Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование средств и способов иммунизации поросят против классической чумы свиней

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОНЕТА ШИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ Й ЗАКУПКАМ

ВИТЕБСКИЙ ОРДЕНА «ЗНАК ПОЧЕТА« ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ИМЕНИ ОКТЯБРЬСКОЙ ГСВОЛЩИИ ■

На правах рукописи УДК 619:616.98:578.833.31-053.2-093.2

ЧЕРМАШЕНЦЕВ Владимир Иванович

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СРЕДСТВ И СПОСОБОВ ШУНИЗАЦИИ ПОРОСЯТ ПРОТИВ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Витебск - 1990

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии.

Научдай руководитель - доктор ветеринарных наук,

профессор ПСПОВ В.И.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор СИДОРОВ И.А.

кандидат ветеринарных наук, доцент МАКСИМОВИЧ В.В.

Ведущая организация - Украинский научно-исследовательски

ветеринарный институт.

Защита диссертация состоится .. ^ » ¿/.> —I991 г

в /*/ часов на заседаши специализированного совета К 120.05.01 в Витебском ордена «Знак Почета« ветеринарном институте имени Октябрьской револяпяи (210619, г.Витебск, ул. 1-я Доватора, 7/11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ви'згебског ветеринарного института.

Автореферат разослан «

г.

7

Ученый секретарь специализированного совета, доктор ветеринарных наук,

профессор АРЕСТОВ И. Г.

■ I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Классическая чума свиней (КЧС) является опасной вирусной болезнью, наносящей мировому свиноводству значительный экономический ущерб, который в настоящее время резко увеличивается в результате высокой концентрации животных и интенсификации свиноводческой отрасли.

Важными условиями .для эффективной борьбы с классической чумой свиней является стандартизация по биологической активности имеющихся вирусвакшн против КЧС и разработка новых наиболее безопасных и высокоиммуногенных профилактических биопрепаратов, а такте их применение в оптимальных дозах и по иммунобиологически обоснованным схемам .для различных половозрастных групп свиней. Успех противоэпи-зоотических мероприятий .при классической чуме свиней зависит от создания напряженного иммунитета во всех возрастных группах стада свиней, но особенно у поросят до- 2-3-месячного возраста, составляющих 40-45% поголовья репродуктор-ных хозяйств. Однако практика ликвидации эпизоотических вспышек классической чумы свиней выявила недостаточную эффективность ранее предложенных (Н.В.Лихачев и др.,1964; А.А.Конопаткин и др., I9G5; А.В.Терюхадов,-1957; П.И.При-тулин и др., 1972; П.Балтов, 1978; В.И.Попов, I9BI) схем многократной вакцинации поросят с IO-15-суточного возраста, рожденных иммунными к вирусу КЧС свиноматками. Эффективная вакцинашя поросят, имеадих естественно или искусственно пассивно-приобретенные вируснейтрализующие антитела, представляет собой сложную проблему (К.В.Лихачев, I9C6; ■ ч..З.Теркр-\анов, I9Ù6; Я.Р.Коваленко, .1979; Н.К.Мищенко, 19Ы; k/.Н.Федоров, 1982; Н.И.Митин," 19ЬЗ;В.И.Попов, J963, 1964; А.А.Консгтаткин, 1984; J.Aiken , I.Blore , I9C4; L.Coggins , I9C4; M.Popovlc et al., 1973,- H.Mahnel , A.Mayr, 1974; H.Dunne , 1975; P.Goret , 1976; G.Corthier, I97b; ï.î.Launais , 1976; U.Shinizu , I960; J.H.Aynaud , I9o4; ?.Hunter , I9Bt; C.Terpstra et al., 1987 и др.).

В рекомендациях 52-й генеральной сессии Международного эпизоотического бвро отмечена необходимость разработки методов и схемы иммунизации поросят, полученных от иммунных свиноматок,против КЧС (А.Д.Третьяков и др., I9B4).

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлась разработка способа иммунопрофилактики классической чумы у поросят, полученных от иммунных свиноматок.

В этой связи было необходимо, решить следующие задачи:

- разработать лабораторные модели для обнаружения, идентификации и титрования вируса КЧС, аналогичные по чувствительности биопробе на естественно восприимчивых животных;

- разработать лабораторный метод опенки напряженности иммунитета у свиней против КЧС;

- определить срок наступления, продолжительность и напряженность колострального иммунитета против КЧС у поросят;

- определить оптимальную дозу и разработать схему вак-шнащи культуральной вирусвакциной ЛК-ВНИИВВиМ против КЧС .для поросят, имеющих кодостральные вируснейтрализующие антитела;

- изучить влияние препаратов против колибактериоза на иммунный ответ новорожденных поросят, перорэльно вакцинированных против КЧС;

- усовершенствовать технологию производства и метод контроля активности культуральной вакщны из штамма "Ж--ВНИИВБиЫ" против КЧС.

Научная новизна. Доказана возможность защиты свиней от КЧС посредством внутримышечной вакцинации поросят в ранний постнатальный период вне зависимости от уровня колостральных вируснейтрализувцих антител, полученных поросятами от своих матерей.

Раскрыт механизм сенсибилизации, и быстрой гибели свиней при классической чуме, заключающийся в ангител^зависи-мом усилении инфекции, и созданы модели этого феномена in vivo И in vi tro .

Выявлена и охарактеризована вирусиндуиированная моду-' ляция фагоштарной активности макрсфагов, позволявшая идентифицировать и титровать вирус КЧС в культуре лейкоцитов крови свиней.

Установлено, что препарата для специфической профилактики колибактериоза (кояипротектан ШЭВ и бификол) не угнетают иммунвдй ответ организма поросят на антигены вируса КЧС и показана принципиальная возможность их перорального применения для новорожденных одновременно и раздельно с культуральной вирусвакпиной Ш-ВНИИВВиМ против КЧС.

Впервые "оказана возможность создания инактивированной вакшны против КЧС из вакцинного вгтамма "Ж-ВНИИВВиМ".

Установлено, что опенка напрятанное та иммунитета у свиней к классической чуме по характеристике впремии вакцинного штамма и титрам поствакпинальных вируснейтрализующих антител соответствует результатам определения иммунитета посредством контрольного заражения. Доказано, что титр вируснейтрализуадих антител 4 logg является критерием заведомой устойчивости поросят к вирулентному вирусу КЧС.

Выявлена возможность .дифференталии штаммов вируса КЧС in vi-tro по их вирулентности, на основе способности к репродукщи в определенных культурах клеток и к модуляции активности фагоцитов в культуре лейкоцитов крови свиньи.

Новые данные, полученные при изучении основных клеток-мишеней для репродукции вируса КЧС in vivo и in vitro, являются определенным вкладом в понимание патогенеза классической чумы свиней.

Практическая значигэсть. На основании полученных данных внесены изменения и дополнения в "Наставление по применению сухой культуральной вирусвакцины ЯК-ВНИИВВиМ против КЧС", утвержденное Главным управлением ветеринарии при Государственной комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам 6 апреля 1990 года, а также предложены изменения в научно-техническую документацию на изготовление, контроль и применение сухой культуральной вирус-вакцины Ж-ВНИИВВиМ против КЧС.

Разработаны и преддояе« к использованию "Методические рекомендация по оценке имунитета у свиней против классической чуми в реакция нейтрализасти на кроликах", утвержденные директором ВНИИВБиМ в 1966 г., а также "Шетодаческие рекомендации по обнаруиеида, идентификация и титроаажю гаруса КЧС в культуре лейхоштов крови свиней-доноров", утвержденные директорш ВНШВБкМ в 1966 г.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на заааиту.

I. Экспериментально-теоретическое обоснования необходимости и возшлаюстя преодолегая отрицательного действия колострадьнш вирусиевтралазупаих антител ка иммунный ответ поросят, вакданированшя против КЧС.

2„ Способ ишуиопрофиаятякй КЧС у поросят, полученных от швяушях свянанаток.

Апробация. Материалы дассертасии доле*ет и обсуждены на 4-х научных конференция ВНИИШиВ (1985-19В8гг.), на конференция молодая ученых и специалистов ВНЙЯИ и ВНИМВВиМ (1987 г.), заседаниях ученого совета ВНШВВиЭ (1364-19В8гг.).

Публикация. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ.

Объем и структура гогесертадии. Диссертационная работа изложена на 237 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка сокращений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 21 рисункам, при этой текстуальная часть диссертации состоят из 150 страниц. Список литературы включает 305 наименований, в том числе 130 отечественных и 175 иностранных источников. В приложении к диссертация представлено 12 документов, отражающих алрооагм» и практическую реализаций исследований.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе представлены результаты исследований, проведенных в лаборатории иммунологии Всесоюзного научно-исследовательского института, ветеринарной вирусологии к микробиологии в 1983-1988 гг. при выполнении научно-исследовательской темы "Совершенствование профилактических и противоэпизоотических мероприятий против классической чумы свиней" (номер государственной регистрации 01830066253).

2.1. Материалы и методы

й-;зотные. Свиньи крупной белой порода, различного возраста и физиологического состояния (новорожденные, поросята-сосуны, отьемыш 1-3-месячного возраста, подсвинки массой 25-30 кг, свиноматки супоросные и подсосные), выращенныр в обычных и гногобиотических условиях. Кролики породы "Со -ветская шиншилла", массой 1-3 кг, 3-8-месячного возраста и баран-донор породы "Прекос" в возрасте 2-х лет.

Закшны. Сухая и нативная культуральная вирусвакцина Ж-ВНШВВиМ против КЧС, производственные 29-64) и экс -периментальные (Ь5,8о,Ь7 пассажи) серии, изготовленные на Покровском заводе биопрепаратов и.в условиях ВШЙВВиМ, титр 4,5-5,5 ИмДзд/мл. Сухая авирулентная лапинизированная вирусвакцина (АСВ) из штадлма "К" против КЧС, производственные серии изготовлены на Сумской биофабрике, титр 2,5-3,0 КИД^/мл. Сухач культуральная вирусвакцина из штамма . "Гудзон" против КЧС, экспериментальная серия № I, изготовлена в условиях ВГНКИ, титр 5,0ККМДзд/мл.

"Вирулентные вирусы. Вирус КЧС, штамм "Ши-Мынь" в виде дефибринированной крови больной свиньи и нативного клеточного лизата культурального варианта 18 пас. в культуре клеток РК-15, получент.! в лаборатории иммунологии и музее штаммов оНИИЬВиМ, титр ДЛ^/кл и 5,5 ККЩ^0/мл, соответственно. Вирус КЧС, изолят "КМ", в виде сухой дефибри -нированной крови больной свиньи, получен из лаборатории эпизоотологии ВНШИиМ, титр 5,5¿¡Д-0/мл. Вирус КЧС, изолят "Н", в виде нативной 10% суспензии печени плода

больной свиньи, получен из лаборатории эпизоотологии ВНИИВВиМ, титр 3,0 ККВД60/мл. Вирус .диареи КРС, штаммы "ОК-67", "Орегон С24У" и "Грузинский", в виде сухого кле -точно-культурального лизата, 10-13 пассажи вируса в культуре клеток почки теленка (ШТ), получен из музея штаммов ВНИИВВиМ.

Биопрепараты для специфической профилактики колибак-териоза. Кодипротектан ВИЭВ, нативный препарат,-производ -ственная серия и госконтроль № 21, изготовлен Приволяской биофабрикой, Бификол, лиофидизированный препарат, производственные серии, изготовлен в НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского.

Культуры клеток. Первичные культуры клеток тестику-лярной ткани ягнят (Тй), костного мозга свиней (ККМС), лейкоцитов крови.свиней (ЛС), лейкоцитов крови кролика (Ж). Перевиваемые культуры клеток почки поросенка (РК-15), почки сибирского горного козерога (ПСГК), почки сайги (ПС), сердца кролика (СК), сердца оленя (СО), легких оленя (ЛО).

В работе также испольсовали различные питательные среды, растворы, реагенты и приборы.

Иммунизация свиней, -отбор и обработка материала. Новорожденных поросят'вакцинировали тотчас после рождения или в первые часы жизни внутримышечным или пероральным введением биопрепаратов. Сущность способа и техники перо -ральной иммунизации новорожденных поросят описаны в "Рекомендациях по пероральной иммунизации поросят против клас -сической чумы и болезни Ауески" (ВНИИВВиМ,1960). При внутримышечной инъекции вирусвакцину вводили з мяш бедра.

Супоросных и подсосных свиноматок, а также поросят-сосунов, полученных от иммунных и неиммунных свиноматок, иммунизировали внутримышечно вирусвакциной Ш-ВНИИВВиМ и АСВ против КЧС в дозах и по схемам, как указано в наставлениях или найдено . опытным путем. В течение 3-х недель после иммунизации ежедневно проводили термоптрию и клиническое наблюдение за состоянием швотнцх.

У свиней брали кровь из ушной вены или краниальной полой вены, используя методические приемы, описанные в

"Методических рекомендациях по, оценке клеточного иммунитета свиней при вирусных инфекциях" (ВНИИВВиМ,1988). У кроликов, кровь брали из краевой вены уха, тотальное обескровливание проводили в стерильных условиях через сонную артерию. Молозиво получали от свиноматок во время опороса равномерным сдаиванием всех действующих сосков в один флакон. Сыворотку крови и молозива получали общепринятыми методами.

Выделение, идентификация и количественные исследования вируса. Обнаружение и титрование вируса: КЧС осуществляли на свиньях, кроликах и различных культурах клеток (PK-I5, ЛС, ТЯ, ПС, ПСГК).

Для определения наличия вирусоносительетва у выживших свиней после контрольного заражения ставили биопробу на поросятах свободных от возбудителей инфекционных болезней (СВИВ). Биоматериал в виде 2055 суспензии внутренних органов (селезенки, лимфоузлов, печени, тимуса, поджелудочной нгдезы, миндалин) и крови переболевших поросят вводили подопытным животным внутривенно (7-10 мл) и внутримышечно в 3-4 точки (20-30 мл).-Наблюдения и термометрию проводили в те -чение 14-21 дня после иньекгии биоматериала.

Иммуногенную активность вирусвакцины Ш-ВНШВВиМ против КЧС определяли на свиньях или кроликах. Наличие иммунитета у свиней определяли методом контрольного заражения через 14 суток после иммунизации согласно "Инструкции по изготовлению и применению сухой культуральной вирусвакцины ЛК-ВНИИВВиМ против КЧС" (В.И.Попов,1981).

Выделение и титрование лапинизированных штаммов вируса КЧС осуществляли на кроликах по методике, описанной N.Totor-се& et al. (1972) и R.Barth , O.Jaeger (1974).

При титровании на кроликах вирусвакшны ЛК-ВНИИВВиМ, не обладающей свойством лапинизированностл, наличие иммун -•чого ответа у лабораторных животных выявляли в тесте гипертермии при помощи латинизированного штамма "К" вируса КЧС по собственной методике. Кроликов, неиммунных к вирусу _ КЧС, иммунизировали 10-кратными разведениями (I0_i - Ю-0) вирусвакшны, которую им вводили в краевую вену уха в объеме I мл. Через 16-23 дня после иммунизации кроликов

внутривенно -заражали тест-вирусом в дозе 30 КИД^/мл. Спустя 3 суток после контрольного заражения у неиммунных кроликов регистрировали типичную гипертермию (40,5-42,0°С).

В культурах клеток выделение, идентификацию и титро -вание различных по вирулентности штаммов и изолятов вируса КЧС проводили при помощи иммунофлуоресцентного метода согласно "Методическим указаниям по иммунофлуоресцентной да -агностике классической чумы свиней' (ВНИИВВиМ, 1984), а также по модифицированной нами методике Y.Kresae et al. (1976) в культуре лейкоодтов крови свиньи-

Иммунологические и цитологические методы. Исследования проводили совместно с к.в.н. В.В.Дмитренко, к.б.н. С.Г.Юрковым, С.Д.Кушнир. Определение концентрации лейкоцитов, относительного и абсолютного количества лимфоцитов осуществляли по. общепринятой методике. Дифференциацию клеток крови проводили сопоставлением формы, размеров и окраски клеток с рисунками форменных элементов крови свиней, приведенных в цветных таблицах гематологического атласа сельскохозяйственных животных (И.М.Карпуть, 1986).

Количественное содержание Т- и В-дамфоцитов у ново -рожденных поросят-СВШ,* иммунизированных перорально против КЧС и колибактериоза, изучали методами выделения лимфоци -тов из периферической крови и лимфоидных органов (тимус, селезенка, бронхиальные, подчелюстные и брыжеечные лимфоузлы) , а затем постановки реакций Е- и ЕА-розеткообразовг -ния с эритроцитами барана и быка согласно "Методическим рекомендап^шм по оценке клеточного иммунитета свиней при-вирусных инфекциях" (ВНИИВВиМ, 1988).

Цитохимическое определение эстераз в пристеночной культуре лейкоцитов крови свиньи использовали для идентификации клеток СИФ. Реакцию на Ы. -нафтилацетатэстеразу ставили по модифицированной нами методике Wacfaatein и Wolf (Ф.Хейхоу, Д.Кваглино, 1983). Фагоштарную активность лейкоцитов определяли по общепринятой методике, и-пользуя 0,25% суспензию полистирольного латекса.

Методы патоморфологическо'го и электронномикроскопи-ческого исследования. Патоморфологические изменения в миндалинах, тимусе, легких, печени, почках, подчелюстных и мезентериальных лимфоузлах, селезенке, поджелудочной железе, слизистой кишечника и ыочевого пузыря у летально инфицированных поросят изучали при участии к.в.н. С.А.Аверина. Материал для гистоморфологических исследований готовили общепринятыми методами'и окрашивали гематоксилин-эозином.

Электронношкроскопическое изучение препаратов вируса КЧС, штаммов "ЛК-БНИИВВиМ" и "Ши-Мынь", осуществляли методом ультратоьких срезов при участии к.б.н. Э.Г.Симоновой. Срезы толщиной 200 А готовили на ультратоме ЛКБ-3801 А, контрастировали уранилацетатом и нитратом свинца и изучали под электронным микроскопом JEM -100 при инструментальном увеличении от 2 тыс. до 40 тыс.

Методы контроля иммунитета против КЧС. -Определение наличия поствакцинального и пассивного иммунитета у свиней против КЧС осуществляли методами контрольного заражения, а также определением титра сывороточных вируснейтрализувдих антител (ВНАт) и ниремии ваквднного штамма. Устойчивость вакцинированных свиней к вирулентному штамму■"Ши-Мынь" вируса КЧС определяли через различное время после иммунизации Сот I суток до 6 месяцев) путем внутримышечного или перорального заражения животных в дозе 3I600-3I6000 ДЦ^/мл (натинная или разведенная 1:10 вирускровь). Для определения виремии вакцинного штамма "Ж-ВНИИВВиМ" использовали собственную методику обнаружения малых количеств вируса в куль -туре свиных макрофагов. Для определения тигров ВНАт в ис -слегубмых свиных и крох гаьих сыворотках крови использовали реакцию нейтрализации на культуре клеток-РК-15 (PHíE), подробно описанную в "Методических указаниях по йммунофлуорес-пентной диагностике классической чумы свиней" (БНИИВВиМ, L9Ü4), а также ка кроликах, предложенную O.Jaeger .H.Bartii (1974) и применяемой б налей модификации.

Методы статистического анализа результатов исследований. Обработку полученных экспериментальных данных осуществляли на ЭВМ "Мир-2" и "Искра-22о" методами вариационной статис -

тики, исходя из уровня значимости 0,0 5 • В работе ис -пользовали стандартные программы по корреляционному и регрессионному анализу.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Разработка лабораторного способа обнаружения, идентификации и титрования вируса КЧС, аналогичного по чувствительности биопробе на свиньях

Поиск высокочувствительной к вирусу КЧС лабораторной тест-системы осуществляли путем сравнительного параллельного титрования вируссодержащего биоматериала in vivo (свиньи, кролики) и in vitro (различные культуры клеток). Результаты опытов показали, что наибольшую чувствительность к вирусу КЧС, наряду со свиньями, проявили культуры клеток свиного гемопоэтического происхождения (.для штаммов "Ши-Мыньм и "ЛК-ВНИИВВиЫ"),. тестикулярной ткани ягнят (.для штамма "Ж-ВНИИВВиМ), лейкоцитов крови кролика (.для шт."К"), ПСГК ' и PK-I5 (для культурально-адаптированного варианта шт."Ши--Мынь"). Использование культуры 1С в качестве тест-системы позволяет обнаруживать вирус КЧС в биоматериале, полученном in vivo или in vitro ., в количествах порядка I JI^q или I ИмДзд/мд. Культура J3C оказалась непермиссивной для вируса .диареи КРС, что позволило достоверно идентифицировать вирус КЧС. Дополнительное использование методики фагоцитоза позволило дифференпировать in vitro различные штаммы вируса КЧС по вирулентности. Широко используемая в диагностике КЧС культура клеток PK-I5, даже после'3-х последовательных пассажей, не позволяет обнаруживать в вируссодержащеы биоматериале вирус КЧС в количествах менее 10-100 JIJ^q или Им&^/мл, что затрудняет идентификацию вируса КЧС и его дифференциа -вдю по вирулентности.

Для высоковирулентного вируса КЧС (штамм "Ши-йынь" и изолят "КМ"), характерны: высокое накопление вируса в куль -туре Ж! (> 2,0 lg КЩОзд/мл), необратимая модуляция фаго -штарной активности лейкоцитов {% фагоцитоза нейтрофилов -

74,0+2,1 при норме 48,0+6,1; % фагоцитоза макрофагов 48,0+2,7 при норме 93,0+1,5), непермиесивность культур несвиного происхождения, повышенная чувствительность к действию интерферона и вируснейтрализующих антител (снижение репродукции вируса в 100 раз), относительная термоустойчивость.

Слабовирулентный вирус КЧС (шт."Гудзон" и изолят "Н") отличается лалинизированностью или низким накоплением (^ 2 lgККИД^0/мл) вируса в культуре J1C. Группа авирулент-ных вирусов КЧС выделяется из всего многообразия штаммов и изолятов за счет потери способности размножаться в культуре свиных макрофагов, играющих ведущую роль в патогенезе КЧС (шт."К"-АСВ) или за счет других факторов, контролирующих его репродукцию в организме свиньи, например, повышенной термочувствительноети (шт."ЛК-ВНИИВВиМ''). При воздейст ж температурного фактора (Тду, 24 часа или Т^, 15 мин.) инфекционная активность вакцинного вируса КЧС, шт."Ж--ВНИИВВиМ", снижается на 90-99$. Анализ полученных данных показал полную идентичность в системе найденных биологи -ческих маркеров штамма "Ши-Мынь" и изолята "КМ", а также значительные различия до всем критериям между штаммом "Ж-ЗНИИВВиМ" и исходным "родительским" штаммом "К".

Исследования показали, что при КЧС-инфекшш in vivo и in vitro возможно обнаружение, титрование и .дифференциация вируса КЧС непосредственно в культуре J1C по што-патическому эффекту, проявлявдемуся модуляцией фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов. Активность фагоцитов крови свиней кратковременно снижается при инфекции вакгшного штамма (% фзлоситоза нейтрофилов 14,0+2,9 при норме 48,0+6,1; %. фагоцитоза макрофагов ¿8,0+3,6 при норме 93,0Л,5), а так?.е повышается % фагоцитоза нейтрофилов и необратимо лнгибируется таковой у макрофагов при инфекции вирулеьтным вирусом КЧС.'

Полученное наш результаты об отсутствии репродукции вакцинного штамма ЬиМ" в организме кролика cor -

ласуюгся с .данными Э.Б.Рудобельского (1969) и В.И.Попова

(1961). Однако,на кроликах возможно титрование, иммуногенной активности культуральной вирусвакщны ЛК-ВНИИВВиМ по типу вирионной инактивированной вакпины, для чего в качестве контрольного тест-вируса пригоден лапинизировэнный вирус КЧС, шт."К", вызывающий у яеиммунных кроликов (титр ВКАт <1 logg ) типичную температурную реакцию.

2.2.2. Разработка метода опенки иммунитета у свиней против классической чумы

Для правильного планирования проводимых профилактических мероприятий путем определения оптимальных сроков имму -низапии свиней против КЧС требуется иммунологический анализ при помощи специфического и простого скрининг-теста.

Результаты опытов по оптимизации условий постановки■ реакции•нейтрализаши на культурах клеток ТЯ, PK-I5 и ЛС показали, что наиболее чувствительной тест-системой оказалась культура ЛС и вирус КЧС, штамм • "Ши-Мынь", в виде вирус-крови больной свиньи. Для постановки РИФЕ в культуре клеток PK-I5 с культурально-адаптированным штаммом "Ши-Мынь" основным условием высокой чувствительности реакции оказа -лась, доза тест-вируса.-Так, увеличение оптимальной (100 ККИДф) инфицирующей дозы вируса в 10 раз достоверно уменьшало результат титрования в пределах 2 iog2 , что обязывает использовать в РНЗБ точную подтитрованную дозу тест-вируса КЧС. В результате моделирования феномена антителозависимого усиления КЧС-инфекции in Titro установлено, что усиление репродукции вируса в культуре свиных макрофагов наблюдается только при определенном количественном соотношении вирус-нейтрализующих антител в вируснейтрализующих единицах (ВнЕ) и вируса в клеточно-культуральных инфекционных 50%-ных дозах (ККИДцф) на каждые I06 клеток (0,03 ВНЕ + 4,4-44 ККИДзд для штамма "Ши-Мынь" и 0,3 ВНЕ + 3,6-36 КЩП§0 для штамма "ЛК-ВНИИВВиМ"). Указанный феномен позволяет повысить чувствительность реакши нейтрализации в культур- ЛС в 100 раз по сравнению с РНФБ в культуре клеток PK-15 и дает возможность выявлять субэффективные количества вируснейтрали -зуюцих антител.

Коррелятивную зависимость между уровнем сывороточных БНАт и параметрами устойчивости поросят к вирулентному вирусу КЧС изучали на 147 животных с различным иммунным статусом. В реакции свиней на контрольное заражение различали 4 типа по степени клинического проявления: гибель, тяжелое клиническое переболевание, слабая гипертермия ( 40,1-40,5°С), полная клиническая устойчивость. Для доказательства специфичности выбранных критериев устойчивости у поросят исследовали пробы крови и органов иммунной сие -темы на наличие лейкопении, виуэмии и вирусоносительства, 4-кратного прироста титра ВНАт, специфических патоморфо-логических изменений.

Корреляционный анализ данных показал, что все критерии оценки напряженности иммунитета поросят против КЧС, за исключением слабо" гипертермии, достоверно имели тесную связь с уровнем.ВНАт и между собой (г =0,93-0,99). Анализ коэффициентов детерминаши показал, что на 94-39$ все специфичные критерии устойчивости поросят к вирулентному вирусу КЧС зависят от урозня сывороточных ВНАт. У t,7-20,0« клинически устойчивых животных наблюдали слабовыраженнуга и кратковременную лейкопению и виремию (до I ig ККИДвд/ГО^кл), сероконверсию и единичные специфические патизменения, что свидетельствовало о возможности приживления вирулентного вируса у поросят низкими титрами ВНАт. Используя регрессионный анализ данных, определили зависимость вел'.гчин:: защитного титра ЕНАт от выбранного уровня резистентности и критерия устойчивости свиней к вирулентному вирусу КЧС (выживание, отсутствие симптомов болезни, отсутствие при -живленця вируса, отсутствие серокон'эерспи). Оптимально защитным уровнем стгеоротпчных В!!А?, прядохряняюаиы гзинеЯ от приживления вирулентного вируса, определен тито в I Xog2 • Следовательно, опенка устойчивости свиней к вирусу КЧС только по выживанию является недостаточно'?! с точки зрчния возможности отдаленных эпизоотологмчпсн,их пссллд -ств'41 при приживлении вирулентного вируса на кумуннсм фоне.

При разработке альтернативных контрольному заражению тестов контроля иммуногенной активности культуральной зирусвакшны ЖтВНйИВВиМ против КЧС использовали 70 поросят, иммунизированных различными дозами биопрепарата. Результаты опытов показали, что наиболее точн™ критерием оценки им -мунитета у свиней в тесте контрольного заражения является приживление вирулентного вируса, определяемое по наличию штовирусемии на 7 сутки после заражения. Контроль актив -ности вирусвакпины ЛК-ВНИИВВиМ можно осуществлять при по -мощи альтернативных тестов: определение срока появления виремии вакшнного штаммаi/или определение титра поствак-шнальннх ВНАт на 14 сутки после иммунизации. Выявление виремки на 5 сутки и/или титр ВНАт 4 log2 ка 14 сутки после вакшнаши свидетельствовали о введении поросятам 1000 ИМД50 вакцинного вируса.

При выборе чувствительной тест-системы для постановки реакции нейтрализации в условиях практических лабораторий использовали 700 кроликов. Опыты показали высокую спет -фичность, воспроизводимость, методическую простоту "и практическую полезность метода опенки иммунитета против КЧС у свиней в реакши нейтрализации на кроликах.

2.2.3. Изучение колострального иммунитета против КЧС у поросят

Для выбора оптимального пути защиты поросят от КЧС и обоснования необходимости вакпинаши животных на пассивном иммунном фоне исследовали противояпизоотическую яффектив-кость колострального иммунитета у поросят от рождения до З-месячного гозраста.

Калостральный иммунитет против КЧС изучали ка 162 поросятах, полученных от свиноматок, вакцинированных за 14 суток - 36 месяцев до опороса и имеющих титр лоствакш-кальных ЗЬАт от 1:2 до 1:2Ь£0.

Результату опытов показали, что новорожденный попо -сенэг. в аервне 48 часов жизни потреблял в среднем 2iß мл молозива (5-570 мл1*. Анализ динамики титров ЗНАт в cvso -ротке могоэива и молока свиноматок в течение 2-х месяцев

после опороса показал наличие 3-х периодов с достоверным снижением уровня защитных антител: первый - 16-39-е часы (20-кратное уменьшение), второй - 5-8-е сутки (6-кратное уменьшение) и третий - 31-3?~е сутки после опороса (2-кратное снижение). Уровень колострального иммунитета 5-суточкых поросят находился в прямой зависимости от специфического иммунниго статус я свиноматок и составлял 20-25$ от уровня ВНАт в молозиве первых часов опороса или 100-200% от уровня ВНАт в сыворотке крови лактирукших свиноматок. У 14$ не -следованных поросят в возрасте 5-15 суток, несмотря на высокий уровень (1:256-1:1280) ВНАт в молозиве и достаточное его потребление, колостралькые антитела выявляли в низких титрах (0-1:8).- Титры ВНАт у остальных поросят внутри одного помета варьировал з пределах 2 lag2 .

Регрессионный анализ экспериментальных данных по динамике титров .-солостральннх ВНАт в крови поросят на протяжении первых 3-х месяцев их газни чозволил определить период полураспада пассивно приобретенных антител (Т). Б первые 1,5 месяца яизта.Т43,7 суток, а затем он увеличи -еался до 19,3 суток. Анализ уровня колостральных ЕНАт в крови поросят с учетом величины критического защитного титра в 4 iog2 » позволил обнаружить 2 периода риска при -живления вирулентного вируса КЧС на иммунном фоне развития болезни у поросят-сосунов: первый - до 3-х суток после рождения, второй - с 30-40-суточного возраста, т.е. эффективность пассивной защиты от КЧС-инфекпии у поросят определяется постоянно изменяющейся (в первые 2 дня газни -нарастающей, а затем прогрессивно убывакгсеЯ) величиной титров колостральных ВНАт в их крови.

В опытах с контрольна заражением установлено, '*то тз первые 2-е суток после дудения поросята били восприимчив;: к вирулентному вирусу КЧС независимо от метода засз.ген;'.я. Процент защита таких поросят от гибели составил 25-27?, а от клинического проявления - 0-33i. Однако с 3-х суток показатели возрастали до 100^..ч 75-80%, ссотз-зтгтзггннз. Поз.арное заражение поросят через 2 месяца полазал: ст"ут-

I7

ствие у них как колострального, так к постинфехционного иммунитета. С 35-чЮ-суточного возраста все инфицированные поросята переболевajr/ атипичной КЧС, однако наличие низких титров ВНАт способствовало выживанию Ь3%> животных, С 70--SQ-суточного возраста все зараженные поросята были не только полностью восприимчивы к ■вирулентному вирусу, но и погибали с признаками усиления КЧС-инфекши. Отягощение болезни характеризовалось коротким инкубационным периодом, ускорением гибели на 2-3 суток, резко выраженной клинической и патоморфологической картиной болезни, высоким накоплением (до 6 lg 1%/г) вируса в органах иммунной системы.

Результаты опытов по поиску основных клеток-мишеней для репродукции вируса КЧС in vitro -и in vivo показали, что пермиссивность культуры НС к вирусу КЧС обусловлена макрофагами, так как пик чувствительности,культуры клеток совладает по срокам с максимумом фагоцитарной и секреторный активности макрофагов, составляющих с 5 суток культивирования основную часть (до 10055) клеток пристеночной культуры 1С. В опытах in vivo ведущая роль инфицированных макрофагов в патогенезе КЧС-инфекши подтверждается характеристиками вирекии и уровнем накопления вируса so внутренних органах зараженных свиней, ингибишей фагоцитарной функции инфицированных макрофагов крови, феноменами анти-телозависимого и лродигиозан-олосредованного усиления КЧС-инфекши, электронномикроскопическим обнаружением вкрионов и -фабрик их сборки в вакуолизировакной цитоплазме исключительно клеток СМФ, деструкцией лимфоиднкх и эпителиальных клеток вокруг активированных макрофагов в органах иммунной системы зараженных животных.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о ток, что вакцинация свиноматок против КЧС с целью ссзда -ккя колострального иммунитета у их потомства является недостаточной-мерой для надежной защиты поросят-в эпизоотическом очаге.

2.2.4. Изыскание способа иммунопрофилактики КЧС

у поросят, полученных от иммунных свиноматок

Возможность преодоления иммуносупрессии опосредованной колостральными В11Ат у вакцинированных против КЧС поросят определяли по двум направлениям: путем. создания защитного масляного дзпо вирусвакпины в обычной прививной дозе и путем повышения прививной дозы с пелъю достигнуть необходимого уровня инфицированных клеток-мишеней в организме жи. -sotho4"'}. Результаты опытов показали, что применение эмульгированной культуральной вирусв¿кгиньг из шт. пЛК-БИ2ШВ;йа*т создает напряженный иммунитет против КЧС только у поросят, полученных, от иммунных свиноматок.

Б предварительных опытах на культуре лС определили условия, при которых происходит полная или частичная нейтрализация определенных доз вакцинного и вирулентного ви -руса КЧС е- свиных макрофагах как модели клеток-мишеней организма при наличии колостральных ВйАт. В реакции серо -зашиты культуры макрофагов крови свиней установлено, что при инокуляши вируса КЧС в количестве VlíO-ütiíO ККИД^/ Юь кл происходит его полная нейтрализация при титрах шАтМ:12В (штамм "ЛК-БШИВВиМ") и 51:0 (шт. "Ши-Нынь"). При более низких количествах антител наблюдали снижение репроду-кции вируса в 10-100 раз. Репродукция вируса достигала максимума при субэффективных количествах ЬпАт, которые выявлялись в реакции антителозазисимого усиления КЧС--инфекцки в культуре ЛС.

В опытах на ICO поросятах отработали оптимальную схему внутримышечной иммунизации поросят культуральноЛ вирусвакшноЯ JK-E-ilfií&bali против IC4C в зависимости от величины привив.гой дозп "акиинм, кратности прививок, воз -растя поросят к моменту вакцинации, а так»е уровня -

рально о иммунитета свиноматок. Эффективность вакткагии поросят оценивали по динамике титров сывороточных ¿ÜAr и

результатах! кснтролиного заражения. Исследоэя пзхяглли, f *

что - или 2-кратная закганация обычными дозами б;:русл (ó32-c320 K.v^q/2 мл" оказалась недостат -чно эффективноЯ,

так как индуцировала устойчивость к гибели у 29-13% привитых поросят. Однократная иммунизация повышенной в 20 раз дозой вирусвакшны (60200 №4^/2 млУ защищала поросят от гибели в 91-100% случаев. Однако у 50? поросят наблюдали после контрольного заражения виремию и достоверный прирост ВНАт, что свидетельствовало о приживлении Вирулентного вируса при титрах поствакшнальных антител менее 4 log2 . Наиболее эффективной (94-lOOiS залдота от .КЧС) схемой могу -низаши поросят, независимо от уровня колостральккх ВНАт к моменту вакцинации, оказалась однократная прививка вакцины в повышенной дозе поросятам в течение первых б часов после рождения или начиная с месячного возраста, а также двукратная прививка поросят-сосуков от I до 30-суточного возраста.

При использовании оптимальной дозы (С3200 11m^q/2 мл^ культуральной вирусвакцины Ж-ВКИИВВиМ против КЧС .для лопосят, полученных от иммунных свиноматок, поствакпкналь-ный иммунитет формируется к G суткам после вакпинатаи {С7% защиты) и продолжается не менее 6 месяцев (срок наблюде -шш). Исследование динамики уровней БНАт з крови :-акцини-рованных и контрольных поросят показало, что повышение дозы вирусБ&кгины снижает титр колостральных ВНАт в пределах I iog2 и не оказывает отрицательного влияния на устойчивость таких поросят'к вирулентному вирусу КЧС.

оа период 3-месячного наблюдения поросята, иммунизированные вирусвакшной JiK-ВНШЬЬиМ в дозе 63200 ИмД^/2 мл, превышающей ранее рекомендованную наставлением в 20 раз, не проявили каких-либо видимых клинических отклонений от нормы. Масса поросят в 10,20,30-суточном возрасте и их выжива'мость до 3-месячного возраста (9L%) были в пределах физиологической нормы.

Способ иммунопрофилактики КЧС у поросят, полученных от иммунных свинчаток, испытан в 24 г не. свинокомплексе колхоза им. Ь Марта Волгоградской области и в Ь4 тыс. евино -комплексе Армянской ССР на общем поголовье 40уЬЬ. Эффек -тивность мероприятий пз ликвпдагаи КЧС составила Ы,4-УЬ,2% гнашт;.: вакцинированных тиботнкх.

Экономический эффект составил ЗЬ,9-с2,7 рублей на рубль затрат на вакшнашю, что в 12-19 раз больше по сравнении с применением ранее рекомендованных схем иммунизации поросят против КЧС.

2.2.5. Изыскание средств повышения имыунопрофилак-тичеокой эффективности вакцины из штамма "М-ВнШВшМ" против КЧС

В опытах по моделированию взаимодействия вируса КЧС и макроорганизма в культуре свинье макрофагов показано, что под действием лейкоцитарного интерферона или митогенов (¿ГА, Л1С) достоверно снижалась чувствительность клеток-мишеней и репродукция вируса на 1,0-1,51е ЖИДвд/ХО^ кл. Обработка чувствительных к вакцинному вирусу КЧС клеток-мишеней антибиотиками в нетдаотоксических концентрациях уменьшала, ре проекцию вируса в 30-10000 раз по сравнению с контролем. Результаты опытов показали, что обработка . макрофагов крови свиньи иммуномоцуляторами (левомизолом и продигиозаном) или субэффективной дозой (0,3 ВНЕ) ВНАт достоверно повышало их чувствительность к вакцинному вирусу КЧС на 1,0-1,51^ ККВДэд/мл.

Б опытах на поросятах, имеющих колостраяьные БНАт, установлено, что введение продигиозана до и после вакци -наши поросят пг„> гив КЧС усиливает выработку поствакга -нальных сзНАт. Иммуностимуляция поросят, иммунизированных субэффективной дозой (0,3 Им/^у) вир^свакпинч лК-ЬНИИББпУ против КЧС, способствовала увеличению их выживаемости на 7Ь% по сравнению с нес табулированными контрольно-запаленными животными.

Исследования показали, что срок хранения при 2-*°С нативной матровой расплодки вируса не должен превышать 3-х м -:яиеэ, сухой когаерческой вкр;,свахцинк - с месягеа. По истечении указанных сроков хранения сухой вирусзактант отмечалось существенное снижение ее иммуногенной актов -ности на 67,7%. Установлено, что вакцинный вирус КЧС, штамм "Ж-ВНИИВВиМ" быстро репродуцируется яри о7°С а монослое клеток Т5!.

В опытах с максимальной множественностью ин^екши (1-10 ККИД^д/кл) достоверно установлено, что одиночный никл его репродукции состглил 10-11 часов без учета предшествующей 2-х часовой адсорбции. В зависимости от множественности инфекции на 1-9 сутки после заражения процент инфицированных клеток достигает 98% от их общего количества. В среднем одна инфицированная клетка ТЯ продуцирует вирус в количестве 20-30 КНИДзд, каждая из которых соответствует минимальной иммунизирущей дозе свиней.

Результаты опытов по изучению динамики накопления вируса в культуре клеток ТЯ показали, что лишь 0,1% инфекционных вирионов находится во внеклеточной среде, а 99,9% - связана с клетками, в которых титр вируса достигает 9

ту С

ККИДэд на каждые 10 4 клеток. Установлено, что оптимальное время стационарного культивирования загаженного монослоя клеток ТЯ без сиены питательной среды для получения максимального (6,8 ККИД^/мл) урожая вакцинного вируса зависит от множественности инфекции и колеблется от I до 9 суток. Другой возможностью повышения урожая вируса явилось применение роллерной технологии культивирования, позволявшая получать титр вируса до 7,8 ККИД^/мл.

В опытах по изучению устойчивости внеклеточного вируса к физико-химическим факторам установлено, что его инфекционная активность снижается на 90% при изменении пН среды на 1,0 или при воздействии ^=37°С в течение суток.

Предложенные методы получения вакцинного вируса в ■ титрах порядка 8-9 Х& ККЩ^д и его полной инактивации химиопрепаратом А-24 создали предпосылки для разработки концентрированной культуральной инактивированной вакцины против КЧС из вакцинного штамма "Ж-БНИИБВиМ". Результаты опытов на свиньях показали, что у 80-100% животных однократное введение экспериментальных серий нативной инактивированной вакцины индушрует устойчивость к вирулентному вирусу на 14-21 сутки после прививки.

3. ВЫВОДЫ

1. Разработанный способ обнаружения, идентификации и титрования вируса КЧС а.культурах клеток, аналогичен по чувствительности биопробэ на естествепно-восприимчивых животных и позволяет дифференцировать штаммы вируса по вирулентности. Макрофаги свиней являются основными клетками-мишенями для репродукции вируса КЧС и источником цитопати-ческк': эффектов как in vitro , так и in vi-ro .

2. Иммуногенная активность культуральной вирусвакцины JiK-BjikvlBBHM против КЧС оценивается по срокам выявления виремии вакцинного штамма и уровню сывороточных вирусней-трализующих антител у свиней после введения вакцины, а также - по гипертермической реакции у вакцинированных кроликов после их контрольного заражения лалинизированным вирусом. Методы взаимозаменяемы и не требуют вирулентного вируса КЧС для контрольного заражения.

3. Уровень накопления вакцинного штамма "Ж-ЬтШБЬиМ" вируса КЧС з культуре клеток тестикулярной ткани ягнят находится в прямой зависимости от множественности инфекции, способа и сроков культивирования клеток и вируса. Роллер-ная технология культивирования инфицированных вирусом КчС клеток ТЯ позвол, jt получать вирусное сырье с титром ?,IB+0,32lg ЫШД^/мл.

4. Лимиопрепарат А.-24 в концентрации 500 мкг/мл полностью инактивирует 9,0 lg КЮУзд/мл вакцинного штамма "JiK-bliili'tobiiM" вируса ¡СЧС, что позволяет получать лабора -торные образцу кj»центрированной к, льтурально.1 инакт-*ви -рованной вакцини против КЧС. Пнакг;:в::розаннь"Л вакцинны.! препарат после однократного внутримышечного звс-дения индущ.рует формирование защитных титров зирусн-зйтра^иэ^в-ащх антител у bO-i.00,« поросят.

5. l'iuujHOMOÄyjMTop »¡родигиозак в дозе I мкг/кг при двукратном внутримышечном введении поросят, привитых культуральной вирусвакциной ЛК-ВКШВВиМ против КЧС, индуцирует усиление выработки поствакцинальных вируснейтрализую-пшх антител и способствует увеличению устойчивости животных к вирулентному вирусу.

6. Препараты для специфической профилактики котбакте-риоза (бификол и колипротектан ВИЭВ) вне зависимости от сроков их введения не влияют на формирование иммунитета у новорожденных поросят, перорально вакцинированных против КЧС.

7. Колостральные вируснейтрализукщие антитела у рожденных иммунными свиноматками поросят не всегда приест -ствj'ют в крови в количестве ( > 4 iog2 ); достаточном для создания напряженного иммунитета против КЧС, а при титрах-менее I log2 такие антитела обусловливают феномен усиления инфекции.

6. Разработанный способ иммунопрофилактики КЧС у поросят обеспечивает 94-100%-ную защиту от болезни вне ■ зависимости от ¿ровня колостральных в иру с не й тр али з у гад их антител. Способ заключается во внутримышечном введении повышенной в 20 раз дозы культуральной вирусвакцины ЛК--ВНИИВВиМ поросятам с месячного возраста - однократно и до ЗО-суточного возраста - двукратно с интервалом 20-25 суток. Оптимальная прививная доза содержит ьЗ200 ИмД^/2 мл.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

па основании результатов исследований предложены:

1. Эффективный способ вакпинаши поросят, рожденных иммунными свиноматками, против КЧС независимо от ¿-ровня колостральных вируснейтрализутаих антител к моменту вак -пинацш:.

2. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и титрованию вируса классической чум; свиней в культуре лейкоцитов крови пьинеЗ--доноров, утверкденные-директором b.-jliibbi'." ifc.Go.oo.

3. Методические рекомендации по опенке иммунитета у свиней против классической чумы в реакции нейтрализации на кроликах, утвержденные директором БНИИВВиМ II.10.86.

4. Усовершенствованная технология производства культу-ральной вирусвакшны Ж-ВНИИВБиМ против КЧС, позволявшая получать лиофилизирозанный биопрепарат с титром не менее 10Ь ИмДвд/мл.

Е Одновременная пероряльная иммунизация новорожденных поросят против КЧС и колибантери'оза.

6. При из-отзялении кулътуральной инактивированной вакцины против КЧС рекомендуем использовать вакцинный вирус, штамм "ЛК-ВНИИБВиМ", и химиопрепарат А.-24.

7. Для сохранения иммуногенной активности коммерческой вирусвакшнм Ж-БНЖЗЗиМ против КЧС рекомендуем сократить срок ее хранения до 6 месяцев.

8. Для контроля' иммуногенной активное™ культуральней вирус вакцины Ж-ВНИИЬБиУ против КЧС рекомендуем использовать альтернативные контрольному заражению тесты оценки: определение срока появления виремия вакцинного штамма и титров поствакцинальных вируснейтрализувзих антител.

Ь. СПИСОК РА^иТ, ОПУБЛИКОьАЛНлХ ПО ТИБ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чермашениев Б.И. .Попов zi.il. Динамика колосгрального иммунитета против классической чуки у "Одсос;ичх поросят // Бопр. вет. яирусод., «/и'-ерэ-биол. и эпизоотол.: Тез. докл. конф. БИЫБВиМ.- Поксов, 1965.- С. Ь2-85.

2. Г» о п о в i3.il., Ч о р м т -п п н п е в Ь.'Л. Коррел <ия уровня защитных ^нти^-^л " нчпряжекног'тьы иму;-нит®та свиней против кла^снч^скоП чумч // Бтнч злт. ч-.г-русол., микробиол. .. •'г:;;опотол.: Таз. дочл. пч!. Ы^-БиМ. -Покров, 1985.- С. 80-82.

3. Чермааентзев В. И., Попов Б.И., Морозов Г.Н. Влияние препаратов для специфической профилактики колибактериоза на .иммунный ответ новорожденных поросят, иммунизируемы* перорально против классической чумы // Вопр. вет. - вирусол., микробиол. и -пизоотол.: Тез. докл. конф. ВНИИВБиМ.- Покров, 1985.- С. 85-87.

4..Чермашенц-ев В.К., П о п о в В.И., К у та н и р А.Т., Колостральный иммунитет поросят и е^о эффективность в условиях экспериментальной классической чумы свиней // Акт. проблемы зет. вирусол. и микробиол.: Тез. докл. конф. молодых ученых ВНИЯИ и ВНИИВВиМ,- Владимир, 1987.- С. 22-24.

5. Чермашеннев В.И., К у ш н и р А.Т., Попов В.И. Эффективность вирусвакшнн ЛК-ВНШББиМ против классической чумы свиней для поросят-сосунов // Акт. проблемы вет. вирусол. и микробиол.: Тез. докл. конф. молодых ученых ШША и ВНИИВВиМ.-.Владимтф, 1987.- С. 24 26.

£. Чермашенцев Б.И., Сафонов Т. А., Рудобельский Э..В. Современные представления о патогенезе классической чумы свиней // Вотгр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол.: Тез. докл. науч. конф. ВНИИВВиМ.-Покров, 1990.- С. 50-55:

7. Чормашечцев ¿.И. .Чермашенце-з а H.A., S у е в В.В., В и т и н а С.А., К у р н ос о в А.Н. Исследование некоторых культур клеток по фактору пестивирусной контаминации и их чувствительности к вирусу классическо" чумы свиней // Вопр. вет. вирусол., мгкробис... и зпизоотол.: Тез. дотсл. науч. конф. БНЖВВиМ. -Покров, IS90.- С. 55 57.

Ь. Ч-5'p г.' а tü е к п е з E.H., Сафонов Г.А., Р у д о б е л ь с к и Vi Э.Б. Р1лр.ссичес:<яя чумя с-виней: патогенез и перспективы патогенетической терапии летально--инфицированных тивотных // Ьогр. вет. вирусол., микробиол. и • зпизоотол.: Тез. докл. науч. конф. ЬНИИВБиУ. -Покиов, 19ЭЭ.— С. 92-95.

9. Чермашениев В.И., С а ф о н о' в Т.к., Дмитренко B.B., Р у д о б е ч ь с к и й Э.З. Влияние вируса классической чумы свиней на функциональную активность фагоцитоз в культуре клеток и организме свиней /7 Вогго. вет. вирусол., микробкол. и а-^тгоотол.: Тез. докл. науч. конф. ВНШВВиМ.- Покров, 1990,- С. 95-96.

10. Чэрмаиенцев В.И. £агогатярная активность лейкоцитов крови свиней: физиологические пределы я отк онения от нормы // Запр. вет. вирусол., кикробнол. и эпизоотол.: Тез. докл. науч. конф. ВНИИВБиМ.—Покров, 1990.- С. 97-96.

11. Чермашенпева H.A.. К у р н о с о в А.Н., Чермашенцев В.И. Изучение биологических свойств песткяируса-контаминанта культуры клеток ППЬГ-ОСб // Зоггр. вет. вирусол., мгкрсбиол. и эпизсотол.: Тез. докл. науч. конф. ВНШВВиМ.- Покров, 1990.- С. 130-132.

12. Чермашенцев В.И., Ч е с м я и г? н-

ц е э а H.A., Р у д о б е л ь с к и й Э.Б. Способ гепучения гцпери'ммунной сыворотки к зирусу классической чумт: свиней // Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эппзоотол.:

Тез. докл. науч. конф. ВНИНБВиМ. - Покров, 1990.- С. 166-109.

Заказ S 67 от 14.Ol.Sir тираа IC0

ротапринт ИВ'Д Витебскоблагропрона