Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови и костном мозге при патологических состояниях, сопровождающихся изменениями гемопоэза

¡- ^ ОД На правах рукописи

1 '» НОЯ т7

ВОЛКОВА Ольга Викторовна

ЭНДОГЕННОЕ АУТОРОЗЕТКООБРАЗОВАНИЕ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И КОСТНОМ

МОЗГЕ ПРИ ПАТОАОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ ИЗМЕНЕНИЯМИ ГЕМОПОЭЗА

14.00.16 — Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 1997 г.

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии с курсом клинической патологической физиологии Тверской государственной медицинской академии (ТГМА)

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор медицинских наук, профессор Бельненко Д.И.

доктор медицинских наук, профессор Александров В.Н. доктор медицинских наук, профессор Петрищев H.H.

Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузнологии

Защита диссертации состоится " ОеКоЗрЯ 1997 г. в час на заседании диссертационного совета Д.074.16.02 при Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования Минздрава РФ по адресу: 193015, г. Санкт-Петербург, ул. Салтыкова-Щедрина, 41.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования

Автореферат разослан 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

А.Н.Тюкавин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актиальность проблемы. Известно, что межклеточные взаимодействия играют решающую роль в развитии, строении, функции тканевых и органных систем. Морфогенез и патогенез многих общепатологических процессов и болезней может быть раскрыт с принципиально новых позиций — в аспекте межклеточных взаимодействий (М.А.Пальцев, 1995). Поэтому изучение проблемы межклеточных взаимодействий контактного типа в системе крови является особенно актуальным.

Клеточные ассоциации, образуемые in vitro лейкоцитами, выделенными из периферической крови, при их инкубации с ауто- и ксеногенными, а также сенсибилизированными эритроцитами, т.е. розетки были описаны в 1964 г. (Nota et al.). Этот феномен широко используется для идентификации клеток иммунной системы, их субпопуляций и определения их функционального состояния (Г.Фри мель, 1987). Намного позже в литературе появились сообщения об розеткообразовании in vivo. В.Т.Василенко (1981) описывает появ ление розеткообразных структур в селезенке и лимфатических узлах с гетеротопически пересаженным сердцем. Автор сообщает, о сход ных морфологических изменениях при ауто- и аллотранснлантации почек, при инфекционных и аллергических болезнях, то есть при состояниях организма сопровождающихся активацией органов иммуногенеза. В нашей лаборатории феномен эндогенного ауторозет-кообразования в периферической крови был обнаружен в 1990 году (Д.И.Бельченко). А.С.Логинов, В.Б.Потапова и Р.Б.Гудков (1990) сообщают о появлении ауторозеток в просвете капилляров биоптатов слизистой желудка из края хронической язвы. Затем был выявлен и описан сходный с ауторозеткообразованием процесс образования эрит-роклазических кластеров в костном мозге (Д.И.Бельченко, 1992). Эндогенное ауторозеткообразование, сопровождающееся экзоцитар ным лизисом эритроцитов, можно рассматривать как один из меха низмов освобождения циркулирующей крови от измененных, поврежденных и старых эритроцитов. Он может быть также механизмом аутоагрессии при аутоиммунной патологии. Исследование этого феномена при изменениях гемопоэза может способствовать развитию представлений о клеточных взаимодействиях в периферической крови и костном мозге, об их последствиях, участии в патогенезе заболеваний системы крови при различной патологии, а также может иметь диагностическое значение.

Цель работы. Выявить изменения характера и интенсивности эндогенного аутоРО и сходного с ним процесса образования костномозговых эритроклазических кластеров при патологических состояниях, сопровождающихся нарушениями и измене-ними гемопоэза.

Для достижения указанной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить интенсивность и характер эндогенного ауторозет-кообразования в периферической крови при усилении эритропоэза, индуцированного острой кровопотерей.

2. Исследовать характер и интенсивность эндогенного ауторо-зеткообразования в периферической крови при угнетении эритропоэза, вызванном плеторической гемотрансфузией.

3. Изучить эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови детей, страдающих наследственными гемолитическими анемиями и при экспериментальной гемолитической анемии.

4. Исследовать костный мозг у ннтактных животных и после вызванной у них кровопотери и переливания гомологичных эритроцитов, кроме того провести исследование костного мозга больных острым лимфобластным лейкозом для изучения образования эритроклазических костномозговых кластеров при изменениях гемопоэза.

Научная новизна. Впервые исследовано эндогенное ауторо зеткообразованне в периферической крови и изучена новая разновидность костномозговых кластеров — эритроклазические кластеры при изменениях гемопоэза, а также патофизиологическое значение этих феноменов в гематологической патологии.

Научно-практическое значение работы. Определение интенсивности эндогенного ауторозеткообразования в периферической крови, интенсивности и характера образования костномозговых эрит роклазических кластеров может быть использовано с диагностической и прогностической целью при гематологической патологии и для оценки эффективности терапии лейкозов.

Положения, выносимые на защити•

1. Интенсификация процесса эндогенного ауторозеткообразования в периферической крови происходит при наследственных гемолитических анемиях у детей, при лейкозах, при экспериментальных острых гемолитической и постгеморрагической анемиях и при посттрансфузионной плеторе, то есть при изменениях гемопоэза и появлении в крови эритроцитов с измененными мембранами.

2. В костном мозге людей и лабораторных животных присут ствуют эритроклазические кластеры, количество которых изменяется при активации и угнетении эритропоэза.

3. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови и образование эритроклазических кластеров в костном мозге, с последующим экзоцитарным лизисом, является одним из механизмов разрушения измененных, поврежденных и старых эритроцитов.

Апробация работы проведена на совместном заседании научных сотрудников кафедр патофизиологии, фармакологии и гисто логин Тверской государственной медицинской академии.

Материалы диссертации доложены на:

1. Научной конференции молодых ученых России, посвященной 50-летию РАМН (Москва, 1994 г.);

2. Заседание научного общества патофизиологов г. Санкт-Петербурга (С.-Петербург, 1997 г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано б печатных работ, оформлено 2 рационализаторских предложения.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, описания результатов собственных исследований. Диссертация изложена на 100 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами и 21-м рисунком. В списке литературы приведен 91 источник, из них 29 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для проведения исследований использовали кроликов калифорнийской породы массой тела 2,5 3,0 кг. В течение всего срока эксперимента животные содержались на стандартном рационе в виварии. Перед опытом кролики проходили недельную адаптацию в условиях вивария.

В настоящем исследовании были поставлены следующие серии экспериментов.

В первой серии исследовали характер и интенсивность ауторо-зеткообразования в периферической крови и костном мозге интакт-ных кроликов.

Во второй серии опытов было проведено исследование клеточного состава периферической крови и костного мозга с учетом числа ауторозеток периферической крови и эритроклазических костномоз-

говых кластеров у кроликов с острыми постгеморрагической и гемолитической анемиями.

В третьей серии экспериментов проводили исследование периферической крови и костного мозга с подсчетом ауторозеток и эрит-роклазических кластеров у кроликов с редуцированным гемопоэзом. Редукцию гемопоэза осуществляли путем воспроизведения экспериментальной инфузионной полицитемии.

Воспроизведение острых постгеморрагической и гемолитической анемий. Постгеморрагическую анемию у кроликов вызывали выпус канием из краевой вены уха крови объемом, равном 1,5% от массы тела животного. Перед кровопусканием и в течение всего срока исследования (14 дней) определяли число эритроцитов, лейкоцитов и содержание гемоглобина в крови (С.А.Голованов, 1977).

Острую гемолитическую анемию вызывали введением фенилгид-разина (37,5 мг/кг в виде 5% спиртового раствора внутривенно, одно кратно). Перед введением фенилгндразина и в течение всего срока эксперимента определяли число эритроцитов, лейкоцитов и содержание гемоглобина в периферической крови (Я.Г.Ужанский, 1968).

Воспроизведение посттрансфузионной плеторы. Экспериментальную полицитемию воспроизводили путем внутривенных влива ний кроликам взвеси отмытых от плазмы гомологичных эритроцитов. Кровь получали в количестве 45-50 мл от животных доноров и стабилизировали гепарином. После центрифугирования крови при 2000 об/мин в течение 10 минут плазму и лейкоцитарную пленку, образующихся на границе разделения плазмы и эритроцитов, удаляли. Полученную эрнтроцнтарную массу трижды промывали 0,9% раствором ЫаС1, взвешивали в 75-100 мл этого же раствора и вливали внутривенно кроликам подопытной группы из расчета 2х1010— 4x10й' эритроцитов на кг массы животных. Влияние эритроцитарной взвеси осуществляли дважды с интервалом в два дня. Перед каждым введением взвеси эритроцитов и в течение всего срока эксперимента проводили подсчет числа эритроцитов, лейкоцитов и определяли содержание гемоглобина в периферической крови (С.А.Голованов, 1977).

Цитологическое исследование мазков периферической крови и костного мозга кроликов. Кровь для исследования брали из краевой вены уха до воспроизведения эксперимента и в течение 14 дней с двухдневным интервалом. Мазки периферической крови фиксировали смесью Никифорова, а затем окрашивали по Романовскому-Гим-зе. Проводили подсчет лейкоцитарной формулы с учетом числа ауто-

розеток. За ауторозетки принимали клеточные ассоциации, содержащие кроме розеткообразующей клетки не менее трех эритроцитов, плотно соединенных с лейкоцитом.

Костный мозг получали под местной анестезией пункцией диа-физов бедренной л большеберцовых костей. После извлечения манд-рена из иглы шприцем, промытым раствором гепарина, насасывали 0,5-0,8 мл костномозговой массы. Сразу же делали мазок, фнксиро вали смесью Никифорова, а затем окрашивали по Романовскому-Гимзе. В мазках проводили подсчет 500 миелокариоцитов с учетом эритрок-лазических кластеров, приходящихся на уже данное число миелокариоцитов.

Выделение гемопоэтических и эритроклазических кластеров костного мозга. Выделение гемопоэтических островков и эритроклазических кластеров костного мозга проводилось по методу Ю.М.За харова (Ю.М.Захаров, 1984; Е.Д.Гольдберг и соавт., 1990). Животных забивали под легким эфирным наркозом. Костный мозг из боль-шеберцовой кости вымывали с помощью шприца 2 мл модифициро ванной среды 199 (90% среды 199, 10%, бычьего сывороточного альбумина, 0,03 мл гепарина), осторожно суспензировали с помощью пастеровской пипетки, фильтровали через капроновую сеточку. IIa обезжиренное предметное стекло наносили каплю полученной сус пензии, покрывали камерой из органического стекла (камера предложена нами рац. предложение № 1607, 15 мая 1992 г.). Плотно фиксировали камеру с помощью металлического зажима. Центрифугировали при 3000 об/мин. в течение 3 мин. Полученные препараты высушивали, фиксировали 10 мин. метанолом и окрашивали по Ро маповскому-Гимзе.

За эритроклазические кластеры принимали клеточные ассоци ации, в центре которых находился макрофаг или кроветворные клет ки на разных стадиях развития. По периметру этих клеток, прилегая к ним, располагались зрелые эритроциты, в количестве не менее 3-х. Подсчитывали также эритроклазические кластеры с экзоцитарным лизисом эритроцитов, который характеризовался появлением в эрит роцитах участков цитоплазмы, лишенных гемоглобина, что является проявлением гемолиза.

Цитологическое исследование периферической крови и костного мозга людей. Проводилось микроскопирование мазков периферической крови и аспиратов костного мозга больных, находящихся на лечении в Тверской областной клинической больнице. Мазки ок-

с

• !(>(,•

рашивали по Ромаиовскому-Гимзе. Подсч1п >сь не менее 200 лейкоцитов с учетом ауторозеток, приходя! -'à это число клеток в мазках периферической крови, и не м ' "0 миелокариоцитов с учетом приходящихся на них эритроклаз; х кластеров в мазках аспиратов костного мозга.

Статистическая обработка материале с. вдевания. Оформление таблиц, графиков и диаграмм пр »вод ^ ~ь • помощью прикладных пакетов "Microsoft Excel" и "M -osolt Graph" в программном продукте "Microsoft Office for Windows".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови лабораторных животных и человека.

1.1. Эндогенное ауторозеткообразование имело место в периферической крови здоровых людей и интактных лабораторных жи вотных. Протекало оно в этом случае с небольшой интенсивностью. Количество эндогенных ауторозеток составило в мазках крови здо ровых взрослых людей — 0,68±0,2% от общего числа лейкоцитов, детей — 2,4±3,0%, причем моноцитарных ауторозеток из них было 1,66±0,46%, а нейтрофильных — 3,34±0,23%. В крови интактных кроликов общее количество ауторозеток составило 7,0±0,49% от общего числа лейкоцитов, из них моноцитарных ауторозеток — 3,48±0,61%, а нейтрофильных — 3,34±0,23%. В эритроцитах, контактирующих с розсткообразующей клеткой, видимых при световой микроскопии, морфологических изменений не обнаруживалось.

1.2. Ауторозеткообразование при экспериментальной острой постгеморрагической анемии.

При экспериментальной острой постгеморрагической анемии с третьего дня опыта происходило достоверное увеличение общего числа ауторозеток.

При этом возрастало содержание как нейтрофильных, так и моноцитарных ауторозеток, с преобладанием последних. Это увеличение числа ауторозеток наблюдалось до 9-го — 10-го дней эксперимента. Одновременно с увеличением интенсивности ауторозеткооб-разования на 3-8 дни кровопотери в мазках периферической крови большинства кроликов были обнаружены явления экзоцитарного лизиса эритроцитов, контактирующих с поверхностью розеткообразующих

16 Т

14

-V

и н о м о о. о н

я

12 --

10 -•

Т 4.5

N

-- 4

-- 3,5 *

-+-

гм о

X

-а н з

о &

3.

2,5

До

кровопотсри

1-2 3-5 6-8

дни после кровопотери

9-10

11-12

■ауторозетки %

■эритроциты

Рис. 1. Динамика общего числа ауторозегок и количества эритроцитов в периферической крови в различные сроки острой постгеморрагической анемии.

клеток. Количество гемоглобина и эритроцитов снижалось в течение 3 5 дней после кровопускания. Следует отметить, что на 3 5 дни кро вопотери выявлялась обратная связь между нарастанием количества ауторозеток и уменьшением количества эритроцитов (г=—0,631, Р<0,01).

Таким образом, результаты эксперимента показали, что интенсификация ауторозеткообразовашш сопровождается прогрессирующим падением числа эритроцитов (рис. 1). Возможно активация ауторо-зеткообразования была связана с появлением в крови эритроцитов с измененными после кровопотери мембранами. Наблюдавшееся явление экзоцитарного лизиса эритроцитов, совпадающее по времени с максимальной интенсификацией ауторозеткообразования подтверж дает наши предположения о том, что исследуемый феномен может быть одним из механизмов постгеморрагического эритродиереза, при водящим к клиренсу эритроцитов с измененными мембранами.

1.3. Экспериментальная острая гемолитическая анемия.

При введении кроликам фенилгидразина, который, как известно, вызывает повреждение эритроцитарных мембран, мы наблюдали резкую активацию ауторозеткообразования уже на второй день экс-

перимента. В это же время происходило значительное уменьшение числа эритроцитов, что еще раз доказывает, что ауторозеткообразо-вание может быть одним из механизмов элиминации поврежденных эритроцитов из сосудистого русла (рис. 2).

30 -г т 4,5

25 --

20 --

£ к ьг

« 15

о

о.

|ю

5 --

- - - -

-- 4

-- 3,5

-- 3 -Т -> о

2,5 2

-- 1,5 -- 1

-- 0,5

•л

Я о

е-

О.

О

о

До введения фенилгидразина

12 3 4 5

дни эксперимента после введения фенилгидразина

49-

•ауторозетка

■ эритроциты

Рис. 2. Динамика числа ауторозеток и количества эритроцитов в различные сроки острой гемолитической анемии

1.4. Эндогенное ауторозеткообразование при экспериментальной плеторе.

В этой серии экспериментов кроликам вводили отмытые гомологичные эритроциты, так как известно, что процесс выделения и отмывания эритроцитов сопровождается изменениями свойств их мембран. Кроме того, возможны явления антигенной несовместимости переливаемых эритроцитов. Результаты экспериментов свидетельствуют, что по мере нарастания в течение первых 3-х суток уровня эритроцитов, одновременно увеличивалось и количество ауторозеток (рис. 3) и на 3-4 дни опыта была выявлена высокая прямая зависимость между нарастанием количества ауторозеток и повышением содержания эритроцитов в периферической крови реципиента.

К тому же на 5-6 дни эксперимента в крови большинства кроликов обнаруживались явления экзоцитарного лизиса эритроцитов, входящих в состав ауторозеток.

5-6 7-8

Дни эксперимента

■ауторозетки

-♦— эритроциты

Рис. 3. Количество ауторозеток и содержание эритроцитов в периферической крови кроликов при инфузнонной плеторе.

14

%

12 4-

ю 48 6 4-

4 --

общее число ауторозеток

моноцитарные

нейтрофильные

3-4

--2

13-14

2

0 контрольная группа

О микросфероцитоз □эллиптоцитоз

Рис. 4. Количество ауторозеток в периферической крови детей

1.5. Эндогенное ауторозеткообразовапие в периферической крови детей, страдающих наследственными анемиями. При исследовании крови детей с наследственными гемолитическими анемиями, которые являются мембранопатиями, мы наблюдали

закономерности подобные описанным выше. Общее количество ауто-розеток в крови детей с наследственной микросфероцитарной анемией было увеличено по сравнению с контрольной группой (здоровые дети; дети страдающие эпилепсией, нейроциркуляторной дистонией, детским церебральным параличом) в 5 раз и составило 13,0±3,32% (Р<0,05), при эллиптоцитарной в 3 раза - 10,6±1,9% (Р<0,05) (рис.4).

Во многих ауторозетках, наблюдавшихся в мазках крови детей с наследственными гемолитическими анемиями происходил экзоци-тарный лизис эритроцитов, входящих в состав ауторозеток.

1.6. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови при лейкозах.

При исследовании мазков периферической крови детей, страдающих острым лимфобластным лейкозом во всех были обнаружены эндогенные ауторозетки. В фазу ремиссии — ауторозетки были об разования в основном моноцитами и сегментоядерными нейтрофила-ми. В активную фазу — лимфобластами, причем в большинстве из них эритроциты подвергались экзоцитарному лизису.

Таким образом при всех исследуемых состояниях, сопровождающихся изменениями гемопоэза и свойств эритроцитарных мемб ран количество ауторозеток в периферической крови людей и лабо раторных животных статистически значимо возрастало по сравне нию с количеством эндогенных ауторозеток в периферической крови контрольной группы детей и интактных животных. Одновременно с активацией ауторозеткообразования при исследуемых патологических состояниях в крови людей и животных обнаружены явления эк зоцптарного лизиса эритроцитов, входящих в состав ауторозеток.

Можно полагать, что экзоцитарный лизис эритроцитов в эндогенных ауторозетках является завершающей стадией процесса внут рнсосудистого ауторозеткообразования.

2. Ауторозеткообразование в костном мозге людей и животных.

Эритроклазические кластеры.

В костном мозге лабораторных животных, полученном пункцией бедренной и болынеберцовой костей, а так же при использовании метода выделения гемопоэтических островков костного мозга (Ю.М.Захаров, 1984) наряду с известными гемопоэтическими островками выявляются ассоциации клеток, в центре которых чаще всего находятся макрофаги, реже гранулоциты на разных стадиях созревания. По периметру этих клеток, плотно прилегая к ним, располагаются зрелые эритроциты. Эти клеточные ассоциации напоминают ауторозетки, наблюдавшиеся нами ранее в периферической крови. В

части костномозговых ауторозеток или костномозговых кластеров, входящие в них эритроциты не обнаруживали каких-либо видимых структурных изменений, но наблюдались кластеры, в которых происходил экзоцитарный лизис.

И так, описываемая разновидность кластеров имела следующие особенности:

1. Кластерообразующими были не только макрофаги, но и миелоидные, и бластные (при лейкозах) клетки;

2. Описываемые кластеры состояли не из созревающих кроветворных клеток, как гемопотические, а из зрелых эритроцитов;

3. Эритроциты, входящие в состав кластеров, подвергались экзоцитарному лизису кластерообразующими клетками.

В костном мозге интактных кроликов количество эритроклази-ческих кастеров составило 3,19±0,5% от общего числа миелокариоци тов, при этом 1,624±0,91%, т.е. 50% всех эритроклазических кластеров были образованы макрофагами.

2.1. Эритроклазическис костномозговые кластеры при экспериментального плеторе.

Возникновение инфузионной плеторы сопровождается усиленным образованием эритроклазических кластеров с 1-го до 7-го дней эксперимента, главным образом за счет нарастания количества эрит-

7,5 -г

-г 4,4

исходные данные

1--3 4—6

Дни эксперимента

7-9

10-12

-в— эритроклазические кластеры

• эритроциты

Рис. 5. Динамика числа эритроклазических кластеров в костном мозге и числа эритроцитов в крови при инфузионной плеторе.

роклазических кластеров образованных макрофагами. К 7 дню эксперимента интенсивность кластерообразования в костном мозге воз вращалась к исходному уровню. К этому же времени нормализовалось и число эритроцитов в периферической крови (рис. 5).

Такое совпадение изменений интенсивности образования эрит-роклазических кластеров и количества эритроцитов в периферической крови дает основание полагать, что усиление образования данного вида кластеров может сопровождаться усиленным разрушением эритроцитов в костном мозге.

2.2. Костномозговые эритроклазические кластеры при экспериментальной острой постгеморрагической анемии.

При исследовании костного мозга кроликов с эксперименталь ной постгеморрагической анемией, мы наблюдали изменения противоположные по характеру обнаруженным при экспериментальной плеторе. Как видно из рис. 6 на 14 дни после кровопотери наблюдалось достоверное снижение содержания эритроцитов в периферической крови, в это же время происходило достоверное уменьшение числа эритроклазических кластеров. А затем, к 5-7 дням кровопотери эти показатели достоверно не отличались от исходных данных.

4 -г

до кровопотери

1-2 5—7

Дни эксперимента

-г 4,5

9-12

■ эритроклазические кластеры

■эритроциты

Рис. 6. Динамика числа эритроклазических кластеров костного мозга кроликов и количества эритроцитов в различные сроки острой постгеморрагической анемии.

Это дает основание полагать, что процесс эритроклазии в костном мозге при постгеморрагической анемии тормозится, что в данной ситуации целесообразно.

2.3. Эритроклазические кластеры в костном мозге больных лейкозами.

Обнаружение эритроклазических кластеров, подобных выявленным в мазках костного мозга экспериментальных животных, в костном мозге людей представляет существенный интерес. Для ис следования мы воспользовались аспиратами костного мозга детей, больных острым лимфобластным лейкозом. Все дети находились на лечении в Тверской областной детской клинической больнице. Костный мозг для исследования брали в фазу ремиссии и активную фазу. Эритроклазические кластеры были обнаружены во всех исследованных мазках костного мозга. Кластерообразующими клетками в фазу ремиссии костномозговые макрофаги или гранулоциты, на разных стадиях созревания, во время острой фазы кластеробразующими клетками в основном были бластные клетки, причем в этом случае преобладали кластеры с происходящим в них экзоцитарным лизисом эрит роцитов, что можно рассматривать как один из механизмов развития анемии при остром лимфобластном лейкозе, а определение соотношения количеств кластеров с экзоцитарным лизисом и без него, то есть изменение интенсивности экзоцитарного лизиса эритроцитов, может служить дополнительным диагностическим критерием характера течения лейкоза (Д.И.Бельченко, 1992).

Подводя итог анализу результатов проведенного исследования, следует отметить, что в периферической крови и костном мозге животных (кролики) и человека присутствуют ассоциации клеток, представляющие собой эндогенные ауторозетки (периферическая кровь) и эритроклазические кластеры (костный мозг). Интенсивность и характер ауторозеткообразования в периферической крови и костном мозге зависят от состояния гемоноэза, их содержание значительно изменяется при появлении в организме эритроцитов с измененными мембранами.

ВЫВОДЫ:

1. В периферической крови человека и животных осуществляется эндогенное ауторозеткообразование, которое обычно завершается экзоцитарным лизисом эритроцитов.

2. Интенсивность и характер эндогенного ауторозеткообразо-вания зависят от функционального состояния эритрона. Усиление и угнетение эритропоэза приводят к интенсификации этого процесса. При кровопотере (усиление эритропоэза) это связанно, по-видимому, с постгеморрагическим эритродиерезом, при искусственной плеторе

с появлением в крови эритроцитов с измененными мембранами.

3. Острая экспериментальная гемолитическая анемия у кроли ков и наследственные гемолитические анемии у детей (мембранопа-тии) сопровождаются интенсификацией эндогенного ауторозеткооб-разования и активацией экзоцитарного лизиса эритроцитов.

4. В костном мозге больных, страдающих лейкозами и в костном мозге интактных животных и при исследуемой патологии обнаружены сходные с наблюдавшимися в крови ауторозетками эритрок лазнческие кластеры, в которых происходит разрушение эритроцитов, то есть эритроклазия.

5. Количество и характер эритроклазических кластеров в костном мозге зависят от функционального состояния эритропоэза: при его подавлении (посттрансфузионная плетора) число эрнтроклази ческих кластеров возрастает, при активации, вызванной кровопоте-рей — уменьшается.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Данные, полученные в диссертационной работе, позволяют получить новые представления о механизмах изменения состава крови при наследственных гемолитических анемиях и остром лимфобла стном лейкозе у детей, а также при экспериментальных анемиях и плеторе у животных.

2. Результаты диссертационной работы используются для прогнозирования течения гематологических заболеваний.

3. Предложено изучение феномена эндогенного ауторозетко-образования в периферической крови и костном мозге в темах: "Роль реактивности в патологии", "Патофизиология эритрона" на практических занятиях для студентов III курса лечебного и педиатрического факультетов на кафедре патофизиологии в Тверской государственной медицинской академии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови при экспериментальных анемиях. // Тезисы докладов научной конференции «Ученые института — практическому здравоохранению». - Тверь, 1992. - Т. 1. - С. 25.

2. Механизм элиминации эритроцитов с измененными мембранами из крови и костного мозга. // Материалы научной конференции ТГМА. - Тверь, 1992. - С. 10-13 (соавт. Бельченко Д.И.).

3. Ауторозеткообразование как механизм регуляции качественного состава эритрона. // Тезисы докладов научной конференции моло дых ученых России.посвященной 50 летию РАМН. — М., 1994. — С. 206 207.

4. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови при экспериментальной острой и гемолитической анемии. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1994. — № 2. - С. 10-12.

5. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической кропи при гемолитической анемии. // Тезисы докладов Первого Рос сийского конгресса по с международным участием. — М., 1996. — С. 86 87 (соавт. Бельченко Д.И.).

6. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови и костном мозге кроликов при экспериментальной плеторе. // Рукопись деп. в ВИНИТИ 23.09.94, № 2256 В (соавт. Бельченко Д.И.).

РАЦИОНАЛИЗАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Устройство для центрифугирования проб крови или костного мозга на предметном стекле с целью изучения кластерообра-зования. — Рац. предложение № 1607. - 15.05.92 (соавт. Бельченко Д.И., Школовон В.В.).

2. Способ дифференцировкн Т- и В-лимфоцитов крови кроликов. — Рац. предложение № 1820. — 25.09.96 (соавт. Попыхов Д.П., Демидова М.А.).