Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Цитокин-опосредованные механизмы развитияпосттравматических иммунодефицитов

^ ^ Йнсгит^т клинической иммунс^гии СО РАМ,Н

1 51М 1ьПЗ

нк прааЮс руМпЖи

Ермолович Едена Юрьевна

Цитокин-опосредованные механизмы развития посттравматических иммунодефицитов

14.0036 — Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск — 1993 г

>

Работа выполнена в Институте клинической иммунологии Сибирского отделении! Российском Академии медицинских наук.

Научный руководитель

академик РАМН, профессор ВЛЛозовон

Научный консультант

кмл. В.СКожевников

Официальные оппоненты

в «_» часов на заседании специализированного совета

К 0010101 Института клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630091, (-.Новосибирск, ул. Ядршщоаская, 14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН.

доктор медицинских наук ВЛ Коненков кандидат медицинских наук АЛ Колесников

Ведущее учреждение

Институт иммунологии Министерства здравоохранения России

Защита диссертации состоится «_»

1993 г.

Автореферат разослан «сВ » 1993

г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Л^ггЛя^ О.ТКудаева

Общая характеристика работы

Актуальность В последние два десятилетия интенсивно темы развиваются исследования иммунологичес-

ких аспектов травмы. Актуальность этих исследований обусловлена двумя основными причинами. Во-первых, стало очевидным, что травма (термическая и механическая) является причиной развития вторичного иммунодефицита. Исследования, проведенные в нашей лаборатории показали, что вследствие травмы могут развиваться различные патогенетические типы вторичного иммунодефицита, и, проводя иммунологические исследования, можно изучить многие закономерности, характерные для развития вторичного иммунодефицита как вида иммунопатологии. Клеточный тип иммунодефицита характеризуется угнетением клеточных эффекторных функций и имеет саногенетическое значение в плане репаративных процессов и защиты от бактериальной инфекции за счет сохранения (или стимуляции) гуморального иммунного ответа. Сочетанный тип иммунодефицита характеризуется угнетением клеточных и гуморальных эффекторных функций и имеет патогенетическое значение в развития инфекционных осложнений. Третий тип иммунодефицита, гуморальный, характеризуется угнетением гуморальных и стимуляций клеточных эффекторных функций и имеет патогенетическое значение не только в развитии инфекции, но и в таких осложнениях, как лизис аутодермот-рансплантата, длительно незаживающие раны, неконсолиди-рующиеся переломы и т. д. Активация клеточных эффекторов проявляется в сенсибилизации к собственным тканям, обеспечивает лизис аутокожн при пересадке и угнетение репаративных процессов [Кожевников B.C. и соавт., 1991]. Во-вторых, сама травма является актуальной общемедицинской проблемой, поскольку является самой частой причиной утраты трудоспособности, в 29% случаев приводит к инвалидности, а инфицированные осложнения травмы часто трудно поддаются лечению. Например, смертность при сепсисе достигает 80% [Григорьев М.Г. и соавт., 1977]. С этой точки зрения иммунологические исследования актуальны, поскольку дают основу для разработки методов ранней диагностики и эффективной коррекции иммунопатологических состояний, лежащих в основе посттравматической гнойной патологии, то есть служат, благодаря профилактике и эффективному ее лечению, скорейшей реабилитации больных.

В настоящее время бурно прогрессируют исследования роли цитокинов в развитии иммунопатологических процес-

сов, d том числе и и.-л-лунодефицитпых состояний, сформулирована концепция пнтерлейкинзависимых иммунодефи-цитов [Петров Р.В., 1987]. Цитокины являются медиаторами не только взаимодействий иммунокомпетентных клеток, но и клеток иммунной системы с одной стороны и клеток нервной системы и системы соединительной ткани с другой, они принимают активное участие в репаративных процессах [Kovacs E.J., 1991]. В связи с этим изучение продукции цитокиноб при травме открывает новые возможности для изучения патогенеза посттравматическнх иммунодефицнгои, создания эффективных методов их диагностики и коррекции.

В настоящей работе мы исследовали продукцию цитокиноб при ожогах, травме и остеомиелите — состояниях, при которых возможно развитие клеточного, гуморального " и сочетанного иммунодефицита. Выбор ИЛ-1/3, ФНО-а, к ИЛ-2 и ИФ-у обусловлен тем, что эти цитокины играют ключевую роль в индукции типовых реакций организма на травму, а также в запуске гуморального и клегочно/о иммунного ответа.

За исключением' отдельных работ по продукции ИЛ-1 и ИЛ-2 при травме [Greer. D.R., Faist Е„ 1988, Glinz W ei al., 1989], исследования продукции ИЛ-1, ФНО-а, ИЛ-2 и ИФ-у не проводились, и на наш взгляд, описание экспрессии мРНК it секреции этих цитокинов кнтактными и стимулированными клетками, а. также концентрации ИЛ-1/> и ФНО-а в сыворотке в качестве показателя системной продукции их в организме может внести ясность в понимание механизмов развития иммуиодефицитоз при травме и ее осложнениях.

Одним нз наименее изученных феноменов является активация эффекторов ГЗТ у некоторых больных остеомиелитом, а также больных с различными нарушениями репаративных процессов [Кожевников B.C. и соавт., 1991]. Неясно, почему на фоне сочетанного иммунодефицита активируются клеточные эффекторные функции против инфекционных агентов и компонентов соединительной ткани, неизвестны механизмы активации клеточных эффекторов. Для того чтобы подойти к решению этого вопроса, мы, параллельно с изучением продукции цитокинов, исследовали активность эффекторов ГЗТ в ответ на ФГА при различных состояниях: травме, остеомиелите, а также при остеомиелите после курса лечения тактивином, учитывая, что этот препарат наряду с клиническим, обладает ярко выраженным иммуно-модулирующнм эффектом [Арион В.Я. и соавт. 1985, Караулов А.В. и соавт. 1988].

Таким образом, целью нашего исследования явилось изучение механизмов развития вторичных иммунодефицитов, связанных с нарушением продукции цитокинов, возникающих при травме и ее осложнениях.

В соответствии с этим решались следующие задами:

1. Оценка спонтанной и индуцированной продукции мРНК ИЛ-1Д мРНК ФНО-а, мРНК ИЛ-2, мРНК ИФ-у моно-нуклеарами здоровых доноров, пациентов с термической, механической травмой и остеомиелитом.

2. Исследование спонтанной и индуцированной продукции ИЛ-1/3, ФНО-а, ИЛ-2 п ИФ~у мононуклеарами доноров, пациентов с травмой и остеомиелитом.

3. Изучение взаимосвязи активности ФГА-стимулирован-нъ:х эффекторов ГЗТ от продукции ИЛ-2 при травме и остеомиелите.

4. Оценка изменения продукции ИЛ-1/3, ФНО-а, ИЛ-2, ИФ-у и ГЗТ эффекторов при остеомиелите после курса лечения тактивином.

Наущал Показано, что развитие различных пато-значнмость генетических типов посттрапматчческого раооты иммунодефицита характеризуется общим

изменением способности иммунокампетентных клеток продуцировать in vitro ИЛ-1/3, ИЛ-2 и ФНО-а. Снижается спонтанная и стимулированная продукция ИЛ-2 и ИЛ-1/3 и повышается спонтанная продукция ФНО-а. Эти изменения сопровождаются снижением продукции мРНК ИЛ-1/3 и мРНК ИЛ-2, продукция мРНК ФНО-а не изменяется. Обнаружены также особенности изменения продукции цитокинов, характерные для определенных типов иммунодефицита.

При клеточном типе иммунодефицита характерно снижение спонтанной и стимулированной продукции мРНК ИФ-у и снижение стимулированной продукции ФНО-а. При сочетанном типе иммунодефицита характерно повышение спонтанной продукции мРНК ИФ-у и повышение спонтанной продукции ФНО-а. При гуморальном типе иммунодефицита характерно повышение спонтанной и стимулированной продукции ИФ-у и снижение стимулированной продукции ФНО-а.

При клеточном типе иммунодефицита характерно повышение системной продукции ИЛ-1/3 и ФНО-а, при сочетанном типе иммунодефицита характерно повышение системной продукции ИЛ-1/3 и снижение системной продукции ФНО-а, при гуморальном типе иммунодефицита характерно снижение системной продукции ИЛ-1/3 и ФНО-а.

Практическая Проведенные исследования показали, что значимость существуют взаимосвязи между продукци-работы е!", цитокинов ИЛ-1/3, ФНО-а, ИЛ-2 и ИФ-у и активностью эффекторов ГЗТ, причем эти взаимосвязи проявляются по разному в зависимости от типа иммунодефицита. Эти результаты могут быть использованы для прогнозирования типа иммунодефицита, развивающегося во время посттравматического периода. Методы информативны, легко воспроизводимы, что позволяет внедрить их в практику иммунологических лабораторий. Показано, что развитие соче тайного типа иммунодефчцита сопровождается понижением функций эффекторов ГЗТ в ответ на ФГА, сопровождающееся повышением продукции ИЛ-1/? и ФНО-ос в сыворотке и повышением продукции этих цитокинов в отпет па стимуляцию ЛПС мононуклеа-рами. Развитие гуморального типа иммунодефицита сопровождается повышением функций ГЗТ эффекторов в ответ на ФГА, понижением продукции ИА-1/3 и ФНО-а в сыворотке и понижением продукции этих цитокинов в ответ на стимуляцию АПС мононуклеарами, увеличением продукции мРНК ИФ~у интактными и стимулированными ФГА мононуклеарами через 24 часа культивирования. Ранняя диагностика развития иммунодефицита при травме позволит своевременно применить иммунокоррекцию и предупредить развитие осложнений во время травматической болезни.

Положения, 1. Снижение спонтанной и индуцированной выносимые продукции ИЛ-1/3 и ИЛ-2, возникающее на защиту на транскрипционном уровне, является ведущим в развитии посттравматического иммунодефицита и характерно для его клеточного сочетанного и гуморального патогенетического типа.

2. Основной особенностью, характеризующей разные типы иммунодефицита, является изменение спонтанной и индуцированной продукции мРНК ИФ-у: при клеточном типе снижена спонтанная и стимулированная продукция, при сочеганном типе повышена спонтанная продукция, при гуморальном типе повышена и спонтанная и стимулированная продукция мРНК ИФ-у.

3. Изменения продукции цитокинов, возникающие в результате иммунокоррегирующей терапии такгивином, индуцируются на транскрипционном уровне.

Объем и Диссертация изложена на 114 страницах. структура Она состоит из введения, обзора, лнтера-диссертации. туры, описания материалов и методов, результатов исследований и их обсуждения, изложенных в 3 главах, заключения и выводов. Диссертация иллюстрирована 36 рисунками и одной таблицей. Список литературы состоит из 126 источников, из них 12 работ отечественных авторов.

Апробация Полученные результаты доложены на от-работы и четной сессии ИКИ СО РАМН в 1992 г. публикации Апробация работы состоялась на расширенном семинаре ИКИ СО РАМН 10 сентября 1992 г. У автора имеется 19 печатных работ, из них 6 опубликовано по теме диссертации.

Методы Мононуклеарные клетки (МНК) получали исследований после центрифугирования венозной крови на градиенте плотности верографин/фи-колл [Кожевников B.C., 1983] МНК культивировали в среде RPMI 1640 с 4мМ глутамина, 5x10 М2-меркаптоэтано-ла, 40 мкг/мл гентамицина и 10% или 2% СПК или сыворотки человека АВ 4 группы, соответственно (в дальнейшем полная среда).

Мононуклеары стимулировали ФГА-Р (Flow) в концентрации 1мкг/мл или ЛПС (дериват из E.coli 026:В6) в концентрации 50 мкг/мл или 100 иг/мл (концентрация ЛПС зависела от поставленных задач) или рекомбинантным ИЛ-1Д в концентрации 60 Ед/мл, любезно предоставленным д.м.н. И.Г.Цырловой.

Для стимуляции продукции ИЛ-1, МНК в концентрации 3x107мл инкубировали 40 минут в среде 199 без сыворотки с 10 мкг/мл аспирина на водяной бане 37°С. Через 40 минут МНК трижды отмывали для удаления аспирина. Затем клетки заливали полной средой с 2% АВ 4 группы в концентрации ЗхЮ6/мл, помещали в плоскодонный планшет в количестве 1 мл. В качестве контроля использовали МНК, не обработанные аспирином. К мононуклеарам, обработанным аспирином, добавляли 100 нг/мл ЛПС.

Также был контроль, где к МНК, обработанным аспирином, ЛПС не добавляли. Через 6 часов инкубации собирали МНК для выделения цитоплазматической РНК. Через 24 часа инкубации собирали супернатанты и замораживали для их использования.

Для стимуляции продукции ФНО-а МНК в концентрации Зх106/мл ресуспендировали в полной среде с 2% АВ 4 группы и помещали в плоскодонный планшет в объеме

1 мл, добавляли 50 мкг/мл ЛПС либо 60 Ед/мл рекомби-нантного ИЛ-1/?. Через 60 минут инкубации выделяли из МНК цитоплазматическую РНК, через 24 часа инкубации собирали супернатанты и замораживали до их использования. Для стимуляции продукции ИЛ-2 и ИФ-у МНК в концентрации Зх10й/мл преинкубировали 1 час в среде 199 без сыворотки с 30 мкг/мл ФГА. Через 60 минут МНК трижды отмывали средой для удаления ФГА. Затем клетки в концентрации 1х106/мл инкубировали в С02-инкубаторе. Через 6 и 24 часа культивирования собирали цитоплазматическую РНК, через 24 и 48 часов культивирования собирали супернатанты и замораживали до их использования.

РНК выделяли по методу, предложенному 1\.и.Сои§Ь. В качестве ДНК-зондов были использованы плазмида рАА-1213-23, содержащая кДНК ИЛ-2 человека, плазмида р1Ж 278, содержащая 4 экзон гена ФНО-а, кДНК ИЛ-1/3 в составе фага М13 tg 130, содержащая 4, 5, 6 и 7 экзоны гена ИЛ-1/? и полная последовательность гена ИФ-у в составе плазмиды РВЯ 322. ДНК-зонды метили 32Р.

Гибридизацию проводили 36-48 часов при 37°С. Радиоавтографию проводили с использованием рентгенографической пленки РМ-В.

Активность ИЛ-1 в супернатантах от интактных и стимулированных ЛПС мононуклеарах оценивали стандартным костимуляционным тестом тимоцитов. Для этой цели из тимуса мышей получали суспензию клеток в концентрации 5х106/мл в полной среде с 10% СПК. Тимоциты культивировали с испытуемыми образцами и митогеном — ФГА 1 мкг/мл 72 часа в С02 инкубаторе. За 18 часов до окончания культивирования добавляли 3Н-тими-дин. Величина включения гимндина и является относительной точкой отчета, характеризующей количество содержащегося в образце ИЛ-1 [Чередеев А;Н., 1989]. Для учета эффекта воздействия супернатантов, отражающих активность продуцируемого ИЛ-1, использовали индекс влия-иия (ИВ):

число импульсов в минуту в опыте

ИВ =-

число импульсов в минуту б контроле

Количество ИЛ-1/3 и ФНО-а в сыворотке и супернатантах от интактных и стимулированных МНК определяли с помощью метода ИФА, согласно инструкции прилагаемой к наборам моноклональных антител. Наборы для определения ИЛ-1 и ФНО иммуноферментным анализом покупали

в Институте переливания крови г.Минска и Институте особо чистых препаратов г.Санкт-Петербурга.

Биологическую активность ИА-2 в супернатантах от интактных и стимулированных ФГА МНК определяли с помощью перевиваемой ИЛ-2 зависимой линии Т-лимфоб-ластов человека по методу, разработанному в нашей лаборатории (Киселев СБ., 1990).

В некоторых экспериментах биологическая активность ИЛ-2 была определена с помощью ИЛ-2 чувствительной линии Т-лимфобластов мыши CTLL-2. Для поддержания роста линии CTLL-2 получали супернатанты от суспензии клеток из селезенок крыс 5х106/мл в полной среде с 5% СП К (30 часов культивирования в С02 инкубаторе). К супернатанту добавляли 10 мг/мл Methyl-L-D—mannopyronoside. Готовые супернатанты хранили при

-20°С.

Оба метода определения активности ИЛ-2 сопряжены с трудностями адаптации этих линий и проблемой получения достаточно активного фактора роста для их поддержания. Поэтому мы применяли в большей части наших исследований метод определения биоактивности ИЛ-2 на лимфобла-стах человека по методу А.Хамблин и О'Гарра в модификации, разработанной совместно со ст.н.с., к.м.н. Е.Р.Черных [Дж. Клаус, 1990].

Супернатанты от интактных и стимулированных ЛПС мононуклеаров диализировали в течение 48 часов против 500 объемов RPMI 1640 при 4°С для удаления ингибитора ИЛ-1.

Активность эффекторов ГЗТ оценивали с помощью разработанной в нашей лаборатории системы (A.C. 1575711, В.С.Кожевников, Р.Р.Набиуллин, С.В.Богидаев, В.П.Лозо-вой, 1987). Подсчитывали показатель эффекторных функций (ПЭФ) .

В качестве контроля были обследованы 150 доноров, на которых были отработаны нормативные показатели. ПЭФ в ответ на ФГА у доноров от 1,8 и более.

При математической обработке данных проверка нулевой гипотезы о соответствии эмпирических данных нормальному распределению не подтвердилась, поэтому при статистической обработке использовались непараметрические критерии U-Уилкоксона (Манна-Уитни), парный критерий Вилкоксона (критерий Т) и ранговый коэффициент корреляции Спир-мена.

Результаты и обсуждение

Изменение про- У больных с механической и термической дунции цитокинов травмой мы определяли ИЛ-1 методом у больных ив' ИФА в сыворотке и супернатантах от ханическои и тер- интактных и стимулир0ванных ЛПС мо-мическои травмой . ^ „

нонуклеаров периферической крови. Стимулирующую дозу ЛПС подбирали, стимулируя МНК здоровых доноров. Оптимальная доза ЛПС для стимуляции продукции ИЛ-1 была 100 нг/мл, эта доза совпадала с

данными литературы.

нг/мл

нг/мл. »1

А — доноры (п=5), Б — травма (п=8), В — ожог (п—10). S - МНК+ЛПС, □ - МНК. х, хх — р=0,05

Ai

Рисунок 1. Концентрация ИЛ-1р в сыворотке и супернатантах от МНК, обработанных аспирином у доноров и больных механической н термической травмой.

У больных механической травмой концентрация ИЛ-1/9 в сыворотке значительно повышена по сравнению с донорами, тогда как у больных термическим ожогом ИЛ-1/3 в сыворотке нашим методом не определялся, что свидетельствует о его минимальной продукции (рис. 1).

Количество ИЛ-1 в супернатантах интактных МНК, предварительно обработанных аспирином, у больных механической и термической травмой меньше, чем у доноров (р=0,01), причём у больных термической травмой значительно меньше, чем у больных механической травмой (р=0,01) (рис. 1). Оценивая стимулирующий эффект ЛПС на продукцию ИЛ-1, рассчитывали индекс влияния ЛПС на продукцию ИЛ-1/? (ИВЛПС). ИВ_дПС на продукцию ИЛ-1/3 у больных механической и термической травмой был выше, чем у доноров, и ч тому же ответ на стимуляцию ЛПС у больных механической травмой был выше, чем у больных термической травмой (р=0,01).

В отличие от доноров у больных механической травмой большим значением концентраций ИЛ-1 в сыворотке соответствовали большие значения его концентраций в супернатантах интактных и стимулированных МНК Корреляцион-

ный анализ показал следующее. У больных механической травмой существует положительная корреляционная взаимосвязь между концентрацией ИЛ-1/3 в сыворотке и в супер-натантах от интактных МНК (г,=0,7, р<0,05) и от МНК, стимулированных ЛПС (rs=0,88, р<0,05); между концентрацией ИЛ-1/S в сыворотке и ИВЛПС на продукцию ИЛ-1 (г.=0,58, р<0,05), а также между концентрацией ИЛ-16 в супернатантах от интактных и стимулированных ЛПС мононуклеаров (г8=0,59, р<0,05), между ИВЛПС на продукцию ИЛ-1 и количеством ИЛ-1/? в супернатантах от стимулированных ЛПС мононуклеаров (г,=0,55, р<0,05).

Таким образом, у больных механической травмой в отличие от доноров (корреляционных взаимосвязей не было выявлено) существует довольно жёсткая зависимость продукции ИЛ-1: чем больше ИЛ-1/3 продуцируется интактнымн МНК, тем больше они отвечают на ЛПС, тем больше стимулированные МНК продуцируют ИЛ-1 и тем больше концентрация ИЛ-1 в сыворотке.

Обнаружив изменения продукции ИЛ-1 мононуклеарами периферической крови, мы попытались оценить экспрессию

мРНК ИЛ-1Д

У больных механической травмой было обнаружено значительное увеличение количества мРНК ИЛ-1/? в лейковзвеси по сравнению с донорами (р=0,01), что возможно отражает активацию продукции ИЛ-1 у этих больных in vivo и соответствует повышенному содержанию ИЛ-1 в сыворотке (рис. 1). Количество ИЛ-1/? в интактных МНК и моноцитах было снижено по сравнению с донорами (р=0,01). Не было увеличения количества мРНК ИЛ-1/3 в ответ на стимуляцию ЛПС мононуклеаров по сравнению с интактными МНК (рис. 2).

У больных термической травмой по сравнению с донорами в клетках лейковзвеси было больше мРНК ИЛ-1/3, но меньше в интактных МНК и моноцитах, чем у доноров. ЛПС

не стимулировал уве- р„ 2. Содержа „РНК ИЛ-lfi личение продукции

мРНК ИЛ-1/3 в мононуклеарах и моноцитах по сравнению с интактными МНК и моноцитами (р=0,01).

Таким образом, при механической травме происходит повышенная системная продукция ИЛ-1, показателем чего

А Б в

Мо+ЛПС

Мо щ Щ; ■Щ

мнк+лпс ■-Tí ■ш ib

МНК Ш ++' - "

лейков&песь ш ш

Í2

является высокая (" гравнению с донорами) концентрация ИЛ-1 в сыворотке. Этот процесс может обеспечиваться in vivo многими видами клеток [Piatanias L., 1990]. Наши исследования продемонстрировали, что продукция ИЛ-1 in vivo у этих больных, по крайней мере частично, происходит за счет нейтрофилов, тогда как моноциты, но сравнению с донорскими клетками, продуцируют низкие количества как мРНК ИЛ-1, так к ИЛ-1 (спонтанно к после стимуляции ЛПС). В отличие от механической травмы при ожогах отсутствует системная продукция ИЛ-1, хотя по продукции мРНК ИЛ-1 и ИЛ-1 исследованные клетки практически не отличаются.

У больных механической травмой на второй неделе болезни концентрация ФНО-а в сыворотке а среди;;.; С ;ла значительно Еь;шг, чем у доноров. Чтобы оценить стимулирующий эффект ИЛ-1/3, был введен индекс влияния ИЛ-1 на продукцию ФНО (ЙВил-}5)- У тех больных механической травмой, где была снижена концентрация ФНО г, супер;ia-тантах от интактных МНК, ИЛ-1 оказывал стимулирующий эффект на продукцию ФНО-а, ИВ ИЛ-1 составил 1,8, а у больных с высокой концентрацией ФНО-а в супернатантах от интактных МНК, ИЛ-1 оказывал, напротив, ингиби-рующий эффект на продукцию ФНО-а, ИВ ИЛ-1 составил 0,06. Была обнаружена положительная корреляционная взаимосвязь между содержанием ФНО-а в сыворотке и супернатантах от интактных МНК (rs=0,87, р<0,05). Таким образом, у больных механической травмой высокая спонтанная продукция соответствует высокой концентрации ФНО-а в сыворотке, что может свидетельствовать о вовлечении моноцитов в процесс системной продукции ФНО-а.

У больных с тяжелыми ожогами и сыворотке ФНО-а практически не определялся (рис. 3). ИВ ЛПС па продукцию ФНО-а составил 1,0, то есть были снижена отвечае-мость на ЛПС tío сравнению с донорами, тогда как концентрация ФНО-а в супернатантах от интактных МНК была выше, чем у доноров (р=0,01). Была обнаружена пСло/Кительная корреляционная взаимосвязь между концентрацией ФНО-а в сыворотке и концентрацией ФНО-а в супернатантах от стимулированных ЛПС МНК (rs—0,77, р<0,05), а также между концентрацией ФНО-а в супернатантах от интактных н стимулированных ЛПС мононукле-аров периферической крови (rs=0,95, р<0,01). Эти данные свидетельствуют о том, что низкой концентрации ФНО-а в сыворотке соответствовала низкая концентрация ФНО-а в супернатантах от интактных и стимулированных ЛПС мононуклеаров, и наоборот.

А — доноры, п—7, Б — больные термической травмой, п=10, В ~ больные механической травмой, п=8.

□ - мнк,

"А - МНК+ЛПС, Ш - МНК+ИЛ-1/3.

х, хх, ххх — р—0,01.

А Б В ЛЕВ

Рисунок 3. Концентрация ФНО-a в сыворотке и супернатантах

Обнаружив изменения продукции ФНО-а в сыворотке и супернатантах от интактных и стимулированных ЛПС и ИЛ-1/3 мононуклеарах периферической крови, исследовали продукцию мРНК ФНО-а у больных механической травмой.

Мы определяли мРНК ФНО-a через 60 минут культивирования после стимуляции ИЛ-1уЗ. МНК здоровых доноров спонтанно экспрессировали умеренное количество мРНК ФНО-a и ИЛ-13 не стимулировал, а даже снижал количество мРнк фно -а. У больных механической травмой МНК продуцировали умеренное количество мРНК ФНО-а, ИЛ-1/3 не стимулировал продукцию мРНК ФНО-a, а наоборот продукция мРНК ФНО-a была снижена в стимулированных МНК. Таким образом, продукция мРНК ФНО-a у больных механической травмой не отличалась от доноров (рис. 4).

А — доноры, Б — травма.

. Дот-гибридизация РН1£ из МНК 3x10 , стимулированных ИЛ-1/? (60 Ед/мл)30 минут С ДНК-ЗОНДО!

и мРНК ФНО-а.

Следовательно ЛПС и ИЛ-1/3 по-разному влияют на продукцию ФНО-а МНК. Известно, что ЛПС является индуктором ИЛ-1 и других цитокинов, в том числе и ФНО, как прямо, так и опосредованно через продукцию ИЛ-1. У тех больных механической травмой, у которых была высокая системная продукция ФНО-а, и в продукции этого цитокина были задействованы моноциты, на стимуляцию ИЛ-1/3 дополнительной продукции ФНО-а не было. Если же у больных системная продукция ФНО-а не была увеличена и моноциты не были задействованы в его продукции, то ИЛ-1/3 стимулировал продукцию ФНО-а. Продукция ФНО-а в ответ на ЛПС у больных термической травмой не увеличивалась. У боль-

Рисунок 4. Содержание мРНК ФНО-а

ных механическом травмой происходит повышенная системная продукция ФНО-а и ИЛ-1Д показателем чего является высокая (по сравнению с донорами) концентрация ИЛ-1в и ФНО-а в сыворотке. Не смотря на то, что продукция ИЛ-1/3 и ФНО-а стимулированными моноцитами не достигает величин, характерных для доноров, что свидетельствует о наличии механизмов, ограничивающих продукцию ИЛ-1/3 и ФНО-а, спонтанная продукция ФНО-а была выше, чем у доноров, тогда как спонтанная продукцйя ИЛ-1/? была снижена. Возможно, что в отличии от продукции ИЛ-1/3, которая у больных механической травмой нарушается на транскрипционном уровне, механизмы нарушения продукции ФНО-а реализуются на посттранскрипционном уровне. У больных термической травмой происходит повышенная системная продукция ФНО-а на фоне снижения системной продукции ИЛ-1/3, в чем отличие этих больных от больных механической травмой. Интактные и стимулированные клетки продуцировали ИЛ-1/3 и ФНО-а аналогично клеткам больных механической травмой.

6 часов А Б 24 часа

+ФГА 0 +ФГА

0 А ++

24 часа Б +

+ФГА -- А 4++ + + + +

О ; В

0 б

А — доноры, Б — травма. Дот-гибридизация

РН£ из МНК

1x10 , стимулированных ФГА (1 мкг/мл) 6 и 24 часа, с ДНК-зондом к мРНК ИФ-у, и 24 часа с ДНК-зондом К мРНК ИЛ-2.

Рисунок 3. Содержание мРНК ИФ-у и мРНК ИЛ-2

Мы обнаружили, что у больных термической травмой в мононуклеарах ФГА не стимулировал продукцию мРНК ИФ-у, а интактные МНК продуцировали мРНК ИФ-у би-фазно — через 6 и 62 часа культивирования. У больных механической травмой продукция мРНК ИФ-у отсутствовала через 6 и 24 часа культивирования как в интактных, так и стимулированных ФГА мононуклеарах периферической крови.

У больных механической травмой ФГА практически не стимулировал продукцию ИЛ-2 мононуклеарами периферической крови по сравнению с донорами (рис. 6).

Продукция ИЛ-2 интактными и стимулированными ФГА мононуклеарами периферической крови у больных термической травмой была снижена по сравнению с донорами, отвечаемость на ФГА продукцией ИЛ-2 была снижена в несколько раз по сравнению с донорами (рис. 7).

v 15

аБД

ЕЛ

а - мнк,

П - МНК+ФГА М

X - р = 0,01,

Рисунок 6. Биоактивность ИЛ-2 по отвечаемостн CTLL-2

Я

¡Р

А К

Рисунок 7. Биоактивность ИЛ-2

у больных механической травмой. у больных термической травмой.

Таким образом, у больных термической и механической травмой снижается продукция ИЛ-2 ннтактными и стимулированными ФГА мононуклеарамн периферической крови по сравнению с донорами.

Ранее было установлено, что у больных наблюдается угнетение активности эффекторов ГЗТ в ответ на поликло-нальную активацию ФГА по сравнению с донорами [Кожевников B.C. и соавт., 1991].

У больных механической травмой функции эффекторов ГЗТ в ответ на ФГА были понижены по сравнению с донорами (р=0,01), а также была выявлена высокая положительная корреляционная зависимость между ПЭФ ГЗТ и продукцией ИЛ-2 интактными МНК (rs=0,7, р < 0,05), свидетельствующая о том, что понижение продукции ИЛ-2 сопровождается понижением поликлональных функций эффекторов ГЗТ.

У больных термической травмой также была обнаружена положительная корреляционная взаимосвязь между ПЭФ ГЗТ и ИВфГА на продукцию ИЛ-2 (г5-0,6, р<0,05). Эти данные свидетельствуют о том, что снижение активности поликлональных эффекторных функций ГЗТ, сопровождается понижением продукции ИЛ-2 п ответ на стимуляцию

ФГА.

Таким образом, у больных механической травмой в отличии от доноров была повышена системная продукция ИЛ-1/5 и ФНО-«, тогда как спонтанная и стимулированная продукция ИЛ-1Д ИЛ-2 и ИФ-у in vitro была снижена. Механизмы, изменяющие продукцию этих цитокинов, действуют на транскрипционном уровне. Спонтанная продукция ФНО-а была повышена, механизмы, изменяющие продукцию этого цитокина, действуют на транскрипционном уровне. У больных термической травмой отсутствует системная продукция ИЛ-1Д хотя по продукции мРНК ИЛ-1/J и

ИЛ-1/?, ФНО-а и ИЛ-2 исследованные клетки практически не отличаются от клеток больных механической травмой. Тем не менее отличие от больных механической травмой отмечено в продукции мРНК. ИФ-у, которая повышена в сравнении с донорами.

У больных остеомиелитом была значительно повышена концентрация ИЛ-1 в сыворотке по сравнению с донорами (р^О.01), тогда как после иммунокор-рекции концентрация И Л-1/5 в сыворотке значительна снижалась, оставаясь однако на уровне превышающем донорский (р=0,01) (рис. 8).

Изменения продукции цитокпнов у больных остеомиелитом

Ъ.ЪЛ 3,0.. 2,5 2.0.. 1.5 1.0 0.5..

А — доноры (п=5), Б — остеомиелит (п=5), В — остеомиелит после иммуиокоррскнии тактивином (п=5).

□ - мнк, а - мнк+фга

а б в

Рисунок 8. Содержание ИЛ-1(} в сыворотке и в супернатантах

У больных остеомиелитом в супернатантах от интактных МНК концентрация ИЛ-1/3 была выше, чем у доноров (р=0,01), а после лечения тактивином снижалось (р=0,01). В супернатантах от стимулированных АПС не было стимуляции продукции ИЛ-1/?, напротив, наблюдалась ингибиция по сравнению с интактными МНК (р=0,01) и донорами (р=0,01), тогда как после лечения тактивином концентрация ИЛ-1/3 была выше, чем у доноров и у больных до лечения (рис. 8).

Был высчитан индекс влияния АПС на продукцию ИЛ-1/3 (ИВЛПС), который у больных остеомиелитом был снижен по сравнению с донорами (р=0,01), а после иммунокорреги-рующей терапии увеличился, был вышЬ, чем до лечения тактивином и выше, чем у доноров (р=0,01).

Была выявлена положительная корреляционная взаимосвязь между количеством ИЛ-1/3 в сыворотке и его концентрацией в супериатантах от интактных МНК (г,=0,9, р<0,05), в сыворотке и его концентрацией в супернатантах от стимулированных ЛПС мононуклеарах периферической крови (гь~0,7, р<0,05), между количеством И Л-1/3 п супернатантах от интактных и н стимулированных ЛПС мононуклеарах периферической кропи (^=0,9, р<0,05).

У больных остеомиелитом количество мРНК ИЛ-1/3 в интактных МНК было меньше, чем у доноров, ЛПС стимулировал продукцию мРНК ИЛ-1/3 по сравнению с ::нтакт!!ым:: МНК. После лечения тактнвином у больных остеомиелитом увеличилось количество мРНК ИЛ-1/? в г'нтактнмх МНК ч стимул чровэчнмх А ПС МНК по сравнению с продукцией мРНК ИЛ-1 до лечения та к ти-

Ткккм образом, у больных "стеот'елнто»» увеличивалась продукция мРНК ИЛ-1/? в МНК стимулированных ЛПС, но снижалась концентрация ИЛ-1/3 з супернатантах от этих МНК. Возможно, что продукция ИЛ-1/? ингибируется у больных остеомиелитом на пост-транскрипцнонном уровне. То, что 3' больных остеомиелитом ингибируется продукция ИЛ-1/3 на посттраискрипционном уровне свидетельствует наличие стзечаемости МНК на стимуляцию ЛПС. К тому же после лечения тактнвином мы наблюдал» соогкетствие между продукцией мРНК ИЛ-1/3 п ¡штактных и стимулированных ЛПС моно.чуклеарах и концентрацией ИЛ-1/? в супернатантах от зтих клеток. ! о есть под влиянием нммунокоррегирутещей терапии тактнвином исчезала ингибицкя продукции ИЛ-1/3 в ответ на ЛПС.

Концентрация ФНО-а в сыворотке больных была снижена по сравнению с донорами (р=0,01), тогда как концентрация ФНО-а в супернатантах ст интактных и стимулированных ЛПС мононуклеаров была выше, чем у доноров (р=0,01). ИВИЛ1) на продукцию ФНО-а у больных остеомиелитом был ниже, чем у доноров (р=0,01).

После иммунокоррегирующей терапии у больных остеомиелитом концентрация ФНО-а в сыворотке увеличилась (р=0,01), а концентрация ФНО-а в супернатантах от интактных МНК уменьшилась (р=0,01).

(рис. 9).

лл ~ донор,

3 — остеомиелит после лечения тактики ком. Дот-гибридизации

РНК НЗ МНК

Зх 10°, гтнмулиро-

раниых ЛПС 100 иг/мл б Течение 6

Ч2СОР, С ДНК-ЗОНдом к мРНК ИЛ--!;.

Рисунок 9. Содержание

.-.¡Р'НК ИЛ4$ з МНК

А — доноры (п=5), Б — больные остеомиелитом (п=5),

В — больные остеомиелитом после иммунокорре-гирующей терапии такти-вином (п=5). □ — сыворотка,

Ш - МНК,

Ш - МНК+ИЛ-1.

х, хх, ххх, *, ** — р=0,01.

А Б В

Рисунок 10. Изменение концентрации ФНО-а у больных остеомиелитом'

Среди больных остеомиелитом была группа больных, у которых МНК стимулировали ИЛ-1/3, концентрация ФНО-а в супернатантах от таких МНК была выше, чем у доноров (рис. 10). Для того, чтобы оценить стимулирующий эффект ИЛ-1^3 на продукцию ФНО-а, был рассчитан индекс влияния ИЛ-1/2 на продукцию ФНО-а (ИВил.^ на продукцию ФНО-а), который был в несколько раз ниже, чем у доноров (р=0,Ш).

У больных остеомиелитом отсутствовал стимулирующий эффект ИЛ-19 для продукции мРНК ФНО-а, но количество мРНК ФН к}-а в стимулированных МНК было больше, чем у допоров (рис. И). После иммуно-коррегирующего лечения тактиви-ном количество мРНК ФНО-а в стимулированных ИЛ-1/? мононук-леарах значительно снижалось и приближалось к донорам.

Таким образом, у больных остеомиелитом снижалась концент-. рация ФНО-а в сыворотке и супернатантах в ответ на стимуляцию ЛПС и ИЛ-1/3. Под влиянием иммунокоррегирующего лечения тактивином у больных остеомиелитом увеличилась концентрация ФНО-а в сыворотке и су-

Жтантах от стимулированных или ИЛ-1^8 мононуклеаров периферической крови.

Таким образом, у больных остеомиелитом системная продукция ИЛ-1/3 была повышена, а ФНО-а снижена,

I

Р

Ж

0 +ИЛ-1/! А 0 & +■

Б ++++ # © ++ В +++ # .

Рисунок 11. Содержание

мРНК ФНО-а у больных остеомиелитом

спонтанная и стимулированная продукция ИЛ-1/3 была снижена, а ФНО-а повышена. Механизмы, изменяющие продукцию этих цитокинов, задействованы на транскрипционном уровне. Отличие остеомиелита от механической травмы состоит в том, что повышается как системная, так и спонтанная и стимулированная продукция ФНО-а, и механизмы, изменяющие продукцию ФНО-а, действуют на транскрипционном уровне.

Параллельно с донорами изучалась кинетика продукции мРНК ИФ-у у больных посттравматическим остеомиелитом з интактных и стимулированных ФГА мононуклеарах периферической крови в течение 62 часов. В течение первых 6 часов культивирования определяли самое высокое количество мРНК ИФ-у в интактных МНК. Количество мРНК ИФ-у было значительно меньше з стимулированных ФГА МНК, тогда как к 15 часам количество мРНК ИФ-у снижалось и в интактных и в стимулированных ФГА мононуклеарах, но к 24 часам в интактных МНК количеством РНК ИФ-у оставалось на уровне 15 часов, а в стимулированных ФГА МНК мРНК ИФ-у исчезала. В остальные временные точки в интактных и стимулированных ФГА мононуклеарах мРНК ИФ-у определить методом дот-гибридизации не удалось (рис. 12).

У других больных посттравматическим остеомиелитом мРНК ИФ-у выделяли через 6 и 24 часа культивирования интактных и стимулированных ФГА МНК. У всех больных через 24 часа культивирования количество мРНК ИФ-у было значительно больше, чем через 6 часов. У больных остеомиелитом продукция мРНК ИФ-у была увеличена в интактных и стимулированных мононуклеарах почти у всех больных, хотя ФГА и не стимулировал продукцию мРНК ИФ-у мононуклеарамн периферической крови.

Количество мРНК ИФ-у после лечения тактивином у больных остеомиелитом в ответ на ФГА увеличивалось к 24 часам, а к 36 часам снижалось незначительно. В интактных МНК количество мРНК ИФ-у было ниже, чем в стимулированных ФГА, а к 36 часам культивирования мРНК ИФ-у методом дот-гибридизации не определялась (рис. 12).

Таким образом, под влиянием лечения тактивином продукция мРНК ИФ-у усиливалась в мононуклеарах, стимулированных ФГА, и время продукции мРНК ИФ-у и количество мРНК ИФ-у в стимулированных ФГА мононуклеарах увеличивалось, что свидетельствует об изменения функциональных возможностей МНК под действием имму-аокоррегирующей терапии тактивином.

Рисунок 12. Содержание мРНК ИФ-у и мРНК ИЛ-2 А — доноры, Б — остеомиелит, В — остеомиелит после лечения. Дот-грибидизаиия РНК из МНК 1x106, стимулированных ФГА (1 мкг/мл) ДНК-зондом к мРНК ИФ-у, и дот-гибридизация РНК из МНК 1x106 стимулированных ФГА (1 мкг/мл) и РНК ИЛ-2

Таким образом, при осложнении механической травмы — остеомиелите продукция мРНК ИФ-у имела один пик экспрессии — либо через 6 часов, либо через 24 часа культивирования МНК, но количество мРНК ИФ-у в интактных МНК было больше, чем у доноров. ФГА у части больных не стимулировал продукцию мРНК ИФ-у на 24 часа, тогда как на шесть часов культивирования продукция отмечена у всех больных. После лечения тактивином наблюдалось снижение продукции мРНК ИФ-у в интактных МНК и стимуляция продукции мРНК ИФ-у в стимулированных ФГА мононуклеарах как на 6, так и на 24 часа культивирования, что свидетельствует о нормализующем эффекте лечения тактивином на продукцию мРНК ИФ-у у больных остеомиелитом.

Продукция мРНК ИЛ-2 у больных остеомиелитом была снижена по отношению к донорам и определялась только через 24 и 62 часа культивирования. ФГА не стимулировал . продукцию мРНК ИЛ-2, в отличии от доноров, где . продукция мРНК ИЛ-2 постепенно увеличивалась: с 3 часов культивирования до 62 было наибольшее количество мРНК ИЛ-2, ФГА стимулировал продукцию мРНК ИЛ-2 у доноров начиная с 6 часов после стимуляции. В другие ' временные точки у больных остеомиелитом были обнаружены только следы мРНК ИЛ-2. В интактных МНК больше /всего мРНК ИЛ-2 было через 24 часа культивирования, тогда как в стимулированных ФГА мононуклеарах периферической крови больше всего мРНК ИЛ-2 было к 62 часам после стимуляции. У больных остеомиелитом небольшое увеличение биологической активности ИЛ-2 было через 48 часов культивирования и практически не было увеличения биологической активности ИЛ-2 в ответ на стимуляцию ФГА мононуклеарЬв периферической крови, тогда как у доноров* первый пик продукции ИЛ-2 был определен через

48 часов культивирования и ФГА стимулировал продукцию

После иммунокоррегирующей терапии тактнвином у больных остеомиелитом увеличилась продукция мРНК ИЛ-2 интактными и стимулированными ФГА мононуклеарами периферической крови. Продукция мРНК ИЛ-2 в интакт-ных МНК увеличивалась к 15 и 24 часам культивирования, тогда как в стимулированных ФГА мононуклеарах мРНК ИЛ-2 увеличивалась к 15 и 24 часам культивирования и сохранялась до 36 часов культивирования после стимуляции ФГА, к тому же ФГА стимулировал продукцию мРНК ИЛ-2 по сравнению с интактными клетками (рис. 12).

После лечения тактивином увеличивался ИВФГА на продукцию ИЛ-2, то есть увеличивалась отвечаемость продукцией ИЛ-2 на стимуляцию ФГА, но количество ИЛ-2 от интактных МНК стало меньше, чем до лечения тактивином.

Вероятно, что у больных остеомиелитом понижается не только продукция ИЛ-2, но и рецепция ИЛ-2, а лечение тактивином, повышает рецепцию ЙЛ-2 и увеличивает продукцию ИЛ-2 Т лимфоцитами, что подтверждается увеличением продукции ИЛ-2 на транскрипционном уровне. По-видимому за счет увеличения связывания ИЛ-2 его рецепторами и наблюдали уменьшение биологической активности ИЛ-2 по ответам лимфобластов человека после , лечения тактивином, чем до лечения этим препаратом. Эти данные свидетельствуют о том, что тактивин действует как иммунорегулятор, увеличивая продукцию ИЛ-2 на транскрипционном уровне.

У больных посттравматическим остеомиелитом функции эффектороп ГЗТ изменялись неоднозначно: у части больных ПЭФ был в нормальных пределах, у остальных — понижен (рис. 13). После иммунокоррекции тактивином высокий ПЭФ ГЗТ понижался, а низкий — повышался. Для того, чтобы оценить влияние тактивина на ПЭФ ГЗТ и продукцию ИЛ-2 интактными и стимулированными ФГА МНК, мы вычислили индекс влияния лечения ПЭФ (ИВЛ ПЭФ = ПЭФ после лечения - ПЭФ до лечения) и индекс влияния лечения ИЛ-2 (ИВЛил„2= ИВф[-л после лечения — ИВфГА до лечения).

Была выявлена высокая отрицательная взаимосвязь между ПЭФ ГЗТ и ИВФГА на продукцию ИЛ-2 у больных остеомиелитом до лечения тактнвином, то есть, чем выше был ПЭФ ГЗТ, тем ниже был ИВФГА на продукцию ИЛ-2 и, наоборот (г =-0,96, р<0,01), но отсутствовала взаимосвязь между ПЭФ ГЗТ и продукцией ИЛ-2 интактными МНК, то есть иными словами, способность МНК отвечать на ФГА

продукцией ИЛ-2 находилась в реципрокных отношениях со способностью отвечать развитием эффекторных функций ГЗТ и отсутствовала зависимость между спонтанной продукцией и ИЛ-2 и активностью ГЗТ-эффекторов в ответ на ФГА.

После лечения тактивином у этих больных была выявлена высокая отрицательная корреляционная взаимосвязь между активностью ГЗТ эффекторов в ответ на ФГА и ИВФГА на продукцию ИЛ-2 (г,=-0,94, р<0,01); взаимосвязь между ПЭФ ГЗТ и продукцией ИЛ-2 интактными МНК отсутствовала. Эти данные свидетельствуют о том, что и после лечения ответ на ФГА продукции ИЛ-2 находится в реципрокных отношениях с активацией ГЗТ-эффекторов. Аналогичные выводы можно сделать и при сравнении индексов влияния лечения, когда была выявлена отрицательная взаимосвязь между ИВЛ ПЭФ ГЗТ и ИВА на продукцию ИЛ-2 (г8=-0,79, р<0,01) (рис. 13). То есть под влиянием лечения тактивином изменился показатель активности эффекторов ГЗТ: низкий ПЭФ повысился, а

Рисунок 13

высокий — понизился. Так же изменилась под влиянием лечения тактивином и продукция ИЛ-2, увеличилась функциональная способность клеток, о чем свидетельствует повышение ИВФГА в два раза.

Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что при остеомиелите, в стличие от механической и термической травмы, активность эффекторов ГЗТ в ответ на ФГА находится в обратной зависимости от способности к продукции ИЛ-2 и не зависит от продукции ИЛ-2 интактнымн МНК. Эти данные противоречат общепринятым понятиям сб ИЛ-2, как о необходимом лимфокипе для активации эффекторных клеток ГЗТ, и даже наоборот говорят, о его возможной ингибирующей родм. Проявлением этого можно считать взаимосвязь, свидетельствующую о том, что после лечения тактипином незначительно увеличивающаяся способность МНК отвечать продукцией ИЛ-2 на ФГА сопровождается усилением, а значительно увеличивающаяся — снижением активности ГЗТ-эффектороз. Данные Кпор ]. [1988] о стимуляции функции ГЗТ у больных после лечения реком-бннантным ЙФ-у могут свидетельствовать о том, что этот цитокин .может выступать в качестве одного из регуляторов функций ГЗТ при патологических состояниях. Тем более, что полученные нами данные продемонстрировали нормализацию продукции мРНК ИФ-у после лечения тактивином: у больных с повышенной спонтанной продукцией мРНК ИФ-у тактивин снижал, а у больных с нормальной — не изменял продукцию мРНК ИФ-у, при этом у всех больных усиливалось стимулированная ФГА продукция мРНК ИФ-у. Взаимосвязь активности ГЗТ-эффекторов с ИФ-у тем более вероятна, что только эти два параметра модулируются (нормализуются) под влиянием лечения тактивином, в то время как характеристики продукции других исследованных цитокинов изменяются односторонне: либо увеличиваются, либо уменьшаются.

Выводы

1. Снижение спонтанной и индуцированной продукции ИЛ-1 и ИЛ-2 является ведущим в развитии посттравматического иммунодефицита и характерно для его клеточного, сочетанного и гуморального патогенетического типа. Понижение продукции ИЛ-1 и ИЛ-2 обусловлены снижением содержания клетками соответствующих мРНК.

2. Клеточный тип иммунодефицита, сопровождающий неосложненнуго механическую травму, отличает снижение спонтанной и стимулированной продукции мРНК ИФ-у, снижение стимулированной продукции ФНО-а и повышение системной продукции ИЛ-1/:! и ФНО-а.

3. Сочетанный тип иммунодефицита, сопровождающий остеомиелит, отличает повышение спонтанной продукции мРНК ИФ-у, повышение стимулированной продукции ФНО-а, повышение системной продукции ИЛ-1/? и снижение системной продукции

ФНО-а.

4. Гуморальный тип иммунодефицита, сопровождающий тяжелые ожоги, отличает повышение спонтанной н стимулированной продукции мРНК ИФ-у, снижение стимулированной продукции ФНО-а и снижение системной продз'кцзш ФНО-а и ИЛ-1/?.

5. Иммуномодулирующий эффект тактивина, проявляющийся в повышении продукции мРНК ИЛ-2, продукции ИЛ-2, повышении стимулированной продукции мРНК Иф-у, снижении спонтанной продукции мРНК ИФ-у, снижении системной, спонтанной и стимулированной продукции ИЛ-1/? и повышении системной и стимулированной продукции ФНО-а и снижении спонтанной продукции ФНО-а, реализуется на транскрипционном уровне.