Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Изучение фармако-токсикологических свойств мастина при маститах у коров

У»

, 7 •

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи УДК 615.5 1 618.19 - 0.02 : 636.2

ДАГАЛНЫ ВОЛОДЯ

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МАСТИНА ПРИ МАСТИТАХ У КОРОВ

16.00.04.-Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

. (-.Санкт-Петербург 1995

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи УДК 615.51 618.19 - 0.02:636.2

ЦАГААНЫ ВОЛОДЯ

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МАСТИНА ПРИ МАСТИТАХ У КОРОВ

16.00.04.-Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

г.Саккт-Петсрбург 1995

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи УДК 615.5:618.19 - 0.02 : 636.2

ЦЛГААНЫ ВОЛОДЯ

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МАСТИНА ПРИ МАСТИТАХ У КОРОВ

16.00.04.-Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных нзук

г.Санкг-Пстербуг.г »995

Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины:

лауреат преют Совета Министров СССР, доктор ветеринарных наук, профессор Соколов В.Д.

доктор биологических наук, старший научный сотрудник Андросов Н.С. доктор ветеринарных наук, профессор Давидов В.У.

Санкт-Петербургский Государственный Аграрный Университет

Защита состоится " "__ 1995 года в 13.00. часов на заседании Специализированного совета Д.120.20.02 в Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины по адресу: 196084, г.Санкт-Петербург.ул.Черниговская.5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке акздемии.

Автореферат разослан " * _ 1995 года".

Научный руководитель

Официальные оппоненты: -

Ведущая организация

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

Узюмова 0. В.

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В современных условиях ведения молочного скотоводства на основе промышленной технологии при концентрации большого поголовья животных на ограниченных площадях с высоким уровнем механизации и автоматизации наблюдается снижение резистентности организма и создаются благоприятные факторы для возникновения и распространения маститов у коров (Батраков А.Я. 1987; Оксамитный Н.К. 1988; Карташва В.М.. Квашура А.И. 1988. 1991; Полянцев Ю.Н. 1990). Среди заболеваний коров маститы занимают одно из ведущих мест. По данным Международной Федерации по молочному делу, маститы - одна из труднорешаеных проблем молочного скотоводства во многих странах мира, в том числе и в Монгольской республике.

Маститы наносят огромный экономический ущерб, складывающийся из снижения молочной продуктивности, ухудшения биологических и технологических качеств молока и изготовляемых из него молочных продуктов. преждевременной выбраковки больных животных, затрат на лечение. роста заболеваемости и падежа телят раннего возраста.

Маститы у коров возникают во всс функциональные периоды развития и функционирования молочной железы (Батраков А.Я. 1977; Симец-кий O.A. 1977; Полянцев Ю.Н. 1985; Оксамитный Н.К.; Egan J. 1984).

В происхождении маститов, кроме непосредственных причин, большую роль играют предрасполагающие условия, снижающие резистентность организма животного и тканей молочной железы (Давыдов В.У. 1986; Гончаров В.П. н соавт. 1987; Париков В.А., Сапохнккова H.A. 1988; Кипилов B.C., Копытин В.П. 1980). на фоне которых оказывает свое действие патогенная и условно-натогенная микрофлора (Картаюоиа В.М., Ивашура А.И. 1988; Ивченко В.М. 1991; Helschen Vf., Shotts E.B. 1987).

Для лечения и профилактики маститов предложены различные ле-

карства, состоящие, главным образом, из комбинации разных антибиотиков, которые не всегда оказывают высокий терапевтический эффект в результате развития у микроорганизмов устойчивости. Кроме того, по мнению многих специалистов, они угнетают естественную резистентность организма животного, могут прозоцирозать маститы микозной этнологии и ухудшают качество молочных продуктов (Манойленко C.B. 1984; Карташова В.М. 1930; Кузьмин Г.Н.. Ракова Т.Н. 1SS0; Ходаков A.B. и соавт. 1994). Поэтому, в большинстве случаев, разработка эффективных методов борьбы с ними является актуальной задачей ветеринарное медицины.

В связи с вышеизложенным, разработка новых комплексных препаратов, обладающих широким спектром антимикробного действия и повышающих естественную резистентность организма животного, для лечения и профилактики маститов у коров, имеет большое теоретическое и практическое значение.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящего исследования явилась разработка нового комплексного препарата "Мастан" и внедрение его в ветеринарную практику.

Для разрешения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать рецептуру мастина.

2. Изучить токсичность препарата.

3. Изучить антимикробную активность и возможное раздражающее действие мастина.

4. Установить влияние исследуемого препарата на иммунобиологический статус молочной железы при маститах коров.

5. Определить лечебно-крофилакгаческую эффективность мастина при маститах коров в условиях производства.

1.3. Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые создан новый комплексный препарат - мастин, обладающий антимикробным, противовоспалительным, кммунокорригиругащии и нролонги-

рованным действиями. Изучены его фармако-токсикологические свойства как противомаститного препарата. Установлена лечебно-профилактическая эффективность мастина в рекомендуемых дозах при маститах у коров.

1.4. Практическая ценность работы. Разработано "Временное наставление по применению мастина при маститах у коров" (Утверждено Ученым Советом СПГАВМ, Леноблветотделом и представлено в ГУФ РФ, 1994).

Препарат - мастин внедрен в практику ряда хозяйств Ленинградской области и госхоза "Гачурт" Уланбаторского округа Монголии.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту: Фармако-токсикологические свойства мастина. рекомендуемого для лечения и профилактики маститов коров.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 3-й, 4-й. 5-й межгосударственных межвузовских научно-практических конференциях "Новые фармакологические средства" (г.Санкт-Петербург. 1992, 1993, 1994), на научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПГАВМ (г. Санкт-Петербург, 1994.).

1.7. Публикации, по материалам диссертационной работы опубликованы 2 научные статьи.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из списка сокращенных слов, введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 7 рисунками к 2 фотографиями.

Список использованной литературы включает 283 библиографических наименований, в том числе 208 отечественных и 75 зарубежных источников.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований. Экспериментальные исследования проведены в течение 1991-1994 гг. на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины, в Научно-исследовательском институте ветеринарной фармации "Эврика", в совхозе "Шушары" Тосненского района Ленинградской области и в совхозе Тачурт" Уланбаторского округа Монголии.

Для исследований использовали новый комплексный препарат мас-тин в сравнительном аспекте с диоксиднном и мастисаном А.

В состав мастина входят: даоксндин, метнлурацил. жировой регенерирующий компонент и специальный стабилизатор. Препарат представляет собой маслянистую жидкость белого или слегка желтоватого цвета со специфическим запахом, При хранении расслаивается. Мастин хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от + 4 до + 20°С. Срок годности 1 год.

При проведении экспериментальных исследований и приготовлении мастнна применяли оригинальный отечественный химиотерапевтический препарат диоксидан и метнлурацил производства ВПО - "Союзленсин-тез", ЛПХФО - "Фармакон" серия Н 4400793 н 1020793 и мастисан А, выпускаемый Харьковской биофабрикой серия N 59.

В экспериментальных работах использовано 54 белых мыши массой 18-23 г, 8 кроликов порода шиншилла (3.2-3.8 кг), 30 крыс массой 190 -220 г, 664 коров черно-пестрой порода средней продуктивности.

Острую токсичность мастнна определяли на белых мышах при внут-рибршшшом введении. Контрольным животным вводили равное по объему количество изотонического раствора. Наблюдение за животными вели в течение 10 суток, обращая внимание на общее состояние, поведение, аппетит и учитывая смертность подопытных животных. . .

Расчет основных параметров острой токсичности проводили по методу Кербера и Першина {М.Л.Беленький. 1963), величину стандартной

огябки ЛДз,, - по формуле Гэддама (1933).

Подостру» токсичность насткна изучали на крысах при пероргль-ном введении, наблюдая за общим состоянием животных и изучая некоторые нжуно-био:зтические показатели.

Раздражающее действие «астина изучали при нанесении его на конъюнктиву глаз кроликов по методу Гацура В. В. (1974) к на здоровую молочную железу коров с подсчетом соматических клеток. Для контроля в один глаз и в долю вымени вводили равно» количество изотонического раствора.

Антимикробную активность мастина определяли на примере кишечной палочки (E.coll) и золотистого стафилококка (S.aureus) в сравнительном аспекте с диоксидинои. устанавливая нинямальную подавляющую концентрацию (ШЛО препаратов методом серийных разведзнкй.

Диагноз на клиническую форму маститов ставили: осмотром - пропорциональности четвертей, контролем состояния молока, пальпацией -консистенцию, температуру, болезненность н другими методами.

Влияние мастина, диоксидина и мастисана А на гематологические, биохимические н иммунологические показатели изучали на 30 коровах, больных острым серозно-катаральяым .маститом в возрасте 5-9 лет на 1-3 месяце лактации. Больных коров выбирали на центральной ферме совхоза "Шушары" Тоснекского ¡района Ленинградской области.

По принципу аиглогоз животные были разделены на 3 группы по 10 голов в каждой. Животным 1-й группы вводит? по 10 мл маетана ннтра-цкетернзльно 1 раз в сутки, зо 2-й группе - 1 %-ный раствор диоксидина, согласно временному наставлении по применению диоксидина в ветеринарии, утвержденного ГУЗ СССР (1908). Животным 3-й группы интрацистернально вводили мастисаи А в дозе 10 мл 1 раз в сутки. Жкчотным всех групп препараты вводили в течение S-и суток после зе-чернего доении. Контролем олухкст i0 здоровых коров! У контрольных , животных исследопага указаш'Ыв шказател11 до Еведения и через 34 дней после последнего пчздения препаратов.-

для лабораторного исследования брали кровь из вены больной доли вымени и секрет(молоко) из той же доли молочной железы коров до введения препаратов, на 3-й.7-й день после начала лечения и через 14 дней после последнего введения препаратов.

В крови, оттекающей от вымени, общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмму и содержание гемоглобина.

При оценке Т- и B-системы иммунитета у коров определяли: количество T-ЛИМфОЦИТОВ (Е-РОК), В-ЛИМфОЦИТОВ (ЗСз-РОК) и 0-лимфоцитов в одном препарате - реакцией комбинированного розеткообразования по методу Mendes К.F. (1974) в модификации Блинова Н.И. (1985); количество теофиллинчувствительных (супрессоры) и теофиллинрезистентных (хелперы) Т-лимфоцитов (Limatibul S. et al. 1978, Shohat В., Joshua H. 1982); функциональную активность Т-лимфоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с конканавалнном А ( КонА. "Serba". ФРГ) по Дж.Бендиксену и соавт. (1980) в модификации Хавинсона В.Х.; Морозова В.Г. (1980); ■ коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов -Т-хелперы/Т-супрессоры, характеризующий функциональное состояние субполяций Т-лимфоцитов по методу Kung P.C. et al. 1979.

О функциональной активности B-лимфоцитов судили по содержанию иммуноглобулинов G.M.A. которые определяли по методу дискретного осаждения, разработанному Бадиньм П. и Роусселетом Ф. (1964) в модификации Ларского Э.Г. и Кравченко Н.П. (1966) с изменениями Кос-тыной М.А. (1983).

В пробах сыворотки крови определяли содержание общего белка -рефрактометрически, белковые фракции - нефелометрическим методом по Оллу и Махкорду в модификации Карпюка С. А. (1962).

Для оценки факторов неспецифической защиты организма выявляли бактерицидную активность (Смирнова О.В. и Кузьмина Т.А. 1966), активность лизоцима (Дорофейчук В.Г.. 1968).

В секрете (молоке) вымени выявляли число соматических клеток'

по методу Хилькевича Н.М. ( Ивааура А.И. 1991). содержание общих иммуноглобулинов - цинк-сульфатным методом по Воловенко М.А. (1975) с модификации Костиной М.А. (1983) и рН молока измерили на рН -320.

Лечебно-профилактический эффект мастина изучали на 644 коровах, больных клиническим маститом и здоровых животных по сравнению с диоксидином и мастисаном А в условиях Ленинградской области и Монголии.

Экономическую эффективность способов лечения и профилактики животных рассчитывали по методикам, утвержденным Главным Управлением Ветеринарии МСХ СССР (1984).

Результаты опытов приведены в единицах СИ и обработаны методом вариационной статистики (Лахин Г.Ф. 1980) с применением критерия Стьюдента на микрокалькуляторе "Электроника - МК 51".

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Острая токсичность мастина. Учитывая то обстоятельство, что степень токсичности и переносимости лекарственных веществ является одним из необходимых показателей для внедрения препарата в клинику, изучали острую токсичность мастина в сравнении с диоксидином.

Оказалось, что при внутрибрюшинном введении мастина летальные дозы, рассчитанные по методу Кербера для белых мышей составили: ЛДао - 1433.33±96.95 мг/кг. ЛДо - 800.0 мг/кг. ЛД,6 - 1013.33 мг/кг, ЛД84 - 2013,33 мг/кг, ЛД,00 - 2200 мг/кг.

Летальные дозы, рассчитанные по методу Периина ЛДо, ЛД100 препарата соответствовали таковым, полученным при расчете по методу Кербера. Параметры ЛД50 при Енутрнбрюшиннон введении составили 1433.38 мг/кг.

В результате исследований установили, что ЛД,, () мастина для бе-

-голых мыиой была ниже, чем чистого диохсидина. что подтверждается литературными данными (ЛДзР диоксидака ВОО-ЭОО мг/кг).

Следовательно, по данным изучения острой токсичности, мастин относится к группе малотоксичёских вецеств.

3.2. Подострая токсичность масуинэ. Длительное применение мастача <10 дней) в дозах, превышающих терапевтические в 25 и 50 раз (0.1 к 0.2 мл/крысу). не оказывает токсического действия на организм бегых крыс. За врем» наблюдения общее состояние крыс оставалось удовлетворительным, аппетит бы« сохранен. Видимых изменений кожи и слжшсчкх не отмечали.

Б конце Э1;сперимента в кров;! ¡юдопыгнкх животных содержалось 14.5=0.9 - 15.141.3 Г/п - гемоглобина, 62.4+3.8 - 64.3±2.5 г/л - общего белка, 4.20+0.4 - 4.35г0.6 % лизоцимной активности сыворотки кусвк (ЛАД?), ?.1.4±0.5 - Зх. 5±0.7 % бактерицидной активности сыворотки жрови (БАСК). У контрольных животных эти показатели соответственно равнялись: 14.8±0.Б г/л.; 60;5£1.г г/л. 3.85±0.5 %, 32.4±0.Г>%.

Содержание гемоглобина й бактерицидная активность сыворотки крови бьан примерно одинаковыми в крови подопытных и контрольных крыс. На^чюдалась л<юь некоторая ,хендсн1?ия увеличения содержания общего белка и активности лизала в сыворотке кров» подопытных крыс, чтоможно расцйнить кгк позитивный момент.

3.3. Оценка раз.праудюшаго действия тетина. Проверку раздражающего действия мастина прсводшм на конъюнктиве глаза 8 кроликов, оцениваемую гюкровенагюлненйю. кеншжтавы, лакримации и влиянию на роговицу глаза : слабое {+), умеренное (+*) и сильное (+++) раздражающее действие. '•.'•.:';' ,

Препарат при начальном дзукратиом нанесении на конзднктиваль-ные мешки глаз кроликов не проявлял раздражающего действия, но после третьего нанесения ■ наблюдали ■ слабовыражекное кровенаполнение конъюнктивы у 7 кроликов и после четвертого нанесения проявлялось такое же изменение у всех кроликов, которое не усиливалось к при

последующих введениях.

Следовательно, мастин оказывает слабовыраженчое раздражающее действие (незначительная гиперемия, без слезотечения и гнойных выделений. исчезающее к 8-му часу после инсталляции препарата). Раздражающий эффект не сопровождался изменением температуры тела, учащением пульса и количества дыхательных движений:

Аналогичный раздражающий эффект наблюдали к при назначении эталонных препаратов: раствора диоксидина и мастисана А.

Изучение раздражающего вдаянйя однократного интрацистернально-го введения настина в здоровую молочную железу коров проведено с подсчетом соматических клеток в молоке.

Через 8 ч. после введения мастика отмечено увеличение по сравнении со смежными контрольными доякии вшени количества соматических клеток, в молоке на 20.4 X (Р<0.001)> реакций молока с 5 *-иым раствором иинастина оценена в ±. т.е. указшала ка раздражение паренхимы вымели з нормальных пределах. Чёрез 12 ч. количество соматических клеток на 23.4 % (Р<0.001) было зыае. чем в смежных контрольных долях вымени. Через ¿0 и 24 ч. количество соматических клеток приблизилось к исходному уровню 370.91*16.25.

Масткн не вызывал изменения общих клинических показателей организма, состояния вымени, не влиял ка цвет, запах и консистенцию молока. Однако небольшое увеличение числа соматических клеток в молоке коров после введения препарата в цистерну вымени свидетельствовало о незначительном раздражении, которое бесследно проходило через 24 часа после введения иастяна.

3.4. АнукмнкроСнье свойства мастина. Установили, что минимальная подавляющая концентрация мастина по отношению к кишечной палочке составила 25 мкг/мл (в пересчета по активно-действующему веществу), а по отношению к золотистому стафилококку 12.5 мкг/чл (по ди-оксидину). Диоксида» обладал одинаковой антимикробной активностью по отношений к исследуемым микроорганизмам. Антимикробный зЭД-зк.т

диоксидина. входящего в состав мастина в отношении грамотрицатель-ной и неположительной микрофлоры, не снижался в присутствии вышеизложенных компонентов.

3.5. Иммунобиологический статус молочной железы пру маститах у коров. В результате проведенных исследований установили, что маститы у коров сопровождались изменением содержания эритроцитов и гемоглобина в пределах физиологических норм и повышением (Р<0.01) количества лейкоцитов, При изучении лейкограммы было отмечено увеличение (Р<0.05) содержания юных и палочкоядерных нейтрофилов и уменьшение (Р<0.01)сегментоядерных нейтрофилов.

Полученные данныеизменения общего белка и его фракции в сыворотке крови коров, больных серозно-катаральным маститом согласуются с результатам! работы Шафрана В.И. (1972). Лебединского В.И. (1985), которые указывают на повышенное содержание общего белка и гамма-глобулина и пониженного содержания альбуминов. Эти показатели подтверждают, что при серозно-катаральном мастите идет острый воспалительный процесс, .сопровождаться поступлением в кровь из воспалительных тканей вымени общего белка, глобулина и особенно гамма-глобулинов.

Одновременно с атим у коров при серозно-катаральном мастите имело место нарушение дифференцировочных процессов в органах иммунной системы. Это выражалось в увеличении у больных животных относительного содержания лимфоцитов на 10.4 % (Р<0.01), Т-лимфоцитов на 5.5 % (Р<0.05) и незначительным снижением В-лимфоцитов на 1.8 % (Р>0.05), что в целом вело к недостоверному уменьшению в крови больных содержания нулевых клеток. Эти данные, в основном, совпадают с результатами работ ПиЬе ¿.Р. (1989), Каига ^К. ег а1. (1989) и Ивченко В.М. (1991). •

Изучение соотношения иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфо-иитов показало, что при серозно-катаральном мастите имело место почти двукратное, снижение (Р<0.05) коэффициента дифференцировки

Етр-РОК/Етч-РОК по сравнению со здоровыми животными.

При определении функциональной активности Т-клеток установили, что у больных животных снижена продукция лимфокинов. Это выражалось в увеличении (Р<0.005) процента миграции лейкоцитов в РТМЛ с КонА у больных почти в 1.5 раза по сравнению со здоровыми животными.

Кроме того выяснили.что в сыворотке крови, оттекающей от пораженных острым серозно-катаральным маститом долей молочной железы, возрастает (Р<0.05) количество иммуноглобулинов G. М, уменьшается (Р<0.05) бактерицидная и лизоцимная активность и увеличивается (Р<0.005) число общих иммуноглобулинов, соматических клеток в молоке. Эти данные в некоторой степени согласуются с работами Сервули В.А. 1988), Савостина А.Н. (1988), СапожникоВой H.A. (1992). Остро-уховой В.И. (1993).

Следовательно, количественный дефицит B-лимфоцитов (ЗС3-Р0К), угнетение активности РТМЛ с КонА позволяют нам говорить о наличии дефицита в клеточном и гуморальном звене иммунной системы молочной железы при острых формах серозио-катарального мастита у коров.

3.6. Влияние мастина. диоксйдина и мастисана А на показатели морфологического состава крови при остром серозно-катаральном мастите. Установили, что мастин, диоксидин и мастисан А не оказывали выраженного влияния на содержание эритроцитов и гемоглобина, которое было одинаковым в опытной и контрольной группах.

На 3-й и 7-й день от начала лечения коров количество лейкоцитов. юных и палочкоядерных нейтрофилов, эозинофйлов, лимфоцитов уменьшилось в крови всех трех групп животных. При этом наиболее интенсивное снижение количества как лейкоцитов в целом (Р<0.01), так и различных форм нейтрофильных гранулоцитов (Р<0.05) (за исключат;-ем сегментоядерных нейтрофилов) наблюдали при назначении мает« но сравнению с третьей группой (мастисан А).

В группе коров, обработанных диоксидином, снижение (P<:o.Q*j> количества лейкоцитов, лимфоцитов, палочкоядерных нййтробяж»»

более выражено.чем в третьей группе на 3-й и 7-й день от начала введения препарата.

На 3-й и 7-й день от начала введения препарата содержание сег-ментоядерных нейтрофилов 1-й группы (Р<0.05) к 2-й 1-руппы (Р>0.05) было выше, чей в третьей группе.

. К 14-му дню воспалительный процесс закончился, и количество лейкоцитов, показатели лейкограммы у вылеченных внвотнкх были близки к т&ковым здоровых коров.'

3.7. влияние мастияа. токсивина и мастасана А на белковый об-

ротке крсои альфа-глобудиков и бета-глобулинов не наблюдали статистически достоверного изменения их количества в опытной и контрольной группах животных. Одновременно с »там на 3-й и 7-й день от начала лечения мастином у хивотшл отмечалось снижение содержания общего белка (Р>0.05). га*«а-глобулта (Р<0.05), но увеличились количество альбумина <Р<0.05) и коэффициент альбумииово-глобулиноваго отношения (А/Г) по сравнению с третьей группой.. А повышение количества альбуминов и коэффициента альбумиково-глобулинового отношения были сходны во второй и третьей группах.

Указанная тенденция наблюдалась и в последующие дни исследований. № 14-й день, когда наступило купирование воспалительного процесса. изучаемые показатели приблнжалисьпо своему значению к таковым у -¿доросых животных. ' :;

иммунный ответ ртм серозно-катаральном мастите. На 3-й и 7-й день от начала лечения больных хорее настшюм в крови уменьшалось абсолютное количество лимфоцитов (р<0.01). абсолютное количество Т-лим-фоцитов (?<0.05), относительное количество Т-лиифоцктов(Р>0.05). абсолютное количество Т-супрессоров (Р>0.05). относительное количество Т-супрсссоров (Р<0.05>. процент РТО .С КонА (?<С.05). но увеличивается относительное количество 1-.челлеров ,(Р<0.05). кдоффи-

циент днфференцировкн Т-лимфоцитов-Т-хелперы/Т-супрессоры (PCO.01) по сравнению третьей группой.

При лечении коров диоксидином на 3-й и 7-й день уменьшились (Р>0.05) и увеличились (Р>0.05) аналогичные показатели по сравнению с третьей группой.

Изменения относительного количества Т-хелперов и нулевых клеток были почти одинаковыми во второй и третьей группах/

К 14-му дню у выздоровевших коров, леченных мастином. диоксидином и мастисаном А, отмечали уменьшение относительного количества Т-лимфоцитов с 53.7*1.77 до 47.5Ю.85 (PCO.05), относительного количества Т-супрессоров с 23.lt0.65 до 11.9*1.32 (Р<0;01), процент PTMJI с КонА с 89.48*1.92 ДО 54.98*1.29 (PCO.01) и увеличение относительного количества Т->;елперов 30.50*1.50 до 35.6*1.08 (Р<0.05), коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов-Т-хелперы/Т-супрессоры с 1.31*0.06 до 3.40*0.48 (Р<0.05). . ; / ..."

3.9. Влияние мастнна. дяоксидина и мастисана А на гуморальный иммунный ответ при остром серозно-катаральном мастите. На 3-й и 7-й день от начала лечения больных коров мастином н диоксидином в крови уменьшилось содержание (Р<0.05) иммуноглобулинов G, М, суммарное количество (РС0.05) иммуноглобулинов, бактерицидная (PCO.05) и ли-зоцимная (Р>0.05) активность и увеличилось относительное количество (Р>0.05) B-лимфоцитов. содержание (Р>0.05) иммуноглобулина А по сравнению с третьей группой (мастисан А).

К 14-му дни у всех выздоровевших коров отмечали уменьшение содержания иммуноглобулинов G с 16.99*0.69 до 11.91*0,46 (PCO.05) и М с 9.76*0.29 до 5.60*0.27 (Р<0.01). суммарного количества иммуноглобулинов с 27.08*0.53 до 18.71*0.28 (PCO. 05) к увеличение относительного количества B-лимфоцитов с 17.3*0.93 до 20.2+0.69 (Р>0.05), содержания иммуноглобулина А с 0.94*0.09 до 1.25*0.12 (Р>0.05), бактерицидной с 39.82*3.14 до 79.03*1.7 (PCO.1) и лизоцимной активности с 5.64±0.14 до 7.96*0.12 (РС0.1).

3.10. Влияние мастина. диоксидина и мастисана Л на некоторые иммунобиохимические показатели секрета (молока) при остром сероз-но-катаральнои мастите. На 3-й день от начала лечения коров масти-ном и диоксидином в секрете (молоке) уменьшилось число соматических клеток (Р<0.05). содержание общего иммуноглобулина (Р>0.05) и рН молока (Р>0.05) по сравнению с третьей группой.

Такая аналогичная тенденция наблюдалась на 7-й день. К 14-му дню все изученные показатели у больных коров достигали физиологических значений.

3.11. Оценка фармакологической активности мастина. Проведенные исследования показали, что новый комплексный препарат - мастин обладает более высокой фармакологической активностью при лечении, купировании воспалительного процесса и регенерации тканей молочной железы по сравнению с диоксидином и мастисаном А. Это объясняется тем. что мастин проявляет не только антимикробное действие за счет диоксидина, но и значительную сумму фармакологических эффектов благодаря другим компонентам, особенно метилурацилу. Этот препарат ускоряет процессы клеточной регенерации поврежденных тканей, стимулирует (корректирует) клеточный и гуморальный иммунитет, повышает иммунобиологическую защиту организма и способствует синтезу лизоцима, интерферона и компонентов системы комплемента и повышает активность основных ферментов цикла Кребса в В-лимфоцитах.

4. ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ ИСПЫТАНИЯ МАСТИНА

Определение .лечебной и профилактической эффективности мастина проводили при различных формах клинических маститах коров в условиях Ленинградской области и Монголии.

В хозяйствах Ленинградской области при серозном мастите коров лечение мастином обеспечило выздоровление 80 % животных и излечение £7.5 % долей вымени при средней продолжительности курса З.Й+0.24

дня. Лечение диоксидином обеспечило выздоровление 70.0 % коров и

73.3 % долей вымени при средней продолжительности курса 3.4±0.22 дня.

В группе коров, больных катаральным маститом, выздоровело 70.0 % коров и наступило излечение 64.2 % долей вымени при средней продолжительности курса лечения 4.1±0.31 дня от внутрицистернальных введений мастина, тогда как от применения диоксидина процент выздоровления составил 60.0 % при средней продолжительности курса лечения 4.5±0.26 дня.

Одновременно с этим в крови больных коров, леченных мастином. более интенсивно снижалось количество лейкоцитов и в молоке соматических клеток.

Анализ полученных данных позволяет сделать заключение о том, что терапевтическая эффективность во всех случаях была выше от применения животным мастина, чем при лечении диоксидином, и разница составила: при серозном и катаральном маститах по 10 % от выздоровевших коров и по излечению больных долей вымени на 7.5 % и 10.9 % соответственно. Также установили сокращение срокоз лечения больных коров мастином: при серозном мастите на 0.2 дня, катаральном - 0.4 дня.

Проведенные испытания показали, что профилактическая эффективность от двукратного введения мастина составила 75 %, в контрольной группе - 66.6 %, а санирующий эффект по долям вымени составил 89.5,'í, в контрольной группе - 85.4 1«.

Однократное кнтвацистернальное введение мастина обеспечивало профилактическую эффективность на 66.6 % и санирующий эффект из

85.4 %, в контрольной группе - 58.3 % и 83.3 % соответственно.

В условиях Монголии мастин сравнивали с мастисаком А. При серозном мастите коров лечение мастином обеспечило выздоровление 91.6%, при катаральном - 83.3 % и при гнойно-катаральном - 71.4 %.

Терапевтическая эффективность во всех случаях была руне сг

применения мастина, чем при лечении настисаном А, разница составила: при серозном и катаральном маститах по 8.3 X и гнойио-катараль-ном - 4.8 %. Также было установлено сокращение срока лечения больных маститом: при серозном мастите на 0.33 дня. катаральном - 0.34 дня и гнойно-катаральной - 0.45 дня.

Профилактическая эффективность от двукратного и однократного интрацистернального введения мастина в сухостойный перибд также была выше, чём от применения мастисана А и контрольной группы.

.На основании полученных данных можно сделать выводы о том. что в условиях Монголии лечебно-профилактическая эффективность мастина была выше, чем в условиях Ленинградской области. :

В 1994 году хозяйства Ленобласти приобрели и применили 1.5 млн. доз мастина, приготовленного Ленветфармом и АОЗТ НИИВФ "Эврика", что позволило обработать и излечить около 435 коров, больных маститом различной формы.

Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составила 5.22 руб. от применения мастина при лечении маститов в условиях Ленинградской области, а при профилактике -13.42 руб.

Экономическая эффективность на 1 тугрик затрат составила 5.32 тугриков от применения мастина при лечении маститов коров в условиях Монголии, а при профилактике - 14.18 тугриков.

: Экономический аффект при лечении больных коров в группах с применением мастииа был выше, чем в группах с применением диоксиди-на н мастисана А на 20.8-28.0 X в условиях Ленинградской области и Монголии.

5. ВЫВОДЫ

1. Разработал, апробирован и внедрен в практику новый лротиво-маститный препарат - мастин. .

2. Мастин является малотоксичным препаратом. При внутрибрюшин-

ном введении белым мышам Щ, составила - 800 мг/кг, ЛД5П - 1433.34± 96.95 мг/кг и ЛД100 - 2200 мг/кг.

3. Препарат проявляет слабовырахенное раздражающее действие, (аналогично мастисану А и раствору диоксидина). которое не оказывает отрицательного влияния на организм животных, молочную железу и состояние молока.

4. Мастин обладает широким спектром антимикробного действия. Наибольшую активность' ои проявляет в отношении кишечной палочки и стафилококка.

5. У коров, больных острым серозно-катаральным маститом, происходят глубокие физиологические, биохимические и иммунологические изменения, проявляющиеся в увеличении количества лейкоцитов, общего белка, относительного количества Т-лимфоцитов, иммуноглобулина G в крови, содержания соматических клеток в секрете (молоке) и снижении относительного количества В-лимфоцитов, иммуноглобулина А, бактерицидной и лизоцимной активности в крови.

6. Мнтрацнстернальное введение мастина в дозе 10 мл 1 раз в день в течении 3-8 суток оказывает выраженное лечебное (70.0-91.6^). а двукратное введение в сухостойный период - профилактическое(66.6-83.3") действие при разных формах клинических маститов у коров.

7. По фармакологическим свойствам (антимикробная, противовоспалительная. иммунокорригирующая активность и пролонгированное действие) мастин не уступает существующим противомаститным препаратам. а в ряде случаев превосходит их.

6. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

По материалам исследований производству предложены:

1. Временное наставление по применению мастина при маститах у коров (Утверждены Ученым Советом Санкт-Петербургской Государственной Академией ветеринарной медицины. Леноблветотделон. 1933 г, и

представлено в ГУВ РФ).

2. Результаты исследований по лечебному и профилактическому действию мастина используются в учебном процессе кафедрами фармакологии и токсикологии, акушерства и гинекологии с.-х. животных Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины.

7. СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Цагааны В. Антимикробная активность диоксндина в некоторых противомаститных препаратах. //Новые фармакологические средства. /Тезизы докладов 4-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции/. - Санкт-Петербург. 1992. - С.62.

2. Цагааны В. Антимикробное действие диоксидина в комплексных препаратах. //Новые фармакологические средства. /Тезизы докладов 5-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции/. - Санкт-Петербург. 1993, - С. 96,