mg, Na, Р, Si), 54 микро- и ультрамикроэлемента (Ag, As, Au, В, Ва, Be, Bi, Br, Ce, Cd, Co, Cs, Cr, Cu, Dy, Er, Eu, Fe, Ga, Gd, Ge, Hf, Hg, Ho, I, La, Li, Lu, Mn, Mo, Nb, Nd. Ni, Pb, Pr, Rb, Sb, Se, Sm, Sn, Sr, Ta, Tb, Th, Ti, TI, Tm, U, V, W, Y, Yb, Zn, Zr), имеющих определенное значение в хемосистематическом, экологическом, токсикологическом и медицинском аспектах; содержание токсичных элементов (As, Cd, Hg, Pb) в них не превышало допустимый уровень нормативной документации.

3. При количественном определении аминокислот семян 5 сортов амаранта печального с использованием аминокислотного анализатора обнаружено 18 аминокислот, среди них 7 заменимых (Ala, Gly, Ser, Cys, Asp, Glu, Pro), 3 условно незаменимых (Туг, His, Arg) и 7 незаменимых (Val, lie, Leu, Met, Phe, Thr, Lys), среди которых преобладали Glu (15,66 -18,47 %), Arg (11,96 - 12,46 %), Asp (7,99 - 9,43 %), Gly (7,48 - 8,49 %), Lys (6,22 - 7,36 %). Орнитин выявлен в следовых количествах.

4. Установлена масличносгь семян исследуемых сортов амаранта печального (Воронежский - 6,05 %, Кинельский - 4,92 %, Крепыш - 5,95 %, Янтарь - 4,5 %, Кизлярец - 5,9 %) и близость их физико-химических показателей, методами ВЭЖХ и ТСХ определен компонентный состав жирных масел, представленный насыщенными (25-28 %) и полиненасыщенпыми жирными кислотами (61-74 %), токоферолами (0,55-1,30 %), фосфолипидами (2,48-3,85 %) в зависимости от сорта и отмечено, что по содержанию эссенциальных жирных кислот доминировали сорта Воронежский и Кинельский, по содержанию токоферолов и фосфолипидов - сорт Янтарь.

5. В этанольном извлечении семян сорта Воронежский хромато-масс-спекгрометрией идентифицировано 67 соединений, из которых 57 (жирных кислот 18, аминокислот 13, углеводов 6, глицерина и его сложных эфиров 6, витамин Е, сквален, стеринов 4, органических кислот 7, тритерпеновых сапонинов 1 - фриделанон) до и 60 (жирных кислот 23, аминокислот 14, углеводов 9, глицерина и его сложных эфиров 5, витамин Е, сквален, органических кислот 7) после экстракции жирного масла гексаном с пищевым нефрасом. Определено, что до экстракции в семенах в общей сумме наиболее значима доля (более 75 %) жирных кислот и сквалена (свыше 10 %), гораздо меньше углеводов (до 6 %) и стеринов (свыше 4 %), в незначительных количествах обнаружены органические кислоты (менее 1 %), глицерин и его сложные эфиры (более 0,3 %) и аминокислоты (в пределах 0,3 %) и отмечено, что содержание жирных кислот после экстракции уменьшилось в 1,5 раза, сквалена - в 2,5 раза, витамина Е - в 25 раз, стерины и фриделанон извлеклись полностью. I

6. В результате фармакогностического изучения семян амаранта печального выявлены их основные микродиагностические признаки (кожура -большей частью однослойная со слегка утолщенными стенками клеток, хорошо развитый зародыш, расположенный кольцом по краю семени (диска) вокруг эндосперма), определены нормы качества семян амаранта печального и составлен проект ФСП «Амаранта семена» и ТУ 9719-003-77872064-2011 «Зерно амаранта».

7. В эксперименте на животных изучено гиперхолестеринемическое, антиоксидантное, бактерицидное действие амарантового масла; установлено, что оно не обладало практически раздражающим действием и относится к безопасным соединениям (IV класс токсичнорти).

8. Исследована парафармацевтическая модель «Мазь с маслом амаранта», которая обладала вязкопластичностыо, тиксотропностыо. структурированностью и оказывала выраженный рапозаживляющий эффект, вероятно, обусловленный антиоксидантным и бактерицидным действием масла, определены нормы ее качества, положенные в основу проекта ФСП «Мазь с маслом амаранта»