Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц

ТАДЖИКСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ

ИНСТИТУТ (ТАДЖ НИВИ)

ТАДЖИКСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК (ТАСХН)

САЛИМОВ ТОЧИДДИН МУХИДДИНОВИЧ

АССОЦИИРОВАННАЯ ФОРМОЛВАКЦИНА ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА И СТАФИЛОКОККОЗА ПТИЦ (АНТИГЕННЫЕ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА)

16.00.03. - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

На правах рукописи

микология и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

п

Научный руководитель:

член-корреспондент ТАСХН, доктор ветеринарных наук И.Т.САТТОРОВ

Душанбе - 1999 г.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ ....................................................................................................................... 4

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................... 8

Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ..........................................................................................................................27

2.1. Материалы и методы исследований ...................................................................... 27

2.2. Результаты исследований ............................................................................................................................................................................32

2.2.1. Распространение колибактериоза и стафилококкоза птиц в птицеводческих хозяйствах Республики Таджикистан ..........................................................................32

2.2.2. Подбор штаммов эшерихия коли и стафилококкус ауреус с высокими иммуногенными свойствами ................................................................................................................................37

2.2.3. Приготовление ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц ..........................................................................................................................45

2.2.4. Изучение иммуногенной активности ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц ................................................................................................47

2.2.5.Иммунологические показатели цыплят, привитых ассоциированной формолвакциной против колибактериоза и стафилококкоза ......................................................50

2.2.6. Испытание ассоциированной формолвакцины против колибактериоза

и стафилококкоза птиц в производственных условиях ..........................................................................53

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................................................................60

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................................................................................................................................................67

ВЫВОДЫ ......................................................................................................................................................................................................................................................69

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ..............................................................................................................................71

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................................................73

ПРИЛОЖЕНИЕ ..............................................................................................................................................................................................................................85

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ

РА - Реакция агглютинации

МПА - Мясопептонный агар

МПБ - Мясопептонный бульон •

МППБ - Мясопептонный печеночный бульон

ВФА - Ворфель-Фергюсона

НТД - Нормативно-техническая документация

ГУВ - Главное управление ветеринарии

ЛД50 - Пятидесятипроцентная летальная доза

КИЭзо - Пятидесятипроцентный коэффициент иммунологической эффективности

М.К. - Микробная клетка

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Одной из важнейших отраслей сельского хозяйства Республики Таджикистан является птицеводство. Уровень производства продуктов птицеводства оказывает большое влияние на экономическом состоянии населения, а животные и птицы являются национальным богатством нашей страны.

Ветеринарная наука и практика ставят своей целью сохранение и увеличение поголовья птиц, повышение их продуктивности и выпуск полноценных продуктов питания и сырья для промышленности. Однако успешному развитию отрасли птицеводства в республике в значительной мере препятствуют желудочно-кишечные и респираторные болезни, наносящие огромный ущерб хозяйствам. Среди указанных болезней в птицеводческих комплексах большой удельный вес имеют колибактериоз и стафилококкоз, которые, часто протекая в ассоциации, вызывают массовую гибель эмбрионов, цыплят разного возраста и взрослых кур.

Значительные исследования по изучению вопросов колибактериоза и стафилококкоза проведены А.Байдавлятовым, Л.Белицкой [14], С.А.Артемьевой [3], Л.А.Ольковичем [71], И.А.Рахманиной, Г.А.Грошевой [88], А.К.Борисенковой с соавторами [25]. Т.В.Крыловой [56], Т.Н.Мальцевой [61], Н.А.Радчук, Н.С.Якубовой [108] и др.

Для специфической профилактики колибактериоза и стафилококкоза разработаны моновакцины, включающие местные штаммы эшерихии коли и стафилококкус ауреус (Х.К.Бурханова [27], Н.А.Радчук [80] и Т.В.Крылова [57]).

В борьбе же со смешанными инфекциями птиц, вызываемыми эшери-хией коли и стафилококкус ауреус, наиболее эффективными могут быть ассоциированные вакцины.

Однако в этом направлении исследования малочисленны. В этой связи разработка ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафило-

коккоза из местных штаммов микроорганизмов является весьма актуальной. Применение таких вакцин дает возможность сократить сроки создания иммунных групп птиц, повысить производительность труда ветеринарных работников, уменьшить затраты на проведение противоэпизооти-ческих мероприятий. В птицеводческих хозяйствах Республики Таджикистан исследования по изучению распространения колибактериоза и стафи-лококкозу птиц не проводились и не разработаны средства специфической профилактики указанных инфекций;

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась разработка и изучение антигенной и иммуногенной эффективности ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение колибактериоза и стафилококкоза птиц в хозяйствах Республики Таджикистан.

2. Подобрать штаммы эшерихии коли и стафилококкус ауреус с высокими иммуногенными свойствами и изготовить ассоциированную фор-молвакцину против колибактериоза и стафилококкоза птиц.

3. Изучить иммунологические показатели организма цыплят, привитых ассоциированной формолвакциной.

4. Изучить антигенную и иммуногенную эффективность ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц в лабораторных и производственных условиях.

Научная новизна. Изучено распространение колибактериоза и стафилококкоза птиц в хозяйствах Республики Таджикистан. Подобраны штаммы эшерихии коли и стафилококкус ауреус с высокими иммуногенными свойствами и отработана технология изготовления ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц.

Определены оптимальные условия выращивания микробной массы на модифицированной среде Ворфель-Фергюсона для изготовления вакцины.

Изучены показатели гуморального иммунитета и неспецифических факторов резистентности организма у вакцинированных цыплят. Установлена корреляция между серологическими показателями иммунитета, содержанием общего белка и белковых фракций в сыворотке крови иммунизированных цыплят.

Изучена антигенность и иммунологическая эффективность вакцины, определены оптимальная доза и схема вакцинации цыплят.

Практическая ценность. На основании проведенных исследований разработаны:

- «Временное наставление по применению ассоциированной формол-вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц, приготовленной на среде Ворфель-Фергюсона (ВФА)» (Утв. ГУВМСХ РТ, 1996 г.).

- Нормативно-техническая документация (инструкции по изготовлению и контролю, технические условия, наставление по применению) на ассоциированную вакцину против колибактериоза и стафилококкоза птиц (Утв. ГУ В МСХ РТ, 30.01.99 г.).

- Рационализаторское предложение (удостоверение №1 Утв. Тадж-НИВИ 04.03 1996 г.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- данные изучения распространения колибактериоза и стафилококкоза птиц в хозяйствах Республики Таджикистан;

- подбор штаммов эшерихии коли и стафилококкус ауреус с высокими иммуногенными свойствами;

- результаты определения показателей естественного иммунитета организма у вакцинированных цыплят;

- антигенная и иммуногенная эффективность ассоциированной фор-молвакцины п рота в колибактериоза и стафилококкоза птиц в экспериментальных и производственных условиях.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого Совета Таджикского НИВИ в 1994-1998 гг.; на республиканских и областных семинарах и совещаниях (1994-1997); конференции в честь 70-легия УзНИВИ (Самарканд, 1996); заседании научного совета по животноводству и ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук (1996-1997); заседании научно-технического совета Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан (1996).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 научные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список использованной литературы. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 7 рисунками. Список литературы включает 150 источников.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Краткая историческая справка

Колибактериоз (колисептицемия, колиинфекция, эшерихиоз, колиэн-терит, колиперитонит) - энзоотическая септическая болезнь различных видов птиц, вызываемая патогенными типами эшерихий различных сероти-пов.

Кишечная палочка впервые была выделена в 1885 году профессором клиники детских болезней в Граце Т.ЕзсЬепсЬ.

В дальнейшем выяснилось, что среди кишечной палочки имеется большое число разновидностей, отличающихся между собой по ферментативным и серологическим свойствам, по степени антагонистической активности и патогенности.

С момента открытия и до настоящего времени кишечная палочка как болезнетворный фактор привлекает к себе внимание многих исследователей, и были опубликованы работы, подтверждающие этиологическую и патогенетическую роли кишечной палочки в возникновении желудочно-кишечных болезней.

В СНГ колибактериоз у птиц впервые выделили в 1940 году И.Н.До-рошко, З.А.Кучеренко [41].

Несмотря на значительное количество исследований [11, 43, 90, 105, 148, 149], проведенных в последние годы, проблема колибактериоза кур продолжает оставаться весьма актуальной.

Стафилококкоз - инфекционная болезнь птиц, вызываемая патогенными стафилококками и проявляющая артритами, синовитами, дерматитами, воспалением подглазничных синусов и сережек, а также клоацитами [62].

Проблема стафилококковой инфекции уже на протяжении более 36 лет является одной из наиболее важных и интересных для ветеринарной медицины. Ей посвящено огромное количество публикаций в зарубежной

литературе.

Изучением стафилококков впервые в 1965-1967 год занимались Н.Б.Мордвинова, Т.Б.Выгодчиков, Г.В.Бахлачева [66], Э.А.Нечаева, И.И.Панышева [73], \V.Meyer [140] и др.

Ряд исследователей [15, 100, 129, 130, 150] изучили свойства штаммов стафилококков, изолированных от кур. При этом наблюдали колонии типа А/В на среде с кристаллическим фиолетовым, продукция фибринолизина и а-гемолизина, отсутствие в-гемолизина, устойчивость к фагам наборов «и» «крс.».

1.К.Тошрвоп [147] и др., проводя фаготипирование штаммов, выделенных от кур в 7 странах, обратили внимание на то, что культуры фаго-группы А в отличие от штаммов фагогрупны В1 редко образовывали ДНК азу и коагулировали плазму крови коровы. Таким образом, штаммы фаго-группы А соответствовали варианту galinal, а культуры фагогруппы В2 отличались от него, и авторы пришли к заключению о возможном существовании двух разных биотипов среди штаммов стафилококкус ауреус, обитающих у кур. Штаммы, выделенные от кур, росли при 45 градусах значительно реже, чем золотистые стафилококки другого происхождения (соответственно 33% и 95-100% штаммов). Авторы предложили метод био-типирования куриных штаммов, основанный на оценке гемолитической активности, образования ацегоина, окисления лактозы, галактозы и ман-нита. Штаммы биотипов (наиболее многочисленного) и 4 не росли при 45 градусах, а биотипов 2 и 3 в этих условиях росли хорошо.

Основное внимание исследователей при проведении биологического типирования стафилококкус ауреус концентрировалось на штаммах, выделенных от домашних животных и птиц.

За период, как стало известно о заболевании птиц стафилококкозом, достигнуты определенные успехи. Были изучены биология возбудителя болезни и его свойства, эпизоотология и патогенез заболевания, его клиническая и патологоанатомическая картина, диагностика и дифференциальная

диагностика стафилококкоза от других болезней со сходными клиническими признаками, иммунитет и лечение при стафилококкозе, за рубежом разработаны специфические средства профилактики и методы их применения [1, 9, 14, 38, 39, 40, 54]. Безусловно, что все это явилось огромным вкладом, как в науку, так и в производство и дало положительные результаты в борьбе с этой инфекцией.

В нашей республике к изучению стафилококкоза птиц приступили недавно, многие вопросы эпизоотологии, терапии и специфической профилактики этой болезни неизучены, уровень заболевания пгиц стафилокок-козом пока еще остается сравнительно высоким и оно занимает одно из ведущих мест в инфекционной патологии птиц и наносит большой экономический ущерб птицеводству.

Эпизоотология колибактериоза и стафилококкоза птиц

В условиях перевода птицеводческих хозяйств на промышленную основу и в связи с существенными изменениями в технологии выращивания молодняка увеличилось распространение колибактериоза и стафилококкоза птиц.

Согласно сообщению С.А.Артемьевой [5], колибакгериоз распространен повсеместно с той лишь разницей, что в одних птицехозяйствах это заболевание регистрируется спорадически, в других протекает с массовым охватом птиц разного возраста.

О колибактериозе птиц сообщали в Болгарии - Д.Савов [96], в Канаде [126], в США [121], в России [41], в Узбекистане [27, 87], в Казахстане [58], в Таджикистане [61, 77].

Исследования колибактериоза у птиц [107], проведенные в 1985 году показали, что оно занимает второе место в Марокко (28 % случаев) после Ньюкаслской болезни. Он может быть распространен в индивидуальном секторе птицеводства самостоятельно и несвязан с нарушением санитарных и технологических режимов.

Колибактериозная инфекция наносит большой экономический ущерб птицеводческой промышленности. Она начинается с генерализованной формы, и после септицемии поражает и респираторные органы [63, 116, 131, 141, 146]. Это заболевание сопровождается снижением яйценоскости взрослого поголовья и выводимости утят, а также приводит к гибели птицы [7, 69, 111, 123,139, 144].

Смертность среди заболевших стафилококкозом птиц составляет 3-15 %, выбраковка кур - 8-10 %, а петухов - более 50 % [71, 116]. Стафилококкоз часто протекает в ассоциации с пастереллезом, колибактериозом и стреп-тококкозом [22, 58, 84].

Стафилококкоз снижает общую резистентность организма цыплят, трудно поддается лечению [131]. По данным Е.Harry [126] падеж цыплят может достигать 40 %.

H.Lensing [137] сообщил о массовых заболеваниях кур-несушек на четырех фермах, где погибло 15 % птиц. J.Karacov [133] зарегистрировал 100 %-ную гибель заболевших куропаток:

А.Байдавлятов, Л.Белицкая [14] наблюдали респираторную форму стафилококковой инфекции.

Г.А.Грошевой [36] в опытах выявлена патогенетическая связь между процессами вызванными E.Coli и М.Голиссептикум. Установлено, что комбинированное инфицирование указанными возбудителями обусловливает наиболее высокую заболеваемость птиц. Так, если при неосложнен-ной микоплазменной инфекции смертность цыплят составляет 9,4 %, то при смешанной она достигает 42,7 %.

Сезонность в заболевании цыплят колибактериозом имеет определенные закономерности. С.Г.Покровский [68] установил, что наибольшее количество энтеропатогенных серотипов кишечной палочки выделяется в первом и четвертом кварталах, особенно в марте и октябре. В эти же сроки резко возрастает заболеваемость среди молодняка.

А.У.Хашимов, Б.И.Рафиев [104], изучая эпизоотологическое состоя-

ние, определили, что колибактериоз среди птиц разного возраста распространяется в осенне-зимнее и летнее время.

Восприимчивость цыплят к колибактериозу и стафилококкозу зависит от периода их роста. Заболевание чаще возникает у 1-10 дневных цыплят. Развитие эпизоотии происходит в течение 20-суток. У цыплят в возрасте от 20 до 30 дней количество новых случаев заболевания уменьшается, в дальнейшем наблюдаются только спорадические случаи [45, 49, 134].

Исследованиями Г.А.Грошевой и др. [39] установлено, что наибольшая восприимчивость к колибактериозу отмечается у цыплят 1-3 месячного возраста. Среди взрослых кур заболевание отмечается спорадически.

Б.Белицкая и И.Паникар [19] наблюдали колибактериоз бройлеро�