Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛИСТЬЕВ ЗЕМЛЯНИКИ ЛЕСНОЙ И САДОВОЙ РЕГИОНА УРАЛА



На правах рукописи

ПЕТУХОВЛ ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

ФАРМАКОГНОСШЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛИСТЬЕВ ЗЕМЛЯНИКИ ЛЕСНОЙ И САДОВОЙ РЕГИОНА УРАЛА

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2003

Работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической академии

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук,

профессор Олешко Г. И.

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор фармацевтических щук, профессор Фурса Н. С. кандидат фармацевтических наук, доцент Калива М. А.

Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Защите состоится 23 декабря 2003 года в 13 часов на заседании двссертацвонво-го совета Д 208.068.0f при Пермской государственной фармацевтической академии по ад* ресу: 614990, г, Пермь, ул. Ленина, 48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академик по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан 21 ноября 2003 г.

"Ученый секретарь

диссертационного совета Л) Метелева Е, В,

/

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Лекарственные препараты, получаемые из растений, занимают важное место среда средств профилактики и лечения многих заболеваний, Пополнение арсенала лекарственных препаратов растительного происхождения является актуальной задачей, так как спрос на них удовлетворяется меньше, чем на 50%. Особую значимость при решении этой проблемы приобретает вопрос поиска новых источников, способных расширить сырьевую базу и номенклатуру лекарственного сырья.

Земляника лесная широко применяется в научной и народной медицине, является ценным продуктом питания, источником витаминов, минеральных и органических соединений. Как лекарственное растение земляника лесная упоминается в литературе уже в ХШ веке. В мировой литературе описано 7 видов и около 3000 культурных сортов земляники Fragaria L.

В научной медицине применяются листья и плоды земляники лесной -Fragaria vesca L. как диуретическое, спазмолитическое, желчегонное, жаропонижающее и гипогликемическое средство.

В аптеках города Перми и области сырье «Листья земляники» отсутствует, что можно объяснить трудоемкостью заготовки от дикорастущих растений, а также тем, что в последние годы в природе, особенно около крупных населенных пунктов, наблюдается резкое ухудшение состояния земляничников. Это происходит из-за неправильного сбора (вырывания растения с корневищем и усами), вытаптывания животными при выпасах, использования земли под дачные участки, ухудшения экологии.

Повсеместно в регионе Урала культивируют землянику различных садовых сортов (Fragaria ananassa). Земляника садовая является наиболее распространенной ягодной культурой и в Российской Федерации, и в мнре. Эта культура сочетает в себе высокую пластичность, приспособляемость к самым разным условиям среды, хорошую и ежегодную урожайность, легкость и быстроту размножения побегами-усами. В большинстве районов культуры по; —•

; ; i ;V- дШВ

еле сбора урожая плодов листья немедленно скашивают для снижения пора-жаемости растений болезнями и вредителями; скошенные листья собирают и уничтожают.

Систематическое родство земляники лесной - Fragaria vesca и садовой -Fragaria ananassa, культивирование садовых сортов земляники на больших площадях и значительные объемы неиспользуемых листьев земляники садовой представляют интерес для возможного использования их в медицинских целях.

В настоящее время в медицинской практике листья земляники лесной применяют только в виде настоя. Такая лекарственная форма имеет ряд существенных недостатков; неполное извлечение биологически активных веществ, неточность дозирования, ограниченный срок хранения и кратковременность терапевтического действия. Экстракционные лекарственные формы, в частности экстракты сухие, обладают рядом преимуществ по сравнению с настоем: легкость и быстрота дозирования, устойчивость при хранении, возможность создания новых лекарственных препаратов на их основе.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью данной работы является изучение возможности введения в научную медицину листьев земляники садовых сортов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: • провести:

- сравнительный фитохимический анализ листьев земляники лесной и садовой;

- изучение товароведческих показателей листьев земляники садовой;

- сравнительные ресурсоведческие исследования листьев земляники лесной и садовой;

- сравнительное изучение фармакологической и микробиологической активности земляники лесной и садовой;

• разработать:

- проект Инструкции по заготовке листьев земляники садовой;

- нормативный документ - проект ФСП на листья земляники садовой;

- оптимальные условия получения экстракта листьев земляники садовой сухого и параметры стандартизации полученной субстанции;

- нормативный документ - проект ФСП, технологический документ - лабораторный технологический регламент на получение экстракта листьев земляники садовой сухого.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые проведено комплексное фармаког-ностическое изучение листьев земляники лесной и садовой региона Урала.

В листьях земляники лесной и в листьях земляники садовой установлено наличие флавоноидов, дубильных веществ, кумаринов, органических кислот, кислоты аскорбиновой и каротиноидов.

Впервые в листьях земляники садовой идентифицированы два флаво-ноида, три моносахарида в составе полисахаридного комплекса, восемь аминокислот и восемнадцать микроэлементов.

Сравнительное изучение биологически активных веществ: флавоноидов, суммы окисляемых веществ, полисахаридов, органических кислот и каротиноидов показало близкое их содержание в листьях земляники лесной и садовой. Количество кислоты аскорбиновой в листьях земляники садовой в два раза больше, чем в лесной.

В период цветения и после окончания плодоношения содержание флавоноидов, суммы окисляемых веществ, полисахаридов, органических кислот, кислоты аскорбиновой и каротиноидов в листьях земляники лесной и садовой высокое и не имеет существенных отличий.

Впервые проведено морфолого-анатоми веское изучение листьев земляники садовой, выявлены диагностические признаки для определения подлинности сырья, разработаны товароведческие показатели качества сырья «Листья земляники садовой».

Впервые определены оптимальные условия получения экстракта листьев земляники садовой сухого.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Установлена возможность использования листьев земляники садовой в научной медицине в качестве диуретического, противовоспалительного и ранозаживляющето средства. Диуретический эффект сопоставим с таковым для листьев земляники лесной, но выражен в два раза сильнее. Установлено наличие антимикробной активности листьев земляники лесной и садовой в отношении Staphylococcus aureus и Esherichia coli.

Проведена стандартизация сырья «Листья земляники садовой»: определены показатели качества сырья, диагностические особенности, разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин. Все показатели включены в Проект ФСП «Листья земляники садовой».

Разработан проект Инструкции по заготовке листьев земляники садовой: рекомендована заготовка сырья как во время цветения, так и после окончания плодоношения.

Ресурсоведческие показатели листьев земляники лесной и садовой на примере Пермской области свидетельствуют о том, что листья земляники садовой имеют обеспеченную сырьевую базу и являются перспективным сырьем для заготовки.

Получена субстанция «экстракт листьев земляники садовой сухой», проведена ее стандартизация. Показатели качества экстракта листьев земляники садовой, методика количественного определения суммы флавоноидов включены в ФСП «Экстракт листьев земляники садовой сухой». Разработан лабораторный технологический регламент получения экстракта листьев земляники садовой сухого. Лабораторный технологический регламент апробирован на ОАО «Биохиммаш», г. Москва.

Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе на факультете дополнительного профессионального образования в Пермской государственной фармацевтической академии и в качестве лекционного материала на курсе усовершенствования фармацевтов ГОУ ДПО Пермского областного центра повышения квалификации. НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ РЕЗУЛЬТАТЫ:

• сравнительного фотохимического анализа листьев земляники лесной и садовой;

• товароведческого анализа листьев земляники садовой;

• изучения фармакологической активности листьев земляники лесной и садовой;

• ресурсоведческих исследований листьев земляники лесной и садовой;

• по разработке оптимальных условий получения экстракта листьев земляники сдзовой сухого и параметры стандартизации полученной субстанции.

ПУБЛИКАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ИССЛЕДОВАНИЯ И АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. По теме диссертации опубликовано 11 работ. Материалы диссертационной работы представлены на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава Пермской государственной фармацевтической академии (Пермь, 2001,2002, 2003гг.), на международном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002, 2003гг.), на областной научной конференции молодых ученых, студентов н аспирантов «Молодежная наука Прикамья - 2002» (Пермь, 2002г.), на четвертом конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2003г.).

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической академии в соответствии с планом научно-исследовательских работ по проблеме "Изучение лекарственной флоры РФ" (номер Государственной регистрации 01.9.10.018875),

Тема утверждена на заседании Ученого совета Пермской государственной фармацевтической академии (протокол № 5 от 25.01.01).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Работа изложена на 154 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (I глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и 10 приложений; иллюстрирована 11 рисунками и 54 таблицами. Список литературы включает 196 источников, в том числе 33 иностранных авторов,

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту.

Обзор литературы представлен в первой главе и включает данные по систематическому положению, морфологической н сырьевой характеристике, особенностям биологического развития, химическому составу, применению в научной и народной медицине листьев земляники; лекарственным формам из лекарственного растительного сырья.

Во второй главе обоснован выбор объектов и методов исследования. Объектами исследований явились образцы листьев земляники леской и садовой, заготовленные на территории региона Урала, а также водные, водно -спиртовые, хлороформные, гексановые извлечения из сырья, полученные в лабораторных условиях и субстанция «экстракт листьев земляники садовой сухой», полученная на ОАО «Биохнммаш».

Образцы листьев земляники лесной и садовой заготовлены из территории Пермской, Челябинской, Свердловской областей, в Башкортостане и Удмуртии, Исследовали образцы листьев земляники садовой смешанных сортов, собранные на частных садовых участках и образцы чистых районированных сортов - «Фестивальная», «Ромашка фестивальная», «Фея», «Най-

дена», «Рубиновый кулон», собранные на территории ФГУП Племзавода «Савинский» Пермской области.

Все образцы заготовлены в 200Ь02гг. в два срока: 1-й - период цветения согласно Инструкции по сбору и сушке листьев земляники лесной, 2-й -цосле окончания плодоношения (в фазу вторичной вегетации) и высушены воздушно-теневым способом.

Всего проанализировано 88 образцов листьев земляники с 49 участков заготовки. Из них: 40 образцов листьев землянихи лесной, 20 - листьев земляники садовой чистых сортов и 28 - листьев земляники смешанных сортов.

Дня проведения качественного фитохимического анализа использовали химические реакции, методы восходящей хроматографии на бумаге, хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках «ЗНиЫ» и спектрального анализа.

Количественное определение основных групп биологически активных веществ проводили, используя титриметрические, гравиметрический и спек-трофотометрический методы анализа.

Изучение минерального состава листьев земляники лесной и садовой проводили методом атомно-абсорбционной спектроскопии в аккредитованном аналитическом испытательном центре ОАО «Уральская центральная лаборатория», г, Екатеринбург.

Изучение товароведческих показателей проводили в соответствии с требованиями ГФ XI и ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств».

Определение запасов листьев земляники проводили на конкретных зарослях методом модельных экземпляров (Методика1986).

Диуретическую активность определяли по методу Гацуры В. В.(1974), противовоспалительную активность - в соответствии с методическими рекомендациями по изучению новых нестероидных препаратов (2000), раноза-

живляющую активность определяли на модели линейной резаной раны (1979).

Микробиологические исследования проводили по статье ГФ XI, вып. 2, с. 187 и Изменению № 2 к статье «Методы микробиологического контроля лекарственных средств».

ИЗУЧЕНИЕ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

В листьях земляники лесной и садовой обнаружены флавоноиды, дубильные вещества, кумарины, полисахариды, кислота аскорбиновая, органические кислоты, аминокислоты и каротиноиды. С аутентичными образцами идентифицированы: флавоноиды-гликозиды - рутин, кверцитрин; флаво-новды-агликокы — кверцетин, кемпферол; моносахара в составе полисаха-ридного комплекса - глюкоза, галактоза, рамноза; аминокислоты - аспараги-новая кислота, глицин, серии, глутаминовая кислота, цистеин, алашш, ме-тиокин, лейцин; по величине б.?, флуоресценции и в сопоставлении с литературными данными определены кумарины - кумарин, умбеллиферон, скопо-летин; каротиноиды - бета-каротин.

Листья земляники лесной и садовой содержат фосфор, марганец, барий, стронций, иттрий, титан, хром, медь, цинк, свинец, серебро, ниобий, ванадий, никель, кобальт, молибден, берилий, олово. Преобладающими во всех образцах являются фосфор, марганец, барий, стронций. Из токсичных элементов в сырье присутствуют - свинец и медь в концентрации 0,42-5 мг/кг и 3,5-6,3 мг/кг соответственно, что не превышает предельно допустимые.

Проведено количественное определение основных групп биологически активных веществ в листьях земляники лесной и садовой. Листья земляники садовой содержат флавоноиды, сумму окисляемых веществ, полисахариды, органические кислоты, кислоту аскорбиновую и каротиноиды в количествах, сопоставимых с аналогичным содержанием в листьях земляники лесной. В листьях земляники садовой содержание всех групп биологически активных

ю

веществ несколько выше, чем в листьях земляники лесной. Смешанные сорта земляники садовой накапливают почти в два раза больше кислоты аскорби-

новой, чем чистые сорта, а содержание каротиноидов в них меньше (табл. 1).

Таблица I

Содержание биологически активных веществ в листьях земляники

Группа БАВ Период заготовки Содержание БАВ, % или мг%*

Земляника лесная Земляника садовая

чистые сорта Смешанные сорта

Флавояонды 1 2,2 ±0,4 2,6 + 0,4 2,4 + 0,5

2 2,5 ±0,4 2,5 ± 0,5 2,1+0,3

Окисляемые вещества 1 22,5 + 2,6 23,1 ± 1,9 26,6 + 4,2

2 25,4 ±4,4 26,9 ±3,4 27,5 ± 3,5

Полисахариды 1 6,4 ±0,6 7)5 ± 0,5 6,9 + 0,5

2 7,1+0,5 6,0 ±0,6 5,4 + 0,6

Органические кислоты I 2,5 ±0,3 3,6 ±0,4 2,9 ± 0,5

2 2,8 ± 0,4 4,3+0,5 3,3 ±0,5

Кислота аскорбиновая 1 221,2+18,3* 205,9 ±18,2« 452,7±20,3*

г 293,2 ±19,5* 282,7 ± 18,5* 465,7 + 21,6*

К&ротшюкды 1 0,7 + 0,2* 1,1+0,3* 0,6 + 0,1*

2 0,9 + 0,5* 1,1 ±03» 0,8 + 0,3*

Примечание: 1 - период цветения, 2 - период после окончания плодоношения

Содержание биологически активных веществ во второй период заготовки близко к таковому при заготовке сырья в период цветения.

Таким образом, листья земляники садовой по содержанию флавонои-дов, суммы окисляемых веществ, полисахаридов и органических кислот не уступают листьям земляники лесной, а по содержанию аскорбиновой кислоты превосходят их.. Целесообразно рекомендовать сбор листьев земляники после окончания плодоношения, что позволяет получить сырье с высоким содержанием биологически активных веществ и сохранить урожай плодов.

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛИСТЬЕВ ЗЕМЛЯНИКИ

САДОВОЙ

Морфологические признаки листьев земляники лесной и садовой идентичны, но листья земляники садовой более крупные и имеют темно-

зеленую окраску (табл. 2).

Таблица 2

Морфометрическне показатели листьев земляники

Длина Ширина Масса воздуш-

Земляника листа, листа, но-сухого листа,

см см г

Садовая сорта чистые 6,9 + 0,1 5,8 ±0,2 0,57 ±0,19

смешанные 5,7 ±0,4 4,9 + 0,3 0,53 ±0,16

Лесная 3,9 ±0,08 2,5 ± 0,06 0,23 ± 0,14

Анатомические признаки листьев земляники лесной и садовой аналогичны. Диагностическое значение имеют: характер клеток эпидермиса, тип устьичного комплекса, расположение и характер волосков, наличие друз ок-салата кальция и призматических кристаллов.

Для стандартизации листьев земляники садовой выбраны флавоноиды, которые содержатся в растительном сырье в значительных количествах и по данным Садиковой В.К., Коноплевой ММ. (1988), Воротынпевой Н.И., Бу-бенчиковой В.Н. (2000) определяют фармакологический эффект.

Разработана методика количественного определения суммы флавонои-дов в листьях земляники садовой. Для количественной оценки суммы флаво-ноидов предложен епектрофотометрический метод, основанный на способности комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом поглощать монохроматический свет при длине волны 405 нм. Расчет содержания суммы флавоноидов вели в пересчете на рутин.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье «Листья земляники садовой» рассчитаны

из результатов анализа одного образца сырья в 10 независимых повторно-стях (табл. 3),

Таблица 3

Метрологические характеристики методики количественного опреде-

ления суммы флавоноидов в пересчете на рутин в листьях земляники

садовой

/ X S Р>% t(PJ) Лх Е, %

9 2Д5 ОД 15 95 2,26 0,082 ±3,64

Относительная ошибка единичного определения с вероятностью 95% составила ± 3,64 %■ Опыты с добавками PCO рутина к навеске сырья показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики. Содержание суммы флавоноидов в листьях исследуемых образцов находится в пределах 2,5±0,5% (табл. 4).

Установлены требования к качеству сырья: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин — не менее 1,5%, влажность не более 13%; золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более б%; листьев с остатком черешка длиной более 1 см не более 5%; других частей растения не более 5%; органической примеси не более 0,5%; минеральной примеси не более 1%. Срок годности сырья - 2 года.

На основании проведенных исследований разработан проект ФСП «Листья земляники садовой».

Таблица 4

Результаты товароведческого анализа листьев земляники садовой

Место сборе № Образец и срок сбора 1 * ш Г а Зола 1 * к ^ V В >=! * ц з § I ||||| й II Б и Примеси

общая, % иераствори . мая в 10% на органн ческая, % минера льная, %

зН ш с ^ & Фестивальная (1) 2,90 6,5 9,8 5.0 1.1 _0[02_ 0,51 0,15 0,03 0,01

2, Фестивальная (2) 2,8» , А4.., 1,3 • 040 0,03 0,03 -

3. Найдена (1) 2,»5 6,3 9,3 4,5 0,3 - 0,65 0,10 0.05

4. Найдена (2) 2,74 6.1 4,6 - 0,44 0,28 0,03 0,02

5. Ромашка Фестивальная (1) 2.28 6,8 8.4 - 0,01 0,50 0,25 ■ •

6. Ромашка фестивальная (2) 2,12 6,9 8,6 4,4 1,4 * 0,38 0,13 *

7. Фея (1) 2.73 9,0 4,7 0,4 0,05 0,85 о, 15 0.05 0,09

8. Фея (2) 2,68 Л? . 8,6 4,4 - 1,70 0,20 -

9. Рубиновый кулон (1) 2,27 6,3 8,8 4,5 0,5 - 0,70 0,15 0,03 -

10. Рубиновый кулон (2) 2,10 6.4 9,8 5,3 0,04 0,50 0,24 - -

Г. Кукгур, л. Кадочиикоко 11. Сметанный (1) 2,44 6,8 .. .А4 , - - 0,10 0,13 0,05 0,10

12. Сметанный (2) 2,36 6.8 8,5 4,3 - - 1,80 0.30 0,02 -

Свердловская обл. г, Артемовен пй и. Смешан кий (1) 2,16 6,8 9.5 2,0 0,03 0,38 0,50 0,02 0,07

14 Смешанный (2) 2,06 6,9 9,8 . 5,5 1,9 - 0,90 0,50 0.04 0,06

г. Кудым кар 15. Смешанный (1) 2,60 6.7 8,8 4,5 1.7 - - -

16. Смешанный (21 2,37 6,6 8,8 4.6 1,4 0,30 0,05 -

Башкортостан, Ёслсрецкнй р-н 17. Смешанный (1) 3,48 6,8 9,9 5,6 0,9 - 1,50 0.50 - -

1«. Смешанный (2) 2,02 6,7 9,6 5,4 1,7 - 1,35 - 0,03 0,09

Среднее значение 2,50 6,7 9,1 4,» 0,» 9,06 0,73 9,21 0,02 0,03

Примечание; (I)-период ивггеикя, (3)- период после окончания плодоношения

РЕСУРСОВЕДЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Плотность запаса воздушно-сухого сырья у листьев земляники садовой чистых сортов составляет от 565 до 3849 г/м2, смешанных сортов - от 152 до 2662 г/м5, у земляники лесной - от 45 до 118 г/м2. Биологический запас у земляники садовой на сопоставимых площадях в 12 раз больше, чем у земляники лесной. Выход воздушно-сухого сырья у садовой земляники в 2-3 раза выше аналогичного показателя для листьев земляники лесной. Заготовка сырья листьев земляники ананасной перспективна.

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО ПОЛУЧЕНИЮ И СТАНДАРТИЗАЦИИ

ЭКСТРАКТА ЛИСТЬЕВ ЗЕМЛЯНИКИ САДОВОЙ СУХОГО

Установлены оптимальные условия экстрагирования из листьев земляники садовой для последующего получения экстракта сухого: экстрагент -вода очищенная, соотношение сырье: экстрагент - 1:10, температурный режим - 75 + 50С, размер частиц сырья - 3 мм, трехкратная экстракция (90 мин).

Полученный экстракт представляет собой порошок от желто-зеленого до коричневого цве!а со слабым запахом, горьковатым, слегка вяжущим вкусом, дающий положительную реакцию с 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида. УФ-спектр раствора экстракта с алюминия хлоридом, полученного для количественного определения, в области от 380 до 470 нм имеет максимум поглощения при длине волны 405+2 нм (рис. 1).

По содержанию влаги и тяжелых металлов субстанция соответствует требованиям ГФХ1, вып. 1, статья «Экстракты». По показателю «Микробиологическая чистота» экстракт листьев земляники садовой сухой удовлетворяет требованиям ГФ XI и Изменению № 2 (категория 4 Е).

А, нм

Рис.1 Дифференциальные УФ-спектры; 1 - PCO рутина, 2 - суммы флавоноидов экстракта листьев земляники садовой сухого

Для количественного определения суммы флавоноидоз в пересчете на рутин-стандарт использовали метод спектрофотометрии, разработанный для исходного сырья. Установлена норма содержания суммы флавоноидоз в экстракте листьев земляники садовой сухом - не менее 3,5%. Относительная ошибка единичного определения при доверительной вероятности 95% составляет ±3,2%.

Методом ускоренного старения при повышенной температуре установлен срок годности экстракта - 2 года.

На основании полученных данных составлен проект ФСП «Экстракт листьев земляники садовой сухой».

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ЛИСТЬЕВ ЗЕМЛЯНИКИ

При проведении предварительных фармакологических исследований лекарственных форм из листьев земляники лесной (настоя) и земляники садовой (настоя и экстракта сухого) установлено, что они обладают диуретической, противовоспалительной, раноэаживляющей и антимикробной активностью.

Настой из листьев земляники садовой в дозе 150 мгУкг оказывает диуретическое действие, что проявилось приростом объема мочи за 19 часов на 4,1 мл и увеличением диуреза через 24 часа на 106,9%, в то время как настой из листьев земляники лесной увеличивал диурез только на 31,0% (табл. 5).

Экстракт листьев земляники садовой сухой в дозе 150 мг/кг оказал диуретическое действие, что проявилось приростом объема мочи за 19 часов на 2,9 мл и увеличением диуреза через 24 часа на 75,9% (табл. 5),

Таблица 5

Диуретическая активность лекарственных форм из листьев земляники

Исследуемый объект Доза, мг/кг Количество животных Количество мочи (мл) через 5 часов Количество мочи(мл) через 24 часа Всего увеличение диуреза (мл) за 19 часов

Контроль 12 2,4 ±0,1 2,9 ±0,4 0,5 ± ОД

Настой из листьев земляники лесной 150 б 2,1+0,2 3,8 + 0,1* 1,7 ±0,1**

Настой из листьев земляники садовой 150 6 1,9+1,0 6,0 + 0,7*** 4,1+0,4***

Экстракт листьев земляники садовой сухой 150 6 2,2 ±0,5 5,1+0,4*** 2,9 ±0,3

Примечание: *р <0,05; 0,01; р < 0,001

Установлено, что настой из листьев земляники садовой обладает самостоятельным противовоспалительным действием, которое проявляется торможением каррагенинового отека и зависит от дозы (табл.6).

Сравнение выраженности противовоспалительной активности экстракта листьев земляники садовой сухого н индометацина (функционального аналога) показало, что субстанция не уступала типичному нестероидному противовоспалительному средству н проявила противовоспалительную активность в дозе 150 мг/кг (табл, 6).

Установлено, что настой из листьев земляники садовой проявляет ра-нозажнвляющий эффект: увеличивается прочность рубца на разрыв во все сроки наблюдения. У опытных крыс 50% ран не подвергались разрыву (табл. 7).

Таблица 6

Противовоспалительная активность лекарственных форм из листьев земляники

Исследуемый объект Доза, мгЛсг Число животных Торможение воспалительного отека, %

через 3 часа через 5 часов

Настой из листьев земляники лесной 150 6 10,5 + 4,9 8Д ±3,5

300 6 14,8 ±6,6 14,7 ±5,2

Настой из листьев земляники садовой 50 б 14,9,9 ± 4,4 10,5+3,7

150 6 44,1 ±3,9*** 45,9±3,1***

300 6 22,6 ± 1,9* 38,6 ±2,7***

Экстракт листьев земляники садовой сухой 150 6 36,9±3,5***1 40,9±3,3***i

Индометацин 10 6 30,2±2,4***i ***2 52,1+2,6***,

Примечание:* р < 0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001 ***i - по сравнению с контролем

***>-по сравнению с настоем из листьев земляники лесной

Таблица 7

Влияние настоя из листьев земляники садовой на заживление раны

Исследуемый объект Доза, мг/кг Прочность заживления раны, г Количество ран, ве подвергавшихся разрыву, %

5 день 14 день 5 день 14 день

Контроль 386,7 ±55,0 673,8 ±29,5 0 0

Настой из листьев земляники садовой 150 1060,0 + 30,5*** 1366,7 + 88,2*** 50*** 5Q4**

Примечание; *** р < 0,001

Настой и экстракт сухой из листьев земляники садовой обладают антимикробной активностью в отношении Е. coli и St. aureus в разведении 1:70 и 1;S0 соответственно. Более высокая активность отмечена у экстракта.

Лекарственные формы из листьев земляники садовой более активны, чем из земляники лесной.

ВЫВОДЫ

1, Проведено комплексное сравнительное фармакогностическое изучение листьев земляники лесной и садовой региона Урала с идентификацией основных компонентов. В исследуемых образцах установлено наличие флаво-ноидов, дубильных веществ, кислоты аскорбиновой, органических кислот, кумаринов, каротиноидов, полисахаридов, минеральных элементов и аминокислот.

2. В листьях земляники лесной и садовой методом восходящей хроматографии на бумаге с аутентичными образцами идентифицированы: флавонси-ды-гликозиды - рутин, кверцитрин; флавононды-агликоны — кверцетин, кемпферол; моносахара в составе полисахаридного комплекса - глюкоза, галактоза, рамноза; аминокислоты - асгтарагиногая кислота, глицин, серии, глутаминовая кислота, цистеин, аланин, метионин, лейцин. По значениям Яг и флюоресценции методом хроматографии в тонком слое сорбента определены кумарины - кумарин, умбеллиферон, скополетин; каротиноиды - бета-каротин.

Методом атомно-абсорбционной спектроскопии определен микроэлементный состав листьев земляники лесной и садовой, который представлен -фосфором, марганцем, барием, стронцием, иттрием, титаном, хромом, медью, цинком, свинцом, серебром, ниобием, ванадием, никелем, кобальтом, молибденом, бериллием, оловом.

Флавоновды - рутин, кверцитрин; моносахара в составе полисахаридного комплекса — глюкоза, галактоза, рамноза; аминокислоты - аспарагииовая кислота, глицин, серии, глутаминовая кислота, цистеин, аланин, метионин, лейцин; микроэлементы * фосфор, марганец, барий, стронций, иттрий, титан,

хром, медь, цинк, свинец, серебро, ниобий, ванадий, никель, кобальт, молибден, бериллий, олово в листьях земляники садовой обнаружены впервые,

3, Листья земляники лесной и садовой содержат флавоноиды - 2,1 -2,6%, окисляемые вещества - 22,5 - 27,5%, полисахариды - 5,4 - 7,5%, каро-тиноиды - 0,6 - 1,1мг%, кислоту аскорбиновую - 205,9 - 465,7мг% и органические кислоты — 2,-5 - 4,3%. В листьях земляники садовой содержание всех групп биологически активных веществ несколько выше, чем в листьях земляники лесной. Смешанные сорта земляники садовой накапливают почти в два раза больше кислоты аскорбиновой, чем чистые сорта.

4. Содержание биологически активных веществ во второй период заготовки высокое и близко к таковому при заготовке сырья в период цветения. Целесообразно рекомендовать сбор листьев земляники после окончания плодоношения, что позволяет получить сырье с высоким содержанием биологически активных веществ и сохранить урожай плодов.

5. Разработана дифференциальная спектрофотометр ическая методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в листьях земляники садовой и в экстракте сухом, которая включена в проект ФСП «Листья земляники садовой», в проект ФСП «Экстракт листьев земляники садовой сухой».

Установлена норма содержания флавоноидов в сырье - не менее 1,5%; в экстракте сухом - не менее 3,5%.

б. Установлены морфологические и анатомические признаки листьев земляники садовой. Диагностическое значение имеют морфологические признаки: размер, окраска верхней стороны листовой пластинки, обильное опушение нижней стороны листовой пластинки; анатомические признаки: характер клеток эпидермиса, тип устьичного комплекса, расположение и характер волосков, наличие друз оксалата кальция и призматических кристаллов.

7. Плотность запаса сырья листьев земляники садовой в Пермской области составляет -152 - 3849 г/и2, у лесной - 45 - 118 г/м2. Биологический запас у земляники садовой на сопоставимых площадях в 12 раз больше, чем у земляники лесной. Заготовка листьев земляники садовой на территории ФГУП Племзавода «Савинский» и на садовых участках Пермской области перспективна.

8. Установлена диуретическая, противовоспалительная, ранозаживляю-щая и антимикробная активность листьев земляники садовой. Экстракт листьев земляники садовой сухой показал диуретическую, противовоспалительную и антимикробную активность.

9. На основании проведенных морфологоанатомических и товароведческих исследований, разработанной методики определения основной группы биологически активных веществ составлен проект ФСП «Листья земляники садовой».

10. Подобраны оптимальные условия получения экстракта листьев земляники садовой сухого.

11. Разработан лабораторно-промышленный регламент получения экстракта листьев земляники садовой сухого. Экстракт в количестве пяти серий получен на ОАО «Биохиммаш» в г. Москва.

12. Проведена стандартизация экстракта листьев земляники садовой сухого. Разработан проект ФСП «Экстракт листьев земляники садовой сухой».

По материалам диссертации опубликованы следующие работы: 1. Петухова О.В., Левинова В.Ф., Иванова Г.А., Олешко Г.И., Оринина МХ. Ресурсоведческие исследования листьев земляники садовых сортов // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Мат. межвуз. Научко-праюг. конф., поев. 85-летию высшего образования на Урале. - Пермь, 2001.-СЛ14.

2. Петухова О.В., Иванова Г.А., Олешко Г.И., Блинова O.A., Мухамеджанова Д.М, Исследование условий получения сухого экстракта из листьев земляники // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Мат. межвуз. Научно-практ. конференции «Вузы и регион» — Пермь, 2002.-С.57-58.

3. Олешко Г.И., Иванова Г. А., Крапивина И.В,, Левинова В.Ф., Петухова О.В, Перспективы использования лекарственных средств календулы лекарственной и земляники лесной // Человек и лекарство: Тез. докл. IX Росс, национ. конгр,-М., 2002.-С. 672.

4. Петухова О.В., Громов А.Ю., Иванова Г.А. Анатомическое строение листьев земляники лесной и садовой // Молодежная наука Прикамья: Тез.докл.обласной научной конференции молодых ученых, студентов и аспирантов. - Пермь, 2002.-С. 170-171.

5. Олешко Г.И., Петухова О.В., Крапивина И.В., Иванова ГА., Левннова В.Ф., Мухамеджанова Д.М. К рациональному использованию листьев земляники и цветков ноготков // Человек и лекарство: Тез. докл. X Росс, национ. конгр.-М., 2003,-С. 643.

6. Петухова О. В., Запоров А. Ю. Микроэлементный состав листьев земляники лесной и садовой // IV международный конгресс молодых ученых «Науки о человеке». -Томск, 2003.-С. 215-216.

7. Петухова О.В., Иванова Г.А., Олешко Г.И., Мухамеджанова Д.М. Флаво-ноиды листьев земляники леской и садовых сортов региона Урала // Фармация, 2003.-Xa5.-C. 19-20.

8. Петухова О.В., Иванова ГА., Олешко Г.И. Сравнительные ресурсоведче-ские исследования листьев земляники Н Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Мат. межвуз. научно-практ. конференции «Вузы и регион» - Пермь, 2003.-С. 111-112.

9. Петухова О.В., Иванова ГА., Олешко Г.И. Количественное содержание аскорбиновой кислоты в листьях земляники // Актуальные проблемы фарма-

цевтической науки и образования: итоги и перспективы: Мат. межвуз. науч-но-практ. конференции «Вузы и регион» - Пермь, 2003.-С.113-114.

10. Петухова О.В., Иванова Г.А., Холкина Е.Е. Аминокислоты листьев земляники лесной и садовой // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Мат. межвуз. научно-практ. конференции «Вузы и регион» -Пермь, 2003.-С.114-115.

11. Петухова О.В., Иванова Г.А., Олешко Г.И. Кумарины листьев земляники лесной и садовой // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы; Мат. межвуз. научно-практ. конференции «Вузы и регион» - Пермь, 2003 ,-С. 115-116.

Подписано в печать 20,11.2003 Бум. ВХИ. Формат 60х90!/,< Гарнитура «Тайме», Печать на ршографс. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 120 экз. Заказ 79

Отпечатало в Пермском образовательной научно-исследовательском центре авиталыгой шггшноста 614000, Пермь, ул. Луначарского, 21; тел./факс: (3422) 10-16-16

$ 19264