Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсичность, резорбитивные свойства и технология получения фенасала-2

государственная комиссия см ссср по продовольствию и закупкам

ленинградский ветеринарный институт

На правах рукописи Для служебного пользования

(j экз. № 000085 *

ЧЕСНОВСКАЯ Елена Семеновна

удк 619:615.733:615.5 + (547.587.11.07:66.012:543)

ТОКСИЧНОСТЬ, РЕЗОРБТИВНЫЕ СВОЙСТВА И ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕНАСАЛА-2

Специальность: 16.00.04 — Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

eiipet&i лЕнШптад—

1991

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов.

Научный руководитель — доктор ветеринарных наук, профессор Тимофеев Б. А.

Официальные оппоненты: профессор Соколов В. Д.; доктор биологических наук, с. н. с. Кинигсберг Я. Э.

Ведущая организация — Харьковский зооветеринарный институт им. Н. М. Борисенко.

Защита диссертации состоится «¿'»¿/¿¿V 1991 года в 13 часов на заседании Специализированного совета Д 120.20.02 в Ленинградском ветеринарном институте (196006, Ленинград, Московский пр., 112).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ленинградского ве-ветеринарного института.

Автореферат разослан '-/,> 1091 г.

Ученый секретарь

Специализированного совета Киндрас Т. М.

оеддя дрлодгистец РДВота

Актуальности темы

Разработка и внедрение совершенных методов и средств пре-. дупреждения и лечения болезней» эффективных биологических и хи-. миотерапевтических ветеринарных препаратов и технологии их про- . кзводств - одна из основ)?« задач, выдвинутых ХХУП съездом ЛЛСС.

Потребность практической ветеринарии в ветеринарных химио-терапевтических препаратах в настоящее вгемя удовлетворяется далеко не полностью. Если не проводить дегельминтизацию животных страна несет потери до 98,5 иян.губ. в год по данннм ВИП1С (1986 г.).

Одним.из наиболее эффективных отечественных антгельыинти-ков является фенасал. Это почти единственное высокоэффективное средство при мониезиозе овец, других ленточных гельминтозах сельскохозяйственных животных и прудовых рыб. Применяется он и в медицинской практике. К достоинствам препарата следует отнести также низкув токсичность и возможность использования для обработки животных групповнм способом.

Потребность животноводства d фенасале - 630 тонн в год по данным ВИГОС (1988 г.'). Химическая промышленность удовлетворяет эту потребность только на I9&. Основным,препятствием для расширения выпуска фенасала ветеринарного является крайне неблагоприятная экологическая характеристика этого производства: в процессе очистки технического продукта до требуемых кондиций образуется около 200 тонн сильно загрязненных сточных вод на каждую тонну» товарного продукта.

Нами установлено, что наработку препарата ыоясно повысить, . если изменить условия выделения и исключить многокпатную обработку целевого продукта хлорбензолом, спиртом, хлориьтоводород-

- л -

ной кислотой и водой (A.c. JJI05025I от 27.01.62 г.) .

Полученный препарат по всём качественным показателям соответствует данным Фармакопеи ГДР, УП издание (1975 г.)на аналог, фенасала //¿¿' Eosamit/i/'» ■ ...

Однако любое изменение в технологии производства может повлиять на качество продукта, изменить физико-химические свой- . стса, структуру его и, как следствие этого, фармакологические свойства лекарственного средства. ' -

Полученный по усовершвнсгвовг.лной технологии препарат назван нами фенасал-2.

Цель и задачи исследования

Основная цель наших исследований - внедрить в ветеринарную практику фенасал-2 - антгекьмннтик, полученный по усовершенствованной нами технологии, позволяющей на 30$ увеличить отдачу существующих мощностей, в 2 раза сократить вредные отходы производства.

В связи с этим требовалось решить следующие задачи;

- исследовать фиоико-химические свойства фенасала-2 в сравнении с обычным фенасаЛом;

- синтезировать и изучить физико-химические свойства, фармаколо-

I 1 I

гическую активность 3,2-дихлор-4-нитро салициланилида - основной возможной сопутствующей примеси в производстве фенасала}

- изучить токсические свойства фенасала-2; оструо токсичность, влияние на.антитоксическую функцию печени, наличие аллвргизи-руюцих свойств, безвредность для овец;

- разработать метод определения остаточных количеств фенасала-2 v

в органах и тканях овец, установить сроки выведения его из организма кив'отнпго;

- опрэдвиить аттельминткуо вффективность фенасала-2 при моние-

зиоэе овоц;

- разработать нормативно-техническую документацию для промышленного производства фенасаяа-2 (ТУ и производственный реглемонт).

Научная новизна

Разработан экологически чистый способ получения фенасала. Изучена биологическая активность и токсические свойства антгель-' минтика, полученного по новой,технологии, фагманскинетика и влияние препарата на антитоксическую функции печени, его аллергизи-руоди§ свойства. Проанализированы причины-наблюдавиихся осложнений при применении препарата.

Практическая, ценность

1. Разработана нормативно-техническая документация для промышленного производства фенасала-2:

- технологический .регламент производства фенасала-2, утвержденный руководителем НЮ "Краситель" 07.09.82 г.;

- технические условия на фенасал-2 - ТУ 6-14-267-83, утвержденные ВО Союзашлпром 15.II.83 г.

2. Технология фенасала-2 внедрена в цехе .'"22 ИЮ "Краситель", выпущен отчет "Освоение технологии фенасала-2", утвержденный 28.12.83 г.; получен акт внедрения, утвержденный^,руководителем РЮ. "Краситель" 30.12.83 г.

3. Разработаны методические указания по определению остаточных количеств фекасала-2 э органах и тканях животных, утвержденные ГУВ Госагропрома СССР 24.01.89 г. Определены сроки возможного убоя овец после введения фенасала-2.

I

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на 1-ой

- а -

межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические стедства в ветешнарии" (Ленинград, 1989).

Публикации научных исследований

' По теме дирсертеции опубликованы 3 статьи и получено 2 авторских свидетельства на изобретения. '. * . .

Основные положения диссептации. выносимые на защиту

*

- результаты лабоцаторшх и производственных оштов по изучение острой токсичности фенасала-2, его аллергазирупцих свойств, влияния на антитоксическую фуккцио печени; *■

- ' - денше по ф&рмакокинетике фенасала-2, практическое предложение по определение остаточных количеств препарата в органах и тканях; .

I »

• - результат» по изучение токсических свойств 3,2-дихлор-4-нит-росалкцилашлида основной возможной сопутствующей принеси в производстве фенасада, практическое предлвжение по качествен-исиу определение этой примеси в фекасале; ! - данные по выявление причин побочных явлений, имевших иесто у 0,1-0 жнвотилс, после ях дегельминтизации фенасалов и фе-насалом-2.

Структура и объем диссепташм ;' Материал диссертации изложен на 128 страницах ыапнношско-го текста (исключая приложения) и иллюстрирован 23 таблицами, 12 рисунками, 2 фотоснимками.

Сшсок использованной литературы включает 196 навденова-v. кий, в том числе 53 иностранных.

Диссертация включает сдадуюцие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждедое результатов, ' выводы, предложений для практики, список литературы,приложения.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Материалы и методы

Работа выполнена в лаборатории контроля и стандартизации лекарственных препаратов и кормовых добавок ВГНКИ, ОПХ "Манихи-но", Рубежпнском филиале НКОПиК '.ОТО "НИОПИК", Рубеяанском производственном объединении "Краситель", в хозяйствах Омской области и Чечено-Ингупской АССР.

В опытах изучали фенасал-2 с концентрацией активного вещества 96/о, наготовленный Рубеканским' производственным объединением "Краситель", и 3,2-дихлор-4-нитросалициланилид (возможная сопутствующая примесь э производстве фенасала), синтезированный в лаборатории Ей НИОПиК.'В качестве препарата сравнения использовали обычный ветеринарный феиасал, изготовленный.РПО "Краситель", имеющий такую же концентрацию активного вещества.

При изучении токсичности и резопбтивных свойств испытуемых образцов были использовп "ы клинически здогювые лабораторные животные, находившиеся в одинаковых условиях содержания и кормления . '

В проведенных исследованиях использовали 436 б4лых мышей обоего пола массой тела 16-20 г, 24 морские свинки массой тела 300-400 г, 33 овцы в- возрасте 8 месяцев и 9 овец в возрасте 1,5 • года массой тела 26-27 кг, 30 ягнят трехмесячного возраста, в совхозе "Тихвинский" Омской области дегеяьыинтизоции подвергли •. 7500 ягнят и в колхозе имени Ленина Чечено-Ингушской АССР -3400 ягнят•' '

Определение металлов проводили на атомно-абсорбционном спсктпофсзометг.е "Сатурн" с воздушно-ацетиленовым пламенем го- •

гилкн - атомизатором, лги соответствующих длине аналитической

• ■

линии, расходе здетилена и воздуха, пирипе цели монохроматора.

Химическое строение исследуемых образцов идентифицировали

■ >

методом ИК- и УФ-спектроскопии. ИК спектры записывали в таблетках с бромиатым калием в концентрации 0,3% (1мг/ 300 мг) на спектрофотометре UR-20.

У4 спектры записывали на спектрофотометре СФ-8 в кват^евых кюветах с толщиной поглощающего свет слоя £ш 9,98 мм при аналитической длине волны 220-370 т. В качестве растворителя использовали 0,01 н спиртовый раствор хлористоводородной кислоты.

Химический состав определяли: ' , Элементный анализом (массовую дол» азота -.газометрическим микрометодом Дкма, зак лечащемся в предварительном сожжении в токе COg определенной навески препарата-с последующим объемным определением образовавшегося азота; массовую долю хлора - по методу Иешгера, основанном на предварительном сожжении навески, вещества в атмосфере 0g в присутствии платинового катализатора о последующим титрбвением ионов хлора раствором азотнокислого серебра)(

методом атомно-абсорбционной спектроскопии (массовые доли металлов - .на атомно-абсор&деонном спектрофотометре путем перевода металла, содержащегося в виде соли в атомарное состояние с последуициы спектрофотометтипсванием растворов и определением массовой концентрации металла);

методом тонкослойной хроматографии (качественный состав примесей в исследуемых образцах - на хрсматографических пластинках Силуфол фирмы "Kavalier" ЧССР,, для обнаружения пятен в У® свете

использовали осветитель "Миг" (336 нм), в качестве растворителя

i

- ацетон» в качестве алвента использовали систему бензол-ацетон в "соотношении 6:1).

Кассовую Долю аолы, температуру плавления, растворимость определяли в соответствии с требованиями ГОСТ: 2III9.10-75,■

18995.4-73. '

3-Хлорсалициловую кислоту получали по патенту ФРГ 827805 (1952г). 3,2-Дихлор-4-нигросалициланилид получали аналогично феносалу . . (А.в.Бехли о соавт., 1965).

Острую токсичность фенасала-2 в сравнении с обычным фена-салом изучали на 200 белых беспородных мышах массой тела 16-18 г и 12 овцах в возрасте 8 месяцев массой тела 26-27 кг при однократном оральном введении препарата в 1^-ном крахмальном геле. На каждую дозу брали 6 мышей и 3 овцы. Определяли максимально переносимую дозу (МВД) и вычисляли ДД16, Д%о» Д%4> Ждоо при однократном введении по методу Литчфидда и Уилкоксона. Параметры тонсичности обичного фенасала для ветеринаркой практики для сравнения с испытуемыми образцами брали по М.В.Дорониной (1068).

При изучении токсичности и эффективности препаратов пользовались методиками, принятыми в токсикологии и гельминтологии. Испытуемые соединения вводили орально в суспензии; В ряде опытов препараты задавали г упповым методом в смеси с кормом.

Остаточные количества Денасала-2 в организме овец изучали на 21 овце массой тела 26-27 кг. Препарат вводили в виде мучной суспензии орально, инпивидуально, в терапевтической'дозе (0,1 г/ кг). Чевез I, 2, 4, 6, II, 15, 20 , 26 , 30 суток при послеубой- . ном вскрытии каждой пары животных отбирали кусочки мыад, внутренних органов, желчь и фекалии. Антгельминтик из навески биоматериала, предварительно измельченной и обработанной физрас- ' твором, извлекали экстракцией в течение 18 часов при комнатной -температуре. Надосадочную жидкость спектрофОтометрировали на спектрофотометре СФ-26 при рН 9 и длине волны 395 км. Содержание феиаедла-2 в ацетоновых экстрактах определяли по калибровочной кривой и пересчитывали по формуле

Н' Э

: С - количество фенасала-2 в исследуемой навеске биоматериала, мкг/г;

1 к - коэффициент перехода от, оптической плотности 'к концентрации;

Д1 - оптическая плотность одатной пробы; 2

¡¡Г - оптическая плотность контрольной пробы; У1 - объем опытной пробы, см3; 1

У^ - объем контрольной пробу, см3; Н - вес исследуемой пробы биоматериала, г; : Э - степень извлечения фенасала-2 из органа.

Эффективность фенасала-2 в сравнении с обычным фенасалом изучали на 30 ягнятах трехмесячного возраста! инвазированность которых подтверждалась микроскопией фекалий на наличие фрагментов мониезий. Из животных сформировали 3 группы, из которых животные одной группы получали фенасал, второй'- фенасал-2 и третья ! группа животных была контрольной. Препарат животным вводили в дозе 0,1 г/кг массы тела перорально, индивидуально, утром натощак. По прекращении выделения гельминтов у ливотных первой и второй групп был произведен у(?ой и гельминтологическое вскрытие кишечника всех 30 ягнят, произведен учет количества сколексов. . По общепринятой формуле расчета определяли инт^нсэффективность " (ИЭ) и экотенсэффективнооть (ЭЭ).

Для дегельминтизации животных групповым способом использовали овец в возрасте 8 и 12 .месяцев. Препарат в дозе 0,2 и 0,25 ^г/кг массы тела и корм из расчета 200 г животному отвешивали на 20Ö овец, раскладывали в кормушки. Исходную экстенсивность инвазии определяли методом брллеборна. Через 20 дней после обработки животных снова обследовали, определяли процент животных, пол-

, ностыо освободившихся от гельминтов •

Результаты исследований по воем разделам обрабатывали статистически с применением критерия Стьюдента при Р = 0,95 (К.До-ерфель, 1969).

2. Результаты исследований

2.1. Совершенствование технологии производства антгельмин-тика. /

Установлено, что снижение выхода фенасала в производстве связано о условиями выделения препарата. Многократная'обработка . продукта хлорбензолом, спиртом, раствором хлористоводородной кислоты и водой в кислых средах ведет к тому,.что часть фенасала в виде комплексов и эфиров фосфорной кислоты растворяется и теряется о маточниками. При' отгонке хлорбензола о паром происходит омыление оставшихся эфиров фосфорной кислоты с выделением минеральной кислоты, которая вызывает гидролиз целевого продукта.

Нами предложено проводить обработку реакционной массы хлорбензолом и отгонку растворителя паром в присутствии гидроокиси аммония, что позволило исключить последующие ..многократные обработки, предотвратить потерю продукта. При этом число технологических стадий сократилось о 16 до.9, расходные нормы на сырье снизились с 8,7 т/т до 5,3 т/т, в 2 раза сократилось количество неутилизируемых сточных вод, что позволило решить экологические-. вопросы, связанные с производством фенасала-2.

2.2. Побочные явления, встретившиеся у животных при применении фенасала и фенасала-2. , ..." ..

По данным :4.В.Дорошиной (1967, 1968, 1969) фенасвл беэвре- » дон для овец в дозе, превышающей терапевтическую в 6-10 раз. В Лгав до 10 г/кг -массы тела препарат не влияет на клидаческие .

показатели, физиологическое состояние животных, морфологический состав кроаи и качественный состав мочи. Хорошую переносимость фенасала отметили В.А.Ексаева с соавт. (1972), Т.Д.Султанкулов • с соавт. (1973) и многие Другие. Однако описаны случаи осложнений у овец при применении фенасала в пределах терапевтической дозы (П.В.Родионов, 1974).

При изучении антгельминтной эффективности фенасала-2 в сравнении с фекасалоя при спонтанном мониезиозе овец в одном из совхозов Оконешниковского района Смекай области летом 1983-1984 г.г. также наблюдали побочные явления у небольшого количества (0,3-0,5%) животных как после применения фенасала-2, так и после применения обычного фенасала. Осложнения проявлялись в виде отеков в области головы на вторые сутки после обработки. Для выяснения причин осложнений у овец были проведены' комплексные исследования разных серий фенасала и фенасала-2: изучение физико-химических свойств, токсичности и т.д.

2.3. Физико-химичеокие свойства исследуемых образцов фенасала и фенасапа-2.

Причиной осложнений может служить качество лекарственного средства,' которое, как известно, в значительной мере определяется его физико-химическими показателями.

' Обследованию подвергли образцы четырех партий антгельмин-тика.'две из которых (фенасал п.107 и фейасал-2 п.2) вызвали . осложнения у 0,3-0,5$ дегельминтизированных животных, а две (фенасал п.21 и фенасал-2 п.5) не вызвали побочных явлений.

По химическому строение исследуемые образцы, как вызвавшие осложнения, так и не вызвавшие побочные явления, идентичны, о 'чеЯ свидетельствует практически полное совпадение спектральных характеристик в-У® спектрах и характеристических полос и их интенсивности в ИК спектрах.

Характерными показателями химического состава фенасала яв--ляются массовые доли азота и хлора. Завышенные результаты по этим- двум элементам по сравнении с теоретически рассчитанными могут свидетельствовать о наличии в препарате исходных полупродуктов. Результат элементного анализа в исследуемых образцах близки между собой и близки теоретически рассчитаннш значениям (таблица I) •

Таблица I

Результаты элементного анализа

№ I Наименование I N ; %_I С1. %

пп ! образца I Опытные | 1ра(Г1 ^.Опытные '.<рост , 1_1112 1 '1112 1

1. Обычный фенесал п.Ю7, ' вызвавший осложнения 8.00 8.25 8.56 21.13 20.79 21.68,

2. Фенасал-2 п.2, вызвавший осложнения 7.90 8.10 8.56 21.75 21.52 21.68

3. Обычный фенасал п.21,

не вызвавший осложнения 8.29 7.98 8.66 20.54 21.09 21.68

4. Фенасал-2 п.5, не вызвавший осложнения 7.98 8.01 8.56 20.97 31.37 21.68

В анализируемых образцах выполнено определение/массовых долей Ре, И а, Са, Мд, 1п, Ы! , Сг, К, Со, Си, ¡/¡п, 5п, Сс(, " Аг, Н^, поскольку псимеси металлов в значительной мере влияют на химический состав, а, следовательно,, на качество анттельмин-тика. -

Металлы Со, Си, Мп, Сс), ЛЭ, Нд в пределах чувствительности метода не обнаружены. Определены массовые роли 8 металлов: Ре, И а, Са, Мд, ¿п , /V/ , Сг, К. Их величины как у .образцов препарата^ вызвавших осложнения, так и не вызвавших осложнений близки между собой (таблица 2). Из четырех обследованных образцов лишь у обычного фенасала (образец I) массовая доля железа в

Таблица 2-

Результаты анализа образцов антгельминтика методом атомно-абсорбционной спектроскопии (ААС)

1 - Наименование 1 Массовая доля металла, а /о

пп 1 об-оазца ! Ре ! Ma ! ! Са ! ! Мр ! 2п ! Ni \ ! Сг ! К

I. Обычный фенасал л ЛОТ, вызвавший осложнения 0,220 0,050 0,020 0,030 0,016 0,02 0,03 0,010

' 2. Фенасал-2 п.2, . . вызвавший осложнения 0,100 0,100 0,030 .0,020 ' 0,018 н.и. . . н.и. . 0,010

3. Обычный фенасал п.21, не вызвавший осложнений 0,100 0,100 0,030 ' 0,021 0,020 • н.и. н.и. 0,020

.4. Фенасал-2 п.5, не вызвавший осложнений 0,100 0,100. 0,030 0,020 0,020 ' 0,02 0,04 0,015'

Примечание: н.и. -

2.2 раза вше, чем у остальных. В то же время массовая доля же-, , леза у образца 2, вызвавшего побочные, явления, точно такая же,, кап у образцов партий антгельминтика, не вызвавших побочных явлений. Анализ полученных данных свидетельствует о том, что фенасал-2 содеттмит металлы и в качественном и в количественном

отношении такие же, как и обычный фенасал. Наличие этих метал-

1«

лов не является причиной встретившихся осложнений у 0,3-0,5» дегельминтизированных животных.

Метод тонкослойной хроматографии не выявил различий в качественном составе обследованных образцов. Хроматограммы всех ■ образцов во всех системах идентичны. Таким образом, анализ фе-насала и фенасала-2, вызвавших и не вызвавших осложнения у животных, показал, ЧЮ| побочные явления, наблюдавшиеся у овец при

дегельминтизации фенасалом и фенасалом-2, не связаны с физико-

i

химическими показателями препарата различных партий.'

2.4. Физико-химические свойства 3,2-дихлор-4-нитросали-Циланилида.

' i ■ В сравнении с фенасалом (5,2-дихлор-4-нитросалициланилидом)

i i

определены физико-химические свойства 3,2-дихлор-4-нигросалиЦил-анилида, образование которого, согласно У.Badea (1970), возможно в процессе производства фенасала. Оба соединения имеют общую эмпирическую фошулу CjgHgN и отличаются лишь положением,

одного атома хлора в молейуле салициланияида.

Синтезированный препарат представляет собой светло-коричневый .порошок, без запаха, хорошо растворимый в ацетоне, бензоле, хлорбензоле (500 г/л), растворимый в растворах щелочей, нерастворимый в кислотах; Т.пл. 197°С. Индивидуальность его подтверждена Ш спектром, содержащим характеристические частоты для -NOg, -СО, -WH, GI групп.

На пласгийе "Силуфол" (метод ТСХ) синтезированный продукт

проявляется в виде пятна желтого цвета с = 0,87, что позволяет хорошо дифференцировать.возможную примесь от целевого продукта, имеющего = 0,78. Введение анализа методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) в ЗУ на фенасал-2 является достаточным для обесПеч чшя высокого качества антгвльминтика.■

2.6. Токсические свойства 3,2-дихлор~4-нитросалициланилида.

3,2-Дихлор-4-китросалициланилид оказался чрезвычайно токсичным, соединением, Максимально переносимая доза составила Юмг/ кг, а ЛДзд - 43 мг/кг.

Нами определена также МВД примеси, представляющей собой остаток после упаривания досуха хлорбензольных маточников производства фенйсаяв-2 (МПД 1200 мг/кг). ЛД50 ее составляет 2535 мг/ кг (2334-2753 мг/кг), т.е. согласно ГССГ 12.1.007.76 "Вредные {■вещества" она может быть отнесена к 3 классу токсичности. Следовательно, в производственных условиях получения фенасала-2 3,2-

I

■дихлор-4-нитросалициланилид не образуется, т.к. 3-хлорсалицило-вая кислота удаляется на первой стадии, в противном случае показатели острой токсичности примеси, выделенной из хлорбензольных маточников, были бы иными.

2.6. Токсические свойства фенасала-2. '

2.6.1. Острая токсичность.

Г '

Параметры острой токсичности фенасала-2 в сравнении с обычным фе насалом, применяемым в ветеринарной практике, представлены в табл. 3.

В Пределах физиологической нормы находились также показатели крови (количество эритроцитов и лейкоцитов, гемоглобин, общий белок) животных, получавших фенасал-2 в 6-кратной терапевтической дозе. ,

В результате проведенных исследований установлено, что фенасал-2 является малотоксичныы соединением. ДД^д такая же, как и

Таблице 3

Показатели .острой токсичности фенасала-2 и фенасала

Наименование • ! Дозы, мг/хг

препарата | ¡ад 1 Щб 1 ВД5о 1 ВДЦ 1 ЗДро

Фенасал (Т.пл.226°С) по М.В.Дорониной, 1968 10000 . ■ 12500 13500 14500 ■ 17500

Фенасал-2 (Т.пл.'223-224°С) 6700 12400 13520 14870 13126+13925 22000

у фенасала, а ДДюо даже несколько выше. Согласно ГССТ 12.1.0(7?. 76 "Вредные вещества',' препарат относится к веществам 4 класса токсичности, а согласно классификации химических веществ по острой токсичности для мышей и крыс при пероральном введении (Т.П.Веселова, 1978) к практически нетоксичным химическим веще- . ствам.

2.6,2. Аллергизируицие свойства фенасала-2.

Известно, что аллергизирующие свойства можно выявить по изменению уровня гистамина в сыворотке крови овец до и после введения препарата (И.М.Коренман, 1970). При наличии у препарата' аллергизирующих свойств уровень гистамина повышается.

Результаты исследования аллергизирующих свойств представлены в таблице 4.

Изменение уровня гистамина в крови овец, определенное через . разные промежутки времени после введения препарата в период наибольшего его всасывания, статистически недостоверно.

Тест гистаминного шока на морских свинках также подтвердил отсутствие у фенасала-2 аллергизирующих свойств, т.к. введение препарата в терапевтической и двойной терапевтической дозах не

Таблица 4.

Показатели гистамина в сыворотке крови овец до и после введения фенасала-2 в терапевтической доае

Периоды исследования !. Уровень гистамина ! подопытных ! (мкг/5мл) у овец контрольных

До введения фенасала-2 2,1±0,1 1.4+0,5

Через 24 часа после введения фенасала-2 2,2+0,4 . 1,5+0,6

Через 48 часов после 'введения фенасала-й 3,0+0,4 ■2,4+0,6

Через 72 часа после введения фенасала-2 2,9+0,9 2,3+0,5

Чсгез 96 часов после ■введения фенасала-2 2,5+0,7 1,7+0,2

ускоряло гибель животных (табл.5). Реакция у контрольных и опытных морских свинок на введение гистамина была одинаковой.

Таблица 5.

Данные гистаминной активности фенасала-2 на морских свинках

Название

(Количество ки-ггупп 1вотных в ■ I группе

Дозы.,

_!Интетчзал между! По гибло сви-

™ !гисга 1насала и гис_

:ала . мина 1т„,.,,ня ияг, •/кг 'иг/кг !та'"»'1а» чао

коли- ¡через

че- какое ! ствс !врем« I I мин

I ! г ' 1 3 ! 4 ! 5 ! 6 1 7

Перван опыт. 4 0,2 5 1,5 4 17 -го

Вторая опыт. 4 0,4 5 . 1,5 3 17 -20

Контрольная 4 ' ■ - . 5 1,5 4 15

Третья опит. 4 0,2 5 3,0 3 15

Таблица 5 (продолжение)

.1 3.1.

! 6 I 7

Четвертая опытная

Контрольная

4 4

.0,4

3,0 3,0

4 12-16 2 20

2.6.3. Влияние фенасала-2 на антитоксическую функцию печени.-Поскольку метаболизм лекарстванного вещества наиболее интенсивно происходит в печени, то тест гексеналового сна оказался наиболее приемлемым в эксперименте. Продолжительность сна у мы- ■ ■ей опытной группы, получивших фенасал-2 в терапевтической и 10-

кратной терапевтической дозах (таблица 6), не возросла по срав-»

нению с контрольной.

Таблица 6

Влияние фенасала-2 на антитоксическую функцию печени

Группа животных

Доза

I Интервал между введением фена- !крах- 1гексе- 1 Фенасала-2 к гексенала

сац-2 ,м§л ,нал -кв_чау-

3 1.6______1 24

г/кг

• нал ¿.¡о-

2%-иый' ный 1

1 |мл/.гоя , Продолжительность сна в

I гол I_I мин

Опытная

(терапевтич. ■ 0,1 0,4 0,8 доза)

79,75+9,3

56,76±0,55

17,25+0,85

Опытная (10-

кратная тера- . I 0,4 0,8 52.?5±3,9 ■ певтич. доза)

62,25+5,25 67,25*3,3 •

Контрольная

0 4 08 60,25+6,0 61,5+1,5

67,75±5,27

В терапевтической дозе фенасал-2 оказывал даже некоторое благотворное влияние, на что указывает более короткий гексена-

ловый сон в опытных группах. Различив в длительности сна через, 3 часа в группах мышей, получавших фенасал-2 в терапевтической дозе и контрольной было статистически недостоверным. Отсутствие увеличения продолжительности сна, вызванного гексеналом, .свидетельствует о том, что фенасал-2 не угнетает антитоксическую. функцию печени.

2.7Остаточные количества фенасала-2 в организме овец.

На. основании проведенной оценки растворимости фенасала-2 для эксперимента отобраны два органических растворителя: ацетон •и етиловый апирт.

. Анализ влияния условий экстракции на степень элиминации антгелшинтика из биоматериала показал, что наиболее полное извлечение препарата из органов и тканей достигается ацетоном при доинатной температуре за 18 часов. Экстракция при температуре кипения показала более низкую степень извлечения, что связано с •метаболизмом белков и препарата при повышенной температуре.

•' Данные по распределению фенасала-2 в органах и тканях через различные промежутки Времени после введения препарата представлены в таблице 7. Анализ полученных данных позволяет сделать вывод, что в органы я ткани овец препарат всасывается неравномерно

и в небольшой»степени, достигая максимума в первые сутки. Значи-

»- -

тельнуо концентрацию его в печени следует объяснить тем, что этот орган является важнейшим в элиминации лекарственных веществ. В течение первых двух суток препарат определили во всех органах. В последующее время р. легких, сердце, селезенке препарат не обнаруживали, а в почках, печени, мыпцах происходило снижение его концентрации.

Выводится фенасал-2, в основном, через желудочно-кишечный тракт в первые четверо оуток. Именно в этот период наблюдается максимальный эффект от дегельминтизации, который обеспечивается

Распределение фенасала-2 в органах и тканях овец (иг/г)

Таблица 7.

Стоки !_ Органы и ткани

наблюдения '11!1>

(сут.) I печень 1 почки ! легкие I сердце ! селезенка ! мывды ! фекалии

0,03178 0,00485 . 0 0,00614 . 0,00263 0,00723 ' 2,07925

3. 0,00620 0,00345 . 0,00050 .0,00079 0,00203 0,00200 1,11675

■ 4. 0,00751 • о • 0 0, 0 0,00315 2,79175

6. 0,00960 . 0,00028 0 0 . 0 0,00010 0,01000

II. . 0,00986 0 . 0 • 0. • 0 0 .0

15. 0,01650 0 о 0 ' ' 0 0 0

20. 0,00038 .0,00038 , 0 0 0,00037 0,00267 н.и..

26.' 0,00683 г 0,00235 0,00423 н.и.. 0,00305 0,02105 н.и.

30. 0 ,0 0 0,00201 0 0,00095 1,24575"

Примечание: н.и. -■ не исследовалось ■.

контактом препарата с цестодами в кишечнике. Практически полностью фенасал-2 выводится иа организма к 30-м суткам и лишь у отдельных животных препарат обнаруживается в сердце и в мыедах в незначительной концентрации, что можно объяснить индивидуальной вариабельноотью, вследствие особенностей его всасывания, расгц чделения и выделения.

2.8. Антгельминтная эффективность фенасала-2.

результаты испытаний антгельминтной ¡эффективности фенаса-ла-2 показали, что через 12-24 часа у животных, получавших препарат индивидуально перорально, число фрагментов цестод, выделяющихся с фекалиями, значительно увеличивается по сравнению с контрольными. При послеубойном вскрытии кишечника животных опытных групп сколексов цестод не обнаружено. У всех ягнят f контрольных групп найдены мониезии. Антгельминтная эффективность составила 100$..

Полученные данные полностью подтверждены результатами дегельминтизации групповым способом в дозе 0,2 и 0,25 г/кг массы тела 3400 ягнят в одном уз колхозов Чечено-Ингушской АССР и 7500 ягнят в одном из совхозов Омской области. ЭЭ препарата составила .соответственно 91 и I00/J.

Проведенный эксперимент позволяет сделать вывод, что нет различий в антгельминтной активности фенасала-2 и обычного фе-насала, давно применяемого в ветеринарной практике.

' ВЫВОДЫ

I. Усовершенствован метод-получения ветеринарного фенаса-ла, позволяющий на существующих мощностях увеличить выпуск г.нт-гельминтика на 30%, существенно упростить и обезопасить технологию, с 2 газа сократить количество неутилпзпгуе;.''!;; стоков.

2. Сизако-химические свойства фенасала-2 идентичны фенаса-

. лу, кроме- температуры плавления, которая на 1-1,5°С ниже и зольности, последняя составляет не'вше 1%. 1

3. *енасал-2 относится к классу слаботоксичных веществ, (Щ - 8700 мг/кг, при пероральном введении для белых мышей составляет 13500 мг/кг. По ГОСТ 12.1.007.76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности" препарат относится к 4 классу токсичности. . • |

4. Фенасал-2 не обладает аллергизитупцкми свойствами и не усиливает действие гистамина.

б. Терапевтическая и 10-кратная терапевтическая дозы фенасала-2 не влияет на антитоксическую функцию печени овец.'

6. Накопление фенасала-2 в организме животных происходит в небольшой степени, а распределение в органах и тканях нерав-комерно. Отмечено избирательное' накопление его в печени. Максимальная концентрация зафиксирована в первые сутки. В большой массе фенасал-2 выводится из организма рвец через желудочно-кишечный тракт в первые четверо суток. Препарат не обнаруживается в организме через 30 суток после его введения.

7. По антгельминткой активности фенасал-2 не уступает о&чному фенасалаг» Эффективность его при индивидуальном введения внутрь в дозе 0,1 г/кг равна 10 при "групповом способе првменения в дозе 0,2 ж 0;25 г/кг 29 равна 91 и 100£.

8. Осложнения, наблюдавшиеся у 0,1-0,55? овец при дегельминтизации фенасалои и фенасалом-2, не связаны с аллергиэирую-(цими свойствами и физико-химическими показателями различных партий препаратов, а объясняются внутривидовой чувствительностью животных и фотасенсибилизирущими свойствами антгельмин-

. тиха.

\

\

- . ПРАКТИЧЕСКИЕ Пй^ЛОВДШЯ

I. Внедрен в ветеринарную практику фенасал-2, что позволило на 30$ увеличить выпуск высокоэффективного отечественного антгельминтика. ' .

к. Разработана и утверлдаена следующая нормативно-техническая документация: "

2.1. Технологический регламену получения фенасала-2,' утвержденный руководителем предприятия п/я М-5400 07.09.1983 г.

. 2.2. Технические условия ТУ 6-14-267-83 на фенасал-^, утвержденные ВО Союэанилпром I5.IlÄ983 г.

2.3. Методические указания го определению остаточных количеств фенасала-2 в органах и тканях овец, утвержденные ГУЛ Гос-агропрома СССР 24.01.1989 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ П(Й МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. A.c. 1050251 СССР, Ш3 С 07С 103/75, С 070 102/04. Способ выделения 4-нитро-2,5-Дихлорсалициланилида / В.В.Реэни-ченко, Т.Н.Под^езова, Е.С.Чесновская и pp. (СССР). - 7 с.

2. Токсикологические и антгельминтные свойства фенасала с пониженно!) температурой' плавления и повышенной зольностью / Надыкто М.В., Полуэктов В.Ш., Тимофеев Б.А., Чесновская Е.С. // Ветеринария. - 1984. j- Г6. - й 64-65.

3. A.c. 1469803 СССР, Ш3 С 07С 103/75, С 07С 102/04. Способ выделения 4гНитро-2,Б-дихлопсалициланилида / В.И.Рого-вик, Е.С.Чесновская, Т.Н.Подрезова и др. (СССР). - 8 с.

4. Фармакологические свойства и остаточные количества фенасала-2 в организме овец / Надыкто М.В., Тимофеев Б.А., Полуэктов В.Н., Чесновская B.C. // Ветеринария. - 1907.-.'"2.-С.64-68.

5. Чесновская Е.С., Надыкто М.В., Полуэктов В.Ш. Биологическая активность салициланилидов // Тр. ин-та / Всесоюа. гос. научно-контр. ин-т- ветпрепаратов. 198?. - С. 21-23. !

6. Чесновская Е.С,, Тимофеев Б.А., Надыкто М.В. Токсичность, реэорбтивные свойства, эффективность фенасала-2 // Материалы 1-ой межвузовской научно-практической конференции ¡"Новые фармакологические средства в ветеринарии" (тезисы докладов), / Ленинградский ветеринарный институт.Д; 1989. - С. 144-145.