Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Морфофункциональная характеристика яичников кобыл и совершенствование методов гормональной регуляции их половой функции

&"1 о: Г. С об' -—О и С О I

СЕСОЮЗНЫй НАУЧНО-ИССЛЕДО&^ЕЛЬСКИИ ВЕТЕРИНАРНБШ ИНСТИТУТ'ПАТОЛОГИИ, ФАРМАКОЛОГИИ Й ТЕРАПИИ

На правах рукоггиси

ПОДВАЛЮК Дмитрий Васильевич

МОРФОФУНКЦЙОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЯИЧНИКОВ КОБЫЛ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ГОРМОНАЛЬНОЙ РЕГУЛЯЦИИ ИХ ПОЛОВОЙ ФУНКЦИИ

16,00.07 — акушерство и искусственное осеменение

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ВОРОНЕЖ

1992

Работа выполнена в лаборатории патологии воспроизводства крупного рогатого окота Всесоюзного научно-лсследова-тельского ветеринар,ного института патологии, фармакологии и терапии.

Научный руководитель ■— доктор ветеринарных наук» профессор Черемисинов Г. А.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Нежданов А. Г.,

доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов С. М.

Ведущая организация — Санкт-Петербургский ветеринарный институт.

Защита состоится 1992 г. и о час.

'на заседании специализированного совета Д020.65.01. при Всесоюзном научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии (394043, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6).

С диссертацией 'можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан

¿г » 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Слободяник В. И.

; I. седя харлктьрпсшса работы

„ !

угзцин ! Актуальность теш. Ь решении вопроса обеспечения населения продовольствием важное место должно принадлежать коневодству, так как себестоимость I ц товарного конского мпса в 2 раза ниже, чем мяса крупного рогатого скота и овец. Наряду с этим лошади используются в работе, спорте и биологической промышленности. Особенное место в настоящее время отводится коневодству в связи с созданием фермерских хозяйств.

Однако резервы и возмсясности отрасли используются недостаточно. И в первую очередь большой ущерб коневодству продолжают наносить нарушения воспроизводительной способности.

Среди патологии половых органов значительное место занимают дисфункции яичников кобыл, которые приводят к недо -получению в конных заводам более 40 яеребят на 100 конема -ток.

Вместе с тем до настоящего времени недостаточно изучено восстановление плодовитости при дисфункциях яичников кобыл с применением биолргически активных и гормональных средств. Именно поэтому изучение морфофункциснальных особенностей яичников кобыл, патогенеза их функциональных нарушений и разработка методов регуляции половой функции представляет научный и практический интерес для современного коневодства.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение сезонных особенностей половой функции,мор-фофункциональной характеристики яичников, патогенеза их функциональных нарушений и на основании этого разработка показаний применения отечественных простаглаццинов Ф-2альг, фа (эстуфалана и клаграпрозтина) и гонадотропина СЖК для синхронизации половой функции,и терапии дисфункций яичников кобыл.

В связи с этим на разрешение были .постаЕ?'.\м! следующие задачи:

1. Изучить особенности морфофункцнонэльных изменений в яичниках кобыл в различные стадии полового цикла, сроки беременности, сезоны года и при некоторых их нарушениях.

2. Вскрыть патогенез дисфункций яичников кобыл.

3. Изучить влияние эстуфалана и клатрапростина на генеративную и эндокринную функцию яичников KoÖbMj и установить их оптимальные дозы.

4. Разработать методигу применения препаратов простаг-лаццина ф-2альфа и гонадотропных гормонов для синхронизации половой функции,и терапии дисфункций яичников кобыл.

Научная новизна. Раскрыты закономерности гамето-фолли-куло- и лютеогенега в зависимости от сезона года и состоя -ния половой функции, вскрыт патогенез дисфункций яичников кобыл, определены оптимальные дозы и показания применения отечественных простаноедов для регуляций половой функции;и терапии дисфункции половых желез, а также предложена комплексная их терапия путем сочетанного применения отечествен-, ных простаноедов с гонадотропином СШК.

Практическая значимость. Практическая значимость работы заключается в разработке методики применения отечественных простагландинов Ф-2альфа и в сочетании с гонадотропином СЖК для синхронизации половой функции, и терапии функциональных нарушений яичников кобыл.

Реализация результатов исследований. Материалы исследований вошли в "Наставление по применению эстуфалана в животноводстве" и в "Наставление по применению клатрапростина в животноводстве", утвереденные ЛУБ МСХ РФ 31 марта 1992 г.

Публикация. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на конференции молодых ученых "Новые методы диагностики,способы профилактики и лечения незаразных болезней животных" (Воронеж,1990) и на научно-практической конференции "Биотехнология и воспроизводство в животноводстве" (Горки,1991).

Обгем и структура диссертации. Диссертация изложена на 178 страницах машинописного текста, имеет 15 таблиц, 19 ри-

оуякоь ¡1 сч^сит оп пведений, созови дмериту!'!, мати^иьиюй и петодов исследования, результатов собственна*: исследований, выводов, практических предложений и списка литературы, включающего 245 источников, в том числе. ВО отечественных и 155 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЁ&ОШШ

Исследования проведены в лабораториях патологии воспроизводства крупного рогатого скота и патоэццокринологии Всесоюзного НИШ патологии, фармакологии и терапии, а также в раде хозяйств и конных заводов Воронежской области на кобылах орловской, русской рысистой пород и беспородных живот -ных в возрасте 5-16 лет, средней и вышесредней упитанности.

Для диагностики функционального состояния половой системы использовали клинические, морфологические, гистологи -ческие и гормональные методы исследований.

Для изучения морфофункциснальных изменений в яичниках в различные стадии полового цикла убито 5 кобыл в период половой охоты, 5 на 2-5 дни и 5 на 7-12 дни после ее окончания. Морфофункциональные изменения в гонадах в различные сроки беременности изучались от животных на I, 2, 3, 4, 5, 7 месяцах от трех кобыл в каждом случае и на б месяце жеребости от четырех. Морфофункциональные изменения в половых железах в различные сезоны года изучены на 15 кобылах в весенне-летние (март-июль) и на 16 - в осенне-зимние (ноябрь-декабрь) месяцы, а при их дисфункциях (перспатентные желтые тела, гипофункция, фолликулярные и лютеиноше кисты) - на 2-5 животных в каждом случае.. Всего в этих опытах находилось 88 кобыл.

На фоне изученных морфофункциональкых закономерностей в яичниках кобыл и раскрытия патогенеза их дисфункций проводили отработку оптимальных доз, показаний и противопоказаний применения отечественных НП£-2альфа (эстуфалана и клатрап-ростина). Одновременно разрабатывалась методика комплексной терапии дисфункций яичников кобыл путем сочетанного применения отечественных простаноицов с грэвогормоном. При этом в опытах находилось 106 кобыл.

В эксперименте, на фоне функционирующих желтых тел, отрабатывали /ю.чы эстуфалана и клатрапростина на ос коСылах.,

ч

из них 4В было подопытных и 8 контрольных. Эстуфалан применяли 24 кобылам в дозах I мл (250 мкг), 2 мл (500 ыкг) и 4 мл (I0C0 ыкг). Клатрапростин вводили такому же количеству животных в дозах I мл (50 мкг), 2 мл (100 мкг) и 4 мл (200 ыкг). Восемь кобыл служили контролем, им препарат не вводили. Для изучения ыорфофункциональных изменений в яичниках под влияниемм различных доз испытуемых препаратов производился выборочный убой животных.

В научно-производственных опытах по комплексному применению эстуфалана, клатрапростина и гравогормона находилось 50 кобыл, из них 40 подопытных и 10 контрольных. Препараты применяли на 6-8 день после овуляции, йри этом первой группе вводили эстуфалан в дозе 2 мл (500 мкг), второй - эстуфалан в дозе 2 мл (500 мкг) и гравогормон 1500 ы.е., третьей - клатрапростин в дозе 2 мл (100 мкг), четвертой -клатрапростин и граБогормон соответственно в дозах 2 мл (100 мкг) и 1500 м.е., а пятая группа кобыл служила контролем. В каждой группе находилось по 10 животных.

При изучении влияния клатрапростина на персистентные желтые тела яичникое кобыл в опыте находилось 17 животных, из них II подопытных и 6 контрольных. Подопытным кобылам вводили клатрапростин в дозе 2 мл (100 мкг).■

Опыты по определению терапевтической эффективности клатрапростина с гравогормоном при лютеиношх кистах проводили на 13 кобылах, из них 8 отнесены в опытную труппу, а 5 в контрольную. Клатрапростин и гравогормон вводили одновременно соответственно в дозах 2 мл (100 мкг) и I50C м.е.

В опыты по терапии гипофункции яичников кобил било включено 20 животных, которые были распределены на 3 группы. Первой группе, состоящей из 8 животных, вводили клатрапростин в дозе 2 ил (100 ыкг) и гравогормон в дозе 1500 м.е., второй, - состоящей из 8 кобыл, иньецировали один клатрапростин в дозе 2 мл (100 мкг), третья группа (5 кобыл) служила контролем.

Экстирпированные после убоя кобыл яичники подвергали макроскопическому и гистологическому исследованиям. При макроскопическом исследовании определяли их объем (методом

вытеснения жил,кости), размеры (длина, толщина и ширина),консистенцию, подсчитывали количество и величину фолликулов, а также количество, величину и цвет желтых тел. На срезах яичников, окрашенных гематоксилин-эозином, изучали гамето-фолли-куло- и лютеогенез, преобразование клеточных структур в процессе роста и созревания фолликулов, их овуляцию, формирование, функционирование и инволюцию желтых тел, структуру фолликулярных, лютеиноЕчх кист и персистентных желтых тел, а также выявляли закономерности облитсрационной и кистозной атрезии фолликулов.

В экспериментальных опытах по установлению оптимальных доз отечественных простаноццов и в научно-производственных опытах изучена в крови динамика прогестерона и эстрадиола-17бета до введения препаратов, а также через 24, 48 и 72 часа после их инъекции. Кроме того, изучено содержание половых гормонов у 3 кобыл с персистентными желтыми телами, у 3 кобыл с лютеиновыми кистами и у такого же количества жиеот-кых с гипофункцией яичников. Концентрацию стероидов в плазме крови определяли по методу Т.Л$о( 1975). Радиоактивность измеряли на жццкостно-сцинтилляционном счетчике " Яаскбеба. -1215".

Для определения охоты у кобыл проводили ручную пробу :керебцом-пробником подготовленным по методу М.А.Милованова и И.Г.Сильченко (1932). Стадии созревания фолликулов, наступление овуляции и жеребость определяли методом ректальной диагностики, предложенным X.И.Животковым (1952).

Использовали синтетические аналоги Г1ГФ-2альфа -эстуфа-лан - 17, 18, 19, 20 - тетранор-16 (М-хлорфенокси) (клопро-стенол) и клатрагростин, в состав которого входит клопрос-тенол, тритерпеновый глюкозид, диметилсульфоксед и фосфатный буфер, а также гравогормон, приготовленный в лаборатории патологии воспроизводства ЬНИВИПФиТ.

Всем подопытным животным ИГФ-2альфа вводили в верхнюю треть шеи, однократно, внутримышечно, а гравогормон - подкожно.

У животных определяли время наступления стадии возбуждения полового цикла, ее продолжительность, результаты оп-

лодотворения и получение приплода. Учитывались количество дней бесплодия и экономическая эффективность.

Полученный материал подвергали биометрической обработке по Е.К.МеркурьевоЙ (1964).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ССЮГЬШНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Морфофункцйонаяьная характеристика яичников кобыл в различные стадии полового цикла,сроки беременности, сезоны года и при некоторых их нарушениях

3.1.1. Морфофункциональные изменения в яичниках кобыл в различные стадии полового цикла

В отличие от друпрс вцдов сельскохозяйственных животных, в гонадах кобыл имеется овуляционная ямка длиной от I до 2,8 см и шириной от I до 1,9 см, расположенная на малой кривизне и покрытая зачатковым эпителием. Мозговое вещество состоит из одного, а в некоторых местах из двух рядов крупных кровеносных сосудов начинается и заканчивается границами овуляционной ямки, и покрывает совместно с серозной и мощной фиброзной оболочкой всю большую кривизну гонад. Корковое вещество, включающее в себя фолликулы, желтые и атре-тические тела, располагается внутри яичника и прилегает к овуляционной ямке в области малой кривизны.

Установлено, что в стадию возбуждения полового цикла в яичниках созревают 1-3 крупных фолликула от" 3,9 до 4,9 см в диаметре. При этом объем увеличивается' й ё среднем составляет на одно животное 7?,.90 — 10,50 с^3 при'размерах 6,8хЗ,9х хЗ,8 см. В стадию тормшейИн' полового цикла,- когда вдет процесс формирования желтого теЖ,- а фйляинулй подвергаются ат-резии, объем и размеры яичнйК0б: уИбгШшгШтся и соответственно составляют 50,30 - 5,84 ей3 И" 5,6x3,2x3,3 см. В стадию уравновешивания полового цикла, когда'крупные и среднего размера фолликулы редуцируются, об^ем и размеры яичников соответственно уменьшаются до 39,0 — 4,43 см3 и 3,7x3,0x3,0 см.

При гистолог:-,чссисм изучении яичников установлено,что из зачаткового эпителия наблюдается постоянная миграция крупных клеток, дифференциацией вокруг которых плоских меток завершается формирование примордиальных фолликулов.Этот процесс наблюдается постоянно и не зависит от стадий полове-го цикла. Созревание и овуляция фолликулов наблвдается на фоне инволюции желтых тел. Рассматривая особенности фоллпку-логенеза следует указать, что в основе этого процесса лежит как преобразование плоских клеток приморциальных фолликулов в фолликулярный эпителий, и этот процесс осуществляется под метаболическим влиянием яйцеклетки, так и формирование хорошо васкуляриэированной текальной ткани фолликулов.

В процессе васкуляризации и морфогенеза текальной ткани в фолликулярном эпителии усиливается пролиферация и гиперсекреция, обеспечивая развитие фолликулов. При этом яйцеклетка увеличивается в объеме и занимает центральное положение. Наличие многослойного эпителия с крупной яйцеклеткой характеризует собой развитие вторичного фолликула. При этом вокруг овоцита заканчивается дифференцировка эпителиальных клеток, получивших название лучистого венца. Между эпителиальными клетками и яйцеклеткой образуется прозрачная оболочка, которая обеспечивает трансформацию питательных веществ из гранулезы в яйцеклетку. С формированием хорошо васкуляриэированной текальной ткани фолликула активизируются про-лифератиЕНые процессы в гранулезе, которая формирует яйценосный бугорок и приобретает многорддную радиальную структуру с банальной мембраной, что характеризует собой формирование третичных фолликулов. При этом функция базальнэй мембраны сводится к трансформации питательных веществ из текального слоя б гранулезу, обеспечивая активизацию пролиферации и секрецию, что приводит к созревании крупных фолликулов.

В стадию возбуждения полового цикла в яичниках кобыл формируется 1-2, а иногда 3 крупных фолликула, из которых . овулирует, как правило, один, а остальные претерпевают ат-резию. Перед овуляцией фолликулярный эпителий редуцируется, тогда как в соединительнотканной оболочке (фолликула активи-

зируются сосудистая, ыорфогенная и секреторная реакции с образованием крупных тека-лютеиновых клеток. Вследствие развития гиперпластических и гипертрофических процессов в соединительнотканной оболочке, она увеличивается в объеме, а с наступлением овуляции вместе с кровеносными сосудами вдается в полость фолликула, образуя гафрирообразные впячивания. С разрывом кровеносных сосудов создается благоприятная трофическая среда для пролиферации клеток внутренней теки и их дифференциации в лютеоциты. При этом клетки от типичных соединительнотканных с удлиненными адрами преобразуются в лютей-новые с овальными и округлыми ядрами^и хорошо контурированной цитоплазмой.

В стадию торможения полового цикла завершается формирование желтого тела, функция которого усиливается в стадии уравновешивания. Ыто характеризуется увеличением объема ядер, вакуолизацией цитоплазмы, лизисом краевых ее участков и накоплением в межклеточных простанствах светлой субстанции.

При инеолюции желтых тел, которая установлена в конце стадии уравновешивания полового цикла, лютеиноше клетки приобретапт полигональную форму от веретенообразных, кубических до треугольных и плоских. При этом цитоплазма лютео-цитов подвергается лизису с формированием волокнистой структуры, а ядра - пикнозу. На фоне инволюции желтых тел,происходит рост и созревание фолликулов.

Следовательно, мезонхимше элементы яичников кобыл, также как и у других вццов сельскохозяйственных кивотшх, следует рассматривать как ткгжь выполняющую трофическую функцию, обеспечивая рост, созревание фолликулов и пластическую -формирование желтых тел.

3.1.2. Морфофункциональная характеристика яичников кобыл в различные сроки беременности

Характерной особенностью для яичников беременных кобыл, в отличие от других видов животных, является непродолжительное функционирование первичных желтых тел, сформированных в стадию возбуждения полового цикла и формирование новых,

вторичных, желтых тел в процессе беременности. Причем, первичные желтые тела имеют большие размеры (2-4 см в диаметре) и функционируют до 4-х месячной беременности, а затем претерпевают инволюиию. Ьторичные желтые тела имеют меньшие размеры (1-2 см в диаметре) и появляются в яичниках со 2-3 месяцев беременности, в период наиболее высокого гонацотрсп-ного фона в организме, и функционируют до б месяца беременности. В последующие сроки беременности желтые тела в гнчни-ках не определяются.

Рассматривая вопрос об изменении объема и размера яичников беременных животных, то наибольшие эти показатели наблюдаются в первые четыре месяца беременности и находятся в пределах соответственно 46,5 — 6,33 - 42,0 — 1,39 см3 и 5,4 х 3,4 х 3,6 и 4,6 х 2,5 х 2,7 см, что связано с функционированием первичных желтых тел, а также с ростом и созреванием крупных фолликулов, их овуляцией и формированием вторичных желтых тел. Во - второй половине беременности фолли-куло- и лютеогенная функция яичников снижается, а в связи с этим объем и размеры яичников соответственно уменьшаются до 35,6 - 2,03 см3 и 4,0 х 2,4 х 2,5 см.

Касаясь гамето- и фолликулогенной функции яичников, то следует отметить, что эти процессы в яичниках кобыл наблюдаются в течение всего срока беременности. Мелкие фолликулы в количестве 2-4 на разрезе каждого яичника определяются на протяжении всей беременности, тогда как крупные и среднего размера фолликулы преимущественно можно наблюдать в период наибольшего гонгу?^тройного фоня с организме (2-4 месяца беременности'), которые повергаются лютеннизашш или овуляции с формирог-знием лытеиношх структур. При этом в те калькой ткачи созрераю'цих фолликулов усиливается васкуляризаиия и активизируются пролифератипные процессы с формированием те-ка-лютеииот;: клеток. Лроппссы овуляпни или лютеиниэации фолликулов с формисороиием рторичных желтых тел беременности пмялогичиы описанным при фср-'ировании желтых тел полорого никла.

3.1.3. Морфофункциональная характеристика яичников

кобыл в различные сезоны года

Установлено, что функция яичников кобыл носит сезонный характер с активизацией в них фолликуло-'и лютеогенной функции в поздне-весенние и ранне-летние месяцы,и с депрессией этих процессов в осенне-зимний периоды. Это сопровоздаетея изменением объема и размера яичников, которые в весенне-летние месягр соответственно составляют 55,1 — 5,18 см3 и 5,4 х 3,3 х 3,3 см, а в период депрессии эти показатели сни- . жаются до 34,5 - 0,88 см3 и 4,2 х 2,4 х 2,6 см. Стабильным в яичниках во все сезоны года является проявление гаметоген-ной функции зачаткового эпителия и формирование первичных фолликулов. Дальнейшая судьба этих фолликулов зависит от мор-фогенной функции мезенхимных элементов, коркового вещества, которые активизируется в весенне-летние месяцы, обеспечивая рост, созревание фолликулов, их овуляцию й формирование желтых тел, тогда как с наступлением осеннего периода и в зим-' ние месяцы они приходят в-состояние гипоплазии, в связи с чем растущие фолликулы претерпевают атреэию и редукцию, что по-ведимому, связано с недостаточной секрецией Гн-РГ гипоталамусом. Поэтому в этот сезон корковое вещество яичника слабо васкуляризировано и представлено Клеточной структурой с наличием единичных мелких фолликулов (0,3-0,5 см в диаметре), при полном отсутствии лютеиновой ткани.

3.1.4. Морфофункциональные изменения в половых железах при задержании жёлтых тел, гипофункции и кистах яичников кобыл

- Установлено, что общим при дисфункциях яичников является сохранение гаметогенной функции зачаткового эпителия, формирование примордиальных фолликулов и их преобразование во вторичные и мелкие третичные фолликулы. Дальнейшая судьба фолликулов определяется морфогенной потенцией их текаль-ной ткани, дифференцирующейся из окружающей ткани коркового вещества гонад. Б частности, при функционирующее задержавшихся жёлтых телах полового цикла рост фолликулов продолжа-

ехся, однако по море их увеличения в текальной ткани развиваются литические процессы с формированием фиброзной структуры, а гранулеза с яйцеклеткой подвергаются дистрофии. Ьри прекращении функции желтого тела фолликулы созревают и подвергаются овуляции с проявлением других феноменов стадии возбуждения полового цикла.

Аналогичные процессы фолликуло- и лютеогенеза наблгда-ются и при лютеиновых кистах. При такой патологии яичников животные продолжительное время находятся в состоянии анафро-дизии. При этом объем яичников увеличивается в 2-4 раза, а кисты определяются в виде толстостенных, тугофлюктуирующих образований до 7 см в диаметре. На гистологических срезах стенки таких кист представлены гиперплас.тически и гипертрофически измененными клетками внутренней теки, аналогично лю-теоцитам желтых тел, при хорошо обеспеченной васкуляризации. .

Гипофункция яичников характеризуется уменьшением их объема до 33,6 - 1,22 см3 и размера до 4,3 х 2,5 х 2,6 см. На разрезе таких яичников просматриваются 1-3 мелких фолликула от 0,3 до 0,5 см в диаметре при полном отсутствии лютеиновой ткани. Такие животные находятся в состоянии анафродизии. На гистологических срезах ткань коркового вещества слабо васку-ляризирована и предстаглена клетками в состоянии гипоплазии. В таком же состоянии находится и текальная тханьвторичных и мелких третичных фолликулов. В последних гранулеза подвергается дистрофии и вместе с яйцеклеткой редуцируется. В связи с чем фолликулы прекращают дальнейшее развитие и подвергаются атрезии.

При фолликулярных киотах яичники увеличиваются в 1,5-2 раза по сравнению с гс'надшли б период стадии возбуждения полового цикла.В них пальпируются ¡рлюн-гуируигчт образования величиной до 5 см в диаметре. Ь зависимости от расположения и величины кист яичники изменит- конфигурации, приобретай бобовцпную, грушевипну) или бугрттув форму и '¡^ькгуирующую консистенцию. ни гззрсзе яичники преде-пайсы или единичными, преимущественно крупными кистами, или множественными мелкими склеро-киетозными образованиями.

Ьри тшфемании срезы из стенок фолликулярных кист характеризуются грвнулезой в состоянии гиперсекреции, Внутренний

слой теки имеет единичные овальные клетки, хорошую васкуляри-зацп:э и волокнистую структуру. Наружная оболочка стенки фолликулярной кисты находится в состоянии гипоплазии и сливается с окружающей тканью яичника. В дальнейшем гранулеоа приходит в состояние гипоплазии и редукции, а клетки соединительнотканной оболочки претерпевают фиброзное изменение. Вследствие этого нимфомания сменяется анафродизией. Следовательно,в основе патогенеза фолликулярных кист, как и при гипофункции яичников, лежит недостаточная морфогенная потенция соединительнотканных элементов коркового вещества яичников и текаль-ной ткани фолликулов.

Исходя из патогенеза дисфункций яичников, лечение животных с такой патологией должно быть направлено как на устранение функционирующих лютеиновых структур, так и активизацию функции мезенхимшх элементов коркового вещества гонад и те-кальных структур фолликулов.

3.2. Разработка показаний применения отечественных простггландинов Ф-2альфа для регуляции половой функции кобыл

• 3.2.1. Изыскание оптимальных доз и показаний применения эстуфалана и клатрапрсстина для регу -ляп.ии половой фу.шции кобыл

Установлено, что шрфофункционалыиле изменения в яичниках и динамика половых гормонов в крови кобыл и, следовательно, проявление фадюь.енов стадии воябуздения полового цикла зависят от вводимых дои исследуемых простпноидоь.

Динамика половых гормонов при введении различных доз эетуфалииа и клатрапроотина отражены в таблице I, из анализа которой следует, что наилучший внводмтошшй оффзкт ь келтих телах и падение уроь.ш прогестерона наблюдается под влиянием эстуфалана и клатрапрсстина введенных соотвс-тотьенно в доаах 500 и 100 |лкг. При этом в кро{ш возрастал уровень эстрццисла-]7с;ота и в течение 5 суток у всех подопытных животных наступила синхронная стадия возбуждения полового никла, при опло-дотвопкемости 93,7%. Под влиянием остуфалана и клатрапроети-

динамика половых гормонов в плазме крови кобыл под влиянием различных доз ПГ2?-2альфа

Группа ¡Кспытуе-живот- i 1лыэ пре- ных i пагаты i позa 'MI т ................>" ;11сследуе-j ¡i.bie roc:.;oj i к: 'i Г'' До введения ( После введения (часы)

препаратов ( \ 24 ! i 48 ! ! 72

I i с; 250 3,98+0,71 3,32+0', 47 3,06+0,85 2,85+0,61

14,25+2,96 17,52+3,37 19,66+3,59 20,43+5,01

I ,Ъ) 500 4,53+1,42 2,38+0,47 1,35+0,72 0,91+0,45

С 9,74+2,57 13,25+2,36 29,69+3,49 52,45+3,96х

2 ,'cUCCí ii 5,31+1,61 2,05+0,64 0,74+0,70 0,52+0,40

С 11,42+1,89 20,92+3,35 23,66+2,46 27,45+3,70х

ч i К; 50 li 7,15+1,01 5,25+1,29 4,78+1,34 2,4£нь0,78

ó 13,20+2,30 15,74+2,57 23,61+3,14 25,10+2,41

5 ГЛ" ICO ii 6,55+3,27 3,13+1,15 1,45+0,50 0,36+0,37

- 7,72+1,99 19,39+1,30 22,86+3,13 65,03+5,46х

с ,л; a 5,21+0,82 2,06+0,50 1,23+0,89 0,45+0,41

ü 10,53+1,34 23,12+4,66 39,54+5,46 42,05+5,94х

Примечание: I. X-P< 0,05-C ,01;

О. О-зотуфалан, К-клатрапростин;

С) ш ii-прогестерон нг/мл, &-эстрадиол-17бета пг/ыл

на, введенных соответственно в дозах 250 и 50 мкг, наблюдалось менее выраженное снижение в крови уровня прогестерона и незначительный подъем эстрадиола-Г7бета, в связи с чем синхронная стадия возбуждения полового цикла наступила у 50 и 62,5g подопытных животных при 100$ оплодотворяемости. Введение же эстуфалана и клатрапростина в дозах 1000 и 200 мкг вызвало резкое падение уровня прогестерона & крови при менее выраженном подъеме эстрадиола-Г7бета, что связано с развитием литических процессов в текальных клетках, а, следовательно, с угнетением фолликулогенной функции яичников, а потому эти дозы препаратов не могут быть рекомендованы. Также не могут рекомендованы эстуфалан и клатралростин в дозах 250 и 50 мкг, как не обеспечивающие должного лютеолитического эффекта.

Следовательно, оптимальными дозами эстуфалана и клатрапростина, вызывающими инволюцию желтых тел и полноценное проявление феноменов стадии возбуждения полового цикла, являются 500 и 100 мкг по АДВ соответственно.

3.2.2. Научно-производстве'нше опыты по комплексному применению эстуфалана, клатрапростина и гравогормона

Применение испытуемых препаратов на фоне функционирующих желтых тел обеспечило их синхронную инволюцию, падение уровня прогестерона в крови с последующей активизацией роста фолликулов, подъемом уровня эстрадиола-17бета (табл.2) и проявлением феноменов стадии возбуждения полового цикла.

Так, введение подопытным кобылам эстуфалана и дозе 500 мкг обеспечило проявление половой охо/ш в течение.5 дней опыта у 80^ животных, при оплодотворяемости 7ö}L Совместное же применение эстуфалана и гравогормона обеспечило более выраженное падение в крови содержания прогестерона и высокий подъем концентрации эстрад1;ола~17бета (табл.2), при LüUji проявлении половой охоты в течение 4 днуй и 7Q'/i их оплодотворяемости. Под влиянием одного клатрапростина половая охота в течение а дней опыта установлена у 9С$ животных, при оплодотворяемости 77,7%. Под влиянием же комплексного применения клатрапростина. и гравогормона наблкщалось более выраженное падение.уровня прогестерона и возрастание концентрации зстрадиола-17бета с

Динашка половых гормонов в плазме крови кобыл под влиянием комплексного применения простановдов и гравогормона

Группа ¡Испытуемые !Исследуе-! До ! После введения, (часы) живот- ¡препараты и!мые гормо! введения ! 1 1 ид ^ ных 'доза Тмкг) !ны { ' !_!__!

I О) 500 Д 5,81чр,64 3,27+1,20 2,46+1,27 1,25+0,56

Э 7,98+5,59 16,18+4,76 19,80+5,03 29,31+5,72

2 О) 500 П 4,33+1,87 ... 2,61+1,23 2,28+0,65 0,77+0,28

(?) 1500 Э 9,52+2,46 14,92+3,72 27,59+3,07 52,84+9,39

(К) 100 а '3,94+1,09 3,10+0,57 1,95+0,94- 1,18+0,42

э 12,4%3,53 16,32^2,25 27,83+10,71 40,12+6,45

4 (К) 100 а 5,58+2,10 2,06+1,97 1,62+0,71 0,60+0,59

(Г) 1500 • э 10,92+3,47 25,43+4,61 41,29+11,08 67,60+9,32

5 - п 5,43+2,25 5,68+1,72 6,14+1,69 8,23+2,45

э ' 11,24+3,88 . Л,01^,47 9,37+1,62 8,75+3,20

Примечание: I. Э-эстуфалан, К-клатрапростин, Г-гравогормон;

2. И-прогестерон,нг/мл, Э-эстрадиол-17бета пг/мл

проявлением половой охоты у всех подопытных кобыл через 3,5 дня при 80$ их оплодотворяемости.

Следовательно, под влиянием совместного применения гра-вогормона, эстуфалана или клатрапростина происходит более выраженная синхронная инволюция желтых тел, созревание и овуляция фолликулов с проявлениями других феноменов стадии возбуждения полового цикла и высокой оплодотворяемостью кобыл в сравнении с одними простаноедами. Поэтому методика комплексного применения простаноидов с гонадотропином заслуживает испытания при дисфункциях яичников кобыл.

3.3. Разработка показаний применения одних простаноидов и в комплексе с гравогормоном при дисфункциях яичников кобыл

3.3.1. Терапевтическая эффективность клатрапростина при персистентных желтых телах в яичниках кобыл

Четких клинических признаков наличия желтых тел в яичниках кобыл, находящихся в состоянии анафродизии, не установлено. Однако, один из яичников был увеличен в размерах, в сравнении с другим, имел плотную консистенцию и гладкую поверхность. Тогда как другой - уменьшен в размерах, в сравнении с нормой, и также характеризовался плотной консистенцией и гладкой поверхностью. Радиоиммунологическое исследование показало, что у данных животных концентрация прогестерона в крови (4,60 - 0,21 нг/мл) и эстрадиола-17бете (6,76 - 0,43 пг/ыл) свидетельствует о наличии в гонадах функционирующей лютеиновой ткани (задержавшихся желтых тел).

В результате применения клатрапростина в дозе 100 мкг, как правило, в меньшем по размерам яичнике установили рост и созревание фолликулов, при одновременном размягчении паренхим» большего яичника.

Обобщенные данные о терапевтической эффективности клатрапростина при персистентных телтнх хелах продето гюны в таблице 3. Из «¡»аягза которой еледугт. «то в ш>рг:.И месяц опыта проявили г.слсвук» охоту вес по-;о|0'-»нче :--:иг'. -п.'с, и:- кс-

юглпг оплодою^рхиззи а (72,7;0. Б контроле за этот же срок стадия возбуждения полового цшсла пыявлена у одной кобылы, которая о пл сд отворилась.

Ео втором месяце опыта оплодотворились остальные подопытные животные, а в контрольной группе, в течение третьего месяца, - одно (16,7/0 и в течение четвертого - 2 (33,3$). Причем, к кончу случного сезона, в контроле 2 кобылы (33,3%) остались бесплодными.

■ Экономическая эффективность лечения кобыл с персистент-¡ими желтыми телами составила ¿6,91 руб, на I руб. затрат.

3.3.2. Результаты опытов по комплексной терг.пии лютеиновых кист яичников кобыл

При пальпации гонад кобыл обнаружено, что в результате наличия плотных:, тугофлкжтуирующих, округлых образований достигающих 2-5 см (иногда 7 см) в диаметре они увеличены в размерах в 2-4 раза в сравнении с нормой. У этих животных концентрация прогестерона в крови составила 6,32 - 1,35 нг/мл, а эстрадиола-17бета - 7,53 — 1,34 пг/мл, что позволило предположить наличие в яичниках функционирующих лютеиновых кист.

Под влиянием введения клатралростина и гравогормона соответственно в дозах 100 мкг и 1500 м.е., как правило, в одном (без лютеиновых кист) яичнике происходит бурный рост "и созревание фолликулов. Вследствие чего увеличиваются размеры гонад и изменяется их форма от бобовидной до грушевидной или шишковидной. В яичниках же с лютейнотми киотами, на фоне уменьшения размеров последних, наблюдается размягчение паренхимы гонад.

Данные о проявлении стадии возбуждения полового цикла и оплодотворяемости :юбил в первый месяц опыта отракенч а таблице 3. Из анализа которой следует, что после сочетанного введения препаратов у всех подопытных живэтных восстановлена половая функция и 6 кобыл (75%) оплодотворилось, ь контрольной группе в течение' этого срока из 5 кобыл у о-х наступила стадия возбуждения полового никла. Из них оплодотворилась одна кобыла (2ОХ).

Во втором и третьем месяцах опыта в опытной группе оплодотворились две кобылы (25/3), а в контроле одна (£($) на втором и одна кобыла (20$) на четвертом месяцах. К концу опыта все подопытные животные были оплодотворены, тогда как в контроле две кобылы (40%) остались бесплодными.

Экономическая эффективность лечения кобыл с лютеиношми кистами составила 21,90 руб. на I руб. затрат.

3.3.3. Результаты опытов по применению комплексной терапии при гипофункции яичников кобыл

Яичники кобыл в состоянии анафродизии характеризуются уменьшенными размерами, плотной консистенцией и гладкой поверхностью. Радионммунологическое исследование крови на содержание прогестерона (0,92 - 0,33 нг/мл) и эстрадиола-^бета (4,44 — 0,47 пг/мл) показало глубокую депрессию гонад кобыл.

После инъекции клатрапростина и гравогормона соответственно в дозах 100 мкг и 1500 м.е.," в одном из яичников регистрировали рост и созревание фолликулов, что сопровождалось увеличением размера гонад, размягчением их паренхимы, изменением состояния их- поверхности от гладкой до бугристой и проявлением феноменов стадии возбуждения полового цикла.

Результаты опытов представлены в таблице 3, из анализа которой следует, что в первый месяц опыта половая охота установлена у всех подопытных кобыл. При этом оплодотворилось из восьми пять (62,5%) кобыл, В контроле из 5 животных у 2-х (40%) также выявили половую охоту, однако они оказались неоплод отворенными.

Во втором месяце опыта в опытной группе оплодотворились 2 (2Е%) кобылы, а в контроле I (20%). В третьем месяце оплодотворилась одна подопытная кобыла, тогда как в контроле 2 (40%). Причем в контроле, к концу случного сезона, 2 кобылы (40%) остались бесплодными.

Экономическая эффективность терапии кобыл с■гипофункцией яичников составляет 20,28 руб. на I руб. затрат.

Таблица 3

Данные о комплексной терапии дисфункций яичников кобыл

Опытная Контрольная

Дисфункции яичников Всего кобыл Препараты 1 {наступил постовой | цикл оплодотво рилось осталось бесплод- 1 ¡наступил по-¡ловой 1 цикл оплодотворилось осталось бесплодных

п 1 п| % п ! о; 1 ¡о П I % п ! п! а ! П1 /о п 1 % п ! о/ 1

Персистентные желтые тела 17 К П II 100 8 72,7 6 I 16,7 I 16,7 5 83,3

Лютеиновые кисты 13 к+г 8 8 100 6 75,0 - 5 3 60,0 I 20,0 4 80,0

Гипофункция 13 к+г 8 8 100 5 62,5 - 5 2 40 - - 5 100

Примечание: I. Продолжительность опыта 30 дней;

2. К-клатрапростин 100 ыкг, Г-гравогормон 1500 м.е.

еывди

1. В яичниках кобыл, независимо ох состояния половой функции и сезона года., из зачаткового эпителия овуляцион-ной ямки постоянно наблюдается гаметогенез о формированием примордиальных фолликулов я да .преобразованием во вторичные и третичные.

2. Рост и созревание половых .клеток происходит в результате дифференциации вокруг .них -меэенхимных элементов коркового -вещества и их преобразованием в фолликулярный эпителий

с последующим формированием .прозрачной оболочки и лучистого венца. Дальнейшие гамето-фолликуло- и лютеогенные процессы в яичниках обусловлены формированием базальной мембраны и хорошо васкуляризированной, пролиферативно активной текаль-ной тканью, выполняющей сначала трофическую функцию, обеспечивая созревание яйцеклетки-и фолликулов, а после их овуляции - пластическую, преобразуясь в желтые тела.

3. Созревание и овуляция фолликулов в яичниках кобыл наблюдается, как правило, в ранне-весенний и летний периоды, а также на 2-3 месяцах жеребости, что позволяет отнести этих животных к сезонно полициклическим.

4. Первичные желтые тела, образовавшиеся в стадию возбуждения полового цикла, находятся <в яичниках кобыл до 4-го месяца беременности, а вторичные -.сформированные за счет лютеинизации и овуляции фолликулов,, .рбнаруживаютсп до 5-6 месяцев жеребости. При отсутствии-беременности желтые тела ■ подвергаются инволюции и в среднем через 21 день наступает очередная стадия возбуждения полового-,цикла.

5. В основе дисфункции яичников-и.их:сезонной депрессии лежит изменение функционального состояния¡мезенхимных элементов коркового вещества гонад и .текальной -ткани фолликулов:

- при гипофункции яичниковтц*нх-сезонной депрессии ме-зенхимные элементы коркового вещее-тва -гонад и оболочек фолликулов находятся в состоянии-гипоплазии, а потому фолликулы не достиггют овулянионной зрелости и претерпевают атре-зиг;

?л

- г.рн фоллихуляр'ых кистах сначала активизируется рост ф-олликулов и повышается эстрогеншй фон в организма, что сопровождается явлением шафоиании. Продолжительная гиперфункция мезенхимшх элементов коркового вещества гонад и текаль-ной ткани фолликулов сменяется развитием в них фиброзных процессов и склеро-кистозными изменениями в яичниках, что приводит к анвфродизии кобыл;

- при персистеитных желтых"телах и Литвиновых кистах яичников морфогенная функция в текальной ткани фолликулов хотя и усиливается, однако из-за высокого прогестеронового фона и прогестероновой блокады они не овулируют,.а подвергаются лютеинизации с формированием тека-лютеиновой ткани, что приводит к длительной анафродизии животных.

6. Специфическое влияние ПГ$-2альфа на яичники кобыл проявляется в лютеолизе функционирующих лютеиновых струнтур желтых и атретических тел, тека-лютеиновых клеток согревающих фолликулов и интерстициальных клеток коркового вещества гонад. Действие гонадотропина сводится к усилению васкуляриза-ции и пролиферации структур коркового вещества и текальной ткани фолликулов, обеспечивая их рост и созревание с последующей их овуляцией и формированием желтых тел.

7. Лютеолитический эффект препаратов Г1ГФ-2альфа определяется вводимой дозой.. Применение эстуфалана и клатралрости-на соответственно в дозе 250 и 50 ыкг вызывает частичный лизис функционирующих желтых тел и незначительное снижение (на 28,4%) в крови уровня прогестерона; введение этих препаратов в дозе 500 и 100 мкг обеспечивает инволюцию желтых тел и снижение уровня прогестерона соответственно с 4,53 — 1,42 нг/мл до 0,91 i 0,45 нг/мл и с 6,55 — 3,27 нг/мл до 0,36 -0,37 нг/мл, активизацию роста и созревания фолликулов, их овуляцию с синхронным проявлением других феноменов стадии возбуждения полового цикла, а потому эти дозы 1ШЬ-2альфа следует признать оптимальными. Под влиянием эстуфалана и клатра-простина, введенных в дозах 1000 и 200 мкг, кроме шраженно-го лютеолиза лютеиновых структур желтых тел, литические процессы развиваются в интерстициальных клетках коркового веще-

етва гонад и тека-лютеиношх клетках созрсьаи'.цпх фолликулов, что приводит к проявлению аногуляторных половых циклов.

8. Применение эстуфалана и клатрапростина на фоне функционирующих желтых тел полового цикла соответственно в дозах 500 и 100 мкг обеспечивает 100$ синхронизацию половой функции в течение 2-5 суток и оплодотворяемость в синхронизированную половую охоту у 87,&/о и 100% кобыл.

9. Исходя из того, что под влиянием оптимальных доз препаратов ПР$-2альфа наряду с развитием инволюционных процессов в желтых телах, активизируется и фолликулогенная функция яичников, которая усиливается при одновременном введении го-надотропина СЖК, то заслуживает внимания комплексное приме -нение этих препаратов при дисфункциях яичников кобыл:

- введение клатрапростина в дозе 100 мкг и гравогормона в дозе 1500 м.е. кобылам с гипофункцией яичников обеспечило ЮСприход в охоту и оплодотворяемость 62,5% животных в первый месяц опыта;

- введение этих препаратов при лютеиновых кистах обеспечило 100% приход в охоту и оплодотворяемость 75% кобыл в первый месяц опыта;

- применение клатрапростина в дозе 100 мкг животным с персистентными желтыми телами обеспечило 100% приход в охоту и оплодотворяемость 72,7% животных в первкй месяц опыта.

10. Экономическая эффективность комплексной, терапии дисфункций яичников кобыл составляет от 20,28 до 36,91 руб. на I руб. затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ пгаДОВДМ

1. Для предотвращения бесплодия и синхронизации половой охоты кобылам следует вводить на 6-1I дни полового цикла эстуфалан или клатрапростин соответственно в дозах 5С0 и ICO мкг.

2. Для восстановления плодовитости кебнл при дисфункциях яичников (гипофункция, лютеиногае кисты и персистентные желтые тела) следует совместно применять гравэгормон в дозе 1,5 тыс. м.е. и эстуфалан или клатрапростин соотнественно в дозах 500 и 100 мкг.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Иодвалюк Д.В. Степень распространения бесплодия кобыл// Новые методы диагностики, способы профилактики и лечения незаразных болезней животных. Тез. докл. конф. молодых ученых 24 декабря 1990'. -'Воронеж, 1990. С. 35-36.

2. Подвалюк Д.В. Морфологическая характеристика яичников кобыл// Новые методы диагностики, способы профилактики

и лечения незаразных болезней животных. Тез. докл. конф. молодых ученых 24 декабря 1990. - Воронеж, 1990. С. 36-38.

• 3. Подвалюк Д.В., Черемисинов А.Г. Морфофункциональная характеристика яичников кобыл в зависимости от состояния половой функции и ее нарушений// Биотехнология и воспроизвод- . ство в животноводстве. Тез. докл. науч.-практ. конф. 27-28 июня 1991. - Горки, 1991. С. 68-69.

4. Подвалюк Д.В., Черемисинов А.Г. Разработка показаний применения отечественных простаглавдинов в коневодстве// Биотехнология и воспроизводство в животноводстве. Тез.докл. науч.-практ. конф. 27-28 июня 1991. - Горки, 1991. С.69-71.