Выявление наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа

Асташкина, Ольга Генриховна

Диссертации по медицине → Судебная медицина

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.24) на тему:Выявление наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Асташкина, Ольга Генриховна Москва 2004 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.24

Автореферат диссертации по медицине на тему Выявление наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа

На правах рукописи УДК: (616.15+616-003.261) - 074 - 091.818:340.6

Асташкина Ольга Генриховна

«Выявление наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа»

14.00.24 - судебная медицина

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2004 г.

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский Государственный медико-стоматологический университет» Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор В.В.Жаров Официальные оппоненты:

Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор, Юлий Иванович Соседко

доктор медицинских наук, профессор, Юрий Дмитриевич Гурочкин Ведущая организация:

Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет им. академика И.П. Павлова

Защита состоится_2004 года в_часов на

заседании диссертационного совета Д208.041.04 при государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский Государственный медико-стоматологический университет» Министерства Здравоохранения РФ (Москва, ул. Долгоруковская, д.4; почтовый адрес: Москва, ул. Делегатская, д.20/1, 127473)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский Государственный медико-стоматологический университет» Министерства Здравоохранения РФ (127206, Москва, ул. Вучетича, д. 10а).

Автореферат разослан_2004 года.

Ученый секретарь Диссертационного Совета,

кандидат медицинских наук, доцент Т.Ю. Хохлова

Актуальность исследования.

В России в настоящее время наркоманией страдает более 1 млн. человек и число лиц, употребляющих наркотические средства, за последние годы постоянно увеличивается (Кузьминых К.С., Бабаханян Р.В., 1998, Лисовская СБ., 2000, Александрова Л.Г. с соавт, 2001; Мелентьев А.Б. с соавт. 2001). Из общего числа насильственной смерти отравления составляют в среднем 23% (Мельникова Е.Ю., 2002). Проблема наркомании принимает угрожающие масштабы, растущее разнообразие наркотических и одурманивающих средств способствует вовлечению в свой мир все большего количества людей, как правило, молодого и юного возраста (Кригер О.В., Могутов СВ., Бутовский с соавт., 2001; Колкутин В.В., Соседко Ю.И., Пиголкин Ю.И., с соавт, 2002). Перестали быть редкостью случаи острого отравления наркотиками детей до 14 лет (Мельникова Е.Ю., 2002). Постоянным спутником наркомании являются такие страшные заболевания как ВИЧ и гепатиты В, С и некоторые другие, передающиеся парентеральным путем (Кригер О.В.,с соавт. 2001; Каниболоцкий А.А., с соавт. 2003, Lange WR. et al, 1990). По данным зарубежных исследователей большой процент потенциальных доноров злоупотребляет наркотиками (Mahl MA, Hirsch M, Sugg U., 2000; Peters FT, Maurer HH, Hellstem P., 2003).

Повышение уровня отравлений и смертности от передозировки наркотических средств влечет за собой увеличение количества судебно-химических экспертиз. Одним из распространенных наркотических средств, возможно, более доступным для населения, злоупотребляющего наркотиками, является морфин, представитель группы опиатов.

Диагностика наркомании у живых лиц не представляет большой проблемы вследствие широкого выбора исследуемого материала. Гораздо больше затруднений возникает при судебно-медицинской экспертизе трупов в связи с тем, что, как правило, отсутствует катамнестические данные и подробные сведения об обстоятельствах дела. При проведении

РОС. НАЦ!'.*Я\ЛЫ1АЯ БИБЛИОТЕКА

C.fleit^' ОЭ

судебно-медицинской экспертизы достаточно часто секционное исследование проводится спустя некоторое время после смерти (на 1-е, 2-е, 3-е сутки), в отдельных случаях и через значительно больший промежуток времени. В связи с этим, судебно-медицинские эксперты нередко исследуют трупы, подвергшиеся гнилостному разложению, что значительно затрудняет постановку диагноза. По данным Российского центра судебно-медицинской экспертизы за 2003 год на территории РФ было зарегистрировано 57 тыс. гнилостно измененных трупов с неустановленной причиной смерти.

Таким образом, возникают- определенные проблемы, связанные с исследованиями частично или полностью путрифисцированного биологического материала. Многие эксперты лабораторной службы не считают возможным исследовать такие объекты, мотивируя свой отказ недостоверностью возможных результатов.

Традиционные методы определения наркотиков в трупном материале при проведении судебно-медицинской экспертизы включают хроматографические методы анализа, такие как тонкослойная хроматография (ТСХ), газовая хромато-масс-спектрометрия (ГХ/МС), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) (Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В., 1993). Эти методы требуют пробоподготовки образца и занимают много времени (обычный срок исполнения судебно-химической экспертизы на наличие наркотических веществ составляет до 1 месяца по данным Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента Здравоохранения г. Москвы). Для проведения иммуноферментного анализа (ИФА) требуется кровь и моча, не нуждающиеся в специальной пробоподготовке. Срок исполнения экспертизы значительно меньше (до 1 дня), чувствительность и специфичность метода достаточно высоки, чтобы применять ИФА на предварительном этапе судебно-медицинского исследования (Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В., 1993).

Вопрос сохранности наркотических веществ группы опиатов в трупном материале изучен недостаточно, данные литературы противоречивы. Концентрация общего морфина и кодеина в моче при хранении в замороженном состоянии при -20°С была стабильна в течение года (Dugan S. at al., 1994). Содержание общего морфина и кодеина в моче снижается на 10-40% в течение 11 мес при хранении охлажденными до 4-8°С или замороженными при -15°С, при этом концентрация свободных морфина и кодеина постоянно возрастает (Веселовская Н.В., Коваленко А.Е., 2000). В комнатных условиях (25-30°С) за 11 мес концентрация общего морфина может уменьшиться на 70-100%, а концентрация свободного морфина меняется непредсказуемо (в зависимости от рН, наличия бактерий, концентрации коньюгатов), значительно увеличиваясь в некоторых образцах мочи в течение 30-90 дней хранения (Lin DL, et al, 1995). Морфин свободный и морфин коньюгированный стабильны в образцах мочи и крови в течение 10 дней хранения при температуре 4°С, 18-22°Си 37°С (Веселовская Н.В., Коваленко А.Е., 2000).

По данным литературы, есть возможность использования биохимических показателей при постановке диагноза наркотической интоксикации - определение концентрации глюкозы, гликогена и миоглобина (Павленко Е. Ю., с соавт. 2003). Помимо этого, при длительном злоупотреблении наркотическими препаратами, возможны полиорганные нарушения, которые можно выявить на основании изменений концентраций мочевины, креатинина. В моче возможно качественное выявление билирубина, уробилиногена и ацетона, что также способствует диагностике нарушений функциональной активности печени и почек. Обнаружение рядом с трупом приспособлений для инъекций наводит на мысль о злоупотреблении наркотиками, однако, не исключена возможность наличия сахарного диабета у потерпевшего. Для диагностики данного заболевания необходимо проводить исследование гликозилированного гемоглобина, глюкозы и ацетона. Активность

холинэстеразы также, по литературным данным, может свидетельствовать об употреблении морфина - морфин угнетающе воздействует на данный показатель (Смусин Я.С., 1980).

Таким образом, представляется весьма актуальным исследование трупного материала при наличии гнилостных изменений методом иммуноферментного анализа с сопоставлением результатов указанного метода с данными стандартных судебно-химических методов и с использованием биохимических показателей для уточнения диагноза наркотической интоксикации.

Цель работы: применить метод иммуноферментного анализа для выявления наличия наркотических веществ группы опиатов в крови и моче при гнилостной трансформации и разработать критерии экспертной оценки наркотической интоксикации по биохимическим показателям органов и тканей.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи.

Задачи исследования:

1. Провести исследование крови и мочи из трупов методом иммуноферментного анализа и тонкослойной хроматографии, газовой хромато-масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии для. сравнения полученных результатов по наличию наркотических веществ группы опиатов.

2. Провести иммуноферментное исследование крови и мочи из трупа, содержащей опиаты, в условиях хранения материала при температуре +4°С в течение 6 мес (1 день,1 неделя, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 26 недель) и при температуре +18-20°С в течение 6 мес (1 день,1 неделя, 2, 4, 6, 8, 12, 16,20,24,26 недель).

3.Провести иммуноферментное исследование крови и мочи из трупа, не содержащей опиаты, в условиях хранения материала при температуре +4°С в течение 6 мес (1 день, 1 неделя, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 26 недель) и

при температуре +18-20°С в течение 6 мес (1 день,1 неделя, 2, 4, 6, 8, 12, 16,20,24,26 недель).

4. Оценить влияние пробоподготовки трупного материала с элементами гемолиза и гниения (центрифугирование в течение 10 мин при 3 тыс. об/мин) на результаты иммуноферментного анализа.

5. Оценить антиокислительную активность крови и мочи с элементами путрификации с наличием опиатов и без таковых.

Научная новизна.

Впервые в судебно-медицинской практике применен метод иммуноферментного анализа с использованием диагностикума для обнаружения опиатов при гнилостных изменениях крови и мочи. Доказано, что гнилостное разложение объектов (кровь и моча) в сроки до 6 месяцев при хранении объектов при температуре +4 С и при температуре + 18-20 С не препятствует установлению наличия опиатов.

Впервые проведено исследование методом хемилюминесценции трупного материала, содержащего опиаты и раствора морфина.

Впервые для обоснования диагноза наркотической интоксикации использованы биохимические показатели - содержание глюкозы, гликогена, мочевины, креатинина, миоглобина, активности холинэстеразы, гликозилированного гемоглобина, билирубина, ацетона, уробилиногена в крови, моче, перикардиальной жидкости, печени, миокарде, скелетной мышце. Доказана возможность использования указанных показателей также для диагностики сахарного диабета.

Практическая значимость. В процессе исследования методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации получены результаты, позволяющие давать предварительную оценку наличия или

отсутствия наркотических веществ группы опиатов в исследуемом материале (кровь и моча). Разработана схема комплексной оценки биохимических показателей трупного материала (крови, мочи, печени, миокарда, скелетной мышцы, перикардиальной жидкости), что позволяет провести посхмертную диагностику сахарного диабета и наркотической интоксикации. Даны практические рекомендации по хранению и исследованию экспертного материала. На защиту выносятся положения:

1. Иммуноферментный анализ с использованием диагностикума обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Указанное положение подтверждено с помощью стандартных химических методов (тонкослойной хроматографии, газовой хромато-масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии), примененных для выявления наркотических веществ группы опиатов.

2. Иммуноферментный анализ информативен при выявлении наличия опиатов в крови и моче с гнилостными изменениями при хранении трупного материала при температуре +4 Си при температуре +18-20 С.

3. Пробоподготовка в виде центрифугирования в течение 10 мин при 3 тыс. оборотов/мин достоверно не влияет на результаты иммуноферментного анализа.

4. Проведение комплексной оценки биохимических показателей крови, мочи; перикардиальной жидкости, печени, миокарда и скелетной мышцы способствует постановке диагноза наркотической интоксикации и позволяет исключить диагноз сахарного диабета при подозрении на наркоманию.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на 2-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебной биохимии» (Санкт-Петербург, 2003), на заседании научного общества судебных химиков Российского Центра судебно-медицинской экспертизы (2004), на совместном заседании

кафедры судебной медицины МГМСУ, 9-ого танатологического отделения и химического отделения Бюро СМЭ ДЗ Москвы.

Внедрение в практику. Результаты, полученные в ходе проведения диссертационного исследования, внедрены в практическую деятельность Бюро судебно-медицинской экспертизы ДЗ г. Москвы. Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных статей. Получена приоритетная справка №2004109841.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена в 1 томе на 135 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов и практических рекомендаций, списка литературы, включающего 153 источника. (73 отечественных и 80 зарубежных авторов), приложений 1 и 2, иллюстрирована 17 таблицами и 47 рисунками.

Материалы иметоды исследования. Работа была выполнена на экспертном материале Бюро Судебно-медицинской экспертизы Департамента Здравоохранения г. Москвы.

В работе было проведено 1674 исследования методом иммуноферментного анализа 334 объектов (кровь и моча), а также 1118 биохимических исследований крови, мочи, печени, миокарда, скелетной мышцы, жидкости из полости перикарда.

Объекты были получены от 245 трупов лиц в возрасте от 16 до 75 лет. Количество трупов мужского пола 186, женского - 59. Давность смерти составляла от 1 до 3 дней. Рис.1 Материалы и исследования.

Инипгтрмм^тгпинищпамЯотм

Наибольшее количество случаев выявления наркотических веществ группы опиатов (66%) наблюдается в возрастном диапазоне 20-29 лет. Значительно большее, количество случаев обнаружение опиатов приходится на долю мужской половины населения. В работе были использованы следующие методы:

1.Метод иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием диагностикума для обнаружения в крови и моче наркотических веществ группы опиатов.

2. Газовая хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС) - метод определения наркотических веществ, использован для сравнения результатов ИФА.

3. Тонкослойная хроматография (ТСХ) - метод определения наркотических веществ, использован для сравнения результатов ИФА.

4. Высокоэффективная жидкостная хроматография — метод исследования мочи, на наличие наркотических веществ, использован для сравнения результатов ИФА.

5. Антроновый метод определения гликогена по Рою и Моррису в модификации Зейфтера.

6.Глюкозооксидазный метод определения глюкозы.

7. Метод определения мочевины в реакции с диацетилмонооксимом и метод определения креатинина по цветной реакции Яффе с использованием реактивов фирмы «ЬасЬеша».

8. Метод определения миоглобина в реакции пассивной гемагглютинации.

9. Спектрофотометрический метод определения концентрации гликозилированного гемоглобина.

10. Хемилюминесцентный метод определения антиокислителыюй активности биологического материала в модельной системе гемоглобин-люминол-перекись водорода (Нв-ЛМ-Н2О2).

11 .Методы статистической обработки данных.

Результаты исследования. Определение опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации. Сопоставление результатов с данными тонкослойной хроматографии и газовой хромато-масс-спектрометрии.

Все образцы трупного материала были исследованы методом тонкослойной хроматографии, газовой хромато-масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (моча) и методом иммуноферментного анализа.

В 97% случаев результаты, полученные методом ИФА, совпали с данными тонкослойной хроматографии и газовой хромато-масс-спектрометрии. Только в 3% случаев результаты, полученные методом ИФА, не совпали с результатами указанных методов (рис 2). Поскольку метод ИФА позволяет определять пикограммовые количества веществ, допустимым является вариант выявления минимальных количеств опиатов в объекте исследования, которые не могут быть обнаружены стандартными методами за счет более низкой чувствительности.

После исследования указанными методами, были отобраны 87 объектов, содержащих опиаты и 47 объектов, не содержащих опиаты, которые хранили при температуре +18-20° С и при температуре +4° С в течение 6 месяцев (около 26 недель), проводя определение наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа через 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 26 недель. На рис. 3 показана воспроизводимость метода иммуноферментного анализа (кривая эксперимента повторяется из раза в раз).

Рис.3. Воспроизводимость метода иммунофсрментного анализа.

I день

Оценку наличия опиатов проводили по значению оптической плотности (А). Учет результатов производили спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Реакцию считали положительной, если оптическая плотность исследуемого образца равна или ниже А стандартного раствора, что соответствует содержанию веществ группы опиатов в опытном образце не менее 300 нг/мл. В каждом эксперименте участвовал отрицательный контроль (специфические антиморфиновые антитела), положительный контроль (стандартный раствор морфина 6 нг/мл), модельная система (контрольная моча, в которой заведомо отсутствуют опиаты). Значения А исследуемых объектов необходимо сравнивать со значениями А указанных параметров ИФА для правильной оценки полученных результатов.

В таблице 1 представлены данные по выявлению опиатов в трупном материале в течение 6 мес по значению оптической плотности в виде с указанием достоверности. характеризуют группу

объектов, где опиаты обнаружены не были, Мг И М2 соответственно относятся к группе с выявленным наличием опиатов.

Таблица 1. Средние значения оптической плотности при исследовании объектов методом ИФА.

№№ срок М1 (Ах 100) м1(Ах!00) Достоверность М2(Ах100) м2(Ах100) Достоверность

1 1д 47.04 1.19 р<0.001 0.71 0.12 р<0.001

2 1н 38.61 1.40 р<0.001 0.48 0.09 р<0.001

3 2н 41.33 1.5 р<0.001 0.49 0.07 р<0.001

4 4н 41.57 1.42 р<0.001 0.7 0.09 р<0.001

5 6н 41.78 1.24 р<0.001 06 0.08 р<0.001

б 8н 41.55 1.3 р<0.001 0.64 0.09 р<0.001

7 12н 41.67 1.24 р<0.001 0.64 0.09 р<0.001

8 16н 42.55 1.2 р<0.001 0.56 0.09 р<0.001

9 20н 43.27 1.21 р<0.001 0.84 0.11 р<0.001

10 24н 47.04 1.49 р<0.001 0.71 0.10 р<0.001

И 26н 47.08 1.25 р<0.001 0.74 0.09 р<0.001

Средние значения оптической плотности в группе объектов, отрицательной на опиаты колебались в диапазоне от 38.61+ 1.40 до 47.08+1.25, что соответствует отсутствию веществ группы опиатов в образцах трупного материала. Средние значения оптической плотности в группе объектов, положительной на опиаты, находились в диапазоне от 0.48+0.09до0.84+0.11.

На рис. 4 представлена динамика значений оптической плотности трех выборочно взятых образцов, содержащих опиаты, измеренной методом иммуноферментного анализа, в течение 26 недель при хранении образцов при температуре +18-20° С.

Рис. 4. Динамика оптической плотности 3-х содержащих опиаты образцов при температуре хранения +] 8-20 С.

Динамика оптической плотности 3-х образцов,

содержащихопиаты, при1= 18-20С —„р.

'ПОЛОКК

Ким

1 2 4 6 8 12 16 20 24 26

Кривые, помеченные ромбом и треугольником, отображают динамику значений А отрицательного контроля и контрольной мочи, видно, что значений их достоверно не отличаются друг от друга, что дает возможность сделать вывод о правильности заключений, касающихся наличия наркотических веществ в исследуемых образцах. Очевидным является факт наличия опиатов в указанных образцах трупного материала.

На рис.5 представлены данные по динамике значений оптической плотности образцов, содержащих опиаты, хранящихся при температуре +4С в течение 26 недель.

Рис.5 Динамика оптической плотности положительных на опиаты образцов при температуре +4 С.

Динамика оптической плотности образцов, содержащих опиаты при Т=+4С

120

0 1 2 4 6 8 12 16 20 24 26

Аналогичная картина наблюдается при исследовании положительных образцов, хранящихся при температуре +4° С - по оптической плотности можно сделать вывод об отсутствии веществ группы опиатов в исследуемых образцах крови.

Такие же исследования были проведены в отношении не содержащих опиаты образцов трупного материала. Результаты исследований представлены на рис.6 ( на примере 10 образцов).

Значения оптической плотности отрицательного контроля и контрольной мочи достоверно не отличаются, значения А стандарта достоверно отличаются от А якоря и контрольной мочи. Значения А опытных образцов достоверно отличаются от значений А стандарта и достоверно не отличаются от значений А якоря и контрольной мочи, что свидетельствует об отсутствии наркотических веществ группы опиатов в объектах.

На следующем рисунке 7 представлены данные по изменению А образцов, отрицательных на опиаты при хранении их при температуре + 1820 С в течение 26 недель.

Рис.7. Динамика оптической плотности «отрицательных» образцов при температуре +18-20 С.

1 д 1 2 4 Б т&л. 12 16 20 24 26

В условиях комнатной температуры особенно отчетливо проявляется бактериальный пророст образцов трупного материала. Несмотря на это, большинство образцов показало стабильность в отношении значений оптической плотности, указывающей на отсутствие опиатов. Оптическая плотность образцов достоверно отличается от оптической плотности стандартного раствора.

Количественная оценка наличия наркотических веществ группы опиатов.

Теоретически была выведена формула для количественного определения наркотических веществ группы опиатов в исследуемом материале. Наличие опиатов в диагностически значимой концентрации 300 нг/мл устанавливают по значению оптической плотности (А), если Аив в диапазоне АпоЛожти1ьный кр>Аив>0. В том случае, если Аив=0 осуществляют разведение до тех пор, пока не станет отличной от 0, затем проводят количественное определение наркотических веществ группы опиатов по формуле:

где: С - концентрация наркотического вещества, нг/мл,

300 - диагностически значимая концентрация наркотического вещества

группы опиатов, нг/мл,

X - исходное разведение,

У - конечное разведение.

Способ количественного определения опиатов методом иммуноферментного анализа с использованием диагностикума, включая выше указанную формулу, были поданы в виде заявки в Патентное ведомство РФ. Получена приоритетная справка №2004109841. Практическое применение рассмотрено на примере: кровь развели в 50 раз (980 мкл раствора 2 + 20 мкл крови. При измерении А в лунке, содержащей отрицательный контроль получен результат 0.76; 0.77 (на каждый образец 2 лунки), А в лунке с положительным контролем (морфин 6 нг/мл) = 0.04;0.05; А в лунке, содержащей разведенный опытный образец составила 0,00; 0,00. Провели разведение крови в 100 раз и вновь произвели измерение А указанных образцов. Оптическая плотность опытного образца составила 0,00; 0,00. Далее процесс разведения и измерения А проводили до тех пор, пока А опытного образца не стала отличной от нуля. При разведении в 350 раз оптическая плотность опытного образца составила 0,03; Произвели расчет концентрации опиатов в

образце крови: С-(300x350)/50=2100 нг/мл.

Концентрация веществ группы опиатов в присланном на исследование образце крови составила 2100 нг/мл.

Оценка влияния пробоподготовки в виде центрифугирования на результаты иммуноферментного анализа

Считается, что при проведении ИФА желательно проводить пробоподготовку образцов трупной крови, включающую центрифугирование с целью осаждения эритроцитарной и белковой массы. Однако, в связи с тем, что в судебно-медицинской практике, как правило,

трупная кровь представлена сгусткообразной формой, с элементами фибринолиза и гемолиза, представляется весьма проблематичным отцентрифугировать такой материал. В связи с этим мы поставили перед собой задачу провести сравнительное исследование образцов трупной крови и мочи методом иммуноферментного анализа с пробоподготовкой и без.

В работе было проведено иммуноферментное исследование 30 образцов трупного материала, из них 28 объектов - кровь, 2 -моча.Образцы крови и мочи центрифугировали в течении 10 мин при 3 тыс. об/мин. Из 30 образцов крови 8 находились в состоянии гемолиза (таблица 2).

Таблица 2. Сравнение оптической плотности образцов, исследуемых после центрифугирования и без центрифугирования при проведении

иммуноферментного анализа.

№№ Безп/п, Сп/п, №№ Без п/п, Сп/п,

Ах 100 Ах 100 Ах 100 Ах 100

1 40 41 16 38 37

2 г 39 37 17 36 37

3 36 34 18 39 41

4 г 43 30 19 40 44

5 35 37 20 33 36

6 г 40 37 21 ' 2 1

7 г 36 30 22 1 0

8г 44 38 23 1 1

9 38 39 24 0 0

Юг 0 0 25 0 0

и 0 1 26 0 1

12 1 2 27 1 0

13 2 0 28 г 1 2

14 г 2 1 29 м 1 1

15 1 0 30м 1 1

А - значение оптической плотности исследуемого образца при

проведении ИФА;

г - гемолиз; м - моча

Пробоподготовка в виде центрифугирования не оказывает существенного влияния на результаты иммуноферментного анализа.

О влиянии опиатов на антиоксидантную активность трупной крови и мочи.

При нормальных условиях все клетки содержат широкий спектр антиоксидантов и ферментов, контролирующих образование свободных радикалов. Возможно, при действии наркотиков на организм происходят сдвиги в антиокислительной (АО) системе организма. В литературе нам не встретилось данных о влиянии опиатов, в частности, морфина, на процессы перекисного окисления липидов и АО активности крови. В связи с этим было проведено провести измерение АО активности трупной крови и мочи и стандартного раствора морфина в концентрации 6 нг/мл в модельной системе гемоглобин-люминол-перекись водорода. Не было выявлено существенного влияния опиатов на АО активность крови и мочи, однако были обнаружены антиокислительные свойства морфина при разведении стандартного раствора морфина в концентрации 6 нг/мл в 100 раз.

Оценка биохимических показателей органов и тканей из трупа при наличии опиатов.

Во всех образцах крови от каждого трупа были определены концентрации глюкозы, мочевины и креатинина, в отдельных случаях было проведено определение активности холинэстеразы крови, концентрации гликозилированного гемоглобина. Концентрация глюкозы также была определена в моче и перикардиальной жидкости.

В случаях, когда для исследования кроме крови были доставлены фрагменты печени, миокарда, скелетной мышцы, производилось определение гликогена тканей. В отдельно взятых случаях было проведено исследование крови и мочи, а также жидкости из перикардиальной полости с целью определения миоглобина в реакции обратной пассивной гемагглютинации.

В таблице 3 представлены средние значения концентраций биохимических показателей - глюкозы, мочевины, креатинина, гликогена, в группах 1 и 2 с указанием достоверности.

Таблица 3. Средние значения концетраций биохимических показателей.

Название биохимического показателя Образцы, не содержащие опиаты Образцы, содержащие опиаты достоверность

глюкоза крови 4,73+0.68 3,10+0.26 р<0.05

глюкоза перик/ж 9,17+2,72 2,13+0.35 р<0.001

глюкоза мочи 11.42+5.74 7.14+4.6

мочевина 9.62+1.34 5.45+0.28 р<0.001

креатинин 0.34+0.04 0.20+0.01 р<0.05

гликоген печени 1.3+0.28- 1.76+0.2 р<0.05

гликоген миокарда 0.03+0.03 ОНО

гликоген скелетной мышцы 0.55+0.09 0.68+0.08 р<0.05

миоглобин мочи 542.47+320.94 323.77+229.57

миоглобин перик/жид 75146.66+44818.31 224300.59+41612.53

миоглобин крови 47864.84+20820.35 18617.14+4179.04

гликозилированный гемоглобин 6.79+0.67 5.02+0.12 р<0.01

активность холинэстеразы 2.11+0.64 2.88+0.06 р<0.1

миоглобин мочи (Ьп) 4.68+0.41 4.05+0.37

миоглобин пери к/жидкости Оп) 10.85+0.61 11.64+0.23

миоглобин крови (Ьп) 8.94+0.28 8.77+0.18

Комплексная оценка биохимических показателей органов и тканей позволяет уточнить диагноз танатолога.

Высокие показатели глюкозы в крови и наличие гликогена в органах свидетельствует о быстрой смерти, например, в случае передозировки наркотиками. Также возможна посмертная диагностика сахарного диабета

по вышеуказанным показателям и при оценке содержания глюкозы и ацетона в моче. На основании полученных результатов мы предлагаем таблицу интерпретации данных по гликозилированному гемоглобину для трупной крови (таблица 4):

Таблица 4. Интерпретация результатов для трупной крови.

НвА|, % Степень контроля глюкозы

>12% возможна кома (уточнить показатели глюкозы крови и мочи, ацетон в моче

9-12% плохая

8-9% посредственная

7-8% удовлетворительная

6-7% близкая к норме гликемия

<6% недиабетический уровень

Показатели мочевины и креатинина, билирубина и уробилиногена характеризуют состояние печени и почек. Повышенное содержание креатинина и мочевины при наличии билирубина в моче указывают на нарушение функции почек. Отсутствие мочевины в крови может свидетельствовать о нарушении функции печени. Нормальные показатели мочевины и креатинина в крови свидетельствуют об отсутствии нарушений функции печени и почек, что характерно для молодых наркоманов, у которых не успевают развиться указанные нарушения. Наличие уробилиногена в моче при отсутствии билирубина может свидетельствовать о наличии гемолитической желтухи, пернициозной анемии, инфекции желчевыводящих путей.

По концентрации миоглобина возможно установить повреждение мышечной ткани, токсическое поражение организма. Высокие концентрации миоглобина в перикардиальной жидкости наблюдались у трупов лиц, злоупотребляющих наркотиками. Наличие опиатов достоверно не влияло на активность холинэстеразы крови.

Выводы.

1. Результаты исследований, подтвержденные стандартными химическими методами (тонкослойная хроматография, газовая хромато-масс-

спектрометрия, высокоэффективная жидкостная хроматография) свидетельствуют, что метод иммуноферментного анализа с использованием диагностикума обладает высокой чувствительностью и специфичностью и может быть рекомендован в судебно-медицинскую практику для установления наркотических веществ группы опиатов в крови и моче при экспертизе наркотической интоксикации.

2. Проведенными исследованиями установлено, что метод иммуноферментного анализа сохраняет свою информативность и достоверность при гнилостной трансформации и установление наличия опиатов в крови и моче из трупа в указанных условиях осуществимо в сроки до 6 месяцев постмортального периода.

3. Проведение комплексных биохимических исследований органов и тканей трупа (кровь, моча, перикардиальная жидкость, печень, миокард, скелетная мышца) и оценка их показателей способствует правильной постановке диагноза наркотической интоксикации и исключению наличия сахарного диабета у пострадавших.

4. Ряд условий пробоподготовки, а также эндогенные и экзогенные факторы (длительность центрифугирования в течение 10 мин, количество оборотов 3 тыс/мин, пол, возраст потерпевших, температура хранения, длительность хранения до 6 месяцев) существенно не влияют на результаты иммуноферментного анализа.

5. Результаты применения метода хемилюминесценции свидетельствуют о наличии определенной антиоксидантной активности стандартного раствора морфина в концентрации 6 нг/мл при разведении в 100 раз. Дальнейшее изучение указанного явления позволит раскрыть ряд существенных механизмов действия морфина на организм человека.

Практические рекомендации.

1. После изъятия крови и мочи из трупов, следует их поместить в стандартную стеклянную посуду (пузырек), закрытую крышкой и оперативно отправить их в судебно-химическую и судебно-биохимическую лаборатории на исследование. При отсутствии такой возможности кровь и мочу можно хранить в стеклянной посуде при температуре +4°С в течение нескольких дней.

2. При подозрении на наркотическую интоксикацию желательно направить кровь, мочу, пери кард иальную жидкость, кусочки печени, миокарда, скелетной мышцы для биохимического исследования на глюкозу, гликоген, . мочевину, креатинин, гликозилированный гемоглобин, билирубин, уробилиноген, ацетон, миоглобин.

3. При вскрытии гнилостных разложенных трупов с подозрением на наркотическую интоксикацию необходимо направить в биохимическую лабораторию кровь и мочу для исследования с помощью иммуноферментного анализа, так как процессы гнилостного разложения в сроки до 6 месяцев существенно не влияют на результаты исследования.

4. Для точной оценки наличия наркотических веществ группы опиатов целесообразно проводить исследование содержания глюкозы, гликогена, гликозилированного гемоглобина, ацетона, мочевины, креатинина, миоглобина в крови, моче, перикардиалыюй жидкости, печени, миокарде, скелетной мышце. Эти показатели позволяют также выявить наличие сахарного диабета, что важно при определении причин смерти.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1.Михайлова Г.В., Асташкина О.Г., Павленко Е.Ю., Зимина Л.Н., Баринова М.В. «Значение биохимических исследований в комплексной диагностике острых отравлений опиатами». Альманах судебной медицины (материалы 2-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебной биохимии»), Санкт-Петербург, №6,2003, с. 88-91.

2.Жаров В. В., Пашинян ГА, Асташкина О. Г. «Определение гликозилированного гемоглобина для посмертной диагностики нарушений углеводного обмена». Альманах судебной медицины (материалы 2-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебной биохимии»), Санкт-Петербург, №6,2003, с. 56-58.

3.Жаров В.В., Пашинян Г.А., Лапенков МИ., Асташкина О.Г. «Определение наличия наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа при определении опиатов методом иммуноферментного анализа». Альманах судебной медицины (материалы 2-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебной биохимии»), Санкт-Петербург, №6,2003, с. 54-56.

4.Жаров В.В., Пашинян Г.А., Асташкина О.Г. «О возможности биохимического исследования трупной крови в сроки до 21 дня после взятия материала». Альманах судебной медицины (материалы 2-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебной биохимии»), Санкт-Петербург, №6,2003, с. 54-56.

5. Асташкина О.Г. «Определение гликозилированного гемоглобина для посмертной диагностики сахарного диабета методом ионообменной хроматографии» // «Естественные и технические науки», Москва, №4 (13),2004,с.261-264.

6.Асташкина О.Г. «Оценка влияния пробоподготовки трупного материала при определении опиатов методом иммуноферментного анализа» // «Естественные и технические науки», Москва, №4 (13), 2004, с.265-266.

7. Асташкина О.Г. «О влиянии опиатов на антиоксидантную активность трупного материала» // «Естественные и технические науки», Москва, №4 (13), 2004, с.267-268.

8.Асташкина О.Г. «Исследование биохимических показателей трупного материала при наркотической интоксикации» // «Проблемы экспертизы в медицине», Ижевск, 2004, Т 4, № 3, с. 15-17.

Асташкина Ольга Генриховна

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ЛИЦЕНЗИЯПД№ 00608

Формат 60x84/16 1,7 усл. пл. Бумага офсетная 80 гр. Тираж 100 экз. Заказ № 98

Отпечатано с готовых О/М в типографии «Медина-Принт» ул. Новослободская д. 14/19 стр. 5 тел./факс: 787-62-21

Р16355

Оглавление диссертации Асташкина, Ольга Генриховна :: 2004 :: Москва

Введение. Актуальность исследования.

Глава 1. Современное состояние диагностики отравлений наркотическими веществами в судебно-медицинской практике (обзор литературы).

1.1. Диагностика отравлений наркотическими веществами.

1.2. Морфологические критерии наркотической интоксикации.

1.3. Химические критерии наркотической интоксикации.

1.4. Биохимические критерии наркотической интоксикации.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Определение опиатов в крови и моче методом имму но ферментного анализа с использованием диагностических наборов.

2.2. Определение опиатов в крови и моче методом газовой хромато-масс-спектрометрии.

2.3. Определение опиатов в трупном материале методом тонкослойной хроматографии.

2.4. Исследование мочи трупа на наличие наркотических веществ группы опиатов методом высокоаффинной жидкостной хроматографии.

2.5. Антроновый метод определения гликогена по Рою и Моррису в модификации Зейфтера.

2.6. Определение количества глюкозы крови, мочи, перикардиалъной э/сидкости глюкозооксидазным методом.

2.7. Определение концентрации мочевины и креатинина в крови.

2.8. Определение концентрации миоглобина в крови, моче, перикардиалъной жидкости.

2.9. Определение концентрации гликированного гемоглобина в крови.

2.10. Определение активности холинэстеразы в крови методом Хистрина в модификации Эйдельмана.

2.11. Хемилюминесцентный метод определения антиокислительной активности биологического материала в модельной системе гемоглобин-люминол-перекисъ водорода (He-JIM-H202).

2.12. Статистический анализ данных.

Собственные исследования.

Глава 3. Определение опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа.

3.1 Сопоставление результатов с данными тонкослойной хроматографии и газовой хромато-масс-спектрометрии.

3.2. Определение опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупного материала в течение б недель.

3.3 Определение опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупного материала в течение б месяцев (26 недель).

3.4. Оценка разности оптических плотностей по отношению к 1 дню измерения; каждого последующего измерения к предыдущему.

3.5. Количественная оценка наличия наркотических веществ группы опиатов.

3.6. Оценка влияния пробоподготовки в виде центрифугирования на результаты иммуноферментного анализа.

3.7. О влиянии опиатов на антиоксидантную активность трупной крови и мочи.

Глава 4. Оценка биохимических показателей трупного материала в группах объектов с наличием опиатов.

Введение диссертации по теме "Судебная медицина", Асташкина, Ольга Генриховна, автореферат

Актуальность исследования.

Проблеме диагностики смертельного отравления наркотическими веществами посвящены' многочисленные работы отечественных и зарубежных авторов.

По официальным данным число лиц, употребляющих наркотические средства, за последние годы постоянно увеличивается (2,13,21,33,34,40,41). В России в настоящее время наркоманией страдает более 1 млн. человек. Из общего числа насильственной смерти отравления составляют в среднем 23% (42). Проблема наркомании принимает угрожающие масштабы, растущее разнообразие наркотических и одурманивающих средств способствует вовлечению в свой мир все большего количества людей, как правило, молодого и юного возраста (29,30,31,36,42,53). Перестали быть редкостью случаи острого отравления наркотиками детей до 14 лет (42). Постоянным спутником наркомании являются такие страшные заболевания как ВИЧ и гепатиты В, С и некоторые другие, передающиеся парентеральным путем (26,31,115). По данным зарубежных исследователей большой процент потенциальных доноров злоупотребляет наркотиками (123,134).

Повышение уровня отравлений и смертности от передозировки наркотических средств влечет за собой увеличение количества судебно-медицинских экспертиз на наркотики.

Одним из распространенных наркотических средств, возможно, более доступным для населения, злоупотребляющего наркотиками, является морфин, представитель группы опиатов.

На рис. 1 представлены данные отделения общих химических методов исследования Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента Здравоохранения г. Москвы по определению наличия веществ группы опиатов в трупном материале за 2000-2003 г:

Рис. t. Случаи определения опиатов в трупном материале за 2000-2003 гг.

800

700

600

500

400 <

300

200

100' морфин кодеин героин а 6-МАМ

2000

2001

2002

2003

Прослеживается тенденция к сокращению случаев обнаружения наркотических веществ группы опиатов. Однако, этот факт не свидетельствует об однозначном уменьшении употребления наркотиков этой группы. Эти данные говорят лишь о возможном сокращении смертельных случаев отравлений.

Диагностика наркомании у живых лиц не представляет проблемы вследствие широкого выбора исследуемого материала. Гораздо больше затруднений возникает при судебно-медицинской экспертизе трупов, в том числе на наличие наркотических средств, в связи с тем, что, как правило, отсутствует анамнестические данные, обстоятельства дела. При проведении судебно-медицинской экспертизы достаточно часто секционное исследование проводится спустя некоторое время после смерти (на 1-е, 2-е, 3-е сутки). В отдельных случаях после наступления смерти может пройти значительно больший промежуток времени, В связи с этим судебно-медицинским экспертам приходится сталкиваться с трупами, подвергшимися в какой-то мере гнилостному разложению, что значительно затрудняет постановку диагноза. По данным Российского центра судебно-медицинской экспертизы за 2003 год на территории РФ было зарегистрировано 57 тыс. гнилостно измененных трупов с неустановленной причиной смерти. По данным Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента Здравоохранения г. Москвы за 2003 год насчитывается 150 таких случаев в Москве. Таким образом, возникают определенные проблемы, связанные с исследованиями частично или полностью путрифисцированного биологического материала (1,32,66). Многие эксперты лабораторной службы не считают возможным исследовать такие объекты, мотивируя свой отказ недостоверностью возможных результатов.

Учитывая факт наличия определенных морфологических критериев диагностики наркотической интоксикации, необходимо отметить, что решающая роль в постановке данного диагноза принадлежит все-таки результатам судебно-химического исследования.

Существующие ныне иммунохимические методы позволяют провести исследование на наличие наркотических средств гораздо быстрее, в частности, иммуноферментный анализ может дать результат в течение 1 дня. Такие методы достаточно просты, не требуют специальной пробоподготовки, обладают чувствительностью и специфичностью. Среди иммунохимических методов исследования в судебной токсикологии наиболее распространены следующие: иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА) и поляризационный флюороиммуноанализ (ПФИА) (21,34).

Как было указано выше, исследование гнилостно измененных трупов, в частности на наличие наркотиков, представляет значительные трудности.

Вопрос о сохранности наркотических веществ в тканях и органах трупа при гнилостных изменениях недостаточно изучен. По данным литературы опиаты достаточно быстро метаболизируются. Период полужизни морфина в плазме 2-3 ч, связывание с белками 20-30% (10). Кинетика элиминирования из плазмы свободного и связанного морфина различны. После введения 1 мг/кг морфина (инъекции в спинномозговой канал) максимальная концентрация в плазме 100 нг/мл в интервале 2-5 мин уменьшается до 60 нг/мл в течение 1-1.5 часов и до 15-10 нг/мл в через 2-4 часа. Концентрация связанного морфина увеличивается при этом от 9 до 80 нг/мл в интервале 2-20 мин и затем остается неизменной по крайней мере до 4 часов (10). Выведение морфина происходит через почки. За 8 часов выводится 80% введенной дозы морфина, за 24 ч - 64-90%, через 72100 ч в моче определяют следы морфина (10). По данным С.Н. Сучковой и В.А. Томилина (1995) период полужизни морфина в крови составляет 2-3 ч, экскреция опиатов с мочой завершается в течение 2 суток, при абстиненции (через 1-3 суток после последней интоксикации) опиаты обнаруживались в моче и не выявлялись в сыворотке крови (62). При определении наркотиков в крови и моче от 52 добровольцев методом ГХ-МС морфин удалось обнаружить в течение 270 часов, 6-моноацетилморфин в течение 34.5 часов, в сыворотке крови морфин определяется в течение 121 часа. Кодеин в моче присутствует 123 часа, в сыворотке до 29 часов (136).

В отношении стабильности морфина и кодеина в биологических жидкостях данные литературы противоречивы. Концентрация общего морфина и кодеина в моче при хранении в замороженном состоянии при -20°С была стабильна в течение года (90). По литературным данным содержание общего морфина и кодеина в моче снижается на 10-40% в течение 11 мес при хранении охлажденными до 4-8°С или замороженными при при этом концентрация свободных морфина и кодеина постоянно возрастает. В комнатных условиях (25-30°С) за 11 мес концентрация общего морфина может уменьшиться на 70-100%, а концентрация свободного морфина меняется непредсказуемо (в зависимости от рН, наличия бактерий, концентрации коньюгатов), значительно увеличиваясь в некоторых образцах мочи в течение 30-90 дней хранения (120). Морфин свободный и морфин коньюгированный стабильны в образцах мочи и крови в течение 10 дней хранения при температуре 4°С, 18-22°С и 37°С (10).

В литературе есть данные о сохранности наркотиков и лекарств в волосах, ногтях в течение длительного времени (103,111). В волосах наркоманов присутствие наркотиков, в том числе и опиатов, адекватно выявляется только с помощью высокочувствительных химико-токсикологических методов как радиоиммунный анализ, газовая хромато-масс спектрометрия, высокоэффективная жидкостная хроматография вследствие их низкой концентрации (нг/мл) (138). Проведение исследования волос на присутствие наркотических веществ оправдано в случае необходимости подтверждения диагноза хронической интоксикации при клиническом исследовании, а также в судебно-медицинской практике для выяснения причин летального исхода при подозрении на острую интоксикацию. Показано, что после одноразового употребления наркотики обнаруживаются в волосах не ранее, чем через 57 дней (когда они уже не выявляются в крови, слюне и моче), и сохраняются в волосах, не метаболизируясь, в течение нескольких лет (87,94). Однако, анализ такого материала требует значительной пробоподготовки и времени (34).

В судебно-медицинской практике часто бывает необходимо в самом начале судебно-медицинской экспертизы правильно сориентировать танатолога в вопросе о наличии наркотических веществ в трупном материале, помочь в выборе хода исследования. В таких случаях серьезным недостатком является срок исполнения судебно-химической экспертизы. Кроме того, судебно-химическое исследование на наркотики не всегда дает истинный положительный результат, что связано с недостаточно высокой чувствительностью традиционных химических методов (31,34). Многие авторы считают оптимальным вариантом использование высокочувствительного иммунохимического анализа с применением стандартизированных реагентов для лабораторной диагностики наркотической интоксикации (46,62). Использование иммуноферментного анализа позволяет выявить скрытые формы наркомании в случае отсутствия употребляемого вещества в организме (46,62). Для иммуноферментного исследования требуется кровь и моча, не нуждающиеся в специальной пробоподготовке, срок исполнения экспертизы значительно меньше (до 1 дня), чувствительность и специфичность метода достаточно высоки, чтобы применять ИФА на предварительном этапе судебно-медицинского исследования (21). По данным литературы, есть возможность использования биохимических показателей при постановке диагноза наркотической интоксикации — определение концентрации глюкозы, гликогена и миоглобина (48). Помимо этого, при длительном злоупотреблении наркотическими препаратами, возможны полиорганные нарушения, которые можно выявить на основании изменений концентраций мочевины, креатинина. В трупном материале возможно качественное выявление билирубина, уробилиногена и ацетона в моче, что также способствует диагностике нарушений функциональной активности печени и почек. Обнаружение рядом с трупом приспособлений для инъекций наводит на мысль о злоупотреблении наркотиками, однако, не исключена возможность наличия сахарного диабета у потерпевшего. Для диагностики данного заболевания необходимо проводить исследование гликозилированного гемоглобина, глюкозы и ацетона. Активность холинэстеразы также, по литературным данным, может свидетельствовать об употреблении морфина - морфин угнетающе воздействует на данный показатель (55). Возвращаясь к вопросу о недостаточном изучении сохранности наркотиков в трупном материале в условиях гниения представляется весьма актуальным исследование трупного материала при наличии гнилостных изменений методом иммуноферментного анализа с обязательным сопоставлением результатов указанного метода с данными стандартных судебно-химических методов.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи.

Задачи исследования:

1. Провести исследование крови и мочи из трупов методом иммуноферментного анализа и тонкослойной хроматографии, газовой хромато-масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии для сравнения полученных результатов по наличию наркотических веществ группы опиатов.

3.Провести иммуноферментное исследование крови и мочи из трупа, не содержащей опиаты, в условиях хранения материала при температуре +4°С в течение 6 мес (1 деньД неделя, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 26 недель) и при температуре +18-20°С в течение 6 мес (1 день,1 неделя, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 26 недель).

6. Оценить изменение биохимических показателей (глюкозы, мочевины, креатинина, миоглобина, гликогена, активности холинэстеразы, гликированного гемоглобина) в крови, моче, перикардиальной жидкости, печени, миокарде, скелетной мышце при наличии опиатов. Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на 2-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебной биохимии» (Санкт-Петербург, 2003), на заседании научного общества судебных химиков Российского Центра судебно-медицинской экспертизы (2004), совместном заседании кафедры судебной медицины МГМСУ, 9-ого танатологического отделения и химического отделения Бюро СМЭ ДЗ Москвы (2004).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена в 1 томе на 135 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов и практических рекомендаций, списка литературы, включающего 153 источника (73 отечественных и 80 зарубежных авторов), приложений 1 и 2, иллюстрирована 17 таблицами и 47 рисунками. На защиту выносятся положения:

Заключение диссертационного исследования на тему "Выявление наркотических веществ группы опиатов методом иммуноферментного анализа при гнилостной трансформации трупа"

Выводы.

1. Результаты исследований, подтвержденные стандартными химическими методами (тонкослойная хроматография, газовая хромато-масс-спектрометрия, высокоэффективная жидкостная хроматография) свидетельствуют, что метод иммуноферментного анализа с использованием диагностикума обладает высокой чувствительностью и специфичностью и может быть рекомендован в судебно-медицинскую практику для установления наркотических веществ группы опиатов в крови и моче при экспертизе наркотической интоксикации.

3. Проведение комплексных биохимических исследований органов и тканей трупа (кровь, моча, перикардиальная жидкость, печень, миокард, скелетная мышца) и оценка их показателей способствует правильной постановке диагноза наркотической интоксикации и сахарного диабета у пострадавших.

4. Ряд4 условий пробоподготовки, а также эндогенные и экзогенные факторы (длительность центрифугирования в течение 10 мин, количество оборотов 3 тыс/мин, пол, возраст потерпевших, температура хранения, длительность хранения до 6 месяцев) существенно не влияют на результаты иммуноферментного анализа.

Практические рекомендации.

1. Необходимо изъять кровь и мочу от трупа, поместить в стандартную стеклянную посуду (пузырек), закрытый стандартной крышкой. Допустимо хранение объектов при температуре +4 С, однако желательна незамедлительная отправка объектов в судебно-химическую и судебно-биохимическую лаборатории на исследование.

2. При подозрении на наркотическую интоксикацию желательно направить объекты (кровь, мочу, перикардиальную жидкость, кусочки печени, миокарда, скелетной мышцы) для биохимического исследования на глюкозу, гликоген, мочевину, креатинин, гликированный гемоглобин, билирубин, уробилиноген, ацетон, миоглобин.

3. При вскрытии гнилостных разложенных трупов с подозрением на наркотическую интоксикацию необходимо исследовать кровь и мочу методом иммуноферментного анализа, так как процессы гнилостного разложения в сроки до 6 месяцев существенно не влияют на результаты исследования.

4. При оценке результатов биохимических показателей (глюкоза, гликированный гемоглобин, ацетон, мочевина, креатинин) и определения наркотических веществ группы опиатов имеется возможность выявления наличия сахарного диабета, что может быть осуществлено судебно-медицинским экспертом при вскрытии трупов, причиной смерти которых может быть сахарный диабет.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Асташкина, Ольга Генриховна

1. Авдеев М.И. Судебно-медицинская экспертиза трупа. Москва "Медицина", 1976. - 440 с.

2. Асатиани B.C. Методы биохимических исследований. Москва: "Медгиз", 1956, с 255-259.

3. Асташкина О.Г. «Исследование биохимических показателей трупногоматериала при наркотической интоксикации» // «Проблемы экспертизы}

4. Астащкина О.Г. «О влиянии опиатов на антиоксидантную активность• * ' ' 1 , ' *" 1 -трупного материала» // «Естественные и технические науки», Москва,4 (13), 2004, с.267-268. ' ' , ' t ! '':

5. Асташкина О,Г. «Определение гликозилированного гемоглобина для1. Г ^ j v ^ , 1посмертной диагностики сахарного диабета методом ионообменной хроматографии» // «Естественные и технические науки», Москва, №4v' * / ' / 113., 2004, C.26U264., * i t

6. Асташкина О.Г. «Оценка влияния пробоподготовки трупного материалаs , j »при определении опиатов ' методом иммуноферментного анализа» //г' 4

7. Естественные и технические науки», Москва, №4 (13), 2004, с.;2(?5-266/1. V ' > < Г- »

8. Богомолов Д.В. Судебно-медицинская диагностика наркотической интоксикации по -морфологическим данным. Автореф. дис. д.м.н./

9. Российский Центр судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ. 2001. - 32 с.

10. Ю.Веселовская Н.В., Коваленко А.Е. Наркотики. -Москва "Триада-Х", 2000.-206 с.

11. П.Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. Москва: Наука, 1972. - 252 с.

12. Внутренние болезни: Учеб. Пособие/Под ред. д.м.н. Елисеева Ю.Ю. -Москва: Крон-Пресс, 1999. 848 с.

13. Воронин Е.С., Петров A.M., Серых М.М., Девришов Д.А. Иммунология; Под ред. акад. РАСХН Е.С. Воронина. -Москва: "КОЛОС-ПРЕСС", 2002.-С. 163-167.

14. Гамалея Н.Б. Иммунологическая характеристика и иммунодиагностика опийной наркомании: Автореф. дис. на соиск. уч. степ. д.м.н. / Государственный научный центр наркологии Минздрава РФ. Москва, 1992.-33 с.

15. Гамалея Н.Б., Паршин А.Н. Иммунодиагностика наркоманий // Тезисы докладов республ. совещ. врачей психиатров-наркологов "Медицинские аспекты проблемы наркомании". Москва, 1991. - С. 30-33.

16. Гланц Стентон. Медико-биологическая статистика. Москва: Практика, 1999. - 459 с.

17. Горбачева Н. А., Орлова А. М. Применение ТСХ-анализа при судебно-химическом исследовании мочи на опиаты // Судебно-медицинская экспертиза. 2003. - №3. - с. 34-48.

18. Горская М.Н. Острые отравления веществами наркотического действия по данным токсикологического центра // Теория и практика судебной медицины, 2 выпуск: Труды Петербургского научного общества судебных медиков/СПбГМУ. Санкт-Петербург, 1998. - С. 105-108.

19. Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В. Анализ наркотических средств Руководство по химико-токсикологическому анализу наркотических и других одурманивающих средств. М.: "Мысль". -1993. - 265 с.

20. Иммунологические методы: Метод, рек.; Пер. с нем. яз.; Под ред Г.Фримеля. Москва: "Медицина", 1987. - С. 162-224.

21. Качина Н.Н. Посмертная оценка гликемии по уровню глюкозы и гликозилированного гемоглобина крови // Суд- Мед. Экспертиза. 1991. - №4. - с. 7-10.

22. Кинле А.Ф. Правила- забора, хранения, доставки биоматериала для биохимического исследования и трактовки биохимических показателей в судебно-медицинской практике: Методические реком. Москва, 2002. -35 с.

23. Колкутин В.В., Пиголкин Ю.И., Соседко Ю.И. Медико-правовые аспекты профилактики и диагностики наркоманий // Военно-медицинский журнал. 1999. - №4. - С. 23-25.

24. Колкутин В.В., Соседко Ю.И., Пиголкин Ю.И., Романенко Г.Х. Проблема токсикомании среди военнослужащих // Военно-медицинский журнал. 2002. - №3. - С.23-27.

25. Кригер О.В., Могутов С.В., Бутовский с соавт. Судебно-медицинская экспертиза смертельных отравлений наркотическими веществами // Судебно-медицинская экспертиза. 2001. - №2. - С. 9-14.

26. Крюков В.Н. Судебная медицина. -Москва "Медицина", 1998. 464 с.

27. Лисовская С.Б., Смирнов А.В., Симонов Е.А., Изотов Б.Н., Буркин А.А. Иммунохимические методы определения опиатов в тканях и органах // Судебно-медицинская экспертиза.- 2000. №6. - С. 25-30.

28. Литвинцев С.В., Шамрей В.К., Лытаев А.А. Наркологическая ситуация в Вооруженных Силах РФ // Военно-медицинский журнал. 2001.-Т.322. - №6. - С.4-10.

29. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления: Руководство для врачей. Москва.: "Медицина", 2000. - 434 с.

30. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуелл В. Биохимия человека в 2-х т. / Пер с англ. яз.; под. ред. д-ра хим. наук Л.М.Гинодмана. Москва: "Мир", 1993.-с. 52-62.

31. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия. / Пер с англ. яз.; Под ред. д-ра мед. наук Н.И. Новикова. Москва. - СПб.: "Издательство БИНОМ" -"Невский Диалект", 2002.- 384 с.

32. Мелентьев А.Б., Новиков П.И. О кумулятивном действии алкоголя и героина // Судебно-медицинская экспертиза отравлений наркотическими веществами, психотропными средствами и алкоголем: Сб. Научных работ / РБСМЭ. Казань, 2001. - С. 43-49.

33. Мельникова Е.Ю. Особенности судебно-медицинской экспертизы отравлений в детском возрасте. Автореф. дис. к.м.н./ Московский государственный медико-стоматологический университет. 2002. - 25 с.

34. Молин Ю.А. Судебно-медицинская экспертиза повешения. -Санкт-Петербург: НПО "Мир и семья", 1996. С. 151.

35. Мягкова М. А., Брюн Е. А., Копоров С. Г., Панченко О. Н., Абраменко Т. В. Иммуноглобулины, связывающие опиоидные пептиды, биогенные амины и опиаты у больных наркоманией // Судебно-медицинская экспертиза. 2001. - №1. - С. 18 .

36. Назаров Г.Н., Николенко Л.П. Судебно-медицинское исследование электротравмы. -Москва. -1992. с. 105-117.

37. Павленко Е. Ю., Зимина JI. Н., Таланкина И. Е., Баринова М. В. Аспекты судебно-медицинской диагностики острых отравлений опиатами // Судебно-медицинская экспертиза 2003. - №3 . -с. 10-14.

38. Пиголкин Ю.И., Богомолов Д.В., Богомолова И.Н. с соавт. Возможности использования морфометрических методов в судебно-медицинской диагностике отравлений наркотиками // Проблемы экспертизы в медицине. 2001. - №1. - С. 18-20.

39. Ройт А. Основы иммунологии / Пер. с англ. яз.,; Под ред. канд. хим. наук Василова Р.Г. и канд. биол. Наук Киркина А.Ф. Москва: "Мир", 1991. - С.84-100.

40. Романенко Г.Х. Судебно-медицинская диагностика токсикоманий со смертельным исходом. Автореф. дис. к.м.н./ Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова. 2003. - 30 с.

41. Руководство по наркологии, том 1; под ред. член-кор. РАМН проф. Н.Н. Иванца. Москва: Медпрактика-М, 2002. - С.8-41.

42. Руководство по наркологии, том 2; под ред. член-кор. РАМН проф. Н.Н. Иванца. Москва: Медпрактика-М, 2002. - С.440-451.

43. Руководство по судебно-медицинской экспертизе отравлений; под ред. Р.В. Бережного, Я.С. Смусина, В.В. Томилина, П. П. Ширинского. -Москва: Медицина, 1980, С.186.

44. Смусин Я.С. Судебно-медицинская экспертиза отравлений антихолинэстеразными веществами. Москва: "Медицина", 1968. -191 с.

45. Солохин Е. В., Каниболоцкий А. А., Чернолихова И. А., Лаптева М. И., Потемкин А. М. Отравление опиатами (анализ секционного материала) // Судебно-медицинская экспертиза. 2002. - №2. - С. 32.

46. Сучкова С.Н., В.А. Томилин. Лабораторная диагностика наркотической интоксикации//Вопросы Наркологии. 1999. - №4. - С. 38-52.

47. Сучкова С.Н., Томилин В.А. Вопросы лабораторной диагностики острой и хронической наркотической интоксикации // Концептуальные вопросы наркологии: Сб. научных трудов / ИПКФУ МБЭП, РГМУ. -Москва, 1995. С. 139-143.

48. Титов В.Н., Коткина Т.И., Волкова Е.И., Миоглобин крови: диагностическое значение и методы исследования (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - № 3. - С. 3-10.

49. Харитонов Ю.Я. Аналитическая химия (аналитика). В 2 кн. Кн. 1 Общие теоретические основы. Качественный анализ. Учеб. Для вузов. Москва: "Высшая школа", 2001. - С. 264-286.

50. Харитонов Ю.Я. Аналитическая химия (аналитика). В 2 кн. Кн. 2 Количественный анализ. Физико-химические (инструментальные) методы анализа. Учеб. Для вузов. Москва: "Высшая школа", 2001. - С. 356-369; 402- 442.

51. Хохлов В.В., Кузнецов Л.Е. Судебная медицина: Руководство. -Смоленск, 1998.- 800 с.

52. Чернобровкина Т.В. Лабораторные методы в наркологии: актуальные задачи, современные достижения и перспективы развития //Проблемы современной наркологии: Респуб. сб. науч. трудов / 2-ой МОЛГМИ им Н.И. Пирогова. Москва, 1991. - С.13-26.

53. Шевченко Н.Г. , Клинико-диагностическое значение определения миоглобина // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - №1. - С. 43-46.

54. Шигеев С.В. Анализ признаков "острой" смерти на примере случаев отравления опиатами // Судебно-медицинская экспертиза отравлений наркотическими веществами, психотропными средствами и алкоголем: Сб. Научных работ / РБСМЭ. Казань, 2001. - С. 31-33.

55. Эйдельман М.М. Модификация колориметрического метода определения активности ацетилхолинэстеразы в крови // Лабораторное дело. 1963.-№10.-С. 29-34.

56. Asselin WM, Leslie Ж, McKinley В. Direct detection of drugs of abuse in whole hemolyzed blood using the EMIT d.a.u. urine assays. // J Anal Toxicol 1988 Nov-Dec;12(6):16.

57. Asselin WM, Leslie JM. Modification of Emit assay reagents for improved sensitivity and cost effectiveness in the analysis of hemolyzed whole blood.// J Anal Toxicol. 1992 Nov-Dec;16(6):381-8.

58. Badia R. et al. Analytical approaches of European Union Laboratories to drugs of abuse analyses // Clinical Chemistry. 1998; 44:790-799.

59. Baskin LB, Morgan DL. Drugs detected in patients suspected of acute intoxication.// Tex Med. 1997 Sep;93(9):50-8.

60. Baynes J.W., Bunn H.F., Goldstein D.E., et al., "National Diabetes Data Group: Report of the Expert Committee on Glycosylated Hemoglobin", Diabetes Care, 7,6: 602-606 (1984)

61. Beike J, Blaschke G, Mertz A, Kohler H, Brinkmann B. A specific immunoassay for the determination of morphine and its glucuronides in human blood.// Int J Legal Med. 1999; 112(1):8-14.

62. Bogusz M, Aderjan R, Schmitt G, Nadler E, Neureither B. The determination of drugs of abuse in whole blood by means of FPIA and EMIT-dau immunoassays~a comparative study. // Forensic Sci Int. 1990 Nov;48(l):27-37.

63. Ceder G, Jones AW. Concentration ratios of morphine to codeine in blood of impaired drivers as evidence of heroin use and not medication with codeine // Clin Chem. 2001 Nov;47(l 1): 1980-4.

64. Ceder G, Jones AW. Concentrations of unconjugated morphine, codeine and 6-acetylmorphine in urine specimens from suspected drugged drivers // J Forensic Sci. 2002 Mar;47(2):366-8.

65. Cody JT, Valtier S. Effects of Stealth adulterant on immunoassay testing for drugs of abuse. J Anal Toxicol. 2001 Sep;25(6):466-70.

66. Collison IB, Spiehler VR, Guluzian S, Sedgwick PR. Setting cutoff concentrations for immunoassay screening of postmortem blood.// J Forensic Sci. 1998 Mar;43(2):390-4.

67. Compagnucci P., Cartechina M.G., et al. The Importance of Determining Irreverisibly Glycosylated Hemoglobin in Diabetics. // Diabetes, 30: 607-612, 7(1981)

68. Cone E.J. Testing human hair for drugs of abuse.// J Anal Toxicol. 1990 Jan-Feb;14(l):l-7.

69. Drummer OH, Gerostamoulos J. Postmortem drug analysis: analytical and toxicological aspects. //Ther Drug Monit. 2002 Apr;24(2): 199-209.

70. Dugan S., Bogema S., Schwartz RW, Lappas NT. Stability of drugs of abuse in urine samples stored at -20 degrees C. // J Anal Toxic. 1994, 18:391-396

71. Fraser AD. Clinical toxicology of drugs used in the treatment of opiate dependency.// Clin Lab Med. 1990 Jun;10(2):375-86.

72. Goldberger B.A., Caplan YH.,Maguire Т.,Cone E.J. Testing human hair for drugs of abuse.//J Anal Toxicol. 1991 Sep-Oct;15(5):226-31.

73. Goldstein D.E., Peth S.B., England J.D., et al., " Effects of Acute Changes in Blood Glucose on HbAlc", Diabetes, 29: 623-628/8 (1980)

74. Gronholm M, Lillsunde P. A comparison between on-site immunoassay drug-testing devices and laboratory results // .Forensic Sci Int. 2001 Sep 15;121(l-2):37-46.

75. Hagedom HW, Meiser H, Zankl H, Schulz R. Methadone screening of racehorses.// J Anal Toxicol. 1999 Nov-Dec;23(7):609-14.

76. Hammett-Stabler CA, Pesce AJ, Cannon DJ. Urine drug screening in the medical setting. // Clin Chim Acta. 2002 Jan;315(1 -2): 125-35.

77. Hayes LW, Krasselt WG, Mueggler PA. Concentrations of morphine and codeine in serum and urine after ingestion of poppy seeds. // Clin Chem. 1987 Jun;33(6):806-8.

78. Hepler BR, Sutheimer C, Sunshine I, Sebrosky GF. Combined enzyme immunoassay-LCEC method for the identification, confirmation, and quantitation of opiates in biological fluids. //J Anal Toxicol. 1984 Mar-Apr;8(2):78-90.

79. Hino Y, Ojanpera I, Rasanen I, Vuori E. Performance of immunoassays in screening for opiates, cannabinoids and amphetamines in post-mortem blood //Forensic Sci Int. 2003 Jan28;131(2-3): 148-55.

80. Iwersen-Bergmann S, Schmoldt A. Direct semiquantitative screening of drugs of abuse in serum and whole blood by means of CEDIA DAU urine immunoassays.// J Anal Toxicol. 1999 Jul-Aug;23(4):247-56.

81. Jurado C, Sachs H. Proficiency test for the analysis of hair for drugs of abuse, organized by the Society of Hair Testing // Forensic Sci Int. 2003 Apr 23; 133(1-2): 175-8.

82. Kaferstein H, Sticht G. Comparison of the MTP immunoassay with EMIT in blood screening for drugs // Arch Kriminol. 1998 Nov-Dec;202(5-6):165-72.

83. Kaplan R.M., Fochtman F., Brunett P., White C., Heller MB. An analisis of clinikal toxicology urine speciment using the Quik test.//J Toxicol Clin Toxicol/1989;27(6):369-73.

84. Kell MJ. Utilization of plasma and urine methadone concentration measurements to limit narcotics use in methadone maintenance patients: II. Generation of plasma' concentration response curves. //J Addict Dis. 1995;14(1):85-108.

85. Keller T, Schneider A, Dirnhofer R, Jungo R, Meyer W. Fluorescence polarization immunoassay for the detection of drugs of abuse in human whole blood // Med Sci Law. 2000 Jul;40(3):258-62.

86. Kemp P, Sneed G, Kupiec T, Spiehler V. Validation of a microtiter plate ELISA for screening of postmortem blood for opiates and benzodiazepines // J Anal Toxicol. 2002 0ct;26(7):504-12.

87. Kerrigan S., Phillips W.H. Comparison of ELISAs for Opiates, Methamphetamine, Cocaine Metabolite, Benzodiazepines, Phencyclidine, and Cannabinoids in Whole Blood and Urine // Clinical Chemistry. 2001;47:540-547.

88. Koenig R.J., Peterson C.M., Kilo C., et al., "Hemoglobin Ale As an indicator of the Degree of Glucose intolerance in Diabetes", Diabetes, 25, 3: 230-232(1976)

89. Kottenhahn В., v. Meyer L., Drasch G., Roider G., Hofbauer B. Direct Detection of Drugs of Abuse in Whole Hemolysed Postmortem Blood and Qualitative Measurement in EDTA (E Plasma using the CEDIA DAU Urine Assays // T + К (2002) 69 (2): 64

90. Kroener L, Musshoff F, Madea B. Evaluation of immunochemical drug screenings of whole blood samples. A retrospective optimization of cutoff levels after confirmation-analysis on GC-MS and HPLC-DAD//J Anal Toxicol. 2003 May-Jun;27(4):205-12.

91. Lange WR., Cone EJ.,Snyder FR. The association of hepatitis delta vims and hepatitis В vims parenteral drug abusers. 1971 to 1972 and 1986 to 1987.//Arch Intern Med. 1990 Feb;150(2):365-8.

92. Lee CW, Lee HM. Evaluation of the Abbott TDx analyzer. // J Anal Toxicol. 1989 Jan-Feb;13(l):50-6.

93. Lewellen LJ, McCurdy HH. A novel procedure for the analysis of drugs in whole blood by homogeneous enzyme immunoassay (EMIT) // J Anal Toxicol. 1988 Sep-C)ct;12(5):260-4.

94. Lin DL, Chen CY-, Shaw KP, Havier R, Lin RL. Distribution of codeine, morphine, and 6-acetylmorphine in vitreous humor.// J Anal Toxicol. 1997 Jul-Aug;21 (4):25 8-61.

95. Lin DL, Liu H, Chen CY. Storage temperature effect on stability of morphine and codeine in urine.// J Anal T oxicol. 1995 Sep;19(5):275-280.

96. Logan BK, Luthi R. The significance of morphine concentrations in the cerebrospinal fluid in morphine caused deaths. //J Forensic Sci. 1994 May;39(3):699-706.

97. Loor R, Lingenfelter C, Wason PP, Tang K, Davoudzadeh D. Multiplex assay of amphetamine, methamphetamine, and ecstasy drug using CEDIA technology. //J Anal Toxicol. 2002 Jul-Aug;26(5):267-73.

98. Mahl MA, Hirsch M, Sugg U. Verification of the drug history given by potential blood donors: results of drug screening that combines hair and urine analysis. Transfusion. 2000 Jun;40(6):637-41.

99. McCord CE, McCutcheon JR. Preliminary evaluation of the Abbott TDx for benzoylecgonine and opiate screening in whole blood // J Anal Toxicol. 1988 Sep-Oct; 12(5):295-7.

100. Moeller M. R., Steinmeyer S., Kraemer T. Review Detennination of drugs of abuse in blood // Journal of Chromatography B, 713 (1998) 91-109

101. Moore KA, Werner C, Zannelli RM, Levine B, Smith ML. Screening postmortem blood and tissues for nine classes correction of cases. of drugs of abuse using automated microplate immunoassay.// Forensic Sci Tnt 2000 Oct 9;114(1):49.

102. Moritz F, Goulle JP, Girault C, Clarot F, Droy JM, Muller JM. Toxicological analysis in agitated patients. //Intensive Care Med. 1999 Aug;25(8):852-4.

103. Moriya F, Chan KM, Noguchi TT, Parnassus WN. Detection of drugs-of-abuse in meconium of a stillborn baby and in stool of a deceased 41-day-old infant.//J Forensic Sci. 1.995 May;40(3):505-8.

104. Moriya F, Hashimoto Y. Application of the Triage panel for drugs of abuse to forensic blood samples // Nippon Hoigaku Zasshi. 1996 Apr;50(2):50-6.

105. Nakamura G.R., Way E.R. Determination of morphine to codeine in postmortem samples /J Anal Chemistry, 1975,v.47, p. 775-778

106. Nathan D.M., Singer D.T., et al. The Clinical Information Value of the Glycosylated Hemoglobin Assay //N. Eng. J. Med., 310: 341-6 (1984)

107. Niedbala RS, Kardos K, Waga J, Fritch D, Yeager L, Doddamane S, Schoener E. Laboratory analysis of remotely collected oral fluid specimens for opiates by immunoassay.// J Anal Toxicol. 2001 Jul-Aug;25(5):310-5.

108. Peters FT, Maurer HH, Hellstern P. Prevalence of illicit drug use in plasmapheresis donors.//Vox Sang. 2003 Feb;84(2):91-5.

109. Piergies AA, Sainati S, Roth-Schechter B. Lack of cross-reactivity of Ambien (Zolpidem) with drugs in standard urine drug screens. // Arch Pathol Lab Med. 1997 Apr;121(4):392-4.

110. Reiter A, Hake J, Meissner C, Rohwer J, Friedrich HJ, Oehmichen M Time of drug elimination in chronic drug abusers. Case study of 52 patients in a "low-step" detoxification ward // Forensic Sci Int. 2001 Jun 15;119(2):248-53.

111. Rivara FP, Mueller BA, Fligner CL, Luna G, Raisys VA, Copass M, Reay DT. Drug use in trauma victims. // J Trauma. 1989 Apr;29(4):462-70.

112. Romolo FS, Rotolo MC, Palmi I, Pacifici R, Lopez A. Optimized conditions for simultaneous determination of opiates, cocaine and benzoylecgonine in hair samples by GC--MS. //Forensic Sci Int. 2003 Dec 17; 138(1-3): 17-26.

113. Rosenberg NM, Meert KL, Marino D, Yee H, Kauffman RE. Occult cocaine and opiate exposure in children and associated physical findings // Pediatr Emerg Care. 1995 Jun; 11 (3): 167-9.

114. Samyn N, van Haeren C. On-site testing of saliva and sweat with Drugwipe and determination of concentrations of drugs of abuse in saliva, plasma and urine of suspected users. // J Legal Med. 2000; 113(3): 150-4.

115. Schramm W, Smith RH, Craig PA, Kidwell DA. Drugs of abuse in saliva: a review. // J Anal Toxicol. 1992 Jan-Feb;16(l):l-9.

116. Shughart LC, Lappas NT Detection of opiates in blood by thin-layer immunoassay. //J Anal Toxicol. 1983 Sep-0ct;7(5):209-12.

117. Skelton H, Dann LM, Ong RT, Hamilton T, Ilett KF. Drug screening of patients who deliberately harm themselves admitted to the emergency department. // Ther Drug Monit. 1998 Feb;20(l):98-103.

118. Spiehler V, Isenschmid DS, Matthews P, Kemp P, Kupiec T. Performance of a microtiter plate ELISA for screening of postmortem blood for cocaine and Metabolites.// J Anal Toxicol. 2003 Nov-Dec;27(8):587-91.

119. Spiehler VR, Collison IB, Sedgwick PR, Perez SL, Le SD, Farnin DA. Validation of an automated microplate enzyme immunoassay for screening of postmortem blood for drugs of abuse.// J Anal Toxicol. 1998 Nov-Dec;22(7):573-9.

120. Spiehler VR, Reed D, Cravey RH, Wilcox WP, Shaw RF, Holland S. Comparison of results for quantitative determination of morphine by radioimmunoassay, enzyme immunoassay, and spectrofluorometry.// J Forensic Sci. 1975 Qct;20(4):647-55

121. Tagliaro F., Frigerio A., Drizzi R., Lubli G., Marigo M. Liquid chromatography with pre-column dansyl derivatisate and fluorimetric detection applied to the assay of morphine biological samples // J Chromatogr. 1985 Aug 23; 330(2):323-31.

122. Tagliaro F., Lafisca S., Maschio S., Parolin A., Lubli G., Marigo M. Quantitative determination of morphine in hair: a comparison between RIA and HPLC methods//Acta Med Leg Soc (Liege). 1985; 35(l):181-4.

123. Toennes SW, Kauert GF. Importance of vacutainer selection in forensic toxicological analysis of drugs of abuse.// J Anal Toxicol. 2001 Jul-Aug;25(5):339-43.

124. Wehner F, Wehner HD, Subke J, Meyennann R, Fritz P. Demonstration of morphine in ganglion cells of the hippocampus from victims of heroin overdose by means of anti-morphine antiserum. // J Legal Med. 2000; 113(2): 117-20.

125. Wilson JF, Toseland PA, Capps NE, Sandle LN, Smith BL, Sweeney G, Thomson AH, Watson ID, Williams J. External quality assessment of laboratory performance in analysis of toxicological cases.// Forensic Sci Int. 2001 Sep 15;121(l-2):27-32.

126. Zeiger AR, Patkar AA, Fitzgerald R, Lundy A, Ballas SK, Weinstein SP. Changes in mu opioid receptors and rheological properties of erythrocytes among opioid abusers // Addict Biol. 2002 Apr;7(2):207-17

Оглавление диссертации Асташкина, Ольга Генриховна :: 2004 :: Москва

Введение диссертации по теме "Судебная медицина", Асташкина, Ольга Генриховна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Асташкина, Ольга Генриховна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций