Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Влияние различных сывороток крови животных на репродукцию вируса лейкоза крупного рогатого скота в культуре клеток

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР

ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

САМАРКАНДСКИИ ОРДЕНА ПОЧЕТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ ИМЕНИ В.В.КУИБЫШЕВА

На правах рукописи

МАМАДЖАНОВ ЮСУФ ИСЛАМОВИЧ

УДК 619:616-006:591,11:576,858

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ СЫВОРОТОК КРОВИ ЖИВОТНЫХ НА РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСА ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

13.00.03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Самарканд—1990

У

Работа выполнена в Узбекском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском ветеринарном инсл-итуте

имени академика К.II. Скрябина-Научные руководители*

ч

Академик ВАСХНИЛ, доктор ветеринарных наук, профессор ШИШКОВ В.П. Доктор гетернпарных наук САЛИМОВ Х.С.

Официальные оппоненты

Доктор ветеринарных наук, профессор Шатохин Н-Г-Кандидат ветеринарных наук ШАДЫБАЕВА РХ.

Ведущая организация — НИКЭВ Сибири н Дальнего • Востока.

на заседании специализированного Совета К 120.34.01 при Самаркандском сельскохозяйственном институте им-В.В.

Куйбышева (703003, Самарканд, ул- К.Маркса, 77)

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Самаркандского сельскохозяйственного института.

Защита состоится

Автореферат

1

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат ветеринарных наук

1АФАРОВ М.Б.

ОЕЦЛЯ ЬШ.Г^РШ'ШСЛ РА1.0ТЦ

Актуальность проблем!); Яачшую рать в решении иродололы'тмчшой проблемы страны призвана, счграть ветеринарная к.чу ка. ¡и которую возложена такая ответственная задача как разработки э^сктямиа методов, средств и научно обоснованных с15.стегл но по прият и!! по диагностике, терапии, профилактике инфекционных заболевали."., среди которых лейкозу крупного рогатого скота отводится оеобон место (В.П.Шишков, 19ЬЬ).

Экономически», ущерб, причиняемый гемоблпетозпми .тивотноведег;.-у, достигает значительных размеров вследствие паце.'.ш, снилсш'.п /цю-дуктивности, вынужденной выбраковки болыпх яивотних, утилизации "уш и органов с опухолевши разрастания.»! и затрат на проведение протшзолейкозяых мероприятий.

Усилиями многих отечественных и зарусе:.и:ых исследовагселий к настоящее времени у;ке достигнут значителыщй прогресс в изучении этой патологии. Выделен экзогенный, РИК^содерхас^ий, вируи лейкоза крупного рогатого скота (13ЛКРС), изучены его г|пзи;о-хпмлческио и биохимические свойства, доказана его этиологическая роль в заболевания У.й.мшвг еЪ а1. ,1969; А.б.Валлхоз с соаат. ,19'М; «.К. Паршанозич с соавт.1976; Л.Г.Ьурба с соавт.,1977; Р.Л.^унаИн с соавт.,1977; Х.С.Салиыов, 1966 и др.). Расширены иредстанле!иш и о патогенезе болезни (Г.Л.Сшонян,1974; Г.ч.Коромыслов,1977; П.Н.Смирнов, 1965; З.П.Ташшонас, 19Ь7 и др.). Разработали гу ек- . пшкие метода ш/глунодаигкостшщ ( А.А.йеаваке ,1376; Б.и.ь.лаксв з соавт. ,1976; А.£-.ЬалиховД97&; М.Опшаа в« а1. ,1Э7Ь; Л.ПЛ-агае-ва с соавт., 1УЬ9 и др..) ц мери профилактики по оздоровлен:» хозяйств, неблагополучных по лейкозу(З.А.Крпкуя с соавт., 1964; З.А.Бусол, 19Кб{ Л.Г.Бу.рба с соавт., 1913; Б„!,;.пахмалсон, 1916 г.

5р.).

Ванное значение в комплек-се меропрплтп:; по борьбе с лейкозом крупного рогатого с;.ста »и.:«:от .унелоглчеок.'б ;.:отсг:; .-*.:•-.гнее?:!-;п, которые пузь-.-л.и-т контролировать пзрсистеядаэ ВЯКГС у крупного богатого слота ¡га белее родней стадвл раз^ктна , •.•¡спснного 1соцесса. ид^чко, внуокос ;:слользо::гч:;:е лг.йксги

тупного рогглсуо скота стачкззаетоя с трудности.:;:, с^г&яш&гс с юлучеяиеи необходимого количества вируса к ппрусгпх ¿uiTr.r9i-.os. ¡сточияком гт;;;-; антигенов является клеточные' г.уяьтур:, лроду»вру<о-

ííukvMv.Sü cu'r-¡!,'.;jbHiiij.'. a нрашесивишп системами считается ищч:и:ииекив линии клеток почки ьийриши охвд - p;:: ( Fetal -Д¡.;, ¡. jvi(U»e¿- ) (д.П.Ьалеьскии, Iu?y; t!.J.Vt.u dci» Uualun Si al.,

¿i тимуса амЗрпаиа короьи - ToK-i,ilíA-76 (Б.Л.ирпкун о соавт,, 10?v>, хронически шфтироъшше ЬШ'С. При ввращивании клеток в {iii'fü'i (¡ja ну>< среду в качества ростового компонента добавляют остро-ftti.i^иоротку крови эмСриопов корон (J.l!.Kill<sr et al., IÜ7?; a др., l'ütíj, процесс .получения которой трудоем-

ки;'! и jíoj-wivjíj. Коммерчосла з сииоротки крови взрослого крупного рогатого ct.'o-ru ¿i tuwv для этих целей не пригодны из-за аоэможло-го cuü.p:i.u¡iírt u Ш'.". специфических антител к ьнрусу дейиози, что си,- а-. :о о ипрокп.'. распространением инфекции ЬЛКРС, и таклЮ из-за 1ГуГ ,;'".;.чо низкого содержания в щи ростовых Лекторов (Л.Г.Колонией С г , 197с-; i),!.:.Driucui i с- i ui. , I'JVL).

изпол! iufaotiaví сывороток нроьн взросл ex овец в культивировании 1к!певг.ваашх клезочнше лшшЯ и г и иродуцируащих

W.s -Q, указало на явные прьшущестьа ростооеесиечиваюцшс свойств ахих видов cl'aoporok нерод другими (В.й.Кткин с соавт.,1965).

üübí. ítíio, что а крови молодых животных содержится большое количество n'Uiа'»"0ль1аи в^еств (микро- и шифоэдемунтов, витим лов, оелков, гормонов и т.н.), лаос-ходимих дая нормального роста и развития организма (Ьокар, 1Ü54; Цос-.лов, .1003 и др.).

Учитиш!» utü ocutoíj'iвльстиа » ириншоя во шшыалие то, что в Узбекской ССР имеьтся крупные овцеводческие комплексы но выращивании и откорму карелульоких овцематок, с, целью коммерческого получения каракульских смуаск - "шракульчи", не нарушая производственного цикла, можно организовать промасленную заготовку сывороток крови овцематок IL&-I35'-дневной суягности, а также сыворотку крови ил ылбрионои.

В связи о втш, работа, направленная на использование в качестве сывороточного копне и.-лиа питательных сред разных видов сывороток крови каракульских •"в.-.-ц', свободных естественных условиях от инфекции ÍJiKPü, 1тлг.аг\'л актуальной.

■Голь и :i;.i!ci4n исал.;.;и;цлния. Настоящая работа посвщ<злц изучению влияния риа/тших видов сиворсток крови овец на ростовую и анти-генлродуцару1Л'.ул способность хронически шкрицировашшх ВЛКРС клеточных культур SSK UBft- 7о н FU , О целью изыскания возможности ■ эшенн ;íopoi'ooT(..¿wií сыворотки крови эмбрионов коров, используемой

ри производстве лейкозного диагностикума. В связи с этш, перед аи били поставлены следующие задачи: •

I.бучить влияние сывороток крови суягных овцематок каракульчой породи, их эмбрионов и новорозденних япшт на ростовую И штигелпродуцнрукшую способность хронически шьъицироваш-шх ХУихРС ;леточш:> культур ТСК-'.тЛ-7'3 и И,к .

. ировесх;! сравнительный цитоморАологическпи анализ препарата клеточных культур ТЗК-;..ВА-?6 и к , выращенных на средах 5 использование« сшзоротск крови суяпшх овцематок, их эмбрионов 1 новорожденных ягнят.

изучить динамику репликации ЫЫРС и продукции вирусных анти-РсИСъ в перевиваемых культурах клеток ТаКЧлЪп-'/б и .

4. Дать качественную оценку антигенов приготовленных

13 Еи^усссодерьще!! культуральнои едкости клеточных линии ¡.'0:г-!..ЬА-7б к , ь^ршцетшх на средах, содеркадих сыворотки

:;розп сунгшх свцематок, их эмбрионов и новорожденных япшт.

•нгучиан ¡.овпзна. Ьперьие праве депо сравнительное изучение использования различите видов сьшороток крови каракульских овец в качестве сывороточного компонента питательной среды в клеточных культурах, продуцирующих ВЛКРС, взокея эмбриональной сизоротки крова крупного рогатого скота.

Изучена возможность получения ЩЬРС и его антигенов при культивировании Перевиваемых клеточных лилий ТоК-мВА-76 И 1'^С на средах, содергадше снБороткл крови каракульских суягных овцематок, их зморианов и новорожденных ягнят.

Ьае[•).;>№ установлено, что сыворотки крови каракульских суягных оиполаток, их ллйр.юнов и новороэденаых ягнят могут быть исполь-как за/лзнители сыворотки крови эмбрионов коров при культи-перевиваемых клеточных лгашй ТсКЧшЗА-76 и ¿'¿¡С . стс.-юьлено также, что перевиваемые1 клеточные лшша ТЭКЧ.1ВА-7Ь

, вьрицен^ые на средах с сыворотками крови- суягных оьцч-ллич'о», их эмбрионов и новорожденных ятнят, по показателя!,! сроков .'¿ориироьанпя монослоя, шаекош: клеточной пролиферации, со репродукции ВлКРО и продукций а:;рус}шх антигенов существенно превосходят к; сие.;х л:в.:в; клеток, варвцехгных

¡¡а с спворстн-;ш крови крупного рогатого скота 11 зыбрионоа

коров.

¡¡«на мор^логичеекая характеристика перевиваемых линий клеток

ь

ТЭК-М8Л-76 il flk, продуцирующих ВЛКРС в средах, содержащих сшю-ротки крови суягных овцематок, их эмбрионов и новорожденных ягнят , Выяснено, что перевиваемая культура клеток fij; лучше адап-'тируется к средам, содержащим,сыворотки крови суягных овцематок, ■цх эмбрионов и новорожденных ягнят, чем клеточная культура ТЭК-К8 -76.

Практическая ценность. Материалы диссертации использованы при разработке "Методических рекомендаций по использованию сывороток крови суягных овцематок для получения антигена вируса лейкоза крупного рогатого скота", которые утверждены на заседании секции "Лейкозы, сравнительная и экспериментальная онкология животных" ВАСХКИЛ (1989 г.).

Результаты проведенных исследлзшшй позволяют тш;х:е использовать сыворотку крови эмбрионов овец и новорожденных ягнят для кул! тивироваяия клеточных линий ТЭК-ША-76 и F1K , продуцирующих ШШРС и его антигены, с целью замены сыворотки крови, эморионов крупного рогатого скота в производстве лейкозикх диагностикумов.

Апробация работы. Материалы диссертации дологсеш на конференции молодых ученых Узбекского НИШ, посвященной 70-летию ВЛКСМ (I96&); на заседании Ученого Совета УзШСШ (13Ь6,19У9); на заседании секции животноводства и ветеринарии CAO ВЛСХШ1Л (1Э&9); на заседании секции "Лейкозы, сравнительная и экспериментальная онкология животных" ВАСХШ1Д (1989).

Публикации. По теме диссертации опубликованы '4 научные работг

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста и-состоит из. введения, обзора литературы (3 главы),собственных исследований (2 главы), англп-з результатов исследований, .выводов, практических предложений и прило кения. _

Материалы ' диссертации иллюстрированы 10 таблицам:! л ?А риеуя-ками. Список литературы включает 279 работ, в том числе 1ч0 -зарубежных источников.

Основные положения, выносимые на защиту: - I. ¡„етоди вираецшанйя клеток иа средах с использованизм сыворо ток кроди суягных овцематок каракульской породы, их эмбрионов и поворошенных -ягнят.

'б. Способ получения антигенов ВЛКРС из перевиваемых клеточных линий ТЗК-ША-76 и elk , выращенных на средах с добавлением сывороток крови суягных овцематок, их эмбрионов и новорожденных ягнят.

0. Серологическая оценка антигенов ВЛКРС, полученных при культивировании перевиваемых клеточных линий ТЭК-1.13А-76 и ИХ на средах,' содержащих различ£ше вида сывороток крови овец и крупного рогатого с^зта.

СОДЕРШЖЕ РАБОТЫ ...атериалы и методы исследования.

Исследования проводились в лаборатории по изучению лейкоза . УзНИШ и в лаборатории по изучению лейкоза ыВА совместно с сотрудниками к.в.н. В.А.Крикуном и мл.н.с.Н.В.Ронновой.

Материалом для исследований служили перевиваемые культуры клеток почки эмбриона овцы-Fetal laah Kidney ( шс ) и тимуса эмбриона коровы (T3K4.13A-76), хронически инфицированные ВЛКРС. В качестве сывороточного компонента питательных сред использовали сыворотки крови каракульских суягных овцематок, их эмбрионов и ново-роздешшх ягнят. Контролем служили сыворотки крови крупного рогатого скота, свободные от антител к ВЛКРС, и эйрионов коров, производства института микробиологии и эпидемиологии ид.Гамалеи (Москва). • ■ 1 i -

В опытах"использовались коммерческие сыворотки крови каракульских суягных овцематок и ах-эмбрионов, производства САОЕШгИ (г.Душанбе), а также получешше.нами на мясокомбинатах гг.Катта-Курган и Навои в период массового ¿/боя (февраль-март) каракульских овцематок 130-135-дневной суягяости, выращенных на спёциализиро-ванных овцеводческих котлёксах по;производству "каракульчи".

Сыворотки крови новорожденных яйшт получали в условиях овцеводческих хозяйств Самаркандской и,Навоийской областей из.крови 3-5 суточных ягнят. Сбор и оценку■качества приготовлешшх образцов сывороток проводили согласно методике, изложенной во "Бремен-ном наставлении по получению, контролю и использованию сывороток крови животных для культивирования клеток и вирусологических исследований" "(утв.ГУВ 1X1 СССР-£0.УГ.-19ьЗ г,).

Б опытах были такяе использованы несколько серий стандартных сывороток крови крупного рогатого скота, свободных с.т антител к ВЛКРС, производства ¿.оскозсксго и Кае ¿с кого ьшоохсмсидаа с-в. •

Наличие в сыворотках специфических антител к BJKPC определяли в реакции ишуяодк^фузии в агаровом геле (Р1Щ) общепринятым методом.

• Для культивирования перевиваемых клеточных линий попользовали питательные средщ, состоящие из среды Игла с глэташшом (&0,а) и 0,5% ггдрслизата лактальбумина (ГЛА) .(50/1), или среды Игла с глатшшом и среды Л 199 в том ке соотношении, с добавлением 10% сыворотки крови ;ы1вотных и-антибиотиков (пенициллин, стрептомицин по 100 ЕД мл). Посевная кощентрашш клеток на каждом naccase для обеих культур составляла 5х10^кл мл среда. Клетки культивировались в 250 мл матрасах, в термостате при 37°С в течение. 3-5 суток, с ежедневники наблюдениями за ростом клеток под малым (х55) увеличением микроскопа.

Для получения антигенов использовали вируссодерлащуа культуралъ-нуа жидкость, которую концентрировали методом ускоренного'диализа с полизтиленглияолегл (ПЭГ-6000). Полученный таким способом концентрат служил антигеном В.1КРС.

Морфологическую оценку глеток проводили на кативных ели окрашенных по методу Романовского-Гимза или хематоксщишэозшюг,: препаратах, под малым (х70) и.под большим (х 260) увеличением микроскопа, по общепринятой методике.

Шщпкацкю -BJ2ÍPC в тесте снкциткеобразования (ТСО) ' проводили совместно с сотрудниками'лаборатории иммунологии и биотехнологии УзШ-IBü х.б.н.Расулевым О.Ш., согласно" 'методическим рекомендациям по определению инфекционного бичьего вируса (БЛВ) методом сшщитие-образовшшя'.'. (¡».¿.¡Срикун с Ьоавт.,1960).

Продукцию антигенов ВШРО определяли в 'реакции кллунодиффузил (РИД) со специфической серопозитивной сывороткой, /активность приготовленных антигенов оценивалась по результатам лабораторных п производственных испытаний, где в качестве контроля использовались стандартные аятигенц, приготовленные на рурской биофабрике и в лаборатории по изучению-лейкозы 13л.

Результаты последовал::]; обрабатывали методом вариационной статистики (Н.Ь.Садовский,,1275).

Результата исследовали;;

Культивирование перевивавших клеточных линий

ТЭКЧ.Ж-76 и 5ЧК на средах с различными сыворотками крови овец и крупного рогатого скота.

Исхода из цели и задач шиш било изучено влияние сывороток зови суягных овцематок каракульской породы, их эмбрионов и ново-эвдениых ягнят на ростовуа и антлгеипродунирукщую споссбность ронически инфицированных ВЛЛРС перевиваемых клеточных линий Ж-ША-76 и 7LK. Критерием опенки качества вс следу е:.:их образцов IBOPOTOK при этом являлись средние статлстическнз показатели роков формирования монослоя, индекса клеточной пролиферации,ре-родукции вируса и продукции- впрусылх антигенов в течение всего рока наблюдения (10 naccascoií).

Средние статистические данные сроков ^армирования монослоя п щекса клеточной пролиферации приведены а табл.1.

¡¡з представленных в таблица данных водно, что лучшая адаптация неточных линий Т2К-МЗА-76 и FLK к сывороточному компоненту ппта-злыюй среды прослекнвшгась в относа:;::,: сывороток креви суягных зцематок. С использованием этих видов сывороток, клеточные куль-/ри ТЗК-иША-76 и PIK , по показателям сроков формирования глояо-гсоя и индексам клеточной пролиферации существенно опережали как энтрольние неточные культуры, выржзнные на средах с сыворотками рова амбрионоэ коров и. крупного рогатого скота, так к опытные, сращенные на средах с сыворотками кровл эмбрионов овец и новоро::с-зшшх ягнят. ■

Высокий уровень кизяеспособности и адгезии клеток в этих куль-урах прослеживался на дротяиешш всего срока наблкдешш (10 cacar,ей). , -' _ Клеточная культура TcK4;LbA-76, выраженная с сыворотками крови ' ' уягяых овце.'латок, на разных уровня:! пассата к кскэнху . образована ионе слоя (74*1,8 часа) имела одинаковую морфелогша и состояла основном из зпителпоподобкых тпг.оа. клеток. Ядра зтих клеток :.:ела скруглул форму л зачастую располагались- эксцентрично.

Клеточная культура ?lk в монослоз.{56*3,42 часа), ккгла xapaft-'.' врнув рельефность и была представлена преимущественно фи^роблас-олодошгд типом клеюк. Натхзные клетки внеляе- оставались езетли-tt, рефрактилвными, с ярко очерчелш.щ границам::. В скралеллых ■

Таблица i.

•••• Сроки СорглЕроланая иоаосдая и индексы .клеточной пролиферации а : jnepsBisae^cc культура^ клеток T3K-i.SA.-76 и fis .выращенных 'на

среда:; с сыворотками крози разных видов животных.

. • культур ы клеток

: ¿'.«'дсрогкг. , ■■ серий сыво- " TSK-ïviBA- 76 'НЕ

: . r-:poi':.v . роток . Осоки аосиксова-: •кия мокослоя" : (час.) . : • Индексы пролиферации : Сооки, йорьшрова-:-.кия монослоя : (час) • .Кндекск прслкфергции

I. Оулгкых овцематок 1-5' 74-1,£0 6,45t0,23 ■ 58+3,43 ' 7,35*0,14' £

2. c2iipilgîîg3 c3siî 1-6 76*1,98 5,0 ±0,04 73*2,50 '6,5*0,09. '

3« ' ¿^'obodojk^ohiîhx ягнят Т ^ j.,—и . ■ ЬО-1,37 4,91* 0,04, 73*2,25 6,41*0,09

4. Крупного рогатого скота .• ■ ■ 1-6 ' 147+0,63 . 2,37±0,0S ' 133*4,76 3,05*0,16

5.. Змйрпояза . коров • т . л J.—«I S2±0,52 4,7*0,04 77±2,54 6,25*0,06

ll -

isascctta* Cwii'j:uoTiju tyici-ок имело иедтралЬаСв расположенное ipo саальноЗ vopr.ai, a котором различались L-6 ядршаек. Цито-;азма шела слегка зернистую структуру.

лДйпткцйя клеточшгх ладяа 'ГЭК-&ВА-76 к средам с сыворотками •они '.змсриспоз овен ц но^ороадешшх ягнят в целом проходила 1КЯ8 активно, как к ор^дад с сыворотками кроьи эмбрионов коров.

Показатели сроков формирования монослоя и индексов клеточной ¡лшьерацпл ь этих культурах почти но отличались от показателе;' ;ятрольных культур глете;;, ьиркце^шх с использованием сыворо->к кропи nr.:op!!OHCii короь. Прикрепление ц распластывание клеток- а ишадих культурах ТУь-;шА-76 и plk стг/ечалось уне через 4-6 чц->в после ии.:«ва. üoe китоадие культуры в мснослое млели свой-.•аетше км морфологические признаки.

Наташше культуры обеих линий ¡слеток характеризовались высо-им уровнем дсизнеспособности и адгезии клеток а течение всего .-от наблюдения. Цитоплазма клеток была светлой и хорошо пре~ ::.ияли о вот. В обеих клеточынх культурах, вырецешшх на средах сыворотками кроьи эмбрионов овец и новорожденных ягнят, роо-)выо и морфологические свойства клеток оставались неизменными почти не отличались от контрольных культур клеток, выращенных использованием сывороток крови эмбрионов коров. Использование а качестве сывороточного компонента питатель->й среды сийороток крови крупного ¡рогатого скота показало явные -зличия ростсобеспечивающих свойств разных серий сывороток. iK, для культур обеих линий клеток с увеличением количества пас-

xap-iKTapHO било ослабление потенции роста. Обе клеточные • /льтуры, выращенные, на средах о использованием этих видов сы-ipc-roK, по срокам формирования моноагоя- и индексам клеточной юлпфирации достоверно уступали культурам, выращенным с сыво-эткой крови эмбрионов коров (Р«0),Ьй).

клеточная культура Т!эКЧ.ША-76, выращенная на средах с сыьорот-~ми ;:рой'л крупного рогатого скота,' клзточ:шй иыюслой формиро-Ала линь на первых пассатах в средней за 147 часов культивировали

Ь ;«етк«.г: о некоторыми оериыли сывороток формирований моносдоя jodL'iti не отмечалось,

Upeauint индекс пролиферации в этих культурах такзе уступал куль/рам, вырацешшм на средах,оодорлсацах сыворотка крова оыСриоиос ;ров, иршерно в '¿. раза (табл.U,С увеличением количества наоса-

Таблица 2

-редкие показатели репродукции 'ВЛКРС а продукции вирусных антигенов в перевиваемых культурах клеток ТЗК-лЗА-76 в шс ■, выращенных на средах с разнят сыворотками

крози киаотных

•; г - г к ■ культуры к л.е то к' '

пп 1аимз ко з анзе : 'сызоссток . . кпозн серий сызссо- ток ТЗХ-йВА-76 дас

Титры анткгзноз (РИД) :К-ао.с Титш антигенов (РНЮ- :Кол~во сия

Ге I :сшвд-:тиез з :1 преп. Гп . • ^4 :цитаеа в :1 препар. : (ТС0)

Суягных. овцематок ГЛ 1-5 20,8+1,65 30,6*1,64 5-20 34,0*1,8 39,0*0,32 15-25

'2. ■Эмбриокоз озец 1-е 18?2±0,94 28,-2*1,75 5-20 26,0*1,34 34,0*0,71 15-25

Козорохдэнных ягнят :.! '1-6 17,6*0,50 24,4*0,73 4-20 26,2*2,62 33,2*0,67 14-22

-4. Крупного согатого скота ;А 1-6 4,0*0,16 7,3*0,62 - 6,7*0,87 Б, 6*2,19 2-5

.5. Эмбрионов коров 1-4 16,6*0,66 23,4*1,54 4-20 27,4*0,97 31,4*0,81 10-23

■;-} зуявзть спшитии не удавалось.

жей резко ониаалсл выход клеток, рост их станоиилсп оччго^ям, омечалксь конгломераты эсрнистьх и сморщешшх клеток.

Культура клеток .и,К , виршиекиая на средах с и'ыфлк.кгл крови крупного рогатого скота, клоточшй моыоало.'! ¿ормяроилда лишь до 9 -пассата в среднем за 133 часа культпнкронаиая. 0ред;кп! индекс пролицсршши при этом составлял 3,05'~0,16, что примерно в 2 раза пиле чегл в культуре, вцргацешшй с оыверотко!) ?;ровл эмбрионов коров.

В клеточных культурах ш\ при пассировании наблюдались как патологические, так и нормальные клеточпне организации. С увеличением 1сбличестза иассаяей число клеток с опплтошм:* '"г; ук7.урнш.т. изменениями росло я. носило нсобргтщлкй характер, что л ;:т'Л<;< не могло но отразиться на ростовой активности и т'лнююп'-Снчстп клеток. ;

Таким образом, на основании проведенных ивследозани.Ч м«>- по заключить, что обе клеточные культуры, шроденкие на ср:'» о сизо-ротками кропи суягиях овцематок, по показателям сроков 1 о\г:прозз-ншт моиослоя и индексам клеточной пролиферации пролдгчгл высокий уровень адаптации и ростовой активности гл г тек, чем клз» точные культуры, выращенные па средах с другсте вэд;.:/.:*, ендароток.

Средние статистические дпаныо по ряпрздука:;':: адкго п^одудаш его антигенов в перевиваемых культурах клеток Т£л-1.1Л-7-> и.г выращешшх ни средах с разш:ми еызороткамк кропи .*иглп к, «пг в таблице ¡¿, из которой видно, что культур» сг.гих ■луу^чгич лини!: про^'випупг пак гл;!ьопрот5к:<з г--л :: г -лг •

пи В*;1иО, где титры зт;::: антзг^зо^ л? -г : . ■' /.'-■•;•■;••.•

сывороточного компонента плтг.т^лыи,1; среда.

Лу':"1ГШ ПрСДуКЦПЛ В.'НрС ;! ЗГЗ 'ЛЛТ.;Г- г".!" ': Ч.'КЛЧ"!'!: , Г,-.:;-;,а,/|-7Г) л -ч.к огпзз'л : ' ■ .■ . .: :ро'.з'л -■ -. Л'1 ' овазпзток, з зизезмх урз.л.чь зкт.и ;сл'.' -.'а..:::'" '.■:•' : •: ■ зу.ззтате пазонрозапил ;.ч ауль-гл ■ л ■■ .и. -'": .' • • :-•

"сстс з') рно з:.ле ;;зат галл-...: ^ , о. :■•..,.:;.■• л "

зз паззирззплл ;лзл"г лал-, '.' .: ;' . . .

ззлшл :■:.!■ г.";. : лл ■■:;. ..а лл л л; - ;. : : . . 1 ■ " . •: З-Л. з Зл-Зз.

'лзтллл: :ллз._аз' >-7п - , - ". "'

с сыворотками крови эмбрионов овец, ;-.!:зс!:;:;"1 • • •."••г" •>•; • ; :" '

в.'Вц i". 1 : ; y'.V i : i' »1 uliï.. f. !.-•.) v . 'ь.;; В- сЛ'ЯМеЫШ

»'¡•-•bii HauНрпче:.'. i; "USYBa; i.,.x:f-ic Î3K-

••¡.¿'.Л-ЛЧ. i' Продукций как о, -¿'¿¿л ц

г/ ',; .....ал г-j иш'игчноь ЬЛ-a'ü чогл а ку;ь-

ТУ1»цл, ¿t.j r-jiuuniv. с сиьоротка-'.н Kpf!.:$i воров.

¡к<влпроду|;:1:;к Lilivf'C в опытам в контрольных культурах ïwiv-'u,:,-'/!, i'L. ci_w 'j^aiuaiow» лиоокигли (ди lu а содь-и «шщити-еи в I n^iuv-'ï j) . ü;:.a-u;c( репродукция вируса в ..леточн л; культу-pu !••'.;-. Св'лл ;уогоыфао ni- if, нем л вул^л-уре 'iЭУ.-1.~>,\-& (P<G,Ü5).

Atuv.c;;¡-iеулв'пли с.цди иш.у&Д!. .i ку.млу^.лл uüt.nx кдвточ-шн л'х.ви, ли средах с cyb.ïj.*/i4iia.ut нр^а новорожденных

и-. . и ;.;!.; оввороток оее культуры иролвлялк

•а<?.'» ко ьисокум ш»Т1'.ге1Цфоду1и'.руиА</1) споое-саисть в-л; и о ousopoi-it'Ui 1ф1л:;; 'jr.x'ipnoüOB коров. Одних:-, ь кдегоч«.-»»! кульгуре «?1£ про-д.-кция j„ü'Ü Я I-ГО aHTiUY.iki.il Сила ¡:иОКОЛ1,КО huS.\;, леи J KOriïpa'ib-:.cU Kivii-vypù, На средо « -оииорелкой ei.:öpцоноь ■.оров,

к геидьш&я сохранились п.. уроыш всех песике!:. й ТОО число Oi'.üUii'ViUi.'ü.üB/. iuui-ок i. кладом препарате наечнтиьалось от 14 до Ы

¡'ида'СШШ н продукция вирусных антигенов в оштвой

г.улыур*. вл.ваок 'iv'ii-:.i5A-76, Bupu'.oiüion на средах с сивороткаш крови it0«i;pfvvu-i:iiux ягнят, на протяжении ваех nuucayeL Сйла такой ле sucoKoa, кшс и и контрольной культура, иирсицециой на средах с oui-o;x«Ku.m крови. вибрионов При атец, число сашушшьшх •

клеток волаоалось а пределах от 4 до '¿и в оди»са препарате.

В кульг.урше -oör/лх клеток при иопешговании сывороток крови Bpyutiüi'O i.vi4î«i'o скота 'иьбла^-яась слабая продукция антигенов

Причел в npoueûeè fiuCoBpOBfûiiïH и e-iBix культурах уграччва-'•ыеь способность продуцировать как В,лаЧ>, так к его антигены. В в.диуре i'jiùTûK Iü: продукция глкг.ил]Ю'*-вкиоього ыьтдгена МчРО оллочаяаоь на <»ли 6 гтеоа^ей, пояезсйувдюго - но сколько дольше. Репродукция вируса ь культуре • ври паоеироклгил снкйсыхась. В ире-ïiapiiTax. хо naeeaiii . извить олнцитил не удшюсь. В клоючной культура ï3i{-;.DA-?ô на средэ с саьорог-ишла крови круш»ого рогатого окоха, ii.iKiiau-iwifc ia;ïitb,»o(,Tii глги^инр-гленнового к полниватидного aHTi'ji6ii&B ШРС до Ь к 4 маиог-гн сиответотвешю. Репро-

дукции B.ipyoa при отом не оОнги;уливав.ев (Табл.к:).

Ревультатц процеводствениих «сиитиняй ангвгеяов BJil-LPü, получениях при культивироыйигп перевинаев.вх шуточных лишШ ТОКЧ.ША-76 и

PIK на средах с различными вкдсмп cuisopoTOi: кропи плотных, приведены в таблице 3.

Сравнительное изучение диагностической цешюсти ош. пп.гх и контрольных антигенов ВЙКРС проводили в Р;5Д на '••грос.ти поголовье крупного рогатого скота (1613 гол.) в хозяйствах с р-.гигшой степенью выраженности эпизоотической ситуации по лейкозу. Результаты этих исследований выявили 214 голов зивотиых, ;uí.r;uí:;p0¿.-íu:íi ;>. ВЛКРС. Степень зифшировшшости животных В.'.КРС при ото« кол-зба-лась от 1,9 до 46,Ь^ к количеству обследованного коголом.л.

Опытные антигены, полученные из персЕиваз.'иы:-: л:ыи»! svmwn ТЭК-МВА-76 и FLK , -выращенных на средах с Giu.jpcTKun; кр<ы« супг-тх овцематок, их эмбрионов и нозорo:?j<ciu.u>: лпыг, я с capono-зитшзной сывороткой давали четкие линии преципитации 'г:с;;с-.;'но стандартнш антигеном ВЛКРС, производства Курской бпогибриск. Тогда, как опытные антигены, получешше при■культпинропанни клеток ТЗКЧ.ША—7G на средах с сывороткой! крови, крупного рогатого скота, в отличие от стандартных антигенов БЛТС, zooexa но ргапфоидеп в РИД. с. серопозитнвныын сыворотками крсьи .".дестни;-:. V, то ::::. время опытные серии антигенов ЗЛКРС, приготовленные из клетсчлцх культур Р1К , выраяенных на средах с сыворотками крог.и к;улнмс рогатого скота, в ?¡X'c- серопозитивыыцл сыворотками креязляли w-оша. слабуа диагностическую активность.

Антигоны ЗЛКРС, приготовленные из клеточных культур "Ii.-;-¡-.i'Л-76 и FIK , вирзавияюс на средах о сыворотками креви смсрисксв ropón, проявляли с ссропозиткз.1а."й сыворотка:«;: крови погосло

стандартным антигена:.: высокую диагностн'Ь'.иг-у.^ -.i

(табл.З)-, огкечащукся в чмкжя лк.л:лх; прсцгпптчг:гп ::о г. положтельккм сывороткам крови

Таким оернзо;,:, анализируя резулгл:;::' г•/■..•■ л п-,ч:\ ;i;;í¡ антигенов b.Z.:C,. зхжлй'.-ь, 'г: ■ t гилт;-; ¡

приготовление из. кулыурплълс;' и, v-' .■ог.гл'кн

крови караку.!иск;-.х суягных овг.емак.к, их е.. и t*г;f■ -

лих ягнят, ло качеству яг уступает ■ т:Гг ... '•'"" -

производимы:-: Сурепой спс-<йСр;н:о'... Спело, л: ¿льне, .-сг:-г. •••• полученные -ирл 'г.-.р.хиватни ктегс'-итс ::.'■:' .. ¡ЪК-Ж:<-76

и si:: на сред.-с с сыворотками-кре^и суягн,": i:L-.x :': .<;:, их омбрне— йов и .новорсг.^екк1;х ягнят, могут С.Лъ Кслглисх:'.- /л; я z:>:¿(¡ivj

- ХСГ.'-^.С'Т- К-хг (голов) Ста.'::;:.;; (0-)

Лг,серк • голзз ^ /э : сер;:: - -• « <

I. К-з Тел—; .114 А- -76

144 51 21,5 4С) 31 21,5

С-Е "50-летия СССР 60 С V 22 36,6 6(2) '¿а. 33, Ь

3. С-е "00 '-летня СССР 141 23 Б 6,0 7(3) 8 6,0

я г\ С "Галла-Аозл" 109 17 2 1,9 2(4) - -

■ 5. К—з "Ленинград:" 4^9 9 42 9,7 1К5) 42 9,7 1

Г*

6. К-з ^.'..МуНбылева ■ £26 12 £9 11,9 5(1) со П.9 I

, 7. С-з 50-летия СССР . СО 9 2Б 46, Ь 6(2) 28 46,6

Б. К-з "Ленинград;" - 310 25 34 ' 10, В 9)3) 34 10 »2

С. К-з им.Свердлова •3.7 5 ' '4 10,0 3(4) I 2,7

■ 1С. 0-з "Карпай"- 197 17 4 2,3 10(5) л о с -

Серии адтигеноз, полученные с сыворотками крови : (I) - суягных озлвматок; (2) - вибрионов овец; (о) - новорожденных ягнят; (4) - крупного рогатого скота; (Б) - эмбрионов коров.

- г? -

рогостояцдх стандартных анткгеноз-д!П1п:остикумов ВлгСРС, Сравнений себестоимости антигенних препаратов, приготовленных культуральяой жидкости перевиваемых клеточных лп.чпл ТсК-£!УА-76 1ЧК .вырэдешшх на средах с сыворотками крови каракульских пгкых овцематок, их эмбрионов и новорожденных ягнят, показало, з только за счет замены эмбриональной сыворотки крови крупного гатого скота, необходимой при изготовлении антигенов З-ИРС, па воротку крови суягных овцематок экономическая олекткапость я зчете на 100 тис.доз диагностпхума составит 8,?. тыс.рублей, з позволит примерно в II раз снизить себестоимость производства ":кознь1х диагностикумов.

Учитывая, что по новой технологии производства антигенов-диагно-гкумоз 13ЛКРС имеется значительная экономия как питательных зд, так и сяикения затрат труда, далныЛ способ культивирования 1учает значительные преимущества, по сравнении с ранее прпм"нлз~ 1И. Следовательно, в производства антигенов ЕСйЗгС дорогостоящую зоротку крови эмбрионов керов моаяо заменить на более депевугз к;<?ектпвнуз сызоротку крови суягных овцематок, их змбриояоз и зорояденных ягнят.

ВиВОДи

1. Установлено, что перевиваемые' ялеточшга ланка" ТЭл-ЖЛ--75

I , вираценные на средах с сыворотками крови суягных евцема-: каракульской породы, их эмбрионов и 'юворолдзнккх яг:«:т, по :азател.'3! сроков формирования мснослоя, индексам клэтсчпсЛ ■.ифзрацпи-, по репродукции ШлгС и продукции зируенвх антигенов ;естгеяло превосходят перевиваете культуры клеток, взззцзлзас средах с сузероткгха крови эмбрионов керов. Сывсроткл крез:: суягных овцематок, их змбриензв и ногсро:,дсй-ягяяг не содержат специфических антител з: Б.ДЛ'С и его антн-ам.

2. Пере£1взаз:.з;е клеточные линан; и , : гоничйс. ::: нцироваянме вирусом лейкоза крупного рзгзтзгз скот2, :;аз;:;ен-

т средах с сыворотка:.::! крови суввнкх озцзматск, их' змОрзо-и нс2спс:::гзн;:вх ягнят, протухл зла: :;:л гл::;:заротз:з.зз:1,., и лолнпэптндкый анткг&ш

- lu -

S. Гипродукцля ЬЛСРС'И продукция вирусных антигенов с клеточных культура:; 'Гэ:;-!.Шл-76 и pu , выращенных на средах с коммерческими сыворотками крови крупного рогатого скота, существенно . уступает клеточным культурам этих линий, выращенных на средах с сыворотками крови суягных овцематок, их эмбрионов и новорзден-ных лги-»?- а таку.е с сыворотками крови Ембриоиов коров.

4. иц.сьви&си-л культура клеток FLK. лучше адаптируется к средам о сиюротк<&и кроьи е/япшх .овцематок, их эмбрионов и новорожденных ягнят, чем клеточная культура ТдК-ША-76.

о; геародукцил bJIPvPC И продукция его антигенов в клеточных куль т;».-.ос ru: , i.i.puu;aiii!iix. на средих .с сыворотками крови суягных овцематок, их эмбрионов и иоьорозденних ягнят, существенно превосходит t язточнук культуру'ККЧ.ША-76, выршцешую на средах с теми же водами сывороток.

G. ГликопротеиношИ и нслипептидный антигены БЛиГС, получешше при культивировании перевиваемых клеточных лпнш! 1оК-1.!БА-76 и FIX вырацзшше на средах с суворотксш крови суягных овцематок, их р;.:брионо» и новорожденных ягнят, проявляли высокую активность в Tic; при серологической диагностике лейкоза крупного рогатого скота. -

7. Ь производство'антигена ВШРС, при культивировании перевиваемых клеточных .линий ТЭДЧ.1ВЯ-?6 и -Pli: . дорогостоящи сыворотку крови эмбрионов коров можно заменить сравнительно дешевыми сыворотками крови суягных овцематок, их эмбрионов и новорожденных

i.VïUi-î. ... "

Ь. Убтановйеаа пря!,Гая коррелятивная связь менад репродукцией ШКРС в клеточных культурах Î3K-î.îIîA-?6 и Нк , выращенных'на срадцх о сыворотками крови'суягных овцематок, -их аыбрионов и ново розданных ягнят, v -продукцией вирусных антигенов в РВД и тесте сшиштнеобризованил. ...'''.. _

- w.diTH4i£c>:m трщошин

I,. Результаты изложенные в диссертационной работе, могут быть использованы специалистами ветеринарных учреждении _и диагностически: лабораторий при культивировании хронически инфицированных BJîKPC перевиваемых клёточшх линий ТЭК-МБА-76'и PLE . с'целью

изучения различных свойств вируса.

'¿. Материалы диссертации попользованы при разрг.сГггко и ллтов-лении "Методических рекомсч цаций по использована« <„ '.зрею;; крови суягных овцематок для получения ачтиГеяа вируса лейкоза крупного рогатого скота" (одобрены на заседании секции "ЛеПкози, сраангтель • пая и эксперимент-.льнач онкология мнветякх" ВЛСХНРЛ от Ь гзгчя 1969 г.)

3. Для культивирования перевиваемых клеточных линий ГЭК~"аЛ-'/;; и flk при крупномасштабном производстве .--¿кознах антигенов рет» кендуетоя использовать сыворотки крови с vrai1;-. овцематок, их эмбрионов и новорожденных ягнят вместо дорогое,■■ згадзй коммерческой сноо-ротки эмбрионов коров.

4. Катеркалн диссертационной расоты могут быть использовали з учебном процессе при подготовке слушателей Но курсу ветергласноП зирусолоиш, а также при написании учебных пособий, мотглл'зз ло зекомендаыий и монографий.

список опуыыловлнных г/а:от по ты-;:; ^^-'Lvivdv;!

I. Салимов Х.С., Ыамадгганов И.И,, Бутазя М.К. Сораюгячтегггя эценка антигенов ВЛКРС, пригото¿тачных к? яоръвтж'.ъгл клтсчдых ¡Hiraii, выращенных на средах с дсбазлепием разлачккх екпоглз л :рова//Докл.5иСЩи1.Чи, 1969.-]; П.С.ЙЬ-'ЛЗ,

Z, Вязко з В.Л. .Сатиков Х.С.,Ыа,.:ад.'5ачо.ч Г).-'., Крикун я. л», ояноаа Н.В. .Мзтодическке рекомендации по гзпл-ьзояал-лз cuecuotok ров" суягных овцематок для получения аятпглл. вируса лейкоза рупнего рогатого скота, iM.,1969. С.1-7.

■IV

10)

s 3, (, !» п

"лг.°:/.~ 'ло

ja.4jjsa:c. .-л. КЛял-'1