Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ в зависимости от дозы, кратности и интервалов между вакцинациями

г ^ л:

^ • I

КАЗАНСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ имени Н.3.БАУМАНА

На правах рукописи

МШАКАЕВ ОРАЗАЛИ ТУРМАНОВИЧ

ИММУКОМОР4-0ЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ИЗ ШТАММА БРУЦЕЛЛ 82-ПЧ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ДОЗЫ. КРАТНОСТИ И ИНТЕРВАЛОВ КЕЯДУ ВАКЦИНАЦИЯМИ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животних

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степепн кандидата ветеринарии* наук

Казань - 1991

)

Работа выполнена на кафедре патологической анатомии Казанёк го ордена Ленпа ветеринарного института имени Н.Э.Баумана и в лаборатории бактерийных инфекций ВНИВИ (г.Казань)

Научные руководители: заслуженный деятель науки ТССР,

доктор ветеринарных наук, профессор Г.З.ИДРИСОВ

заслуженный ветеринарный врач РСФСР, доктор ветеринарных наук, профессор К.М.САЙМАКОВ

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор М.С.ЕЗКОВА

доцент В.В.ТИТОВ

Ведуцее учреждение: Витебский ордена "Знак Почета" ветеринарный институт имени Октябрьской реьо-лвции

Защита состоится " Л " СШ^й-Ь^А 1991 года в /О часов на заседании специализированного со^Ьта Д-120.22.01 при Казанском ордена Ленина ветеринарном институте имени Н.Э.Баумана (420071», Казань, ветеринарный институт).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ордена Ленина ветеринарного иистигута имени Н.Э.Баумана.

Автореферат разослан % 1991 года

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

В.И.УГРШОВ

,';"' i I- ОЫЗАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теми. Открытие возбудителя бруцеллеза положило на-:сУаЛ.О^Истивной профилактике этого заболевания. Было предложено и ис-"пытано большое количество живых и убитых вакцин, которые в общем комплексе мероприятий борьбы с данной инфекцией имели большое значение. Однако до настоящего времени нет противобруцеллезной вакцины. обеспечивающей полную защиту организма человека и животных.

Как указывают А.М.Рахманов и М.С.Каков (1980,1982) при оценке иммуногенних достоинств и реактогенности вакцинных препаратов значительно возросла роль патоморфологических исследований органов и тканей вакцинированных животных. Этому посвящены работы Г.З.Идрисс-ва (196^-1976), Г.З.Идрисова и К.М.Салмакова (Г975), Н.И.Архипою и соавт.(1973,1980), М.С.Жакова и соавт.(1977,1980). А.П.Стрельником и А.Н.Куриленко(1982), Л.И.Кундрюковой( 1982.198'»). Э.И.Алиева и Р.А.Белозеровой(1985), Э.И.Алиева и Д.И.Шарипова(19еб), Ф.И.Ибадул-лаева и соавт.(1980,1990) , M.Tralnin, H.smaH (1973), J. В.Millar (1977), R.P.Bäsch, J.K.Kadlsh (1978).

В настоящее время для специфической профилактики бруцеллеза животных широко используются вакцины из штаммов 19 и 82. Но при иммунизации вакциной из итамма 19 животные долгое время остаются серо-позитивными (К.К.Алексеев.А.К.Лукин, 1980; В.П.Ярослав'цев и соавт., 1980; К.В.Шумилов и соавт.,1984), что затрудняет проведение вэтери-нарно-санитарных мероприятий, дифференциацию реакций животных на вакцинный и полевые штаммы и определение эпизоотического состояния стад по бруцеллезу. Вакцина из штамма 82 примерно у 10-20? вакцинированных беременных коров и нетелей вызывает аборты (К.М.Салмаков и соавт.,1978; В.С.Ивановский, P.M.Хамитов,1981; К.В.Ы)..шлов и соавт. 1983 и др.).

Во Всесоюзном научно-исследовательское ветеринарном институте проф. К.М.Салмаковым и с.н.с. Г.А.Белозероый выделен новый вакцинный штамм - 82-ПЧ (пенициллинчувсТЕИтелышЯ вариант вакцинного штампа Br.abortus 82). Эта вакцина в поисковых исследованиях оказалась перспективной и в отличие от вакцин из штаммов 19 и 82 при иммунизации беременных животных не вызывает аборты. Это свойство нового препарата выгодно отличает его от других предшественников бруцеллезных вакцинных препаратов.

В настоящее время вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ проходит лабораторное и производственное испытания, но иммуногенные качества и побочное действие этой гакцины на организм животных до сих пор изу-

- к -

чены недостаточно.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы явилось проведение иммуномо1дологической оценки эффективности применения вакцины из птамма бруцелл 82-ПЧ в зависимости от дозы, кратности и интервалов между вакцинациями.

В связи с этим, для реализации данной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

1) изучить динамику и характер иммуноморфологических и ультраструктурных изменений в органах морских свинок, вакцинированных вакцино{ из штамма бруцелл 82-ПЧ;

2) провести сравнительную иммуноморфологическув оценку эффективности и безвредности различных доз вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ пр> иммунизации телок;

3) определить степень напряженности иммунитета, создаваемого вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ, в зависимости от дозы у крупного рогатого скота и у морских свинок при многократной вакцинации;

выяснить иммуноморфологические изменения в органах и тканях коров при ревакцинации вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ.

Научная новизна. Исследованиями установлены уровень иммуноген-ных качеств и повреждающего действия вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ в зависимости от дозы, кратности и интервалов между вакцинациями .

Выяснена степень выраженности иммуноморфологической перестройк! в органах и тканях жиботных при иммунизации их различными дозами вакцины из штамма 82-ПЧ, а также зависимость морфологических проявлений напряженности иммунитета от сроков и кратности вакцинаций. Ог ределена ультраструктурние изменения в органах привитых животных в динамике иммуногенеза.

Теоретическая и практическая ценность работы. Полученные результаты с использованием современных методик и аппаратур..!, проведанный иммуноморфологический анализ клеточных реакций в иммунокои-петентных органах кивотных, позволили определить, что вакцина из стамма бруцелл 82-ПЧ является достаточно иммуногенной.

Данные, полученные в ходе иммуноморфологических, иммунохимичес-ких, ультраструктурных и флуоресцентных исследована.дали возможность судить о степени выраженности иммуноморфологических изменешК в органах, определить уровень иммуногенности и реактогенности вакш ны из штамма 82-ПЧ и найти оптимальные дозы ее применения. Установлено, .что вакцинный штамм бруцолл 82-ПЧ может с успехом использо-

ваться для специфической-профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных жиеотных в угрожаемых хозяйствах без учета периода беременности животного. Ревакцинации крупного рогатого скота против бруцелло-за необходимо проводить через 10-12 месяцев. Изучена локализация и уровень содержания цитоплазматических катионных белков в клетках иммунокомпетентных органов телок, иммунизированных вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ, а также животных, зараденных вирулентной культурой бруцелл.

Внедрение результатов исследований. Результаты проведенных исследований, сформулированные в диссертации, внедрены в учебный процесс на кафедре патологической анатомии Казанского ветеринарного института, а также используются в научно-исследовательских работах ВНИВИ.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работа долохены на республиканских научно-производственных конференциях Казанского ордена Ленина ветеринарного института имени Н.Э.Баумана (I988-I99I гг), на межвузовской научно-практической кенфоренцш' >.с -лодых ученых (Фрунзе,1990), XI Всесоюзной научно-производстьеинсП конференции по патологической анатомии болезней сельскохозяйственных животных (Харьков, 1990), мзгккафедральном заседании КВН (Казань, 1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ и оформлены 2. рационализаторских предложения.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 288 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, закличения, выводов, практических предложений, описка литературы, включающего Ю5 источников, из которых иностранных, и приложения. Текст илявстрирован II таблицам!!, 101 рисунком.

Основные положения рабогы, выносимые на защиту:- проведенная иммуноморфологическая оценка сакц.'нш из ат; :иа бруцелл 82-ПЧ показывает, что вакцина обладает Еыражешшки иммунсгек-ными свойствами, не абортогыша, хорошо пршхшдатся в осганизмо привитых животных и ее применение в дозах 100 и 200 млрд.«.к. создает достаточно напряженный икмунитзт против вирулентной культуры бруцелл, что позволяет рекомендовать вакцину для профилактики бруцолле-за в угрожаемых хозяйствах;

- вакцина из птамма бруцелл 82-ПЧ при ревакцинации у со мгле г липфе-

идно-гиперпластические, макрофаговьные и ллазмоклоточные реакции в органах и тканях привитых животных, при этом степень выраженности этих изменений зявисит от кратности и интервалов инокуляции препарата, поэтому повторную иммунизацию животных этой вакциной следует проводить через 10-12 месяцев после первичного введения антигена;

- вакцина из итамма бруцелл 82-ПЧ фагоцитируется лимфоидно-макрофа-гальными клэтками, вызывает образование и усиление функции лизосом, слияние последних с фагосомами и последующее переваривание в фаго-лизосомах бруцелл вакцинного штамма.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.Т. Материал и методики исследования

Иммуноморфологическую оценку эффективности вакцины из птамма бруцелл 82-ПЧ, уровень содержания Т- и В-лимфоцитов в крови, кати-оиных белков в мазках-отпечатках, антителообразующих клеток в лимфатических узлах и селезенке при иммунизации указанным вакцинным препаратом проводили путем патоморфологических, гистохимических, иммунофлуоресиентных и иммунологических исследований. Работу выполняли на материале, взятом от крупного рогатого скота и морских свинок, использованных в совместных научно-производственных опытах на кафедре патологической анатомии Казанского ордена Ленина ветеринарного института им.Н.Э.Баумана и в лаборатории бактерийных инфекций Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института в I987-I99I годах (номер Госрегистрации 01860030355). Опыты проводили на поголовье крупного рогатого скота в количестве 46 животных и 161 морской свинке, разделе..них на 5 подопытных групп по принципу аналогов. Всего было проведено четыре серии опытов.

В ..ервой серии опытов, включающей две группы животных, изучали динамику иммуноморфологических и ультраструктурных изменений в органах морских свинок, иммунизированных вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ. В этой же серии изучали патоморфологические изменения в органах морских свинок после однократной и многократной вакцинации. Первую группу животных, состоящую из 54 морских свинок, иммунизировали вакциной из птамма 82-ПЧ в дозе 3 млрд.м.к.(по оптическому бактерийному стандарту мутности). Вакцину вводили подкожно в медиальную поверхность правого паха. На каждый срок для иммуноморфологических исследований использовали по три животных, а для ультраструктурных

- по два. Исследования проводили на Г,2,3,5,7,10,14,21,28,45,60 и 120 сутки после иммунизации. Вторая группа состояла из 30 морских

свинок, разделенных на две подгруппы. В первой подгруппе било 15 животных, а во второй - 12. Первуа подгруппу по три животных ревак-цинировали вакциной с интервалом 20 дней, 1,2,4,б месяцев. Вторув подгруппу по четыре морские свинки иммунизировали вакциной трижды с интервалом 20 дней, Г и 2 месяца. Убой животных первой подгруппы, ровакцинированных вакциной через 20 дней, проводили спустя 20 дней, ревакцинированных с интервалом 2,4,6 месяцев - через 2 месяца, а морских свинок, иммунизированных дважды с интервалом I месяц, убивали спустя 2,5 месяца после последней вакцинации. Убой животных второй подгруппы, иммунизированных трижды с интервалом 20 дней. I и 2 месяца, проводили соответственно через I, 1,5 и 2 месяца. Контролем служили три интактные морские свинки.

Во второй серии опытов (третья группа), в которую входило четыре подгруппы, было соответственно 17, 30, 15 и 15 животных з каждой. Морские свинки первой подгруппы в количестве 9 животных иммунизировались однократно, были заражены вирулентной культурой бру-целл штамма 54 в дозе 50 м.к. через 20 дней и исследовались спустя 20 дней после заражения. 8 морских свинок этой • э подгруппы (по 4 животных) были заражены вирулентнсй культурой бруцелл в дозах 50 и 200 м.к. ч^рез 4 месяца после вакцинации и убиты спустя 30 дней после заражения. Вторая подгруппа свинок ревакцинировалась вакциной с интервалом 20 дней, 2 и 4 месяца соответственно по 9, 15 и б животных. Для проверки напряженности иммунитета морские свинки, ра-вакцинированные через 20 дней, заражались вирулентной культурой бруцелл в дозе 50"м.к. спустя 20 дней, а ре акцкнированные через 2 и 4 месяца после вакцинации инфицировались через 2 месяца. Мовские свинки третьей подгруппы прививались трижды с интервалом 20 дней и 2 месяца по 8 и 7 животных соответственно. 8 св!«нок иммунизированных трижды с интервалом 20 д зй, бьт. заражены вирулентной культурой бруцелл в дозе 50 м.к. через 20 дней, г 7 жиеотных, вакцинированных также трижды, но с интервалом 2 месяца, заражались в дозе 50 м.к. спустя 2 месяца после последней иммунизации. 15 морских свинок четвертой подгруппы служили контролем и были заражены вирулентной культурой бруцелл штамма 54 без предварительно . иммунизации в дозе 50 и 200 м.к. соответственно по 12 и 3 жиеотных. Убой морских свинок второй, третьей и четвертой подгрупп проводили чере^ месяц после заражения.

В третьей серии опытов (четвертая группа) 1^учали эффективность различных доз вакцины из отаммг бруцелл 82-ПЧ на крупном рогатом скоте. Четворту» группу животных составили 40 телок, разделенных ,ча

10 подгрупп. В 1,2,3,4 и 5 подгруппах находилось по 3 подопытных животных, а в 6,7,8,9 и 10 - по 5 телок в каждой. Первая подгруппа - животные, вакцинированные вакциной в дозе 50 млрд.м.к., вторая -телки, иммунизированные вакциной в дозе 100 млрд.м,к., третья - животные, привитые вакциной в дозе 200 млрд.м.к., четвертая - телки, вакцинированные вакциной в дозе 400 млр; м.к., пятая подгруппа -интактные животные. Все телки 6,7,8 к 9 подгрупп были иммунизированы вакциной соответственно в дозах 50,100,200 и 400 млрд.м.к. и для проварки напряженности противобруцеллезного иммунитета были заражены вирулентной культурой бруцелл через 3 месяца после вакцинации. Животные 10 подгруппы, зараженные вирулентной культурой бруцелл втакма 54 без предварительно;! иммунизации; служили контролем. Всех толок 1,2,3,4,5 подгрупп исследовали через два месяца после вакцинации (5 подгруппу - без вакцинации), а телок 6,7,8,9,10 подгрупп убили через месяц после заражения на санитарной бойне Казанского мясокомбината.

Вакцину вводили подкожно в правув верхнею треть шеи, доза заражения культурой вирулентного итамма 54 для животных 6,7,8,9 и 10 подгрупп составила 100 млн.м.к. Культуру вводили в конъвнктивальный меаох обоих глаз в объеме 0,1 мл (по 0,05 мл).

В четвертой серии опытов (пятая группа) изучали эффективность вакцины из птамма бруцелл 82-ПЧ на крупном рогатом скоте при ревакцинации. Пятая группа состояла из 6 коррв, ревакцинированных через 10 и 12 месяцев после иммунизации по 3 животных на каждый срок ревакцинации. Доза вакцины при ревакцинации и вакцинации составила 100 млрд.м.к. Убой подопытных коров проводили через два месяца после позорной иммунизации в Цхинвальском мясокомбинате Юго-Осетинской автономной области Грузинской ССР. Вакцину вводили также подкожно в праву» верхние треть шеи.

Экспериментальнув часть работы выполняли совместно со старшими научными сотрудниками лаборатории бактерийных инфекций и патоморфо-логки ВН11ВИ (г.Казань) Г.А.Белозеровой и В.А.II иокиным.

Материалом для патоморфологиче^лих исследований служили кусочки внутренних ог^анов всех жих тных, использованных в опытах.

Патматериал фи-сировали в 10)2-ном растворе нейтрального формали на. спиг--формоле (9:1), холодном этаноле и в растворе формалина по Лилли. Уплотнение материала проводили путем заливки в парафин по об непринятой методике (И.И.Меркулов,1969). Для гистохимических исследований использовали свежезамороженные криостатные срезы. Гистосре-зы окрашивали гематоксилином и эозином, по ван-Гизону, по Романове-

кому-Гимза. Содержание РНК определяли по Браие, гликогена - по Ша-бадашу, кислую и щелочную фосфатазы - по Го.чори. Для выявления бру-целл в лимфоидных органах и тканях гистосреэы окрацивали по модифицированному методу Ци. -Нидьсена С о. a. Alt on, ь.и.jones 1968) и по Козловскому. Т-лимфоциты в периферической крови определяли методом спонтанного розеткаобразования с эритроцитами барана (E-РОК) по Д.ПЛея и соавт. (1978). В-лимфпциты в периферической крови определяли иммунофлуорес ¡ентным методом по B.Mayer, w.sehlo-

gar (1977). Лизосомные катионные белки выявляли окраской мазков-отпечатков лимфатических узлов и <",лезенки раствором бромфенолово-го синего по методу М.Г.Иубича, а для флуоресценции - раствором примулина. Аутоантителообразувщие клетки определяли метод( ¡ Йерне в модификации Н.Н.Клемпарской (1972).

Антителообразующие клетки, бруцеллезный антиген и иммунные комплексы антиген-антитело в лимфоидных органах и тханях выявляли прямым и непрямым иммунофлуоресцентным методом Кунса. Подсчет анти-телообразусщих плазматических клеток в срезах лимфоузлов и селезенки проводили в пересчете на 5 тысяч клеток препарата. Идентификация антителообразувдих плазмоцитов осуществляли путем подсчета 100 светящихся клеток в каждом препарате.

Иммунофлуоресцентные исследования проводили на люминесцентном микроскопе "ЛЙКАМ-И1" отечественного производства. Для подтверждения специфичности иммунофлуоресцентной реакции ставили соответствующие контроли.

Для электронномикроскопических исследований использовали кусочки тканей с места введения вакцины из атамма бруцелл 82-ПЧ. регионарного правого пахового и контррегионарного левого лахоЕого лимфоузлов, а также кусочки селезенки чммунизиро^аншх морских свинок. Срезы пс..учали на ультратоме LK3-III и просматривали а электронном микроскопе JEH-IC0B при инструментальном увеличении 5000-30000 крат. Материал фотографировали на фотопластинки для ядерных исследований, маркировали их и печатали с них электроно-граммы.

Статистическую обработку цифровых данных проводили с заданной надежностью (достоверностью) Р ^ 95$ или уровнем значимости ч = 0,05 на ЭВМ "Электроника И-56" по разработанным программам (П.Х. Тукшаитов, Н.Х.Нигматуллин, 198'О.

2.2. Патоморфологические и ультраструктурные изменения органов и тканей морских свинок после одно-, дву-и трехкратной иммунизации

Наиболее выраженные иимуноморфологические, патогистологические и ультраструктурные изменения в органах и тканях морских свинок, иммунизированных вакциной из зтамма бруцелл 82-ПЧ, развились на месте введения вакцины, а также в регионарных к месту введения вакцины правых паховых и контррегионарных левых паховых лимфоузлах и селезенке.

В первые сутки после иммунизации в вывеуказанных органах и тканях морфологические изменения обнаруживались лишь при субмикроскопическом исследовании. В лимфоидных органах животных наблюдалась нараставшая функциональная активизация макрофагов селезенки и лимфоузлов. Процесс активизации фагоцитоза, стимулированный вакцинацией, затрагивал и лимфоциты.'Об этом свидетельствовало наличие бруцелло-подобных частиц в цитоплазме отих клеток регионарных лимфоузлов.

Через 3 дня поело иммунизации патоморфологические изменения в тканях,на месте введения вакцины,характеризовались серозно-воспали-тельным отеком, распадом гранулоцитов и лимфоцитов, местами на значительном протяжении. Прямым иммунофлуоресцентнык методом Кунса в клетках воспалительного экссудата выявили бруцеллезный антиген. При ультраструктуриом исследовании отмечался активный фагоцитоз и признаки функциональной активизации всох исследуемых иммуноконпетентных кл ток. В лимфоцитах регионарных лимфоузлов продолжали выявляться бруцеллоподобные частицы, Последние обнаруживались и на 5-е сутки после введения вакцины. К этому сроку исследования в цитоплазме макрофагов .. ли! *юцитов селеэенк : присутствовало множество лизосом и остаточных телец, что свидетельствовало зб уже переваренных бруцел-лах.

Начиная с 7-го дня после вакцинации, отмечали специфические и аллергические изменения, наивысшая выраженность которых наступила к 14-м суткан и оставалась на этом урорче до 28-го дня после иммунизации. К специфическим изменениям относились гиперпластическо-макрофа-альная и плазм.клеточная реакции, а также повышенный синтез РНК и глобулинов в лимфг:1д..«1х органах. Аллергические изменения характеризовались к.коидным набуханием стенок мелких кровеносных сосудов, эо-зинофилией, гомогенизацией ретикулярной стромы, отеком и разрыхлением периваскулярной ткани трабекул и очаговым скоплением лимфоидно-гастиоцитарш' : клеток в трабекулах и паренхиматозных органах. При электронномикроскопическом исследовании в контррегионарных лимфоуз-

lax через 7 дней после введения вакцины обнаруживались бруцеллопо-мбные частицы с деструктивной клеточкой стенкой, что является ре-)ультатом частичного переваривания бруцелл вакцинного птамма. На ГО-е сутки в макрофаг х лимфоузлов вновь выявлялись фагосокы с по-¡улереваренными бактериями, а на 14-е - в фагосомах макрофагов отмечались как сугубо клеточные фрагменты, так и фрагменты, содержаще остатки бруцелл. Видимо, в этом случае имел место фагоцитоз слеток, нагруженных бруцеллак !, Кроме того, было отмечено множество длящихся стромалышх клеток, которые, вероятно, замещали погибшие (ммунокомпетентные клетки. Разрастание стромы наблюдалось в лимфоузлах v. через 21 сутки, а также Оыли отмочены признаки аутофагии «акрофагов. На 28 день ультраструктура подавляющего больяикства ис-зледуемых клеток была близка к nopv.e.

При гистологическом исследовании как з лимфоузле, так и в селезенке выявили Еысокув активность щелочной фосфатазы. В мякотных тя-ках лимфоузлов и красной пульпе селезенки отмечалось значительное «оличество плазматических клеток разной степени зрелости с пирони-юфилией цитоплазма.

В контррегионарных и отдаленных лимфоузлах гиперпластическиэ и 1ролиферат :вньш процессы по интенсивности- уступали таковь-м в регио-шрных.

Через 45,60 дней после вакцинации иммуноморфологическио процес-;и имели твнленциа к затуханию, к 120 дна они приходили к морфо-[1ункциональному равновесия.

Следовательно, вакцина из штамма бруцел.. 82-ПЧ вызывает не толь-со выраженные, но и обратимые иммуноморфологическио изменения з органах и тканях привитых животных. Фагоцитоз бруцелл вакцинного зтамма лимфоцитами и макрофагами иммунокомпетен'чых органов сопровождается перестройкой структурных элементов этих клеток, лизисом микроорганизмов в фаголизосомах и пероводок их в иммуногеннуп форму.

Резкое усиление лимфоидно-гиперпластичоской, макро? гальной и иазмоклеточной реакций наблюдалось в органах и тканях морских сви-юк, иммунизированных вакциной из. птамма бруцелл 82-ПЧ несколько заз с разными интервалами. Причем, у животных, привитых дву- и трех-«ратно с интервалом 2 месяца и убитых спустя 2 месяца после последуй вакцинации, в регионарных лимфоузлах обнаруживались специфич^с-сие эпителиоидно-клеточные гранулемы, но без признаков некроза. Местами эти гранулемы подвергались фкбротизации, члэ подтверждалось ок-эаской по ван-Гизону. При трехкратной иммунизации морских- свинок, ю сравнения с ревакцинированными, наблюдалось более выраженное збеднение лимфоидных органов лимфоцитеми, кукоидное набухание; сте-

нок кровеносных сосудов, образование специфических зпителиоидно-кле--очных гренулем в правых паховых лимфоузлах и развитие склеротических изменений во внутренних органах.

2.3. Динамика уровня содержания иимунокомпетентных клеток в крови и органах вакцинированных морских свинок

Результаты исследования показали, что в крови интактных морских свинок уровень Т-лимфоцитов составляет 20,09+1,34^, В-лимфоцитов -11,16+0,83$. На 7 день после введения вакцины из штамма бруцелл 82-¡14 процентное содержание Т-лимфоцитов достоверно увеличивалось в 1,34 pas;., 3-лимфсцитоъ - 1,45 раза, пик их наблюдался на 14-й день и составил соответственно 4Г,00+2,51$ и 24,14+2,262 (Р<0,05). Затем отмечалось постепенное снижение, на 28 день их уровень приблизился к показателям интактных животных и стабилизировался до 120-го дня (срок наблюдения). Следует отметить, что на 3-й день после вакцинации происходило заметное снижение процентного содержания Т-лим-фоцитов в периферической крови с последующим повышением на 5-е сутки, что, по-видимому, связано с перераспределением их в тканях на месте введения антигена и в регионарных лимфоузлах. Об этом свидетельствовали также результаты гистохимических исследований.

Количество пл&змоцитов, Бырабатыгаюцих иммуноглобулины, в лимфоузле и селезенке у интактных животных составило соответственно 33,04+1,57 и 20,32+1,20. Иммунизация усиливала образование плазматических клеток в регионарном лимфоузле и селезенке, начиная с 1-го дна, пик набдвдался спустя 10 дней после введения вакцины и составил лимфоузле 157,0+1,16, а в селезенке - 136,32+3,51. Начиная с 14-го днг, отмечалась снижение количества плазмоцитов как в лимфоузле, так и в селезенке, и постепенное приближение их к исходным данным, составляя на 120-й день 35,03+1,51 и 24,07+^,18 соответственно. Причем, р:.?;,:1ца в показателях подопытных и интактных животных была статисти-достоверной (?<0,01) во всо сроки исследо-"шия. кроме 120 дня, Вакцинация оказала влиянио и на с стяв плазматических клеток .•¡•.:.чф5узла "л селезенки. В лкмф^зло интактных животных количество ...-■c.'iiix нлазмоцитои составило 5,48+0,57$, в селезенко - 6,67+0,61$. ,Ь.>!$'к,!зс.ця« способствовала достовэрпоыу увеличении количества зре-г,;с.з:'.оц".тов s лимфоузле нй 3,5 и 7 сутки, к 10 дне их уровень инизидся до 6,64+0,У1р. Достоверное увеличение отмечалось до конца опыта и через 120 дней после вакцинации количество зрелых плазмоцитов составляло 15,14+0,47$ (Р<0,05). В селезенко количество зрелых плвзиоцшов к 3-у дню опыта увеличилось почти плоде. Затем их уро-

вень повышался и к 7-у дно составил 12,32+0.63$ (Р<0,05). До 21-го дня наблпдалось снижение этого показателя, в дальнейшем происходило статистически достоверное увеличение и к 120-у дне составляло 15,46+ 0,602.

Наряду с антителообраэующими клетками мы выявляли иммунные комплексы янтиген-алтитоло, откладываемые в стенке сосудов регионарного лимфоузла и селезенки, а также в базальной мембране капилляров сосудистого клубочка почек. Имму'офлуоресценцля их была равномерно диффузного характера. Начиная с Г4-го дня после иммунизации в стенке мелких сосудов регионарного лимфоузла и селезенки обнаруживалось свечение иммунных комплексов, иь.знсивность которых к 21-у дня усиливалась. йммунофлуоресценция наблюдалась до конца срока исследования, но к 120-м суткам интенсивное/ь свечения была незначительной.

Изучение динамики аутоантителообразувпих клеток в периферической крови гакцинированных животных показало, что у интактных морских свинок бляшкообразувщие клетки составляли в крови 2,35+_0,17#. С 1-го до 7-го дня опыта наблпдалось резкое повышение количества аутоанти-телообразующих клеток от 5,01+0,64 до 28,77+2,(Р<0,05). Затеи содержание их уменьшалось, достигая показателей интактных животных, и в последствии стабилизировалось на этом уровне до конца наблюдения.

Таким образом, вакцина из птпмма бруцелл 32-ПЧ является достаточно иммуногенной, способствует 'повыпонию уровня содержания Т- у В-лимфоаягоз в крови,' образованию в лккфоидных органах больного количества антителообразуюяих клеток, их созревании и переходу в более зрелые формы.'Ловрсвдасчес действие Баг-'ины на организм из высокое и нормализуется к концу вакцинного процесса,

2.4. Гистологическое и гистохимическое изучение напряженности иммунитета V корских Г":ис:; г "«еле однократное и многократной вакцинация

Защитно-приспособительные реакции в органах и тканях аи?оук:гх, привитых одно-, дву- и трехкратно с разными интервала!«!, посла заражения вирулентной культурой бруцелл усиливались. Ярко ыражешмл иммуноморфо.югичеекке изменения наблюдались, т. осиог.к и, а регионарном правом паховом лимфоузле и селезенке. Здесь отмечались р^озире-нио герминативных центров фолликулов, уморенная гипорпл"зия мяко-г-ных тяжей лимфоузлов и лкмфондноЯ ткани периаргериальних ел я .'¡и * селезенки. Наряду с фолликулеми с распиронными герминативным.» центрами, встречались и вног.ь формиругцкесг.. Подкапсулярныз синусы лимфоузла были сдавлены гиперплазированной лкмфоидной тканью, мостами на значительном протяжении заполнены болыим количеством хромат: о-

бух частиц распавзихся лимфоцитов. Мозговые и промежуточные синусы узла и венозные'синусы селезенки расширены, содержали малые и средние лимфоциты, макрофаги и клетки плазмоцитарного ряда, которые обнаруживались по ходу трьбекул. Стенка мелких кровеносных сосудов была в состоянии мукоидного набухания. В мякотных тяжах лимфоузла v красной пульпе селезенки отмечалось значительное количество плазматических клеток разной степени зрелости.

Интенсивность плазнокдеточной реакции в контррегионарных и отда ленных лимфоузлах была ниже, чем в регионарных. Кроме того, наиболее выраженные иммуноморфологические изменения отмечались у морских свинок, зараженных вирулентной культурой бруцелл в дозе 200 м.к. спустя • месяца после вакцинации. В их регионарном лимфоузле и селе зенке обнаруживались специфические эпителиоидно-клеточные гранулемы но без признаков некроза. Эпителиоидно-клеточные гранулемы отмечались также в регионарных и контррегионарных лимфоузлах животных, им мунизированних дву- и трехкратно с интервалом 2 месяца, зараженных вирулентной культурой бруцелл в дозе 50 м.к. через 2 месяца и убитых спустя месяц после заражения.

В печени, почках, миокарде и надпочечниках обнаруживались полис кровле сосудов, зернистая дистрофия паренхиматозных элементов и оча говая пролиферация лимфоидно-гистиоцитарных клеток. В легких отмечались. утолщение межальвеолярных перегородок за счет инфильтрации их лимфоидными клетками, в периваскулярной и 'перибронхиальной ткани опгана наблюдались компактные скопления лимфоидно-гистиоцитарных клеток, местами с образованием лимфоидных фолликулов.

У контрольных морских свинок лимфоидно-гиперпластическая и мак-рофага-мтя реакции в органах и тканях проявлялись сильнее. Кроме того, в регионарных и контррегионарных лимфоузлах обнаруживались оС вирные зоны некроза как в корковом, так и мозговом веществе. В отда ленных лимфоузлах и селезенке встречалось множество эпителиоидно-клеточных гранулем, нередко с признаками некроза. При окрашивании по кодифицированному методу Циля-Нильсена и Косовского в цитоплазме элителиоидных клеток обнаруживал., бнцеллы. Специфичность послел них подтверждгчась иммунофл!^ресцентним исследованием по Кунсу. В печени большинства морских свинок местами встречались гранулемы, подвергагциеся некрозу.

Таким образом, вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ при одно-, дву-и даже трехкратной вакцинации вызывает выраженные иммуноморфологические измеиения в органах и тканях привитых животных и создает дос таточно напряженный иммунитет против экспериментального заражения.

2.5. Иммуноморфологические изменения в органах и тканях телок, привитых ЕакциноП из штамма бруцелл 82-ПЧ в разных дозах

Патогистологические изменения у всех вакцинированных телок, независимо от дозы вакцины, выражались однотипно. В регионарных (правом предлопаточном) лимфоузлах и селезенке отмечались расширение герминативных центров фолликулов, содержащих в основном бластныа клетки, малые и средние лимфоциты, а также фигуры митоза. Чякотные тяжи лимфоузлов и лимфоидная ткань периартериальных гильз селезенки были умеренно гиперплазированы, представлены в основном малыми и средними лимфоцитами, плазмоцитами разной степени зрелости. Стенка арториол, венул и капилляров подвергалась мукоидному и фибриноидно-му набухании. Одновременно встречались сосуды без изменений их стенок. Мозговые синусы лимфоузла и венозные синусы селезенки расширялись. В некоторых мозговых синусах отмечался выраженный лимфоцитов, а у ворот лимфоузла наблюдался повышенный распад лимфоцитов. Пери-васкулярная ткань трабекул как в лимфоузлах, так и в селезенке была разрыхлена и отечна. ¡Г

Лимфоидно-гиперпластический и макрофагальный процессы наблида-лись и в контррегионарных и отдаленных лимфоузлах, но интенсивность плазмооеточной реакции в них проявлялась слабее.

Зернистую дистрофии паренхиматозных .элементов обнаруживали в печени, почках и миокарде. Здесь отмечались полнокровие сосудов и очаговая пролиферация лимфоидно-гистиоцитарных клеток. В почках подопытных животных наблюдалась умеренная пролиферация эндотелия капилляров сосудистых клубочков, а в просвете между почечным клубочком и капсулой отмечалось содержание небольшого количества белкового субстрата. В некоторых сосудистых клубочках стенка расширенных капилляров выступала в виде проволочных петель. В легких перибронхиальные и периваскулярные лимфоидные образования б1"1И умеренно гиперплазированы. Следует отмотлть, что иммуноморфологические изменения в ли.чфо-идных и паренхиматозных органах телок, привитых Еакцикой из штамм-бруцелл 82-ПЧ в дозе 400 млрд.м.к., выступали сильнее, чем у животных, вакцинированных в других дозах. У этих телок в мозговом веяест-ве регионарного лимфоузла обнаруживались неболызие у.чиотки вновь образованной соединительной ткани, а ретикулярная осноез селезенки была огрубевлей. В контррегионарных и отдаленных лимфоузлах отмечались выраженные склеротические изменения трабекулярного аппарата, в мозговом вецестве местами образовывались неболызие поля склерозированной фиброзной ткани. У одного животного из этой подгруппы фолликулы лимфоидной ткани миндалин имели расширенные герминативные центры,

которые содержали преимущественно бластные клетки. Лимфоидная ткань была гиперплазирована, инфильтрирована в основном малыми и средними лимфоцитами. Кр..лты миндалин-содержали значительное количество некротического детрита, а эпителий их был случен'.

Во все сроки исследования изменения надпочечников были хорошо выражены. Отмечалась умеренная гипертрофия клубочковой и сетчатой зон органа, в интерстициальной ткани встречались очаговые скопления лимфоидно-гистиоцитарных клеток. В матке, яичнике и молочной железе всех подопытных телок существенных морфологических изменений не отмечалось.

Следовательно, вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ вызывает более выраженные лимфоидно-гиперпластическио, макрофагальные и плазмокле-точные реакции в лимфоузлах и селезенке, активацию элементов системы мононуклеарных фагоцитов во внутренних органах животных, привитых в дозах 100 и 200 млрд.м.к., тогда как у животных, вакцинированных в дозе 50 млрд.м.к. иммуноморфологические изменения в органах проявлялись слабее, а у телок, привитых в дозе 400 млрд.м.к., в лим-фоидных органах отмечались явления делимфотизации и фибротизации тканей стромы.

У телок, зараженных вирулентной культурой бруцелл через 3 месяца после вакцинации, лимфоидно-гиперпласгическая, макрофагальная и плазмоклеточная реакции в лимфоидных органах проявлялись еще сильнее. Особенно ярко выраженные изменения отмечались у животных, зараженных после введения вакцины в дозе 400 млрд.м.к. У них обнаруживались сильно выраженные аллергические изменения, проявлявшиеся в виде мукоидного набух"ния стенок сосудов, отека и разрыхления перивас-кулярной ткани трабеку;.. очагового скопления лимфоидно-гистиоцитарных клеток в паренхиматозных органах, усиления склеротических изменений .

У беременных телок из этих опытных подгрупп плоды были развиты нормально. В плаценте и катке, а также в органах плода макроскопических изменений не обнаруживалось. Гистокартина матки толки, зараженной после введения вакцины из втамма бруцелл 82-ПЧ в дозе 50 млрд.м.к., соответствовала морфологии этого органа при шестимесячной беременности. Местами в толце железистой ткани встречались очаговые геморрагии и унеренно выраженный отек интерстициальной ткани. В предлопаточном лимфоузле ее плода рисунок фолликулярного строения был сглажен. Отмечалась лимфоидная гиперплазия мякотных тяжей, умеренная макрофагальная реакция в синусах и наличие властных клеток в мякотных шнурах. В селезенке плода наблюдалось резкое полнокровие органа, наличке сформироваться лимфоидной ткани в периартериаль-

них гильзах и большое количество мегакариоцитов, разбросанных по всему полп зрения. Печеночные клетки были с явлениями зернистой, а местами гидропической дистрофии. В паренхиме печени встречались единичные мегакариоциты, очаговые скопления лимфоидно-гистиоцитарных клеток и очаги окстрамедуллярного кроветворения.

Рисунок строения матки животного, зараженного вирулентной культурой бруцелл спустя 3 месяца после иммунизации вакциной в дозе 100 илрд.м.к., был сохранен. Микрокартина соответствовала морфологии матки шестого месяца беременности. У плода в предлопаточном лимфоузле отмечалась гиперплазия лимфоидной ткани, расяирение центральных синусов и отек трабекулярного аппарата. В селезенке плода рисунок строе 1ия был сглажен. Лимфоидная ткань представлена лиаь островками в области периартериадышх гильз. Наблюдалась депонация красной пульпы кровью и в ней обнаруживалось значительное количество мегака-рионитов. В печени плода замечены очаги экстрамедуллярного кроветворения. Отмечалась белковая дистрофия гепатоцитов и сильное расширение кровеносных сосудов органа.

Морфология матхн и карункулов телки, зараженной после вчкцина-цш в дозе 200 илрд.м.к., соответствовала функциональному состоянии в соответствии со сроком беременности (семь месяцев). В предлопаточном лимфоузле плода наблвдалась умеренная гиперплазия лим^ондноП ткани, но без четкого рисунка фолликулярного строения. В селезенке плода рисунок фолликулярного строения не выявлялся. 3 области пери-артериальных гильз были заметны лиаь небольшие скопления ли.чфоидных клеток. Красная пульпа депонирована кровьв, в нсЯ обнаруживалось значительное количество нягакариоцитов. В паренхиме печени встречались очаги экстра::здулллрного кроветворения и распредпенныо по всему органу единичные негакар'/оциты. Сосуды били умеренно налиты, ге-патоциты с явлениями белкоЕс;' дистрофия.

У толки, привитой в '¡00 илрд.м.к. i* зараженной спустя Э месяца после ■•ммукпзации, пчбясдслась гиперплазия клеток лалэзистоЗ структуру натки. Сосуды кптерстгш:я оргяна был:: умеренно налиты, »остами в неточных »едеэах встречались очзгог.уе геморрагии. Някро-карткиа соотг«гстпо»зяа чсрфо.-.сгиа беременной ызткз восьмого месяца. У плода в предлсяаточноч лиифэузлз г^супск {олдккухярн .'о строения отсутствовал, хотя и отмечалось доетяточчо полнее формирование ctsyivrypu органа. Ллнфоадная ткань m^xotkjx т.<ггса била умеренно гя-перплазярСЕан=», .т-блодался "дгсЕвамгтигнчЯ катар" центральных сину-соп у умеренное полнокровие сосудов органа. В селезенке плода отме-"«есь rapa-хзннсл депонация про ra з краснея пульпе и умеренная гиперплазия ликвидной тканя периартериалышх гильз. Рисунок фоллику-

лярного строения отсутствовал, небольшое количество мегакариоцитов встречалось в красной пульпе органа и по периферии лимфоидных скоплений" периартериальных гильз. Внутридольковые сосуды печени были сильно налиты, отмечалось набухание звездчатых ретикулоэндотелиоци-тов.

У животных, зараженных вирулентной культурой бруцелл без предварительной иммунизации, лимфоидно-гиперластическая, макрофагальная и плазмоклеточная реакции проявлялись сравнительно сильнее с образованием специфических зпителиоидно-клеточных гранулем, нередко с очагами некроза в центре. Последние выявлялись в предлопаточных, глубоких паховых и надвымянных лимфоузлах, а также в селезенке.

Таким 'образом, вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ в разных дозах вызывает выраженные иммуноморфологические изменения в органах и тканях вакцинированных животных и создает достаточно напряженный иммунитет против экспериментального заражения. Кроме того, этот вакцинный штамм не абортогенен и не вызывает поствакцинальных изменений в иммунокомпетентных органах плодов. Обобщая результаты иммуноморфоло-гических исследований, считаем, что оптимальными иммунизирующими дозами вакцины из итамма бруцелл 82-ПЧ являются 100 и 200 млрд.м.к.

2.6. Иммунофлуоресцентное исследование органов, тканей и определение уровня содержания лизосомных катион-ных белков телок, иммунизированных вакциной в разных дозах

Наибольшее количество антителообразуюаих клеток в лимфоузле и селезенке отмечалось у телок, привитых вакциной из птамма бруцелл 82-ПЧ в дозе 400 млрд.к.к., а наименьшее - у животных, вакцинированных в дозе 50 млрд.м.к. В большом количестве флуоресцирующие клетки обнаруживались в правом предлопаточном лимфоузле телок, иммунизированных в дозе 400 млрд.м.к.(ад.91+2,77), у животных, привитых в дозе 50 млрд.м.к., эти клетки составили 27,69+2,88, а у телок, вакцинированных в дозах 100 и 200 млрд.м.к., - соответственно 34,56+3,23 и 37,37+4,12.

Иммунизация вакциной в разных дозах оказала влияние и на состав антителообразуюцих клеток регионарного лимфоузла. Здесь преобладали незрелые плазмоциты и плазнобласты. У телок, привитых в дозах 50 и 400 млрд.м.к. их количество составляло 39,4+3,1; 20,3+2,3 и 36,6+ 2,9; 22,4+2,2$ соответственно, а у животных, вакцинированных в дозах 100 и~200 млрд.м.к., - 27,6+2,1; IV,3+1,9 и 29,1+1,9; 18.1+ l,Q%. Однако количество зрелых плазмоцитов у последних было значительно больие (49,8+1,2 и 48,2+1,4$), чем у телок, иммунизированных в дозах 50 и 400 млрд.м.к.(37,8+2,5 и 35,6+2,72).

Заражение вакцинированных животных вирулентной культурой бру-целл вызывало резкое повышение уровня антителообразупцих плазмоци-тов как в лимфоузлах, так и в селезенке. Причем, количество этих клеток в правом, левом предлопаточных, внутреннем паховом лимфоузлах и селезенке телок, иммунизированных вакциной из итамма бруцелл 82-ПЧ в дозе 400 млрд.м.к. было выае, чем у животных, вакцинированных в дозах 50, 100 и 200 млрд.м.к. У телок, привитых в дозе 50млрд. м.к., отмечалось самое низкое количество антителообразуюдих клеток в вышеуказанных лимфоидных органах. У животных, зараженных вирулентной культурой бруцелл без предварительной иммунизации, наблюдалось повы-аенное содержание плазматических клеток в левом предлопаточном лимфоузле (53,91+0,69) и селезенке (59.40+2.80).

Результаты исследований по составу антителообразувщих клеток животных, зараженных спустя 3 месяца после иммунизации, показали, что в регионарном лимфоузле зрелых плазмоцитов было больше у телок, вакцинированных в дозах 100 и 200 млрд.м.к.('»6,5+2,2 и 44,8+1,соответственно) по сравнении с животными, привитыми в дозах 50 и 400 млрд.м.к.(36,4+3,I и 32,8+2,1# соответственно). У контрольных телок количество плазмобластов и незрелых плазмоцитов было значительно вы-пе, а зрелых плазмоцитов обнаруживалось наименьаее число (25,8+1,5?) по сравнении с животными опытных подгрупп. При выявлении иммунных комплексов не удалось обнаружить разницы в интенсивности и характере свечения глобулинов и комплемента в стенке сосудов органов в зависимости от примененных доз вакцины из атамма бруцелл 82-ПЧ, В стенке артериол, венул, капилляров лимфоузлов, почек и селезенки подопытных животных иммунные комплексы антиген-антитело наблсдались также у телок, зараженных вирулентной культурой бруце."« через 3 месяца после вакцинации. Причем у телок, зараженных спустя 3 месяца после вакцинации в дозе 400 млрд.м.к., чясло сосудов со специфическим свечением иммуноглобулинов в их стенке 'чачительно превосходило количество сосудов с локализацией антител в лимфоузлах животных других подгрупп. .

При иммунизации телок вакциной из итамна бруцелл 62-иЧ в дозе 50 млрд.м.к. отмечалось статистически достоверное увеличение бляакооб-разугщих клеток (БОК) в периферической крова на 10 и 2-е сутки исследования (1,91+1,23 и 2,65+2,08^) по сравнении с интактными животными (0.39+0,12$). При вакцинации в дозах 100 и 200 млрд.м.к. достоверное увеличение БОК неб: )далось на 10-й день (2,88+1,33 и 2,29+ 1,42?) и 20-е сутки после иммунизации (2,67+1,47 и 2.69+1,38$). Вакцинация телек в дозе 400 млрд.м.к. на 20.30,40 и 50-3 дни после введения вакцина вызывала статистически достоверное увеличение холи-

чества БОК в периферической крови. Максимальное содержание БОК отмечалось у всех подопытных животных на 20-е сутки исследования, независимо от примененных доз вакцины. В дальнейшем наблюдалось постепенное снижение их уровня и через 60 дней после иммунизации процентное содержание этих клеток приближалось к исходным данным, кроме телок, привитых в дозе 400 млрд.м.к. У последних количество БОК даже на 90-е сутки Серок исследования) прег'иало показатели интактных животных почти вдвое.

По современным данным при бруцеллезе, протекающем хронически, в процессах фагоцитоза и переваривания возбудителя первостепенное значение имеют лизосомные катионные белки (КБ). При недостаточном уровне синтеза последних гранулоцитами бруцеллы имеют тенденцию к размножению и проявляет свое патогенное действие.

У телок, зараженных вирулентной культурой бруцелл спустя 3 месяца после вакцинации, происходило статистически достоверное увеличение как количества гранулоцитов, так и интенсивности флуоресценции лизосомальных КБ в селезенке и регионарном лимфоузле. Эти данные составили соответственно 30,2+2,44 и 29,8+4,78 по сравнению с иитакт-ными животными (10,4+2,77 и 14,8+3,33). Наблюдалось увеличение количества лейкоцитов с КБ, по сравнению с интактными. во внутреннем паховом лимфоузле контрольных телок, лот показатель у последних составил 22,3+2,66, у интактных животных он был равен 17,6+3,19. У телок, привитых вакциной и убитых спустя 2 месяца после иммунизации, отмечалось увеличение количества гранулоцитов с КБ в правом (23,2+ 3,21) и левом (20,4*2,78) предлопаточных лимфоузлах, но во внутреннем паховом лимфоузл. и селезенке наблюдалось небольшое снижение этого ингредиента.

Следовательно, вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ в дозах 100 и 200 млрд.м.к. вызывает образование большого количества зрелых плаз-моцитов в лимфоидных органах телок. Кроме того, у иммунизированных животных отмечается значительное число гранулоцитов с содержанием большого числа лизосомальных катионных белков. Побочное действие вакцины в вышеуказанных дозах является не высоким и носит обратимый характер.

2.7. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины на крупном рогаток скоте при ревакцинации

Иммуноморфологические изменения в органах и тканях коров, реим-мунизированных как через 10, так и 12 месяцев, выражались однотипно. Патогистологические изменения в регионарных лимфоузлах, в отличие от таковых у телох, привитых вакциной однократно в разных дозах, харак-

теризовались утолцением мякотных онуров и инфильтрации их больиим количеством плазмоцитов с богатым содержанием в цитоплазме РНК. Местами в центральных синусах отмечались явления линфостаза и выпот нежных сеток фибрина. Кроме того, у животных, ревакцинированных через 12 месяцев, в корковом веществе узла встречались небольших размеров скопления эпителиоидных клеток. Местами кровеносные сосуды кьл бы остались без связи о окружающей соединительной тканьп, а в некоторых из них наблюдалась облитерация просвета. В селезенке по ходу сосудол и трабекул встречались значительные скопления плазмоцитов. Эндотелий пенициллярных артерий пролиферировал. В перифолликулярной зоне отмечались клеточные элементы с повышенной активностьв кислой и щелочной фосфатазы. Лимфоидно-гиперпластическая и макрофагальная реакции наблюдались в контррегионарных и отдаленных лимфоузлах, но по выраженности они уступали таковым, отмеченным в регионарных.

В паренхиматозных органах (печень, почка, миокард) иммуноморфо-логические изменения характеризовались зернистой дистрофией паренхиматозных клеток и наличием в интерстициальной ткани очаговых скоплений лимфоидно-гистиокитарных клеток. Местами в легких отмечалось очаговое утолщение межальвеолярных перегородок за счет инфильтрации нх лимфоидными ¡слетками. Последние встречались•также в периваскуляр-ной и перибронхиальной ткани органа. В надпочечниках наблюдалось рас-вирение коркового вещества за счет гиперплазии клеток пучковой и сетчатой зон. В матке, молочной железе и яичниках патсморфологичес-кие изменения не обнаруживались.

При иммунофлуоресцентном исследовании в лимфоидных органах выявлялось большое количество антителообразувщих клеток. Количество их у животных, ревакцинированных через 10 и 12 месяцев, составляло в предлопаточном лимфоузле соответственно 54,2242,76 и 51,14+3,05, селезенке - 43,31+2,98 и 42,07+2.69, левом предлопаточном - 38,39+2,88 и 35,65+3,16, во внутреннем паховом лимфоузле - 24,48+2,93 и 23,91+ 3,29. Свечение иммунных комплексов антиген-антитело в стенке сосудов лимфоузла и селезенки, а также в почечных клубочках обнаруживалось у всех подопытных коров.

Таким образом, Еакцина из отамка бруцеля 82-ПЧ при ревакцинацьл через 10 и 12 месяцев вызывает выраженные инмунонорфо.-чгические изменения во всех внутренних органах иммунизированных животных.

3. В Ы В' О Д Ы

Г. Живая вакцина из втамма бруцелл 62-ПЧ вызывает выраженную им-муноморфологическую перестройку организма привитых животных, проявляющуюся лимфоидно-гиперпдастической. макрофагальной и плазмоклеточ-ной реакциями в лимфоузлах и селезенке, а также активацией клеток ретикуло-гистиоцитарной системы во внутренних органах. Эти изменения являются обратимыми и у морских свинок затухают спустя 120 суток после иммунизации.

2. Фагоцитоз бруцелл вакцинного штамма 82-ПЧ лимфоцитами и макрофагами иммунокомпетентных органов сопровождается перестройкой структурных элементов этих клеток, лизисом микроорганизмов в фаголи-зосомах и переводом их в иммуногенную форму.

3. Иммунизация вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ сопровождается повышением уровня содержания Т- и В-лимфоцитов в периферической крови, максимальное количество которых наблюдается на 14-й день вакцинации. Нормализация уровня содержания этих клеток в крови происходит через месяц после инокуляции препарата.

4. Количество антителообразующих клеток в регионарном к месту введения вакцины лимфатическом узле и селезенке достоверно возрастает к 10-м суткам, превышая показатели интактных животных, в лимфоузле в 4,8 раза, а в селезенке - в 6,7 раза. По мере удлинения поствакцинального срока в составе антителообразующих клеток лимфоузлов и селезенки процентное содержание молодых плазмоцитов уменьиа-ется, а зрелых - увеличивается и на 120-е сутки превышает уровень таковых у интактных животных в 2,5-3 раза.

5. Побочное дей». .'вие вакцинного штамма бруцелл 82-ПЧ проявляется повышением уровня содержания аутоантителообразующих клеток в периферической крови.и отложением иммунных комплексов антиген-антитело в стенке сосудов микроциркуляторного русла, которые не выходили за рамки допустимого предела для вакцинных препаратов и нормализовались к 28-м суткам после иммунизации.

6. Многократная вакцинация в отдаленные сроки вызывает усиление склеротических изменений, огрубение и фибротизацив ретикулярной основы в лимфоидных органах, а также некоторое обеднение их лимфоцитами, что свидетельствует о выраженном характере не ^олько иммуно-морфологических, но и аллерп ческих и, в какой-то мере, иммунопатологических процессов.

7. Иммуноморфологические изменения, вызванные разными дозами вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ, являются однотипными, но несколько варьируют ъ зависимости от степени реактогенности и остаточной ви-

рулентности. Установлено, что оптимальной дозой вакцины является 100 и 200 млрд.м.к.

8. Вакцина из отамма бруцелл 82-ПЧ обладает выраженными иммуно-генными свойствами, н абортогенна, хорошо приживается в организме привитых нетелей, не вызывает поствакцинальных изменений в иммуно-компзтентных органах плодов и создает достаточно напряженный иммунитет против вирулентной культуры бруцелл.

9. Наибольиее количество зйкоцитов, содержащих цитоплазматичес-кие катионные белки, отмечается в лимфоузлах и селезенке животных, зараженных вирулентной культурой бруцелл отамма 54 через 3 месяца после введения вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ, что свидетельствует о выраженной фагоцитарной активности гранулоцитов.

ГО. Ревакцинация усиливает лимфоидно-гкперпластические, макро-фагальные и плазмоклеточные реакции в органах и тканях привитых животных. При этом степень выраженности этих изменений зависит от кратности и интервалов инокуляции препарата. Повторную иммунизации животных вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ необходимо проводить через 10-12 месяцев после первичного введения антигена.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты проведенных исследований и научные положения, сформулированные в диссертации, используются при изыскании новых вакцинных препаратов против бруцеллеза в научной лаборатории ВНИЗИ, а также при испытании вакцинного штамма 82-ПЧ в экспериментальных

и производственных условиях.

2. Для получения более выраженного иммунитета вакцинации . квотных вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ необходимо проводить в дозах 100 и 200 млрд.м.к.

3. С уче'. им аллергической перестройки организма, вызванной пер-еичной антигенной стимуляцией, ревакцинацию животных вакцинным штаммом бруцелл 82-ПЧ следует проводить через 10-12 месяцев.

4. Результаты исследований внедрены з учебный процесс при обучении студентов на кафедре патологической анатомии Каг некого ордена Ленина ветеринарного института имени К.Э.Баумана и на факультете повышения квалификации ветеринарных врачей, а также могу- быть использованы при написании учебно-методической литературы.

СПИСОК РАБОТ; ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Муллакаев О.Т., Белоэерова Г.А. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ //Достижения ветеринарной и зоотехнической наук - в животноводство: Тез.докл.респ. научно-произв.конф.- Казань, 1988.- С."5.

2. Нуллакаев О.Т., Белозерова Г.А. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ в зависимости от дозы //Теоретические и практические вопросы ветеринарии и зоотехнии: Тез.докл.республ.научно-произв.конф.- Казань, 1989.- С.44.

3. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А. Иммуноморфологические изменения в ор..шах и тканях морских свинок после ревакцинации вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ //Животноводству - комплексную программу развития: Тез.докл.республ.научно-произв.конф.- Казань, 1990.-С.43.

4. Муллакаев О.Т. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ на морских свинках //Вклад молодых ученых и специалистов в научно-технический прогресс в с.-х. производстве: Тез.докл.межвузовской научно-практ.конф.- Фрунзе,

1990,- С.102-104.

5. Муллакаев О.Т., Шошокин В.А., Белозерова Г.А. Гистологические

и ультраструктурные изменения в иммунокомпетентных органах морских свинок, иммунизированных вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ //Повышение эффективности лечебно-профилактических мер при незаразных болезнях животных: Межвузовский сборник научных трудов.-■ Казань. 1990.- С.84-90.

6. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А. Динамика уровня Т- и В-лимфоцн-тов у морских свинок, иммунизированных вакциной из итамма бруцелл 82-ПЧ //Достижения Казанской ветеринарной школы - в. практику животноводства: Тез.докл.республ.научно-произв.конф,- Казань,

1991.- С.13.

7. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А. Динамика со,* юркания иммунокомпетентных клеток у морских свинок, ривитых вакциной из итамма бруцелл 82-ПЧ //Достижения Кгтанской ветеринарной школы - в практику животноводства: Тездокл.республ.научно-произв.конф.- Казань, 1991.- С.14. ,