Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Химико-фармацевтическое исследование и стандартизация антидота П-10М

На правах рукописи

Для служебного пользования

Экз. №

БОБРОВ АЛЕКСЕЙ ВЛАДИСЛАВОВИЧ

ХИМИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ АНТИДОТА П-10М

15.00.02. - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь 2000

Работа выполнена в Пермском Научно-производственном объединении. «Биомед»

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ доктор фармацевтических наук A.B. Сульдин

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ доктор фармацевтических наук, профессор Ю.А. Хомов кандидат фармацевтических наук, В.А. Сафин

Ведущая организация - Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия.

Защита состоится «30» октября 2000 г. в_ часов на заседании

диссертационного совета Д 084.70.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614600, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан «_»_2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат фармацевтических наук Е.В. Метелева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Расширение номенклатуры отечественных лекарственных средств и непрерывно возрастающие требования к их качеству вызывают необходимость систематического развития и совершенствования методов контроля.

Эффективность контроля качества лекарственных препаратов, а также проведение их всестороннего изучения обеспечивается внедрением в практику фармацевтического анализа физических и физико-химических методов, среди которых важное место занимают хроматографические метода: хроматография в тонких слоях сорбента (ТСХ), газожидкостная хроматография (ГЖХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

Анализ данных периодической литературы, способов контроля, описанных в зарубежных фармакопеях и отечественных нормативных документах (НД) показал, что вышеуказанные способы наиболее часто используются в последние годы для оценки качества лекарственных средств.

В НПО «Биомед» совместно с Пермской государственной фармацевтической академией разработана новая многокомпонентная таблетированная лекарственная форма, содержащая аминостигмин, фторацизин и ионостигмин (ионообменная соль аминостигмина), рекомендованная как антидот. Лекарственные соединения, входящие в состав таблеток (кроме ионостигмина), имеют сходные химические свойства, так как являются по своей природе органическими азотсодержащими основаниями. Анализ подобных лекарственных форм традиционными методами вызывает некоторые затруднен™, связанные с необходимостью разделения определяемых компонентов, а часто и отделения их от вспомогательных веществ.

Перспективным методом, позволяющим решить многие проблемы анализа является ВЭЖХ, отличающаяся высокой чувствительностью, селективностью и экспрессностью. Применение ВЭЖХ позволяет одновременно осуществить разделение веществ, установить их подлинность и количественное содержание в анализируемом объекте.

Изучение периодической литературы показало, что если для оценки качества фторацизина и его лекарственных форм уже предложены методики анализа на основе химических и физико-химических методов, то для аминостигмина и ионостигмина (ввиду их недавнего введения в медицинскую практику) практически не разработано способов аналитического определения.

Новым и актуальным является исследование лекарственной формы, в которой вышеуказанные вещества содержаться совместно. Проведение комплекса аналитических исследований необходимо для создания надежных объективных методик оценки качества новой лекарственной формы, что

1 РОССИЙСКАЯ ] ГОСУДАРСТВЕННАЯ |_БИБЛИОТЕКА_

обеспечит безопасность и эффективность ее применения в медицинской практике.

Пели и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка селективных, высокочувствительных и унифицированных способов стандартизации и оценки качества новой лекарственной формы, содержащей аминостигмин и фторацизин с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии и создание на этой основе нормативной документации.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие

задачи:

• изучить физико-химические свойства (спектральные характеристики, растворимость и др.) лекарственных веществ, входящих в новую лекарственную форму;

• исследовать хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина в нормально-фазном и обращенно-фазном вариантах ВЭЖХ;

• определить оптимальные условия и разработать методики качественного и количественного определения аминостигмина и фторацизина;

• разработать способы стандартизации новой лекарственной формы;

• апробировать разработанные методики на опытно-промышленных образцах таблеток;

• на основании комплекса проведенных исследований разработать Временную Фармакопейную Статью на многокомпонентную таблетированную лекарственную форму «Таблетки П-10М, покрытые оболочкой».

Научная новизна. Проведен комплекс исследований новой многокомпонентной лекарственной формы, содержащей аминостигмин, фторацизин и ионостигмин. Изучено хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина в нормально-фазном и обращенно-фазном вариантах ВЭЖХ.

Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден выбор оптимальных условий качественного и количественного определения аминостигмина и фторацизина методом ВЭЖХ при их совместном присутствии в лекарственной форме.

Разработаны селективные, высокочувствительные и унифицированные способы стандартизации и оценки качества изученной лекарственной формы.

Методики рекомендованы для установления подлинности объектов исследования, определения количественного содержания в таблетированной лекарственной форме, оценки однородности дозирования действующих лекарственных веществ, установления их степени высвобождения и срока хранения.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработана и утверждена ВФС 42-3468-99 «Таблети П-1 ОМ, покрытые оболочкой» (для служебного пользования), в которую включены ВЭЖХ-методики:

• установления подлинности аминостигмина и фторацизина (раздел «Подлинность»);

• определения однородности дозирования (раздел «Однородность дозирования»);

• определение количественного содержания действующих веществ (раздел «Количественное определение аминостигмина и фторацизина методом ВЭЖХ»);

• оценка высвобождения аминостигмина и фторацизина (раздел «Растворение»).

Препарат «Таблетки П-1 ОМ, покрытые оболочкой» зарегистрирован (приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 282 от 14 июля 1999 года), регистрационное удостоверение № 99/282/2.

Разработан, согласован с Всероссийским научным центром по безопасности биологически активных веществ и утвержден пусковой регламент ОПР 42-6802055-42-99 (для служебного пользования) на производство таблеток препарата П-1 ОМ, покрытых оболочкой.

Выпуск данной лекарственной формы и практическое применение ВФС 42-3468-99 для оценки качества произведенных промышленных серий осуществлено на НПО «Биомед».

Апробация работы. Основные материалы работы доложены на юбилейной межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава «80 лет фармацевтическому образованию и науке на Урале: итоги и перспективы», посвященной 250-летию г. Перми и 80-летию фармацевтического образования на Урале (Пермь, 1998) и на Ученом Совете НПО «Биомед» (Пермь, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 160 наименований, приложения. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, включает 23 таблицы, 11 рисунков и 24 страницы приложения.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость результатов экспериментальных исследований.

Первая глава представляет собой обзор литературы по методам

стандартизации и анализа лекарственных соединений, производных фенотиазина и эфиров карбаминовой кислоты на основе фенолов различного химическою строения - структурных аналогов аминостигмина.

Во второй главе описана применяемая аппаратура, приборы, реактивы, исследуемые образцы.

Третья глава содержит экспериментальные данные по исследованию физико-химических свойств аминостигмина, фторацизина и ионостигмина и их интерпретацию.

Четвертая глава посвящена изучению хроматографического поведения объектов исследования в нормально-фазном и обращенно-фазном вариантах ВЭЖХ, обоснованию выбора типов сорбента и способа детектирования.

В пятой главе представлены результаты изучения влияния вспомогательных веществ на хроматографический анализ аминостигмина и фторацизина, метрологические характеристики методики количественного определения действующих веществ таблеток анализа, разработаны методики испытания таблеток по показателям «Подлинность», «Однородность дозирования» и «Растворение» и приведены результаты анализа опытно-промышленных серий таблеток П-1 ОМ.

В Приложения включены текст ВФС 42-3468-99, где приведены конкретные методики установления подлинности, количественного определения аминостигмина, фторацизина и ионостигмина, оценки однородности дозирования и степени высвобождения лекарственных веществ, входящих в состав лекарственной формы; копия регистрационного удостоверения, которое подтверждает факт внедрения результатов настоящего исследования в практику фармацевтического анализа.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Результаты исследования хроматографического поведения аминостигмина и фторацизина в нормально-фазном варианте ВЭЖХ;

2. Результаты исследования хроматографического поведения аминостигмина и фторацизина в обращенно-фазном варианте ВЭЖХ;

3. Способы контроля качества многокомпонентной таблетированной лекарственной формы П-10М (установление подлинности, однородности дозирования, количественного содержания аминостигмина и фторацизина, оценка степени высвобождения и срока годности).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты исследования, приборы и реактивы

Аминостигмин - ^К-диметш1-(2-М,К-диметиламинометилпи-ридил-3) карбамата дигидрохлорид. Синтезирован промышленным способом в ООО «Органика», г. Новокузнецк. Использованные в работе серии аминостигмина предварительно проверены по показателям ФС 42-2675-89; каждая из них удовлетворяет всем требованиям указанной НД.

Фторацизин - 2-трифторметил-10-(3-диэтиламинопропионил) -фенотиазина гидрохлорид. Синтезирован НИИ Фармакологии АМН РФ. Использованные в работе серии фторацизина предварительно проверены по показателям ФС 42-2055-97; каждая из них удовлетворяет всем требованиям указанной НД.

Ионостигмин - ионообменная соль аминостигмина и катионита КУ-2чМ (сульфированного сополимера стирола и дивинилбензола). Синтезирован НПО «Биомед» совместно с Пермской фармацевтической академией. Использованные в работе серии ионостигмина предварительно проверены по показателям ФС 42-3469-99; каждая из них удовлетворяет всем требованиям указанной НД.

Опытные серии препарата «Таблетки П-10М, покрытые оболочкой» изготовлены НПО «Биомед» совместно с Пермской фармацевтической академией.

Разработку методик оценки качества таблеток П-10М проводили на образцах, изготовленных в период с 1994 по 1999 г.г.

Спектрофотометрические исследования в УФ-области проводили на спектрофотометре СФ-121. Хроматографические исследования методом ВЭЖХ проводили на жидкостных хроматографах, основные блоки которых преимущественно изготовлены «LABORATORNi PRiSTROJE» (ЧССР):

1. насос НРР 5001, петлевой дозатор LCI30, УФ-детектор LCD 2563, самописец TZ4620 и вычислительный интегратор CI-100;

2. насо с LCP 3001, петлевой дозатор «Rheodyne 7010», УФ-детектор LCD 2563, самописец TZ 4620 и вычислительный интегратор CI-105.

Некоторые этапы работы выполнены на хроматографе «Милихром-4».

Все реактивы и растворители, используемые в настоящей работе, кроме особо оговоренных случаев, описаны в соответствующих разделах ГФ XI. Статистическую обработку результатов анализа проводили по методике, рекомендованной ГФ XI (вып. 1, с. 200).

Физико-химические свойства аминостигмина, фторацизина и нопостигмина.

В ходе исследования изучены растворимость и спектральные характеристики лекарственных веществ, входящих в состав таблеток П-10М.

Изучение растворимости исследуемых лекарственных веществ необходимо для подбора растворителей, использование которых возможно при исследовании хроматографического поведения аминостигмина и фторацизина, разработке способов пробоподготовки (извлечение действующих лекарственных веществ из лекарственной формы) и методик анализа изучаемой таблетированной формы.

Растворимость определяли в соответствии с методикой ГФ XI (вып. 1, с. 175), внося в каждом случае в 10 мл 0,01 г лекарственного вещества; соотношение вещество-растворитель выбрано нами, исходя из высокой чувствительности методов исследования, которые в дальнейшем нами были использованы; возможностями приготовления анализируемых растворов в оптимальной для работы концентрации, растворимости в элюенте. Данные по растворимости аминостигмина и фторацизина в воде, диэтиловом эфире, и ионостигмина в воде взяты из соответствующих НД.

Эффект растворения оценивали визуально. Результаты эксперимента представлены в табл. 1.

Таблица 1.

Растворимость аминостигмина, фторацизина и ионостигмина.

Растворитель Аминосшгмин Фторацизин Ионо стигм ин

Вода + ± —

Метанол + + -

Ацетонитрил + + -

Изопропанол + + -

Диэтиловый эфир - - -

Хлористый метилен - + -

Хлороформ - + -

Гексан - -

Ацетон + —

ДМФА • + -

+ - лекарственное вещество растворяется полностью;

± - при растворении лекарственного вещества образуется мутный раствор;

- - внесенное количество лекарственного вещества практически не растворяется.

С учетом полученных данных по растворимости объектов исследования выбраны растворители для изучения спектральных характеристик аминостигмина и фторацизина в УФ-области спектра.

УФ-спектры аминостигмина и фторацизина сняты на спектрофотометре СФ-121 в диапазоне длин волн от 200 до 360 нм в кювете длиной 10мм. Основные

спектральные характеристики полученных спектров приведены в табл. 2.

Таблица 2.

Спектральные характеристики аминостигмина и фторацизина.

Растворитель Длина волны в максимуме поглощения Удельный коэффициент экстинкции Примечание

Аминостигмин

Вода 264 113

Метанол 210 263 163 105

Изопропанол 211 259 122 106

Ацетонитрил 230,5 271 298 275 225 177 Максимум при 298 нм выражен не отчетливо

* Фторатвин

Вода 217-225 253-261

Метанол 210 227 566 512,5

Изопропанол 229 470

Ацетонитрил 228 485

во всех спектрах присутствует небольшое плечо в диапазоне 250-260 нм

Определение спектральных характеристик ионостигмина не проводили ввиду его нерастворимости в выбранных растворителях.

Высокая способность аминостигмина и фторацизина поглощать излучение в диапазоне от 200 до 360 нм позволяет предложить для регистрации аналитического сигнала детектор по измерению оптической плотности в УФ-области спектра Исходя из спектров поглощения исследуемых веществ для детектирования выбрана длина волны 254 нм. Данная длина волны находится в областях спектров, близких к тем максимумам поглощения аминостигмина и фторацизина, которые характеризуются наибольшими значениями удельного коэффициента экстинкции.

Хроматографическое разделение аминостигмина и фторацизина как в нормально-фазном, так и в обращенно-фазном вариантах осуществляли при комнатной температуре 20±2°С.

Исследование хроматографичсского поведения аминосгигмина и фторацизина

Изучено хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина при совместном присутствии как в нормально-фазном, так и в обращенно-фазном варианте. Ионостигмин - ионообменная соль катионита и аминостигмина -нерастворим ни в одном из выбранных растворителей (см. табл. 1) и не принимает участия в хроматографическом процессе.

Из строения обоих объектов исследования следует, что они являются солями хлористоводородной кислоты, в их структуре присутствуют различные по своей природе активные центры (например, атомы азота в пиридиновом, фенотиазиновом кольцах и в диалкиламинных группах). Такое строение соединений приводит к некоторым трудностям определения, ибо сорбция в этом случае будет осуществляться по нескольким механизмам одновременно. Так, если вещества анализируются в виде оснований, то в процессе сорбции-десорбции принимают участие все три атома, а если в виде соли, то основной вклад вносят атомы азота ароматических колец. Исходя из этого положения, изучено хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина как в виде оснований, так и в виде солей.

Нормально-фазный вариант. Хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина исследовали на полярном сорбенте Берагоп ЗвХ.

При подборе состава элюента использовали смеси гексан-метанол, гексан-изопропанол и метанол-ацетонитрил различного состава. Варьированием содержания растворителей в элюенте (без применения каких-либо добавок-модификаторов) добиться разделения аминостигмина и фторацизина не удалось.

Чтобы уменьшить нежелательное влияние протонизированных аминных групп на механизм сорбции молекул и форму хроматографического пика обычно используют введение электролитов-модификаторов, анион которых образует достаточно прочную ионную пару с катионом сорбата. В нашем случае использовали ацетат аммония, присутствие которого в элюенте поддерживает рН около 7, а ацетат-ион блокирует положительно заряженные центры молекулы сорбата. Ацетат аммония вводили в количестве 0,01-0,5 моль/л в смеси гексан-изопропанол и метанол-ацетонитрил различного состава. Однако присутствие такого модификатора в элюенте не привело к достижению селективности разделения и симметрии пиков.

В хроматографической практике нередко применяется добавление органических аминов в подвижную фазу. Органические амины в этом случае не только меняют рН среды, но и выполняют роль модификаторов - прикрывают как силанольные группы поверхности сорбента, снижая тем самым его адсорбционную активность, так и активные центры сорбатов.

jj

Нами изучено влияние аммиака, диэтиламина, триэтиламина, этилендиамина и моноэтаноламина на хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина. Перечислешше вещества вводили в количестве от 0,1 до 0,6% в подвижную фазу на основе гексана с различным содержанием полярного компонента - изопропанола. Исследования показали, что наилучшее разделение аминостигмина и фторацизина наблюдается при элюировании данных лекарственных веществ смесью состава гексан-изопропанол (75:25), содержащая 0,05 моль/л диэтиламина. Скорость потока элюент 0,6 мл/мин, длина волны детектирования 254 нм (рис. 1).

О 4 В 12 Время, мин

Рис. 1. Типичная хромагограмма смеси фторацизина (I) и аминостигмина (II). Колонка Separen SGX, 3,3x150 мм, 7 мкм. Элюент: гексан-изопропанол (75:25), содержащий 0,05 моль/л диэтиламина. Скорость потока элюент 0,6 мл/мин, длина волны детектирования 254 нм. I - фторацизин, II - аминостигмин

Обрашенно-фазный вариант. Хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина изучали на неполярных сорбентах Separon SGX C18HNucleosil 100С18.

В экспериментальных исследованиях некоторых авторов при определении фторацизина в элюент добавляется триэтиламин как модификатор подвижной фазы и поверхности сорбента. Нами изучено влияние триэтиламина и диэтиламина на процесс хроматографического разделения аминостигмина и фторацизина. Установлено, что модифицирование водно-метанольных и водно-ацетонит-рильных подвижных фаз различного состава триэтиламином либо диэтиламином (в количестве от 1,0 до 1,5%) позволяет определять аминостигмин и фторацизин лишь по отдельности, в то время как при совместном присутствии данных лекарственных веществ в пробе добиться разделения не удалось.

Изучено влияние ион-парных реагентов с различной длиной алифатической цепи (натрия лаурилсульфата, натрия гексилсульфоната, аммония ацетата)

на хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина. В ходе исследований использовали подвижные фазы на основе воды с добавлением ацетонитрила, метанола либо изопропанола. Из перечисленных ион-парных

реагентов наиболее пригодным для решения нащих задач оказался ацетат аммония, использование которого позволило добиться

селективности разделения и удовлетворительной симметрии пиков. Подобраны следующие условия определения

аминостигмина и фторацизина: стеклянная колонка размером 3,3x150 мм, заполненной сорбентом Separon SGX С18 с диаметром зерен 7 мкм. Объекты исследования элюировали подвижной фазой состава метанол-вода (75:25), содержащей 0,1 моль/л аммония ацетата. Скорость потока элюента 0,6 мл/мин; длина волны детектирования 254 нм (рис.2).

о е_ с

ч о

CQ

m

JJU

8

-г-

12

16

—г-

20

Время, мин

Рис. 2. Типичная хромагограмма смеси аминостигмина (I) и фторацизина (II). Колонка Separon SGX С18, 2x120 мм, 7 мкм. Элюент: метанол-вода (75:25), содержащая 0,1 моль/л ацетата аммония; скорость элюирования равна 0,6 мл/мин, длина волны детектирования 254 нм. I - аминостигмин, II - фтор-ацизин.

С целью снижения расхода дорогостоящих растворителей и повышения эффективности разделения исследуемых веществ подобраны условия анализа аминостигмина и фторацизина в микроколоночном варианте. За основу взяли уже разработанный вариант для колонки Separon SGX CI8. Для улучшения массообмена в подвижную фазу введен тетрабутиламмония бромид.

Изменением концентрации метанола, ацетата аммония и тетрабутиламмония бромида в элюенте удалось добиться разделения аминостигмина и фторацизина на стальной колонке Nucleosil 100 С18 размером 120x2 мм (диаметр частиц сорбента 7 мкм). Оптимальными являются следующие условия: элюент состава метанол-вода (6:4), содержащий 0,05 моль/л ацетата

аммония и 0,002 моль/л тетрабутиламмония бромида; скорость элюирования равна 0,5 мл/мин, длина волны детектирования 254 нм. Картина хроматографического разделения аминостигмина и фторацизина в данных условиях принципиально ничем не отличается от представленной на рис. 2.

Стандартизация и анализ таблеток П-10М, покрытых оболочкой

Изучено влияние третьего лекарственного вещества, входящего в состав таблетированной формы - ионостигмина. Установлено, что использование растворителей, содержащих ионогенные вещества (элюент, растворы хлористоводородной кислоты различной концентрации и т.д.), для извлечении аминостигмина и фторацизина в ходе пробоподготовки приводит к десорбции аминостигмина из ионостигмина; протекание ионообменных процессов искажает результаты количественного определения лекарственных веществ.

Также исследовано влияние вспомогательных компонентов, использованных при получении таблеток (МКЦ, ОПЦ, ПВП, ПЭО, крахмал, тальк, твин 80, аэросил, глицерин, ТЮ2), на хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина. Из всех веществ лишь твин 80 дает на хроматограмме несколько пиков, перекрывающихся с пиком аминостигмина. Кроме того, поверхностно-активные вещества и мелкодисперсная фракция ТЮг, входящие в состав ядра и оболочки таблеток П-10М, в полярных растворителях (вода, метанол и др.) образуют устойчивую суспензию.

Нами разработана процедура пробоподготовки, позволяющая устранить вышеперечисленные негативные факторы.

Установлено наличие линейной зависимости площади пика от содержания лекарственного вещества в испытуемом растворе в области рабочих концентраций аминостигмина (1,5*10^- 4,5* 106 г/мл) и фторацизина (3*10^ -15* Ю-5 г/мл) (см. рис. 3 и 4.).

30 -I

0

га 25 -

£

То 20*3 15 •

| ю-

1 "

о .....

0 1 2 3 4 5

Концентрация аминостигмина, *10б, г/мл Рис. 3. Зависимость плошали пика от концентрации аминостигмина

30 л

0 -I-1-1-1-1-,-1-1-1-,-1->-.-!-1-1-,

О 2 4 6 8 10 12 14 16 Концентрация фторацизина *105, г/мл

Рис. 4. Зависимость площади пика от концентрации фторацизина

Зависимости площадей пиков аминостигмина и фторацизина от концентрации в изученных пределах были аппроксимированы следующими линейными уравнениями с помощью метода наименьших квадратов:

1. 8 = 7,1662*10'° * С + 0 (для аминостигмина),

2. 8 = 1,6643*10'* С+ 0(для фторацизина), ще Б - площадь пика, мВ *с;

С - концентрация лекарственного вещества, г/мл.

Полученные уравнения описывают экспериментальные данные с высоким уровнем достоверности и адекватности. Коэффициенты корреляции равны 0,9963 для аминостигмина и 0,9988 для фторацизина

Для оценки точности и воспроизводимости разработанной ВЭЖХ-методики определения аминостигмина и фторацизина использовали модельную смесь. Субстанции лекарственных веществ, входящих в состав модельной смеси, предварительно контролировали по соответствующей нормативной документации: для аминостигмина ФС 42-2675-89, для фторацизина ФС 42-205597. Результаты анализа модельной смеси представлены в табл. 3.

На основании результатов проведенных исследований разработана ВФС, в разделах «Подлинность», «Количественное определение», «Однородность дозирования» и «Растворение» которой использована разработанная нами методика анализа аминостигмина и фторацизина. Раздел «Количественное определение ионостигмина» разработан совместно с Пермской государственой фармацевтической академией.

Подлинность лекарственных веществ устанавливается по совпадению времен удерживания пиков аминостигмина и фторацизина на хроматограммах испытуемого раствора и раствора стандартного образца.

Таблица 3.

Результаты количественного определения аминостигмина и фторацизина в модельной смеси исследуемых таблеток

Введено, г Определено, г Метрологические характеристики

Аминостигмина 0,000375 0,000359,0,000364, 0,000367,0,000369, 0,000371,0,000378, 0,000381,0,000389, 0,000394,0,000397 X =0,000377, /=9; £2=1,71*Ю"10 ,$'=1,31*10"5;£;=Ч14*10"6 Ах =0,0000292; Ах =0,000092 Б =±7,75%; 8 =±2,45%

Фторацизина 0,03 0,0289,0,0295, 0,0296,0,0297, 0,0301,0,0302, 0,0303,0,0303, 0,0304, 0,0306 2 7 X =0,02994, /-9; £ =1,47* 10 Я =3,84* 10"4; =1,21*104 Дл: =0,00086; А Зс =0,00027 8 =±2,86%; 8 =±0,91%

Количественное содержание аминостигмина и фторацизина в таблетке рассчитывается, исходя из значений площадей пиков лекарственных веществ на хроматограммах испытуемого раствора и раствора стандартного образца.

Разработанный способ определения аминостигмина, фторацизина и ио-ностигмина апробирован на опытно-промышленных сериях таблеток П-1 ОМ (9 серий). Все проанализированные серии таблеток соответствуют требованиям НД.

Нами проведены исследования по установлению срока годности таблеток П-1 ОМ в естественных условиях и методом «ускоренного старения». Показателями стабильности лекарственных веществ являются отсутствие продуктов разложения и количественное содержание. Контроль за качеством лекарственной формы проводили по показателям ВФС.

На основе проведенных исследований установлен срок годности таблеток П-1 ОМ в естественных условиях - 3 года.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведены анализ и обобщение данных литературы, сравнительная оценка уровня требований и методик контроля качества, включенных в российские и зарубежные НД на фторацизин, аминостигмин и лекарственные вещества, сходные по химическому строению с объектами исследования. Показана необходимость повышения уровня требований к качеству и унификации методик анализа исследуемых препаратов, на базе использования современных инструментальных методов.

2 Изучено хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина на различных типах неподвижных фаз: полярная неподвижная фаза -^модифицированный силикагель, неполярная неподвижная фаза -силикагель, модифицированный октадецилсиланом (С18). Обоснованы ограничешюсть использования полярной неподвижной фазы для анализа изучаемых соединений, а также преимущества и недостатки использования неполярной неподвижной фазы. Подобраны оптимальные условия определения аминостигмина и фторацизина методом обращенно-фазной ВЭЖХ.

3. Разработана и предложена унифицированная методика определения аминостигмина и фторацизина при совместном присутствии в лекарственной форме с использованием обращенно-фазного варианта ВЭЖХ. Определены относительная погрешность отдельной варианты (7,75% для аминостигмина и 2.86% для фторацизина) и относительная погрешность среднего результата (2,45% и 0,91% для аминостигмина и фторацизина соответственно).

4. Изучено влияние вспомогательных веществ, входящих в состав ядра и оболочки таблеток, хроматографическое поведение аминостигмина и фторацизина. Установлено, что все вспомогательные компоненты, за исключением твина-80, не мешают хроматографическому определению исследуемых лекарственных веществ. Предложена методика, позволяющая отделить твин-80 от анализируемой пробы без изменения содержания лекарственных веществ.

5. Исследовано влияние ионостигмина на количественное определение аминостигмина при использовании различных растворителей (как содержащих, так и не содержащих электролиты) для извлечения лекарственных веществ из таблеток П-1 ОМ. Предложен способ устранения мешающего влияния ионного обмена с одновременным исключением образования устойчивых суспензий, что обусловлено наличием в составе ядра и оболочки таблеток поверхностно-активных веществ и мелкодисперсной фракции ТЮ2.

6. Разработаны и апробированы на опытно-промышленных сериях таблеток, изготовленных НПО «Биомед» совместно с Пермской фармацевтической академией, методики оценки качества многокомпонентной лекарственной формы «Таблетки П-10М, покрытые оболочкой» по показателям: «Подлинность», Количественное определение», «Однородность дозирования» и «Растворение».

7. Изучена стабильность антидота П-10М при хранении в естественных условиях и при повышенных температурах. Установлен срок годности изученной лекарственной формы - 3 года;