Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Закономерности изменения метаболизма лимфоцитов, легочной ткани и полиморфизм генов у больных раком легкого

804607777

На правах рукописи

КАЗЬМИНА Неля Васильевна

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ИЗМЕНЕНИЯ МЕТАБОЛИЗМА ЛИМФОЦИТОВ, ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ И ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ

ЛЕГКОГО

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- 2 СЕН 2010

Иркутск-2010

004607777

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте медицинских проблем Севера Сибирского отделения РАМН, г. Красноярск и ФГОУ ВПО Сибирском федеральном университете, г. Красноярск.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Савченко Андрей Анатольевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук доктор медицинских наук, профессор

Шенин Владимир Анатольевич Семинский Игорь Жанович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Томск.

Защита состоится « 10» сентября 2010 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д 001.038.02 при Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Научного центра проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН.

Автореферат разослан «_£_» оАр^Л.

2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук Шолохов Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы: Рак легкого занимает ведущее место в структуре онкологической заболеваемости населения практически всех индустриально развитых стран, характеризуется постоянным повышением частоты заболеваемости, в том числе в России, и низкими показателями выживаемости [Аксель Е.М., Давыдов М.И., 2002; Полоцкий Б.Е., Лактионов К.К., 2006; Gessner С. et al., 2004; Matakidou A. et al. 2007]. На дошо немелкоклеточного рака легкого (НМКРЛ), который объединяет плоскоклеточную (ПКРЛ), крупноклеточную гистологии и аденокарциному (АКЛ), приходится до 80-85% больных раком легкого; 15-20% составляет группа мелкоклеточного рака легкого (МКРЛ) [Бахлаев И.Е., Толпинский А.П., 2000; Трахтенберг А.Х., Чиссов В.Ч., 2000]. Различие между гистологическими типами рака легкого в течении патофизиологического процесса - по скорости развития опухоли, по степени малигнизации и дифференциации, вероятности метастазирования - дают основания для предположений об особенностях метаболических нарушений и генетической предрасположенности для различных типов рака легкого [Сое B.P.et al., 2006; Liu G. et al., 2001; Miller D.P. ct al., 2002].

Рак легкого представляет собой мультифакториальную патологию, развитие которой обусловлено взаимодействием внешнесредовых и эндогенных факторов [Якубовская Р.И., 2000; Mechanic L.E. et al., 2005; Menezes R.J., 2007]. Вовлечение в патогенез рака легкого генетических факторов, ответственных за взаимодействие с экзогенными и эндогенными агентами, на фоне недостаточности иммунной системы и метаболических нарушений в ткани легкого может определять различия в уровнях риска развития заболевания.

Патогенез рака легкого определяется нарушениями фундаментальных клеточных механизмов в опухолевой ткани с одной стороны и нарушениями функций иммунной системы с другой [Антонов В.Г., Козлов В.К., 2004; Kazbariene В., 2009; Standish L.J. et al., 2008]. Большое число исследований направлено на поиск специфических метаболических нарушений при раке легкого, ассоциированных, в частности, с развитием иммуносупрессии. В то же время не достаточно изученным остается вопрос о том, на сколько нарушаются универсальные внутриклеточные метаболические пути, функционирующие в опухолевой ткани и клетках иммунной системы. Многие данные свидетельствуют о различии патогенетических механизмов при разных гистологических типах рака легкого [Бахлаев И.Е., Толпинский А.П., 2000; Полоцкий Б.Е., Лактионов К.К., 2006], однако до настоящего времени не установлено определенного профиля метаболических нарушений, как в ткани легкого, так и в клетках иммунной системы в зависимости от гистологического типа.

Накопленные к настоящему времени данные позволяют характеризовать полиморфизм генов, вовлеченных во взаимодействие с факторами среды, регуляцию клеточного цикла и стабильности генома как генетических факторов предрасположенности к раку легкого с высокой распространенностью и низкой пенетрантностыо [Milne R.L., Benitez J., 2008], Наибольшее внимание в исследованиях ассоциации с риском развития рака легкого уделяется "нулевым" генотипам генов второй фазы биотрансформации ксенобиотиков глутатион-Б-трансфераз - GSTM1 и GSTT1, Arg/Pro-полиморфизму 72 кодона 4 экзона гена-онкосупрессора р53, полиморфизму С677Т гена метиленгетрагидрофолат редуктазы (MTHFR) [Суворова И.К. и соавт.,

2005; Чердынцева H.B. и соавт., 2006; Dai S. et al., 2009; Hung R.J. et al., 2007; Popanda O. et al., 2007; Zhang X.M. et al., 2005]. Данные полиморфизмы создают неблагоприятный генетический фон для развития рака легкого, который реализует свое влияние через нарушение определенных ферментативных реакций или сигнальных путей. В то же время значение такого неблагоприятного генетического фона в развитии заболевания на уровне основных метаболических реакций в клетках остается не ясным, в том числе и при отдельных гистологических типах рака легкого.

Проведение комплексного исследования, включающего изучение метаболических параметров лимфоцитов и опухолевой ткани легкого в зависимости от гистологического типа опухоли и полиморфизма генов, определяющих особенности индивидуальной предрасположенности к развитию опухоли, позволит получить новые сведения о патогенезе рака легкого.

Цель исследования: Установить закономерности нарушений активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови и клетках легочной ткани в зависимости от гистологического типа рака легкого и полиморфизма генов GSTM1, GSTT1,pS3vl MTHFR.

Задачи исследования:

1. Определить рисковую значимость полиморфизмов генов GSTM1, GSTT1, р53 и MTHFR для различных гистологических типов рака легкого.

2. Оценить активность НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови в зависимости от гистологического типа рака легкого.

3. Выявить особенности активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в клетках немалигнизированной и опухолевой ткани легкого в зависимости от гистологического типа рака легкого.

4. Выявить закономерности метаболизма НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови и клетках опухолевой ткани легкого в зависимости от генетических факторов риска у больных раком легкого.

Научная новизна и теоретическая значимость работы: Для больных раком легкого установлено патогенетическое значение полиморфных генотипов GSTM1, р53 и MTHFR как факторов предрасположенности к раку легкого. Для больных с ПКРЛ и AKJI легкого установлено рисковое значение генотипа GSTM1 0/0; для больных MKPJI выявлена значимость генотипа р53 Arg/Pro. Впервые для ПКРЛ установлено патогенетическое значение сочетания генотипов "GSTM1 0/0 - MTHFR С/Т".

Впервые доказано, что лимфоциты больных раком легкого независимо от гистологического типа характеризуются ингибированием гликолиза, нарушением взаимодействий между ЦТК и реакциями аминокислотного обмена, нарушением липид-ного обмена, а также ингибированием ПФП. Выявлены нарушения метаболизма лимфоцитов, характерные только для больных МКРЛ: повышение активности аэробной энергетики на фоне недостаточности реакций синтеза аминокислот и оттока ин-термедиатов с аминокислотного обмена на цикл Кребса.

Получены новые данные о закономерностях нарушений активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в легочной ткани у больных раком легкого, в том числе и в зависимости от гистологического типа рака легкого, Опухолевая ткань больных раком легкого отличалась усилением преобразования лактата в пируват по сравнению с немалигнизированной тканью. В опухолевой ткани больных ПКРЛ установлено повышение переноса продуктов липидного обмена на реакции гликолиза. Метаболизм

опухолевой ткани больных MKPJI отличался от показателей для ПКРЛ и АКЛ и характеризовался активацией энергетических реакций цикла Кребса и ПФП. Немалиг-низированная ткань больных АКЛ отличалась от показателей активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ больных ПКРЛ: установлено снижение реакций гликолиза на фоне повышения активности глутатионредуктазы. В опухолевой ткани больных АКЛ наблюдалось ингибирование одного го звеньев антиоксидантной защиты по сравнению с немалигнизированной тканью.

Впервые был проведен нейросетевой анализ активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови, немалигнизированной и опухолевой ткани легкого и определены наиболее информативные ферменты в лимфоцитах крови (МДГ, ГР, НАДФ-ГДГ и НАДН-ЛДГ), немалигнизированной (НАДФ-ГДГ, НАДФ-МДГ, ГЗФДГ, НАДН-ГДГ и НАДН-ЛДГ) и опухолевой ткани легкого (НАДФ-МДГ, НАДФ-ГДГ и ГЗФДГ), позволяющие классифицировать различные гистологические типы рака легкого. В немалигнизированной ткани легкого у больных раком легкого доказано неодинаковое распределение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ: в 61% и 19,5% больных АКЛ активность ферментов соответствовала параметрам метаболизма опухолевой ткани больных ПКРЛ и МКРЛ, соответственно; в 14,9% и 15,1% больных ПКРЛ немалигнизированная ткань легкого определялась как опухо левая ткань больных АКЛ и МКРЛ, соответственно.

Впервые для гистологических типов рака легкого установлены закономерности нарушений метаболизма лимфоцитов в зависимости от полиморфизма генов GSTM1, р53 и MTHFR. Для больных АКЛ при генотипе GSTM1 0/0 показано снижение интенсивности аэробных этапов энергетического обмена в лимфоцитах, а также нарушение субстратного потока между ЦТК и реакциями аминокислотного обмена на фоне снижения активности ГР. У больных МКРЛ при генотипе р53 Arg/Pro выявлено усиление субстратного потока по ЦТК. Лимфоциты больных ПКРЛ при сочетании генотипов "GSTM1 0/0 - MTHFR С/Т" характеризовались нарушением переноса продуктов с липидного обмена на реакции гликолиза.

Практическая значимость работы: В результате проведенных исследований получены новые данные о закономерностях метаболических нарушений в лимфоцитах крови и клетках легочной ткани в зависимости от гистологического типа рака легкого и полиморфизма генов GSTMl,p53 и MTHFR.

Комплексное исследование метаболического статуса лимфоцитов, легочной ткани и генетических факторов предрасположенности к раку легкого у больных раком легкого позволяет составигь представление о состоянии внутриклеточных процессов в лимфоцитах и ткани легкого в зависимости от гистологического типа рака легкого и полиморфизма генов, что в свою очередь может быть использовано для разработки профилактических и лечебных мер для лиц группы риска.

На основании исследования делеционного полиморфизма гена GSTM1, Arg/Рто-полиморфизма 72 кодона гена р53 и С677Т-полиморфизма гена MTHFR у пациентов можно выявлять группы риска предрасположенности к раку легкого.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфный генотип GSTM1 0/0 ассоциирован с риском развития ПКРЛ и АКЛ; Arg/Pro-генотип гена р53 ассоциирован с риском развития МКРЛ; сочетание генотипов "GSTM1 0/0 - MTHFR С/Т" является фактором риска развития ПКРЛ.

2. В лимфоцитах крови больных ПКРЛ и АКЛ выявлено сходство нарушений активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ. Ферментативный статус клеток иммунной системы у больных МКРЛ отличался от особенностей внутриклеточного метаболизма лимфоцитов больных ПКРЛ и АКЛ повышением активности ИЦЦГ и НАДН-ГДГ.

3. Установлены закономерности метаболических нарушений в лимфоцитах крови в зависимости от полиморфизма генов: у больных АКЛ при GSTM1 0/0-генотипе снижалась активность ГР, МДГ и НАДФН-ГДГ; у больных МКРЛ при генотипе р53 Arg/Pro наблюдалась активация цикла Кребса; у больных ПКРЛ при сочетании "GSTM1 0/0 -MTHFR С/Т" выявлено снижение активности ГЗФДГ.

4. Метаболические нарушения в опухолевой ткани легкого различаются у больных с различными гистологическими типами рака легкого: у больных ПКРЛ повышен уровень переноса продуктов липидного катаболизма на реакции гликолиза; у больных МКРЛ выявлено повышение активности Г6ФДГ и НАД-ИЦЦГ; у больных АКЛ снижена активность ГР. Немалигнизированная ткань легкого у больных АКЛ характеризовалась снижением активности НАДН-ЛДГ и ГР по сравнению с показателями ПКРЛ.

Апробация материалов диссертации: Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на X и XI Всероссийских научных конференциях "Экология и проблемы защиты окружающей среды", г. Красноярск (2003,2004); Российской научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии", г. Томск (2004); 1П съезде онкологов и радиологов СНГ, г. Минск (2004); 8-ой международной Пущинской школе-конференции молодых ученых "Биология - наука третьего тысячелетия", г. Пущино (2004); международной школе-конференции молодых ученых "Системная биология и биоинженерия", г. Москва (2005); V съезде Российского общества медицинских генетиков, г. Уфа (2005); межрегиональной научно-практической конференции "Объединение субъектов Российской Федерации и проблемы природопользования в приенисейской Сибири", г. Красноярск (2005); VIII научной конференции с международным участием "Генетика человека и патология", посвященной 25-летию НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН, г. Томск (2007); 1П региональной конференции молодых ученых им. академика РАМН Н.В. Васильева "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии", г. Томск (2008); IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, г. Новосибирск (2008); Всероссийской конференции с международным участием "Молекулярная онкология", г. Новосибирск (2008); XIV Всероссийский симпозиум с международным участием "Сложные системы в экстремальных условиях", г. Красноярск (2008); 13 межрегиональная научно-практическая конференция с международным участием "Актуальные проблемы медицины", г. Абакан (2010).

Публикации: Результаты исследования опубликованы в 27 печатных работах, отражающих основные положения диссертации, 6 работ из которых опубликовано в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации: Диссертационная работа изложена на 154 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, главы с изложением собственных результатов, заключения, выводов, списка цитируемой литературы. Библиогра-

фический указатель включает 223 источников, из них 74 отечественных и 149 зарубежных. Результаты работы отражены в 11 таблицах, 10 приложениях и 11 рисунках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В процессе работы обследованы 232 пациента мужского и женского пола с диагнозом рак легкого (в возрасте 20-75 лет), которые находились на лечении в Красноярском краевом онкологическом диспансере. Из них 127 человек имели ПКРЛ, 59

- AKJI, 46 - МКРЛ. Распределение больных по стадиям заболевания было равномерным в зависимости от гистологического типа. Диагноз, стадия и гистологическая форма рака легкого устанавливались врачами-онкологами на основании патогномич-ных признаков и гистологического исследования в Красноярском краевом онкологическом диспансере. Все обследованные нами больные раком легкого курили в среднем в течение 18 лет (17,8±4,9). В качестве контроля обследовано 230 не родственных относительно здоровых людей (в возрасте 22-66 лет), из них 66% - курильщики.

С помощью фенол-хлороформного метода проводили выделение ДНК из образцов цельной крови. Исследование делеционного полиморфизма генов GSTM1 и GSTT1 проводили с помощью ПЦР (Liu G. et al., 2001). Исследование Arg/Pro-полиморфизма 72 кодона 4 экзона генар53 и полиморфизма С677Т гена MTHFR проводили с использованием ПЦР/ПДРФ-анализа по методам Ara S. et al. (1990) и O'Shaughnessy Н.М. et al. (1999), соответственно. Результаты ПЦР- и ПЦР/ПДРФ-анализов просматривали электрофоретически в 7% полиакриламидном геле с добавлением бромистого этидкя и визуализацией в проходящем УФ-свете.

Выделение лимфоцитов производили центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина по методу Boyum А. (1968).

С помощью биотоминесцентного метода, описанного в работе Савченко А.А.

- Сунцовой Л.Н. (1989), определяли активность 14 ключевых НАД(Ф)-зависимых де-гидрогеназ в лимфоцитах крови и образцах здоровой и опухолевой ткани легкого. Определяли атвивности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (ГЗФДГ), НАД- и НАДН-зависимой реакции лактатдегидроге-назы (ЛДГ и НАДН-ЛДГ), НАДФ-зависимой малатдегидрогеназы (НАДФ-МДГ), НАД- и НАДН-зависимой реакции малатдегидрогеназы (МДГ и НАДН-МДГ), НАДи НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (ГДГ и НАДН-ГДГ), НАДФ- и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФ-ГДГ и НАДФН-ГДГ), НАД- и НАДФ-зависимых изоцитратдегидрогеназ (ИЦДГ и НАДФ-ИЦДГ) и глутатионредуктазы (ГР). Активность ферментов выражали в ферментативных единицах 1 Е = 1 мкмоль/мин: в лимфоцитах - на 104 клеток, в ткани легкого - на 1 мг белка [Строев Е.А., 1986]. Опредление общего количества бежа в ткани легкого проводили по методу Бредфорд [Доссон Р. и соавт., 1991].

Статистическую оценку достоверности различий в распределении генотипов, сочетаний генотипов и аллелей в обследованных группах проводили методом %2 в пакете "Statistica 6.0". Для маленьких групп (п<10) использовали поправку Йетса. При математической обработке результатов генотипирования использовали закон генетического равновесия Харди-Вайнберга. Риск развития рака легкого и различных гистологических форм рака легкого при определенном генотипе или сочетании генотипов оценивали по величине соотношения шансов (OR, "odds ratio") по стандартной формуле: OR=(A/B)/(C/D), где А и С -количество больных, имеющих и не имеющих

s

мутантный генотип соответственно, В и D - количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих мутантный генотип соответственно. OR указан с 95% доверительным интервалом (С195%).

Для всех данных биолюминесцентного определения активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ, определяли медиану (Me) и интерквартальный размах в виде 25 (C2s) и 75 (С75) процентилей (Me; C2J-C75). Достоверность различий между показателями независимых выборок оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни (пакет "Statistica 6.0"). Сравнение величин активности дегидрогеназ и оценка статистической значимости различий в здоровой и опухолевой ткани легкого осуществляли по критерию Вилкоксона. Для исследования силы взаимосвязей вычислялся коэффициент ранговой корреляции по Спирмену и корреляционный граф (сумма достоверных коэффициентов корреляции по модулю).

Для решения задач системного анализа использовали модель нейросетевого классификатора "ПКРЛ - АКЛ - МКРЛ". Классицикацшо проводили по активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови, немалигнизированной и опухолевой ткани легкого в заивисмости от гистологического типа рака легкого.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Полиморфизм генов GSTM1, GSTTl,p53 и MTHFR и сочетания полиморфных генотипов у больных раком легкого с различными гистологическими типами

Ассоциация полиморфизмов генов GSTM1 и GSTT1, р53 MTHFR с риском развития рака легкого в различных популяциях доказывается большим числом исследований [Суворова с соавт., 2005; Carlsten et al., 2008; Hung et al., 2007; Miller et al., 2002; Shi et al., 2005]. В то же время вовлеченность факторов генетической предрасположенности в этиологию и патогенез отдельных гистологических типов рака легкого исследована в меньшей степени.

В результате проведенного генотипирования установлено, что частота гомозиготного по делении генотипа GSTM1 достоверно выше в группе больных раком легкого в сравнении с контрольной группой - 47,3% против 29,2% в контроле (%2=6,82, р=0,009) (рис. 1).

Рис. 1. Частота встречаемости GSTM1 0/0-генотипа у больных с различными гистологическими типами рака легкого. Примечание: * - значимые различия с группой контроля, р<0,05; ** -значимые различия с группой контроля, р<0,01.

% ЮО л

* **

ш : — Ills

щщ

Шл

Контроль ПКРЛ АКЛ МКРЛ

Риск развития рака легкого при носительстве СБТМ! 0/0-генотипа повышен в 2,2 раза ((Ж 2,17 (С1 95%: 1,2-3,9)). Повышение частоты генотипа 0/0 по

сравнению с контролем выявлено нами в группах больных с ПКРЛ и АКЛ. При этом для ПКРЛ составил 2,7 (OR 2,65 (Cl 95%: 1,38-5,10)), а для АКЛ - 2,4 (OR 2,42 (Cl 95%: 1,05-5,6)).

Частота "нулевого" аллеля GSTM1 у больных раком легкого по нашим данным выше (68,8%, х-4,62, р=0,050), чем в группе контроля (54,0%), особенно в группах больных с ПКРЛ (72,3%, '/>7,2, р=0,010) и АКЛ (70,7%, yv2=5,94, р=0,050).

Выявленные в нашем исследовании повышение частоты GSTM1 0/0-генотипа и риска развития рака легкого, особенно при таких гистологических типах рака легкого, как ПКРЛ и АКЛ, согласуются с исследованиями российских и зарубежных авторов. В некоторых исследованиях приводятся сведения о частоте делеции GSTM1 5867% для ПКРЛ и 46-63% для АКЛ [Dmitrieva et al., 2007; Lee et al., 2006].

У больных МКРЛ ассоциации с GSTM1 0/0 в нашем исследовании выявлено не было. Однако по результатам ряда авторов делеционный генотип GSTM1 выявляется в 37-72% случаев МКРЛ и достоверно отличается от контроля [Брагина, Гусарева, Фрейдин, 2002; Lee et al., 2006].

Известно, что GSTM1-дефицитный генотип увеличивает риск возникновения опухолей у курильщиков [Белогубова с соавт., 2000; Hosgood, Berndt, Lan, 2007]. В нашем исследовании курящими являлись 100% лиц в группе больные раком легкого.

При исследовании Агц/Рго-полиморфизма гена р53 только в группе больных МКРЛ обнаружено достоверное повышение частоты гетерозигот по сравнению с контролем (рис. 2).

Рис. 2. Частота встречаемости р53 Arg/Pro-генотипа у больных с различными гистологическими типами рака легкого. Примечание: * - значимые различия с группой контроля.

При этом выявленное значение OR при цосительстве р53 Arg/Pro составило 4,27 (С1 95%: 1,18-16,16). Распределение Arg/Pro- и Рго/Рго-генотипов в группах больных ПКРЛ, АКЛ и больных раком легкого в целом не отличалось от контроля.

У больных МКРЛ установлено также повышение частоты Рго-аллеля (43,3%, Х2=5,17, р=0,050), который определяет снижение функции онкосупрессора Р53 [Mechanic et al., 2005; Szymanowska et al., 2006], по сравнению с контролем (27,9%).

Однако представленные в литературе данные об ассоциации Arg/Pro-полиморфизма 72 кодона генар53 с раком легкого не однозначны: некоторые исследования подтверждают рисковое значение полиморфных генотипов Arg/Pro- и Pro/Pro гена р53 при раке легкого [Dai et al., 2009; Li et al., 2009], в то время как в других ассоциаций данного полиморфизма с риком развития рака легкого не выявлено [Васильева, 2006; Weston, 1994]. В исследованиях Fan et al. (2000) и Jin et al.

Контроль ПКРЛ АКЛ МКРЛ

(1995) выявлена ассоциация Pro/Pro-варианта р53 с риском развития AKJI, в то время как в нашем исследовании только для группы больных MKPJI подтверждено рисковое значение генотипа р53 Arg/Pro.

В литературе обсуждается вовлеченность делеционного варианта гена GSTT1 и полиморфных генотипов С677СТ и С677ТТ гена MTHFR в нарушения механизмов детоксикации ксенобиотиков, индукцию хромосомной нестабильности и гипомети-лирование ДНК, которые характерны для рака легкого [Дмитриева с соавт., 2005; Chen et al., 2006; Hung et al., 2007]. В нашем исследовании рисковая значимость данных полиморфизмов как для группы больных раком легкого в целом, так и для отдельных гистологических типов рака легкого, не подтвердилась.

Статистически значимых отклонений в распределении частот генотипов по Arg/Pro-полиморфизму гена р53 и С577Г-полиморфизму гена MTHFR от равновесия Харди-Вайнберга не отмечено.

Несмотря на отсутствие ассоциации части исследованных нами полиморфизмов с риском развития рака легкого, интерес представляет анализ сочетаний рисковых факторов. Это связано с тем, что значение генетических факторов риска для развития такой мультифакториальной патологии, как рак легкого, может усиливаться в случае их полигенного сочетания. Объяснением такому факту может служить то, что при сочетании нескольких полиморфных вариантов генов создается неблагопрятный генетический фон, который повышает канцерогенное воздействие компонентов табачного дыма, загрязнений и инфекций на ткань легкого [Klinchid et al., 2009]. Ряд исследований свидетельствует о том, что сочетания полиморфных вариантов GSTM1, GSTT1 и р53 ассоциированы с риском развития различных гистологических типов рака легкого [Liu et al., 2001; Miller et al., 2002; Vineis et al., 2007].

При анализе ассоциации сочетаний генетических факторов с риском развития рака легкого установлено, что только одно сочетание "GSTMI 0/0 - MTHFR CT" определяет предрасположенность к ПКРЛ: частота данного сочетания в группе больных ГЖРЛ составила 21,3% по сравнению с 11,7% в контроле (%2=6,78, р=0,009). При этом риск развития ПКРЛ повышен в 1,6 раза (OR 1,61 (С195%: 1,13-2,31)). Хотя полиморфизм С677Т гена MTHFR не может рассматриваться в качестве самостоятельного фактора генетической предрасположенности, в сочетании с делецией GSTM1 в нашем исследовании проявляется рисковое значение гетерозиготного генотипа MTHFR для развития ПКРЛ.

Эизиматические особенности лимфоцитов крови при раке легкого в зависимости от гистологического типа опухоли

Лимфоциты, как клетки иммунной системы, связаны с регуляцией обмена веществ целостного организма, и их метаболическое состояние оказывает влияние на выполнение ими специфических функций и определяет уровень иммунореактивно-сти организма [Kazbariene, 2009; Standish et al., 2008]. На фоне факторов наследственной предрасположенности, которые создают неблагоприятный фон для развития заболевания, и наличия тяжелого патологического процесса в ткани легкого лимфоциты крови представляют собой хороший объект для исследования метаболических нарушений. Особенности патогенеза различных гистологических типов рака легкого определяют важность анализа метаболических нарушений лимфоцитов для выявления специфических для разных типов опухоли патофизиологических нарушений.

При исследовании активности большого спектра НАД(Ф)-зависимьгх дегидро-геназ получены убедительные доказательства нарушения метаболического и энергетического обмена в лимфоцитах крови у больных раком легкого, в том числе и в зависимости от гистологического типа рака легкого.

Установлено, что у больных раком легкого в целом и независимо от гистологического типа в лимфоцитах крови происходит снижение активности ДЦГ (прямой и обратной), МДГ, Г6ФДГ, НАДФ-МДГ, НАДФ-ИЦЦГ и НАДФ-ГДГ в сравнении с контрольной группой (табл. 1 и 2). Также в общей группе больных раком легкого выявлено снижение интенсивности реакций НАДН-МДГ и ГДГ. Полученные данные свидетельствуют о снижении интенсивности гликолитических реакций (низкая активность ЛДГ), интенсивности аэробных этапов энергетического обмена, а также ин-гибировании процессов общего обмена энергией (снижение активностей МДГ и НАДФ-ИЦДГ).

Выявленное нами снижение активности ГДГ и НАДФ-ГДГ в лимфоцитах свидетельствует о понижении уровня дезаминирования аминокислот. О снижении интенсивности ПФП можно судить по низкой активности его ключевого фермента -Г6ФДГ. В результате можно предположить, что в лимфоцитах крови у больных раком легкого наблюдается недостаток восстановленной формы НАДФН и пентоз, образующихся в ходе реакций ПФП. Это в свою очередь может привести к недостаточности реакций биосинтеза жирных кислот и нуклеиновых кислот. Ингибирование малик-фермента (НАДФ-МДГ) у больных раком легкого может приводить к недостаточному образованию восстановленной формы цитоплазматического НАДФН и недостатку субстратов для биосинтеза жирных кислот. Все это может сигнализировать о снижении реакций пластического обмена в лимфоцитах.

При анализе корреляций в лимфоцитах крови у больных раком легкого выявлено много корреляционных взаимодействий: корреляция активности ЛДГ с МДГ (г=0,55, р<0,05), НАДФ-МДГ (г=0,59, р<0,05) и НАДФ-ИЦДГ (0,43, р<0,05); активности НАДФ-МДГ с МДГ (1=0,66, р<0,05), НАДФ-ИЦДГ (г=0,55, р<0,05) и Г6ФДГ (1-0,54, р<0,05); активности НАДН-МДГ и НАДН-ГДГ (1=0,57, р<0,05).

Анализ активности НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови в зависимости от гистологического типа опухоли позволил отметить, что группы ПКРЛ и АКЛ имели выраженное сходство параметров метаболизма лимфоцитов и статистически не различались между собой. Исключение составило достоверное снижение активности НАДН-МДГ у больных ПКРЛ по сравнению с контролем, в то время как при АКЛ различия не были статистически значимыми. Падение интенсивности реакции НАДН-ГДГ при данных гистологических типах можно рассматривать как следствие снижения активности ГДГ, т.е. недостаточность реакций синтеза аминокислот не усугублялась оттоком интермедиатов с аминокислотного обмена на ЦТК.

Ферментативный статус клеток иммунной системы больных МКРЛ отличался от ПКРЛ и АКЛ повышением активности ИЦДГ и более высокими показателями активности НАДН-ГДГ. Можно предположить, что у больных МКРЛ в отличие от ПКРЛ и АКЛ наблюдается определенная активность аэробной энергетики.

Таблица 1

Активность НАД-зависимых дегидрогеназ (мкЕ) в лимфоцитах крови в контроле и у больных раком легкого в зависимости от гистологического типа опухоли (Ме, С25-С75)

Рак легкого

Показатели Контроль, N=142 1 Все N=138 2 ПКРЛ, N=84 3 АКЛ, N=38 4 МКРЛ, N=16 5

Ме | С25-С75 Ме | С25-С75 Ме | С25-С75 Ме | С25-С75 Ме | С25-С75

ГЗФДГ 0,63 0,01-1,96 0,18 0,01-0,61 0,16 0,01-0,79 0,21 0,00-0,55 0,09 0,01-0,46

ИЦДГ 3,95 0,97-12,93 2,75 0,00-15,60 2,76 0,00-14,11 1,40 0,01-13,2 28,11 1,47-48,29 Рз<0,01

ЛДГ 37,90 14,7-97,56 2,88 0,21-20,52 Р!<0,001 2,51 0,15-17,12 р,<0,001 6,22 1,06-26,0 р,<0,001 2,50 0,24-3,35 р,<0,001

НАДН-ЛДГ 71,78 7,74-186,8 2,34 0,00-27,08 р,<0,001 5,72 0,00-45,85 Р1<0,001 1,73 0,01-38,3 Р1<0,001 0,01 0,01-9,79 р1<0,001,р3<0,05

мдг 68,52 17,54134,9 2,29 0,34-24,56 р,<0,001 1,94 0,00-26,10 р,<0,001 8,91 1,55-23,39 р,<0,001 1,24 0,35-2,12 р ,<0,001

НАДН-мдг 119,34 36,93341,53 116,8 26,52-177,36 7 р,<0,05 87,79 9,55-180,32 Р1<0,05 118,85 30,42159,38 148,63 112,88-200,43

ГДГ 5,64 0,46-16,76 2,40 0,55-7,89 Р1<0,05 2,64 0,41-8,58 3,82 1,27-11,8 1,48 0,92-2,97 Р1<0,05

НАДН-ГДГ 47,53 8,85-83,36 25,93 1,06-70,37 21,19 0,89-61,16 Р1<0,05 20,42 0,57-59,01 р,<0,05 58,63 35,32-72,05 Рз.4<0,01

Примечание: статистически достоверные различия: р1 - с величиной контрольных показателей, р3 - с величиной показателей больных ПКРЛ; р4 - с величиной показателей больных АКЛ.

Таблица 2

Активность НА ДФ-зависимых дегадрогеназ (мкЕ) в лимфоцитах крови в контроле и у больных раком легкого в зависимости от гистологического типа опухоли (Ме, С25-С73)

Показатели Контроль, N=142 1 Рак легкого

Все N=138 2 ПКРЛ, N=84 3 АКЛ, N=38 4 МКРЛ, N=16 5

Ме | С25-С75 Ме | С25-С75 Ме | С25-С75 Ме | С25-С75 Ме | С25-С75

Г6ФДГ 4,29 0,89-13,63 2,31 0,48-7,92 Р/<0,05 2,91 0,49-9,18 р,<0,001 1,17 0,24-8,06 р,<0,05 1,79 0,68-4,12 р ¡<0,001

ГР 26,07 2,02-149,35 25,35 6,45-59,80 25,79 5,68-45,09 31,19 8,64-111,43 19,65 0,01-47,92

НАДФ-МДГ 2,71 0,63-12,59 0,14 0,03-6,46 р,<0,001 0,12 0,01-8,05 р ¡<0,001 0,92 0,04-6,46 р,<0,05 0,09 0,03-0,15 р,<0,001

НАДФ-ИЦДГ 31,88 14,42-63,63 1,46 0,36-4,92 Р!<0,001 1,65 0,24-6,31 р,<0,001 1,44 0,74-3,15 Р:<0,001 1,43 0,81-2,66 Р1<0,001, р4<0,05

НАДФ-ГДГ 0,58 0,01-2,56 0,02 0,00-0,59 р ¡<0,001 0,04 0,00-0,88 р,<0,001 0,01 0,01-0,35 Р1<0,05 0,01 0,01-0,31 р^О.05

НАДФН- гдг 52,99 31,76-87,13 65,10 28,70-149,49 63,68 28,70-166,32 71,95 42,21-204,42 59,11 32,02-83,54

Примечание: статистически достоверные различия: Р) - с величиной контрольных показателей, р4 - с величиной показателей больных АКЛ.

Для MKPJI повышение активности НАДН-ГДГ происходило на фоне ингиби-рования прямой реакции ГДГ. Следовательно, можно предположить, что у больных MKPJI (в отличие от ПКРЛ и АКЛ) недостаточность реакций синтеза аминокислот усугублялась оттоком интермедиатов с аминокислотного обмена на ЦТК и, как следствие, наблюдалась активация аэробных реакций в цикле Кребса (это подтверждено выявленным повышением активности ИЦДГ). Необходимо отметить, что выявленные изменения активности ИЦДГ, ГДГ и НАДН-ГДГ у больных МКРЛ наблюдались на фоне ингибирования большого спектра указанных выше ферментов.

По результатам нейросетевого анализа в модели "ПКРЛ - АКЛ - МКРЛ" в лимфоцитах крови установлена информативность уровней активности НАДН-МДГ, МДГ, ГР, НАДФ-ГДГ и НАДН-ЛДГ, что подтверждает значимость этих ферментов в патогенезе ПКРЛ, АКЛ и МКРЛ.

Таким образом, в нашей работе получены убедительные доказательства нарушение активности большого спектра НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных раком легкого, в том числе и в зависимости от гистологического типа рака легкого. Установлено, что группы ПКРЛ и АКЛ имели выраженное сходство параметров метаболизма лимфоцитов и статистически не различались между собой, в то время как ферментативный статус клеток иммунной системы больных МКРЛ отличался от ПКРЛ и АКЛ повышением активности аэробной энергетики. Выявленные значительные нарушения пластического и энергетического обмена свидетельствуют о том, что у больных раком легкого нарушается функциональная активность лимфоцитов крови, как клеток иммунной системы. Лимфоциты крови испытывают недостаток энергии и пластических интремедиатов для основных метаболических процессов, протекающих в клетке. В результате могут нарушаться процессы обновления структурных и рецепторных компонентов лимфоцитов и, как следствие, происходит нарушение контроля за процессами деления клеток в организме, в том числе и злокачественных, со стороны иммунной системы.

Энзиматические особенности опухолевой и немалигнизированной ткани легкого в зависимости от гистологического типа рака легкого

Метаболические нарушения в опухолевой ткани тесно ассоциированы со всем комплексом развивающихся в ней патологических процессов, в том числе и нарушением генетической программы клеточных процессов [Аничков, Кветной, Коновалов, 2004]. Опухолевые клетки обладают мощными защитными системами, которые позволяют им приспосабливаться к экстремальным условиям существования [Кадагид-зе, 2002]. Однако какими бы не были эти системы, возможность их реализации в первую очередь связана с протекающими в клетке метаболическими процессами, поскольку именно последние обеспечивают клетку пластическими и энергетическими ресурсами, необходимыми для развития адаптационных реакций [Кнорре, Мызина, 2002; Мари с соавт., 1993].

Нарушения отдельных ферментов и метаболических процессов в опухолевой ткани легкого при раке легкого показаны многими работами [Anandakumar et al., 2008; Rocha et al., 2010; Senthilnathan et al., 2006], однако многие детали метаболических дефектов при раке легкого до сегодняшнего дня не ясны. Также мало изучены энзиматические особенности отдельных, гистологических типов рака легкого.

При исследовании уровней активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в клетках опухолевой и немалигнизированной ткани легкого выявлены разнонаправленные нарушения отдельных звеньев метаболизма, в том числе и в зависимости от гистологического типа рака легкого.

Опухолевая ткань больных раком легкого в целом характеризовалась повышением активности ЛДГ по сравнению с немалигнизированной тканью (активность фермента повышена в 1,5 раза, р<0,01). В группе больных ПКРЛ установлено увеличение активности ЛДГ в 51 раз (р<0,05) и ГЗФДГ в 1,8 раза (р<0,05) в опухолевой ткани, В группе АКЛ найдено снижение активности ГР в опухолевой ткани по сравнению со здоровой (активность фермента снижена в 13,4 раза, р<0,01). В группе МКРЛ отмечалась более высокая активность ИЦДГ (р<0,05) и ГбФДГ (р<0,05) в опухолевой ткани по сравнению с аналогичным показателем при ПКРЛ и АКЛ. Более низкая активность НАДН-зависимой ЛДГ в здоровой ткани выявлена при АКЛ по сравнению с ПКРЛ (р<0,05). Активность ГР, характеризующаяся снижением в опухолевой ткани при АКЛ, в здоровой ткани отличается большей активностью по сравнению с ПКРЛ ¿><0,05).

Повышенным уровнем активности ИЦЦГ и Г6ФДГ в опухолевой ткани отличалась группа МКРЛ в сравнении с больными ПКРЛ и АКЛ (р<0,05).

Анализ показателей активности оксидоредуктаз в ткани легкого у больных с различными гистологическими типами позволил установить нарушения метаболизма в немалигнизированной ткани легкого у больных раком легкого. Так, у больных АКЛ по сравнению с больными ПКРЛ в немалигнизированной ткани отмечается значимое снижение активности реакции НАДН-ЛДГ (р<0,05) и более высокая активность ГР (р<0,05).

При анализе данных корреляционных взаимосвязей было установлено, что для клеток немалигнизированной ткани были характерны корреляции активности НАДН-МДГ с активностью НАДН-ГДГ (1=0,87, р<0,05), НАДФ-МДГ (г=0,70, р<0,05) и НАДФН-ГДГ (г=0,78, р<0,05); активности НАДФН-ГДГ с активностью НАДН-ГДГ (г=0,90, р<0,05) и Г6ФДГ (г=0,72, р<0,05).

Клетки опухолевой ткани характеризовались большим количеством корреляций по сравнению с немалигнизированной тканью. Выражешюе взаимодействие выявлено для активности НАДФН-ГДГ и НАДН-МДГ (г=0,84, р<0,05), НАДН-ГДГ (г=0,88, р<0,05), Г6ФДГ (г=0,77, р<0,05) и НАДФ-ИЦДГ (г=0,73, р<0,05); активности НАДФ-ИЦЦГ с активностью МДГ (г=0,72, р<0,05), НАДН-МДГ (г=0,73, р<0,05), НАДН-ГДГ (г=0,74, р<0,05) и Г6ФДГ (г=0,83, р<0,05); активности Г6ФДГ с активностью НАДН-МДГ (1=0,75, р<0,05) и НАДН-ГДГ (г=0,75, р<0,05); активности НАДН-МДГ с активностью НАДН-ГДГ (г=0,92, р<0,05).

Повышение активности ЛДГ в опухолевой легочной ткани, выявленное нами при раке легкого, особенно при ПКРЛ, показывает усиление преобразования лактата в пируват. Также в опухолевой ткани у больных раком легкого налюдалась конкуренция ПФП и этапов аминокислотного обмена за восставноленный НАДФН, о чем свидетельствует выявленная нами корреляция активности НАДФН-ГДГ и Г6ФДГ. Корреляция активности НАДФ-МДГ и МДГ может свидетельствовать о конкуренции аэробных путей ЦТК и малат-апартатного шунта за малат.

Можно предположить, что усиление гликолиза, установленное при ПКРЛ, приводит к усилению клеточных путей по снижению накопления НАДН в цитоплаз-

ме. Повьшение активности ГЗФДГ свидетельствует об усилении катаболизма липи-дов. Это подтверждается литературными данными: в исследовании Tokunaga et al. (1987) установлено повышение активности ГЗФДГ в опухолевой ткани легкого. Относительно повышенным уровнем ИЦДГ и Г6ФДГ в опухолевой ткани отличалась группа MKPJI в сравнении с ПКРЛ и АКЛ, что свидетельствует о повышении уровня пластических процессов, зависящих от продуктов ПФП и, как следствие, усилении ряда реакций ма!фомолекулярного синтеза, а также активности аэробных реакций митохондриального компартмента.

Анализ показателей активности оксидоредуктаз в ткани легкого при различных гистологических типах позволяет предполагать, что при злокачественном процессе в немалигнизированной ткани наблюдаются нарушения метаболизма: выявленная корреляция активности НАДН-МДГ с НАДФ-МДГ свидетельствует о наработке малата в немалигнизированной ткани легкого с помощью обратной реакции МДГ, который включается в реакции липидного обмена через НАДФ-МДГ. Корреляция активности НАДФН-ГДГ и Г6ФДГ показывает недостаток восстановленного НАДФН в цитоплазме, который необходим для пластических процессов ПФП и аминокислотного обмена.

Для немалигнизированной ткани легкого больных АКЛ (в сравнении с больными ПКРЛ) характерно нарушение терминальных этапов гликолиза на фоне усиления антиоксидантного звена вследствие снижения активности реакции НАДН-ЛДГ и повышения активности ГР.

При анализе данных нейросетевого анализа установлены информативные ферменты в немалигнизированной и опухолевой ткани легкого, позволяющие классифицировать различные гистологические типы рака легкого. В немалигнизированной ткани наибольшая информативность установлена для НАДФ-ГДГ, НАДФ-МДГ, ГЗФДГ, НАДН-ГДГ и НАДН-ЛДГ, в опухолевой ткани - НАДФ-МДГ, НАДФ-ГДГ и ГЗФДГ.

При исследовании взаимосвязей между активностью ферментов лимфоцитов крови и клеток немалигнизированной и опухолевой ткани легкого у больных раком легкого обнаружены корреляционные взаимосвязи НАДН-МДГ, ГДГ, НАДН-ГДГ и НАДФ-МДГ. Активность ЛДГ и МДГ в лимфоцитах коррелировала с активностью данных ферментов в немалигнизированной ткани легкого (г=0,26 и г=0,32, соответственно, р<0,05). В клетках немалигнизированной и опухолевой ткани взаимосвязаны следующие ферменты: ИЦЦГ (г=0,39, р<0,05), Г6ФДГ (г=0,56, р<0,05), НАДФ-ИЦЦГ (г=0,58, р<0,05), НАДФ-ГДГ (г=0,29, р<0,05), НАДФН-ГДГ (г=0,58, р<0,05).

Корреляционные зависимости между лимфоцитами и опухолевой тканью могли бы иметь значение в качестве диагностических или прогностических маркеров метаболических нарушений, однако в нашем исследовании таких показателей не установлено.

На основе данных нейросетевого анализа нами был проведен вычислительный эксперимент, в ходе которого база данных уровней активности ферментов немалигнизированной ткани, распределенная по трем классам (ПКР - АКЛ - МКРЛ), тестировалась на нейросети активности дегидрогеназ опухолевой ткани легкого. Установлено, что немалигнизированная ткань у больных ПКРЛ и АКЛ по активности ферментов определяется как опухолевая ткань в модели нейросетевого классификатора. В ряде случаев в немалигнизированной ткани больных ПКРЛ и АКЛ наблюдаются

изменения метаболизма, отличительные от параметров метаболизма опухолевой ткани при соответствующем гистологическом типе. Так, например, у 61% и 19,5% больных АКЛ активность ферментов немалипшзированной ткани легкого нейрокласси-фикатором определялась как активность дегидрогеназ опухолевой ткани ПКРЛ и МКРЛ, соответственно. У больных ПКРЛ немалигнизированная ткань легкого в 14,9% и 15,1% случаев по активности дегидрогеназ определялась как опухолевая ткань больных АКЛ и МКРЛ, соответственно. По активности ферментов немалигнизированная ткань легкого у больных МКРЛ в 75% случаев классифицировалась как опухолевая ткань МКРЛ. Следовательно, можно предположить, что для немалигни-зированной ткани легкого больных ПКРЛ и МКРЛ характерны главным образом изменения метаболических реакций, сходные с изменениями в опухолевой ткани легкого при соответствующем гистологическом типе. В то же время у большей части больных АКЛ немалигнизированная ткань по активности ферментов в ткани легкого характеризовалась изменениями метаболизма, отличительными от опухолевой ткани легкого своего гистологического типа.

Таким образом, установлены существенные разбросы по активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в клетках немалипшзированной и опухолевой ткани у больных раком легкого, в том числе и в заивисимости от гистологического типа рака легкого. Результаты корреляционного и нейросетевого анализа видетельствуют о том, что немалигнизированная ткань легкого характеризуется существенным напряжением метаболических процессов. Кроме того, установлено, что немалигнизированная ткань у больных ПКРЛ и АКЛ характеризуется неоднородностью распределения активности ферментов в модели нейросетевого классификатора. В ряде случаев в немалигнизированной ткани больных ПКРЛ и АКЛ, наблюдаются изменения метаболизма, отличительные от параметров метаболизма опухолевой ткани при соответствующем гистологическом типе.

Особенности активности дегидрогеназ в лимфоцитах крови и ткани легкого у больных раком легкого в зависимости от полиморфизма генов С5ГЛ// и р53

Установленное в нашем исследовании рисковое значение полиморфизмов С5ТМ1 и р53 с одной стороны и специфические в отношении определенных гистологических типов нарушения метаболизма лимфоцитов и ткани легкого с другой, позволяют выдвинуть предположение о наличии особенностей метаболизма у больных раком легкого с определенным "рисковым генотипом". В связи с этим нами была предпринята попытка проанализировать активность ферментов лимфоцитов и ткани легкого у больных раком легкого в зависимости от наличия выявленных нами генетических факторов риска.

Рисковая значимость СБГМ! 0/0 по нашим данным доказана для ПКРЛ и АКЛ. Однако анализ активности ферментов в зависимости от наличия "нулевого" генотипа (лЯГМ/ позволил установить, что только в лимфоцитах крови больных АКЛ выявляются определенные особенности. Ни в клетках немалигнизированной, ни опухолевой ткани при ПКРЛ и АКЛ не найдено достоверных отличий ферментативного статуса в зависимости от генотипа бЗТШ 0/0.

При наличии "нулевого" генотипа С5ТА// у больных АКЛ выявлено снижение активности МДГ (активность фермента снижена в 11,1 раза, р<0,005), ГР (активность фермента снижена в 9,2 раза, р<0,001) и обратной реакции НАДФ-зависимой ГДГ

(активность фермента снижена в 3,1 раза, типом GSTM1 (рис. 3).

т-1

О 10 20 30 40 % активности

по сравнению с нормальным гено-

Рис. 3. Процент активности ферментов МДГ, ГР и НАДФН-ГДГ в лимфоцитах крови в группе АКЛ с генотипом GSTM1 0/0 по отношению к аналогичным параметрам в группе AKJI с нормальным генотипом GSTM1.

Это может свидетельствовать о том, что на фоне общего угнетения метаболических процессов в лимфоцитах крови больных АКЛ при наличии генотипа риска GSTM1 присутствуют дополнительные нарушения. Так, ГР и НАДФН-ГДГ не отличались от контроля для всех гистологических типов, включая АКЛ, однако при наличии генотипа GSTM1 0/0 активность этих ферментов была существенно ниже. Активность МДГ, сниженная в лимфоцитах при всех гистологических типах рака легкого, в большей степени снижена у больных АКЛ с генотипом GSTM1 0/0 по сравнению с нормальным генотипом. Особенно интересным представляется факт низкой активности ГР при GSTM1 0/0-генотипе у больных АКЛ. Активность этого фермента взаимосвязана с активностью глутатиои-Б-трансферазы и можно было ожидать изменения активности этого фермента в группах ПКРЛ и АКЛ, для которых GSTM1 0/0 обладает рисковой значимостью. Наши данные свидетельствуют о снижении активности ГР только у АКЛ при GSTM1 0/0-генотипе.

Для больных ПКРЛ было установлено рисковое значение сочетания "GSTMI 0/0 - MTHFR CT". При исследовании активности оксидоредуктаз нами выявлено достоверное снижение активности только одного фермента - ГЗФДГ по сравнению с группой больных ПКРЛ (активность фермента снижена в 39 раз, р<0,05), у которых отсутствует генетический риск по данному полигенному сочетанию. Выявленная взаимосвязь требует более тщательного исследования для возможной интерпретации.

Для больных МКРЛ в нашем исследовании выявлена рисковая значимость генотипа р53 Arg/Pro. Однако только для ИДДГ выявлено повышение активности при Arg/Pro-генотипе по сравнению с Agr/Arg-генотипом (рис. 4).

Следовательно, лимфоциты больных МКРЛ с нарушением контроля клеточного цикла, к которому предрасполагает даный полиморфизм гена р53, могут отличаться большим пролиферативным потенциалом и усилением субстратного потока по ЦТК, лимитирующим ферментом которого является ИДДГ. В то же время анализ активности других ферментов ЦТК у больных МКРЛ не поддерживает этого предположения.

Следовательно, лимфоциты больных МКРЛ с нарушением контроля клеточного цикла, к которому предрасполагает даный полиморфизм гена р53, могут отличаться большим пролиферативным потенциалом и усилением субстратного потока по ЦТК, лимитирующим ферментом которого является ИТЩГ. В то же время анализ активности других ферментов ЦТК у больных МКРЛ не поддерживает этого предположения.

то м

30 40

20 10 О

Рис. 4. Активность ИЦЦГ у больных МКРЛ при полиморфизме гена р53.

Таким образом, в нашем исследовании установлено, что ПКРЛ, АКЛ и МКРЛ различаются между собой особенностями течения патологического процесса: по факторам генетической предрасположенности, специфическим нарушениям метаболических параметров в лимфоцитах крови и ткани легкого. Полиморфные генотипы генов GSTM1, р53 и MTHFR на начальных этапах канцерогенеза создают неблагоприятный генетический фон, который реализует свое влияние через нарушение этапов детоксикации ксенобиотиков, стабильности генома и контроля клеточного цикла [Albeorola et al. 2004; Altinisik et al., 2010; Dai et al., 2009]. В связи с этим при разных гистологических типах рака легкого запускаются различные патофизиологические механизмы злокачественной трансформации. Для ПКРЛ на начальных этапах канцерогенеза характерно большее значение нарушения механизмов детоксикации ксенобиотиков и контроля хромосомной и геномной стабильности, для АКЛ - нарушение механизмов детоксикации ксенобиотиков, а для МКРЛ - в большей степени нарушение контроля клеточного цикла.

Лимфоциты больных раком легкого характеризовались нарушениями ключевых метаболических и энергетических процессов: выявлено ингибирование гликолиза, липидного обмена, ПФП, ЦТК, переаминирования и митохондриального транспорта. У больных ПКРЛ и АКЛ выявлено нарушение связей между реакциями ЦТК и аминокислотного обмена. Для больных МКРЛ характерным являлось повышение аэробной энергетики на фоне оттока субстратов с реакций аминокислотного обмена на ЦТК. Также установлены дополнительные закономерности активности ферментов в лимфоцитах крови в зависимости от генетических факторов риска: у больных ПКРЛ при сочетании "GSTM1 0/0 - MTHFR С/Т" выявлено снижение интенсивности липидного обмена; у больных АКЛ при генотипе риска "GSTM1 0/0" наблюдалось снижение интенсивности реакций переаминирования и антиоксидантной защиты; у больных МКРЛ при генотипе риска р53 Arg/Pro выявлено компенсаторное стимулирование реакций ЦТК.

Выявленные значительные нарушения метаболических и энергетических реакций, в том числе и в зависимости от генетических факторов риска, свидетельствуют о том, что при раке легкого лимфоциты испытывают недостаток энергии и пластиче-

ских интермедиатов для основных метаболических процессов, протекающих в клетке. В связи с этим нарушаются процессы обновления структурных и рецепторных компонентов лимфоцитов и, как следствие, происходит нарушение контроля за процессами деления клеток в организме, в том числе и злокачественных, со стороны иммунной системы.

В нашем исследовании установлено, что немалигнизированная ткань легкого при раке легкого характеризуется существенным напряжением метаболических процессов, что, вероятно, обусловлено тем, что на фоне генетических факторов предрасположенности клетки легкого испытывают значительное влияние канцерогенов и других факторов. Здоровые клетки в ткани легкого начинают адаптироваться к создавшимся условиям. Так, например, в немалигнизированной ткани больных ПКРЛ в нашем исследовании выявлено усиление гликолиза на фоне ингибирования реакций антиоксидантной защиты. Это может приводить к усилению влияния канцерогенов на клетки, что в свою очередь сказывается на снижении способности к пролиферации. В то же время клетки немалигнизированной ткани легкого больных АКЛ характеризуются возрастанием интенсивности реакций антиоксидантной защиты.

Нарушения активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогсназ на фоне постоянного канцерогенного воздействия, а также нарушения механизмов дстоксикации ксенобиотиков приводит к тому, что в здоровых клетках ткани легкого запускаются процессы дезадаптации - происходит возникновение генетических и хромосомных мутаций. Нарушение контроля геномной стабильности и регуляции клеточного цикла приводит к их закреплению и запуску процессов злокачественной трансформации.

Принципиальные различия между тремя наиболее распространенными гистологическими типами рака легкого заключаются в том, какой тип эпителиальных клеток подвергается метаплазии и какова степень дифференцированности этих клеток. При ПКРЛ злокачествегаюй трансформации подвергаются дифференцирующиеся клетки цилиндрического эпителия, при АКЛ - клетки бронхиальных желез, при МКРЛ - нейросекреторные клетки [Ганцев, 2006; Keith, 2009]. Образующиеся в результате опухолевые клетки легкого характеризуются мощными защитными системами, которые позволяют им приспосабливаться к экстремальным условиям существования и избегать контроля со стороны иммунной системы [Кадагидзе, 2002].

Одним из проявлений адаптационных реакций ткани легкого является изменение интенсивности метаболических реакций, причем для различных гистологических типов рака легкого они также специфичны. В нашем исследовании в опухолевой ткани легкого при ПКРЛ установлено повышение интенсивности реакций ЦТК на фоне ингибирования липидного омена, что в целом активизирует энергетический обмен, активизирует пролиферацию опухолевых клеток и рост опухоли. Опухолевая ткань больных АКЛ характеризовалась ингибированием реакций антиоксидантной защиты, что также может свидетельствовать о процессах метаболической адаптации: на ткань легкого продолжают действовать канцерогены, но их детоксикация осуществляется образующимися окислителями. У больных МКРЛ в опухолевой ткани наблюдалось повышение интенсивности аэробных реакций и ПФП, что свидетельствует о высокой активности энергетического и пластического обмена опухолевых клеток. Этими изменениями может быть обусловлена высокая скорость пролиферации опухолевых клеток, высокая скорость роста опухоли и раннего метастазирования при МКРЛ.

Таким образом, на основании наших данных и работ других авторов можно дифференцировать различные гистологические типы рака легкого по факторам генетической предрасположенности, метаболическим нарушениям в лимфоцитах крови, немалигнизированной и опухолевой ткани легкого. Кроме того, можно предположить, что выявленные в нашем исследовании закономерности могут определять патофизиологические особенности течения и клинические проявления ПКРЛ, АКЛ и МКРЛ, а также могут быть использованы при разработке современных подходов профилактики, прогнозирования и лечения рака легкого.

На основании вышеизложенного могут быть предложены гипотетические схемы патогенеза ПКРЛ, АКЛ и МКРЛ (схемы 1-3).

га&ър 0?0 (рв. 2,65) "Ни Ч Ш - Щ-НРЯ С{Т(ОЛ 1,61) .

Нарушение детоксикацин. ксен оби отиков Нарушение геномной стабильности

Токсическое повреждение клеток -► Мутагейвз

ЛИМФОЦИТЫ

Метаболическая адаптация: 1 лшшдного "о б мена.

Малоэффективный энергетический

Нарушение обновления биомембран

Экергодефицшп, нарушение енутрждетачыайрепарации.

Частичная утрата иммунных функций

Нарушение иммунных функций

т

"Нарушение энергетического и шхастического обмена: 1 гликолиза, • | липядного обмена, IПФП... . | метаболизма в ЦТК, 1 митохендриального транспорта, | пере а минирования. Нарушение взаимосвязей ЦЧ'К аминокислотного обмена.

НЕМАЛИГНИЗИРОВАННАЯ ТКАНЬ ЛЕГКОГО

Метаболическая адаптация: | глнколзса,

ЛОЗ. (повышение мутагенеза, ограничения пролиферации). 70% . по типу клеток ПКРЛ, 30°/о ■ по типу клеток АКЛн МКРЛ.

Нарушение иммунного контроля и клеточного иммунитета

Экзогенные канцерогены

Стимуляция мутагенеза

Возникновение мутаций: дупликации 2р. Зq, 9q, 12р, 17ц, 18р и делеция 8р

Выживание мутаятньк кпетоь; закреал енне мутаций

Метаплазия мерцательного эпителия в многослойный плоский

ОПУХОЛЕВАЯ Т £АНЬ ЛЕГКОГО

Метаболическая адаптация: | лшшдного обмена, | оттока субстратов с гликолиза на ЦТК.

Повышение энергетического обмена

Стимуляция пр опиф ерации

Рост опухоли

НЛО СЖОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО

Схема 1. Гипотетическая схема механизмов патогенеза ПКРЛ (серым цветом выделены собственные результаты, двойными стрелками отмечен "порочный круг")-

* ' Фактор риска -

Нарушение детоксякацни ксенобиотихсе

Токсическое повреждение клеток -► Мутагенез

ЛИМФОЦИТЫ

Метаболическая адаптация: I ЦТК,

I АОЗ (детоксякация окислителями), I переаминирования.

Снижение энергетического и пластического обмена.

Снижение синтеза рецепторных и киллсрных белков. Частичная утрата иммунных функций

Нарушение иммунных функции

Нарушение энергетического и пластического обмена: 1. гликолиза, | липндного обмена, ].ПФП,

| метаболизма в ЦТК» | матохондриального транспорта, 1 переаминирования. Нарушение взаимосвязей. ЦТК аминокислотного обмена.

НЕМАЛИГ1ШЗИР ОВАННАЯ ТКАНЬ ЛЕГКОГО

Метаболическая адаптация: I гликолкза,

Т АОЗ {снижение мутагенеза). 19,5% - по типу »леток АКЛ, 61% - по типу клеток ПКРЛ, 19,5% - по -типу клеток МКРЛ.

Нарушение иммунного контроля и клеточного иммунитета

Экзогенные канцерогены

Стимуляция мутагенеза

Возникновение мутации: дупликации бр, 7р, 14 ц, 2 Од, Xделецик 9ц, 17р,

Выживание мутантных клеток; закрепление мутаций

Метаплазия дифференцирующихся клеток бронхиальных желез

ОПУХОЛЕВАЯ Т КАНЬ ЛЕГКОГО

Метаболическая адаптация; 1 ДОЗ.

Д етоксикация окислителями Повышение мутагенеза Сдерживание пролиферацции

Схема 2. Гипотетическая схема механизмов патогенеза АКЛ (серым цветом выделены собственные результаты, двойными стрелками отмечен "порочный круг").

Схема 3. Гипотетическая схема механизмов патогенеза МКРЛ (серым цветом выделены собственные результаты, двойными стрелками отмечен "порочный круг").

ВЫВОДЫ:

1. Риск развития рака легкого повышен в 2 раза (OR 2,17) при носительстве генотипа GSTM1 0/0. Риск развития ПКРЛ повышен при носительстве генотипа GSTM1 0/0 (OR 2,65) и сочетания генотипов "GSTM1 0/0 - MTHFR С/Т" (OR 1,61). Риск развития АКЛ повышен при носительстве генотипа GSTM1 0/0 (OR 2,42). Для развития МКРЛ фактором риска являлся генотипp53 Arg/Pro (4,37).

2. В лимфоцитах крови больных ПКРЛ и АКЛ установлено сходство нарушений активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ. Ферментативный статус клеток иммунной системы у больных МКРЛ отличается от особенностей внутриклеточного метаболизма лимфоцитов больных ПКРЛ и АКЛ повышением активности ИЦЦГ и НАДН-ГДГ. Независимо от гистологического типа в лимфоцитах крови больных раком легкого наблюдается ингибирование гликолиза, нарушение взаимодействий между циклом Кребса и реакциями аминокислотного обмена, нарушение липидного обмена, а также ингибирование ПФП.

3. У больных ПКРЛ метаболизм опухолевой ткани характеризуется повышенным уровнем переноса продуктов липидного катаболизма на реакции гликолиза. Метаболический статус опухолевой ткани у больных МКРЛ отличается активацией Г6ФДГ и НАД-ИЦДГ по сравнению с ПКРЛ и АКЛ. У больных АКЛ в опухолевой ткани установлено существенное снижение ГР по сравнению с немалигнизированной тканью. Независимо от гистологического типа опухолевая ткань легкого у больных раком легкого характеризуется повышением активности аэробной реакции ЛДГ по сравнению с немалигнизированной тканью.

4. Клетки немалигнизированной ткани у больных АКЛ по сравнению с показателями ПКРЛ характеризовались низкими показателями активности НАДН-ЛДГ и IT. В немалигнизированной ткани легкого у больных МКРЛ активность ферментов не отличалаяь от показателей при ПКРЛ и АКЛ. Обнаружена неоднородность распределения активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в немалигнизированной ткани у больных раком легкого: у 70% ПКРЛ, 19,5% АКЛ и 75% МКРЛ метаболические параметры соответствовали опухолевой ткани своего гистологического типа.

5. При GSTM1 0/0-генотипе в лимфоцитах крови больных АКЛ наблюдалось замедление реакций ГР на фоне низкой активности МДГ и НАДФН-ГДГ. При генотипе р53 Arg/Pro в лимфоцитах крови у больных МКРЛ наблюдалась активация цикла Кребса. При сочетании "GSTM1 0/0 - MTHFR С/Т" в лимфоцитах крови у больных ПКРЛ выявлено снижение активности ГЗФДГ. Особенностей метаболизма легочной ткани в зависимости от наличия генетических факторов риска рака легкого не выявлено.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Особенности системы детоксикации ксенобиотиков у здоровых жителей города Красноярска / O.A. Румянцева, Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] / Тезисы докладов X всероссийской научной конференции "Экология и проблемы защиты окружающей среды". - Красноярск, 2003. - С. 209-210.

2. Генетический полиморфизм ферментов биотрансформации ксенобиотиков при раке легкого и панкреатите / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] / Материалы VII международной научной школы-конференции студентов и молодых ученых

"Экология Южной Сибири и сопредельных территорий", - Абакан, 2003. - Т. 2. - С. 169-170.

3. Роль протоонкогена р53 и генов детоксикации ксенобиотиков в развитии рака легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] / Сборник материалов межрегиональной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Интеллект". - Красноярск, 2004. - С. 449-453.

4. Оптимизация ПЦР-реакции для амплификации генов системы битранс-формации (GSTM1, GSTT1, CYP1Ä1) и PRSSI / Е.В. Маркова, Н.В. Зотова, Н.В. Ушакова (Казьмина) / Сборник научных работ "Актуальные проблемы генетики, молекулярной биологии и биохимии". - 2004. - Т. 4, №1. - С. 21-23.

5. Состояние активности НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в клетках здоровой и опухолевой ткани у больных раком легкого в зависимости от полиморфизма гена GSTM1 / A.A. Савченко, П.В. Лапешин, Е.В. Маркова, Ю.А. Дыхно, М.В. Московских, И.Н. Денисов, Н.В. Ушакова (Казьмина) И Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, №3. - С. 24-27.

6. Молекулярно-генетические аспекты риска развития рака легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) / Материалы 8-ой международной пущинской школы-конференции молодых ученых "Биология - наука третьего тысячелетия". - Пущино, 2004.-С. 37.

7. Генотип-энзиматические корреляции у больных раком легкого / Е.В. Маркова, A.A. Савченко, П.В. Лапешин, М.Н. Московских, И.Н. Денисов, Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] / Материалы III съезда онкологов и радиологов СНГ. Часть I. -Минск,2004.-С. 282.

8. Особенности метаболического статуса клеток опухолевой ткани и полиморфизм GSTM1 у больных раком легкого / П.В. Лапешин, A.A. Савченко, Е.В. Маркова, Ю.А. Дыхно, М.Н. Московских, И.Н. Денисов, Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Материалы российской научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии". Часть 2. - Томск: Изд-во НТЛ, 2004. - С. 106-108.

9. Особенности уровней активности оксидоредуктаз в клетках опухолевой ткани и полиморфизм GSTM1 у больных раком легкого / A.A. Савченко, П.В. Лапешин, Е.В. Маркова, Ю.А. Дыхно, М.Н. Московских, И.Н. Денисов, Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Успехи современного естествознания. - 2004. - №4. - С. 119-120.

10. Arg/Рго-полиморфизм гена-онкосупрессора р53 у больных раком легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) // Материалы VIII международной научной школы-конференции студентов и молодых ученых "Экология Южной Сибири и сопредельных территорий". - Абакан, 2004. - Т. 2. - С. 150.

11. Особенности метаболизма лимфоцитов у больных раком легкого в зависимости от полиморфизма генов GSTM1 и GSTT1 / Е.В. Маркова, Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Сборник научных работ "Естествознание и гуманизм". - 2005. -Т. 2, №3. - С. 59-60.

12. Состояние метаболизма здоровой и опухолевой ткани легкого при полиморфизме генар53 у больных раком легкого / A.A. Савченко, Е.В. Маркова, П.В. Лапешин, Ю.А. Дыхно, Н.В. Ушакова (Казьмина) // Материалы межрегиональной научно-практической конференции "Объединение субъектов Российской Федерации

и проблемы природопользования в приенисейской Сибири". - Красноярск, 2005. - С. 341-342.

13. Роль генов детоксикации ксенобиотиков у больных раком легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Материалы межрегиональной научно-практической конференции "Объединение субъектов Российской Федерации и проблемы природопользования в приенисейской Сибири". - Красноярск, 2005. - С. 502-503.

14. Генетические факторы предрасположенности к раку легкого среди жителей Красноярска / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] / Материалы V съезда российского общества медицинских генетиков (часть Ш) // Медицинская генетика. - 2005. -Т. 4, №6.-С. 279.

15. Полиморфизм генов GSTM1 и GSTT1 у больных с различным гистологическим типом рака легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Сборник материалов 69-ой итоговой научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения проф. А.Н. Орлова (часть I). - Красноярск, 2005. - - С. 169-176.

16. Полиморфизмы генов GSTM1, GSTT1 и р53 в формировании предрасположенности к раку легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) / Материалы международной школы-конференции молодых ученых "Системная биология и биоинженерия". - Москва, 2005. - С. 64-66.

17. Комбинированные полиморфизмы генов GSTM1, GSTT1 и р53 в ассоциации с риском развития различных гистологических типов рака легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Медицинская генетика. - 2006. - №5 (47). - С. 43-46.

18. Генетические факторы предрасположенности и метаболический статус лимфоцитов у больных раком легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Красноярский государственный университет, - Красноярск, 2006. - 55 с. - Библиогр.: 87 назв. - Деп. в ВИНИТИ РАН 25.01.06 г. № 75-В2006.

19. Особенности генетической предрасположенности к развитию различных гистологических типов рака легкого / Н.В. Ушакова (Казьмина) [и др.] // Вестник Красноярского государственно университета. - 2006. - Т. 5. - С. 180-185.

20. Молекулярно-генетические особенности генов GSTM1, GSTT1, р53 и WHFR у больных раком легкого в Красноярском крае / Н.В. Казьмина [и др.] // Сборник научных трудов "Генетика человека и патология". - 2007. - Вып. 8. - С. 312-315.

21. Метаболический статус лимфоцитов в зависимости от стадии рака легкого и полиморфизма генов GSTM1 и р53 / Н.В. Казьмина [и др.] // Материалы IV съезда российского общества биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск, 2008. - С. 240.

22. Сравнительный анализ молекулярно-генетических исследований на образцах ДНК, выделенных из крови с ЭДТА и крови с гепарином / Е.В. Маркова, Н.В. Казьмина [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. - №3. - С. 13-15.

23. Ферменты метаболизма лимфоцитов у больных раком легкого / Н.В. Казьмина // Сборник материалов III региональной конференции молодых ученых им. академика РАМН Н.В. Васильева "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии" // Сибирский онкологический журнал. - 2008, - Приложение №1.-С. 63-64.

24. Энзиматические особенности опухолевой ткани легкого при полиморфизме генов GSTT1 и р53 у больных немелкоклеточным раком легкого / Н.В. Казь-

мина [и др.] // Материалы Всероссийской конференции с международным участием "Молекулярная онкология". - Новосибирск, 2008. - С. 110-111.

25. Особенности состояния метаболической системы клеток здоровой и опухолевой ткани у больных раком легкого в зависимости от полиморфизма генов GSTM1 / A.A. Савченко, Е.В. Маркова, П.В. Лапешин, Н.В. Казьмина [и др.] / Тезисы докладов XIV всероссийского симпозиума с международным участием "Сложные системы в экстремальных условиях". - Красноярск, 2008. - С. 47-48.

26. Молекулярно-клеточные механизмы снижения продолжительности жизни человека / Е.В. Маркова, A.A. Савченко, Н.В. Казьмина / Материалы научно-практического семинара Материалы научно-практического семинара "Актуальные вопросы долголетия" / Под ред. В.Т. Манчука, C.B. Смирновой. - Красноярск, 2008. -С. 90-106.

27. Зависимость метаболизма лимфоцитов крови от гистологического типа рака легкого при различных полиморфных вариантах генов GSTM1, р53 и MTHFR / A.A. Савченко, Н.В. Казьмина [и др.] / Материалы 13 межрегиональной научно-практической конференции с международным участием "Актуальные проблемы медицины". - Абакан, 2010. - С. 278-290.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АКЛ аденокарцшюма легкого

ГР глутатионредуктаза

ГЗФДГ глюкозо-3-фосфатдегидрогеназа

Г6ФДГ глюкозо-б-фосфатдегидрогеназа

МКРЛ мелкоклеточный рак легкого

гдг НАД-зависимая глутаматдегидрогеназа

иццг НАД-зависимая изоцитратдегидрогеназа

ЛДГ НАД-зависимая лактатдегидрогеназа

мдг НАД-зависимая малатдегидрогеназа

НАДФГДГ НАДФ-зависимя глутаматдегидрогеназа

НАДФИЦДГ НАДФ-зависимая изоцитратдегидрогеназа

НАДФМДГ НАДФ-зависимя малатдегидрогеназа

НМКРЛ немелкоклеточный рак легкого

НАДН-ГДГ обратная НАД-зависимая глутаматдегидрогеназа

НАДН-ЛДГ обратная НАД-зависимая лактатдегидрогеназа

НАДН-МДГ обратная НАД-зависимая малатдегидрогеназа

НАДФН-ГДГ обратная НАДФ-зависимая глутаматдегидрогеназа

ПКРЛ плоскоклеточный рак легкого

ПФП пентозо-фосфатный путь

ПЦР полимеразная цепная реакция

ПДРФ-анализ полиморфизм длины рестрикционных фрагментов

СБТАЛ ген глутатион-Б-трансферазы М1

ПФП пентозо-фосфатный путь

ЦТК цикл трикарбоновых кислот

05777 ген глутатион-З-трансферазы Т1

МГНЕЖ ген метилентетрагадрофолатредуктазы

р53 ген опухолевого супрессора Р53

Подписано в печать 04.08.10. Бумага офс. 80 гр/м2. Печать ризограф. Усл. печ. л. 1,86. Тираж 100 экз. Заказ № 2267.

Отпечатано в типографии ООО «Версо». 660079, г. Красноярск, ул. Л. Матросова, ЗОк. Тел. 235-04-89,235-05-89