Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Обоснование состава и разработка методов стандартизации противоязвенного лекарственного средства на основе облепихового масла

На правах рукописи

КУПЯНСКАЯ ВАЛЕНТИНА НИКОЛАЕВНА

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И РАЗРАБОТКА

МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ ПРОТИВОЯЗВЕННОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ОБЛЕПИХОВОГО МАСЛА

15.00.02. — фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК - 2004

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В ПЯТИГОРСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ АКАДЕМИИ

НАУЧНЫЙ РУКОВ.ОДИТЕЛЬ:

доктор фармацевтических наук,

профессор

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор фармацевтических наук, профессор

доктор химических наук, профессор

Вергейчик Евгений Николаевич

Попова Ольга Ивановна

Маршалкин Михаил Федорович

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Курский государственный медицинский

университет

Защита состоится г. в « ^ » часов на заседании

диссертационного совета Д.208.069.01 в Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, Пятигорск, пр. Калинина,11).

С диссертацией можно ознакомиться. в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии.

Автореферат разослан

2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор фармацевтических наук, профессор

Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из проблем здравоохранения являются заболевания желудка, в том числе язвенная болезнь. В экономически развитых странах около 10-15% населения в течение жизни болеют язвами желудка и двенадцатиперстной кишки. При этом наблюдается некоторый рост заболеваемости за последние годы.

На I и II Всесоюзных съездах гастроэнтерологов отмечалось, что во многих странах мира, в том числе и в нашей стране, гастродуоденальные язвы - самое распространенное заболевание органов пищеварения. Несмотря на появление новых лекарственных препаратов, а их количество к настоящему времени превысило 500, и на создание новых методов лечения, принципиальных изменений не произошло. Язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и сегодня считаются едва ли не самым распространенным заболеванием среди населения России. На учете находится около 3 млн. больных. Н.Н. Крылов и М.И. Кузин отмечают, что от последствий неадекватного лечения этого заболевания умирают около 6000 человек в год. В США ежегодно от гастродуоденальных язв и их осложнений умирают 15000 больных.

Под диспансерным наблюдением в Санкт — Петербурге в 90-х годах находилось 10,1-11,1 на 1000 взрослых больных.

Для лечения заболеваний ЖКТ в настоящее время используют лекарственные средства различной фармакологической направленности. В эту группу входят:

I. Средства, понижающие секрецию желез желудка: ранитидин, фамотидин, циметидин, омепразол, квамател.

II. Антацидные средства: натрия гидрокарбонат, магния оксид, магния трисиликат, алюминия гидроксид и кальция карбонат.

III. Гастропротекторы:

3.1. Лекарственные препараты, создающие механическую защиту слизистой оболочки - сукралфат, висмута

I библиотека I

3.2. Лекарственные препараты, повышающие защитную функцию слизистого барьера и устойчивость слизистой оболочки к действию повреждающих факторов (мизопростол).

Вместе с тем имеются и специальные лекарственные препараты, которые непосредственно стимулируют процесс регенерации язв желудка и двенадцатиперстной кишки. К ним относятся солкосерил, метилурацил, витамин ^ анаболические стероиды.

Большинство указанных лекарственных препаратов поставляются в Россию зарубежными фирмами. Все они дорогостоящие и поэтому недоступны многим больным.

В то же время существует возможность увеличить производство лекарственных средств в России за счет растительных и других ресурсов, имеющихся в достаточном количестве в нашей стране. Облепиховое масло проявляет болеутоляющее действие, ускоряет грануляцию и эпителизацию тканей. Однако облепиховое масло не проявляет антацидного действия, а иногда усиливает выделение кислоты и недостаточно быстро стимулирует процесс регенерации. На наш взгляд эти недостатки можно компенсировать сочетанием облепихового масла с антацидными и регенерирующими средствами. Для решения этого вопроса необходимо изменение физико-химических свойств облепихового масла, которое позволило бы сочетать его с водорастворимыми веществами. Эту задачу возможно решить путем получения соединений включения облепихового масла с -циклодекстрином (Р-Ц Д). Все это определило цель нашей работы.

Цель и основные задачи исследования. Целью диссертационной работы является теоретическое обоснование состава, разработка способа получения и стандартизация противоязвенного лекарственного препарата для внутреннего применения, сочетающего в себе облепиховое масло, витамин ^ магния оксид.

Для реализации поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- разработать методику получения соединений включения (СВ) концентрата облепихового масла с р - ЦД;

- разработать методики анализа СВ концентрата облепихового масла с Р

-ЦД;

- изучить возможность сочетания в новой лекарственной субстанции концентрата облепихового масла с витамином U и магния оксидом;

- изучить изменение содержания Р - каротина в процессе хранения лекарственной субстанции;

- разработать методики качественного и количественного анализа основных компонентов новой лекарственной субстанции: Р - каротина, витамина U и магния оксида;

- установить условия хранения, сроки годности разработанной лекарственной субстанции;

провести предварительное фармакологическое исследование разработанной противоязвенной лекарственной субстанции.

Научная новизна. Изучена возможность получения соединений включения облепихового масла с р-циклодекстрином, благодаря чему показан способ изменения физико-химических свойств облепихового масла и возможность его сочетания с другими лекарственными веществами. Обоснован состав противоязвенной лекарственной субстанции, сочетающей облепиховое масло, метилметионинсульфония хлорид и магния оксид. Изучены физические параметры указанной субстанции: угол естественного откоса, сыпучесть, насыпная плотность, необходимые для ее технологической характеристики. Выбраны оптимальные условия и разработаны методики для аналитического контроля лекарственной субстанции, а также условия ее хранения. Показана эффективность лекарственной субстанции в условиях экспериментальной язвы желудка и ее низкая токсичность.

Принято решение о выдаче патента на изобретение «Желатиновые капсулы «Гастробиол-ЦД» на основе клатратов концентрата облепихового масла, обладающих противоязвенным действием».

Практическая значимость работы:

- разработан способ получения соединений включения концентрата облепихового масла;

- обоснован состав нового лекарственного препарата «Гастробиол-ЦД», содержащего СВ концентрата облепихового масла, витамин U и магния оксид, обладающего противоязвенным действием;

- предложены методики определения основных действующих компонентов разработанной лекарственной субстанции;

- установлены сроки и условия хранения разработанной лекарственной субстанции на основе концентрата облепихового масла;

- результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке нормативной документации на полученную лекарственную субстанцию.

Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлен для рассмотрения в Департаменте государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники МЗ и социального развития России проект ФСП для ЗАО «Алтайвитамины» на полученный препарат - капсулы «Гастробиол - ЦД».

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (город Пятигорск, 2002 г., 2003 г., 2004 г.). По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ПятГФА (номер государственной регистрации 01.200.101056) в рамках проблемы «Фармация» МНС №35 РАМН.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 42 таблицы, 10 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава) и 6 глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы, включающего 203 источника, в том числе 57 иностранных.

В первой главе диссертации обобщены сведения по общей характеристике, химическому составу и применению в медицине облепихового масла, метилметионинсульфония хлорида и магния оксида. Приведены литературные сведения по некоторым сложным противоязвенным лекарственным препаратам.

Во второй главе проведен анализ исходных продуктов: облепихового масла, метилметионинсульфония хлорида, магния оксида. Одновременно приведены результаты изучения физико - химических характеристик облепихового масла и его концентрата.

В третьей- главе представлены результаты разработки способов получения и исследования СВ облепихового масла и концентрата облепихового масла с Р - ЦД. Приведены основные характеристики СВ концентрата облепихового масла с Р - ЦД и разработана методика его анализа.

В четвертой главе обоснован состав противоязвенной лекарственной субстанции (возможность сочетания СВ концентрата облепихового масла с метилметионинсульфония хлоридом и магния оксидом). Определены оптимальные соотношения СВ концентрата облепихового масла, метилметионинсульфония хлорида и магния оксида.

В пятой главе приведены результаты исследования по разработке методик анализа предложенной лекарственной субстанции. Представлены

результаты количественного определения Р-каротина,

метилметионинсульфония хлорида, магния оксида.

В шестой главе приводятся результаты изучения стабильности действующих веществ в лекарственной субстанции. Приведены данные по условиям и срокам хранения разработанной лекарственной субстанции.

Седьмая глава посвящена изучению фармакологической активности полученной лекарственной субстанции. Проведено определение безопасности ее применения. Изучена противовоспалительная, регенеративная активность и противоязвенное действие капсул полученного лекарственного препарата.

На защиту выносятся следующие положения:

-результаты получения соединения включения концентрата облепихового масла;

-способ получения лекарственной субстанции на основе соединений включения концентрата облепихового масла, витамина ^ магния оксида;

-данные качественного и количественного анализа компонентов разработанной лекарственной субстанции;

-результаты исследования стабильности основных компонентов разработанной лекарственной субстанции;

-экспериментальные данные фармакологического изучения полученной лекарственной субстанции.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Получение и исследование соединений включения облепихового масла и концентрата облепихового масла

В качестве объектов исследования использовали облепиховое масло, концентрат облепихового масла, метилметионинсульфония хлорид, магния оксид.

Основные числовые показатели всех исходных продуктов соответствовали требованиям НД и приведены в таблице 1.

Таблица 1. -Чиловые показатели исходных продуктов

Субстанция Плотность, г/мл Показатель преломления Содержание каротина, мг/% Количественное содержание,%

Облепиховое масло 0,918±0,003 1,472±0,006 196,3±1,8

Концентрат облепихового масла 0,919±0,002 1,471 ±0,006 495,6±505,0

Метилметионин-сульфония хлорид - - - 99,9±0,4

Магния оксид - - - 100,0±0,3

Для получения соединений включения мы использовали методы соосаждения и растирания. Эти методы апробированы на кафедре фармацевтической химии ПятГФА профессорами Компанцевой Е.В. и Гаврилиным М.В.

Метод соосаждения. Предварительно готовили 5% водный раствор ß циклодекстрина и 10% растворы облепихового масла и концентрата облепихового масла в ацетоне. Затем в химический стакан вместимостью 500 мл помещали 100 мл раствора циклодекстрина, подогревали до 60°С, включали магнитную мешалку и добавляли порциями 20 мл раствора облепихового масла. Смешивание растворов продолжали 14 часов. Затем смесь ставили в холодильник при температуре + 4°С. Через 48 часов образовалось соединение включения в виде оранжевого осадка. Надосадочную жидкость осторожно сливали. Остаток переносили на фильтр, промывали его 25 мл диэтилового эфира, предварительно охлажденным на ледяной бане до 0 - 2°С, а затем водой с такой же температурой. Полученный

остаток светло-желтого цвета сначала подсушивали между листами фильтровальной бумаги, а затем в сушильном шкафу при температуре 37°С. В результате были получены порошки мало растворимые в воде. Цвет порошков был различным. Так при взаимодействии облепихового масла с Р -циклодекстрином получен порошок слабо-желтого цвета, который при растирании между пальцами давал ощущение жирного на ощупь. При взаимодействии концентрата облепихового масла получили порошок желто-оранжевого цвета, жирный на ощупь.

Метод растирания. Методика получения СВ методом растирания заключается в механическом смешивании под давлением Р - циклодекстрина и второго компонента. Технология получения длительная, однако, она не требует дополнительных реагентов и растворителей.

Нами проведен предварительно подбор длительности растирания и соотношения - циклодекстрина, облепихового масла или концентрата облепихового масла для получения соединения включения, представляющего собой однородную сыпучую массу. Это соотношение оказалось равным 1:5.

Для получения соединений включения поступали следующим образом. В фарфоровую ступку помещали 100 г р - циклодекстрина. Затем малыми порциями, при растирании добавляли 20 г облепихового масла или концентрата облепихового масла. Растирание продолжали в течение трех часов. В конце данной операции получали однородную сыпучую массу оранжевого цвета. При ее растирании между пальцами ощущалась маслянистость.

Содержание каротиноидов в соединениях включения. В полученных соединениях включения было проведено определение содержания каротиноидов. В основу определения положена методика, описанная в фармакопейной статье (ФС 42-1730-95). Однако, учитывая то, что облепиховое масло и его концентрат входят в состав соединения включения, нами предварительно проводилось извлечение каротиноидов подогретым

этиловым спиртом 95%. Предварительно было показано, что при нагревании на водяной бане до 40-50°С все каротиноиды переходят в спиртовый раствор.

Методика определения. Точную навеску СВ массой около 0,1 г помещали в химический стакан, добавляли 30 мл этилового спирта 95%, подогревали на водяной бане до 50°С, выдерживали при этой температуре 30 минут, фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл. Остаток на фильтре промывали подогретым до 50°С этиловым спиртом 95%. После охлаждения содержимое колбы доводили до метки тем же растворителем.

Оптическую плотность раствора измеряли с помощью спектрофотометра при длине волны 450 нм в кюветах толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служил этиловый спирт 95%. Результаты определения приведены в таблице 2.

Таблица 2.- Содержание р-каротина в СВ,мг%

Метод получения Содержание р-каротина

облепихового масла концентрата облепихового масла

Соосаждения 9,3±0,6 39,6±1,1

Растирания 12,5±0,4 58,5±1,0

Исследование стабильности облепихового масла и концентрата облепихового масла в СВ проводили по изменению йодного числа и по содержанию р-карогина.

Изучение стабильности каротиноидов мы проводили методом ускоренного хранения, а также при хранении в естественных условиях при температуре 20°С.

Методика определения. Навески СВ помещали в закрытых бюксах в термостат и выдерживали при температуре 40°С в течение 6 месяцев. Через каждые 30 дней определяли содержание каротиноидов по приведенной выше методике и йодное число согласно требованиям ГФ XI.

Вторую партию СВ помещали в закрытые бюксы и хранили в темном месте в течение двух лет при температуре 20°С. Содержание каротиноидов и йодное число определяли через каждые 30 дней.

Результаты определения р - каротина в соединении включения при различных способах хранения приведены в таблице 3.

Таблица 3. - Изменение содержания р-каротина при хранении СВ, мг%

"^-^Время СВ 1 месяц 3 месяца 6 месяцев 1 год 1,5 года 2 года

Темпе ратура 40иС

концентрата облепихового масла 58,5±1,5 58,5±],0 57,9± 1,44

Темпе ратура 20" С

концентрата облепихового масла 58,5±1,5 58,5±1,5 58,5±1,5 58,5±1,5 58,4±1,4 58,5±1,5

Таким образом, в естественных условиях хранения содержание р-каротина в СВ концентрата облепихового масла не изменялось в течение двух лет.

Результаты определения йодного числа в соединении включения при различных способах хранения приведены в таблице 4.

Таблица 4. - Значение йодного числа в СВ при хранении

Полученные данные показывают, что йодное число концентрата облепихового масла в СВ при 20°С практически не изменяется в течение двух лет.

При хранении СВ при температуре 40°С через шесть месяцев наблюдается снижение йодного числа на 7-12%. Это указывает на некоторую деструкцию концентрата облепихового масла при повышенной температуре.

Аналогичные исследования, проведенные с нативным концентратом облепихового масла, показали, что йодное число снижается при хранении при 20°С на 10-12% в течение двух лет, и на 8-10% в течение шести месяцев при 40°С.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что концентрат облепихового масла в виде соединения включения является более стабильным по сравнению с нативным концентратом облепихового масла.

Для исследования характера взаимодействия концентрата облепихового масла в СВ нами изучены ИК спектры поглощения исходного концентрата облепихового масла и продукта взаимодействия. Спектры поглощения приведены на рисунке 1.

Пропускание, %

иод

Рисунок 1. - ИК спектр концентрата облепихового масла (1) его продукта взаимодействия с - циклодекстрином (2)

Из рисунка видно, что в ИК — спектре поглощения соединения включения сохраняются характеристические полосы поглощения концентрата облепихового масла. Однако наблюдается значительный сдвиг некоторых полос поглощения при 1740 см-1 и 1235 см-1, которые относятся к карбонилу алифатического эфира. Из этого можно сделать вывод, что

взаимодействие облепихового масла с Р - циклодекстрином происходит в основном по карбонильной группе алифатических эфиров.

2. Обоснование состава лекарственной субстанции и изучение ее фармакологического действия

В соответствии с рекомендацией доктора медицинских наук профессора Ивашева М.Н. в состав лекарственной субстанции мы включили кроме соединения включения концентрата облепихового масла еще один противоязвенный препарат - метилметионинсульфония хлорид (витамин В качестве антацидного средства были использованы магния карбонат основной и магния оксид. Состав прописей на ЮОг, взятых для исследования был следующим:

1. СВ концентрата облепихового масла-54,05 Метилметионинсульфония хлорид-4,51 Магния карбоната основного-41,44

2. СВ концентрата облепихового масла-70,59 Метилметионинсульфония хлорид-5,88 Магния оксида-23,53

Мы изучали основные технологические характеристики порошковых смесей: размер частиц, угол естественного откоса, насыпную плотность, сыпучесть. Эти параметры определяли в соответствии с методиками Украинской фармакопеи. Данные приведены в таблице 5.

Таблица 5 - Технологические параметры порошковых смесей

Смесь Размер частиц, мм Угол откоса,0 Насыпная плотность, г/см3 Сыпучесть, г/сек

1 min 0,01 max 0,10 40,5±I,0 0,63 2,5±0,2

2 min 0,01 max 0,05 39,5±1,0 0,57 2,8±0,2

Приведенные результаты показывают, что по физическим параметрам обе смеси сходны между собой. Однако магния оксид обладает большей

удельной нейтрализующей способностью. Поэтому для дальнейших исследований нами предложена пропись, содержащая магния оксид.

В качестве препарата сравнения в случае определения регенеративной активности применяли официальный лекарственный препарат синтетического происхождения таблетки метилурацила, для соблюдения установленной дозировки которого готовили разведение в воде очищенной и вводили животным в эквивалентном объеме. При изучении противоязвенной активности препаратом сравнения служило масло облепиховое нативное. Активность исследуемой лекарственной субстанции сравнивали с контролем - раствором Рингера- Локка, который вводили в эквивалентном объеме.

Изучаемую лекарственную субстанцию применяли в дозировке 150 мг на 70 кг массы человека, что составило 2,1 мг/кг. Доза была рассчитана, исходя из данных острой токсичности, кратности и длительности применения разработанной лекарственной субстанции. С учетом межвидового переноса доз это составило 12,4 мг/кг для крыс. Лекарственную субстанцию вводили в виде 0,1% водной взвеси в объеме 10 мл/кг массы животного. Облепиховое масло вводили в эквивалентном объеме. Таблетки метилурацила вводили в виде водной суспензии в дозировке 20 мг/кг. Запаивали животных методом принудительного зондирования в объеме 10 мл/кг массы тела в теплом (37°С) виде.

Использовали модель стероидной язвы желудка у крысы путем однократного интрагастрального введения преднизолона в дозе 20 мг/кг, растворенного в этиловом спирте 80%, в объеме 8 мл/кг. Через 3 часа после введения преднизолона, вводили разработанную лекарственную субстанцию в объеме 10 мл/кг массы животного. Через 24 часа после ее введения под легким эфирным наркозом крыс подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации. Антиульцерогенное действие оценивали по классическим критериям: общее количество язв и их средняя площадь, количество язв и их площадь по отделам желудка. Проводили макро- и

микрогистоморфологические исследования с использованием компьютерного цифрового микрофото. Обобщенные результаты приведены в таблице 6.

Таблица 6. - Количество язвенно - эрозивных образований на 1 животное по отделам желудка (шт.)

Показатели Группы" животных Фундальный отдел Пилорический отдел

М±ш Р. Р2 % М±ш Р. Ра %

Животные, получившие раствор Рингера-Локка, п=8 5,0±1,34 100,0 2,3±0,22 100,0

Животные, получившие композицию с магния оксидом и витамином и, п=8 1,0±0,07 <0,01 <0,01 20,0 0,1±0,01 <0,01 <0,05 4,35

Животные, получившие облепиховое масло, п=8 3,8±0,34 <0,05 76,0 1,1 ±0,20 <0,05 47,80

Животные, получившие метнлурацнл, п-8 3,1±0,32 <0,05 62,0 1,3±0,11 <0,05 56,50

Р1- достоверность по сравнению с контрольной группой животных;

Р2- достоверность по сравнению с препаратом сравнения

Из данных таблицы 6 видно, что по эффективности разработанная лекарственная субстанция превосходит как нативное облепиховое масло, так и лекарственный препарат сравнения таблетки метилурацила. Изучение токсичности показало, что для разработанной субстанции LD5o>5000 мг/кг. Это позволяет отнести субстанцию к практически нетоксичным.

3. Разработка методик анализа компонентов лекарственной субстанции и изучение ее стабильности

Для качественного и количественного определения каротиноидов наиболее приемлемым является спектрофотометрический метод. Спектр поглощения р - каротина (рис. 2) в области длин волн 400 - 600 нм имеет два максимума поглощения при 450±2 нм и 470±2 нм. При длине волны 450 нм - каротин имеет значение удельного показателя

поглощения равное 2500. Поэтому спектрофотометрический метод позволяет определить каротиноиды даже при малом содержании.

«0.0 яал «ел

Л,™

Рисунок 2. - ^ет-р поглощения спиртового извлечения из лекарственной субстанции

Количественное определение суммы каротиноидов в пересчете на (3-каротин проводили спектрофотометрическим методом. На основании проведенных исследований нами предложена следующая методика.

Около 0,075 г (точная навеска) лекарственной субстанции вносили в химический стакан вместимостью 100 мл, добавляли 30 мл этилового спирта 95%, перемешивали до образования однородной суспензии, помещали на водяную баню, нагретую до 50°С, и выдерживали при этой температуре 15-20 минут. Смесь фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл. Остаток в стакане и фильтр промывали подогретым до 50°С этиловым спиртом 95%. Фильтрат охлаждали до 20°С и доводили этиловым спиртом 95% до метки. Измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служил этиловый спирт 95%.

Расчет содержания каротиноидов в лекарственной субстанции проводили по формуле:

^ _ А *50*100»1000 _ Л«20 где

А -значение оптической плотности раствора испытуемого образца; а - масса навески порошка, в г, 50 - разведение, в мл;

2500 - значение удельного показателя поглощения р-каротина в спирте этиловом при длине волны 450 нм.

Результаты количественного определения каротиноидов в пересчете на - каротин приведены в таблице 7.

Наличие метилметионинсульфония хлорида подтверждали по реакции с раствором нитрата серебра. Около 0,02 г лекарственной субстанции встряхивали с 5 мл воды в пробирке. Смеси давали отстояться в течение 10 минут. Из верхней части раствора осторожно сливали 1-2 мл прозрачного раствора, добавляли 0,5 мл кислоты азотной разведенной и 0,5 мл раствора нитрата серебра - появлялся белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.

К 2 мл такого же раствора прибавляли 1 мл 0,25% раствора карбоната натрия и 1 мл 1% спиртового раствора нингидрина. При нагревании в течение 10 минут на водяной бане появлялось синее окрашивание.

Количественное определение метилметионинсульфония хлорида проводили фотометрическим методом по реакции с нингидрином.

Для этого точную навеску лекарственной субстанции (около 0,1 г) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 50 мл воды и подогревали 10 минут на водяной бане при 45 - 50°С. Смесь охлаждали до 20°С, доводили водой до метки. Содержимое колбы фильтровали. Первые 20 мл фильтрата отбрасывали. Затем 15 мл фильтрата помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 1 мл 0,25% раствора натрия карбоната, 2 мл 1% спиртового раствора нингидрина и нагревали 10 мин на

кипящей водяной бане. После охлаждения раствор доводили до метки. Оптическую плотность раствора измеряли с помощью спектрофотометра при длине волны 570 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно воды. Параллельно в мерную колбу на 50 мл вносили 1 мл 0,1% раствора метилметионинсульфония хлорида и далее поступали как указано выше.

Обнаружению магния оксида не мешают сопутствующие компоненты, так как магния оксид предварительно отделяли путем растворения в разведенной соляной кислоте. Для этого к навеске порошка массой около 0,05 г добавляли 0,5 мл разведенной соляной кислоты, 2 мл воды, взбалтывали и давали отстояться 10 мин. К 1 мл раствора соли магния прибавляли 1 мл раствора аммония хлорида, 0,5 мл раствора натрия фосфата и 1 мл раствора аммиака; образуется белый кристаллический осадок.

Для количественного определения магния оксида поступали следующим образом.

Около 0,1 г (точная навеска) лекарственной субстанции помещали в стакан вместимостью 50 мл, добавляли 3 мл 1 М раствора хлороводородной кислоты, 15 мл воды, нагревали в течение 15 минут и охлаждали. Полученный раствор фильтровали. Осадок на фильтре промывали 15 мл воды. К полученному фильтрату добавляли 10 мл аммиачного буферного раствора. Раствор титровали при энергичном перемешивании 0,05 М раствором трилона Б до изменения окраски индикатора (кислотный хром черный специальный). Результаты определения приведены в таблице 7.

Таблица 7. - Результаты анализа ингредиентов в субстанции (в пересчете на ЮОг)

Вещество Метод Результаты определения

р-Каротин СФ-метрия 42,3±0,6 мг%

Метилметионин-сульфония хлорид Фотометрия 5,84±0,03 г

Магния оксид Комплексонометрия 23,5±0,5 г

Для испытания стабильности мы заложили по 3 серии субстанций при температуре 20°С и 40°С. Анализ проводили через определенное время. Результаты определения приведены в таблицах 8 и 9.

Таблица 8. — Изменение параметров субстанции и содержания

ингредиентов в процессе хранения при 40°С

Параметр Время хранения

1 месяц 2 месяца 6 месяцев

Угол естественного -откоса 40,5" 42,9и 45,0й

Насыпная плотность, г/см3 0,59 0,60 0,60

Сыпучесть, г/сек 2,3 2,0 1,0

Содержание Р-каротина, мг% 42,5±0,8 42,7±0,7 42,6±0,9

Содержание витамина II, г (в дозе 0,2г) 0,0118±0,001 0,0118±0,001 0,0118±0,001

Таблица 9. — Изменение параметров субстанции и содержания _ингредиентов в процессе хранения при 20±2°С_

Параметр Время хранения

1 месяц 2 месяца 6 месяцев 1 год 2 года

Угол естественного откоса 39,5 39,0 38,5 38,5 38,0

Насыпная плотность, г/см3 0,57 0,57 0,57 0,56 0,56

Сыпучесть, г/сек 2,5 2,5 2,6 2,9 3,0

Содержание р-каротина, мг% 42,8±0,9 42,7±0,8 42,8±0,7 42,5*0,9 42,7±0,7

Содержание витамина и,г (в дозе 0,2 г) 0,011810,001 0,0119±0,001 0,0118*0,001 0,0119±0,001 0,0118±0,001

Учитывая то, что определение витамина и проводилось фотометрическим методом, не позволяющим установить наличие продуктов

разложения, дополнительно определяли наличие примесей методом ТСХ. Наблюдение в течение двух лет показало, что при,температуре 20±2°С примесей.не обнаружено. Но при температуре 40°С через 6 месяцев в некоторых случаях наряду с основным пятном витамина U появлялось слабое пятно посторонней примеси. Поэтому мы считаем, что хранить лекарственную субстанцию можно два года при температуре 20±2°С.

Таким образом, нами предложена методика получения лекарственной, субстанции на основе облепихового масла, обладающей противоязвенным действием и проведены исследования по ее анализу и стабильности.

На основании исследований разработан проект ФСП и передан заказчику.

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Изучены способы получения соединений включения облепихового масла и концентрата облепихового масла методами соосаждения и растирания и установлено, что метод растирания дает лучший выход по содержанию р-каротина.

2. Изучена устойчивость соединений включения при хранении в течение двух лет при температуре 20±2°С, и показано, что содержание

и йодное число в процессе хранения практически не изменяются.

3. Обоснован состав новой лекарственной субстанции, содержащей соединения включения концентрата облепихового масла, метилметионинсульфония хлорид, магния оксид и определены ее технологические характеристики: угол естественного откоса, насыпная плотность, сыпучесть.

4. Для стандартизации - лекарственной субстанции разработаны методики идентификации и количественного определения основных ингредиентов: Р-каротин, метилметионинсульфония хлорид, магния оксид. Относительная погрешность методик не более ± 2%.

5. Изучена стабильность лекарственной субстанции и ее основных ингредиентов и установлен срок хранения два года в естественных условиях (при 20°С).

6. Проведено фармакологическое исследование разработанной лекарственной субстанции и показано, что в предложенном составе она проявляет выраженное антиульцирогенное действие и не обладает токсическим и раздражающим действием.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Получение соединения включения облепихового масла // Человек и лекарство: Тез.докл.1Х Рос.нац.конгр.(8-12 апр.2001г.). - Москва,

2001. - С.687. (соавт.: Вергейчик Е.Н., Саушкина А.С.)

2. Получение и исследование нового противоязвенного средства на основе масла облепихи // Материалы научно-практич. конференции.

- Бийск, 2003. - С. 58-61. (соавт.: Кошелев Ю.А., Миренков В.А., Залесов А.С, Вергейчик Е.Н.)

3. Обоснование состава и разработка лекарственной формы на основе масла облепихового // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Материалы ... (58; 2003; Пятигорск).

- Пятигорск, 2003. - С. 223-225. (соавт.: Сергиенко А.В.)

4. Получение и исследование соединения включения облепихового масла // Регион, конф. По фармации, фармакологии и подготовке кадров (57;2002; Пятигорск): Материалы...- Пятигорск: ПГФА,

2002.-С. 98-99.

5. Стандартизация нового противоязвенного препарата на основе концентрата облепихового масла // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (59;2004; Пятигорск): Материалы...- Пятигорск: ПГФА, 2004.-С. 193-194.

6. Вергейчик Е.Н., Кошелев Ю.А., Купянская В.Н. и др. Пол. Решение по заявке 2003105141/15(005256) «Желатиновые капсулы «Гастробиол-ЦД» .на основе клатратов концентрата облепихового масла, обладающие противоязвенным действием». (РФ) - 5с.

24

» 13 9 55

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НА ОСНОВЕ ОБЛЕПИХОВОГО МАСЛА

КУПЯНСКАЯ ВАЛЕНТИНА НИКОЛАЕВНА

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 20.07.2004 г. формат бумаги 60x84 1/16 Бумага кн.-журнальная. Печать ротапринтарная. Усл. печл. 1,0. Тираж 100 зкз. Заказ №812

Пятигорская государственная фармацевтическая академия 357533, г.Пятигорск, пр. Калинина, 11

Актуальность темы. Одной из проблем здравоохранения являются заболевания желудка, в том числе язвённая болезнь. В экономически развитых странах около 10-15% населения в течение жизни болеют язвами желудка и двенадцатиперстной кишки. При этом наблюдается некоторый рост заболеваемости за последние годы.

На I и II Всесоюзных съездах гастроэнтерологов отмечалось, что во многих странах мира, в том числе и в нашей стране, гастродуоденальные язвы - самое распространенное заболевание органов пищеварения. Несмотря на появление новых препаратов, а их количество к настоящему времени превысило 500, и на создание новых методов лечения, принципиальных изменений не произошло. Язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и сегодня считаются едва ли не самым распространенным заболеванием среди населения России. На учете находится около 3 млн. больных. Н.Н. Крылов и М.И. Кузин отмечают, что от последствий неадекватного лечения этого заболевания умирают около 6000 человек в год. В США ежегодно от гастродуоде-нальных язв и их осложнений умирают 15000 больных.

Под диспансерным наблюдением в Санкт - Петербурге в 90-х годах находилось 10,1-11,1 на 1000 взрослых больных [130,131].

Традиционно считалось, что чаще язвами желудка и двенадцатиперстной кишки заболевают мужчины. Так, по данным L.W.Way мужчины болеют в три раза чаще, чем женщины. Однако явной тенденцией последних лет является рост заболеваемости среди женщин, в результате соотношение мужчины: женщины составляет в настоящее время 1,5:1. Наиболее высок уровень заболеваемости в группе больных от 40 до 50 лет [4,5,164,199]. За последние годы наблюдается увеличение числа больных среди детей и подростков. В Санкт-Петербурге в 1991 году показатель уровня диспансерного наблюдения на 1000 детей составлял 0,24, а к 1997 году он вырос до 0,42. Так же неуклонно растет число подростков (15-17 лет), страдающих гастродуоденальны-ми язвами. В Санкт- Петербурге этот показатель с 1991 г. до 1997 г. вырос с 1,94 до 2,82. Также имеется тенденция к увеличению числа больных пожилого и старческого возраста, страдающих язвами желудка и двенадцатиперстной кишки. Следует отметить, что язвы двенадцатиперстной кишки чаще выявляются в молодом возрасте, в то время как язвы желудка чаще встречаются в более старших возрастных группах [18,130].

Велика социально-экономическая значимость решения проблемы. Не снижается и число дней временной нетрудоспособности у этой категории больных. В Санкт-Петербурге на 1000 человек трудоспособного возраста в 1991 году этот показатель составлял 111,2, а в 1997 - 119. Число дней, проведенных в стационарах подростками и взрослыми, страдающими гастродуо-денальными язвами, составило в 1991-1997 гг. в среднем 205885. Среднее число дней пребывания в стационаре в 1991-1997 гг. составило 18,7. По этому показателю язвы желудка и двенадцатиперстной кишки находятся на первом месте среди остальных заболеваний органов пищеварения [131]. В США ежегодно регистрируется 15 млн. дней нетрудоспособности у больных гаст-родуоденальными язвами. Затраты на лечение, реабилитацию и страховые выплаты составляют ежегодно 1 миллиард долларов.

В противоязвенной терапии можно выделить три основных этапа лечения:

- лечение обострения до рубцевания .язвенного дефекта (1-3 недели);

- индукцию ремиссии (от 1 до 3 мес.);

- противорецидивную терапию (до года и более).

Сегодня большинством гастроэнтерологов признаются два ведущих ульцерогенных фактора: кислотно-пептический и инфекционный [79,82,152,163]. Оба действуют содружественно, взаимно усиливая друг друга. Helicobacter pylori, по общему мнению, определяет хроническое течение заболевания, поддерживает угрозу рецидива и развития осложнений [52,126,197]. Становится очевидным, что долгосрочный успех лечения можно получить только при активном подавлении обоих действующих факторов [37,40,55,60,74]. И все же необходимо подчеркнуть, что и сегодня краеугольным камнем терапии пептических язвенных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки остается контроль над желудочной секрецией [9,117,118,172,198]. Угнетение кислотопродукции снижает эрозивные свойства желудочного сока. Также повышение рН в просвете желудка изменяет среду обитания Helicobacter pylori, обеспечивая условия для успешной эра-дикации микроба. Только при повышении рН выше 3,5 Helicobacter pylori становится доступным для действия большинства антибактериальных препаратов. Поэтому и в настоящее время ингибиция кислотопродукции занимает важнейшее место в лечении хронических гастродуоденальных язв [185]. После создания новых классов Н2-блокаторов гистаминовых рецепторов и бло-каторов насоса водородных ионов, роль антисекреторной терапии стала еще более очевидной [10,12,23,47].

Для лечения заболеваний ЖКТ в настоящее время используют лекарственные средства различной фармакологической направленности [27]. В эту группу входят:

I. Средства, понижающие секрецию желез желудка: ранитидин, фамо-тидин, циметидин, омепразол, квамател.

II. Антацидные средства: натрия гидрокарбонат, магния оксид, магния трисиликат, алюминия гидрокисид и кальция карбонат [15].

III. Гастропротекторы:

3.1. Препараты, создающие механическую защиту слизистой оболочки (сукралфат, висмута трикалия дицитрат).

3.2. Препараты, повышающие защитную функцию слизистого барьера и устойчивость слизистой оболочки к действию повреждающих факторов (мизопростол).

Вместе с тем имеются и специальные препараты, которые непосредственно стимулируют процесс регенерации язв желудка и двенадцатиперстной кишки. К ним относятся солкосерил, метилурацил, витамин U, анаболические стероиды.

Витамин U - метилметионинсульфония хлорид. Препарат отнесен к группе витаминов и предложен для применения при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, хроническом гастрите (при нормальной, пониженной и повышенной секреции), гастралгии [21,103].

Существуют и комбинированные препараты: «Альмагель», «Фосфалю-гель», «Ренни», «Маалокс», «Гастал», «Викаир», «Викалин», «Де-нол» [35,136].

Большинство препаратов поставляются в Россию зарубежными фирмами. Все они дорогостоящие и поэтому недоступны многим больным.

В то же время существует возможность увеличить производство лекарственных средств в России за счет растительных и других продуктов, имеющихся в достаточном количестве в нашей стране.

К таким средствам относится масло из облепихи. Оно состоит в основном из триглицеридов пальмитиновой, олеиновой и пальмитолеиновой кислот, каротиноидов, токоферолов. Облепиховое масло обладает болеутоляющим действием, ускоряет грануляцию и эпителизацию тканей. Применяется при язвенной болезни желудка, а также как профилактическое средство для уменьшения дегенеративных изменений пищевода при лучевой терапии рака пищевода.

При язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки масло назначают внутрь. По имеющимся данным, облепиховое масло улучшает защиту слизистой оболочки желудка, ускоряет заживление язвенного дефекта.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является теоретическое обоснование состава, разработка способа получения и стандартизация противоязвенной лекарственной формы для внутреннего применения, позволяющей сочетать в себе облепиховое масло, витамин U, магния оксид.

Для реализации поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- разработать методику получения соединений включения (СВ) концентрата облепихового масла с Р - циклодекстрином ((3-ЦД);

- разработать методики анализа СВ концентрата облепихового масла с

Р-ЦД;

- изучить возможность сочетания в новой лекарственной субстанции концентрата облепихового масла с витамином U и магния оксидом;

- изучить изменение содержания Р - каротина в процессе хранения лекарственной субстанции;

- разработать методики качественного и количественного анализа основных компонентов новой лекарственной субстанции: Р - каротина, витамина U и магния оксида;

- установить условия хранения, сроки годности разработанной лекарственной субстанции;

- провести предварительное фармакологическое исследование разработанной лекарственной субстанции.

Научная новизна. Изучена возможность получения соединений включения облепихового масла с Р-циклодекстрином, благодаря чему показан способ изменения физико-химических свойств облепихового масла и возможность его сочетания с другими лекарственными веществами. Обоснован состав противоязвенной лекарственной субстанции, сочетающей облепиховое масло, метилметионинсульфония хлорид и магния оксид. Изучены физические параметры указанной субстанции: угол естественного откоса, сыпучесть, насыпная плотность, необходимые для ее технологической характеристики. Выбраны оптимальные условия и разработаны методики для аналитического контроля лекарственной субстанции, а также условия ее хранения. Показана эффективность лекарственной субстанции в условиях экспериментальной язвы желудка и ее низкая токсичность.

Принято решение о выдаче патента на изобретение «Желатиновые капсулы «Гастробиол-ЦД» на основе клатратов концентрата облепихового масла, обладающих противоязвенным действием».

Практическая значимость работы:

- разработан способ получения СВ концентрата облепихового масла;

- обоснован состав нового лекарственного препарата «Гастробиол

ЦД», содержащего СВ концентрата облепихового масла, витамин U и магния 1 оксид, обладающего противоязвенным действием;

- предложены методики определения основных действующих компонентов разработанной лекарственной субстанции;

- установлены сроки и условия хранения разработанной лекарственной субстанции на основе концентрата облепихового масла;

- результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке нормативной документации на полученную лекарственную субстанцию.

Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлен для рассмотрения в Департаменте государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники МЗ и социального развития России проект ФСП для ЗАО «Алтайвитамины» на полученный препарат - капсулы «Гастробиол-ЦД».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ПятГФА (номер государственной регистрации 01.200.101056) в рамках проблемы «Фармация» МНС №35 РАМН.

На защиту выносятся следующие положения:

-результаты получения СВ концентрата облепихового масла;

-результаты получения лекарственной субстанции на основе СВ концентрата облепихового масла, витамина U, магния оксида;

-результаты качественного и количественного анализа разработанной лекарственной субстанции;

-результаты исследования стабильности основных компонентов лекарственной субстанции;

-результаты предварительного фармакологического исследования полученной лекарственной субстанции.

Апробация и публикации результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (город Пятигорск, 2002 г., 2003 г., 2004 г.). По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 42 таблицы, 10 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава) и 6 глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы, включающего 203 источника, в том числе 57 иностранных.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучены способы получения соединений включения облепихового масла и концентрата облепихового масла методами соосаждения и растирания и установлено, что метод растирания дает лучший выход по содержанию (3-каротина.

2. Изучена устойчивость соединений включения при хранении в течение двух лет при температуре 20±2°С, и показано, что содержание Р~ каротина и йодное число в процессе хранения практически не изменяются.

3. Обоснован состав новой лекарственной субстанции, содержащей соединения включения концентрата облепихового масла, метилметионинсульфония хлорид, магния оксид и определены ее технологические характеристики: угол естественного откоса, насыпная плотность, сыпучесть.

4. Для стандартизации лекарственной субстанции разработаны методики идентификации и количественного определения основных ингредиентов: p-каротин, метилметионинсульфония хлорид, магния оксид. Относительная погрешность методик не более ± 2%.

5. Изучена стабильность лекарственной субстанции и ее основных ингредиентов и показано, что в естественных условиях (при 20±2°С) может быть установлен срок хранения два года.

6. Проведено фармакологическое исследование разработанной лекарственной субстанции и показано, что в предложенном составе она проявляет выраженное антиульцирогенное действие и не обладает токсическим и раздражающим действием.