Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ НЕКОТОРЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ И РОЛЬ РЕЗИСТЕНТНЫХ САЛМОНЕЛЛ В ПАТОЛОГИИ ЖИВОТНЫХ

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ

ВСЕСОЮЗНОЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ В. И. ЛЕНИНА

Л- тчі

На правах рукописи

ТРИШКИНА

Екатерина Тарасовна кандидат ветеринарных наук

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ к АНТИБИОТИКАМ НЕКОТОРЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ И РОЛЬ РЕЗИСТЕНТНЫХ САЛМОНЕЛЛ В ПАТОЛОГИИ ЖИВОТНЫХ

(16.00.03 — ветеринарная микробиология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва —

1974

р

t-S '

' s. -, ' - * *

всесоюзный ордена ленина

институт экспериментальной ветеринарии

всесоюзной ордена ленина академии сельскохозяйственных наук имени в. и. ленина

! .у V : | ■ г: ' 1 ; ^ ■ ;■ ■ 1 н' ■ ' ■ :7 * ^ Н ■ Ч . 1 11 п ■ ■

На правах рукописи

ТРИШКИНА Екатерина Тарасовна кандидат, ветеринарных наук

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ к АНТИБИОТИКАМ НЕКОТОРЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ И РОЛЬ РЕЗИСТЕНТНЫХ САЛМОНЕЛЛ В ПАТОЛОГИИ ЖИВОТНЫХ

і (16.00.03 — ветеринарная микробиология)

' АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

, 1„і-;.,.. іЧ-іМОЗ.

'-іащсет'й,;;, і. • Г"!:ір*в "

Москва —

1974

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Ленина институте экспериментальной ветеринарии (директор — академик ВАСХНИЛ, заслуженный деятель науки РСФСР, профессор Я. Р. КОВАЛЕНКО). |

Диссертация изложена на 305 страницах машинописного текста, иллюстрирована 77 таблицами и 23 рисунками. ]

В списке использованной литературы 704 источника, в том числе 377 отечественных авторов п 327 работ, опубликованных в иностранных изданиях. !

Научный консультант — Лауреат Государственной премии СССР, заслуженный деятель науки РСФСР, доктор биологических наук, профессор А. X. САРКИСОВ. [

Официальные оппоненты:

Член корреспондент ВАСХНИЛ, доктор сельскохозяйственных каук, профессор К. М.. СОЛНЦЕВ; |

Доктор биологических наук, профессор Д. Г. КУДЛАЙ;

Заслуженный деятель науки РСФСР, доктор биологических наук, профессор П. И. ПРИТУЛИН. !

Ведущее научное учреждение ГНКИ ветеринарных препаратов. ]

Автореферат разослан « I ($» СХ ¿¿^ 1974 г, |

Защита диссертация состоятся й. <9 1974 г.

в 14 час. на заседании Ученого Совета Всесоюзного института экспериментальной ветеринарии (109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ). |

г

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Ученый секретарь Совета—кандидат биологических наук

В. В. Калугин.

В осуществлении Государственного плана развития народного хозяйства актуальными продолжают оставаться мероприятия, направленные на повышение роста поголовья и продуктивности сельскохозяйственных животных, а также снижение потерь от заболеваний и падежа.

Б этих целях весьма полезным оказалось применение антибиотиков. Эти препараты широко известны, как высокоэффективные лечебные средства при многих болезнях крупного и мелкого рогатого скота, свиней, птиц, кроликов, пушных зверей, промысловых рыб и пчел. Антибиотики также использует в качестве добавок в корм для улучшения роста и развития молодняка животных.

Большой вклад в развитие отечественной науки об антибиотиках внесли известные ученые в области медицины — 3. В. Ермольева, Г. Ф. Гаузе, И. А. Красильников, X. X. Пла-нельес, В. А. Шорин, И. А. Кассирский, химии — М. М. Шемякин, А. С. Хохлов, ветеринарии — А. X, Саркисов, И. Е. Мозгов, К- М. Солнцев, Нг И. Леонов,

Много лет антибиотики занимают ведущее место в общем комплексе санитарно-ирофилактических и лечебных мероприятий, направленных на ликвидацию рожи свиней, пастереллеза, листериоза, салмонеллезов .анаэробных, желудочно-кишечных и легочных болезней сельскохозяйственных животных (Н. С. Акулова, А. Б. Бояхчаи, А. А. Волкова, В. Ф. Грезин, Д. Г. Геловани, А. В. Голиков, X. А. Джилавян, В. И. Ежов, П. Д. Евдокимов, Ф. И. Каган, В. Ф. Ковалев, Н. М. Никифорова, Н. И. Овсянов, В. М. Субботин, И. С. Парфенов, В. М. Петров* В. И. Проданов, В. К. Паракин, Н. Г. Поиировский, А. В. Сизова, Г. А. Шакарян, В. П. Шаматава и многие другие).

Вместе с тем длительное, а иногда и неправильное применение антибиотиков может сопровождаться появлением резистентных штаммов патогенных микроорганизмов и, как следствие, значительным уменьшением эффективности этих ценных препаратов.

В настоящее время приобретает особое значение систематическое изучение уровня чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней, выяснение условий, способствующих появлению штаммов с множественной лекар-

ственной устойчивостью м разработка мер, предупреждающих их распространение. \

Этой проблеме посвящены многочисленные работы зарубежных и отечественных исследователей (Watanabe, Anderson, Smith, Datta, Wiedemann, Walton, Manten, Lebek, Vymola, X. X. Плаиельес, А. Ф. Мороз, С. А. Лебедева, С. Д. Воропаева, Д. Г. Кудлай, С. М, Навашип, Я. Е. Коляков, Б. А. Фор-тушный и др.). а также национальные и международные симпозиумы и конференции. Однако, перечисленные вопросы ;в отечественной ветеринарии отражены лишь в единичных сообщениях. I

Мы поставили к разрешению следующие задачи: |

1. Изучить уровень чувствительности к антибиотикам эпизоотических штаммов возбудителей наиболее распространенных инфекционных болезней сельскохозяйственных животных.

2. Выявить развитие резистентности к антибиотикам у сал-монелл, бактерий рожи н биологические особенности штаммов, выделенных от животных при длительном применении антибиотиков. ¡

3. Выяснить роль антпбиотикорезистентных салмонелл и бактерий рожи в инфекционной патологии сельскохозяйственных жнвотных и перспективы дальнейшего использования антибиотиков с лечебно-профилактической целью при этих болезнях. ;

4. Изучить трансмиссивность резистентности к антибиотикам у штаммов возбудителей салмонеллезов сельскохозяйственных и диких животных, ¡

5. Разработать методические указания для определения уровня чувствительности к антибиотикам микроорганизмов, патогенных для сельскохозяйственных животных. !

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1

Экспериментальная часть работы выполнена в 1958— 1973 гг, в лаборатории антибиотиков и микологии Всесоюзного ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии. Ряд наблюдений проведен в производственных условиях на базе 10 крупных свиноводческих, а также молочных и птице^ водческих хозяйств Московской, Калининской и других областей страны. ;

В опытах использовали 49 053 животных, в том числе, свиней— 5495, птиц — 36608 (куры, цыплята, голуби), белых мышей —6950. |

Бактериологическому исследованию подвергнуты: свиньи— 2 758, цыплята — 1 134, куры—190, а также голуби и мыши! 4 !

В экспериментах изучены чувствительность к трем анти-'биотикам 5 695 штаммов 14 видов возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных и 2607 культур из отдельных колоний; агглютинабилыюсть — 4 769 штаммов; биохимическая активность—1965; вирулентность 762 штаммов салмонелл, бактерий рожи и других микроорганизмов. В исследованиях пс идентификации микроорганизмов, выделенных от животных, принимали участие ветврачи Московской областной и городской ветеринарных лабораторий (Г. В. Ка* зарин, Б. И. Антонов, Н. С. Ковальчук, Л. И. Деменкова, М. Б. Панарина, Е. Ф, Рычагова, Б, Н. Гинзбург).

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам изучали методом серийных разведений с учетом биологических особенностей кыделенных микроорганизмов.

Для выявления штаммов с внехромосомным типом (инфекционный) резистентности применяли конъюгационную систему, □ которой донорами служили испытуемые, устойчивые штаммы, а реципиентом — специальный штамм Ё. coli ÄB-247, устойчивый к налидиксовой кислоте, полученный из института эпидемиологии и микробиологии им. Н, Ф. Гамалеи (А. Ф. Мороз) .

Компетентность к R-факторам изучали у четырех сероти-псв салмонелл. В качестве доноров использовали четыре штамма эшерихий, в том числе два-из ИЭМ им. Гамалеи: Е. coli J5-3RI с маркерами R-фактора Sm Cm Am Nm Km * и штамм E. cci I J5-3R64, резистентцый к Тс Sm, два других штамма — Е. coli К1И и Е. coli R1H1 были получены в нашем эксперименте in vitro при передаче R-фактора от штамма Е. coli J5-3R1 к кишечной палочке, выделенной от подопытного животного.

Передачу R-эпнсомы in vitro осуществляли в жидкой среде в пробирках и с применением штампа-репликатора (Wata-níibe — J96J, Г. Н. Нещадим, А. Ф. Мороз— 1972).

В опытах in vivo по передаче резистентности, использовали поросят в возрасте шести педель в количестве 24 голов. Культуры доноров и реципиентов вводили животным перорально. Мазки со слизистой оболочки прямой кишки исследовали ежедневно, а после убоя поросят брали для исследования пробы крови, паренхиматозных органов, слизистых оболочек тощей, подвздошной и слепой кишок.

* Sm —стрептомицин, Cm—хлорамфеникол (левом ицетин), Am — ампициллин, Nm — неомицин, Km — канамицнн, Тс — тетрациклин.

Методы определения чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней !

сельскохозяйственных животных

Систематическое изучение уровня чувствительности возбудителей инфекционных болезней к антибиотикам является важным элементом рациональной терапии, позволяющим своевременно устанавливать появление резистентных штаммов,, прогнозировать результативность использования антибиотиков в животноводческих хозяйствах и определять направление в изыскании новых лечебных средств. j

Известно, что одновременно с развитием антибиотикотера-гшн разрабатывались и методы изучения чувствительности патогенных микроорганизмов к этим препаратам. ■

Наиболее распространенными являются метод диффузии в агар с применением дисков (Bondi—1947, Oherkinsky—1955, Р. С. Шершевская — 1964, И. Г. Руфанов—1964) и метод серийных разведений, которые имеют несколько вариантов в зависимости от условий опыта (Welch — 1953, В, Ф. Грезин — 1954, Kirby — 1957, Grove —1958, Finland — 1958, А. И.;Ла-бинская — 1963, Е. А. Ведьмина — 1966, H. М. Фурер— 1966).

В целях сокращения сроков исследования предложен j ряд ускоренных способов определения чувствительности микроорганизмов (Bass—1957, В. Лориан — 1957, 3. В. Ермольева— I960, И. В. Власова—1961, В, М. Мельникова—1963, В. С.1 Соболев—1964). . ■ |

В 1956 г. были опубликованы инструкции Минздрава СССР для определения чувствительности патогенных микробов к антибиотикам методом серийных разведеннй и с применением дисков. !

Однако в многочисленных публикациях нет единых рекомендаций, касающихся исследования чувствительности анаэробных и аэробных микроорганизмов, а также культур с|раз-личной интенсивностью роста. Критерий оценки резистентности штаммов отсутствовал или касался лишь некоторых антибиотиков' из большого числа, применяемых в ветеринарии. В связи с этим результаты были трудно сопоставимы, а иногда и противоречивы. |

Для выяснения идентичности оценки исследуемых микроорганизмов в 1964—19С>6 гг. нами из 8 ветеринарных лабораторий страны были запрошены штаммы с характеристикой их. чувствительности к антибиотикам. При контрольном исследовании 30 «устойчивых» штаммов салмонелл установлены существенные расхождения о показателях. Выявлены ошибки, наиболее часто дипуа аемые в лабораториях ветеринарными специалистами при использовании опубликованных методик..

Намечая (в 1958 г.) широкие исследования по изучению уровня чувствительности микроорганизмов к антибиотикам мы, прежде всего, сочли необходимым унифицировать методику для этой цели, сделав ее доступной для исследования наиболее распространенных возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных.

За основу взяли принцип метода двукратных серийных разведений и метода диффузии в агар с применением дисков. Из микроорганизмов включили представителей аэробной группы— Е, coli, Salmonella, Erysipelothrix insidiosa, Р. vulgaris и анаэробной флоры—Cl. perfringens, Cl. oedematiens, Cl. chauvoei. Cí. septicum, B. necrophorus.

Экспериментально установлено, что при использовании метода серийных разведений на получение постоянных и достоверных результатов существенно влияют состав и рН питательных сред, количество посевного материала исследуемых культур, а также химическая структура антибиотиков и сроки учета результатов (табл. 1).

Таблица 1

Показатели чувствительности (мкг/мл) бактерий к хлортетрациклниу в зависимости от рН питательной среды, количества микробных клеток и времени учета результатов

Микроорганизмы Количество микробных клеток на мл РН питательных сред Время учета резль-татов

-16—18 час. 36 час.

Салмонеллы, выделенные от свиней, телят и птиц № 10& 10S Бульонная * 7,0 7.2 7.6 7,2 0,4-1.8 0,9—3.7 3,7—7,5 15.0 7,5—15,0 7,5—20,0 15,0—30,0 30.0

Штаммы возбудителя рожи свиней Ю-4** 10-* I0-¿ Бульонная * 7,0 7,4 7.6 7.4 0,06-0,18 0,09-0,37 0,37—0,75 0.75-3.0 0.37—1,5 0,75- >6.0 1.5 —>6,0 >6,0

* — Бульонные культуры высевал» пера з в еденным и до 0,2 мл. ** — Бульонные культуры в разведении 1 ; 10000 по 0,2 мл.

В равных условиях опыта более четкие с меньшим разбросом данные получены при использовании окситеграциклина,. тем хлортетрациклина.

Исследования 2607 культур из отдельных колоний показали неоднородность штаммов по чувствительности к хлортет-рациклииу. Колебании достигали 5 разведении, но всегда были в границах чувствительности, типичной для исследуемого вида. !

Неоднородность культур, выделенных из колоний одного и того же штамма, еще нагляднее показана при исследовании тетрадиклинорезиегентного штамма №409. Из 100 колоний, отвитых от культуры с 'il сходной устойчивостью 65 мкг/мл, кроме устойчивых вариантов выделено пять чувствительных (4,5 мкг/мл). '

Аналогичное явление обнаружено рядом авторов (X. X. Планельес — 1958, 1966, А. Ф. Мороз—1964, И. Ф. Пашкевич— 1962, В. Н. Соловьев— 1968) при исследовании чувствительности к антибиотикам стафилококков н микробов кишечной группы.

Выявлено несоответствие данных, полученных при определении чувствительности к антибиотикам одних и тех же штаммов методом серийных разведений и с применением дисков.

Культуры салмонелл с чувствительностью 0,9—7,5 мкг/мл хлортетрациклина при исследовании методом дисков показали нечеткие, плохо выраженные зоны, дна метр которых варьировал от 11 до 25 мм. У одной трети штаммов величина зон не превышала 13 мм и они определены, как мало чувствительные.

В опытах с применением бумажных дисков, пропитанных стрептомицином, получены недостоверные результаты. Штаммы устойчивые к этому антибиотику (75 мкг/мл) и чувствительные (9.3—18,7 мкг/мл) давали вокруг дисков четкие, хорошо выраженные зоны с колебанием в диаметре от 17 до 26 мм, присущим чувствительным штаммам.

О значительном несоответствии результатов исследования чувствительности микроорганизмов методом дисков и серийных разведений сообщалось Grove—1958, Л. Г. Бреевой—1961, Р. С. Шершевской — 1964, В. Ф. Имшенецкой —1968, А. М. Плетневым— 1968, Wagner — 1969, Davis—1971.

Эксперименты показали, что метод дисков может быть использован для получения ориентировочных результатов, при условии рационального улучшения качества дисков, особенно,, с хлортетрациклином, окситетрациклином, тетрациклином и стрептомицином. При выявлений устойчивых штаммов заключительное исследование следует проводить методом серийных разведений. 8

В методику серийных разведений включены дополнения и изменения с учетом биологических особенностей наиболее распространенных возбудителей заболеваний сельскохозяйственных животных, определены оптимальные питательные среды, регламентировано количество посевного материала, введен критерии для выявления резистентных штаммов.

Показано, что штаммы возбудителей инфекции следует относить к устойчивым, если их рост не подавляется пенициллином, эритромицином в концентрации более 10 ЕД, мкг/мл, ле-вомицетином, неомпцином, мономицнном и антибиотиками тотрациклипового ряда более 20 мкг/мл, стрептомицином и пол ими кем ном более 50 мкг, ЕД/мл.

Для выявления перспективных антибиотиков в отношении возбудителен анаэробных инфекций необходимо было изыскать наиболее общие условия исследования, применимые для микробов с различными биологическими свойствами и в то же время простые, не требующие специального оборудования, доступные для работы в диагностических ветеринарных лабораториях.

В наших опытах использованы среда Китт-Тароцци, модифицированная среда Китт-Тароцци и 0,15% мясо-пептонный ¡trap. Испытана активность 12 антибиотиков в отношении 48 штаммов с различным содержанием микробных клеток.

Оптимальной средой для исследования чувствительности анаэробных микроорганизмов определена модифицированная среда Китт-Тароцци без кусочков печени с добавлением 0,5% глюкозы. Для исследования рекомендована 18-часовая культура. выращенная на среде Китт-Тароцци, в дозе 0,2 мл на J0 мл среды с антибиотиками. Культуру CI. perfringens и Других микроорганизмов с интенсивным проявлением роста, предварительно следует разводить в питательной среде 1 :100.

В итоге многолетних исследований нами разработаны «Методические указания по определению чувствительности к аи-тнбптикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных», которые рассмотрены Научно-техни-ческнм Советом и утверждены Главным Управлением ветеринарии МСХ СССР (1971 г.).

Чувствительность к антибиотикам эпизоотических штаммов возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных

животных

В течение 16 лет изучена чувствительность к антибиотикам 5G95 эпизоотических штаммов возбудителей салмонеллезов свиней, телят, пуллороза птиц, рожи свиней, па стер ел л езо в, лпетериоза, мыта, некробактериоза, эмфизематозного карбун-

кула, дизентерии ягнят, брадзота, энтеротоксемии и др. В табл. 2 сведены данные по этим исследованиям. i

Часть штаммов для исследования поступили из Республиканских, областных и зоналышх ветеринарных лабораторий (Р. М. Минина, В. И. Борисов, Е, Ф. Кавнцкий, И. И. Соро-кер и др.). '

Многолетний опыт применения антибиотиков убедительно показал несомненную ценность тетрациклиновых препаратов при лечении н профилактике салмонеллезов различных видов животных и птиц. В этой связи особое значение придавали изучению уровня чувствительности к антибиотикам S. chole-rae suis, S. dublin, S. pullorum и S. typhimurium. ;

Среди 885 штаммов-салмонелл, выделенных от свиней, получавших хлортетрациклин, биоветин, бновнт и не получавших антибиотики, а также от животных из хозяйств, находящихся в различных географических зонах страны, значительных колебаний в чувствительности к антибиотикам не установлено. Бактерпостатическая концентрация антибиотиков тетрацикли-нового ряда, левомицетина о отношении S. choierae suis составляла 0,4—7,5 мкг/мл и стрептомицина 9—50 мкг/мл. ''

Установленный нами диапазон чувствительности салмопелл согласуется с результатами, полученными рядом исследователей (И, М. Беспалов —1958, Лю Чжао Би — 1960, В. А, Фор-тушный — 1961, А. В. Сизова— 1963, П. Н. Шмидов— 1963, В. А. Кнваев — 1964).

Вместе с тем, начиная с 1962 года в наших опытах выявлены штаммы с меньшей чувствительностью—15 мкг/мл и единично резистентные к хлор тетрациклину—37—150 и стрептомицину— 75—150 мкг/мл. '

Для выяснения распространенности антибиотикоустойчивых штаммов среди серотипа S. dublin исследования проведеиы[В 1961—1965 и 1969—1973 г.г. и охватили более ста хозяйств ряда союзных республик и центральной зоны РСФСР (Е. Т. Тришкина, А, С, Притула). От телят выделено 698 штаммов салмо-нелл, чувствительность которых изучена к 3—8 антибиотикам.

Штаммы, поступавшие из ветеринарных лабораторий Калининской, Тульской, Рязанской, Воронежской областей с интервалом в 8 лет, по чувствительности к антибиотикам были аналогичны. При сравнении их чувствительности и других биологических свойств с салмонеллами, выделенными от телят ряда крупных хозяйств Московской области, существенных различий также не установлено. j

10 I

Таблица 2

Чувствительность К- антибиотикам микроорганизмов, патогенных для животных и птиц (ЕД, мкг/мл)

Микроорганизмы

Хлор-окснтет-рацик-дин

Лсво-мице-гнн

Стрептомицин

Неоми-цин, карами mis, моно-мицин

Поли-миксии

S. cholerae suis S. dublin S. pu Horum S typhimurium S. abortus ovis S. aborius equi Salmonella (up. ceporimbi1) Ery si p. i nisi di osa Past, multocida List, monocytogenes Strept. equi Ci. perfringens Cl. septicum Cl. chauvoel Cl. oedema tiens B. necrophorus P. vulgaris

0,4 -15 0,4 -7,5 0,2 -3,7 0,4 -3.7 0,4 -3,7 0,9 -3,7 0,4 -3,7 '0,04-3,0 0.04—0,8 0,2 -0,6 0,01—0,8 0,2 -10 0,1 -0,8 0,01-0,5 0,01-0,5 0,03-2,0 20- >450

0,4—7,5 0,9-7,5 0,2—3,7 0,9-7,5 1,8-3,7 0,9-3,7 1,8-3,7 0,4-8,0 0,1-0,9 1,0-9,0 1,0-9,0 1,0-8,0 3,8-3,6 0,2-3,7' 1,8-7,5 0,2-2,0 S—>250

9,3-50 4,6—50 9.3-37 9.3-37 9,3 -18 0,3—18 9,3-37 4,6-48 1,8-10 0,5-15 1,2-3,0, 0.340-750 5020-100 105,0-20 4,0-100 20-100 1-50

0,70,40,20.70.40,40,7200,40,1-

2,07,0202-

6,0 -7.5 -3,7 -8,0 -3,7 -7,5 -9,0 -800 -5,0 3,7 -10 2000 150 20 150 150 25

0,9-3,7 0,4-7,5 0,2-3.7 0,2-3,7 0,4-1,8 0,4-0,9 0,9-3,7 >2jOO 1,5-5. 37->50 9,0-18 >100 тыс.

> lOOiiic.

> 100 тыс. >100 тые,

200 >700

Пени- I Эрнтро-циллин I мицин

Ампи -циллип

Окса-циллин

4,6-50

4.6-50 2.3-18 9,3-50

4.7-18 4,7-18

5-100

£0-200 50- 200 50-200 50-200 50-200 50-200 50-200

0,ОЬО.ООО,01-0.04

00

,02-0,2 0,02-0,9 0,01-0,2 0,01-0,5 0,01-0,09 0,01-0,2 0,01-0,1 0,01-0,04 2,5—> 100

0,07-2,0 0,02-0,09 0,02-0,03 0,3 -4,0 0,04-0,4 0,01-0,03 0,02-0,2 0,02-0,8 >100

0,4-3,7 0,4-3,7 0,2-0,9 0,4-3,7 0,4-1,8 0,4-3,7 0,4-3,7 0,01-0,07 0,09 0,09 0,6 0,04-0,2

>150

>150 >150 >150 >150 75-150 75-150 75—>150 0,01-0.4 1,1-4.7 0,6-2,3 0,6-9,3 0.1-1,5

>150

Чувствительность 99,5% штаммов к хлортетрашшшну; колебалась в пределах 0,4—7,5 мкг/мл, левомицетину — 0,9—7,5, стрептомицину — 4,6—50 мкг/мл. Исключение составили 4 штамма, выделенные от телят из одного хозяйства Московской области, оказавшиеся устойчивыми одновременно к левомицетину н тетрациклину (200—375 мкг/мл). j

Проведенные исследования позволили получить представление об уровне чувствительности S, dublin и выяснить распространенность устойчивых штаммов в стадах крупного рогатого скота, особенно по Московской области. !

Чувствительность к хлортетрациклину салмонелл, выделенных в 1958—1962 гг, от цыплят и кур из птицефабрик, неблагополучных по пуллорозу, определена в том же диапазоне, что и возбудителей салмонеллезов свиней и телят (0,2— 3,7 мкг/мл). Вместе с тем рост 25% штаммов нодавлялря|концентрацией антибиотика равной 0,2—0,4 мкг/мл, что указывает на более высокую чувствительность S. pullorum, в сравнении с другими изученными серотипами салмонелл. j

Чувствительность S. pullorum к пенициллину составляла 2,3—18,6 ЕД/мл, левомицетину—0,3—3,7 мкг/мл, стрептомицину—9,3—37,5 мкг/мл, i

Данные этих исследований соответствовали результатам, опубликованным Chang—1950, Prier—1951, Glaníz—1955 и были подтверждены Н. А, Радчук—1964, А. В. Пересаднным — 1965. Наши исследования отражают чувствительность большего количества штаммов в сравнительном аспекте с другими серотипами.

Штаммы возбудителя пуллороза, выделенные* в 1967— 1970 гг. от цыплят из крупных птицефабрик — «Братцевская», «Кучино», «Михневская», «Загорская», «Конкурсный», широко использующих корм с антибиотиками, и от цыплят мелких ферм, по чувствительности к антибиотикам не отличались между собой. Среди них резистентных штаммов не обнаружили. ;

Изучение чувств и тел ьпостн к 3 антибиотикам 415 штаммов бактерий рожи, выделенных в 1958—1961 гг, и затем с 1962 по 1965 гг. показало, что, несмотря наширокое применение! пенициллина в лечении свиней, штаммы Erysipelothrix insidiosa сохраняют высокий уровень чувствительности к этому антибиотику — 0,01—0,04 ЕД/мл, установленный в нашей стране! еще в 1947—1953 гг. А. И. Лактионовой и В. Ф. Грезиньгм.

В исследованиях, проведенных В. А. Фортушным —1961 г. и несколько позже В, М. Новиковым— 1964, В. Ф. Ковалевым —1968 г., показан аналогичный уровень б акте р и ост а ти ч есисоЙ концентрации некоторых антибиотиков в отношении этого вида микроорганизма. j 12

В течение многих лет в борьбе с пастереллезом животных и птиц в качестве лечебных средств широко применяют анти-1 биотики. В период значительного распространения инфекции (1960 — 1963 гг.) в ряде районов южной зоны страны выделены от животных и птиц 223 штамма пастерелл. Независимо от видовой принадлежности и различного уровня применения антибиотиков в хозяйствах все штаммы оказались высоко чувствительными к пенициллину 0,02—0,2 ЕД/мл, антибиотикам тетра цикли нового ряда — 0,04—0,8 мкг/мл и эритромицину— 0,07—2,0 мкг/мл.

Аналогичные результаты по некоторым антибиотикам получены Ые(ег—1950, МиузБОП—1959, Н. М. Никифоровой—1959, В. П. Шаматава—1961, А. И. Топориной—1961, а в последующем отражены и в работах В. И. Ежова— 1963, В, И. Зю-бап —1964.

Применение антибиотиков с лечебной целью при ряде инфекций и, в особенности, вызываемых анаэробными микроор-гепизмами .часто носит эмпирический характер. В этой связи изучение чувствительности возбудителей брадзота, энтероток-семни, эмфизематозного карбункула, дизентерии ягнят дало нам возможность выявить наиболее активные антибиотики в отношении этих микроорганизмов.

Из 12 антибиотиков, взятых в опыт, штаммы клостридий и возбудителя некробактериоза высокую чувствительность проявили к пенициллину (0,01—0,5 ЕД/мл), затем- эритромицину и олеандомицину (0,01—5,0 мкг/мл). Отмечена зависимость величины бактериостатической концентрации от вида исследуемых микроорганизмов и особенностей штаммов.

В отношении возбудителей листериоза свиней, овец и мыта лошадей выявлена активность эритромицина — 0,02— 0,09 мкг/мл, пенициллина — 0,01 — 0,9 ЕД/мл и о кснтетр а циклима — 0,01—0,8 мкг/мл (1960—1961 гг.).

Примерно аналогичная чувствительность листерий установлена к некоторым из этих антибиотиков И. А. Бакуловым — 1959, Е. М. Цветковой —1959, Ыуз1гбт — 1961, — 1962, А. И. Цыро— 1969.

Терапевтическая активность полусинтетических пеницил-лннов в отечественной ветеринарии совершенно не изучена. В этой связи несомненный интерес представляли эксперименты по выяснению чувствительности к этим препаратам 140 штаммов 8 видов грамположительных и грамотрнцательных бактерий. Эксперименты проведены в сравнительном аспекте с другими антибиотиками для выяснения возможных преимуществ новых препаратов.

Исследования показали .что полусинтетические пеиицилли-ны активно подавляли рост пастерелл, особенно ампициллин* (0,09 мкг/мл) примерно в равной с пенициллином концентрации. ¡

Чувствительность возбудителей листериоза, дизентерии: ягнят, эитеротоксемии к ампициллину составила 0,04— 0,2 мкг/мл и несколько меньше — к оксациллину и метицилли-ну — 0,1—2,3 мкг/мл. Ампициллин и оксациллин менее эффективно подавляли рост мытного стрептококка —0,6—9,3 мкг/мл,, чем пенициллин — 0,02—0,03 ЕД/мл.

В итоге проведенной работы установлена антибиограмма и диапазон естественного колебания чувствительности к 13— 18 антибиотикам у 14 видов микроорганизмов, патогенных'для сельскохозяйственных животных. Вероятно не будет ошибочным, если в характеристику вида бактерий включить дополнительный биологически ¡i признак — показатель их чувствительности к антибиотикам. ¡

Выполненные экспериментальные работы позволили составить таблицу по чувствительности микроорганизмов, которая может быть использована ветеринарными специалистами в качестве руководства при проведении аналогичных работ и|при: выборе более активных антибиотиков для лечебно-профилактических целей. ;

i

Резистентность и биологические особенности штаммов салмонелл и бактерий рожи, выделенных от животных в условиях интенсивного применения антибиотиков ;

Исследования включали: изучение развития резистентности к антибиотикам у S. piillorum, S. cholerae suis и Erysipelothrix insidiosa в эксперименте и в условиях хозяйств, выяснение влияния длительного применения антибиотиков в животноводстве на результативность бактериологических исследований и биологические свойства выделенных бактерий. Эти вопросы в отечественной литературе освещены слабо, j

Опыты in vitro показали, что при непосредственном воздействии антибиотиков у возбудителей салмонеллезов и рожи|наи-более быстро резистентность развивалась к стрептомицину. К Ю пассажу появились культуры с устойчивостью 600— 3750 мкг/мл.

Резистентные к хлортетрациклину салмонеллы возникали очень медленно и уровень их устойчивости через 50—70 пассажей не превышал 18—75 мкг/мл. К таким же выводам пришли, и другие исследователи (В. А. Фортушнып—1965, Ю. Б.' Попов— 1956, Р. 3. Мартиросян—1966, И. Г. Беспалько—19G6)... 14

¡

Эксперименты, .проведенные по выяснению уровня чувствительности к антибиотикам эпизоотических штаммов возбудителя рожи свиней, показали стабильность этого признака. Высказывается предположение, что вряд ли возможно привыкание к лекарственным средствам бактерий рожи в естественных условиях (Kielstein — 1961, Manten — 1963).

В свете изложенного важно было выяснить результаты длительного непосредственного воздействия антибиотиков иа чувствительность, биохимическую активность и вирулентность этого вида микроорганизма.

При пассировании бактерий рожи свиней на среде со стрептомицином уровень их резистентности достигал 5000 мкг/мл. Если в среду длительно добавляли пенициллин или ампициллин в концентрации более 0,08 ЕД, мкг/мл, то рост культур прекращался.

Мы разделяем мнение Schwarz — 1950, Föhrenbach — 1949, Fussgänger—1958 и др., которым также не удалось адаптировать бактерии рожи к пенициллину. В то же время нами не выделены мутанты с резистентностью 25000 мкг/мл стрептомицина, о получении которых сообщает С. Чолакова —1961.

У бактерий рожи и салмонелл устойчивых к антибиотикам (получены in vitro), обнаружили изменения некоторых биологических свойств. Рост культур в жидкой среде наблюдали в виде осадка на дне пробирки при полной прозрачности верхнего слоя бульона, на плотных средах — резко выраженный полиморфизм колоний, а также задержку ферментации углеводов до 3—5 дней. Микробные клетки приобретали несвойственную им форму и цвет при окраске по Граму. Вирулентность по сравнению с контролем снижалась в тысячу раз.

Ослабление вирулентности и изменение культурально-морфологических признаков при пассировании на средах с антибиотиками наблюдал у салмонелл ряд авторов (В. Г. Петровская— 1956, Б. Ф. Бессарабов— 1957, П. Н. Кашкин— i960, 1961, И. Е. Колуканов — 1961, А. М. Гнетиев — 1961, В. А. Киваев—1964, П. Н. Шмидов—1965, Г. Р. Финн—1966). То же самое отмечали у бактерий рожи свиней под действием пенициллина и стрептомицина Kubin— 1949, Daigeler—1951.

Для выяснения действия антибиотиков на биологические свойства салмонелл и бактерий рожи in vivo под наблюдение ■были взяты птица и животные трех птицеводческих (1961— 1964 гг.) и ¡0 крупных свиноводческих хозяйств (1967— 1973 гг.) Московской области. Кроме того, поставлены контрольные эксперименты в условиях лаборатории.

В первую очередь необходимо было выяснить корреляцию-между показателями чувствительности салмонелл и уровнем применения антибиотиков. Для этого в откормочных совхозах «Белая дача», «Знамя Октября» и «Серп и Молот» в группах: свиней .неблагополучных по салмонеллезу, в течение 30 — 45 дней был создан фон интенсивного применения антибиотиков тетрацнклинового ряда. Антибиотики в лечебно-профилактических дозах получали 30)0 свиней и с целью повышения привесов:—2333 подсвинка (Е. Т. Тришкина, X. А. Джилавян,. И. С. Парфенов). 5

Таблица 3

Чувствительность салмонелл, выделенных от поросят в период вспышек салмонеллеза и широкою применения тет р аци кл и н о в ых антибиотиков с лечебно-профилактическом целью

Кол-во штаммов о чувствительн, (мкг/мл)

Время исследования Хозяйства хлортетра-циклин . стрептомицин

0,47.5 15 9-50 75— 150

На фоне хозяйственной схемы применения антибиотиков Белая дача Знамя Октября Серп и Молот 200 147 8 1 1 0 190 1 126 ü ! Н 22 О

Опыт Белая дача Знамя Октября Серп и Молот 91 72 [0 0 0 1 69 1Г 1 3 0

3—6 месяцев после опыта Белая дача Знамя Октября Серп и Молот 88 22 20 5 0 о 91 Э> 20 2 2 0

В последующие 4 года Белая дача Знамя Октября Серп и Молот 302 134 49 0 0 0 301 134 49 1 0 0

Контроль Белая дача Музейные штаммы Всего 34 10 1187 0 0 8 34 9 1152 0 1 43

В теченле опыта и в последующие 3—6 месяцев от309 свиней были выделены S. cholerae suis, которые по чувствительности к хлортетрациклину существенно не отличались от культур, изолированных от 357 животных до постановки экспериментов л 485 подсвинков, убитых в последующие 4 года (0,4— 7,5 мкг/мл). Выявлено восемь штаммов с чувствительностью в 15 мкг/мл, в том числе два штамма до начала опыта (таГо. 3).

В целях подтверждения полученных данных исследования были расширены и проведены еще в 7 свиноводческих хозяйствах.

"Результаты этих наблюдений представляли безусловный интерес, т. к. каждый совхоз, концентрируя свинопоголовье яз 6—7 репродукторных хозяйств, часто становится неблагополучным по салмонеллезу. Систематическое поступление животным до 80% комбикормов, обогащенных тетрациклиновы-мн препаратами {10—20 г на тонну корма) и широкое применение антибиотиков с лечебной целью обеспечивали условия для действия антибиотиков на салмонеллы в организме свиней.

Сводные данные по исследованию чувствительности к хлор-тетрациклину и стрептомицину салмонелл, выделенных от 1008 свиней из хозяйств Московской области, представлены в

табл. 4.

Таблица 4

Данные по чувствительности к антибиотикам салмонелл, выделенных от свиней из хозяйств Московской области

1968-1970 гг. 1971 -1973 гг.

Хозяйства исследо- устойчи- исследо- устойчивых

вано вых к вано к хлортет-

штаммов стрепто- штаммов рзциклину

мицину

Мытищи 125 2 166 7

Останкино 199 3 62 1

Сафшюпский 77 4 73 1)

10 лет Октября 9$ 0 3S 0

Подольский 43 0 28 0

Заречье ЗГ> 0 3 0

Крюковский 2S 0 2 0

Подсоби ые 19 0 12 0

Музейные штаммы выде- J0 0

лены в 1944 г.

Вс<?1 о 624 9 394 8

Уровень чувствительности 624 штаммов салмонелл, выделенных до 1970 г., к хлортетрациклину и левомицетину находился в пределах 0,4—7,5 мкг/мл. Устойчивых культур не оказалось. Несколько иные данные получены по чувствительности к стрептомицину. Бактериостатическая концентрация этого антибиотика для большинства культур составляла! 9— 50 мкг/мл, но для 9 культур была в 2—3 раза выше (75— 150 мкг/мл). j

В последующие три года чувствительность к хлортетрациклину большинства штаммов была на том же уровне, но от свиней из совхозов «Мытищи» н «Останкино» выделили 8 резистентных штаммов {S. cliolerae suis — 5 штаммов, S. typhi-marium — 3 штамма). Следует отметить, что в этих хозяйствах использовано антибиотиков значительно меньше, чем в совхозах «Знамя Октября», «Белая дача», «Серп и Молот» й др. (И. С. Парфенов —1968, 1972). : ¡

За период экспериментов среди культур салмонелл, выделенных от 2193 свиней, устойчивых к левомицетину не зарегистрировали, '

В лабораторных экспериментах от 9 поросят из 20, зараженных чувствительным штаммом салмонелл и получавших хлортеграциклин от 2 до 30 дней в лечебно-профилактических дозах (10—20 мг/кг веса животного), выделили культуру, по чувствительности к антибиотикам и другим биологическим свойствам, идентичные штамму, использованному для заражения животных. I

В условиях свиноводческих совхозов Московской области параллельно с салмонеллами, изучена чувствительность и биологические свойства грамположительной палочки — возбудителя рожи свиней. ;

Исследования показали, что штаммы Erysípelothrix insidiosa, выделенные в 1971—1973 гг. от животных, получавших хлортетрациклин с кормом (10—20 г на 1 тонну), а также от леченных пенициллином и нелеченных животных из других] хозяйств (191 штамм), по чувствительности к антибиотикам не отличались от контрольных штаммов.

Резистентных культур к пенициллину, левомицетину и хлор-тетрациклину не обнаружили. По культурально-морфологическим признакам, биохимическим и вирулентным свойствам бактерии рожи существенно не отличались от культур, полученных при бактериологическом исследовании свиней в 1958— 1965 гг. !

При интенсивном применении антибиотиков в птицеводстве и значительном распространении возбудителя пуллороза увеличивается вероятность появления резистентных штаммов среди этого вида салмонелл. В случае приобретения устой'чи-18 Í

вости штаммы могут передаваться через яйцо от одного поколения птиц к другому и поддерживать очаг резистентных бактерий в хозяйстве.

Исследования но выяснению распространенности антибио-тико-устончнвых штаммов 5. риПогцт проведены в условиях #Кунцевской», «Братцевской» птицефабрик и Госплемгттице-зэвода «Горки 2», где в 1953 г. впервые под руководством профессора Л. X. С арки сова были применены антибиотики при выращивании птиц, которые и в дальнейшем также систематически использовались.

Под наблюдением находились 22010 цыплят и 3500 кур, получавших антибиотики—хлортетрациклин 1000—1500 мкг; пенициллин 500—1500 ЕД на одну птицу. Из этого числа бактериологическому исследованию подвергнуты 901 птица и от .243 были выделены салмонеллы {табл. 5).

Таблица 5

Чувствительность $, риНогит, , выделенных от птиц, получавших антибиотики с кормом в различных дозах

Птицефабрики С I Антибиотики, применяе-« я я мые в хозяйствах § ^ ^ р и ч о и — £ и о «р 3 Г1 сэ я! Чувствительность мкг, ЕД/мл

хлор- . тстра- пепи-ииклип г пильни

,КуЕцевс.вая° 3—2№ 3—2о1 куры пенициллин л тетр а цикли новые препараты 214 257 29 75 146 64 Л1 6 90 1 2_ 15 72 6 47 0,2-1,3 0,4 0,4- 0,9 0,4—1,8 2,3 9,3 4.6 4.6—18,7 4,6 - 9,3

контроль

3-20 45-60 куры 3-30 пенициллин и натявный биомицин 0,4—3,7 0,4-1.8 0,4-3.7 2,3-18.7 4.6-9,3 4,6-18.7

контроль 1 0,9 4,6

»Братцев- ская" Музейные -штаммы контроль 3—20 окснтетрациклин 29 9 6 0,4—0,9 0,2-0,9 <,6-18,7 2,3-9,3

Чувствительность 5. риНогигп, изолированных от цыплят, -кур, получавших пенициллнновые и.тетрацнклиновые препараты, а также от контрольных птиц, оказалась идентичной. Бак-терностатическая концентрация хлортетра цикли на н окситет-

рациклина составляла 0,2—3,7 мкг/мл, пенициллина — 2,3— 18,7 ЕД/мл. ; - ■ •

Полученные данные были подтверждены во втором опыте,, проведенном в Госплемптицезаводе —Горки 2» на 10950 цыплятах из партии,^неблагополучной по пуллорозу.

Птицы в течение месяца получали с кормом биоветин — 1000—1200 мкг в пересчете на активное начало и часть цыплят— пенициллин, по 500 ЕД на голову в сутки.

Выделенные от 139 подопытных и 25 контрольных цыплят салмонеллы были чувствительны к применяемым антибиотикам.

Затем в опыте использовали 80 кур, носителей салмонелл, в организме которых (кровь, яичннки) в течение 1—3 месяцев поддерживали суббактериостатическую и бактериостатическую концентрации хлортетрациклина ежедневной дачей антибиотика в дозе 15—100 мг/кг веса птиц.

Несмотря на систематическое применение антибиотиков^ птице, за период эксперимента S. pullorum были выделены от 52 кур и от 24 контрольных (не получавших антибиотики).

Распределение салмонелл по чувствительности к этому антибиотику находилось в диапазоне, характерном для данного вида бактерий —.0,4—3,7 мкг/мл. Однако, от птиц, которым применяли хлортетрациклин, культур с чувствительностью в 3,7 мкг/мл выделено на 20% больше, чем от контрольных птиц. Отмечено снижение вирулентности у некоторых* штаммов салмонелл.

Таким образом, выяснено, что куры, реагирующие на пул-лорныЯ антиген и получавшие хлортетрациклин в лечебной дозе в течение 90 дней, продолжают оставаться носителями чувствительных к антибиотикам салмонелл.

Результаты исследований дают основание полагать, что из возбудителей салмонеллезов сельскохозяйственных животных и птиц образование резистентных форм менее вероятно среди S. pullorum. По этому вопросу наше мнение не совпадает с опубликованными данными В. И. Соколовой—1962 и М. В.Ка-питанакн — 1963, в которых показано выделение 22 устойчивых к хлортетрациклину штаммов этого вида, бактерий из 54 исследованных.

Исходя из зарубежных материалов о преобладании резистентных штаммов ¡среди S. "typhiraurium (Huey—1958, Ramsey— 1961, Me Whorter— 1963, Anderson—1965, Manten—1963), мы считали практически важным выяснить уровень чувствительности этого микроорганизма, выделенного от животных на территории СССР. '

В этих целях от 364 особей, относящихся к 24 видам животных, в т. ч. и птиц (обезьяны, кошки, кролики, белки, песцы, норки, хомяки, крысы, морские свинки, белые мыши, утки, гу-

си, голуби, фазаны, канарейки, чижи, попуган, страусята) были выделены 199 штаммов салмонелл семи серотипов: S. typhimurium, S. enteritidis, S. pullorum, S. dublin, S- newport, S. morbificans, S. reading.

Исследования показал», что чувствительность 81 штамма S. typhimurium, выделенных от уток и гусей (1963—1965 гг.) к хлортетрациклину колебалась в пределах 0,9—3,7 мкг/мл, стрептомицину — 9,3—37,5 мкг/мл. Один штамм оказался устойчивым к хлортетрациклину. Из 74 штаммов этого серотипа салмонелл, выделенных от других видов животных и птиц, зарегистрированы три резистентных штамма.

Всего было выявлено 9 резистентных штаммов ,в том числе 4—S. typhimurium из 155 исследованных, 4 штамма S. newport из 5 и один штамм S. readingt подателями которых оказались 6 обезьян, кошка, крыса и утка. Обезьяны поступили из тропических стран для зоомагазинов и, находясь в карантине, получали антибиотики.

На основании проведенных исследовании, мы не можем утверждать, что образование резистентных штаммов среди патогенных салмонелл. находится в прямой зависимости от длительности применения антибиотиков и концентрации их в организме животных. Вероятно, этот процесс также связан с биологическими особенностями серологических типов салмонелл, видом жнвон^ых, условиями их обитания и другими еще невыясненными факторами.

Изучение серологических свойств 4769 штаммов, биохимической активности — 1812 и вирулентностн-702 штаммов позволило выяснить серотипы салмонелл, наблюдаемых у свиней, телят и пищ в хозяйствах Московской области и других зонах страны. Было подмечено, что штаммы S. typhimurium изолированы лишь от 4 свиней и не выделены от телят. Очень важно, что из этих штаммов-3 оказались устойчивыми к антибиотикам, что указывает на необходимость оберегать хозяйства страны от заноса этого вида салмонелл. На основании накопленного за большой период экспериментального материала, мы полагаем, что изменения, обнаруженные в биологических свойствах 125 штаммов салмонелл могут являться показателями естественной варнабильности признаков у этого вида микроорганизмов. Вместе с тем считаем необходимым отметить, что из 20 штаммов S. dublin, выделенных от телят из совхозов «Михайловский» и «Клементьево» Московской области при широком применении антибиотиков, у 12 штаммов зарегистрировано ослабление сахаролитической активности и нечеткий ход реакции с агглютинирующими специфическими сыворотками.

Заслуживают внимания особенности роста отдельных куль-

тур S, pullorum, выделенных от цыплят, длительно получавших хлор тетрациклин. При посеве проб из крови, печени, желчи, рост культур регистрировали только в мясо-пептонном бульоне в виде осадка на дне пробирок при полной прозрачности верхнего слоя среды. Рост на МПА иногда проявлялся в виде карликовых или,наоборот крупных грубых единичных колоний, отмечено ¡и замеж^нное сбраживание углеводов.

У штаммов возбудителя пуллороза, выделенных от кур, получавших длительно хлортетрациклин, существенных отклонений в культурально-морфологических признаках не обнаружили, но у бактерий безусловно проявлялась тенденция к снижению вирулентности.

По этому вопросу лишь в работе И. Славкова — 1962 показаны отклонения в морфологии и культуральных свойствах салмонелл в организме свиней под влиянием пенициллина и хлортетраинкл^на. ,

Наблюдения, проведенные над белыми мышами, инфицированными S. dublin и леченными антибиотиками показали, чю до 4% салмонелл в ретрокультуре были атипичны по морфологии и антигенным свойствам (Л. Г. Кузьмина —1962).

Анализируя результаты исследования, можно высказать предположение, что применение антибиотиков и животноводстве з течение ряда лет не оказало существенного влияния на видовую характеристику салмонелл и бактерий рожи, а ис-гтользуемые з ветеринарных лабораториях методики вполне пригодны для их идентификации.

Ь развитие приведенного вывода мы сочли необходимым .'иучнть биологические особенности микроорганизмов, резистентных к антибиотикам. В нашем распоряжении были 36 резистентных штаммов салмонелл, в том числе 26 штаммов, выделенных на территории нашей страны от свиней, телят, обезьян, утки, кошки и крысы.

Для устойчивых мутантов салмонелл, полученных in vitro, является характерным: полиморфизм бактериальных клеток и колоний, ослабление энергии роста, биохимической активности и особенно понижение вирулентности (непатогенны в дозе 5■ 107 микробных клеток). У салмонелл с естественной резистентностью перечисленных изменений в биологических свойствах >не установлено. Бактерии проявлял« латогенность в дозе 5-102 — 5* tO5 микробных клеток на мышь при подкожном введении; четко агглютинировались соответствующими сыворотками и расщепляли углеводы в те же сроки, что и чувствительные.

Результаты экспериментов указывают, что механизм развития устойчивости у микроорганизмов в естественных условиях и при пассировании культур на средах с возрастающими кон-22

центрациями антибиотиков, вероятно, различен. Так, уровень резистентности к стрептомицину у .салмонелл in vitro возрастает с увеличением концентрации антибиотика и достигает 3750—5500 мкг/мл. Отмечена неоднородность показателей устойчивости у культур, полученных в одном опыте. У эпизоотических штаммов резистентность к стрептомицину более стабильна и ниже по уровню (200—750 мкг/мл).

Бее штаммы, независимо от географических зон и вида животных, от которых они изолированы, оказались близкими между собой по уровню резистентности к хлортетрацнклину— 37—150 мкг/мл и окентетрациклину—2Ъ0—750 мкг/мл. Салмо-неллы же,пассированные па среде с хлортетрациклином, остаются чувствительными к окентетрациклину — близкому по химической структуре препарату.

Мы пытались выяснить, является ли устойчивость, приобретенная салмонеллами in vitro, признаком необратимым или физиологическим приспособлением, изменяющимся после прекращения добавления антибиотиков. Оказалось, что устойчивость к стрептомицину через 30 пассажей на средах без антибиотиков уменьшалась в 2—3 раза, а к хлортетрацн клину сохранялась до 50 пассажа. При хранении культур в лиофнльиом состоянии при 5—8" резистентность сохранялась в течение 5 лет (срок наблюдения).

Четыре штамма с естественной резистентностью к хлортет-рациклину в течение 8 лет пересевали на МПА один раз в 2 ме-сгца н последующие 5 лет хранили в лиофильном состоянии, устойчивость на исходном уровне сохранилась у 3 штаммов.

Роль антибнотикорезистентных салмонелл и бактерий рожи в патологии животных

Изучение особенностей течения инфекционного процесса, вызванного устойчивыми к антибиотикам микроорганизмами, длительности сохранения их в организме — весьма важно по ряду причин и, главным образом, в диагностике болезней и разработке перспективных лечебно-профилактических мероприятий.

Немногочисленные сообщения по этому вопросу касаются экспериментов, проведенных на лабораторных животных и наблюдений в медицинских клиниках (Е. С. Лепля— 1954, Б. Г. Затуловский — 1956, Л. Г. Перетц—1960, А. М. Гнет-нев—1963, Д. Г. Кудлай—1972).

Изучая эпизоотическую ситуацию в хозяйствах Московской и ряда центральных областей, нам не удалось подобрать для наблюдения животных, больных салмонеллезом пли рожей, возбудители которых были бы устойчивы к антибиотикам. Резистентные штаммы салмонелл выделены от единичных жнвот-

пых из хозяйств различных зон. В связи с этим опыты поставлена в лабораторных условиях.

Выраженность и течение инфекционного процесса, воспроизведенного у белых мышей штаммами S, choierae suis, устойчивым к антибиотикам тетрациклиновой группы н чувствительными, были 'идентичны. Гибель животных регистрировали в равные сроки при условии, если культуры вводили подкожно в дозе не менее 5* 104 микробных клеток на мышь,

В условиях эксперимента на 59 поросятах воспроизведен салмонеллез штаммом, устойчивым к хлортетрациклину — 37 мкг/мл и окситетрацнклину — 150 мкг/мл (Е. Т, Тришкина, .А. С. Притула). По клиническому проявлению инфекция типична изменениям, наблюдаемым при остром спонтанном и экспериментальном салмонеллезе, вызванном чувствительными штаммами. Падеж животных составлял 84 процента от числа зараженных.

Патологоанатомические изменения характерны для септического процесса и острого катарального воспаления желудочно-кишечного тракта. Отмечены изменения на слизистой оболочке толстого отдела кишечника в виде плотного некротического налета, которые являются характерными для подострого н хронического течения салмонеллеза поросят. При бактериологическом исследовании трупов салмонеллы выделены из всех паренхиматозных органов.

При определении чувствительности к антибиотикам возбудителя рожи свиней нами не выделены штаммы с естественной антибиютикоустойчивостью, гВ 'СВЯЗИ с чем проследить инфекционный процесс аналогичный салмопеллезному не представилось возможным. У культур, адаптированных к антибиотикам in vitro, отмечено резкое снижение вирулентных свойств.

Следует подчеркнуть, что для животноводства нашей страны до настоящего времени резистентные штаммы салмонелл и бактерий рожи не являлись проблемой. Вместе с тем борьба с салмонеллйми в условиях интенсивного ведения свиноводства продолжает оставаться актуальной и, видимо, использование антибиотиков будет расширяться. Не исключена возможность появления очагов, где возбудители могут оказаться устойчивыми к антибиотикам и в этом случае наличие резервных средств весьма необходимо и полезно.

В опытах in vitro (1971 —1972 гг.) установлена высокая чувствительность к ампициллину 166 штаммов 14 серотипов салмонелл и эшерихий (0,4—3,7 мкг/мл).

Антибиотик в этой же концентрации оказывал бактерио-статическое действие и на 24 штамма салмонелл, резистентных к тетрациклину, стрептомицину и левомицетину. Рост :24

этих культур также активно ннгибировался неомицином, ка-намицином и поли ми к си ном в концентрации 0,4—7,5 м кг/мл.

В отношении возбудителя рожи свиней высокая активность отмечена ампициллина, оксациллнна, эритромицина {0,01 — 0,07 мкг/мл) и несколько меньшая метициллина (0,01 — 0,4 мкг/мл). Было выяснено также, что бактерии рожи устойчивы к канамицану, поли ни кс и п у, н ео mih ц i гн у.

Высокая чувствительность 10 штаммов Erysipelothrix insidiosa к полусинтетическим пенициллинам была также выявлена А. В. Голиковым (1973 г.) и других видов бактерий П. Н. Шмндовьгм (1972),

Активность ампициллина в организме мышей проявилась неодинаково и зависела от вида бактерий и уровня чувствительности in vitro штаммов, использованных для заражения. При экспериментальной инфекции, воспроизведенной культурой бактерий рожн с чувствительностью 0,04 мкг/мл ампициллина, отмечен выраженный терапевтический эффект в дозе 5 мг антибиотика на мышь при двукратном введении. Мыши, зараженные салмонеллами (чувствительность 0,7—1,5 мкг/мл), при аналогичном лечении все погибли.

Установлено лечебное действие при экспериментальной роже мышей, наряду с ампициллином, и оксациллнна.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности дальнейшего испытания ампициллина, оксациллнна в условиях хозяйств для выяснения перспективности их применения при роже свиней в качестве резервных лечебных средств.

В наших экспериментах па 63 поросятах выявлено высокое лечебное действие левомицетипа при экспериментальном сал-монеллезе, воспроизведенном штаммом, устойчивым к антибиотикам тетрацпклииового ряда. Левомицетин вводили два— три раза в сутки в дозе 20 мг/кг веса животного в течение 5— 7 дней. Хлортетрациклин, используемый в лечении поросят по методике, принятой для спонтанного салмопеллеза, оказался не эффективен. Это дало основание считать, что при выделении салмонелл с устойчивостью 37 мкг/мл применять в хозяйствах с лечебной целью антибиотики тетрациклинового ряда не следует (табл. 6).

В числе опубликованных работ известна лишь одна (В. А. Киваев— 1964), в которой показана эффективность иеомицнна при этой инфекции.

; Таблица 6

Результаты терапии поросят при экспериментальном салмонеллезе, воспроизведенном тетрациклинорезистентным штаммом S, cholerae suis

Характеристика штаммов Заражено поросят А нт ибиот и котера п ы я ь. "С = 0 2 « ® <2 и Г-3 4JO СЦ а с4 äg в с ? У ^ о о ез а е.

№ 538 устойчивый 15 Л ев ом и детин 20 14

к Xло ртет ра цикл и н у 15 Хлортетрадиклин 20 4

—37 м к г/мл 10 Контроль - 2

№ 916 чувствительный к зелортетрацн клину — 1,8 мкг/мл 6 10 - 7 Левом и нет ин Xлортетра циклнн Контроль 20 20 5 3 1

Тр а и см и сси в ноет ь резистентности к антибиотикам у возбудителей салмонеллезов сельскохозяйственных ЖИВОТНЫХ

Одной из актуальных проблем современной терапии является множественная лекарственная устойчивость возбудителей инфекционных.болезней человека и животных. Широкие исследования в ряде стран мира направлены на изучение распространенности штаммов с эписомной резистентностью, выяснение условий и способов R — передачи между различными видами микроорганизмов.

Имеются сообщения, касающиеся экспериментальной передачи in vitro и в организме животных эписом, контролирующих устойчивость к антибиотикам, среди эшерихий, шигелл, салмонелл, протея и других видов бактерий (Ochiai, Akiba, Mitsuhashi, Iwata, Guiñee, Thiele, Smith, Jarolmen, А. А. Астапов).

В наших исследованиях были изучены:

— тип резистентности у салмонелл, выделенных от животных;

— условия передачи антибиотикоустойчивости от эшерихий к патогенным штаммам салмонелл in vitro;

—возможность передачи лекарственной устойчивости от эшерихий к салмонеллам в организме поросят.

При изучении чувствительности к антибиотикам более 4 700 штаммов салмонелл, выделенных от животных и птиц, зарегистрированы 24 резистентных штамма. Салмонеллы представлены пятью серотипами', S. cholerae suis — 8 штаммов, S. íyphimurium — 7, S. dublin—4, S. newport—4 и S. reading— I штамм. 26

t

Спектр резистентности салмонелл— Тс—12 штаммов, TcSni - 5, Тс Cm - 4, TcSmAm — 1, Тс Am — 1, Sm — 1 штамм.

В коньюгационной системе установили эписомный тин резистентности у 23 штаммов из 24 исследованных. Передачу R-факторов регистрировали через 1, З, Є и 18 часов (время наблюдения) после соединения культур салмонелл и чувствительного штамма Е. coli АВ-247. Уровень резистентности конъюгантов был .идентичен устойчивости салмонелл. Экспериментально установлен обмен R-факторов также между штаммами салмонелл, имеющими различный набор маркеров.

Учитывая определенную роль резистентных штаммов кишечных бактерий в качестве источника R-факторов для патогенных микроорганизмов, были поставлены эксперименты по передаче лекарственной устойчивости in vitro от эшерихий к салмонеллам.

Донорами генетических внехромосомных факторов резистентности служили штаммы: Е. coli J5—3RI, устойчивый к пяти, Е. coli J5—3R64—к двум и Е. coli RIH—к шести антибиотикам (TcSmCmNmKmAm *),

В качестве реципиентов испытаны патогенные штаммы S. cholerae suis, S. typhimurium, S. dublin, S. pullorum, выделенные от поросят, телят, цыплят и голубей по 10 штаммов каждого серотипа.

Для выявления резистентных рекомбинатов салмонелл использовали среду Эндо с добавлением соответствующих анти-■биотиков. Всего получено 37 рекомбинатов с устойчивостью к 2, 3 и 5 антибиотикам. В этом числе 21 конъюгант от штаммов S. cholerae suis, 9 — S. Iyphimurium, 4 — S. dublin и 3 конъюганта от S. pullorum.

При конъюгации in vitro сравнительно легко осуществлялся перенос R—факторов от эшерихий к салмонеллам. В первой попытке это удавалось осуществить примерно на 3— 4 штамма из 10 каждого серотипа.

Выявлены два штамма, которые воспринимали резистентность с наибольшей частотой — музейный S. cholerae suis № 271 в шероховатой форме (R-форма) и эпизоотический — S. iyphimurium № 9883, выделенный от свиньи.

Из четырех серотипов салмонелл менее компетентными реципиентами оказались штаммы S. pullorum. Эта особенность у пуллорных бактерий ранее была отмечена Smith (1966).

— Тс — тетрациклнновая группа Sm ~ стрептомицин Cm — хлорам феникол (леномицетнн)

Ат — ампициллин Nm — неомицин Km — канамицин

Салмонеллы, как правило, получали от эшерихий весь набор маркеров резистентности. Исключение составили три сег-реганта, в геноме которых отсутствовали детерминанты, контролирующие резистентность к тетрациклину или канамицину (неомицнн) и ампициллину.

По агглютинабильности, биохимической активности конъ-юганты с множественной резистентностью не отличались от исходных штаммов салмонелл.

Все конъюганты S. choierae suis, S. pullorum сохранили вирулентность на уровне исходных штаммов. Между тем у 6 ре-комбинантов S. dublin и S. typhimurium из 12 исследованных отмечено снижение вирулентности.

Придавая особую актуальность выяснению возможности передачи резистентности к антибиотикам в организме сельскохозяйственных животных, мы предприняли попытку осуществить перенос R-факторов от сапрофитного представителя эшерихий на патогенные штаммы S. choierae suis и S. typhimurium in vivo —в пищеварительном тракте поросят. В качестве доноров использовали два музейных штамма — Е. coli J5-3RI, Е. coli J5—3R64 и Е. coli R1H1 (TcSmCmAm), полученный в наших опытах;

В результате многократного введения per os поросятам массивных доз культур эшерихий с множественной лекарственной устойчивостью и чувствительных салмонелл, от 3 животных из 24, взятых в опыт, со слизистой оболочки кишечника . выделены S. choierae suis и S. typhimurum с R-факторами JpflftvW. Sm, SmCinAm. В естественных условиях на территории СССР салмонелл с аналогичной резистентностью от животных не выделяли (табл. 7).

В передаче устойчивости к антибиотикам в организме свиней имеет существенное значение подбор компетентных штаммов, количество й вирулентность бактерий, продолжительность пребывания доноров и реципиентов в кишечнике. Устойчивость выделенных рекомбинантов составляла к стрептомицину 90—180 мкг/мл, левомицетину—375—750, ампициллину— 750—! 500 мкг/мл.

Установлено in vitro и in vivo, что передача R-факторов легче осуществляется от свежих доноров, недавно получивших фактор резистентности, к реципиентным штаммам в шероховатой форме. Эти особенности, отмеченные Watanabe—1971, Jarolnien — 1971 Д. Г. Кудлай — 1972, нашли подтверждение и в наших экспериментах, поставленных на поросятах.

Несмотря на низкую частоту передачи лекарственной резистентности в эксперименте in vivo, вероятно, аналогичные явления возможны и в определенных естественных условиях.. 28 . ■ Л

Биологическая характеристика устойчивых к антибиотикам рекомбинантов S. cholerae suis, S. lypliimurmm, выделенных от поросят

к

U

о

о.

о н

с я

41 а о

о. с

<и о X

к S д

о о о

X ч О.

К £

si =

О D Я

w ss я

Уровень рсщсте гшюсгн мкг/мл Биохимическая аюиииость Реакция агглютинации

« . LD

Тс Cm Am g к о Г1 (л

Sm ЬЙ а ТЕ f о Л s to О И

б С0 ei о

2; « £ 31

S RHU 271 0) 2 45 750 \5fi0 3 кг кг VH с 5-10*

5 RUH 271 5п (2—5) 2 ISO 750— 1Г.С0 3 кг - кг — Vif с 5-10*

8 R] И f 203 8т (II) 180 3 3 3 - — кг + VN - 5-102

8 ■ RHU 203 8 t (47) 2 90 3 3 - кг - + VH -

10 J5-3R! 4883 Юг (36, 39) 2 180 3 3 3 кг кг К1 кг + IV 1 5' 10-

to

<p

Обозначение; Тс — тетрациклин, Srn — стрептомицин, Cm — хлорамфеникол (левомлцетин) Ащ — ампицнллин, Nm — яеомицнн, Кгп — кана.мнцин, кг — кислота, газ

Надо полагать, что основным источником штаммов с инфекционной резистентностью являются больные, бактерионосители, внешняя среда и обслуживающий персонал.

Следовательно, в борьбе с инфекционной антибиотикоус-тойчивостыо возбудителей болезн&'в ветеринарии, наряду с рациональными схемами применения антибиотиков, должны осуществляться противоэпизоотическне мероприятия, направленные на предупреждение распространения резистентных штаммов среди животных различных хозяйств.

ВЫ КОДЫ

1. Установлена чувствительность к трем антибиотикам 5 695 штаммов 14 видов патогенных микроорганизмов, выделенных от животных к лгиц из хозяйств 13 союзных республик.

Показатель чувствительности к антибиотикам рекомендуется включить в общую характеристику вида бактерий.

2. Выявлена высокая чувствительность к антибиотикам тетрациклинового ряда и левомицетину (0,2—7,5 мкг/мл) 4 769 штаммов салмонелл, изолированных от свиней, телят, лошадей, овец, кур, уток, а также диких, комнатных и лабораторных животных.

3. Изучены антибнограмма и биологическая характеристика серотипов салмонелл, выделенных от животных из хозяйств Московской области с различным уровнем применения антибиотиков. От свиней изолированы 96,2% штаммов S. choierae suis, 3,8%— S. enteritidis, S. dublin, S. derby, S. rostok, S, ty-

ptiimunum, S. paratyphi A; от телят—96,4% штаммов S. dub-¡iti,3,6%—S. rostok, S. enteritidis, S. paratyphi A, S. panama; от кур и цыплят — 99,4% штаммов S. pullorum и 0,6%—S.dublin.

4. Длительное применение антибиотиков при выращивании Поросят, телят и птиц существенно не изменило культур ально-биологических признаков, используемых для идентификации салмонелл в ветеринарных диагностических лабораториях.

Штаммы салмонелл, с естественной резистентностью к антибиотикам, по серологическим, сахаролитическим и вирулентным свойствам не отличались от аналогичных чувствительных штаммов.

5. Выделенные от свиней 606 штаммов возбудителя рожи оказались высокочувствительными к пенициллину (0,004—0,04 ЕД'мл) и антибиотикам тетрациклиновой группы (0,04— ■0,9 мкг/мл}.

Штаммы, изолированные в 1971—1973 гг., по уровню чувствительности к 18 антибиотикам, культурально-морфологическим признакам, биохимическим и вирулентным свойствам су-

щестненио не отличались между собой и от штаммов, выделен-ныл от животных в 1931 —1964 гг.

6. Изучена чувствительность к 3—12 антибиотикам 320 штаммов возбудителей пастереллеза, листериоза, мыта, брадзота, энтеротоксемии, эмфизематозного карбункула, не-кробактериоза животных и установлена высокая активность пенициллина, ампициллина, эритромицина и хлортетрацикли-на (0,02—2 ЕД, мкг/мл) в отношении микроорганизмов этой группы.

7. Выявлена распространенность антнбнотикоустойчивых штаммов патогенных микроорганизмов в ряде хозяйств.

Резистентные штаммы салмонелл составили 0,3% из культур, выделенных от свиней и 0,5% —от телят. Среди 754 штаммов— S. pulloriim, 606 — Erysipelothrix insidiosa и 232—Pas-teurella multocida устойчивых культур не обнаружено.

8. Установлена эписомиая природа резистентности к антибиотикам у 23 штаммов салмонелл, выделенных от животных, со спектром R-факторов: Тс, Тс Sm, Тс Am, ТсСш, TcSmAin, Sm. Уровень резистентности салмонелл составлял к хлортетрациклину 37—150 мкг/мл, окситетрацнклину 200—750, стрептомицину 200—750, левомицетину 200 и к ампиниллииу 750 мкг/мл.

9. Воспроизведена передача in vitro резистентности к антибиотикам от эшерихии к патогенным штаммам S. cfiolerae suis, S. dublin, S. pullorum и S. typhimurium. Возбудитель пул-лороза оказался менее компетентным реципиентом, чем другие серотнпы. Биологические свойства устойчивых конъюж"ан-тов идентичны взятым в опыт салмонеллам.

Выявлена передача фактора резистентности между различными серотипами салмонелл, имеющими неодинаковый набор маркеров, контролирующих устойчивость.

10. Осуществлена in vivo передача R-факторов от эшери-хий к патогенным салмонсллам путем многократного введения per os поросятам массивных доз культуры.

Из кишечника трех животных, из 24 исследованных, выделены рекомбинанты S. cholerae suis и S. typhimurium,устойчивые к стрептомицину 90—180 мкг/мл, левомицетину 375—750 и ампициллину 750—1500 мкг/мл с маркерами R-факторов Sm, CmAm, SmCmAm. В естественных условиях на территории СССР штаммы салмонелл с аналогичным типом и уровнем резистентности у сельскохозяйственных животных не зарегистрированы.

11. Резистетность салмонелл in vitro развивалась быстро на питательной среде со стрептомицином и к 10 пассажу достигала 3750 мкг/мл. При добавлении возрастающих концентраций хлортетрациклина, левомицетииа или ампициллина устой-

чивые варианты появлялись медленно и через 50—70 пассажей резистентность их составляла 18—75 мкг/мл, 750 мкг/мл и 90—375 мкг/мл соответствени-о.

Мутанты, отличались от штаммов с естественной резистентностью и чувствительных характером роста на питательных средах, морфологией клеток и более низкой вирулентностью.

12. При пассировании штаммов возбудителя рожи свиней на средах с возрастающими концентрациями пенициллина, стрептомицина и ампициллина получены'устойчивые формы только к стрептомицину {5000 мкг/мл). Эти культуры физиологически менее активны, чем контрольные.

13. Установлена высокая активность резервных антибиотиков— ампициллина, полимиксина, канамицина и левомицетн-на в отношении 14 серотипов салмонелл (0,4—7,5 мкг/мл) и для штаммов ¡резистентных к другим антибиотикам.

При экспериментальной рожистой инфекции белых мышей выявлен отчетливый лечебный эффект ампициллина, оксацил-лина, что указывает на перспективность дальнейших испытаний этих антибиотиков в качестве резервных средств при роже свиней,

14. Воспроизведен салмонеллез у поросят штаммом S. спо-ierae suis, естественно резистентным к тетрациклиновым препаратам. По клиническому течению и па тол огоан атомической картине инфекция не отличалась от спонтанного и экспериментального салмонеллезов, вызванных чувствительными к антибиотикам штаммами.

При этой инфекции выявлено лечебное действие левомине-ткиа в дозе 20 мг/кг.веса животного при 2—3 кратном применении в сутки с 5—7 дневным курсом лечения.

15. Разработаны Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней -Сельскохозяйственных животных, которые включают метод серийных разведений для определения чувствительности аэробных и анаэробных микроорганизмов, справочную таблицу к критерий для выявления резистентных штаммов к 8 антибиотикам.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

I. Определять аяти биограммы патогенных микроорганизмов, выделяемых от животных из крупных промышленных комплексов и племенных хозяйств, которые явятся дополнительной, эпизоотической меткой в выявлении движения инфекций в хозяйствах.

2. Разработать мероприятия, направленные на ограждение ферм страны от заноса с импортными животными 5. 1урЫти-пшп, среди которых наиболее часто регистрируются штаммы с множественной инфекционной резистентностью-

3. Ограничить использование Новых антибиотиков при роже и салмоисллезах сельскохозяйственных животных и широкое применение в ветеринарии левомицетнна, сохранив их в качестве резервных средств для использования в очагах заболеваний, вызванных возбудителями, резистентными к другим антимикробным препаратам.

4. Расширить исследования по изучению инфекционной лекарственной устойчивости эшерихий — потенциальных источников 1?-факторов для патогенных микроорганизмов.

5. Широко использовать в работе ветеринарных лаборатории—«Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных», утвержденные Главным управлением ветеринарии МСХ СССР в 1971 г.

МАТЕРИАЛЫ ДИССЕРТАЦИИ ДОЛОЖЕНЫ:

1. На Пленуме отделения животноводства ВАСХНИЛ по применению антибиотиков в животноводстве л ветеринарии, Москва, 1960 г.

2. На Международном конгрессе по антибиотикам. Прага, 1964 г.

3. На IX Международном конгрессе по микробиологии. Москва, 1966 г.

4. На Научной конференции БИЭВ, ¡966 г.

5. На Секции «Инфекционные болезни» Объединенного Пленума отделения животноводства и ветеринарии ВАСХНИЛ. Москва, 1969 г.

6. На Научио-техннчсском Совете МСХ СССР, Москва, 1971 г.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Экспериментальное изучение эритромицина. Пленум отделения животноводства ВАСХНИЛ по применению антибиотиков в животноводстве и ветеринарии. Тезисы докладов, М., 1960.

2. Эритромицин при бациллярной роже и пастереллезе свиней. Ж- «Ветеринария», 1961, 9.

3. Экспериментальное изучение эритромицина и его применение при заболеваниях молодняка свиней. Науч.но-произ-:водственная конференция по современным методам борьбы с

болезнями молодняка с.-х. животных и птиц. Тезисы докладов.. Минск, 1961.

4. Экспериментальное изучение эритромицина и эффективность его при рожистой инфекции. Ж- «Антибиотики», 1962, 6,

5. Экспериментальное изучение эритромицина в ветеринарии. В кн. Антибиотики в животноводстве н ветеринарии. М., J 963.

6. Чувствительность патогенных микроорганизмов к различным антибиотикам. Конгресс по антибиотикам. Тезисы-докладов. Прага, 1964, (в соавторстве),

7. Чувствительность к антибиотикам микроорганизмов, патогенных для сельскохозяйственных животных и птиц. Ж. «Антибиотики», 1965, I, (в соавторстве).

В. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Ж. «Ветеринария», 1965, 7,

О, Проблема устойчивости патогенных микроорганизмов к антибиотикам. Ж. «Ветеринария», 1965, II, (в соавторстве).

10. Адаптация S. pullorum к хлортетрациклину in vitro. Материалы годичной конференции ВИЭВ. М., 1966,

11. Чувствительность и устойчивость некоторых возбудителей инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных к антибиотикам. IX Международный конгресс по микробиологии. Тезисы докладов. М., 1966, (в соавторстве).

12. Чувствительность к антибиотикам штаммов S. pullorum выделенных от птиц, длительно получавших эти препараты. Труды ВИЭВ. М„ 1966,, т. XXXII, (в соавторстве).

13. Влияние длительного применения хлортетрацнклина на результативность бактериологических исследований при пул-лорозе. Материалы годичной конференции ВИЭВ, М., 1966.

14. Об антибиотикоустойчивости микроорганизмов патогенных для сельскохозяйственных животных. Бюллетень ВИЭВ. М„ 1967, в. 11.

15. Эритромицин при заболеваниях свиней. Бюллетень ВИЭВ, М., 1967, в. II.

16. Биологическая характеристика устойчивых к антибиотикам салмонелл. Ж. «Ветеринария^, 1968, 2.

J7. Проблема антибиотикоустойчивости микроорганизмов в ветеринарии. М. Труды ВИЭВ. 1968, т. XXXV.

18. Чувствительность к антибиотикам салмонелл, выделенных от свиней. Ж. «Ветеринария», 1969, 11 (в соавторстве).

19. Методы оценки устойчивости микроорганизмов к антибиотикам. Бюллетень ВИЭВ, М., 1970, в. VIII.

20. Методика определения чувствительности микробов к антибиотикам. В кн. Лабораторные исследования в ветеринарии,. М., 1971. 34

21. Воспроизведение салмонеллеза у поросят антибиотико-устойчивымн штаммами. Бюллетень ВИЭВ, М., 1972, в XII (в соавторстве).

22. Чувствительность к антибиотикам штаммов S. dublin. Ж. «Ветеринария», 1972, 4, {в соавторстве).

23. Заболевание поросят, вызванное тетрацнклиноустой-чивыми салмонелламй. Ж. «Ветеринария», 1972, 6, (в соавторстве) .

24. Видовой состав и чувствительность к антибиотикам салмонелл, выделенных от свиней из хозяйств Московской области. Бюллетень ВИЭВ. М„ 1972, в. XII, (в соавторстве).

25. Сравнительное изучение чувствительности патогенных для животных микроорганизмов к полусинтетическим пеницил-линам и другим антибиотикам. Бюллетень ВИЭВ. М., 1972, в. XII, {в соавторстве). ,

26. Левомицетин при экспериментальном салмонеллезе поросят, вызванном тетрациклиноустойчивым штаммом. Бюллетень ВИЭВ, М„ 1972, в. XII, (в соавторстве),

27. Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. М., 1972.

28. Чувствительность к антибиотикам салмонелл, выделенных от комнатных и мелких диких животных. Ж- «Антибиотики», 1973. 2, (в соавторстве).

29. Свойства С1. períringens типа А, выделенных от кур Ж- «Ветеринария», 1973, 6, (в соавторстве).

30. Уровень чувствительности к антибиотикам эпизоотических штаммов Erysipelothrix insidiosa. Ж. «Антибиотики», 1973, 4, (б соавторстве).

31. Чувствительность к антибиотикам штаммов Cl. períringens, выделенных от кур. Труды ВИЭВ, М., 1973, т. 41, (в соавторстве).

32. Передача факторов лекарственной устойчивости от Е. coli к салмонеллам в кишечнике поросят. Ж- «Антибиотики», 1973, II, (в соавторстве).

Заказ 461

Тираж 150

Тип, МВА