Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Изучение гепатозащитного действия эколиса при экспериментальной токсической дистрофии печени у кроликов и поросят

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПО ВЫСШЕМУ ОБРАЗОВАНИЮ - и . ' • т г

МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ПРИКЛАДНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

На правах рукописи

СМЕТАННИКОВА Татьяна Юрьевна

ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭКОЛИСА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ДИСТРОФИИ ПЕЧЕНИ У КРОЛИКОВ И ПОРОСЯТ

Специальность: 16.00.02 патология,

онкология и морфология

животных

16.00.01 диагностикам терапия животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва 1995 г.

Работа выполнена в Московской государственной академии

прикладной биотехнологии

Научные руководители - доктор ветеринарных наук, професс<

УША Б.В.

- кандидат ветеринарных наук,старши! научный сотрудник ДОРОЖКЩ В. И.

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профессо:

УРАЗАЕВ H.A. (Ставропольская госу дарственная с.-х. академия)

- кандидат ветеринарных наук, старши научный сотрудник БЕЛОУСОВ A.A. (ВНИШП)

Всероссийский научно исследовательски! Ведущее предприятие - ветеринарный институт патологии .

формакологии и терапии (ВНИВИПФиТ) г.Воронеж

Защита состоится -/в " eit^LFZl^l995 года в, на заседании диссертационного совета К.063.46.04 Московской государственной академии прикладной биотехнологии (МГАШ) по адресу: I09816, Москва, ул. Талалихина,33.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАПБ.

Автореферат разослан " iV "¡^¿¿ёХЬ&йЯ 1995 г.

Учёный секретарь специализированного Совета

И.А.Логинов

ВВЕДШИЕ

Акту§льность_темы. Изучение проблем_ ветеринарной гепатологии, связанных:с вопросами этиологии, патогенеза, структурно-функциональных изменений в печени, разработка методов профилактики и лечения болезней печени является важным и актуальным разделом незаразной патологии.

Печень как один из важных органов обмена веществ прямо или косвенно вовлекается в патологические процессы, при которых в организме происходят структурно-функциональные сдвиги. Наиболее распространённым заболеванием печени является токсическая дистрофия, которая отмечается у всех видов тавотных. Это заболевание возникает в результате воздействия различных токсических продуктов.и некоторых других причин, и характеризуется выраженными дистрофическими изменениями гепатоцитов.

Токсическая дистрофия печени наносит большой экономический ущерб при жизни животных, обусловленный снижением их продуктивности, а также ухудшением биологической ценности продуктов убоя и выбраковки самой печени - ценнейшего пищевого продукта.

Большое число отечественных и зарубежных авторов указывает на изменения, связанные с нарушениями функции и структуры печени при токсической дистрофии (В.Н. Байматов, 1991; 1993; О.И. Волкова,1992; В.И. Десятник с соавт., 1990; H.H. Кузнецов, 1990, 1991; К.А. Сидорова, 1993; Г.В. Чернова с соавт., 1991; A.M. Самотин с соавт., 1993; В.В. Уша, 1994; Stifcl ^ iMу WO, AbfdSeLvrzL f. /JSgJ.

Анализ современной литературы показал, что требуется более глубокое изучение морфо-функциональных изменений, происходящих при токсической дистрофии печени, а также изыскание новых, более совершенных гепатозашитных средств, которые могут предупредить заболевание или обеспечить высокий терапевтический эффект/

Исследованиями некоторых учёных (В.П. Леванова, H.A. Беляков, 1990, Г.А.Степанова, Г.Л. Дудин, 1990 и др.) установлена возможность применения препаратов на основе лигнина для лечения болезней пищеварительной системы, сопровождающихся выраженным токсикозом.

Лигнин - природный гетерополимер, являющийся продуктом отхода при переработке древесины, обладающий высокими сорбционными свойствами в отношении микробных клеток, токсинов и других веществ,, находящихся в желудочно-кишечном тракте, что позволяет сделать предполо-

жение о возможности использования его для лечения токсической дистрофии печени в качестве гепатопротектора. Препарат лигнина (коммерческое название эколис) был получен на кафедре биохимии, пищевой химии и технологии высокомолекулярных соединений Московской государственной академии прикладной биотехнологии (зав. каф. акад. Розанцев Э.Г.)

. Целью настоящей работы являлось изучение морфо-функциональных•изменений, происходящих в органах и тканях при экспериментальной токсической дистрофии печени и изыскание метода лечения этого заболевания.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- изучить структурно-функциональные изменения в органах и тканях при экспериментальной токсической дистрофии печени;

-изучить особенности клинического проявления токсической дистрофии печени у кроликов и поросят при лечении эколисом;

- изучить динамику некоторых гематологических и биохимических показателей крови при лечении экспериментальной токсической дистрофии печени у кроликов и поросят эколисом; •

- определить параметры острой токсичности эколиса;

- определить терапевтическую эффективность эколиса для лечения токсической дистрофии печени у кроликов и поросят.

Получены экспериментальные данные о некоторых морфо-функциональных изменениях в органах и тканях животных при токсической дистрофии печени, дано научное обоснование применения эколиса для лечения токсической дистрофии печени кроликов и поросят, доказано гепатопротекторное действие эколиса.

П2§ктическая_уенность. Предложен препарат лигнина (эколис) для лечения токсической дистрофии печени поросят. Фармакологический совет Департамента ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации рекомендовал проведение широкого производственного испытания препарата эколис. Департаментом ветеринарии утверждено Временное наставление по его применению и ТУ на опытную партию.

Результаты экспериментальных исследований использованы в учебном процессе на ветеринарно-санитарном факультете МГАПБ по курсам внутренних незаразных болезней животных и ветеринарной морфологии.

Ап2обация_£§боты. Материалы по теме диссертации доложены на Совете ветеринарно-санитарного факультета МГАПБ (1990,1994), на Меж-

'государственной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (С.-Петербург, 1993).

03^ЛШ£§Ция_везультатов_исследования.. По результатам исследования опубликованы 4 работы, в которьгх изложены основные положения диссертационной работы.

Структ^а_и_об,ьём_Еаботы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и предложений, библиографического списка и приложений.

Работа изложена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 14 таблицами, /У фотографиями.

Библиографический список включает 152 ' наименования, в том числе 21 _ зарубежных источников.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась с 1989 по 1992 гг. на кафедре незаразных болезней животных. Московской государственной академии прикладной биотехнологии и являлась разделом госбюджетной темы "Разработка и внедрение методов экспресс-диагностики, группового лечения и профилактики болезней продуктивных животных, способствующих снижению падежа, преждевременного убоя и повышению удоев и привесов"( № гос.регистрации 8П05194, У-9181).

М§те2иалы_и_методы_исследованиял Исследования проведены на 56 белых мышах, 56 белых крысах, 35 кроликах, 26 поросятах русской белой породы.

Опытные и контрольные группы животных были сформированы по принципу аналогов и перед проведением экспериментов находились на карантине 14 дней.

Изучение острой токсичности эколиса проводили в соответствии с "Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве" (1988). Препарат испытывали в следующих дозах:

- I; 5; 10; 15; 20; 25 г/кг живой массы - на белых мышах и крысах;

- I; 5 г/кг живой массы - на кроликах.

Для каждой дозы использовали по 8 мышей и крыс, и по 5 кроликов, Такое же количество животных служило контролем. Эколис давали каждом} животному индивидуально через зонд в 2 *%-ном крахмальном геле натощак. Контрольные -животные 'препарат не получали.

Наблюдение за подопытными животными проводили в течение 15 дней.

При этом проводили взвешивание животных,клинико-лабораторные иссле- -дования. На 15-й день проводили убой животных с последующим вскрытием и гистологическим исследованием органов и тканей.

Токсическую дистрофию печени у кроликов и поросят воспроизводили по методу Ю.М.Лопухина (1970). Для этого кроликам вводили четырёххло-ристый углерод (€01^) внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг живой массы, предварительно смешав его со стерильным подсолнечным маслом в соотношении 1:1 на первый, третий, и пятый дни опыта. Поросятам четырёх-хлористый углерод вводили подкожно в дозе 0,3 мл/кг живой массы два раза в день с интервалом 12 часов в течение 7 дней.

Для определения терапевтической эффективности эколиса при токсической дистрофии печени кроликов подопытным животным давали препарат с первого по пятнадцатый дни опыта с кормом. Кролики были разделены на 4 группы по пять животных в каждой группе. Первой группе животных эколис давали один раз в день в дозе I г/кг живой массы, второй группе - два раза в день в той же дозе, животным третьей группы препарат не давали. Контролем служили животные четвёртой группы -клинически здоровые кролики.

Для определения терапевтической эффективности эколиса при токсической дистрофии печени поросят животным первой опытной группы препарат давали с восьмого по пятнадцатый дни опыта в дозе I г/кг живой массы два раза в день с кормом. Поросятам второй опытной . группы с воспроизведённой токсической дистрофией печени эколис не давали. Контролем служили животные третьей группы - клинически здоровые поросята.

В работе были использованы следующие методы исследования: клинические, гематологические, биохимические, рентгено-флуоресцентный, патологоморфологический и токсикологический.

Клиническое обследование животных проводили по общепринятой схеме с учётом температуры, пульса, дыхания, обращал особое внимание на состояние органов системы пищеварения и печени. Количество форменных элементов крови (эритроцитов и лейкоцитов) определяли на электронном счётчике форменных элементов "Пикоскел" (Венгрия), уровень гемоглобина - по методу Сали в гемометре ГС-3.

Для изучения функционального состояния печени у животных проводили ряд исследований, которые позволили выявить изменения, происходящие в организме при токсической дистрофии печени.

Уровень общего белка в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом с использованием рефрактометра РЛУ; ¡белковые фракции 4

______.__________________________С_Х_Е М_А_______ОПЫТ А_____________________________

ВОСПРОИЗВЕДЕНИЯ И ЛЕЧЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОЙ ДИСТРОФИИ ПЕЧЕНИ

)пытная группа I п = 5

[етырёххлористый тлерод

¡нутримышечно в (озе 0,3 мл/кг сивой массы-\ раза с интервалом 18 часов

Эколис I раз в день ; дозе I г/кг живой

гассы

У КРОЛИКОВ (п = 20)

Опытная группа 2 п = 5

Чётырёххлористый углерод

внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг живой'массы 3 раза с интервалом 48 часов

Эколис 2 раза в день в дозе I. г/кг живой

массы

Контрольная группа п = 5

Опытная группа 3 п = 5

Четырёххлористый углерод

внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг живой массы 3 раза с интервалом 48 часов

У ПОРОСЯТ (п = 26)

Зпытная группа I Опытная группа 2 Контрольная группа

п =•12 п = 9 п = 5

зтырёххлористый углерод Четырёххлористый углерод здкожно в дозе 0,3 мл/кг подкожно в дозе 0,3 мл/кг геой массы 2 раза в день живой массы 2 раза в день интервалом 12 часов в с интервалом 12 часов в гчение 7 дней течение 7 дней

юлис 2 раза в день в эзе I г/кг живой массы

Рис. I. Схема опыта воспроизведения и лечения токсической дистрофии печени

сыворотки крови - методом электрофореза в полиакриламидном геле(ПААГ) с использованием прибора для электрофореза фирмы "Реанал" (Венгрия). Соотношение альбуминов и глобулинов (А/Г) определяли расчётным путём по отношению процентного содержания альбуминов к процентному содержанию глобулинов,.

Количество свободных аминокислот в сыворотке крови определяли, методом ионообменной хроматографии на автоматическом анализаторе аминокислот ААА-339 (ЧОФР).

Количество билирубина и его фракций в сыворотке крови определяли фотоколориметрическим методом Иендрашика, Клеггорна и Грофа.

Содержание в сыворотке крови железа, меди и цинка определяли методом рентгено-флуоресцентного анализа на рентгено-флуоресцентном спектрофотометре УВА-30.

• Патологоморфологические исследования проводили по общепринятой методике. Отобранный для гистологических исследований патологический материал фиксировали в 10. %-ном водном растворе нейтрального формалина. Материал заливали парафином. Срезы готовили толщиной 7-8 мкм и окрашивали гематоксилин-эозином, Суданом

Статистическую обработку материала проводили по В.М. Константинову (1975).

3. 'РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ^острой ^окс .При наблюдении за опыт-

ными животными, получавшими различные дозы эколиса, не отмечали клинических признаков интоксикации, а также их гибели. Общее состояние животных за период наблюдения было удовлетворительным, они были активны, подвижны, адекватно реагировали на внешние раздражители. Аппетит сохранён. Темпы роста животных не отличались от контроля.

В результате гематологических исследований установленЬ, что все изучаемые показатели (уровень гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов) находилось в пределах возможных физиологических колебаний. На седьмой день наблюдения было отмечено.незначительное,особенно выраженное у белых крыс и кроликов, получавших эколис в дозе 5 г/кг живой массы, повышение уровня гемоглобина на 5 и 6 % соответственно. В дальнейшем этот показатель вернулся к первоначальному уровню.

эе Патологоморфологические исследования проводили при консультации доцента В.Э. Прусак-Глотова.

------При вскрытии опытных животныхполучавших-эколис в изучаемых-до----------

зах, патологических изменений в органах и тканях как визуально, так и микроскопически.не обнаружено.

При гистологическом исследовании печени животных, получавших эколис, выявлено выраженное свойство препарата стимулировать пролифератив-ные процессы и активизировать элементы ретикуло-эндотелиальной системы. 3то проявлялось в увеличении числа клеток Купфера, полиморфизме их ядер, резком увеличении количества двухядерных и полиплоидных гепато-цитов.

В связи с тем, что при применении препарата в изучаемых дозах не наблюдалось признаков интоксикации и гибели животных, ДЦ^ эколиса определить не удалось, поэтому его можно отнести к малотоксичным соединениям.

3^2^_Из^чение__гепатозащитаого ^е(^твия^ко™са_пр^эксперимен-

тально^токсщеско^дистрофии^ечени_кроликов. Изучение клинического статуса животных при воспроизведении и лечении экспериментальной токсической дистрофии- печени проводили путём наблюдения за животными с

моделью токсической дистрофии. Первые признаки интоксикации четырёх-хлористым углеродом выявлены на третий день опыта, наиболее ярко они проявлялись по мере развития интоксикации. Животные были угнетены, слабо реагировали на внешние раздражители, у них отмечалось снижение двигательной активности, анорексия, диспепсические явления.

Колебания температуры были незначительны и составляли 38,8+0,1°С -- 38,7+0,13°С. Отмечалось незначительное увеличение частоты пульса на пятнадцатый день опыта с 147,2^3,3 уд/мин до 157,2-2,7 уд/мин. Живая масса животных снизилась с I,54±0,01 до 1,33-0,05 кг.

В результате клинических исследований крблйКйв первой'и'второй групп,которых лечили эколисом, установили, что оптимальной схемой лс- -чения токсической дистрофии печени является применение препарата в ■дозе -I г/кг--живой масеы два-раза в день с кормом. В этом случае клини-• ческие признаки воспроизведённого у животных заболевания проявлялись в меньпгей степени, признаков угнетения, анорексии, снижения двигательной активности не наблюдалось. Изучаемые клинические показатели (температура,частота дыхания, пульс) находились в пределах физиологической нормы.

Изучение динамики гематологических показателей при воспроизведении экспериментальной токсической дистрофии печени у кроликов показало,что у животных снижается уровень гемоглобина с 115,0+1,28 г/л до 80,8+1,29. г/л ¡количество эритроцитов снижается с 5,64+0,129 млн/мкл до

ч 3,74+0,06 млн/мкл,а количество лейкоцитов повышается с 7,56+0,16тыс/мкл до 8,2+0,15 тыс/мкл. Снижение количества гемоглобина и эритроцитов при токсической дистрофии печени, по-видимому, объясняется интоксикацией организма.

При подсчёте лейкограммы установлено увеличение количества эозин о-филов с 1,2+0,22^ до 2,0+0,2 %, палочкоядерных нейтрофилов с 5,8+0,42% до 8,4+0,27 лимфоцитов с 51,0+1,19 % до 54,4+1,35 % и моноцитов с 4,8+0,65 % до 5)0+0,11 %. Количество сегментоядерных нейтрофилов снизилось с 36,0+1,17 % до 28,6+0,84 %, Незначительное увеличение количества лейкоцитов и изменение*лейкограммы может быть обусловлено развитием'воспалительных процессов в органах пищеварительной системы.

У кроликов, получавших эколис, наблюдалась менее выраженная тенденция -изменения гематологических показателей,- колебания которых находились в пределах физиологической нормы и были статистически недостоверны. Результаты гематологических исследований показали, что эффективнее применять препарат дважды в день. В этом случае уровень гемоглобина снижается с 121,1+1,38 г/л До 109,4+1,6 г/л. Количество эритроцитов увеличи--лось незначительно с 7,36+0,05 до 7,62+0,1 тыс/мкл.

При подсчёте лейкограммы установили, что на 15-й день опыта количество палочкоядерных нейтрофилов у животных., получавших эколис два. раза, в день, увеличилось с 5,6+0,57 % до 7,0+0,5 лимфоцитов с 50,0+0,8 % до 51,8+0,65 %, моноцитов с 5,4+0,76 до 5,6+1,2 %. Количество базофилов и эозинофилов снижалось с 1,4+0,27 до 1,2+0,22 % и с 1,4+0,27 до 1,2+

0.2 % соответственно, а количество сегментоядерных нейтрофилов с 36,2+

1, 08 до 33,0+0,74 %. Таким .образом можно отметить, что у животных, получавших эколис, наблюдались незначительные изменения изучаемых показателей, которые находились в пределах физиологич&ской нормы.

Изучение белкового обмена у кроликов с экспериментально воспроизведённым заболеванием позволило установить гипопротеинемию, при которой уровень общего белка сыворотки крови снижается с 72,1+0,17 г/л до 59,02+0,065 г/л, что может быть отнесено за счёт нарушения белковообра-зовательной функции печени в результате интоксикации, Выявлена диспро-теинемия, сопровождающаяся уменьшением альбуминовой фракции от 58,61+ 0,57 % до 52,77+0,59 %, вследствие угнетения альбуминообразовательной функции печени и усиления вывода этого белка из сосудистого русла.Увеличение глобулиновых фракций сыворотки крови объясняется снижением рас-•пада плазменных глобулинов в печени, увеличение У~ глобулинов -

раздражением клеток РЗС_при-интоксикации^ Так, количестве ¿¿-глобулинов повысилось у кроликов с 10,11+0,045 до 12,44+0,26^,^Г-гло-бултов с 1С',19+0,026 до 12,51+0,44^, /"-глобулинов с 21,09+0,024 до 22,26+0,65^. Вследствие диспротеинемии снижалось соотношение альбуминов и глобулинов, которое составило 1,1+0,2.

В результате изучения аминокислотного состава сыворотки крови у больных кроликов установили увеличение уровня свободных аминокислот с 24,8+0,557 до 25,83+0,029 мг% за счет таких аминокислот как аргинин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, треонин, цистин, фенилаланин.

Результаты изучения белкового обмена у кроликов с ¡экспериментальной токсической дистрофией печени, которым давали эколис, показали, что колебания изучаемых показателей были незначительны и статистически недостоверны. Наименьшие -колебания показателей отмечены у животных, получавших эколис два раза в день. Уровень общего белка снизился у них с,71,3+0,78 до 70,51+0,62 г/л, количество альбуминов с 58,4740,56 до 57,46+0,18 %. Количество (А - глобулинов повысилось с 10,08+0,045 до 10,15+0,063$, $ - глобулинов с 10,17^,076 до 10,22+ 0,0233, /"-глобулинов с 21,16+0,045 до 22,07+0,023^. Соотношение альбуминов и глобулинов снизилось с 1,41+0,03 до 1,34+0,01.

Изменения аминокислотного состава сыворотки крови у кроликов, которых лечили эколисом, были также незначительны (24,68+0,039 мг# -24,96+ 0,531 мг#) и находились в пределах нормы.

Изучение содержания некоторых макро- и микроэлементов при воспроизведении экспериментальной токсической дистрофии печени у кроликов показало увеличение содержания железа, меди и цинка в сыворотке крови. Так, уровень сывороточного железа увеличился от 102,8+2,9 до 210,8+1,8 мг^, что связано с развивающимся цитолизом гепатоцитов и' избыточным поступлением желез? в.кровь. Уровень меди повышается с 268,0+2,8 до 530,0+3,3 мкг;%, что указывает на гибель печеночных клеток. Наиболее значительным было увеличение содержания цинка - с 323,4+ 4,1 до 1208,0+18,3 мкгга.

В группе животных, получавших эколис в доза I г/кг массы тела два раза в день, тенденция к увеличению изучаемых элементов была менее выражена. Это свидетельствует о том, что.печеночная ткань таких животных менее подвержена дистрофическим изменениям. Так, уровень железа в сыворотке,крсви повысился с 101,0+2,1 до 117,8+0,86 иг%, количество меди - с 266,4+2,72 до 357,6+16,2 мкг^, а уровень цинка -с 323,4+5,5 до 392,9+2,6 мкг%.

Патологоморфологические изменения в органах и тканях при-воспроизведении экспериментальной токсической дистрофии печени у кроликов свидетельствуй, что наиболее выраженные изменения обнаруживались в печени. Этот орган макроскопически увеличен в размере, дряблой консистенции, неравномерно окрашен. Микроскопически выявлена дискомплек-сация печёночных балок в центре долек, в сосудистом русле - дистония, агрегация эритроцитов, сепарация форменных элементов крови. В паренхиме печени встречались микроочаги цитолиза гепатоцитов с некротическими массами, пропитанными кровью и плазмой. Портальные поля в области триад инфильтрированы круглоклеточными элементами лимфоидногистио-цитарной природы. В наружной части долек наблюдается локальная пролиферация холангиол - признак холестаза. Кроме того, в паренхиме печени выявлен широкий спектр дистрофических изменений - от зернистой до выраженной жировой дистрофии. Преобладает мелко- и среднекапельная жировая инфильтрация гепатоцитов, расположенных по периферии печёночных долек. Окраска Суданом Ш выявляет диффузную и мелкоочаговую жировую дистрофию печени с превращением отдельных гепатоцитов в крупные -жировые вакуоли, что подтверждает развитие токсической дистрофии печени

В желудке отмечали.гиперемию и отёчность слизистой оболочки, у двух животных - эрозии. Брызжеечные лимфоузлы увеличены, отёчны. Слизистая оболочка кишечника также отёчна, гиперемирована, нередко с кровоизлияниями. Гистологически установлены выраженный венозный застой дилятация вен, перива'скулярный отёк. Выявленные изменения, по нашему мнению, связаны с токсическим действием четырёххлористого углерода.

Почки увеличены в размере, бледные, границы коркового и мозгового слоев сглажены, в корковом слое обнаруживались кровоизлияния. Гистологически в корковом слое выявлены компактные клубочки со спавшимися капиллярными петлями. Отмечались очаговые дистрофические изменения нефроцитов коркового слоя в виде зернистой дистрофии и гиалиново-капельной, отражающей некроз клеток. На границе коркового и мозгового слоев выявлены периваскулярный отёк, очажки кровоизлияний, лимфоидно-гистиоцитарные инфильтраты.

При вскрытии кроликов, получавших эколис один раз в день в дозе I г/кг'массы тела, видимых патологических изменений в сердце, лёгких, селезёнке, желудке и кишечнике не выявлено.

Пёчень тёмно-вишнёвого цвета, по краям долей органа выявлены участки серовато-жёлтого цвета, дряблой консистенции. Гистологически отмечалась умеренно выраженная дискомплексация печеночных балок, 10

-деформация желчных-про токов,фиброз портальных-трактов. - Обнаружено - не------

равномерное кровенаполнение, сепарация плазмы и форменных элементов, в отдельных сосудах дезагрегация эритроцитов, что' говорит о включении компенсаторных механизмов, способствующих восстановлению микроциркуляции в поражённом органе. Окраска Суданом Ш показала наличие гепато-цитов с мелкокапр^-" -т включениями, а такче коричневыми

гранулами липидогект--' г:.:-:' - г.

У двух кроликов почки были немного увеличены, границы коркового

Вскрытие кроликов, получавших изучаемый препарат два раза в день в дозе I г/кг живой массы, видимых патологических изменений во внутренних органах не выявило.

Печень темно-вишневого цвета,. нормальных размеров и консистенции, у трех животных по крям органа обнаружены участки серого цвета. При гистологическом исследовании наблюдалось сочетание дистрофических и регенеративных- процессов в печеночной ткания, поэтому паренхима печени имела полиморфный вид. Отмечено значительное уменьшение степени выраженности жировой дистрофии, а у отдельных животных она практически отсутствует.

Клинические, клинико-лабораторнь;е и биохимические исследования изучаемых показателей у контрольных животных показали, что за весь период наблюдения они практически не изменялись и находились в границах норда. Вскрытие контрольных животных не выявило видимых патологических изменений как визуально, так и микроскопически.

Таким образом, исходя из результатов исследований, можно сделать вывод, что эколис обладает гепатозащитным действием, которое более выражено при применении препарата в дозе I г/кг живой массы два раза з день. Учитывая полученные результаты, изучение гепатсзашитного действия эколиса при экспериментальной токсической дистрофии печени у поросят мы проводили при этой же дозе.

3^2л_И§УН®ние_гепатозашитного_дейст Ц2И_2£££ИН§££22_5й£1Е0фии_печени_п0Е0сят. Изучение клинического статуса животных при воспроизведении токсической дистрофии печени показало, что у поросят с модель» токсической дистрофии печени перьые клинические признаки болезни появлялись на третий-четвертнй дни опыта.При этом животные становились вялыми, угнетенными, аппетит снижался, нередко наблюдалась рвота. По мере развития интоксикации состояние

животных становилось все более тяжелым и на 14 день опыта одно животное погибло.

У больных поросят наблюдалось снижение двигательной активности, они лежали, зарывшись в подстилку или принимали позу "сидячей собаки". Заболевание сопровождалось незначительным повышением температуры с 39,1+0,31°С до 39,7+0,16°С, учащением дыхания с 16,6+0,71 до 21,0+1,1 в минуту и тахикардией, когда частота пульса увеличивалась с 62,8+1,9 уд/мин до 69,5+2,42 уд/мин. Живая масса поросят снизилась с 3,9+0,11 кг до 9,12+0,16 кг за неделю. Начиная с третьей недели опыта клинические проявления болезни стали сглаживаться, к концу наблюдения состояние животных, изучаемые клинические показатели нормализовались.

При наблюдении за опытными животными с токсической дистрофией печени, получавшими эколис, установили, что клиническое проявление воспроизведенного у них заболевания носило сглаженный характер,колебания изучаемых клинических показателей находились в пределах нормы. Под влиянием эколиса, который давали поросятам с восьмого по пятнадцатый дни опыта, изменения температуры, частоты дыхания, -пульса носили "стертый характер", а в дальнейшем клиническое состояние животных нормализовалось, о чём свидельствовали показатели температуры, частоты дыхания и пульса.

Динамика гематологических показателей при воспроизведении токсической дистрофии печени показала, что у поросят уровень гемоглобина снижался с 106,8+1,82 г/л до 89,0+1,5 г/л, количество эритроцитов -с 6,64+0,09 млн/мкл до 6,07+0,07 млн/мкл, а количество лейкоцитов увеличивалось с 9,18+0>09 тыс/мкл до 9,62+0,08 тыс/мкл. В дальнейшем, к 23- му дню опыта, наблюдали нормализацию количества эритроцитов и лейкоцитов.

Подсчёт лейкограммы больных поросят позволил установить снижение количества базофилов с .1,8+0,22 % до 0,75+0,22 %, эозинофи-лов с 1,5+0,22 % до 0,75+0,22 палсчко$дерных"нейтрофилов- - с 3,0+0,35 % до 2,5+0,33 % и сагментоядерных нейтрофилов с 44,8+0',39Й до 39,75+0,31 На восьмой день опыта в крови появились юные формы нейтрофилов - 1,5+0,25 а тагосе выявлен моноцитоз и лимфо-цитоз, когда количество этих форменных элементов увеличивалось до 4,0+0,47 % и 50,75+0,52 ^ соответственно. К 23-му дню опыта лейко-грамма крови больных поросят нормализовалась.

Е результате исследования гематологических показателей у поросят с экспериментальной токсической дистрофией печени, которых

лечили эколисом, установили, что изменения изучаемых показателей (уровень_гемоглобина,-количество эритроцитов', лейкоцитов, лейко-грамма) были незначительны и статистически недостоверны, а к 15-му дню опыта нормализовались.

Динамика показателей белкового обмена при экспериментальной токсической дистрофии печени у поросят позволила установить гипо-протеинемию, усиливающуюся по мере развития интоксикации, когда количество обшего белка снижалось с 72,56+0,34 г/л до 65,45+0,32 г/л. Также выявлена диспротеинемия, проявляющаяся снижением альбуминовой фракции сыворотки крови с 45,2+0,15 ^ до 41,25+0,14 ? и повышением глобулиновнх фракций. Количество ¡/- - глобулинов увеличивалось с 15,6+0,2 % до 16,25+0,3 %, $ - глобулинов с.15,7+0,2?. Я до 16,75+0,4 i, У - глобулинов с 23,5+0,5 % до 25,75+0,32 %. Соотношение А/Г уменьшилось с 0,81+0,3 до 0,69+0,01:

Следует отметить, что к концу наблюдения белковый обмен у животных этой группы нормализовался и его показатели достигли первоначального уровня.

При изучении белкового обмена у поросят с экспериментальной токсической дистрофией печени, которых лечили эколисом, установлена незначительная гипопротеинемия, когда количество общего белка снизилось с 72,08+0,81 г/л до 66,78+0,26 г/л, и диспротеинемия.При этом количество альбуминов уменьшилось с 46,62+0,23 # до 44,06+0,ЗК, количество ^ - глобулинов увеличилось с 15,5+0,44 % до 16,6+0,16 Количество $ - глобулинов повысилось с 16,37+0,23 до 16,81+0,45 а / - глобулинов с 21,51+0,39 < до 22,53+0,37 Соотношение А/Г1 снизилось с 0,87+0,012 до 0,78+0,01. В результате проведённого лечения белковый обмен у животных этой группы нормализовался к 15-му дню опыта, о чём свидетельствуют изучаемые показатели.

Результаты количественного анализа содержания некоторых макро-и микроэлементов в сыворотке крови поросят с экспериментальной токсической дистрофией печени показьгаают резкое увеличение содержания железа, меди и цинка. Так, уровень железа повысился с 171,0+ 1,91 мг<£ до 273,75+4,9 мг^, меди с 193,0+5,64 мкг^ до 292,5+3,75мкг£, цинка - с 170,0+1,91 мкг^ до .390,0+3,6 мкг%.

К концу наблюдения за животными (30-й день опыта) количество изучаемых макро- и микроэлементов снизилось, однако первоначального уровня не достигло. ч

При исследовании сыворотки крови поросят с экспериментальной токсической дистрофией печени, которых лечили эколисом, установлено, что у них наблюдалась тенденция к увеличению уровня железа, меди и цинка, но менее выраженная. Так, на пятнадцатый день опыта уровень железа повысился с 176,25+3,15 до 197,25+4,21 мг%, меди - с 195,75+ 3,57 до 214,37+4,57 мкгЯ, цинка - с 172,5+6,37"до 183,12+3,22 мкг%. В дальнейшем, под влиянием ■эколиса, изучаемые показатели вернулись к исходному уровню, что, по нашему мнению, связано с их адсорбцией препаратом эколис и выведением из организма.

Изучение пигментного обмена при воспроизведённой токсической дистрофии печени у поросят показало резкую билирубинемию,-когда уровень обшего билирубина в сыворотке крови в разгар болезни повысился с 3,07 +0,21 до 7,35+0,31 мкмоль/л за счёт увеличения прямого билирубина с 0,01+0,04 мкмоль/л до 0,21+0,08 мкмоль/л^и непрямого с 3,06+0,02 до 7,14+0,32 мкмоль/л. К пятнадцатому дню отмечали снижение уровня билирубина, при этом количество общего билирубина к концу наблюдений составило 4,15+0,7 мкмоль/л.

У поросят, которых лечили эколисом, также отмечали билирубинемию, но менее выраженную. В начале опыта количество общего билирубина составляло 3,125+0,11 мкмоль/л, к восьмому дню оно увеличилось до 6,42+0,12 мкмоль/л. К пятнадцатому дню опыта наблюдали нормализацию пигментного обмена, что сопровождалось снижением общего билирубина до 3,78+0,05 мкмоль/л. По нашему мнению, это связано с восстановлением функционального состояния печени в результате лечения.

При проведении патологоморфологических исследований с воспроизведённой токсической дистрофией печени у поросят, убитых на восьмой день эксперимента, как ведущий патологоморфологический диагноз была установлена токсическая дистрофия печени.

Печень увеличена в объёме, дряблой, тестоватой консистенции, поверхность разреза пёстрая вследствие неравномерного окрашйвания. Микроскопически отмечали жировую дистрофию гепатоцитов, расположенных в срединной и центральной части долек. Большинство гепатоцитов некро-тизированы с аутолитическим распадом. Лишь по периферии долек сохранена архитектоника гепатоцитов, в которых изредка выявляются клетки в состоянии жировой дистрофии. В очагах темно-красного цвета отмечали фагоцитоз, по периферии долек наблюдали стадию красной дистрофии (сохранены относительно нормальные гепат'оциты). Соединительная ткань

вокруг долек инфильтрирована кругло клеточными элементами лимфоидно--- - — гистиоцитарной природы.

У животных установлен острый катаральный гастрит и энтерит двенадцатиперстной и тощей кишок. Слизистая оболочка желудка и кишечника утолщена, гиперемирована, с точечными кровоизлияниями, местами видны катаральные эрозии. Гистологически выявляли кровоизлияния и пропитывание слизистых оболочек серозно-клеточным экссудатом. Эпителий в состоянии зернистой и отчасти жировой дистрофии.

Почки увеличены в сбъёме, дрябловатые, малокровные, рисунок органа стёрт. Гистологически обнаруживали признаки зернистой дистрофии.

Скелетные мышцы фокусно были окрашены бледнее, дряблые, рисунок мышечной ткани стёрт. Гистологические исследования позволили выявить зернистую дистрофию и фокусный некроз скелетной мускулатуры.

Кроме того у поросят выявляли'точечные кровоизлияния в эьикард, эндокард и незначительную зернистую дистрофию миокарда.

Желудочные, мезенхимальные, печеночные и почечные лимфатические узлы увеличены, гиперемированы, сочные. Гистологически наблюдали признаки серозного лимфаденита.

Остальные органы и ткани не выявляли изменений как визуально, так и гистологически.

Таким образом, на восьмой день эксперимента мы констатировали развитие гепаторенального синдрома, отягощенного воспалительными процессами в желудочно-кишечном тракте, дистрофическими и некротическими явлениями в паренхиматозных органах и скелетной мускулатуре, что характерно для моделированной токсической дистрофии печени.

На пятнадцатый день эксперимента при вскрытии убитых поросят диагностировали токсическую дистрофию печени, хронический катаральный гастрит и энтерит, цирротические явления в почках, острую катаральную бронхопневмонию, очаговый некроз и дистрофию скелетной мускулатуры.

В печени при гистологическом исследовании выявляли развитие острого массивного некроза паренхимы, разрастание соединительной ткани ю периферии некротических зон.

При вскрытии поросят, получавших эколис, проведённом на 15-й }ень эксперимента, выявляли лишь начальные стадии разроста соединительной ткачи и гипертрофическую регенерацию печеночной паренхимы.В футих органах и тканях заметных изменений не обнаружено, за исключе-шем острого катарального энтерита в стадии затухания процесса.

На 30-й день эксперимента у животных как первой, так и второй опытных групп при вскрытии .обнаружено развитие тех же патологических процессов, которые наблюдали на 15-й день опыта. У животных, которых лечили эколисом, выявлены развивающиеся процессы регенерации печеночной паренхимы, а у поросят, которым препарат не давали, в печени отмечали начальные стадии разроста соединительной ткайупи незначительные очаги восстановленных клеток.

Таким образом, можно констатировать, что эколис оказывает существенное влияние на становление и развитие гепаторенального синдрома при экспериментальной токсической дистрофии печени поросят, снижая развитие жировой дистрофии и способствуя более быстрому развитию регенеративных процессов.

Клинические, гематологические и биохимические показатели контрольных животных за.период наблюдений оставались в пределах физиологической нормы. Вскрытие контрольных животных не "выявило видимых патологических изменений как визуально, так и микроскопически.

ВЫВОДЫ

I. Токсическая дистрофия печени экспериментально воспроизводится путём введения четырёххлоркстого углерода внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг живой массы три раза с штервалом 48 часов кроликам и подкожно в той же дозе, два раза в день с интервалом 12 часов в течение 7 дней поросятам.

• 2. Клинически токсическая дистрофия печени проявляется угнетением, снижением двигательной активности и живой массы, анорексией и диспепсическими явлениями.

3. При экспериментальной токсической дистрофии печени отмечает^ ся: снижение количества гемоглобина у кроликов до 80,8+1,23 г/л, у поросят до 89,0+1,52 г/л; эритроцитов до 3,74+0,06 млн/мкл и 6,07+

0,'07 млн/мкл соответственно; увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов у кроликов.и поросят, а у поросят также появление юных нейтрофилов.

4. При экспериментальной токсической дистрофии печени отмечается: а) изменение белкового обмена, проявляющееся гипопротеинемией: уровень общего белка снижается у кроликов до 59,02+0,65 г/л, у поросят до 64,45+0,32 г/л, и диспротеинемией со снижением количества

альбуминов и повышением глобулинов; б) увеличение количества свободных аминокислот в~~сШорбткё~1^вй"1сроликов " с~24,8+р,577~мгЯ~дс 25~,83+~ 0,029 мг# за счет аргинина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, треонина, фенилаланина, цистина; в) увеличением содержания

общего билирубина в сыворотке крови поросят до 7,35+0,31 мкмоль/л за счет повышения его прямой и непрямой фракций.

5. Отмечается резкое увеличение содержания железа, меди и цинка в сыворотке крови у кроликов до 210,8+1,8 мг^, 530,0+3,3 мкгда и 1208+18,3 шг%- соответственно. У поросят эти показатели составляют 27375+4,9 мгй, 292,5+3,75" мкг# и 890,0+3,6 мкг#.

6. Основные морфологические изменения при токсической дистрофии, печени у кроликов проявляются развитием жировой, зернистой дистрофии, некроза гепатоцитов, сочетающихся с зернистой дистрофией почек,острым катаральным гастроэнтеритом (на пятнадцатый день опыта).

7. У поросят отмечается развитие гепато-ренального синдрома, отягощенного воспалительными процессами в желудочно-кишечном тракте, дистрофическими и некротическими процессами в паренхиматозных органах (8-15-й дни опыта), которые сменяются (30-й день опыта) регенеративными и заместительными процессами в печени.

8. По результатам изучения острой токсичности эколиса его можно отнести к малотоксичным соединениям.

9. Для лечения токсической дистрофии печени поросят эколис назначают животным при появлении первых клинических признаков заболевания с кормом в дозе I г/кг живой массы два раза в день до выздоровле-ния(7-8 дней). В рекомендуемых дезах препарат не вызывает осложнений и побочных эффектов.

10. Эколис обладает выраженным гепатозащитным действием, способствует улучшению клинического состояния животных, гематологических; биохимических и морфо-функциональных показателей печени, а также развитию регенеративных процессов в ней, снижает степень развития жировой дистрофии печени.

ПРАКТИЧЕСКИЕ- ПРЕДЛОЖЕНИЯ Эколис рекомендуется применять для лечения токсической дистрофии печени поросят с момента появления первых клинических признаков заболевания. Препарат дают с кормом в дозе I г/кг живой массы два раза в день до выздоровления. - -

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Сметанникова Т.Ю. Уровень меди, железа и цинка в сыворотке крови кроликов при лечении экспериментальной токсической дистрофии печени кроликов// Межгосуд. межвуз. научно-практ. конф."Новые фармакологические средства в ветеринарии".- С.-Петербург./ Тез. докл.,

1993.

2. Сметанникова Т.Ю. Применение лигнина для лечения экспериментальной токсической дистрофии печени // Проблемы профилактики и лечения заболеваний с.-х. животных / Сб. науч. тр. НИВИ Нечерноземной зоны, Н.Новгород, 1993.

3. Сметанникова Т.Ю. Опыт использования лигнина для лечения экспериментальной токсической дистрофии печени // Использование новых методов диагностики и фармакологических средств, в лечении и профилактике болезней животных// Сб.науч.тр. ЕНИИПФйТ, г. Воронеж,1994.

4. Сметанникова Т.Ю. Патологоморфологические изменения в печени кроликов при лечении экспериментальной токсической дистрофии печени лигнином // Сб. науч. тр. МВА"Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней'.'-М: МВАД994.