Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Лечебно-профилактическая эффективность неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей при заболеваниях органов дыхания ягнят

КАЗАХСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт

На правах рукописи УДК 619:616. 2-350. 2:636. 3:615. ЗТЗ

0РАЗБЕК0ВА Алия Исагалиевна

ЛЕЧЕБИО-ПРОфИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НЕСПЕЦПФИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЛОШАДЕЙ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ ЯГНЯТ

16. 00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат

• диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Апматы - 1993

Работа выполнена в лаборатории по изучению болезней крупного рогатого скота Казахского научно-исследовательского ветеринарного института Казахской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник

Л. А АФАНАСЬЕВ

Официальные оппоненты: -

доктор биологических наук, профессор Г. М. ИВАНОВА

- кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник

Э. К СОЛОВЬЕВ

Ведущая организация

Санкт-Петербургский ветеринарный институт

Защита диссертации состоится " »>/ " 1993 г,

в 40 часов на заседании специализированного совета К О. 20. 80. 01 в Казахском научно-исследовательском ветеринарном институте по адресу: 460029, г. Алматк, проспект Райымбека, 223.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " ££ " г.

Ученый секретарь специализированного совета, ' доктор ветеринарных наук ХллЛЛ-^1 Б. ф. КЕРИШАНОВЛ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРНО ТИКА. РАБОТЫ

Актуальность теш. Болезни органов дыхания ягнят наносят-значительный экономический ущерб овцеводству Казахстана (отход животных составляет 40-42% от числа всех незаразных заболеваний).

Основной предрасполагающей причиной этих заболеваний является пониженная резистентность ягнят, обусловленная гипо- или агаммаглобулинемией, т.е. пониженное содержание или отсутствие гамма-глобулинов в крови. Это связано с недостатком поступления молозива .ягнятам шш нарушением усвоения колостралъных (моло-зивных) иммуноглобулинов (А,П.Простяков с соавт. 1961, 1983; I.Р.Коваленко, 1979; В.П.Урбан, И.Л.Найманов, 1984, 1985; Ю.И. 1шштин, Н.С.Мотузко, 1990; С.И.Плдщенко, В.Т.Сидорова, 1991).

В современной ветеринарии возрастает интерес к проблеме ювышения резистентности новорожденных кивотнкх за счет компен-:ации гало- и агаммаглобулинеши. В связи с этим применяют био-югическае активные вещества, среди которых особое место занижают препараты глобулин стой фракции белка сыворотки крови гни отнес. »

В последние годы для повышения резистентности ягнят пред-:ояен неспецифический иммуноглобулин из сыворотка крови овец.

Однако возможности получения этого препарата в-достаточен количества ограничены из-за трудоемкости взятая крови от 1вец.

Республика Казахстан располагает огрогшой сырьевой базой дя изготовления глобулиновых препаратов. Ежегодно на мясоксм-инатах республики убивают более 70 тыс.лошадей, кровь от кото-ых не является пищевой и не собирается для изготовления каких-

либо препаратов. Поэтому актуальным вопросом является разработка методов получения новых аффективных средств из сыворотки крови лошадей для лечения и профилактики заболеваний органов дыхания ягнят.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась разработка метода получения неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей и изучение профилактических и лечебных свойств препарата при болезнях органов дыхания ягнят.

Для решения поставленной цели определены следующие задачи:

1. Изучить естественную резистентность организма ягнят и установить зависимость ее от уровня иммуноглобулинов в сыворотке их крови.

2. Разработать метод получения неспецифического иммуноглобулина из сыворотки 1фови лошадей.

3. Определить возможность использования в качестве средства повышения резистентности организма ягнят препараты неспецифических иммуноглобулинов из сыворотки крови лошадей.

4. Разработать схему применения глобулинового препарата с профилактической и лечебной целью.

Научная новизна -работы. Впервые разработан метод получения неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей.

Установлено, что естественная резистентность ягнят зависит ОТ УРОВНЯ ИММуНОГЛОбуЛИНОВ В СЫВОрОТКе 1фОВИ, в связи с этим

рекомендовано применение с профилактической и лечебной целью неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей при болезнях органов дыхания ягнят. Получено свидетельство на "Способ получения иммуноглобулинов" "Ноу-Хау" за № 0027616 от 14 октября 1991 г.

Л тактическая значимость -работы. Материалы диссертационной

работы были использованы при составлении нормативно-технической документации на "Неспецифический иммуноглобулин из сыворотки крови лопадей".

Использование препарата для профилактики и лечения легочных болезней позволяет снизить.заболеваемость в 2,5 раза и летальность - в 1,9 раза.

На защиту выносятся:

1. Зависимость проявления болезней органов дыхания у ягнят от уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови.

2. Метод получения неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крова лошадей.

3. Профилактическая и лечебная эффективность данного препарата при болезнях органов дыхания ягнят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсувдены на семинар-совещании "Особенности овцеводства в горно-пастбикных условиях Казахстана", Алма-Ата, 1989 г., на Ученом Совете Казахского НИВИ, 1991 г. и на межлабораторном совещании сотрудников Казахского НИВИ, 1993 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи и юлучено свидетельство "Ноу-Хау" за ft 0027GI6 от 14 октября [991 г.

Об'ьем и структура диссертации. Диссертация изложена на :13 листах машинописного текста и вюшчает: введение, обзор ли-■ ературы, собственные исследования, заключение, выводы, иллюст-(ирована 21 таблицами и 2 рисунками. Список использованной лите->атуры состоит из 150 источников, в т.ч. иностранных - 15.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы исследований. Работа выполнена в тече-ие IS88-I9S0 гг. в лаборатории по изучению болезней молодняка

пра Казахском научно-исследовательском ветеринарном институте КазАСХН и в совхозе "Кызыл-Когамский" Павлодарской области.

Материалом исследований служили ягнята с первых дней казни до 240-дневного возраста. Всего в эксперименте использовано 19Р0 ягнят.

Для получения неспецифического иммуноглобулина кровь брали от здоровых убойных лошадей на мясоконсервном комбинате г.Алматы. Сыворотку получали методом отстоя и консервировали 5%-ной карболовой кислотой до конечной концентрации 0,5% или хлороформом из расчета ТОО мл на 10 л сыворотки.

В промессе опытов ежедневно проводили клинические обследования ягнят до 30-дневного возраста, учитывали заболеваемость, продолжительность болезни и отход животных.

Для профилактики болезней органов дыхания ягнятам вводили подкожно неспецифический иммуноглобулин из сыворотки 1фови лошадей в дозе I мд на кг массы животного, введение повторяли через 14 дней в той же дозе.

При изучении лечебной эффективности препарат вводили больным ягнятам в дозе 0,5 мл на кг массы животного двукратно с интервалом в 24 часа, если улучшения не наступало, то через 72 часа введение повторяли. Общее количество инъекций не превышало трех раз. Неспецифический иммуноглобулин вводили и в сочетании с антимикробными препаратами в различных формах (парентерально, интраназально и аэрозольно).

Проводили клинические, гематологические и биохимические исследования у здоровых и больных ягнят. В крови определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, фагоцитарную активность и фагоцитарное число. В сыворотке - общий белок, белковые фракции, лизоцимную активность, количество иммуноглобу-

линов по общепринятым методам. Уровень иммуноглобулинов определяли согласно методической рекомендации по определению уровня иммуноглобулинов в крови новорожденных (1985). В качестве микробной культуры при определении фагоцитарной активности использовали убитую при 70° в течение 30 мин. суточную двухмиллиардную культуру о лагсил (штамм 17).

Для определения качества неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей определяли количество иммуноглобулинов и остаточного полиэтиленглпколя (в %), проверяли рН, стерильность и безвредность препарата.

Математическую обработку опытов проводили по методу определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий (1978).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Зависимость естественной резистентности ягнят от уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови

Результаты наших исследований показывают, что у новорожденных ягнят до приема молозива отсутствует гамма-глобулиновая фракция белка, которая появляется через 4-6 часов после приема

молозива. Количество гамма-глобулиновой фракции в сыворотке кро-«

ви ягнят зависит от количества и качества молозива, а такге от физиологического состояния ягнят.

Анализ данных таблицы I свидетельствует о том, что у ягнят ' до приема молозива отсутствует гамма-глобулиновая фракция, которая появляется с получением молозива. Гипогамлаглобулинемия и гипопротешгемия отмечается у ягнят-сирот, физиологически незрелых, от мал иголочных а мастатных маток. При клиническом обследовании этой группы гивотных у них отмечена вялость и понижение аппетита. В сыворотке крови через 4-6 часов после приема молози-

ва у ягнят от маломолочных маток гамма-глобулиновая фракция составляла 14,4 г/л, а от молочных маток - 18,0 г/л.

Таблица I

Протеинограмма сыворотки крови новоровденных ягнят

Возраст

¡Общий !Альбу-!белок,!бумин, !в ! в '.г/л !г/л

I I

Глобулины, в г/л

-сл

■р

!Кол-во д/Р !иммуно-' ¡глобули-!на,в !г/л

При рождении до

приема молозива 57,65 34,7 17,5 5,45 - 1,51 .¿5

Через 4-6 час. после приема молозива Тот молочных маток) 70,5 36,8 10,2 5,5 18,0 1,09 >15

Через 4-6 час. после приема молозива Тот ягнят -сирот, мастит-ных и малсмолоч-

. них маток) 67,0 36,0 11,0 5,6 14,4 1,1 <15

При дальнейших исследованиях ягнята с гипогаммаглобулине-мией в большинстве случаев подвергались воздействию неблагоприятных факторов и болезнетворных микроорганизмов.

Из таблицы 2 видно, что у здоровых ягнят 5-6-месячного возраста содержание гамма-глобулиновой фракции на' 3,92 г/л выше чем у больных. У больных ягнят 7-8-месячного возраста гамма-.глобулиновая фракция на 7,1 г/л ниже, чем у здоровых. Количество иммуноглобулинов у больных ягнят в среднем по группе ниже 15 г/л, что указывает на гипогаммаглобулинемию.

Следовательно, гшогаммаглобулинемия у ягнят развивается при недостаточном поступлении молозива, зависит от его качества физиологического состояния ягнят. Резистентность таких животных понижена и это может явиться причиной заболевания ягнят бронхопневмонией.

Таблица 2

Протеиногракма сыворотки крови здоровых и больных бронхопневмонией ягнят (разного возраста)

Группа

Кол-во¡Воз-гол. !раст

!мес !в !в.

! !г/л !г/л

¡Общий!Альбу-! белок] мин,

Глобулины, в г/л ! Кол-во ¡иммуно-! 7 Г~ ! глобул., •й ! -Р ! 'У !в г/л

Здоровые 30 5-6 65,04 26,02 13,22 7,9 17,9 ? 15

Больные 30 5-6 59,31 24,97 13,36 7,0 13,98 <15

Здоровые 30 7-8 65,6 30,63 6,94 6,69 21,34 «

Больные 30 7-8 59,4 31,17 7,16 6,82 14,24 с 15

В результате проведенных нами исследований установлено, что у ягнят с гипогашаглобулинемией уровень фагоцитарной и лизоцим-ной активности по сравнению с ягнятами, у которых установлена нормогаммаглобулинемия - понижен. Наш установлена прямая зависимость естественной резистентности организма ягнят от уровня иммуноглобулинов в сыворотке кроЕИ.

Поэтому заболеваемость ягнят органами дыхания зависит от резистентности, которая в свою очередь обусловлена уровнем иммуноглобулинов. С целю ае повышения резистентности организма яг-н^т целесообразно вводить ям иммуноглобулины.

Совершенствование метода получения иммуноглобулинов пз сыворотки крови лошадей

Для получения иммуноглобулинового препарата высокой активности нами был усовершенствован метод осадцения и извлечения иммуноглобулинов из сыворотки крови лопадей ;с применением полиэти-ленгликоля.

Кровь брали от здоровых убойных лошадей на мяооко?лбштте р.Алматн в цилиндры Заводовского.

Отстоявшуюся сыворотку центрифугировали при 3000 об/мин -10т15 мин или Фильтровали через вятномарлевые фильтры. Консервировали в 5%-ным раствором карболовой кислоты до конечной концентрации 0,5%, либо хлороформом 100 мл на 10 л сыворотки.

Осаждение иммуноглобулинов осуществляли полиэтилетглико-лем (ПЭГ-115) при концентрации 6-14$ и рН 7,0-7,2.

Полученный осадок иммуноглобулинов при различных концентрациях ПЭГа растворяли в физиологическом растворе до концентрации общего белка 13-14/2 по рефрактометру, проверяли чистоту фракций белка, электрофорезом на бумаге. Эти данные представлены в таблице 3.

Таблица 3

Содержание фракций .белка в препарате, полученного при различной концентрации полиэтиленглякодя

ПЭГаГй ! 6 ! 7 ! 8 ! 9 I 10 ! 11 ! 12 ' 13 ! 14

Кол-во альбуминов,

в отн.£ 5,9 4,8 3,3 2,1 4,9 7,0 12,3 20,1 24,0

Кол-во ск -глобулинов, в отн.

% 4,9 4,6 3,6 3,1 4,1 5,6 10,8 12,3 13,1

Кол-во £ -глобулинов,

В отн.£ 12,2 10,8 7,8 5,8 8,0 10,1 9,8 10,2 11,2

Кол-во ц - глобулинов, _

в отн.% 77,0 79,8 86,3 89,0 83,0 76,7 67,1 57,4 51,7

Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что оптимальная концентрация ПЭГа, необходимая для осавдения иммуноглобулинов из сыворотки крови лошадей находится в пределах 8,5-9,5$. При этой концентрации можно получить наиболее чистые фракции бета+

+гамма-глобулина (94,1-94,8).

Из 455 литров крови лошадей путем отстоя нами получено 122 литра сыворотки.

Процесс производства иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей состоит з следующем. .

1 стадия. Очистка сыворотки- от остатков фибрина (путем добавления Ъ% ПЭГа), затем фильтрация.

2 стадия. Осаздение иммуноглобулинов, путем добавления 8,5-9,5$ ПЭГа (с учетом ранее добавленных 3% ПЭГа), затем центрифугирование и сбор осадка.

3 стадия. Разведение полученного глсбулинового осадка физиологическим раствором до 13-14;? концентрации общего белка.

4 стадия. Фильтрация через нутч-фильтры, через "Ф" и "СФ" пластины (на фильтрах Сальникова). Перед каждой фильтрацией рй раствора доводили до 7 ,0-7,2.

5 стадия. Разлив по стерильным флаконем.

6 стадия. Контроль на стерильность, безвредность.

7 стадия. Определение качества препарата (рН, массовая доля белка и его фракций, остаточное количество ПЭГа).

Полученный препарат соответствует всем требованиям стан»

дарта предусмотренных для данных препаратов, а метод получения препарата отличается от своих аналогов тем, что для осаждения иммуноглобулинов используется раствор полиэтпленгликоля в концентрации 8,5-9,5%.

Эффективность применения неспецкфических иммуноглобулинов

при профилактике и лечении бронхопневмонии ягнят

Результаты опыта показывают, что паргптеральное введение неспешгфического иммуноглобулина из сыворотки крова лозадей но-ворозденным ягнятам 2-4-дн9еного возраста двукратно в дозе I ил

на кг массы животного, повторным введением препарата через 14 дней повышает сохранность ягнят. После повторного введения ягнятам иммуноглобулина (16-18-дневным) содержание гамма-глобулинов было выше, чем у ягнят контрольной группы, и составило 18,0-2,0 г/л, в контрольной - 16,0 г/л. Лизоцимная и фагоцитарная активность сыворотки крови у ягнят опытных групп также была вьше, чем в контрольной. Лизоцимная активность в опытной группе составила 4,1-0,12% лизиса в контрольной - 3,8±0,3$ лизиса, фагоцитарная активность в опытной группе - 64±3,8$, в . контрольной - 60±4,0%. Отмечено также повышение в опытной группе содержания эритроцитов, гемоглобина по сравнению с контрольной.

При исследовании крови на 32-34 дни жизни ягнят (после ■повторного введения препарата) содержание гамма-глобулинов в . опытной группе остается выше {16,9±1,4 г/л) по сравнению с контрольной группой (15,7-1,2). Установлено повышенное содержание лизоцимной активности (2,90*0,26$ лизиса против 1,80*0,1$ лизиса) и фагоцитарной активности (56*5,0$, против 52*5,1$).

Во всех случаях у ягнят, которые получали на 2-4 и 16-18 дни жизни гетеровидовой иммуноглобулин, содержание бета- и гамма-фракций к 16-18 и 32-34 дню жизни было выше на 0,7-2,0 г/л, а лизоцимная активность - на 0,3-1,1$ лизиса и фагоцитарная активность - на больше, чем у ягнят контрольной группы. Аналогичные опыты проведены на ягнятах после отъема от матерей.

Применение иммуноглобулина снижает заболеваемость ягнят респираторными болезнями после отбивки от маток в 2,5 раза и летальность в 1,9 раза (таблица 4). • .

Введение иммуноглобулинов ягнятам перед отъемом их от матерей оказало влияние на показатели крови, которые отражены в таблице 5. .

Габлкца 4

Эффективность применения неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей для профилактики бронхопневмонии ягнят

Группы животных

Количество ! Заболеваемость! голов ! кол-во !

Пало

I гол

% ! кол-во 1 ! гол ! - *

5,67 14,2 3 15 7,5 14,8

Опытная Контрольная

705 710

40 101

Таблица 5

Показатели крови ягнят отъемного возраста обработанных неспецифическим иммуноглобулином из сыворотки крови лошадей

Показатели

Опытная группа

! Контрольная ! группа

Количество животных

Количество эритроцитов, в млн/мл

{слнчество лейкоцитов, з тыс./мл

Соличество гемоглобина, 5 г/л

[изоцимная активность,

I % лизиса *

'агоцитарная активность,

агоцитарный индекс

бщий белок, в г/л елковые фракции;

льбушны, в г/л льфа-глобулинн, в г/л ота-глобулины, в г/л

амма-глобулины, в г/л

10

8,5±0,2

6,3±0,1

94,0-1,0

3,8±0,3

64,0±2,0 3,0±0,1 65,6±2,5

30,6±1,3 9,0-1,6 7,0±1,4 19,0-2,3

10 7,6±0,3 6,6±0,1 84 ¿1,0 2,9±0,4

60,0±3,0 2,9^0,1

65,0±4,8

34,8±1,5 8,7^0,9 6,7±1,8

14,8±2,0

Повышение уровня гамма-глобулинов на 4,2 г/л по сравнению с контрольной группой, лизоцимной активности - на 0,9$, фагоцитарной активности - на 4% указывает на усиление резистентности ягнят опытных групп. Отмечается также незначительное повышение уровня бета-глобулинов на 0,3 г/л и общего белка на 0,6 г/л. Увеличение количества бета- и гамма-глобулинов сопровождается понижением уровня альбуминовой фракции на 4.,2 г/л.

Повышение содержания бета- и гамма-глобулинов свидетельствует о том, что введение гетеровидовых препаратов интенсивнее стимулирует белее ранний синтез иммуноглобулинов в организме животных, что способствует усилению устойчивости организма ягнят к легочпнм заболеваниям.

Интерес представляют.данные, полученные при проведении исследований по лечебной эффективности иымуноглобулинового препарата, пра болезнях органов дыхания ягнят.

Таблица 6

Лечебная эффективность неспецифического иммуноглобулина из сыворотки кров:? лошадей при бронхопневмонии ягнят в возрасте 4-4,5 мес (по 30 го^ов в каждой группе)

Применяемое ле- ! Выздоровело ! Пало/забито !Продолжительность

чение (схемы) !---!--—¡лечения (дни)

! гол ! % !кол-во ! % !

I 26 86 4 13,33 9

2 28 93 2 6,66 6

3 25 83 5 16,67 10

4 26 86 4 13,33 9

5 26 86 4 13,33 9

6

(контроль, лечение не проводи- 8 26,67 выздоровление лось) ■ не отмечено

ПРИМЕЧАНИЕ: I.схема лечения. Больным ягнятам.вводили неспе-

цифическлй иммуноглобулин из сыворотки крови лошадей в дозе 0,5

мл на кг массы животного один раз в сутки 2 дня подряд.

' 2 схема лечения. Иммуноглобулин неспецифаческкй из сыворотки крови лошадей вводили в той ке дозе и кратности в сочетании с комплексом антимикробных препаратов состоящим из пенициллина (калиевая соль бензилпенициллина), стрептомицина сульфата и растворимого стрептоцида. Комплексный антимикробный препарат растворяли на физиологическом растворе и вводили два раза в сутки в течение 5 дней.

3 схема лечения. Иммуноглобулин применяли интраназально в дозе 0,5 мл на I кг массы животного.

4 схема лечения. Комплексный антимикробный препарат вводили в той же дозе и кратности согласно второй схемы.

5 схема лечения. Неспецифический иммуноглобулин из сыворотки крови лошадей применяли аэрозольно в дозе 6 мл на I г.Р камеры з сочетании с комплексным антимикробным препаратом I раз в сутки, 45 минут, 5 дней подряд.

6 схема лечения. Контроль, лечение не проводили.

Как видно из таблицы 6 наиболее высокая лечебная эффективность была отмечена при применении неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей в сочетании с комплексным антибактериальным препаратом. Курс лечения на 3-4 дня был короче по сравнению с другими схемами лечения.

В результате анализа крови больных бронхопневмонией ягнят установлено пониженное содержание эритроцитов, гемоглобина, общего белка и бета- гамма-глобулиновой фракции. Повышено содержание лейкоцитов и количества альбуминов, что свидетельствует о прогрессировали воспалительного процесса. При клиническом обследовании таких ягнят отмечали истечение из носа серозно-катаралъно-го характера, редкий кашель, учащение дыхания и пульса, угнетег-

нов состояние, умеренную лихорадку (повышение Т на 0,5-1,0°С), снижение аппетита.

Анализ биохимических показателей крови проведенных через 10 дней после проведенного лечения позволили установить количественные' изменения ее состава при проведении лечения животных. У животных всех пяти опытных групп отмечена нормализация исследуемых, биохимических показателей крови, что свидетельствует о выздоровлении животных. Количество эритроцитов увеличилось на 0,52,4 мянЛцсл, гемоглобина - на 0,5-1,3 г%, общего белка - на 3,310 г/л, бета + гамма фракций - на 1,7-10,0 отп.%. Показатели ли-зоцимной активности - от 0,08-до 0,4$, фагоцитарной активности -от 1,0-6,0$, фагоцитарный индекс - от 0,1-0,3. Наиболее выраженные изменения отмечены у животных 2 группы, где применяли комплексное лечение. Биохимические показатели крови больных бронхопневмонией животных (контрольной группы) указывают на усиление воспалительного процесса в организме, характерных для патологии респираторных болезней, а именно происходит снижение эритроцитов (на 0,7 млн), гемоглобина (на 10 г/л), увеличение количества лейкоцитов (на 0,5 тыс/мкл), альфа-глобулиновой фракции (на 2,0 г/л). Понижение количества лизоцимной активности (на 0,3$ лизиса), фагоцитарной активности (на 2%\ Данные приведены в таблице 7.

Полученные результата проведенных биохимических исследовав ый крови от ягнят больных бронхопневмонией в 7-8-месячном возрасте относительно одинаковы. Вместо комплексного антибактериального препарата в этом опыте применяли гентамицин.

. С целью установления сравнительной эффективности гомо- и ге-теровидовых иммуноглобулинов на организм животных были проведенн

ч

сравнительные опыты.

Было сформировано 3 группы клинически здоровых новорождён-

них ягнят-аналогов по 10 голов в каждой группе. Еивотным 1-ой группы в первые 2-Я дня после рождения парэнтерально вводили по Т ш/кг. кассы гомологичного препарата (полученного и? сыворотки крови овец), а второй группе - гетерологичного (из сыроротки крови лошадей), 3-я группа была контрольной, которой глобулино-вые препараты не вводили. На 16-17 дни жизни введение препарата повторяли.

Таблица 7

Показатели крови при применении иммуноглобулина с антибактериальными препаратами при острой катаральной бронхопневмонии ягнят

ПпТ^Я'ЧЯФпТТ'И ^ Группы животных

tí VJi\Ci Оа X Ot/Xii ¡ I ! 2 ! 3 !. 4 ! 5 ! 6

I ! 2 ! 3 ! 4 1 5 ! 6 ! 7

- До лечения

О^щий белок, г/л 54,1 60,3 56,0 65,6 59,6 60,3

Белковые фракции:

альбумин, абс. в г/л 24,9 22,8 22,6 30,Я 26,64 23,7

отн. в % 46,1 37,6 40,3 46,0 44,7 ' 39,4

глобулины:

абс. в г/л

отн. в %

альфа-глобулины:

абс. в г/л 10,0 13,9 13,0 15,6 12,46 15,1

отн. в % 18,6 23,2 23,3 23,8 20,9 26, Т

бета + гаммаглобу-лины:

абс. в г/л 19,2 23,6 20,4 19,8 20,5 20.

отн. в % 35,3 39,2 36,4 30,2 34,4 34,5

Лизоцимная активность, в % лизиса 4,0 '3,8 4,1 3,3 3,6 3.S

продолжение табл.7

I ! 2 ! 3 ! 4 ! 5 ! 6 ! 7

Фагоцитарная активность, в % 44 46 42 46 44 42

Фагоцитарный „ индекс 4,7 4,3 3,8 3,8 4,3 4,3

Эритроциты в млн/мкл 7,21 7,8 8,2 7,2 8,2 7,7

Лейкоциты, ' тис/ш 9,8 ГОД П,4 10,8 11,1 10,4

Гемоглобин, в г/л 88 90 78 86 82 79

После лечения

Общий белок, в г/л 60,3 70,3 60,3 69,0 65,6 54,1

Белковые фракции;

в абс. г/л

ОТЕ. В %

альбумин 26,0 22,8 23,9 30,0 27,4 22,5

43,2 32,5 39,6 44,0 41,8 41,7

альфа-глобулины 11,5 19,0 12,9 18,3 13,0 21,5 15.7 22.8 13,0 19,8 13.1 24.2

б ета+гаыма-глобу-линн 22,8 34,6 23,5 32,9 25,2 18,5

37,8 49,2 • 38,9 33,2 38,4 34,1

Лизоцимная активность, в % лизиса '4,1 4,2 4,2 3,6 3,7 3,6

Ф. .'оцк тарная активность, в % 46 52 44 47 • 46 40

Фагоцитарный индекс 4,7 4,6 4,0 4,0 4,4 4,1

Эритроциты, В МЛН/МКЛ 7,8 10,2 8,7 7,8 8,8 7,0

Лейкоциты, в тыс/ш 8,3 8,5 . 9,0 8,8 9,2 10,9

Гемоглобин, в г/л 95 103 ' 86 91 ' 87 69

Через 4-6 часов после приема молозива в сыворотке крови всех

групп ягнят обнаруживались гамма-глобулины, которые отсутствовали до приема молозива. В первые дни жизни ягнят происходило формирование белкового состава сыворотки крови. У ягнят получавших гомологичный иммуноглобулин аналогично гетерогенному на 16-17 дни жизни происходит увеличение гамма-глобулинов на 1,87 г/л по сравнению с контрольной группой. На 30-31 дни жизни показания иммуноглобулинов незначительно отличаются от контрольной группы, но повышенное содержание гамма-глобулинов в крови ягнят сохранялось до конца наблюдений (60 дней).

Согласно таблицы 8 установлено сходство динамики бета- и • гамма-глобулинов, что свидетельствует о том, что введение гомо-и гетеровидовых препаратов стимулирует более ранний синтез иммуноглобулинов в организме ягнят. Влияние гомо- и гетеровидовых глобулинов на организм ягнят практически одинаково.

Таблица 8

Протеинограмма сыворотки крови ягнят

Возраст в днях

Общий . ! Содетжание фракций, абс. в г/л

п^т/л' !альбумин ;алн|а- ^бета- ¡гаша-' 1 ¡глобулин ;глобулин|глобулин

Получавшие гомологичные иммуноглобулины

До приема молозива

16-17

30-31

60

Получавшие гетерологичные иммуноглобулины

67,2 41,3 25,9 с леди

73,0 36,16 11,17 7,3 ' 18,37

66,8 32,6 9,5 7,0 17,7

68,4 32,62 9,63 8,54 17,61

лозива 67,0 40,0 27,0 следы

16-17 74,0 35,9 10,9 7,9 19,3

30-31 67,0 31,2 11,0 7,4 17,4

60 68,6 32,0 10,7 8,0 ' 18,1

продолжение табл.8

I ! 2 ! 3 ! 4 ! 5 ! 6

Контрольная группа

До приема мо-

лозива 67,6 41,0 26,7 с л еды

16-17 72,0 36,5 11,5 7,5 16,5

30-31 66,0 32,9 9,6 7,7 15,8

60 67,6 33,20 10,0 7,0 17,4

Лечебная эффективность при введении гетеровидового иммуноглобулина при острой бронхопневмонии идентична действию гомо- . валового препарата.• В комплексе с антимикробными препаратами 3-4 кратное введение ищуноглобулинового препарата способствует вн-одороЕлению 86-90$ животных.

Изменение естественной резистентности ягнят при введении неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей

При рождении у ягнят установлена низкая естественная резистентность, о чем свидетельствуют показатели протеинограммы, количество общего белка (54,8 г/л), больше половины которого составляют альбумины (33,42 г/л), гамма-глобулиновая фракция - носитель антител отсутствует. Понижены показатели лизоцимной активности и фагоцитарной активности. После приема молозива и введения глобули-нового препарата в сыворотке крови увеличивается содержание общего белка и увеличивается количество гамма-глобулиновой фракции белка.

Данные таблицы свидетельствуют о том, что о приемом молозива в организм-ягнят поступают молозивные иммуноглобулины, которые всасываются в неизмененном виде в первые два дня,жизни ягнят. Уровень гамма-глобулинов доходит до..18,2 г/л, что соответствует уровню'взрослого животного. В дальнейшем с понижением поступления с

молозивом гамма-глобулинов идет их спад, что сопровождается понижением естественной резистентности яивотных. У ягнят (опытной группы), которым вводили неспецифический иммуноглобулин из сыворотки крови лошадей показатели гамма-глобулинов несколько выше, чем у контрольной группы животных, которым иммуноглобулин не вводили.

Поступление антител с тюдуноглобулинагли молозива и введением их с шшуноглобулиновыш препаратами повышает уровень гамма-глобулинов в сыворотке крови ягнят в первые 2 дня жизни. При исследовании крови ягнят на 14-15 дни жизни и на 30-31 дни жизни уровень гамма-глобулинов остается высоким, кроме того гетеро-ввдовые иммуноглобулины активно стимулируют иммунную систему ягнят и тем самым усиливают выработку собственных антител. Что повйшает лизоцимную и фагоцитарную активность. Эта показали становятся выше по сравнению с контрольными животными.

Таблица 9

Влияние неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей на показатели крови ягнят

Показатели

Возраст в днях

контрольная

опытная

1 1 1-2 14-15 ¡30-31I 1-2 |14-15 ¡30-31

Общий белок, в г/л 68,0 64,0 66,0 72,0 70; О 68,0

Альбумин, в г/л 33,8 31,5 33,0 34,0 33,0 33,0

Глобулины: в г/л

альфа-глобулины 10,0 10,2 10,0 10,0 9,8 5,7

бета-глобулины 6,0 6,7 8,0 8,0 8,2 7,7

г амма-гл обулины 18,2 15,5 16,0 20,0 19,0 18,0

Лизоцимная активность, в % лизиса 2,1 2,3 3,2 5,3 6,1 4,3

Фагоцитарная активность, в % 46 58 60 48 64 58

Фагоцитарное число 2,3 3,4 3,2 3,2 4,4 3,8

Таким образом введение неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей повышает естественную резистентность ягнят.

ВЫВОДЫ

1. У физиологически развитых ягнят через 4-6 часов после приема молозива в сыворотке крови повышается общее количество белка на 12,85 г/л, фагоцитарная активность - на 7,49$, появляется гамма-глобулиновая фракция, достигая до 18 г/л и лизоцим-ная активность - до 2,3$.

2. Низкая естественная резистентность в первые дни кизни и в период отъема от матерей у ягнят имеет прямую коррелятивную связь с гипогаммаглобулинемией и гипопротеинешей.

3. Наилучшее осаждение неспецифических шщудоглобулинов (бета+гамма фракций) из сыворотки крови лошадей по разработанному методу достигается применением полиэтиленгликоля при концентрации 8,5-9,5$ и £Я раствора в пределах 7,0-7,2.

4. Парентеральное введение неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей стимулирует функцию кроветворения и усиливает естественную резистентность организма ягнят, количество эритроцитов повышается на 9,22$, гемоглобина - на 12,1$, лизощшная активность - на 7,4$, фагоцитарная актив- • ность - иа 6,3$, общий белок - на 1,5$ а гамма-глобулина - на XI,11$.

5. Применение неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей в дозе I мл/кг массы животного способствует профилактике заболеваний органов дыхания ягнят и снижению заболеваемости- на 6,71$. Применение препарата ягнятам в период отъема их от маток позволяет снизить заболеваемость респираторными болезнями в 2,5 раза, а летальность - 1,9 раза.

6. Парэнтеральное применение препарата в дозе 0,5 мл/кг в

сочетании с антимикробными препаратами повышает лечебную эффективность на 7-8$, сокращает курс лечения на 3-4 дня и снижает ■ отхой в 2,4 раза.

7. Неспецифический иммуноглобулин из сыворотки крови лошадей по профилактической и лечебной эффективности при заболеваниях органов дыхания ягнят идентичен иммуноглобулину из сыворотки крови овец.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛ02ЕНШ

Разработана нормативно-техническая документация (инструкция) по изготовлению и контролю неспецифических иммунных глобулинов из выворотки крови лошадей..

Определены дозы и кратность введения неспецифического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей для профилактики рее-респираторных болезней ягнят.

Разработан метод лечения болезней органов дыхания ягнят с применением иммуноглобулина неспецифического из сыворотки крови лошадей в сочетании с антимикробными препарата!,®. .

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТШБ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сафонов А.Ф., Лемешкина Л.П., Оразбекова А.И., Помыт-кин Г.А. Неспецифическая иммунопрофилактика легочных и желудочно-кишечных болезней ягнят / Материалы к Ш Всесоюзному совещанию по проблеме повышения резистентности с.-х.животных. Вып. 8- Москва, 1988. - С.99-101.

2. Сафонов А.Ф., Оразбекова А.И. Терапевтическая эффективность иммуноглобулина и тетраолеана при бронхопневпонии ягнят' /Тезисы докл. Всесоюзной научно-технической конференции "Проблемы экологии в ветеринарной медицине" - Воронеж 25-27 окт. -М., 1989.

3. Оразбекова А.И., Сафонов А.Ф., Афанасьев Л.А. Свидетельство на "Ноу-Хау" за № 0027616 "Способ получения иммуноглобулинов" - 1991 г.

4. Оразбекова А.И. Лечебно-профилактическая эффективность иммуноглобулина неспецифического при бронхопневмонии ягнят //Вестник с.-х. науки Казахстана, 1991, Я II - С.80-82.

Подписано к печати 27. 04. 93 г. Заказ 433. Тираж 100. Ротапринт КазНИИЭО АПК, Алма-Ата, ул. Сатпаева, 30 5.