ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИНИПЛАЗМИНА С ЦЕЛЬЮ ИНДУКЦИИ ЗАДНЕЙ ОТСЛОЙКИ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

Норман, Кирилл Сергеевич

Диссертации по медицине → Глазные болезни

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.07) на тему:ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИНИПЛАЗМИНА С ЦЕЛЬЮ ИНДУКЦИИ ЗАДНЕЙ ОТСЛОЙКИ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Норман, Кирилл Сергеевич Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.07

Автореферат диссертации по медицине на тему ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИНИПЛАЗМИНА С ЦЕЛЬЮ ИНДУКЦИИ ЗАДНЕЙ ОТСЛОЙКИ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

На правах рукописи

005055472

НОРМАН КИРИЛЛ СЕРГЕЕВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИНИПЛАЗМИНА С ЦЕЛЬЮ ИНДУКЦИИ ЗАДНЕЙ ОТСЛОЙКИ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

14.01.07 - глазные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 2 НОЯ 2012

Москва-2012

005055472

Работа выполнена на кафедре глазных болезней ГОУ ВПО

Московского государственного медико-стоматологического университета им. А.И. Едокимова и в ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН Тахчиди Христо Периклович Захаров Валерий Дмитриевич доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом витрео-ретинальной хирургии и диабета глаза ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России Казарян Арминэ Амасимовна доктор медицинских наук, профессор кафедры глазных болезней института усовершенствования врачей Национального медико-хирургического Центра имени Н.И. Пирогова Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ глазных болезней РАМН

Защита состоится « 3 » декабря 2012 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.208.014.01 при ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России по адресу: 127486, г. Москва, Бескудниковский бульвар, д. 59А.

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России.

Автореферат разослан « 2 » ноября 2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук В.В. Агафонова

Список сокращений

ВПМ - внутренняя пограничная мембрана

ЗКС СТ - задние кортикальные слои стекловидного тела

ЗОСТ - задняя отслойка стекловидного тела

ОКТ - оптическая когерентная томография

СМ - световая микроскопия

СТ - стекловидное тело

СЭМ - сканирующая электронная микроскопиия ЭРГ - электроретинография

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Последние годы развития витреоретинальной хирургии ознаменовались рядом новых позиций, позволивших достигнуть качественно нового уровня в лечении больных. В первую очередь, это касается применения микроинвазивной трехпортовой техники витрэктомии, использования одноразового режущего инструмента диаметром 25 в, 27 О, нового поколения световодов и эндовитреальных инструментов. Все, вместе взятое, позволило резко уменьшить травматичность операций, снизить сроки реабилитации пациентов и добиться улучшения функциональных результатов оперативного лечения (Захаров В.Д., 2009; Тахчиди Х.П., 2010; БеЬав X, 2010; Ргаут и., 2012).

Основную группу заболеваний заднего отрезка глаза, нуждающихся в витреоретинальном вмешательстве, составляют диабетический макулярный отек, идиопатический макулярный разрыв, витреомакулярный тракционный синдром (Столяренко Г.Е., 1988; Глинчук Я.И., 1994; Кисилев А.В., 2001; Рес1егтап .Г.Ь., 1994). В последнее время наибольший интерес исследователей привлекает изучение задних кортикальных слоев стекловидного тела (ЗКС СТ), так как общепризнано, что основным анатомическим объектом, на который направлено витреоретинальное воздействие при лечении перечисленных заболеваний, являются именно они (Махачева З.А., 1994;

Лыскин П.В., 2007; Алпатов С.А., 2010; Michels R.G., 1945; Sebag J., 1992; Worst J. G., 1992).

Стандартом современной витрэктомии является выполнение полноценного трехпортального доступа, через который происходит удаление стекловидного тела (CT), в том числе интактных его слоев вплоть до субтотальной витрэктомии, при этом наибольшую трудность представляет выделение и удаление ЗКС CT от внутренней пограничной мембраны (ВПМ) сетчатки (Шишкин М.М., 2011; Pendergast S. D., 1999; Yuson R. M., 2009).

Методы отделения ЗКС CT от ВПМ сетчатки можно разделить на два направления — механические и «фармакологический витреолизис» (Тахчиди Х.П., 2010; Gandorfer А., 2004; Sebag J., 2005, 2009).

При применении механических способов отделения ЗКС CT частота ятрогенных осложнений колеблется в пределах от 12 до 69 % (Сдобникова C.B., 1997; Алпатов С.А., 2002; Тахчиди Х.П., 2002; Zinn K.M., 1982; Paques M., 1997; Park D., 1999).

Идеологией «фармакологического витреолизиса» является безоперационное ферментативное воздействие на область витреоретинального соединения (Шарафетдинов И.Х., 2002; Лыскин П.В., 2009; Quiroz H., 1984; Trese M., 2000;Tanaka M., 2006;Sebag J„ 2009). Выполненные экспериментальные исследования по изучению возможности применения ряда ферментов (хондроитиназы, гиалуронидазы, диспазы и других) продемонстрировали перспективность этого направления, как наиболее безопасного с точки зрения достижения индукции задней отслойки стекловидного тела (ЗОСТ). Однако, невысокая эффективность результатов выдвигает задачи поиска новых, более адаптированных для данной цели, ферментативных препаратов (Yao X.Y., 1992; Kuppermann B.D., 2001; Jorge R., 2003).

Последние годы внимание зарубежных исследователей привлечено к плазмину, а точнее - к его модифицированной форме под названием

микроплазмин (Hehkin J„ 1992; VerStraeten Т. С., 1993; Unal M„ 2000). По ряду сообщений интравитреальное введение микроплазмина и его воздействие на содержащиеся в витреоретинальном соединении гликопротеиды, фибронектин и ламинин приводят к ослаблению адгезии ЗКС CT и ВПМ сетчатки, возникновению ЗОСТ в условиях эксперимента в 100% случаев (Gandorfer А., 2004; Toshiro Sakuma, 2005; Benz M.S., 2010).

Российскими учеными в ФГБУ Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава России была получена новая оригинальная рекомбинатная форма модифицированного плазмина (патент на изобретение № 2432396 от 27.10.2011), которая была названа миниплазмином.

Цель настоящего исследования - экспериментально-морфологическое обоснование применения ферментативной индукции задней отслойки стекловидного тела с помощью миниплазмина.

Задачи исследования:

1. Определить возможность использования миниплазмина для индукции задней отслойки стекловидного тела.

2. Теоретически обосновать, рассчитать и лабораторно подтвердить время максимальной амидолитической активности дозы миниплазмина, вызывающей индукцию задней отслойки стекловидного тела в глазах экспериментальных животных in vivo.

3. Выявить влияние рассчитанной для индукции задней отслойки стекловидного тела дозы миниплазмина на витреоретинальное соединение в эксперименте ex vivo.

4. Определить оптимальную эффективную дозу миниплазмина для индукции задней отслойки стекловидного тела и время его экспозиции в эксперименте in vivo.

Научная новизна результатов исследования

1. Впервые установлено, что отечественный препарат миниплазмин в дозе 180 мкг при экспозиции 60 минут вызывает индукцию задней отслойки стекловидного тела в глазах экспериментальных животных ex vivo и in vivo и не оказывает токсического влияния на структуры глазного яблока.

2. Впервые доказано, что при интраокулярном введении миниплазмина сохраняется его максимальная амидолитическая активность в течение 60 минут.

3. Впервые доказано, что двукратное превышение установленной эффективной дозы миниплазмина вызывает развитие выраженных экссудативных явлений в глазах экспериментальных животных in vivo.

4. Впервые доказано, что ЗОСТ может индуцироваться при использовании миниплазмина в дозах 180 и 240 мкг, при этом на фоне идентичных морфо-структурных изменений витреоретинального интерфейса, функциональная активность сетчатки восстанавливается в 7 раз быстрее при использовании меньшей дозы.

Практическая значимость результатов работы

1. Доказано, что миниплазмин может быть использован в качестве индуктора задней отслойки стекловидного тела.

2. Проведенные исследования по использованию миниплазмина для ферментативного витреолизиса позволяют рекомендовать его к клинической апробации с целью уменьшения травматичное™ витреоретинальных вмешательств.

Основные положения, выносимые на защиту

Миниплазмин в дозе 180 мкг при времени экспозиции 60 минут вызывает заднюю отслойку стекловидного тела в глазах экспериментальных животных ex vivo и in vivo, при этом сохраняется его максимальная

амидолитическая активность и не оказывается токсическое воздействие на структуры глазного яблока.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2011), IX Научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2011» (Москва, 2011), научно-клинической конференции ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, совместно с кафедрой глазных болезней Московского государственного медико-стоматологического университета им. А.И. Едокимова (Москва, 2012), X научно-практической конференции с международным участием «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2012» (Москва, 2012), X Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Федоровские чтения-2012» (Москва, 2012).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 4 - в журналах, рецензируемых ВАК РФ. Подана заявка на патент РФ на изобретение.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 100-а листах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы излагающей материалы и методы исследования, двух глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 39-ью рисунками, содержит одну таблицу. Указатель

литературы включает 175 источников, из них 41- отечественный и 134 - зарубежных.

Работа выполнена на кафедре глазных болезней Московского государственного медико-стоматологического университета им. А.И. Едокимова, на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России (генеральный директор - д.м.н., проф. Чухраев A.M.) при участии к.м.н. Шкворченко Д.О. и к.м.н. Шарафетдинова И.Х.

Препарат миниплазмин для индукции задней отслойки стекловидного тела предоставлен ФГБУ «РКНПК» Минздрава России (руководитель лаборатории генной инженерии Бибилашвили Р.Ш. и ст.н.с. Скрыпина H.A.).

Морфологические исследования выполнены на базе лаборатории патологической анатомии и гистологии глаза (зав. лабораторией - к.м.н. Шацких A.B.) и глазного тканевого банка (заведующая - Тонаева Х.Д.) Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова» Минздрава России (заведующий - д.м.н. Борзенок С.А.), на базе лаборатории анатомии микроорганизмов ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России (зав. лабораторией - д.м.н. Диденко JI.B.).

Экспериментальные исследования на кроликах породы шиншилла выполнены на базе Калужского филиала ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России (директор к.м.н. - Терещенко A.B.) при поддержке д.м.н., проф. Белого Ю.А.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Диссертация носит экспериментальный характер, представляет собой доклинические испытания отечественного препарата миниплазмин.

Миниплазмин - рекомбинантный полипептид со свойствами плазминогена человека, способный превращаться при активации в

миниплазмин (Белогуров А.А, Бибилашвили Р.Ш. Гурский Я.Г., Минашкин М.М., Скамров A.B. Скрыпина H.A., 2011).

От имеющегося зарубежного аналога микроплазмина (Sebag J., 2005), миниплазмин отличается строением молекулы и молекулярной массой. Миниплазмин имеет активный центр и крингл-домен с молекулярной массой 38800 Да, а микроплазмин только активный центр с молекулярной массой 27300Да. Миниплазмин, как и микроплазмин, гидролизирует гликопротеиды, фибронектин и ламинин, которые определяют прочность витреоретинального соединения, выполняя роль «цемента» (Kohno Т., 1987; Scheiffarth О. F., 1988).

Материал и методы исследования

Работа базируется на анализе морфоструктурных особенностей 10-ти свежих изолированных свиных глаз и 28-ми глаз опытных животных (кролики породы Шиншилла весом от 2,0 до 3,5 кг в возрасте 4-6 месяцев), в которые вводились различные дозы миниплазмина. Парные глаза служили контролем с введением в них физиологического раствора. Амидолитическую активность препарата миниплазмин изучали на 8-ми глазах 4-х кроликов.

Глаза животных выведенных из эксперимента на разных сроках, подвергались морфологическим методам исследования, включающим световую микроскопию (СМ) и сканирующую электронную микроскопию (СЭМ).

Рассчет эффективной дозы миниплазмина

По данным зарубежных исследований эффективная доза микроплазмина рассчитана, подтверждена и составляет 125 мкг при экспозиции 60 мин (Marc D. de Smet, 2009). Различия в строении препаратов не позволяют использовать дозу и время экспозиции, рассчитанные для

микроплазмина. В проводимом нами исследовании экспериментальная доза миниплазмина рассчитывалась по формуле:

С,=-^х С2,где М2

С,- искомая доза миниплазмина С г- эффективная доза микроплазмина (125 мкг) Mr молекулярная масса миниплазмина (38800 Да) М2- молекулярная масса микроплазмина (27300 Да) С2- эффективная доза микроплазмина, равная 125 мкг.

Согласно проведенным расчетам эффективная доза миниплазмина составила:

„ 38800

27300 х 125 = 180мкг

Определение амидолитической активности препарата миниплазмина в полости стекловидного тела кролика in vivo

Для определения активности миниплазмина использовали амидолитический метод. Эксперимент проводили на лабораторных животных in vivo (4 кролика - 8 глаз). В опытные глаза (OD) вводили миниплазмин в количестве 180 мкг (100 мкл раствора с концентрацией 1,8 мг/мл), в два контрольных глаза (OS) вводили физиологический раствор, из двух других контрольных глаз (OS) однократно были взяты фрагменты интактного СТ в качестве нулевого контроля. Далее через 15, 30, 45, 60, 120 мин, 24 часа, брали фрагменты стекловидного тела с помощью инсулинового шприца с инсулиновой иглой 27 G. Пробы (50 мкл жидкости) немедленно замораживали в жидком азоте и хранили до исследования, которое выполнялось на приборе UV-1601PC, SHIMADZU (Япония) при t = - 20°С.

Структура эксперимента

Первая серия экспериментов ex vivo была выполнена на 5-ти парах свежих изолированных свиных глаз. Время от момента забоя до энуклеации составило 30±10 мин, время от момента смерти до эксперимента - 60±10 мин. Глаза были распределены в две группы (по одному из каждой пары). В опытные, правые, глаза интравитреально в 3 мм от лимба в срединные отделы CT вводили миниплазмин в дозе 180 мкг в объеме 0,1 мл, в контрольные, левые - физиологический раствор. Затем глаза инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 60 мин. По завершению эксперимента глаза погружали в жидкий азот на 10 мин, далее производили раскол глазных яблок с дальнейшим высушиванием в критической точке и выполняли сканирующую электронную микроскопию поверхности сетчатки (СЭМ), предварительно делая макроснимки полученных образцов.

Вторая серия экспериментов in vivo по определению оптимальной эффективной дозы и времени экспозиции миниплазмина для индукции ЗОСТ, была выполнена на 56-ти глазах 28-ми кроликов (табл. 1). Контролем служили парные глаза (OS), в которые интравитреально вводили аналогичное количество физиологического раствора.

Для оценки структур глаза в динамике, до и после интравитреального введения миниплазмина, всем кроликам через 15, 30, 60, 120 мин и одни сутки после начала эксперимента выполняли биомикроскопию с помощью щелевой лампы фирмы «Opton» (ФРГ), осмотр глазного дна методом бесконтактной офтальмоскопии с помощью асферических линз «Ocular MaxField» (США) силой 78 и 90 диоптрий, фотографирование глаз, ультразвуковое офтальмосканирование (B-сканирование) с помощью аппарата «Humphrey» (США), оптическую когерентную томографию (ОКТ) с помощью прибора «Stratus ОСТ 3000» (Carl Zeiss Meditech Inc., Германия) с программным обеспечением версия 4.0.4. Электроретинографические исследования проводились на системе «Torney» (Япония).

Таблица 1

Распределение материала по группам исследования

№ группы Вводимая Количество Сроки выведения

доза миниплазмина кроликов (глаз) из эксперимента

1 OD - 65 мкг

OS - физ. р-р 3(6) 7 суток

2 OD - 100 мкг

OS - физ. р-р 3(6) 7 суток

3 OD - 125 мкг

OS - физ. р-р 3(6) 7 суток

4 OD - 180 мкг 1, 7 суток,

OS - физ. р-р 11(22) 6 месяцев

5 OD - 240 мкг

OS - физ. р-р 5(10) 7 суток

6 OD - 360 мкг

OS - физ. р-р 3(6) 1 сутки

Одним из методов оценки возникновения ЗОСТ являлось интраоперационное субъективное определение легкости отделения ЗКС CT от ВПМ через 12 часов после введения препарата.

Для СМ глаза животных, выведенных из эксперимента, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Далее выполняли серии гистологических срезов с применением окраски гематоксилин-эозином и по методике Ван Гизона. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DMLB2 (Германия) при х50, хЮО, х200, х400-кратном увеличении с последующим фотографированием.

Для СЭМ глазные яблоки экспериментальных животных фиксировали 24 часа при температуре 4°С. В состав фиксатора входили 2% парафармальдегид и 2,5% глютаральдегид на 0,1 М фосфатном буфере, рН 7,4. Предварительно выполняли надрезы склеры острым лезвием до сосудистой оболочки в 3 мм от лимба с сохранением всех структур глазного яблока. После фиксатора глазные яблоки разрезали на две одинаковые половины через диск зрительного нерва острым лезвием. Далее препараты обезвоживали в спиртах восходящей концентрации, напыляли золотом толщиной 6 нм и изучали полученные образцы при помощи СЭМ Quanta 200 3D.

Результаты лабораторных исследований

Динамика зависимости активности миниплазмина от времени его нахождения в глазу отображена в двух графиках: от начала эксперимента до 120 мин (рис. 1) и от начала эксперимента до 1 суток (рис. 2).

Рис. 1. Показатель активности миниплазмина после введения в СТ кролика в сроки от начала эксперимента до 120 мин

0.3 0.25 02

I 0,15

0,05 0

-0,05

Рис. 2. Показатель активности миниплазмина после введения в СТ кролика в течение первых суток эксперимента

Методом амидолитической активности миниплазмина в динамике было установлено, что доза миниплазмина 180 мкг, введенная в стекловидное тело опытных глаз лабораторных животных, проявляет свою максимальную активность в промежутке от 15 до 60 мин.

В течение первых 60 мин миниплазмин теряет активность на 80%, с 0,28 до 0,05 уел ед акт. Далее, при динамическом наблюдении, в течение первых суток, активность миниплазмина падает практически до нуля. В контрольных глазах пробы были абсолютно неактивны на протяжении всего эксперимента.

Таким образом, основное действие фермент способен оказывать в течение первого часа действия.

Результаты экспериментальных исследований на евиных глазах ex vivo

После интравитреального введения миниплазмина в 10 изолированных свиных глаз при макропрепарировании стали видны внешние отличия в опытных образцах: просматривалось отстояние СТ от поверхности сетчатки и его деструктуризация. Волокна СТ были расположены рыхло, с увеличенными промежутками между ними. В контрольных, парных, глазах,

í ■ ■ ' " i

i \

(

'200 400 600 800 10Ш 1200 1400 .1*6

мин

отмечалось полное прилежание задних кортикальных слоев стекловидного тела к сетчатке с сохранением витреоретинального соединения.

По структуре стекловидное тело после интравитреального введения миниплазмина, по сравнению с контрольной группой, имело разряженную структуру.

По данным СЭМ определялось, что опытная группа отличается от контрольной сглаженностью рельефа поверхности сетчатки и отсутствием на ней волокон стекловидного тела, что свидетельствовало о полном отслоении ЗКС СТ.

Результаты эксперимента in vivo

Результаты объективных методов исследований. При осмотре опытных глаз с введенной дозой миниплазмина в 1 - 5 группах (от 65 до 240 мкг) и парных контрольных глаз, в первые сутки наблюдали незначительную смешанную инъекцию сосудов глазного яблока в месте склерального прокола, полностью проходившую на 3-ьи сутки. Роговица оставалась прозрачной на протяжении всего исследования. В течение всего периода наблюдения во всех глазах передняя камера была равномерной, средней глубины, водянистая влага прозрачной, сохранялась живая реакция зрачка на свет, а также обычные цвет и структура радужной оболочки. Хрусталики были прозрачными, рефлекс с глазного дна розовым. Диск зрительного нерва, сосуды сетчатки и хориоидеи, а также собственно внутренние оболочки заднего отдела глаза были без видимых патологических изменений.

В 6-й группе с интравитреальным введением миниплазмина в дозе 360 мкг на первые сутки в опытных глазах наблюдали смешанную инъекцую конъюнктивы, отек эпителия роговицы, экссудат в передней камере, глазное дно не офтальмоскопировалось, что соответствовало картине выраженной

экссудативной реакции. При этом контрольные глаза оставались спокойными. Было принято решение не пролонгировать эксперимент. Животные были выведены из эксперимента.

Результаты инструментальных методов исследований.

В 1-ой и во 2-ой группах, в которых доза интравитреального введения миниплазмина составляла 65 и 100 мкг - ЗОСТ не была выявлена на протяжении всего времени эксперимента (7 суток).

В опытных глазах 3-ей группы с дозой интравитреального введения миниплазмина 125 мкг, в отличие от контроля, через 60 мин выявлялась частичная ЗОСТ, без динамики в течении последующих 7-ми суток.

В 4-й и 5-й группах с дозой интравитреального введения миниплазмина 180, 240 мкг соответственно определялась полная ЗОСТ через 60 мин, подтвержденная результатами B-сканирования и ОКТ, где просматривалась четкая линия отслоения кортикальных слоев СТ. Динамическое наблюдение показало стабильность полученного результата в обеих группах на протяжении всего времени эксперимента, как в ранние сроки наблюдения (7 суток), так и в отдаленные сроки (6 месяцев). При этом высота ЗОСТ оставалась неизменной.

В 6-й группе с дозой интравитреального введения миниплазмина 360 мкг до выведения животных из эксперимента также была установлена полная ЗОСТ через 60 мин после введения препарата.

Экссудативные явления, проявились только в группе с дозой 360 мкг.

Из двух доз 180 и 240 мкг, вызывающих полную ЗОСТ, было решено выбрать, как оптимально эффективную, меньшую из них - 180 мкг.

Результаты интраоперационного метода исследования

Интраоперационный метод исследования включал выполнение витрэктомии на 8-ми глазах 4-х кроликов. Витрэктомию выполняли на 1-ые сутки после

интравитреального введения миниплазмина в опытные, правые, глаза в дозе 180 мкг, и на парном глазу - на первые сутки после введения физиологическго раствора.

Операцию начинали с установки двух портов 27 G. Один порт предназначался для инфузионной системы, второй - для входа эндовитреальных инструментов. Далее выполняли срединную витрэктомию, после чего вводили краситель Кеналог-40 для окраски СТ. На опытных глазах было видно окрашенное СТ, отстоящие от поверхности сетчатки, которое с помощью реза и аспирации витреотома свободно удалялось. Повторное введение Кеналог-40 демонстрировало отслойку волокон СТ от поверхности сетчатки.

В отличие от опытных, в контрольных глазах, после оседания частиц Кеналог-40 было видно, что СТ лежит на поверхности сетчатки. Для его удаления витреотомом понадобились аспирационно-тракционные усилия с использованием 300-500 мм рт ст, что демонстрировало отсутствие ЗОСТ.

Результаты электрофизиологичеких исследований

ЭРГ выполнялась через 10 мин, 1 час, 24 часа, а так же на 4-е и 7-е сутки после начала эксперимента.

Отсутствие токсического воздействия миниплазмина на сетчатку глаз экспериментальных животных было отмечено во всех группах с дозой препарата до 240 мкг.

Анализ динамики общей ЭРГ глаз кроликов после введения 180 и 240 мкг миниплазмина показал изменения амплитуды «а» и «Ь» - волн. В первые 10 мин после начала эксперимента регистрировалась субнормальная ЭРГ у животных в обеих группах. В глазах с интравитреальным введением миниплазмина в дозе 180 мкг наблюдалась тенденция к увеличению амплитуды «а» и «Ь»-волн ЭРГ с полным восстановлением амплитуды «а»-волны уже через час после начала эксперимента и полным восстановлением

электрической активности сетчатки в первые сутки после введения препарата. В глазах с интравитреальным введением миниплазмина в дозе 240 мкг при исследовании в динамике отмечалось незначительное увеличение амплитуды ответа, с восстановлением амплитуды «а»-волны в первые 24 часа после введения препарата. Полное восстановление функций сетчатки происходило лишь на 7-е сутки.

Таким образом, полное восстановление электрической активности сетчатки происходило в обеих рассматриваемых группах. Однако, более быстрое восстановление функций сетчатки было отмечено в группе, где доза эндовитреально введенного препарата была 180 мкг миниплазмина, что подтвердило целесообразность использования в клинических исследованиях именно этой дозы.

Результаты световой микроскопии. В 1-ой и во 2-ой группах, где введенные интравитреально дозы миниплазмина были 65 и 100 мкг соответственно, была отмечена схожая картина гистологических срезов. Ни в одном из срезов не просматривалось отслойка ЗКС СТ от поверхности сетчатки, аналогично контролю.

Гистологически в 3-й группе, с интравитреальным введением миниплазмина в дозе 125 мкг, наблюдалось частичное отслоение ЗКС СТ с сохранением структуры сетчатой оболочки. В контроле витреоретинальный интерфейс оставался без изменений.

В 4-й и 5-й группах с интравитреальным введением миниплазмина в дозах 180 и 240 мкг соответственно, на гистологических срезах просматривалось полное отслоение ЗКС СТ.

При гистологическом исследовании глаз 6-ой опытной группы (360 мкг миниплазмина) клинические экссудативные явления были подтверждены морфологически. Наблюдали субтотальную ферментативную деструкцию стекловидного тела, индуцированную миниплазмином, с сохранением только

передних слоев СТ, приближенных к хрусталику. В витреальной полости имелись скопления фибринозного экссудата с умеренной воспалительной клеточной инфильтрацией, представленной, в основном, моноцитами и единичными эозинофилами. Воспалительных явлений в других структурах глаза и зрительном нерве не было обнаружено. Отмечена отечность внутренних оболочек глазного яблока с застойными явлениями в сосудах хориоидеи. Несмотря на это, структура сетчатки оставалась сохранной, как в отношении клеток, так и в отношении архитектоники ее слоев.

Результаты сканирующей электронной микроскопии.

По результатам СЭМ структура стекловидного тела на поверхности сетчатки 1-ой (65 мкг) и 2-ой (100 мкг) групп имела незначительные отличия от интактного СТ. При использовании малых доз миниплазмина было отмечено лишь появление мелких щелевидных пространств в структуре СТ.

В 3-ей группе (125 мг) явления частичной ЗОСТ при СЭМ были представлены фрагментарным освобождением сетчатки от ЗКС СТ. Кроме того, в остатках СТ прослеживалось изменение его структуры: оно было менее компактным, его волокна были истончены.

Увеличение дозы миниплазмина до 180 мкг и выше (4-ая и 5-ая группа) привело к полному освобождению внутренней поверхности центральных отделов сетчатки от волокон ЗКС СТ. При этом не было обнаружено изменений поверхности самой сетчатки.

Выводы

1. Миниплазмин может быть использован при ферментативном витреолизисе для индукции задней отслойки стекловидного тела.

2. Эффективной дозой миниплазмина, не оказывающей токсического влияния на глаза экспериментальных животных in vivo и вызывающей заднюю отслойку стекловидного тела является 180 мкг при экспозиции 60 мин.

3. Восстановление функциональной активности сетчатки в глазах при интравитреальном введении миниплазмина в дозах 180 и 240 мкг, вызывающих идентичные морфо-структурные изменения витреоретинального интерфейса происходит в 7 раз быстрее на фоне использования меньшей дозы.

4. Максимальная амидолитическая активность миниплазмина при интравитреальном введении сохраняется в течение первых 60 минут.

5. Двукратное превышение установленной эффективной дозы миниплазмина (360 мкг) вызывает развитие выраженных экссудативных явлений в глазах экспериментальных животных.

Практические рекомендации

1. Миниплазмин в дозе 180 мкг с экспозицией 60 минут может использоваться в качестве индуктора задней отслойки стекловидного тела.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Новиков C.B., Шацких A.B., Норман К.С.. Экспериментальное обоснование использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела. // Современные технологии лечения витреоретинальной патологии: Научно-практ. конф.: Материалы. - М., 2012. - С. 202-204.

2. Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Шацких A.B., Огородникова С.Н., Новиков C.B., Узунян Д.Г., Норман К.С. Экспериментальное обоснование использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела на кроличьих глазах in vivo. // X Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием. Федоровские чтения-2012.-М., 2012.-С. 152-153.

3. Шарафетдинов И.Х., Норман К.С., Новиков C.B., Узунян Д.Г., Огородникова С.Н. Экспериментальное обоснование использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела. // Практическая медицина. - 2012. - № 4(59) 2012. - С. 146-148.

4. Норман К.С., Тахчиди Х.П., Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Новиков C.B., Шацких A.B. Первый опыт использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела на глазах экспериментальных животных. // Актуальные прблемы офтальмологии: Сборник научных работ ,-М. 2011.-С. 201-202.

5. Тахчиди Х.П., Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Новиков C.B., Шацких A.B., Норман К.С. Экспериментальное обоснование использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела (предварительное сообщение). // Современные технологии лечения витреоретинальной патологии: Научно-практ. конф.: Материалы.-М„ 2011.-С. 164-166.

6. Тахчиди Х.П., Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Норман К.С. Роль витреоретинального соединения в патологии заднего отрезка глаза

и способы отделения задних гиалоидных слоев стекловидного тела // Офтальмохирургия. - 2011. - № 3. - С. 84-88.

7. Тахчиди Х.П., Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Шацких A.B., Норман К.С. Экспериментальное обоснование использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела // ВЕСТНИК ОГУ. - 2011. - № 14(133). - С. 363-366.

8. Тахчиди Х.П., Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Шацких A.B., Норман К.С. Экспериментальное обоснование использования миниплазмина с целью индукции задней отслойки стекловидного тела // Научные ведомости Бел ГУ. - 2011. - №16(111). - С. 194-198.

Патенты РФ на изобретения по теме диссертации

Шкворченко Д.О., Шарафетдинов И.Х., Новиков C.B., Шацких A.B., Норман К.С. Способ индукции задней отслойки стекловидного тела с помощью миниплазмина. Заявка № 2011134578/14(051219), дата подачи заявки 18.08.2011

Биографические данные

Норман Кирилл Сергеевич, 1984 года рождения, в 2007 году окончил Курский государственный медицинский университет, по специальности «лечебное дело». С 2007 по 2009 год проходил обучение в клинической ординатуре по специальности «офтальмология» на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. С 2009 по 2012 год обучался в очной аспирантуре на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России.

Подписано в печать: 02.11.2012 Тираж 150 экз. Заказ №1021 Отпечатано в типографии «Реглет» г. Москва, Ленинградский пр-т д.74 (495)790-74-77 www.reglet.ru

Оглавление диссертации Норман, Кирилл Сергеевич :: 2012 :: Москва

Список сокращений

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Роль задних кортикальных слоев стекловидного 13 тела в развитии витреоретинальной патологии

1.2. Методы отделения задних кортикальных слоев стекловидного 21 тела от внутренней пограничной мембраны сетчатки

1.3 Применение рекомбинантного плазмина и его фрагментов в 30 офтальмологии с целью индукции ЗОСТ

Резюме

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.1 Характеристика миниплазмина

2.1.2 Теоретический расчёт эффективной дозы миниплазмина

2.1.3 Экспериментальные исследования времени амидолитической активности рассчитанной дозы препарата миниплазмина в полости стекловидного тела глаза кролика in vivo

2.1.4 Экспериментальные исследования действия рассчитанной дозы миниплазмина на индукцию ЗОСТ в изолированных свиных глазах ex vivo

2.2. Структура эксперимента

2.3. Инструментальные методы исследования

2.4. Интраоперационные методы исследования

2.5. Морфологические методы исследования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Характеристика времени амидолитической активности рассчитанной дозы миниплазмина в полости стекловидного тела глаза кролика in vivo

3.2. Результаты экспериментальных исследований действия рассчитанной дозы миниплазмина на индукцию задней отслойки стекловидного тела в свиных глазах ex vivo 45 Резюме

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТА in vivo

4.1. Результаты инструментальных методов исследования 51 4.1.1 Результаты исследования витреоретинального интерфейса (В-сканирования и ОКТ)

4.2. Результаты интраоперационного метода исследования

4.3. Показатели электроретинографических исследований

4.4. Результаты морфологических методов исследования

4.4.1. Результаты световой микроскопии

4.4.2. Результаты сканирующей электронной микроскопии 71 Резюме

Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Норман, Кирилл Сергеевич, автореферат

Последние годы развития витреоретинальной хирургии ознаменовались рядом новых позиций позволившим достигнуть качественно нового уровня в лечении больных.

В первую очередь это касается применения микроинвазивной трехпортовой техники витрэктомии, использование одноразового режущего инструмента диаметром 25 в, 27 в, нового поколения световодов и эндовитреальных инструментов. Все вместе взятое позволило резко уменьшить травматичность операций, снизить сроки реабилитации и добиться улучшения функциональных результатов оперативного лечения.

Основную группу заболеваний заднего отрезка глаза нуждающихся в витреоретинальном вмешательстве составляют: диабетический макулярный отек, идиопатический макулярный разрыв, витреомакулярный тракционный синдром [27].

Следует признать тот факт, что неустановлена специфическая причина, или причины, приводящие к развитию указанных заболеваний, позволившие активно вмешаться в лечение болезни на фоне снижения травматичности и повышения эффективности предложенного лечения [11, 16, 20, 23, 24, 65].

Последнее время наибольший интерес исследователей привлекает изучение задних кортикальных слоев стекловидного тела [20, 61, 167].

Тот факт, что при спонтанно состоявшейся задней отслойки стекловидного тела у всех перечисленных нозологических форм заболеваний отмечается стабилизация, а зачастую улучшение течения процесса, свидетельствует о том, что одним из общих условий возникновения болезни является состояние задних кортикальных слоев стекловидного тела [20, 29, 62, 120, 148, 153].

Обще признано, что основным анатомическим объектом, на который направлено витреоретинальное воздействие, являются задние кортикальные слои стекловидного тела [5, 7, 8, 12, 13, 15, 17, 25, 26, 28, 32, 33, 35, 115].

Однако в силу определенной ограниченности технических возможностей объем хирургического вмешательства вынужденно расширяется, включая в себя зачастую удаление интактного стекловидного тела вплоть до субтотальной витрэктомии, при этом наибольшую трудность представляет выделение и удаление задних кортикальных слоев стекловидного тела от внутренней пограничной мембраны сетчатки [10, 13, 127, 173].

Описанные методы отделения задних кортикальных слоев стекловидного тела от внутренней пограничной мембраны сетчатки можно разделить на два направления - механические и «фармакологический витреолизис».

При применении способов механической направленности частота ятрогенных осложнений колеблется в пределах от 12 до 69 % [53, 123, 124].

Идеологией второго направления является безоперационное ферментативное воздействие на область витреоретинального соединения [132, 140, 144, 151, 156, 157].

Выполненные экспериментальные исследования, направленные на изучение возможности применения ряда ферментов: хондроитиназа, гиалуронидаза, диспаза и другие продемонстрировали перспективность этого направления как наиболее безопасного с точки зрения достижения биохимической индукции задней отслойки стекловидного тела. Однако невысокая эффективность результатов выдвигает задачи поиска новых более адаптированных для данной цели ферментативных препаратов [93, 104, 123, 171].

Последние годы внимание зарубежных исследователей привлечено к плазмину, а точнее к его модифицированной форме под названием микроплазмин [81, 158,161]. По ряду сообщений интравитреальное введение микроплазмина и его воздействие на содержащиеся в витреоретинальном соединении гликопротеиды, фибронектин и ламинин приводят к ослаблению адгезии задних кортикальных слоев стекловидного тела и внутренней пограничной мембране сетчатки, возникновению задней отслойки стекловидного тела в условиях эксперимента в 100% [49, 55, 110, 142, 154].

Российскими учеными в ФГУ Российский кардиологический научно-производственный комплекс Росмедтехнологий была получена новая оригинальная патентозащищенная (патент на изобретение № 2432396 от 27.10.2011) рекомбинатная форма модифицированного плазмина, которая была названа миниплазмином. Миниплазмин это форма плазмина, у которого помимо активного центра оставлен один крингл - домен. Наличие крингл домена, а также оригинальная последовательность аминокислот в строении миниплазмина улучшает структуру молекулы, что увеличивает его способность гидролизировать фибронектин и ламинин, и оптимизирует процесс его получения.

Изложенное выше указывает на то, что проблема индукции ЗОСТ остается не решенной. По нашему мнению, интравитреальное использование плазмина и его фрагментов, в частности миниплазмина, является перспективным направлением с точки зрения безоперационной индукции задней отслойки стекловидного тела, что бесспорно позволит повысить эффективность лечения на фоне существенного снижения травматичности. Научные поиски в этом направлении всецело отвечают современному принципу офтальмохирургии «экономичного» использования ткани, что подразумевает под собой минимальную травматичность с одной стороны и достаточность для достижения стойкого эффекта - с другой (Тахчиди Х.П., Иванов Д.И., Бардасов Д.Б. 2003).

Состояние современной науки не позволяет моделировать болезнь человека в полном объеме у животных. Однако экспериментальные модели отдельных звеньев в патогенезе болезней вещь вполне реальная. Это позволило нам выполнить исследования, Целью которого явилось экспериментально-морфологическое обоснование применения ферментативной индукции задней отслойки стекловидного тела с помощью миниплазмина.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить возможность использования миниплазмина для индукции задней отслойки стекловидного тела.

2. Теоретически обосновать, рассчитать и лабораторно подтвердить дозу и время максимальной амидолитической активности миниплазмина, вызывающей индукцию задней отслойки стекловидного тела в глазах животных.

3. Выявить влияние рассчитанной для индукции задней отслойки стекловидного тела дозы миниплазмина и близких к ней доз на витреоретинальное соединение в эксперименте на животных.

4. Определить оптимальную эффективную дозу миниплазмина для индукции задней отслойки стекловидного тела и время его экспозиции в эксперименте на животных.

Научная новизна

4. Впервые доказано, что задняя отслойка стекловидного тела может индуцироваться при использовании миниплазмина в дозах 180 и 240 мкг, при этом на фоне идентичных морфо-структурных изменений витреоретинального интерфейса, функциональная активность сетчатки восстанавливается в 7 раз быстрее при использовании меньшей дозы.

Практическая значимость

1. Доказано, что миниплазмин может быть использован в качестве индуктора задней отслойки стекловидного тела.

2. Проведенные исследования по использованию миниплазмина для ферментативного витреолизиса позволяют рекомендовать его к клинической апробации с целью уменьшения травматичности витреоретинальных вмешательств.

Основные положения, выносимые на защиту

Миниплазмин в дозе 180 мкг при времени экспозиции 60 минут вызывает заднюю отслойку стекловидного тела в глазах экспериментальных животных ех vivo и in vivo, при этом сохраняется его максимальная амидолитическая активность и не оказывается токсическое воздействие на структуры глазного яблока.

Формы внедрения

Результаты проведенных исследований изложены в докладах на научно-практических конференциях, публикациях, кандидатской диссертации, используются при чтении лекций в ФГБУ «РКНГПС» Минздрава России.

Апробация работы

Публикации

Объем и структура диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИНИПЛАЗМИНА С ЦЕЛЬЮ ИНДУКЦИИ ЗАДНЕЙ ОТСЛОЙКИ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА"

Выводы

2. Теоретически рассчитана и экспериментально обоснована эффективная доза миниплазмина 180 мкг, не оказывающая токсического влияния на структуры глаза экспериментальных животных, обладающая выраженной амидолитической активностью в течение первых 60 минут после интравитреального введения и вызывающая полную заднюю отслойку стекловидного тела.

3. В эксперименте на кроликах установлено, что дозы миниплазмина 180 и 240 мкг при экспозиции 60 минут, вызывают идентичную полную заднюю отслойку стекловидного тела, при этом восстановление функциональной активности сетчатки в глазах экспериментальных животных с дозой 180 мкг происходит в 7 раз быстрее.

4. Двукратное превышение установленной эффективной дозы миниплазмина (360 мкг) вызывает развитие выраженных экссудативных явлений в глазах экспериментальных животных.

Заключение

В первую очередь это касается применения микроинвазивной трехпортовой техники витрэктомии, использование одноразового режущего инструмента диаметром 25 О, 27 О, нового поколения световодов и эндовитреальных инструментов. Все вместе взятое позволило резко уменьшить травматичность операций, снизить сроки реабилитации и добиться улучшения функциональных результатов оперативного лечения.

Таким образом, наиболее безопасным методом удаления задних кортикальных слоев стекловидного тела потенциально может являться биохимическая индукция задней отслойки стекловидного тела, которая позволяет достичь истинную заднюю отслойку стекловидного тела без выполнения интравитреальной операции.

Целью настоящего исследования явилось экспериментально-морфологическое обоснование применения ферментативной индукции задней отслойки стекловидного тела с помощью миниплазмина.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи.

1. Определить возможность использования миниплазмина для индукции задней отслойки стекловидного тела.

Работа носит экспериментальный характер, основана на результатах доклинических испытаний отечественного препарата миниплазмина в качестве индуктора задней отслойки стекловидного тела. Исследование состояло из 2-х серий: 1-ая серия лабораторная на изолированных свиных глазах, 2-ая серия эксперимент in vivo на глазах лабораторных животных.

Одним из первых вопросов требовавших аргументированного ответа являлся вопрос об определении экспериментальной дозы миниплазмина. По данным зарубежных исследований эффективная доза микроплазмина составляет 125 мкг при экспозиции 60 мин. Однако различие в строении препаратов не позволяют слепо ориентироваться на указанные препараты при применении миниплазмина. Нами были проведены математические расчеты направленные на определение эффективной дозы миниплазмина. Согласно нашим расчетам она оказалась равна 180 мкг.

Следующий этап наших исследований сводился к определению активности миниплазмина амидолитическим методом.

Далее мы перешли к определению активности миниплазмина. Активность миниплазмина определяли амидолитическим методом.

Эксперимент проводили на лабораторных животных in vivo (кроликов). В опытные глаза (OD) вводили миниплазмин в количестве 180 мкг (100 мкл раствора с концентрацией 1,8 мг/мл), в часть контрольных глаз (OS) вводили физиологический раствор, из других контрольных глаз (OS) однократно были взяты фрагменты интактного стекловидного тела в качестве контроля.

В результате проведенных исследований были установлены следующие результаты: изначальная доза миниплазмина 180 мкг введенная в стекловидное тело в опытные глаза лабораторных животных проявляет свою максимальную активность в промежутке от 15 мин до 60 мин и составляет с 0,28 до 0,05 уел ед акт.

Далее мы перишли к 1-ой серии экспериментов, выполненных на свежих изолированных свиных глазах. В эксперимент вошло 10 глаз (5 пар). Время от момента забоя до эксперимента составила 60±10 мин. Глаза были распределены на две группы. В опытные (OD) глаза вводили миниплазмин в дозе 180 мкг, в контрольные (OS) физиологический раствор.

По итогам первой серии эксперимента в лабораторных условиях установлено.

Миниплазмин в дозе 180 мкг вызывает индукцию задней отслойки стекловидного тела в изолированных препаратах глазных яблок в эксперименте ex vivo. Для получения данного эффекта ему требуется от 15 до 60 мин.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования интравитреального введения миниплазмина с целью отслойки задних кортикальных слоев стекловидного тела, поэтому далее мы преступили к экспериментальным исследованиям на кроличьих глазах in vivo, для подтверждения полученных данных и отработки методики в максимально приближенных к клинике условиях.

2-ая серия - эксперимент in vivo выполнен на лабораторных животных -28 кроликах (56 глаз) породы Шиншилла весом от 2,0 до 3,5 кг в возрасте 4-6 месяцев. Исследование направлено на экспериментальное определение оптимальной эффективной дозы и времени экспозиции миниплазмина для индукции ЗОСТ.

Эксперимент in vivo на кроличьих глазах позволил определить динамику возникновения ЗОСТ во времени.

Всем кроликам в опытные глаза (OD) интравитреально вводили миниплазмин в дозе от 65 до 360 мкг в связи с чем животные были разбиты на 6 групп. Контролем служил парный глаз (OS), в который также интравитреально вводили аналогичное количество физиологического раствора.

Для оценки структур глаза в динамике, всем кроликам через 15, 30, 60, 120 мин, 1-й сутки после операции (интравитреальное введение) выполняли биомикроскопию, осмотр глазного дна с помощью непрямой бинокулярной офтальмоскопии и электроретинографические исследования (ЭРГ).

Регистрацию задней отслойки стекловидного тела проводили при помощи B-сканирования через 30, 60, 120 мин и 1-й сутки. Для подтверждения результатов B-сканирования также выполняли OKT.

Одним из методов оценки возникновения задней отслойки стекловидного тела являлось интраоперационное определение легкости удаления задних кортикальных слоев стекловидного тела от внутренней пограничной мембраны через 12 часов после введения.

Так же для подтверждения задней отслойки стекловидного тела выполняли морфологические методы исследования, в которые входили световая электронная микроскопия и сканирующая электронная микроскопия.

По итогам второй серии эксперимента in vivo установлено.

Миниплазмин в дозе 180 мкг и 240 мкг с экспозицией 60 мин является эффективной дозировкой для индукции задней отслойки стекловидного тела в глазах экспериментальных животных in vivo. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования интравитреального введения миниплазмина с целью отслойки задних кортикальных слоев стекловидного тела. Выполненные ЭРГ позволили нам проследить зависимость исследуемых показателей от дозы вводимого препарата. Полученные результаты - позволили подтвердить правильность раннее высказанное нами предположение о целесообразности применения миниплазмина в дозе 180 мкг.

Клиническое наблюдение и гистологическое исследование, с длительным сроком (6 месяцев) пребывания миниплазмина в полости стекловидного тела в глазах экспериментальных животных, показало полную безопасность интравитреального использования миниплазмина в дозе 180 мкг.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Норман, Кирилл Сергеевич

1. Алпатов С.А., Щуко А.Г., Малышев В.В. Идиопатические макулярные разрывы. Иркутск, 2002. - С. 50-52.

2. Архангельский В.Н. Физиология и патология стекловидного тела. // Труды 1-го Моск. мед. ин-та им. Сеченова И.М. М., 1964. - Т. 32. - С. 7-27.

3. Балашевич Л.И., Сомов Е.Е., Джусоев Т.Ми др. Бесшовная витрэктомия. // Современные технологии лечения витреоретинальной патологии: Сб. науч. ст.-М., 2002.-С. 17-21.

4. Барабаш Н.С. Ранняя витрэктомия при диабетической ретинопатии (клиническое и морфологическое исследование): Дис. . канд. мед. наук. -М., 1987.

5. Батманов Ю. Е., Серебряков Г. В. Тотальная витрэктомия в глазах с рецидивирующими гемофтальмами. // Вестн. Офтальмологии. 1985. - №1. -С. 24-25.

6. Вит В.В. Строение зрительной системы человека // Одесса: Астропринт.-2003.- 226 с.

7. Волков В. В., Горбань А. И. Витреоретинальная хирургия. // Всероссийский съезд офтальмологов 3-ий: Тез. докл. -М., 1975. Т.1. — С.207-215.

8. Глинчук Я.И. Роль витрэктомии в лечении заболеваний глаз травматической, дегенеративной и воспалительной этиологии.: Дисс. доктора мед наук М., 1987.-378с.

9. Глинчук Я.И., Сидоренко В.Г., Каштан О.В., Шкворченко Д.О. Перфторполиэфиры новые жидкие перфторорганические соединения для витреоретинальной хирургии. // Съезд офтальмологов России, 6-й: Сб. материалов. - М., 1994.-С. 133.

10. Глинчук Я. И., Субанбаева 3. К., Кисилев А. В. Клинический анализ отдаленных результатов лечения отечно-гемморагических форм диабетической ретинопатии. // Офтальмохирургия. 1997. - №2. - С. 68-75.

11. Брошевский Т. И., Мачехин В. А., Белянин А. Ф. Закрытая витрэктомия в лечении больных с гемофтальмами. // Вестн. Офтальмологии. 1984. - №3. -С. 28-30.

12. Кирш Ю.Э. // Поли -N-винилпирролидон и другие поли- N-амиды. -М.,1998. С.8-40.

13. Кисилев A.B. Классификация заболеваний центрального отдела глазного дна и выбор тактики их хирургического лечения. // Волжские зори: Сб. тез. докл.регион.конф.офтальмологов, посв.З 5-летию Самарской офталмол.клин.б-цы.- Самара, 1999.-С. 104-105.

14. Кисилев A.B. Комплексное хирургическое лечение патологии центрального отдела глазного дна: Дис. канд. мед. наук- М., 2001- 236 с.

15. Лыскин П.В. Первичная механическая и биохимическая витрэктомия в бесциркляжной хирургии отслойки сетчатки // Научно-практ. конф.: Материалы. М., 2007. - С. 87-89.

16. Махачева 3. А. Анатомия стекловидного тела / 3. А. Махачева // Офтальмохирургия.- 1994.- № 2.- С. 38-42.

17. Махачева З.А. Анатомо-функциональное обоснование хирургических вмешательств на стекловидном теле при витреальной деструкции: Дис. док. мед. наук.- Москва, 1994,- с.220.

18. Махачева З.А. Анатомо-функциональное обоснование хирургических вмешательств на стекловидном теле при витреальной деструкции: Дис. . д-рамед. наук. М., 1994. - С. 39-55, 67-71, 190-198.

19. Махачева 3. А. Стекловидное тело: новые анатомо-физиологические данные: Лекция для врачей-офтальмологов, интернов, клинических ординаторов / 3. А. Махачева.- М.: Изд-во МНТК «Микрохирургия глаза», 1996.- 11 с.

20. Назарян М. Г. Экспериментально-клиническое исследование травматичности удаления кортикальных слоев стекловидного тела механическим и гидроделаминационным методами: Дис. канд. мед. наук-М., 2009.-С. 33-34.

21. Саркисян А. И. Хирургическое лечение макулярных отеков после экстракции катаракты: Дис. канд.мед. наук. М., 1994. - С. 54-89.

22. Сдобникова C.B. Роль удаления задней гиалоидной мембраны в трансвитреальной хирургии пролиферативной диабетической ретинопатии: Дис. канд. мед. наук- М., 1997.- 67-68 с.

23. Сдобникова C.B., Столяренко Г.Е., Мазурина Н.К. Задняя гиалоидная мембрана и «ранние» показания к хирургическому лечению пролиферативной диабетической ретинопатии //170 лет. Актуальные вопросы офтальмологии, ч.1: Сб. научн. тр.- М., 1996.- с.220-225.

24. Сдобникова C.B., Столяренко Г.Е., Федоров A.A., Марченко Н.Р. Роль задней гиалоидной мембраны в патогенезе и хирургии пролиферативной диабетической ретинопатии // Вестник офтальмологии.- 1996.- № 4.1. С. 5-7.

25. Столяренко Г.Е. Хирургическое лечение транссудативных макулопатий: Дис. д-ра мед. наук. М., 1990. - С. 58-75.

26. Субанбаева З.К. Хирургическое лечение отечно-гемморагических форм диабетической ретинопатии (с применением перфторорганических соединений): Дис. канд. мед. наук. -М. 1997. С.45-79.

27. Тахчиди Х.П. Избранные отделы витреальной хирургии. М.: Медицина, 2002.-С. 32-35.

28. Федоров С. Н. Вопросы витреальной хирургии // Всесоюзный съезд офтальмологов, 6-й: Тез. докл. -М., 1985.- Т.6.- С.139-147.

29. Федоров С. Н., Глинчук Я.И. Возможности трансцилиарных интраокулярных вмешательств с помощью витреотома. // Вестн. Офтальмологии. 1982. - №5. - С. 28-32.

30. Федоров С. Н., Махачева 3. М., Глинчук Я. И. Влияние закрытой витрэктомии на функциональное состояние глаз и течение пролиферативной диабетической ретинопатии. // Вест. Офтальмологии. 1985. - №4. - С. 2933.

31. Федоров С. Н. Трансцилиарная хирургия. // Трансцилиарная хирургия хрусталика и стекловидного тела: Сб.науч. статей / МНИИ Микрохирургия глаза.-М., 1982.-С. 3-11.

32. Хорошилова-Маслова И. П., Ганковская JI. В., Кисилева О. А. Роль иммунных факторов в патогенезе пролиферативной витреоретинопатии. // Актуальные вопросы патологии глазного дна: Сб. науч. трудов. М. 1997. -С. 149-151.

33. Шарафетдинов И.Х. Экспериментально-клиническое обоснование использования Витреосинеретика для индукции задней отслойки стекловидного тела при проведения субтотальной витрэктомии: Дис. канд. мед. наук. М., 2002.

34. Шкворченко Д. О. Шарафетдинов И. X., Тимохов В. JI с соавт. Новый способ хирургического лечения макулярных разрывов. // Съезд офтальмологов России, 7-ой: Тез. докл. М., 2000. - 4.1. - С.508.

35. Шкворченко Д. О. Шарафетдинов И. X., Хорошилова-Маслова И. П. Индукция задней отслойки стекловидного тела путем интраоперационного витреосинерезиса при введении водорастворимых полимеров. // Вестн. офтальмологии. 2001. - №3. - С.16-20.

36. Эффендиев Н. М. Морфологические и биофизические исследования экспериментального гемофтальма. // Вестн. офтальмологии. 1983. - №1. -С.43-48.

37. Эффендиев Н. М. Патогенез швартообразования в стекловидном теле при экспериментальном кровоизлиянии. // Проблемы офтальмологии: Материалы науч. конф., поев. 100-летию со дня рождения В.П. Филатова. -Киев: Здоровье, 1976. С. 215-216.

38. Ai Uemura MD, Makoto Nakamura, MD. Effect of Plasmin on Laminin and Fibronectin During Plasmin-Assisted Vitrectomy. // Arch Ophthalmol. 2005. -Vol. 123.-P. 209-213.

39. Akiba J., Arzabe C.W., Trempe C.L. Posterior vitreous detachment and neovascularization in diabetic retinopathy. // Ophthalmology. 1990. - Vol. 97. -P. 889-891.

40. Akiba J., Kakehashi A., Arzabe C.W., et al. Risk of developing a macular hole. // Arch. Ophthalmol. 1990. - Vol.108.-P. 1088-1090.

41. Akiba J., Trempe C. L. Prognosis of fellow eyes in idiopathic macular hole cases. // Acta Soc. Ophthalmol. Jpn. 1991. - Vol.95. - P. 686-691.

42. Antonetti D.A., Barber A.J., Khin S., et.al. Vascular permeability in experimental diabetes associated with reduced endothelial occluding content. // Diabetes. -1998. Vol. 47. - P.1953-1959.

43. Armand G., Chakrabarti B. Conformation differences between hyaluronate of gel and liquid Human vitreous fractionation and circular dichroism studies. // Curr. Eye Res. - 1987.-Vol. 6. - P.445-450.

44. Arnd Gandorfer et al. Microplasmin-Induced Posterior Vitreous Detachment. // Invest. Ophthalmology Vis Sci. 2004. - Vol. 46. - P. 641-647.

45. Arnd Gandorfer, Matthias Rohleder, Charanjit Sethi. Posterior Vitreous Detachment Induced by Microplasmin. // IOVS. 2004. - Vol. 45. - P. 641-647.

46. Arnd Gandorfer, Messmer E.M., Ulbig M.V., et.al. Resolution of macular edema after surgical removal of the posterior hyaloid and inner limiting memebrane. // Retina. 2000. - Vol. 20. - P. 126-133.

47. Asacura A. Histochemistry of hyaluronic acid of the bovine vitreous body as studied by electronmicroscopy. // Acta Soc. Ophthalmol. J. — 1985. Vol. 89. -P.179-191.

48. Balazs E.A., Toth L.Z., Eckl E.A., Mithcell A.P. Studies on the structure of the vitreous body. XII. Cytological and histochemical studies on the cortical tissue layer // Exp. Eye Res. 1964. - Vol. 3. - P. 57-71.

49. Banker A.S., Freeman W.R., Kim J.W., et al. Vision-threatening complications of surgery for fiill-thickness macular holes. Vitrectomy for Macular Hole Study Group. // Ophthalmology. 1997. -Vol. 104. - P. 1442-1452.

50. Bailey A. Structure, function and ageing of the collagens of the eye // Eye. -1992.-Vol. 24.-P. 175-181.

51. Benz M.S. et al. A placebo-controlled trial of microplasmin intravitreous injection to facilitate posterior vitreous detachment before vitrectomy. // Ophthalmology. 2010 Feb 4 Epub ahead of print.

52. Bishop P.N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. // Prog Retin Eye Res. 2000. - Vol. 19. - P. 323 - 344.

53. Bishop P.N, McLeod D., Reardon A. Effects of hyaluronan lyase, hyaluronidase, and chondroitin ABC lyase on mammalian vitreous gel. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1999. - Vol. 40. - P. 2173-8.

54. Boniuk M. Cystic macular edema secondary to vitreoretinal traction. // Surv. Ophthalmol. 1969. - Vol. 13. - P. 118-121.

55. Busacca A. La structure biomicroscopique du corps normal // Ann. Oculist. -1958. Vol. 91. -P. 477-499.

56. Chen W., Huang X., Ma X.W., Mo W., Wang W.J., Song H.Y. Enzymatic vitreolysis with recombinant microplasminogen and tissue plasminogen activator. // Eye (Lond). 2008. - Vol. 22. - P. 300-307.

57. Cherfan G.M., Smiddy W.E., Michels R.G. et al. Clinicopathologic correlation of pigment epiretinal membranes// Am. J.Ophthalmol.- 1988.- Vol. 106.- № 5. P. 536-545.

58. Davis M.D. Vitreous contraction in proliferative diabetic reri-nopathy. // Arch. Ophthalmol. 1965. -Vol.74. -P.741-751.

59. De Bustros S. Early stages of macular holes: to treat or not to treat. // Arch. Ophthalmol. 1990. Vol. 108. - P. 979-982.

60. Engvall E., Ruoslahti E., Miller E.J. Affinity of fibronectin to collagens of different genetic types and to fibrinogen. // J Exp Med. 1978. - Vol. 147. P. 1584-1595.

61. Federman J.L., Gouras P., Schubert H. Retina and vitreous // Textbook of ophthalmology. Vol. 9 / Ed. by S.M. Podos, M. Yanoff. St. Louis: C.V. Mosby, 1994.

62. Ferris F.L., Patz A. Macular edema: a complication of diabetic retinopathy. // Surv. Ophthalmol. 1984. -Vol. 28 (suppl). - P. 452-461.

63. Foidart J.M., Bere E.W. Jr., Yaar M. et al. Distribution and immunoelectron microscopic localization of laminin, a noncollagenous basement membrane glycoprotein. // Lab Invest. 1980. - Vol. 42. - P. 336-342.

64. Foos R.Y. Vitreoretinal juncture; topographical variations. // Investigative Ophthalmology.- 1972.- Vol.11.-P.801-808.

65. Foos R.Y., Wheeler N.C. Vitreoretinal juncture. Synchysis senilis and posterior vitreous detachment.// Ophthalmology.- 1982.- Vol.89.- P. 1502-1512.

66. Frenzel E.M., Neely K.A., Walsh A.W., Cameron J.D., Gregerson D.S., A new model of proliferative vitreoretinopathy. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1998. -Vol. 39.-P. 2157-2164.

67. Gartner J. Vitreous electron microscopic studies on the fine structure of the normal and pathologically changed vitreoretinal limiting membrane.// Surve. Ophthalmol. 1964. - Vol. 9. - P. 291-294.

68. Gass J.D. Reappraisal of biomicroscopic classification of stages of development of a macular hole. // Am. J. Ophthalmol. 1995. - Vol. 119. - P.752-759.

69. Gaudric A., Haouchine B.} Massin P., et al. Macular hole formation: new data provided by optical coherence tomography. // Arch. Ophthalmol. 1999. - Vol. 117.-P. 744-751.

70. Green W.R, Sebag J. Vitreoretinal interface. // In: Ryan SJ, ed.Retina. Elsevier, Mosby. 2006. - Vol. 3. - P. 1921-1991.

71. Guyer D., de Bustros S., Diener-West M., et al. The natural history of idiopathic macular holes and cysts. // Arch. Ophthalmol. 1992. - Vol. 110. - P.1264-1268.

72. Hageman G.S., Russell S.R. Chondroitinase-mediated disinsertion of the primate vitreous body. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1994. - Vol. 35. - P. 1260.

73. Han D., Abrams G.W., Aaberg T.M. Surgical excision of the attached posterior hyaloids // Arch. Ophthalmol. 1988. - Vol. 106. - P. 998-1000.

74. Haouchine B., Massin P., Guadric A. Foveal pseudocyst as the first step in macular hole formation: a prospective study by optical coherence tomography. // Ophthalmology. -2001. Vol. 108. - P. 15-22.

75. Hee M.R., Puliafito C.A., Wong C., et.al. Optical coherence tomography of macular holes. // Ophthalmology. 1995. - Vol. 102. - P. 748-756.

76. Heegaard S. Structure of the human vitreoretinal border region // Ophthalmolgica. 1994. - Vol. 208. - P. 82 - 91.

77. Hehkin J., Marcotte P., Yang H. The plasminogen-plasmin system. // Prog. Cardiovasc. Dis. 1992. - Vol. 34. - P. 135-164.

78. Hermel M., Schrage N.F. Efficacy of plasmin enzymes and chondroitinase ABC in creating posterior vitreous separation in the pig: a masked, placebo-controlled in vivo study. // Grafes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2007. - Vol. 245. - P. 399406.

79. Hikichi T., Kado M., Yoshida A. Intravitreal injection of hyaluronidase cannot induce posterior vitreous detachment in the rabbit. // Retina. 2000. - Vol. 20. -P. 195-198.

80. Hikichi T., Yoshida A., Akiba J., et. al. Natural outcome of stage 1, 2, 3 and 4 idiopathic macular hole. // Br. J. Ophthalmol. 1995. - Vol.79. - P. 517-520.

81. Hikichi T., Ynagira N., Kado M. et al. Posterior vitreous detachment induced by injection of plasmin and sulfur hexafluoride in the rabbit vitreous. // Retina.1999.-Vol. 19.-P. 55-58.

82. Hossein Nazari, MD; Mehdi Modarres-Zadeh, MD; Arash Maleki, MD. Pharmacologic Vitreolysis. // J Ophthalmic Vis Res. 2010. - Vol. 5 (1). - P. 4452.

83. Ikeda T., Sato K., Katano T., et.al. Vitrectomy for cystoid macular edema with attache posterior hyaloid membrane in patients with diabetes. // Br. J. Ophthalmol. 1999.-Vol. 83.-P. 12-14.

84. Irie Y. Neutral protease useful for animal tissue and cell culture. U. S. Patent No. 3948725.-1976.

85. Jaffe N.S. The vitreous in clinical ophthalmology //C.V.Mosby Company: St.Louis, 1969.- P.-310.

86. Jalkh A, Takahashi M, Topilow HW. Prognostic value of vitreous findings in diabetic retinopathy. // Arch Ophthalmol. 1982. - Vol. 100. - P. 432-434.

87. Jamper J. M., Embabi S.M., Toth C.A et. al. Electron immunocytochemical analysis of posterior hyaloid associated whit diabetic macular edema. // Retina.2000.-Vol. 20. -P.63-68.

88. Johnson R.N., Gass J.D. Idiopathic macular holes. Observations, stages of formation and implications for surgical intervention. // Ophthalmology. 1988. -Vol. 95.-P. 917-924.

89. Jorge R, Oyamaguchi EK, Cardillo JA, Gobbi A, Laicine EM, Haddad A. Intravitreal injection of dispase causes retinal hemorrhages in rabbit and human eyes. // Curr Eye Res. 2003. - Vol. 26. - P. 107-112.

90. Kadonosono K., Itoh N., Ohno S. Perifoveal microcirculation before and after vitrectomy for diabetic cystoid macular edema. //Am. J. Ophthalmol. 2000. -Vol. 130. -P.740-744.

91. Kaiser P.F., Reimann C.D, Sears J.E., et.al. Macular traction detachment and diabetic macular edema associated with posterior hyaloid traction. // Am. J. Ophthalmol. -2001. Vol. 131. - P. 44-49.

92. Kakehashi A., Schepens C.L., Akiba J., et al. Spontaneous resolution of foveal detachments and macular breaks. // Am. J. Ophthalmol. 1995. Vol. - 120. - P. 767-775.

93. Kerrison J.B., Haller J. A., Elman M. et al. Visual field loss following vitreous surgery. // Arch. Ophthalmol. 1996. - Vol. 114. - P. 564-569.

94. Kishi S., Demaria C., Shimizu K. Vitreous cortex remnants at the fovea after spontaneous vitreous detachment. // Int. Ophthalmol. 1986. - Vol. 9. - P. 253260.

95. Klein R., Klein B.E., Moss S.E., et.al. The Wisconsin Epidemiologic Study of Diabetic Retinopathy, IV: Diabetic macular edema. // Ophthalmology 1984. -1984.-Vol. 91.-P. 1464-1474.

96. Kohno T., Sorgente N., Goodnight R., Ryan S.J. Alterations in the distribution of fibronectin and laminin in the diabetic human eye. // Invest Ophthalmol Vis Sci.-1987.-Vol. 28.-P. 515-521.

97. Kohno T., Sorgente N., Ishibashi T. Immunofluorescent studies of the fibronectin and laminin in the human eye // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1987.-Vol. 28.-P. 506-514.

98. Krebs I., Brannath W., Glittenberg K., Zeiler F., Sebag J., Binder S. Posterior vitreo- macular adhesion: a potential risk factor for exudative age-related macular degeneration. // Am J Ophthalmol. 2007. - Vol. 144. - P. 741-746.

99. Kuppermann B.D., Thomas E.L. Hyaluronidase. // Retina. 2001 Subspeciality day: Am. Acad. Ophthalmol. New Orleans. - 2001. - P.293-298.

100. Li X, Shi X, Fan J. Posterior vitreous detachment with plasmin in the isolated human eye. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2002. - Vol. 240. - P. 56-62.

101. Machemer R., Parel J-M., Buetter H. A new concept for vitreous surgery. Instrumentation // Am. J. Ophthalmol. 1972. - Vol. 73. - P. 1-7.

102. Marc D. de Smet, Christophe Valmaggia, Javier Zarranz-Ventura, and Ben Willekens. Microplasmin: Ex Vivo Characterization of Its Activity in Porcine Vitreous. // IOVS.-2009.-Vol. 50.-P. 814-819.

103. Margherio A.R., Margheritt R.P., Hartzer M. et al. Plasmin enzyme-assisted vitrectomy in traumatic pediatric macular holes. // Ophthalmology. 1998. - Vol. 105. -P.1617-1620.

104. Matsumoto B., Blanks J.C., Ryan S.J. Topographic variations inthe rabbit and primate internal limiting membrane. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1984. - Vol. 25.-P. 71-82.

105. McLeod D., Hiscott P. S., I. Grierson I. Age-Related Cellular proliferation at the vitreoretinal juncture.//Eye.- 1987.-Vol. l.-P. 263-281.

106. Mein C.E., Flynn J. Recognition and removal of the posterior cortical vitreous during vitreoretinal surgery for impending macular hole // Am. J. Ophthalmol. -1991.-Vol. 111.-P. 611-613.

107. Michels R.G. Vitreous surgery. // Ophthalmic surgery / Ed. By Rice T. -London, 1984.-P. 209-254.

108. Morgan C.M., Schatz H. Involutional macular thinning: a pre-macular hole condition. // Ophthalmology. 1986. - Vol. 9. - P. 153-161.

109. Mori K., Abe T., Yoneya S. Vitreoretinal tomography and foveolar traction in macular hole development and macular pseudohole. // Nippon Ganka Gakkai Zasshi. 1999.-Vol. 103.-P.371-378.

110. Nasrallah F. P., Jalkh A. E. The role or the vitreous in diabetic macular edema. // Ophthalmology. 1988 Vol. 95. - P. 1335-1339.

111. Nauman G. O., Apple D. J. Pathology of the eye. New York: SpringerVerlag, 1998.-P. 438-447.

112. Ochoa-Contreras D., Delsol-Coronado L., Buitrado-Martinez M., et.al. Progression of diabetic retinopathy in patients with induced posterior vitreous detachment ARVO abstract no.1601.// Invest. Ophthalmol Vis. Sei.- 1999.-Vol.40.- P.303.

113. Okajima K., Abe H., Binder B. R. Endothelial cell injury induced by plasmin in vitro // J. Lab. Clin. Med. 1995. - Vol. - 126. - P. 377-384.

114. Oliveira L. B., Tatebayashi M., Mahmoud T. H., Blackmon S. M., Wong F., McCuen B.W. 2nd. Dispase facilitates posterior vitreous detachment during vitrectomy in young pigs. Retina. 2000. - Vol. - 21. - P. 324-331.

115. Paques M., Massin P., Santiago P. Y., et al. Visual field loss after vitrectomy for full-thickness macular holes. // Am. J. Ophthalmol. 1997. - Vol. 124. - P.88-94.

116. Park D., Sipperley J. O., Sneed S. R. et al. Macular Hole Surgery with Internal-limiting Membrane Peeling and Intravitreous Air.// Ophthalmol.- 1999.-Vol.106.- P.1392-1398.

117. Park S., Marcus D. M., Duker J. S., et al. Posterior segment complications after vitrectomy for macular hole. // Ophthalmology.- 1995.- Vol. 102.-P.775-781.

118. Pendergast S. D., Hassan T. S., Williams G.A., et. al. Vitrectomy for diffuse diabetic macular edema associated with taut premacular posterior hyaloid. // Am. J. Ophthalmol.-2000.-Vol. 130.-P. 178-186.

119. Pendergast S. D., Margherio R. R., Williams G. A. Vitrectomy for chronic Pseudophakie cystoid macular edema. // Am. J. Ophthalmol. 1999. - Vol. 128. -P. 317-323.

120. Pendergast S. D., McCuen B. W. Visual field loss after macular hole surgery. // Ophthalmology. 1996. - Vol. 103. - P. 1069-1077.

121. Puliafito C. A., Hee M. R., Lin C. P., et al. Imaging of macular diseases with optical coherence tomography. // Ophthalmology. 1995. - Vol. 102.1. P. 217-229.

122. Poliner L. S., Tornambe P. E. Retinal pigment epitheliopathy after macular hole surgery. // Ophthalmology. 1992. - Vol. 99. - P.1671-1677.

123. Robison C, Krebs I, Binder S, Barbazetto I, Kopstolis A, Yannuzzi LA, Sadiun AA, Sebag J. Vitreo-macular adhesion in active and end-stage age-related macular degeneration. // Am J Ophthalmol. 2009. - Vol. 148.1. P. 79-82.

124. Quiroz H., Buzney S.M., Furukawa H. et al. Enzymatically induced posterior vitreous detachment abstract. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1984. - Vol. 25 (Suppl). - P. 307.

125. Ruby A J., Williams D.F., Grand M.G. et.al. Pars plana vitrectomy for the treatment of stage 2 macular hole.// Arch. Ophthalmol.- 1994.- Vol.112.-P.557-580.

126. Sakuma T., Tanaka M., Inoue M., Mizota A., Souri M., Ichinose A. Efficacy of autologous plasmin for idiopathic macular hole surgery. // Eur J Ophthalmol. -2005.-Vol. 15.-P. 787-794.

127. Scheiffarth O. F., Kampik A., Günther H., von der Mark K. Proteins of the extracellular matrix in vitreoretinal membranes. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1988. - Vol. 226. - P. 357-361.

128. Scott J. The chemical morphology of the vitreous. // Eye. 1992. - Vol. 6. -P.553.

129. Schepens C. L., Avila M. P., Jalkh A.E. Role of the vitreous in cystoid macular edema. // Surv. Ophthalmol. 1984. - Vol. 28 (suppl.). - P.499-504.

130. Sebag J. Anatomy and pathology of the vitreo-retinal interface. // Eye. 1992. -Vol. 6.-P. 541-552.

131. Sebag J. Molecular biology of pharmacologic vitreolysis. // Trans Am Ophthalmol Soc. 2005. - Vol. 103. - P. 473-494.

132. Sebag J. Pharmacologic vitreolysis premise and promise of the first decade. // Retina. - 2009. - Vol. 29. - P. 871-874.

133. Sebag J. The Emerging Role of Pharmacologic Vitreolysis. // Retinal Physician. 2010 (March). - P. 52-56.

134. Sebag J., Ansari R. R, Suh K. 1. Pharmacologic vitreolysis with microplasmin increases vitreous diffusion coefficients. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. -2007. Vol. 245. - P. 576-580.

135. Sebag J., Balazs E.A. Human vitreous fibres and vitreoretinal disease. // Trans Ophthalmol Soc UK. 1985. - Vol. 104. - P. 123-128.

136. Stankiewicz A., Gos A. Experimental depolymerezation of hyaluronic acid in rabbit vitreous body // Klinica Oczna. 1974. - Vol. 14. - P. 1005-1010.

137. Staubach F., Nober V., Janknecht P. Enzyme-assisted vitrectomy in enucleated pig eyes: a comparison of hyaluronidase, chondroitinase, and plasmin. // Curr Eye Res. 2004. - Vol. 29. - P. 261-268.

138. Stenman S., Vaheri A. Distribution of a major connective tissue protein, fibronectin, in normal human tissues. // J Exp Med. 1978. - Vol. 147. - P. 10541064.

139. Tachi N., Ogino N. Vitrectomy for diffuse macular edema. // Am. J Ophthalmol. 1996. - Vol. 122. - P. 258-260.

140. Tagawa H., McMeel J.W., Trempe C.L. Role of the vitreous in diabetic retinopathy: n. Active and inactive vitreous changes. // Ophthalmology. 1986. Vol. 93.-P.l 188-1192.

141. Takahashi M., Trempe S.L., Maguire K., et.al. Vitreoretinal relationship in diabetic macular retinopathy. // Arch. Ophthalmol. 1991. - Vol. 99.1. P.241-245.

142. Takano A., Hirata A., Inomata Y., Kawaji T., Nakagawa K., Nagata S., et al. Intravitreal plasmin injection activates endogenous matrix metalIoproteinase-2 in rabbit and human vitreous. // Am J Ophthalmol. 2005. - Vol. 140.1. P. 654-660.

143. Tanaka M., Qui H. Pharmacological vitrectomy. // Semin Ophthalmol. 2000. -Vol. 15.-P. 51-61.

144. Tezel T. H., Del Priore L. V., Kaplan H. J. Posterior vitreous detachment with dispase.//Retina.- 1998.-Vol. 18.-P.7-15.

145. Tolentino F. I., Lee P. F., Schepens C. L. Biomicroscopic study of vitreous cavity in diabetic retinopathy. // Arch. Ophthalmol. 1966. - Vol. 75.1. P. 238-246.

146. Toshiro Sakuma, Minoru Tanaka, Atsushi Mizota. Safety of In Vivo Pharmacologic Vitreolysis with Recombinant Microplasmin in Rabbit Eyes. // IOVS. 2005. - Vol. 46. - P. 3295-3298.

147. Trempe C.L., Weiter J.J., Furukawa H. Fellow eyes in cases of macular hole: biomicroscopic study of the vitreous. // Arch. Ophthalmol. 1986. - Vol. 104. -P. 93-95.

148. Trese M. T. Enzymatic-assisted vitrectomy. // Eye. 2002. - Vol. 16.-P. 365-368.

149. Trese M. T. Enzymatic vitreous surgery. // Semin Ophthalmol. 2000. - Vol. 15. -P. 116-121.

150. Unal M., Peyman G. A. The efficacy of plasminogen-urokinase combination in inducing posterior vitreous detachment. // Retina. 2000. - Vol. 20. - P.69-75.

151. Van Effenterre G., Guyot-Argenton C., Guiberteau B. Macular edema caused by contraction of the posterior hyaloud in diabetic retinopathy: surgical treatment of the a series of 22 cases. // J. Fr. Ophtalmol. 1993.- Vol. 16. - P.602-610.

152. Vander J. F., Kleiner R. A method for induction of posterior vitreous detachment during vitrectomy. // Retina. 1992. - Vol. 12. - P. 172-173.

153. Verstraeten T. C., Chapman C., Hartzer M. et al. Pharmacologic induction of posterior vitreous detachment in the rabbit. // Arch. Ophthalmol. 1993. - Vol. 111. -P.849-854.

154. Wait H. J., Beethem W. P. Diabetic retinopathy // Ed. F. A. L'Esperance, W.A. James.- St. Louis: C.V. Mosby, 1981.- ch.l.- P.3-19.

155. Walshe R., Esser P., Wiedemann P., Heimann K. Proliferative retinal diseases: myofibroblasts cause chronic vitreoretinal traction //British J. Ophthalmol.- 1992.-Vol.76.- P.550-552.

156. Wang F., Wang Z., Sun X., Wang F., Xu X., Zhang X. Safety and efficacy of dispase and plasmin in pharmacologic vitreolysis. // Invest Ophthalmol Vis Sci. -2004.-Vol. 45.-P. 3286- 90.

157. Wang Z. L., Zhang X., Xu X., et al. PVD following Plasmin but not hyaluronidase: Implications for combination pharmacologic vitreolysis therapy. // Retina. 2005. - Vol. 25. - P. 38-43.

158. Williams J.' G., Trese M. T., Williams G. A., Hartzer M. K. Autologous plasmin enzyme in the surgical management of diabetic retinopathy. // Ophthalmology.-2001.-Vol. 108.-P. 1902-5.

159. Worst J. G., Los L.I., Comparative anatomy of the vitreous body in rhesus monkeys and man//Doc. Ophthalmol.- 1992.- Vol.82.- №1-2.- P.169-178.

160. Wu W. C., Drenser K. A., Capone A., Williams G. A., Trese M. T. Plasmin enzyme- assisted vitreoretinal surgery in congenital X-linked retinoschisis: surgical techniques based on a new classification system. // Retina. 2007. - Vol. 27.-P. 1079-85.

161. Wu W. C., Drenser K. A., Lai M., Capone A., Trese M. Plasmin enzymeassisted vitrectomy for primary and re-operated eyes with stage 5 retinopathy of prematurity. // Retina. 2008. - Vol. 28(3). - P. 75-80.

162. Yan-Nian H., Goodnight R. Xiao-Jing Z. Glial epiretinal membranes and contracthion. //Arch. Ophthalmol. 1988.-Vol. 106.-P. 1280-1285.

163. Yao X.Y., Hageman G. S., Mannor M. F. Recovery of retinal adhesion after enzymatic perturbation of the interphotoreceptor matrix. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1992. - Vol. 33. - P.498-503.

164. Yao X. Y., Hageman G. S., Marmor M. F. Retinal adhesiveness is weakened by enzymatic modification of the interphotoreceptor matrix in vivo. // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 1990.-Vol. 31.-P.2051-2058.

165. Zhu D., Chen H., Xu X. Effects of intravitreal dispase on vitreoretinal interface in rabbits. // Curr Eye Res. 2006. - Vol. 31. - P. 935-946.

166. Zinn K. M. Surgical management of vitreoretinal membranes in proliferative diabetic retinopathy. // Bull NY Acad Med. 1982. - Vol. 58 (4). - P. 382-398.

Автореферат диссертации по медицине на тему ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИНИПЛАЗМИНА С ЦЕЛЬЮ ИНДУКЦИИ ЗАДНЕЙ ОТСЛОЙКИ СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

Оглавление диссертации Норман, Кирилл Сергеевич :: 2012 :: Москва

Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Норман, Кирилл Сергеевич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Норман, Кирилл Сергеевич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций