Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Структурно-метаболические реакции у потомства экспериментальных животных, перенесших действие химических соединений в эмбриогенезе

р Г 5 ОД

| О ОЕВ '¡235 На правах рукописи

СЕМЕНЮК Александр Васильевич

УДК 577.15.02 + 612.015.34 : 591.392

Структурно-метаболические реакции у потомства экспериментальных животных, перенесших действие химических соединений в эмбриогенезе

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации иа соискание ученой степени доктора медицинских наук

Иркутск 1996

Работа выполнена в Институте общей патологии и экологии человека Сибирского отделения Российской Академии медицинских наук (г.Новосибирск)

Научные консультанты: член-корреспондент РАМН,

д.и.к., профессор член-корреспондент РАМН, д.ы.н., профессор

КОЛЕСНИКОВ С.И.

ЯКОБСОН Г.С.

Официальные оппоненты д.и.н., профессор, Засл. деятель науки д.и.н., профессор д.б.н.

ЯБЕРБАУМ П.М. КОГАН А.С. КОНСТАНТИНОВ Ю.М.

Ведущее учреждение: - Московская Медицинская Академия

на заседании Специаль . ______________резидиума

Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН (664003, г.Иркутск, ул.Тимирязева, 16).

С диссетацией можно ознакомиться в библиотеке ВосточноСибирского научного центра СО РАМН по адресу: г.Иркутск, ул.Тимирязева, 16.

им.И,М.Сеченова

Защита состоится

часов

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

ШОЛОХОВ Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность текы. Способность потомства эффективно адаптироваться к условиям окружающей среда во многом зависит от становления органов и систем в эмбриогенезе. К сокалению, часто физиологическое течение данного процесса оказывается нарушенным в результате воздействия химических веществ (загрязнители среда, бытовые токсиканты, лекарственные препараты) в период беременности (Саноцкий, Сальникова, 1979; Смольникова, 1982; Колесников и др., 1986; Czel-zel е.а., 1988). С дефектами у ребенка при его рождении или проявляющимися в более поздние периода жизни связаны многие человеческие трагедии (вспомним талидомид), и совершенно очевидной является необходимость усовершенствования методов комплексного анализа химических соединений, оказывающих токсическое действие на эмбрион или плод, а также методов оценки риска для здоровья человека и прогнозирования неблагоприятных исходов беременности (Принципы оценки риска----- ? 988).

Выраженные структурные дефекты развития, макроскопически различимые морфологические повреждения, так называемые тератогенные эффекты, достаточно хорошо известны и описаны в современной литературе (Репин, 1980; Динерман, 1980; Wilson, 1977; Krauer е.а., 1984). Однако в последние годы стало ясно, что изучение эмбрио-токсичности и тератогенности пранатального воздействия химических веществ необходимо расширить и включить в него выявление химически индуцированных нарушений роста зародыша, а такке функциональных отклонений, которые могут проявляться лишь спустя длительное время после рождения (Hays, 1981; Klinger, Jahn, 1985).

Так доказано, что специфические компоненты нервной системы могут подвергаться влиянию токсичных агентов с нейро-поведенческими отклонениями без каких-либо заметных изменений в головном мозге (Reinisch, Karow, 1977; Lundborg, Engel, 1978; Rosengarten, Friedhof f, 1979). В то же время отклонения в темпах размножения клеток в развивающемся головном мозге и другие морфологические изменения могут быть минимальными (Bendek, Hahn, 1981).

Если учесть сложность процессов гаметогенеза, оплодотворения и особенно эмбриогенеза, становится понятным, что воздействие химических веществ в пренатальном и раннем постнатальном периодах представляет особую токсикологическую проблему. Наиболее очевидным последствием такого воздействия может быть пониженная плодовитость

потомства, поскольку у млекопитающих эмбрионы венского пола особо чувствительны к факторам, поврездавдим зародышевые клетки (у большинства видов ооциты размножаются лишь пренатально) (McLachlan, DUon. 1973; Dixon, 1982).

Отдаленным последствием токсических воздействий является и трансплацентарный канцерогенез - появление новообразований в потомства самок, подвергшихся действию химических агентов в период беременности (Шабад и др., 1975; Alexandre?, Napalkov, 1981; Rice, 1981). Механизмы, лежащие в его основе, зависимость между тератогенезом и канцерогенезом до настоящего времени до конца не изучены (Miller, 1977; Heubert, 1SS0; Feikonen е.а., 1981).

Влияние химических соединений мокет также осуществляться посредством пре- и перинатально индуцированных нарушений регулятор-ных, гомеостатичэских систем, например, такой функции печени, как метаболизм гормонов, вырабатываемых гонадами (Lucler, McDanlel, 1979).

Получены указания на то, что соединения, влияющие на иммунную систему взрослого организма, могут оказывать воздействие и на иммунную систему развиваюдегося плода, эффекты от которого сохраняются в скрытом состоянии до наступления половой зрелости (Spyker, Fernandas, 1ЭТЗ; Chapman, 1981).

Несмотря на разнообразие работ, обозначающих проблему отдаленных функциональных последствий внутриутробного контакта развивающегося организма с токсикантами, лишь в единичных исследованиях делается попытки сопоставления их с особенностями биотрансформации действующего вещества.

В структуре отдаленных стабильных посттоксических нарушений эмбрионального развития но неали своего отражения и вопросы, связанные с изучением формирования реактивности (индукция структурно-биохимических механизмов реализации токсических Бф|юктов) и антитоксической резистентности (приобретение или утрата как организмом в целом, так и отдельными органами-мкзенями устойчивости к действующему антенатально химическому агенту) в постнатальном онтогенезе.

Подробный анализ литературы и вытекахцне из него вышеизложенные обстоятельства определили выполнение настоящего исследования.

Цель работы состояла в выявлении значимых структурно-метаболических сдвигов у взрослого потомства, перенесшего действие раз-

летных химических соединений в период эмбриогенеза и разработке на этой основе научно-обоснованных принципов прогнозирования и коррекции отдаленных последствий такого токсического воздействия на развивающийся организм.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние пренатального воздействия различных классов ксенобиотиков на постнатальный онтогенез как в исходном состоянии, так и при повторной нагрузке исследуемым веществом.

2. Установить зависимость структурно-метаболических изменений в клетках печени взрослых нивотных от особенностей биотрансформации действующего в период внутриутробного развития ксенобиотика (бенз[а]пирен, паракзат, фенобарбитал).

3. Изучить роль пола экспериментальных еивотных в формировании отдаленных метаболических особенностей реализации токсических эффектов и антитоксической резистентности организма.

4. Выяснить роль изменений гормонального статуса, мекклеточных связей, субстрат-ферментных взаимоотношений в механизме развития отдаленных токсических последствий.

5. Разработать экспериментальную модель создания долгосрочных изменений антитоксической рэзистентности организма в постнаталь-ном онтогенезе.

6. Определить подхода к патогенетической коррекции структурно-метаболических нарушений, привнесенных вмешательством токсикантов в эмбриогенез.

Научная новизна исследования

1. Впервые установлено, что в основе повышения устойчивости организма экспериментальных животных к химическим соединениям, при биотрансформации которых происходит процесс "токсификации" (бензСаЗпирен и парэкват), лекит стабильное подавление в клетках печени активности патогенетически значимых метаболических реакций (система цитохром Р-450- зависимых микросомных монооксигеназ, наработка восстановительных эквивалентов НАДФН в пентозо-фосфатном цикле и т.д.).

2. Установлены четко выраженные половые различия при формировании как отдаленных метаболических последствий в клетках печени, так и антитоксической резистентности экспериментальных животных.

3. Впервые показано, что структурные перестройки в ткани пече-

ни взрослых юшотных, внутриутробно перенесших контакт с токсикантами, могут включать в себя как измзнешм физико-химической организации биомембран (жидкостные свойства мембраны микросом, фосфолипидный и кирпокислотный их состав), количественные и качественные изменения (повреждения) внутриклеточных органелл, так и нарушения межклеточных контактов.

4. На основании исследования кинетических параметров субстрат-ферментных взаимоотношений, а также данных ВЭЖХ впервые указывается на возможность существования в микросомах печени потомства, пренаталыю контактировавшего с фенобарбиталом, особой формы ци-тохрома Р-450, обладащ8й меньшим сродством к аминопирину и характеризующейся особой метаболической активностью по отношении к диазепаму.

5. Впервые создана модель долгосрочного изменения антитоксической резистентности организма путем введения химических соединений (бензЕсйпирена и параквата) в период внутриутробного развития (органогенеза).

Б. Впервые представлена детальная характеристика морфо-функци ональных комплексов и моксистемных взаимоотношений (по данным корреляционного анализа) в механизме реализации пренаталыю индуцированных особенностей антитоксической резистентности организма в постнатальном онтогенезе.

7. Впервые обоснована целесообразность патогенетической коррекции биоантиоксидантом а-токоферолом последствий свободнорадо-кальных повреждений в клетках печени животных, пренатально перенесших затравку гербицидом парасватом.

Практическая ценность

Результаты исследования существенно углубляют представления о влиянии химических препаратов на процессы эмбрионального развития. Внесен ваашй вклад в понимание возможных механизмов терато неза на уроше, предшествующем появлению грубых морфологических повреждений. Полученные данные могут быть использованы в эмбриологии в качестве экспериментальной модели врожденных изменений антитоксической резистентности организма. Используемый в работе комплекс биохимических методов рекомендуется для эффективного слекения за токсико(фармако)динамическими процессами как в экспериментальных патофизиологических исследованиях, так и клиничес кой практике. Эффективное применение фармакопейно разрешенного

биоантиоксиданта о-токоферола раскрывает широкие возможности для клинической апробации данного препарата в целях профилактики и коррекции функциональных тератогенных эффектов химических загрязнителей среды. Результаты используются в учебных курсах по биологии индивидуального развития Иркутского государственного университета и Новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Предложенный комплекс биохимических методов по оценке перекис-ного окисления липидов используется в работе диагностического отделения женской консультации Новосибирской детской специализированной больницы а 5. Полученные при экспериментальном исследовании данные по моделированию антитоксической резистентности в постнатальном онтогенезе внедрены в работу Института лимнологии СО РАМН, Новосибирского фйлиала НПО "Гигиена и профпатологая" ГК СЭН. Подготовлены методические рекомендации по структурно-функциональной оценке процессов адаптации при воздействии химических факторов окружающей среды. Изданы две монографии, получены авторские свидетельства на изобретения.

1. Монография. - Беременность и токсиканты. С.И.Колесников, В.В.Иванов, А.В.Семенюк и др. - Новосибирск, I98S. - 158 с.

2. Монография. - Печень и ее регионарные лимфатические узлы при воздействии 3,4-бензпиреном. С.И.Колесников, С.В.Мичурина, А.В.Семенюк, Г.М.Вакулин - Новосибирск, 1995. - 218 с.

3. Изобретение.- Способ моделирования устойчивости организма к токсическому действию бенз[а]пирена. A.c. 1587564 СССР, МКК4 G 09 В 23/28.

4. Изобретение. - Среда для окрашивания глутатион-редуктазы ' на срезах тканей. A.c. I72I468 СССР, МКИ4 G 01 H 1/28.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Воздействие в период эмбрионального развития (период органогенеза, I0-II-I2 сутки беременности) различных химических веществ приводит к долгосрочным, выявляемым во взрослом состоянии изменениям как антитоксической резистентности организма в целом, так и структурно-метаболическим перестройкам в клетках печени.

2. Реализация токсического эффекта, э такта структурно-метаболические перестройки в клетках печени взрослых животных, перенесших внутриутробно контакт с токсикантами, зависят от особенностей биотрансформации действующего вещества.

3. Существуют выраженные половые различия в формировании отдаленных токсических последствие.

4. Изменения гормонального статуса играют важную роль в механизме реализации стабильных функциональных последствий внутриутробного контакта организма с токсикантом.

5. Системный корреляционный анализ посттоксических изменений на органном (тканевом), клеточном и субклеточном уровнях организации и установление на его основе новых морфо-функциональных комплексов может быть использовано для диагностики и прогноза влияния химических загрязнителей среды на развивающийся организм.

6. Применение биоантиоксидантов целесообразно в Целях патогенетической коррекции внутриутробно индуцированных свободнорадикаль-ных повреждений и предупреждения стабильных изменений антитоксической резистентности в постнатальном онтогенезе.

Апробация материалов диссертант

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на IV Всесоюзной конференции "Адаптация человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика" (Новосибирск, 1986); X Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Винница, 1986); III Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы внешней среда" (Новосибирск, 1987); Всесоюзной конференции "Цитохром Р-450 и охрана окружавдей среда" (Новосибирск, 1987); IV конференции морфологов Средней Азии и Казахстана "Проблемы реактивности и адаптации клеток, тканей и органов" (Караганда, 1988); Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы медицинской эмбриологии" (Иркутск, 1988); IV Всесоюзном съезде патофизиологов "Нарушение механизмов регуляции и их коррекция" (Кишинев, 1989); Всесоюзной конференции "Проблемы гистофизиологии соединительной ткани" (Новосибирск, 1989); IV Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды" (Ленинград, 1991); Пленуме Сибирского общества патофизиологов и проблемной комиссии по охране материнства и детства "Механизмы патологических реакций" (Иркутск, 1991); Всесоюзной научной конференции "Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии" (Новосибирск, 1992); Международном симпозиуме "Проблемы саноген-ного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю среду организма" (Чолпон-Ата, 1993).

Публикации

Опубликовано 98 печатных работ, из них то теме диссертации -42.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 342 страницах машинописного текста,, собственно текста 270 страниц, содержит 47 рисунков, 25 таблиц. Состоит из введения, главы посвященной материалам и методам исследования, 3 глав собственных исследований, каждую из которых предваряет обзор соответствующей литературы. В соответствии с поставленными задачами изложение материала собственных исследований в каждой главе подразделено на 3-5 подглав. Завершают диссертацию общее заключение, раздел внедрение в практику, а также вывода и список литературы, содержащий 58 отечественных и 388 иностранных источников. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В подглавах "Обзор литературы" собраны и проанализированы данные по токсикологической (фармакологической) характеристике бензСаЗпирена, параквата и фенобарбитала, включая результаты исследований их биотрансформации, токсико(фармако-)- кинетики, механизмов токсичности. Рассмотрены данные о возможном влиянии исследуемых химических веществ на эмбриональное развитие, что позволило обосновать необходимость настоящего исследования.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Модель эксперимента и объект исследования.Опыты проведены на белых беспородных крысах обоих полов массой 180-250 г, содержавшихся в виварии на стандартном рационе питания. Выбор данного вида экспериментальных животных был обусловлен относительно короткой продолжительностью беременности, высокой плодовитостью, предсказуемостью поведения, а также отсутствием сезонных циклов спаривания, как это и регламентируется для подобного рода работ, в специальном руководстве, изданном международной группой экспертов ВОЗ (Принципы оценки риска... , 1988). Всего использовано во всех экспериментальных грушах 2520 животных обоих полов.

Для оплодотворения самок в стадии проэструс-эструс подсаживали на ночь к самцам в соотношении 3:1. Первым днем беременности

считали день обнаружения сперматозоидов во влагалищных мазках. Общая схема эксперимента выглядит следующим образом:

Способ введения и дозировка для каждого исследуемого химического вещества были разными.

БЕНЗ[а]ПИРЕН, растворенный в оливковом масле. (0,08% раствор) вводили самкам крыс в суммарной дозе 60 мг/кг массы тела, внутри-бркпшнно на 10, II и 12 дни беременности (период органогенеза) (по 20 мг/кг ежедневно).

ПАРЛКВАТ: водный 0,32% раствор, вводили самкам крыс в суточной дозе 24 мг/кг массы тела, внутрибршинно в те же сроки беременности (по 8 мг/кг ежедневно).

Контрольным животным внутрибршинно в тех же количествах вводили соответствующий растворитель.

ФЕНОБАРБИТАЛ: беременные самки крыс получали с питьевой водой. Доказано, что вводимый таким образом фенобарбитал производит наименьше нарушения в состоянии животных по сравнению сдругими путями его применения (ВигеПо е.а., 1973). Концентрация барбитурата в воде поилок составляла 0,1%. Пероральное поступление препарата происходило с I по 16 день беременности в среднем примерно по 5 мл в сутки. С 17 дня беременности пошлей опытных животных содержали обычную питьевую воду для исключения возможности поступления (учитывая длительный период полувыведения) остаточных количеств фенобарбитала в организм крысят с грудным молоком.

После контакта с каждым из перечисленных химических соединений беременные животные всех исследуемых групп не подвергались более

никаким воздействиям. После родов регистрировали число крысят в помете в контрольных и опытных группах, а также динамику набора массы тела.

У половозрелого потомства как в контроле, так и в опыте (самки и самцы) оценивали исходный уровень гормонально-метаболических и морфологических параметров, а также ответную реакцию на острое введение токсиканта. В случае бенз1а)пирена 0,08% раствор в оливковом масле вводили двукратно внутрибрюшинно в течение двух дней в суммарной дозе 60 мг/кг массы тела для достижения оптимального уровня индукции микросомных монооксигеназ печени (см. Споб-зреНиз е.а.,1969, 1970; Ляхович, Цырлов, 1981). Паракват в виде водного раствора вводили в дозе.24 мг/кг массы тела однократно, внутрибрюшинно за двое суток до забоя. Величина дозы (24 мг/кг), вводимой животным как в период внутриутробного развития, так и во взрослом состоянии, была подобрана наш экспериментальным путем, как инициирующая наибольшие флуктуации в системе перекисного окисления липидов биомембран (Свиридов и др., 1991). Фенобарбитал вводили (предварительно растворив его в физиологическом растворе) двухкратно внутрибрюшинно в течение 2 дней по 80 мг/кг массы тела, ежедневно, (см.Ляхович, Цырлов, 1981).

Через сутки после введения бенз[а1пирена и фенобарбитала и через двое суток после введения параквата крыс взвешивали и забивали декапитацией.

В эксперименте с паракватом была предпринята также попытка патогенетической коррекции внутриутробно индуцированных отдаленных стабильных структурно-метаболических нарушений с помощью биоанти-оксиданта а-токоферола. Маслянный 10% раствор а-токоферола вводили опытным самкам крыс на 9, 10, II и 12 дни беременности (т.е. за один день до начала и на всем протяжении одновременно проводимой по выше описанной схеме затравки паракватом) внутрибрюшинно по 100 да/кг массы тела, ежедневно, в соответствии с рекомендациями, представленными для данного вида животных в руководстве по экспериментальной витаминологии (Спиричев и др.,1979).

Половозрелое потомство (самки, самцы) от беременных самок данной группы (а-токоферол + паракват), как и вне коррекции, оценивали в исходном состоянии и после острой затравки (24 мг/кг) исследуемым токсикантом.

У экспериментальных животных всех описанных групп регистриро-

вали массу органов, исследовали сыворотку крови, гомогенат печени, цитозоль и микросомную фракцию гепатоцитов, л также-полутонкие и ультратонкие срезы ткани печени.

Методы исследования.

Активность метаболизма ксенобиотиков в печени. Выделение микро-сомиой фракции печени производили методом дифференциального центрифугирования по Daliner и Ernster (1968) в модификации Карузиной И.И. и Арчакова А.И. (1977). Количество белка в пробах при проведении исследований определяли по методу Lowry et al. (1951).

В выделенной фракции определяли содержание цитохрома Р-450 (Ornura, Sato, 1964), его N-деметилазную активность (КФ 1.14.14.1) с использованием аминопирина в качестве субстрата (Smuckler е.а., 1967). Скорость р-гидроксилирования анилина оценивали по количеству образовавшегося р-аминофенола (Archakov е.а., 1974). N-оксиге-назную активность измеряли в соответствии с методом Zelgler и Pet-tit (1964). БензСсйпиренгидроксилазную активность определяли флуоресцентным методом Roble et al. (1976) в модификации Сшрз et al. (1977).

Оценку метаболизма даазепама в микросомах печени производили методом микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Файбушевич и др., 1986) на хромотографе "Милихром" с УФ-де-тектором при длине волны 240 нм. Использовали обращенно-фазовые сорбенты. Количество образовавшихся метаболитов диазепама определяли с помощью калибровочных графиков.

Общий индекс метаболизма в расчете на целостный организм анализировали по методу Boersma et al. (1984). Измерение дыхательной активности микросом (скорости переноса электронов в гидроксилиру-вдей цепи) производили фдуориметрическж,: методом, описанным и.И. Карузиной и А.И.Арчаковым (1977).

Исследование переписного окисления липидов (ПОЛ) в печени. Определение гидроперекисей липидов производили методом УФ-спектрофото-метрии по В.Е.Каган (1981). Содержание малонового диальдегида оценивали методом Yagl К. et al. (1968) в модификации Yagl J. et al. (1976). Скорость аскорбат- и НАДФН- зависимого перекисного окисления микросомных липидов (окисляемость липидов в системах In vitro) измеряли в соответствии с методом А.И.Арчакова и др. (1968) в модификации Hogberg et al. (1973). Определение содержания в образцах малонового диальдегида (МДА) проводили по методу Wills (1964).

Концентрацию Ре2+ в цитозоле печени измеряли методом Henry (1979) с помощью стандартных наборов Био-ЛА-Тест "Железо".

Исследование факторов антиперекисной защиты в печени. Определение концентрации восстановленного глутатиона производили аллокса-новым методом Kay и Murfitt (1960) в модификации Ц.М.Штутман и В.П.Артюх (1970). В ряде экспериментов, где важно было оценить соотношение окисленной и восстановленной форм глутатиона, содержание данных аминотиолов в цитозоле печени было оценено флуориметричес-ким методом Hissln и Hilf (1976). Активность глутатион-редуктазы (КФ 1.6.4.2) оценивали по Horn и Bruns (1958). Для выявления локализации данного фермента в клетках печени нами был разработан мар-керно-гистохимический метод (Глазырин А.Л. и др., 1990), основанный на взаимодействии меченного коллоидным золотом окисленного глутатиона с находящейся в срезе ткани глутатион-редуктазой. Активность глутатион-Б-трансферазы (неселеновой глутатионперокси-дазы) (КФ 2.5.1.18) анализировали методом Habig (1974). Определение активности глюкозо-6-фюсфатдегидрогеназы (КФ 1.1.1.49 ) производили в соответствии с Lohr и Waller (1974). Для работы использовали стандартные диагностические наборы фирмы Boehrlnger Mannheim GmbH. Активность супероксиддисмудисмутазы (КФ 1.15.1.1) оценивали по торможению реакции аутоокисления адреналина (Misra, îri-dovlch.1972) в модификации Sun и Zigman (1978). Содержание а- 'токоферола микросом исследовали флуорометрическим методом Taylor et al. (1976), а общей аскорбировой кислоты цитозоля гепатоцитов методом Schaffert и Klngsley (1955).

Исследование лигшдного компонента микросомных мембран. Для исследования фосфолипидов экстракцию липидов проводили по методу Д.И.Кузнецова (1970) с последующей препаративной тонкослойной хроматографией на силикагеле LS. Состав жирных кислот анализировали методом внутреннего нормирования с известными стандартами метиловых эфиров жирных кислот на газовом хроматографе "Chron-5" и выражали в процентах от суммы всех жирных кислот.

Методика гормонального исследования. Концентрацию гормонов в сыворотке крови экспериментальных животных определяли методом разрешенной во времени иммунофлуорометрии на спектрофлуориметре ARCUS 1240 с коммерческими наборами DEIFIA фирмы 1KB WAIL A G.

Методика морфологического исследования. Для электронно-микроскопического исследования кусочки печени животных ©ж сиров а ли в 2%

растворе параформальдегида, постфиксировали в 1% растворе 0s04 на фосфатном буфере (pH 7,3), дегидратировали этанолом возрастающей концентрации. Заливку производили в эпон-аралдит. Срезы получали на ультрамикротоме Ultracut Е (Reichert). Контрастировали цитратом свинца по методике Reynolds (1963). Препараты исследовали на электронном микроскопе JEM-10QS.

Количественные параметры ультраструктуры оценивали по основным правилам стереологии (Welbel, 1969; Ellas е.а., 1971; Автандилов, 1973). Морфометрический анализ проводили с помощью полуавтоматического анализатора Leltz-ASM.

Методы статистического анализа. При статистическом анализе цифрового материала использовали параметрические и непараметрические методы: критерии Стьюдента, Фишера, Уилкоксона-Манна-Уитни и др. [Лакин, 1990]. Обработку результатов производили на персональном компьютере PC AT 386 Standard с использованием пакета прикладных программ Statgraí.

Исследования липидного состава были проведены совместно с сотрудниками Института физиологии и патологии дыхания СО РАМН (рук. академик РАМН М.Т.Луценно). Электронномикроскопические исследования выполнены совместно с лабораторией отдаленных последствий химических воздействий Новосибирского филиала НПО "Гигиена и профпа-тология" ГК СЭН (рук. д.м.н. В.В.Иванов).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I.ОТДАЛЕННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ВЛИЯНИЯ НА ЭМБРИОГЕНЕЗ БЕНЗГаЗПИРЕНА.

Изменения окислительного метаболизма в печени. На модели интоксикации бензСсйпиреном установлено, что у животных, внутриутробно перенесших контакт с бенз[сОпиреном, в исходном состоянии было крайне мало отличий от нормы, и затрагивали они лишь глутатионовую систему защиты печени у самцов (снижение уровня GSH на 42% и повышение активности глутатион-Б-трансферазы на 22%). У самок данной группы была отмечена лишь некоторая тенденция к повышению активности глутатион S-трансферазы (660 ± 79,5 и 862 ± 82,0 ед., соответственно; Р> 0,05) при неизмененном содержании восстановленного глутатиона в печени (1,26 ± 0,134 и 1,48 ± 0,246 мкмоль -г ткани-1, соответственно; Р> 0,05). Каких-либо изменений в системе микросомных монооксигеназ печени у животных обоих полов данной

группы выявлено не было.

Между тем, ответная реакция организма опытных животных на острую нагрузку токсикантом существенно отличалась от обычной. Так, если в обычных условиях острая затравка данным ПАУ приводила к классической картине индукции цитохром Р-448-зависимых моноокси-геназ (повышение активности анилин- и бенз!а]пиренгидроксилазы на 275 и 504%, соответственно) (рис. I) и сопряженной с ней активации процесса конъюгации, пентозофосфатного шунта (достоверное повышение активности глутатион Б-трансферазы и глюкозо-6-фосфатде-гидрогеназы, соответственно). Значительное повышение уровня а-то-коферола в микросомах было необходимо,очевидно, для поддержания высокой каталитической активности микросомного гемопротеида в условиях индукции ПАУ. Причем, выявленные изменения касались лишь группы самцов и не затрагивали самок.

У опытных, внутриутробно подвергнутых действию бенз[а1пирена самцов при остром введении данного токсиканта наблюдалось выраженное подавление индуцибельности микросомных монооксигеназ (анилин- и бенз[а)пиренгидроксилазы) (рис. I) и сопутствующих этому метаболических процессов (глутатионовая система, а-токоферол.).

При анализе скорости образования, а также спектра метаболитов диазепама в микросомах печени самцов данной группы выявлено девятикратное снижение наработки гидроксипроизводного по сравнению с уровнем у "внутриутробно интактных" животных, подвергнутых острой затравке бензСаЗпиреном (4,0 и 36,0 нг-мин-1-мг белка-1, соответственно). Скорость образования Н-дезметилдиазепама также была снижена с 5,0 нг-мин-1>мг белка-1, при острой затравке интактных крыс, до 2,5 нГ'Мин-1'МГ белка-1, при введении бензСа]пирена животным, внутриутробно обработанным данным ПАУ. Наблюдалось некоторое повышение наработки такого метаболита, как оксазепам (2,0 и 4,5 нТ'Мин-1'Мг белка-1, соответственно)..

Напротив, самки в опытной группе приобретали способность к индукции микросомных ферментов (анилингидроксилаза).

Ультраструктурные перестройки гепатоцитов. Ультраструктурные изменения клеток печени животных, имевших внутриутробно контакт с ПАУ, были также как и метаболические незначительны, но реакция их на острое воздействие токсиканта была иной, нежели у интактных особей. Это и меньшая выраженность в гепатоцитах липидной дистрофии, и признаки структурной компенсации нарушений митохондриаль-

500-

12 3 4 5

12 3 4-5

Рис. 1 Изменение уровня метаболизма ксенобиотиков в микросомах печени у взрослых самцов крыс при остром введении бензНпирвна: А - контрольным животным;.Б - животным, имевшим в эмбриональный период контакт с данным ПАУ.

I - содержание цитохрома Р-450; 2 - активность аншшнгидрокси-лазы; 3 - общий индекс метаболизма по ашшшгидроксилазе; 4 -- активность бенз[«]пиренгидроксилазы; 5 - общий индекс метаболизма по <5екз[о(]пиренгидроксилазе.

• - значения, достоверно отличающиеся от контроля

ного дыхания, а также гиперплазия белок-синтезирующего аппарата зернистой цитоплазматической сети.

Изменения гормонального статуса. В ходе эксперимента было установлено, что токсическое действие бензШпирена на эндокринную систему организма беременных самок крыс проявлялось в значительном снижении уровня в крови тироксина и эстрадиола. Причем по срокам воздействия это совпадало с периодом органогенеза у развивающихся эмбрионов крыс. Учитывая важную роль данных гормонов в процессах клеточной диффэренцировки и координации общего развития организма, интересно было проследить влияние обусловленного ПАУ гормонального дисбаланса на становление эндокринной системы потомства.

Установлено, что наиболее характерным последствием внутриутробного контакта с бензСа]пиреном, как у самцов, так и у самок было повышение циркулирующего в крови тироксина. Реакция на острое введение, как в контроле, так и опыте была однотипной и заключалась в снижении уровня тироксина (табл. I, 2).

В спектре половых гормонов, как и при воздействии на тиреоид-ную систему, последствия острой затравки ПАУ были достаточно сходны у животных обоих полов и проявлялись в повышении концентрации основных половых стероидов (у самцов тестостерона и эстрадиола, у самок - эстрадиола) при сопутствующем снижении содержания в крови их метаболического предшественника (прогестерона). У самцов, имевших внутриутробно контакт с ПАУ уровень половых стероидов в крови напоминал таковой при острой затравке (высокое содержание тестостерона и низкое прогестерона). У самок в этих условиях уровень половых стероидов был значительно ниже, чем у интактных животных.

Системные взаимоотношения. При комплексной оценке резистентности организма к токсическому действию бенз[а)пирена за основу была взята избирательная направленность его действия на лимфоидные органы (ткани). В обычных условиях следствием острой затравки была выраженная иммунотоксичность в группе самцов (снижение массы тимуса, селезенки, пролиферативной активности лимфоцитов). В стуктуре корреляционных связей имела место выраженная отрицательная связь между массой лимфоидных органов и активностью микросомных моноок-сигеназ (рис. 2). У самок при острой затравке вышеуказанные параметры не отличались от нормы.

При острой затравке бенз[а]пиреном пренатально предобработан-

Таблица 1

Содержание гормонов в сыворотке крови взрослых самцов крыс при действии на них бенз[«]шрена ( М + т ).

Эстрадиол (нмоль • •л"1) Тестостерон (нмоль • • л-1) Прогестерон (нмоль ' • л-1) Тироксин (нмоль • • • л"1) Трийодти-ронин (нмоль • • л"1) Кортизол (нмоль • • л-1)

I. Контроль 0,05+0,012 2,2+0,32 29+4,7 108+5,2 5,5+0,24 97+11

2. Животные, имевшие в эмбриональный период контакт с бенз [«]пиреном 0,05+0,021 10,0+1,5 14+2,4 156+5,0 5,3+0,12 74+8

3. Острая затравка бенз [«]-пиреном контрольных животных 0,12+0,010 3,7+0,6 17+2,8 48+2,4 5,7+0,25 160+12

4. Острая затравка бенз[«]-пкреном животных, имевших контакт с данным ПАУ в эмбриональный период 0,05+0,003 [0,9+2,0 10+1,1 89+6,1 4,8+0,15 60+5

Р 1-3 0,0001 3-4 0,0001 [-2 0,001 1-2=0,034 3-4 0,005 1-2 0,0001 1-3 0,0001 2-4 0,0001 2-4=0,023 1-3 0,02

Таблица 2

Содеряаяие гормонов в сыворотке крови взрослых самок крыс при действии на них бенз[й]пирена ( М + т ).

Эстрадам (нмоль • • л"1) Тестостерон (нмоль • • л-1) Прогестерон (шлоль • • л-1) Тироксин (шлоль • • л-1) Трийодти-' роеил (нмоль • • л"1) Кортизол (яко ль • ■ л-1)

I. Контроль 0,11+0,012 3,8+0,37 81+9,8 92+6,1 5,1+0,14 89+10

2. Животные, имевшие в эмбриональный период контакт с бенз [«] пиреном 0,06+0,006 2,3+0,24 70*7,7 205+16,0 5,3+0,16 73+5

3. Острая затравка бенз [к]-пиреном контрольных зевотных 0,15+0,016 1,4+0,15 55+4,4 47+3,3 5,0+0,15 90+8

4. Острая затравка бенз [ампире ном животных, шов-ших контакт с данным ПАУ в эмбриональный период 0,11+0,025 5,4+0,08 92+6,0 74+4,2 5,8+0,22 80+5

Р 1-2 0,0002 1-3 0,05 1-2 0,01 1-3 0,0001 2-4 0,001 3-4 0,001 1-3 0,05 2-4 0,05 3-4 0,001 1-2 0,0001 1-3 0,0001 2-4 0,0001 3-4 0,0001 3-4 0,05

г-0,67-.,ь

р*0,0244 ®

)г-0,63;р°0,0382

щ ъ ъ н-

цитохрома

®Р:Щ21 ;

^ р"0,0372

Анилин

ЗСс^ (селезёнки

р=0,0235

/г-окмот

<>0,0046

/г=0,78-, /р*0,0026

тимуса

^0,0730 Ф

\ Г'в,8в\р-0,0003 ( тела р-Г"-печени

г=0,93; Г'0.88;

кр-0,00001 р •0,0002. ■ х ф У

\р*0,00001 /г-0,73;

©\ \ ( \ /Р'-Ф073

7—090\ I почек

Т*0,67', , \р°0,0763

\Ф

легких

I Г=0.75-, р=0,0054 ¡>0,78; Ф

(®р:01007у

ф|^-0,89;р-0,000е ' у

сердца ,

Рис. 2 Характер корреляционных связей между весовыми и метаболическими параметрами, в организме самцов после острой затравки СекзИ треком.

ных данным ПАУ животных картина проявления токсичности у самок и самцов была прямо противоположной. Так, теперь уже самцы имели завидную устойчивость к действию токсиканта. У самок данной груп пы, в отличие от слабо реагирующих на затравку ПАУ контрольных крыс, отчетливо роализовывался иммунотоксический эффект бензСаЗ-пирена. Достоверно уменьшалась масса тимуса. Имела место выраженная тенденция к снижению массы селезенки. После токсической нагрузки происходило формирование отрицательной корреляции между уровнем цитохрома Р-448 и массой тимуса (г= -0,88; Р= 0,047). Обращает внимание резкое обеднение межорганных связей у животных данной группы.

Заключение. Самцы крыс обладают более выраженной, по сравнению с самками, чувствительностью к токсическому действию бенз[а]пирэ-на, в основе которой лежит высокий уровень образования у них вторичных продуктов метаболизма данного ПАУ в системе цитохром Р-448-зависимых монооксигеназ печени, в то время как контрольные самки резистентны к действию бензСаЗпирена. В результате внутриутробно перенесенного"контакта с ПАУ уже не самцы, а самки демонстрируют повышенную чувствительность к повреждающему действию токсиканта, сопряженную с индуцибельностью микросомных монооксигеназ печени. Наблюдаемые изменения антитоксической резистентности орагнизма тесно связаны с перестройкам гормонального фона.

2.ОТДАЛЕННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ВЛИЯНИЯ НА ЭМБРИОГЕНЕЗ ПАРАКВАТА.

Следующая серия экспериментов проведена с использованием в качестве модельного токсиканта, параквата, гербицида, токсичность которого обусловлена исключительно образованием метаболитов сво-боднорадикальной природы.

Изменения окислительного метаболизма в печени. Результатом внутриутробного контакта животных с паракватом были стабильные отклонения в исходном уровне функционирования системы "перекисное окисление липидов - факторы антиперекисной защиты": на фоне сниженной концентрации в гепатоцитах биоантиоксидантов аскорбата и восстановленного глутатиона, а также активности супероксиддисмута-зы повышено содержание перекисных продуктов - гидроперекисей, снижена окисляемость микросомных липидов в НАДФН- зависимой системе, изменено соотношение мембранных фосфолипидов и жирных кислот (рис, 3; табл. 3, 4). Как и в предыдущей серии с бензЕаЗпиреном, выяв-

оОО-

ос 200 -

I

I

оч

700

%

-3в

12 5 4 5 6 7 8 3 10 11 12

Рис. з Особенности параметров переписного окисления лшш-дов и факторов антипервкионой защиты. печени у взрослых самцов крыс, имевших в эмбриональный период контакт с паракватом (данные представлены относительно, уровня интактных глвотных). I - содержание гидроперекисей; 2 - содержание ыалонового ди-альдогида; 3 - содержание флуоресцирующего пигмента; 4 -

- скорость ферментативного ПОЛ; 5 - концентрация ?е2+ ; 6 --

- содержание восстановленного глутатиона; 7 - активность глутатионредуктазы; 8 - активность глутатион з-трансферазы; 9 - активность глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы; 10 - актив-кость супдроксидцисмутазы; XI - содержание ск-токоферола;

12 - концентрация аскорбата.

• - значения, достоверно отличающиеся от контроля.

20 .

Таблица з

Анализ фракций фосфолипвдов, водоленных из макросом печени контрольных и затравленных паракватом салщов хфыо.

Содержание фракций фосфолипвдов, %

Фосфа-тидил-серин Фосфа-твдил-инозн-тид Лизо-фосфа-тидил-хогин Фосфа-. тидил-этанол- ачин Фосфа-тадил-холин Сфинго- цлзлин X

I. Контроль 11,71 12,50 - 17,97 39,06 18,75 • -

2.Животные, тлевшие в эмбриональный период контакт с паракватом 16,60 5,58 - 13,28 36,50 28,04 -

3.Острая затравка паракватом контрольных животных 7,20 5,26 3,03 15,46 45,39 20,06 3,6

4.Острая затравка паракватом животных, имевших контакт с данным гербицидом в эмбриональный период 3,12 1,99 9,66 20,74 56,25 8,23 -

5.Животные, имевшие в эмбриональный период контакт с паракватом на Фоне коррекции «-токоферолом 9,30 2,85 - 14,28 52,14 21,42 -

6.Острая затравка паракватом животных, имевших в эмбриональный период контакт с данным гербицидом на Фоне коррекции «-токоферолом 12,80 21,60 - 14,40 35,20 11,20 -

Примечание.

В каждой экспериментальной группе анализу была подвергнута суммарная фракция микросом печени от 8 животных. Х- неиденткфицированная фракция фосфолипвдов.

Таблица 4

Анализ фракций фосфолипгдов, виделенинх из макросом печена контрольных и затравленных паракватом салок крыс.

Содержание фракций фосфолшшдов, %

Сфзнго-).шелин Фосфа-тидил-серин Фосфа-тидил— ■ инози-тид Лизо-фосфа-тидал-холин Фосфа-тидил— этанол- амин Фосфа-тидил-холин Лизофос-фатидил-этанол-амин

I.Контроль 24,69 2.18 7.20 13.10 52.83

2.Животные, имевшие в эмбриональный период контакт с паракватом 20,00 20,00 12163 - 22,10 25,07 -

3. Острая затравка паракватон контрольных животных 11,20 21,74 5,60 9,94 9,30 42,23 -

4. Острая затравка паракватом животных, имевших контакт с данным гербицидом в эмбриональный период 5,76 4,98 - - 16,67 68,09 4,5

5.Животные, имевшие в эмбриональный период контакт с паракватом на Фоне коррекции <х -токоферолом 10,56 4,38 2,19 - 37,27. 45,60 -

6.Острая затравка паракватом животных, имевших в эмбриональный период контакт с данным гербицидом на Фоне коррекции с* -токоФеоолом 5,25 2,79 4,66 13,15 45,35 28,80

Примечание. В каждой экспериментальной группе анализу била подвергнута суъсларная фракцзя гшкросом пзченп от 8 животных.

ленные в исходном состоянии особенности метаболических параметров наблюдались исключительнов в группе самцов, и обусловлены они нарушением равновесия в системе "перекисное окисление липидов - факторы антиперекисной защиты". Это предположение подтвевдают результаты исследования по влиянию острой нагрузки паракватом.

В обычных условиях введение гербицида как интактннм самцам, так и самкам сопровождается повышением содержания в микросомах печени цитохрома Р-450, активно участвующего в наработке супероксидного аниона-радикала в организме при циклических редокс превращениях параквата (до 163% и до 177% от контроля, соответственно). В условиях соответствующих перестроек липидного компонента (фосфолигшдов, жирных кйслот) активные формы кислорода запускают в микросомных мембранах процессы перекисного окисления липидов, что приводит к накоплению соответствующих перекисных продуктов (повышение уровня малонового диальдегида на 53% - у самцов, гидроперекисей на 65% - у самок), лизофосфатидов (лизофосфатидилхолина) (табл. 3, 4). Половые различия заключаются в том, что у самцов в этих условиях активно функционирует система регенерации глутати-она. У самок этот механизм не срабатывает, и уровень восстановленного глутатиона в печени снижается - 78,5 ± 7,01 и 56,1 ± 4,04 мкмоль >г печени-1, соответственно (Р= 0,0215).

При введении же параквата внутриутробно предобработанным гербицидом животным картина значительно отличается от предыдущей. Проявление токсичности параквата как у самцов, так и у самок данной группы сопровождается следующей картиной, характеризующей перекисное окисление липидов в клетках печени: высоким уровнем гидроперекисей в липидах микроссм (6,27 ± 1,4 мкмоль-мг липидов-1) имеющих высокую окисляемость в модельных системах ферментативного ПОЛ (0,12 ± 0,022 нмоль ВДА 'Мин-1-мг белка-1,в контроле и 2,02 ± 0,273 нмоль МДА •мин-1'мг белка-1, в опыте; Р= 0,0015), и повышением концентрации ионов Ре2+ в цитозоле (до 210% от исходного уровня). Однако функционирование системы антиперекисной защиты у самцов и самок в этих условиях отличается. Так, у самцов повышение активности супероксиддисмутазы в цитозоле на 82% сопровождается утратой индуцибельности глутатионредуктазы и снижением содержания а-токоферола в микросомах на 41%. У опытных самок не происходит снижения содержания восстановленного глутатиона в печени при острой затравке. Отмечается определенное ограничение скорости реак-

ций, способных к вовлечению в циклические окислительно-восстановительные превращения токсиканта, а именно зна'штельное (на 63%) снижение активности глхжозо-6-фосфатдегидрогеназы и утрата способности к повышению при затравке цитохрома Р-450.

Ультраструктурные перестройки гепатоцитов. На ультраструктурном уровне ткань печени внутриутробно предобработанных паракватом животных характеризуется минимальными отличиями от контрольных особей, но компенсаторно-приспособительные возможности ее в условиях интоксикации гербицидом существенно снижены. Действительно, острая затравка их токсикантом приводит к гораздо более выраженным и обширным, нежели в обычных условиях, некробиотическим изменениям гепатоцитов (лшшдная дистрофия, угнетение белкового синтеза и процессов митохондриального дыхания), а также нарушению их метаболической кооперации (распределение окраски на глутатионредуктазу).

Системные взаимоотношения. За основу при комплексной оценко антитоксической резистентности организма к действию параквата была взята величина ЬБдд, а также весовые характеристики различных органов и всего тела.

В обычных условиях организм самцов был более устойчив к острой затравке гербицидом: величина ЫЗдд значительно превышала таковую у самок (15,2 ±1,6 мг/кг и 10,97 +1,1 мг/кг, соответственно; Р< 0,05). Введение параквата не сопровождалось похуданием животных; самки, напротив, теряли в весе, уменьшалась масса селезенки.

При острой затравке животных, пренатально предобработанных токсикантом, картина проявления токсичности у самок и самцов была прямо противоположной. Так, теперь уже самки имели повышенную антитоксическую резистентность (высокие значения Ш5д, инертность весовых характеристик); самцы же достоверно теряли в весе, уменьшалась масса печени и селезенки.

Большей ранимости организма опытных самцов сопутствует и обеднение функционально-корреляционных связей, утрата их между весовыми и метаболическими параметрами.

Коррекция биоантиоксид&нтом а- токоферолом. В ходе эксперимента была предпринята попытка коррекции приобретенных при внутриутробном контакте с паракватом метаболических перестроек в печени с помощью а-токоферола. Коррекция была достигнута, что проявилось в возврате к обычной для интактных животных метаболической реакции на гербицид по следующим параметрам: (нормализации содержания ги-

дроперекисей в липидах макросом и концентрации ионов Ре2+ в цито-золе печени самок и самцов; утрате индуцибельности супероксиддис-мутазн и восстановление индуцибельности глутатионредуктазы, а также нормализации а-токоферола в печени при нагрузке у самцов; у самок - по реактивации глюкозо-6-фосфат- дегидрогеназы на введение параквата). По ряду показателей (окисляемости микросомных липидов, уровню восстановленного глутатиона) коррегирущий эффект достигнут не был. В спектре мембранных липидов наблюдалось своеобразие вызванное самим а-токоферолом.

Антитоксическая резистентность (по данным Ы>50) самцов к пара-квату при коррекции а-токоферолом повышалась.

Заключение. В норме организм самцов крыс обладает большей, по сравнению с самками, резистентностью к действию параквата. Контакт животных с этим химическим соединением в период эмбрионального развития приводит к тому, что за счет нарушений у самцов в системе "перекисное окисление липвдов - факторы антиперекисной защиты" наблюдается обратная картина по половым различиям в чувствительности к поврездающему действию токсиканта. Внутриутробная коррекция эм-бриотоксического эффекта параквата а-токоферолом оказывает значительный, но не полный эффект.

3.ОТДАЛЕННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ВЛИЯНИЯ НА ЭМБРИОГЕНЕЗ ФЕНОБАРБИТАЛА.

Изменения окислительного метаболизма в печени. При использовании в качестве модельного соединения фенобарбитала установлено, что взрослые животные, имевшие в период внутриутробного развития контакт с данным барбитуратом, уже в исходном состоянии обладали рядом особенностей: сниженной активностью аминопириндеметилазы и повышенной активностью глутатион-Б-трансферазы, сниженной окисля-емостью микросомных липидов в НАДФН-системе на фоне высокого содержания в микросомах а-токоферола (рис. 4). Причем, как и в предыдущих экспериментах, исходные отличия касались лишь группы самцов.

Однако, отдаленные последствия внутриутробного контакта с фенобарбиталом для системы микросомного метаболизма ксенобиотиков не ограничиваются только количественными изменениями ее параметров. На примере метаболизма диазепама было показано, что у внут- " риутробно предобработанных животных совсем не образуется такого метаболита, как оксазепам, причем, острое введение барбитурата не

1 2 3 4 5 6 7

9 Ю 11 12

Рис. 4 Особенности микросомного окисления ксенобиотиков и перекисного окисления липидов в печени у взрослых самцов крыс, имевших в эмбриональный период контакт с фенобарбиталом (данные представлены относительно уровня интактных животных).

I - содержание цитохрома Р-450; 2 - активность аминопи-риндеметилазы; 3 - активность анилингвдроксилазы; 4 - скорость свободного окисления иабрн ; 5 - активность глута-тион з-трансферазы; 6 - содержание восстановленного глута-тиона; 7 - активность глутатионредуктазы; 8 - активность супероксидцисмутазы; 9 - скорость ферментативного ПОЛ; 10 - содержание гидроперекисей; II - содержание малонового диальдегида; 12 - содержание «-токоферола.

• г значения, достоверно отличающиеся от контроля.

изменяет эту картину. Как показали исследования кинетических параметров, в этих условиях цитохром Р-450 обладает наименьшим сродством к субстратам I типа (кт для аминопирина на 28% выше, чем в контроле) (рис. 5).

Характерным результатом исследований в данной группе было и отчетливое стирание половых различий, однако, касалось оно лишь тех метаболических параметров, которые были связаны с микросомной цепью переноса электронов (цитохром Р-450, микросомные моноокси-геназы печени, ферментативное перекисное окисление липидов).

Острое введение фенобарбитала подчеркивает выявленные в исходном состоянии изменения у внутриутробно предобработанных животных.

В обычных условиях введение фенобарбитала самцам крыс сопровождается типичной индукцией микросомных монооксигеназ печени (уровень цитохрома Р-450 возрастает на 128%, активность аминопи-риндеметилазы и анилингидроксилазы на 84% и 55%, соответственно), которая происходит на фоне снижения окисляемости микросомных липидов в ферментативной системе и которой сопутствует повышение уровня а-токоферола (на 234%). У самок изменения затрагивали лишь систему микросомных монооксигеназ печени (рост уровня цитохрома Р-450 на 100%, активности аминопириндеметилазы и анилингидроксилазы на 100% и 110%, соответственно).

При введении фенобарбитала самцам крыс, уже имевшим внутриутробно контакт с барбитуратом, индуцибельность микросомных монооксигеназ была выше (на 20-55%), чем в обычных условиях. Это происходило на фоне достоверного снижения в липидах микросом продуктов перекисного окисления: гидроперекисей (на 41%) и малонового диальдегида (на 25%), а также содержания биоантиоксиданта а-токоферола (на 38%). Антиоксидантный эффект в данной экспериментальной группе сопровождался повышенной активностью супероксиддисму-тазы (57,0 ± 10,4 ед., в исходном состоянии и 101,1 ± 18,34 ед. при нагрузке; Р= 0,0443). Результаты введение фенобарбитала самкам данной группы не отличались от контрольных.

Ультраструктурные перестройки гепатоцитов. Электронно-микроскопическое исследование показало, что структурное обеспечение метаболических процессов в клетках печени опытных жиеотных (цитоплаз-матическая сеть, митохондриальный аппарат, ядерные структуры и т.д.) находится несколько в менее активном состоянии, чем у "Ену-триутробно интактных" сверстников.

(аминопирин,

. Рис. 5 Кинетика н-деметюгирования аминопирина в микросомах печени самцов крыс, подвергнутых действию фенобарбитала,

1 - Контрольная группа;

2 - Острое введение фенобарбитала контрольным

животным;

' 3 - Животные, подвергнутые действию фенобарбитала в период внутриутробного развития; 4 - Острое введение фенобарбитала животным, подвергнутым действию данного барбитурата в эмбриональный период.

2В

Острое введение фенобарбитала опытным животным приводит к более активному включению в функциональную кооперацию пероксисо-мального аппарата, обеспечивающего, по-видимому, долговременную аккумуляцию энергии, необходимую для нужд состояния индукции.

Заключение. Наибольшие изменения метаболизма ксенобиотиков и процессов перекисного окисления липидов в результате перенесенного внутриутробного контакта с фенобарбиталом наблюдались в группе самцов. Острое введение им фенобарбитала выявило большую, чем в обычных условиях, индуцибельнось микросомных ферментов печени. Это объясняется тем, что в этих условиях действие барбитурата происходит на фоне сниженной скорости гидроксилирования субстратов I типа, вообще, и фенобарбитала, в частности. Облегченному процессу индукции способствовали, по-видимому, и обусловленные перекисным окислением липидов перестройки микросомных мембран.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ литературы, а также собственные исследования убедительно свидетельствуют о том, что различные факторы среды, включая химические, воздействуют на развивающийся организм и обусловливают целый ряд изменений в структурно-метаболических процессах, сохраняющихся часто на протяжении всей жизни (Салганик и др., 1979; Хорн, 1988; Семенюк а др., 1991; Osaba, 1986). Это стабильное изменение биологических функций имеет, по-видимому, принципиальные отличия по своему механизму от адаптивных модификаций на этапах раннего онтогенеза, зависящих от присутствия раздражителя и ограниченных во времени. Следовательно, представляется чрезвычайно важным определить с какими биологическими процессами, характеризующими взаимоотношение развивающегося организма с объектами окружающей среды, сопряжены выявленные в нашем исследовании факты.

В аспекте изучаемой проблемы уместно вспомнить об особой форме памяти, наблюдаемой в ранний период постэмбрионального развития и получившей название импринтинга, или "запечатлевания" (Lorenz, 1935). Это явление заключается в установлении связи в определенный период жизни с объектом внешней среда и сохранение ее на протяжении последующей жизни (в проведенных исследованиях это запе-чатлевание касается действия различных по структуре и токсикокине-тическим характеристикам химических соединений) (Аршавский, 1982).

Чужеродные молекулы химических зещестЕ, действующие в крити-

ческие периода развития, могут приводить к нарушению гормон-ре-цепторных взаимоотношений, искажая таким образом гормональное им-принтирование (Csaba, 1986). Например, однократное введение в неонатальный период бензСсйпирена приводит к существенному снижению числа глюкокортикоидных рецепторов в тимусе взрослых особей. В наших экспериментах, отдаленным стабильным последствием внутриутробного действия бенз[а]пирена на развивающийся организм был высокий уровень тироксина в сыворотке крови взрослых особей обоих полов. Этому предшествовало обусловленное ПАУ снижение в циркуля-торном русле беременных матерей содержания данного тиреоидного гормона, на фоне которого происходила закладка органов эмбрионов крыс. При этом эффект гипотироксинемии, согласно теории гормонального импринтинга, заключался в нарушении нормального процесса адаптации рецепторных структур и, как следствие, в стабильном долгосрочном снижении гормон-связывагацей способности клеток-мишеней. Для нормального обеспечения процессов жизнедеятельности (функции энэргообмена и др.) в условиях стабильно сниженного сродства клеточных рецепторов к тироксину высокие концентрации данного гормона в циркуляторном русле взрослого потомства являются, по-видимому, характерной компенсаторно-приспособительной реакцией, сохраняющейся на протяжении последующей жизни.

В механизме развития сложных перестоек в системе половых гормонов взрослых животных, перенесших внутриутробно контакт с бенз-[аЗпиреном, также определенную роль играл сниженный уровень эс-традиола в эмбриогенезе.

Чаще всего изменения гормон-рецепторных взаимоотношений происходят в тех случаях, когда в спектр токсических эффектов включаются нарушения процессов синтеза и/или утилизации действующих в данный момент гормонов. Исходя из результатов собственных исследований и литературных данных на развитие эндокринной системы опытных животных оказывали воздействие все анализируемые нами химические соединения (бензСсйпирен, паракват и фенобарбитал) (Rose е.а., 1974; Fishman е.а.,1982; Franceshl е.а., 1984; Lanoux е.а., 1985; Hallberg, Rydstrom, 1987). В настоящее время имеются исследования направленные на изучение влияния гормонально-активных ксенобиотиков на процессы развертывания программы эмбриогенеза (Illsley, Lamartlniere, 1979, Lamartlnlere, Lucler, 1979; Luoma e.a., 1984).

Действие ряда лекарственных препаратов и токсикантов также опосредуется специфическими клеточными рецепторами (Receptor mediated 1986); соответственно, пренатальное введение этих соединений приводит к долгосрочным изменениям в рецепторном аппарате клеток-мишеней (Haywood е.а., 1970).

Имеются сообщения о том, что уровень активности детоксицирую-щих ферментов печени изменяется в результате перинатального воздействия химических индукторов, и этот эффект может сохраняться после наступления половой зрелости (Салганик и др., 1979; Herd, Green, 1980; Shapiro е.а, 1986).

Приведенные выше факты убеждают нас в том, что действие ксенобиотиков в критические периоды развития (как и в случав эндогенных регуляторных молекул) также может "запечатлеваться" как на уровне эффекторных тканей, так и в системе детоксицирувдих ферментов печени, включая ультраструктурные перестройки цитоплазма-тической сети гепатоцитов (Hansell, Ecoblchon, 19Т5).

Результаты проведенных экспериментальных исследований дополняют это положение, свидетельствуя о выраженной зависимости при "запечатлевании" как антитоксической резистентности организма в целом, так и выраженности посттоксическйх изменений в эффекторных тканях от сформировавшегося под действием ксенобиотика уровня де-токсикационных процессов в печени. Так, в печени пренатально затравленных бензСсйпиреном самцов сниженной активности микросомных монооксигеназ сопутствует повышенная устойчивость взрослых особей к повреждающему действию данного соединения, ввиду слабой его биотрансформации в токсичные метаболиты. В случае эмбрионального контакта с паракватом повышение постнатальной устойчивости к нему самок обеспечивается ограничением скорости реакций, способных к вовлечению токсиканта в циклические редокс-превращения.

При анализе механизмов изучаемого явления уместно вспомнить, что в основе всех анализируемых выше процессов - индукции адаптивных ферментов (по данным наших исследований), синтезе антител, формировании рецепторного аппарата клеток и т.д. лежит экспрессия соответствующих генов и стимуляция ДНК-зависимого синтеза молекул РНК. Это позволило обозначить ферментативный импринтинг, как общий механизм наблюдаемого явления долгосрочной адаптации к доминирующим условиям среды (Салганик и др., 1979). Пожизненный же характер "запечатлеваемой" в раннем онтогенезе реакции, по-видимому, опре-

деляется тем, что в период клеточной дифференцировки под действием тех или иных факторов внешней среды происходит избирательная активация генов. Именно в этот период индивидуального развития гены, как никогда в последующем, регулируются сигналами из цитоплазмы. Как показали исследования Gurdon и Woodland (1970), одна из важных функций митоза в дифференцировке может быть связана с тем, что во время митоза хромосомы не отгорожены мембраной ядра, и поэтому вещества цитоплазмы могут действовать на генетический материал.

Действие гормонов и других регуляторных молекул на дифференци-ровку большинства тканей необратимо. После завершения этого процесса фенотип клеток принципиально уже не изменяется (Розен, 1980). Отсюда следует, что вмешательство в сложную систему регуляции цитодифференцировки различных факторов изменяющейся окружающей среды (химических токсикантов) неизбежно своим следствием будет иметь комплекс стабильных структурно-метаболических изменений в тех или иных органах и тканях.

Таким образом, в процессе эмбрионального развития всегда взаимодействуют два фактора - наследственный, обусловленный генотипом данного животного, и, в некотором смысле, эпигеномный, в тех случаях, когда дифференцировка происходит после воздействия на клетки (или клеточные популяции) какого-то стимула извне. В наших экспериментах, трансплацентарное поступление в развивающийся организм химических соединений, а также вмешательство их в процесс дифференцировки гепатоцитов (в период органогенеза) может обусловливать стабильное изменение количества и/или функциональной активности вновь синтезированных микросомных ферментов метаболизма ксенобиотиков.

Эпигеномным стимулом, вмешивающимся в процессы цитодифференцировки и обеспечивающим пожизненные структурно-метаболические перестройки в печени развивающегося плода может быть и комплекс регуляторных молекул, несущих от матери специфическую информацию через плаценту.

ЕслиА^саться ранее проведенных опытов, то такое "запечатлева-ние" (.фи креаторная связь, по Б.И.Косицкому и Г.Г.Ревич [19751) показано в отношении развития органов дыхательной, выделительной, кроветворной и других систем, когда их повреждение или вызывание повышенного запроса на их функцию приводили к ускоренной дифф.-ренцировкп соименных систем плода (Вязов и др., 1975; Сявчешсоь,

Лобынцев, 1980).

Как показывают результаты наших исследований, введение беременным самкам бенз[аЗпирена и фенобарбитала приводит к существенным изменениям в концентрации циркулирующих в кровеносном русле гормонов (тиреоидных, половых стероидов и др.). Трансплацентарное действие этих материнских гормонов в измененной концентрации на процессы цитодифференцировки в печени плода и становление обменных процессов значительно углубляет существующие представления о механизме реализации креаторной связи в эмбриогенезе. В соответ-' ствии с этим же механизмом могут формироваться и особенности половой дифференцировки функций печени (Розен и др., 1991), и, как следствие, проявление полового диморфизма в пожизненной реализации антитоксической резистентности организма.

Завершая анализ, невозможно не остановиться на соотносимости изучаемых нами процессов с явлением химически индуцированного тератогенеза. Как уже указывалось выше, сфера исследований в современной тератологии простирается за рамки грубых структурных повреждений и включает в себя также отдаленные нарушения поведенческих реакций, метаболических процессов и общего развития организма (Principles Sot the testing..., 1967); Hays, 1981). В частности, на примере 5-бромдезоксиуридина было показано, что этот аналог тимидина вызывает стабильные модификации биохимического фенотипа тканей и органов, не только без каких-либо морфологических повреждений, но также не нарушая пролиферативной активности и жизнеспособности клеток (Rutter, 1975). С этих позиций, выявленные нами структурно-метаболические особенности в организме потомства экспериментальных животных, подвергнутых в период органогенеза действию химических соединений, представляются ни чем иным, как скрытыми от глаза тератогенными эффектами, а полученные в работе данные дополняют и углубляют существующие представления о механизмах дефектного развития (становления) метаболических процессов на ранних этапах индивидуального развития.

ВЫВОДЫ

I. Период органогенеза (I0-II-I2 сутки беременности) в эмбриональном развитии является критическим в плане возникновения отдаленных последствий интоксикаций; воздействие в эти сроки химических веществ приводит к долгосрочным структурно-метабо-

лическим перестройкам в организме. Нагрузочные тесты с соответствующим токсикантом позволяют выявить скрытые структурно-функциональные изменения и резервные возможности исследуемых метаболических систем.

2. В результате внутриутробно перенесенного контакта с токсикантами (бенз[а]пирен, паракват, фенобарбитал) происходят стойкие изменения, которые выявляются во взрослом организме на различных уровнях: организиенпоы (изменение чувствительности организма к аналогичному токсиканту - П>50, изменение весовых характеристик); уровне регудяторно-иетаболических (гомеостати-ческих) систем (гормональной, иммунной и др.); уровне морфо-функциональных комплексов и межсистемных взаимодействий (установление новых структур функционально-корреляционных связей в организме); клаточно-тканевои (посттоксические изменения на тканевом, клеточном и ультраструктурном уровнях); биохимической (изменения метаболической активности в системе микросомных монооксигеназ печени, перекисного окисления липидов и факторов антиперекасной защиты); {изико-хиыическом (изменения жирно-кислотного состава биомембран, кинетических характеристик субстрат-ферментных взаимодействий и др.).

0. Гепатоциты взрослых животных, внутриутробно перенесших контакт с токсикантами, имеют целый ряд морфо-функциональных особенностей уже в исходном (вне острой затравки) состоянии (ги-пертироксинемия у животных обоих полов при действии бензСа1пи-рена; снижение активности в гепатоцитах самцов микросомного окисления на фоне уменьшения внутриклеточных структур энергообеспечения и белок-синтезирующего аппарата при действии фе-барбитала; и выраженный дисбаланс в системе "ПОЛ - факторы антиперекисной защиты"с активацией лизосомного аппарата в клетках печени при действии параквата).

4. Существуют выраженные половые различия в реализации токсического эффекта (перекисное окисление липидов, глутатионовая система защиты, микросомные монооксигеназы печени) у животных, внутриутробно затравленных химическими соединениями.

5. В результате внутриутробного контакта с токсикантом происходит либо углубление половых различий мевду уровнями метаболических реакций (при действии параквата), а в случае бенз[а)пирена и фенобарбитала - стирание этих различий. При действии бензЕа]-

шрена исходно более чувствительные к нему самцы приобретают устойчивость, у самок - реакция прямо противоположна; напротив, пренатальное введение параквата повышает устойчивость к нему самок и снижает устойчивость самцов.

6. Реализация токсического эффекта, а также структурно-метаболические особенности клеток печени экспериментальных животных, перенесших внутриутробно контакт с токсикантами, зависят от особенностей биотрансформации действующего вещества:

- снижение активности микросомных монооксигеназ печени у пре-натально затравленных бенз[а]пиреном самцов приводит к повышению их устойчивости к повторному действию токсиканта вследствие снижения скорости его биотрансформации в эпокси-бенз[а]пирен; появление у самок эффекта ПАУ-индукции способствует их интоксикации;

- в случае параквата - повышение постнатальной устойчивости самок происходит вследствие ограничения скорости реакций, способных к вовлечению в циклические редокс-превращения токсиканта. Чувствительность самцов к повторному действию параквата сопряжена с изменением равновесия в системе "пе-рекисное окисление липидов - факторы антиперекисной защиты";

- повышенный уровень барбитуратной индукции микросомных монооксигеназ печени у самцов, имевших в период эмбриогенеза контакт с фенобарбиталом, обусловлен сниженной скоростью метаболизма самого индуктора (как субстрата I типа).

7. Полученные данные свидетельствуют о важной роли тиреоидных гормонов и половых стероидов при действии бензЕаЗпирена, об ингибировании межклеточных связей и нарушении метаболической кооперации гепатоцитов при интоксикации паракватом и изменении кинетических характеристик и окисляемости липидов моноок-сигеназного комплекса при индукции фенобарбиталом.

8. Доказана возможность патогенетической коррекции отдаленных последствий внутриутробного действия токсиканта (создание фона обеспеченности организма биоантиоксидантом а-токоферолом на всем протяжении внутриутробного контакта с паракватом), однако необходимо учитывать специфические структурно-метаболические последствия такого рода вмешательств в эмбриогенез/

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Результаты проведенных исследований используются в учебных курсах по биологии индивидуального развития Иркутского государственного университета, в курсах по патофизиологии повревдения клетки и основам тератогенеза Новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института, в курсе по патофизиологии токсических воздействий Новосибирского государственного педагогического университета.

Предложенный комплекс биохимических методов по оценке перекис-ного окисления липидов используется в работе диагностического отделения женской консультации Новосибирской детской специализированной больницы JS 5. Полученные при экспериментальном исследовании данные по моделированию антитоксической резистентности в постнатальном онтогенезе внедрены в работу Института лимфологии СО РАМН, Новосибирского филиала НПО "Гигиена и профпатология" ГК СЭН. Подготовлены методические рекомендации по структурно-функциональной оценке процессов адаптации при воздействии химических факторов окружающей среды. Изданы две монографии:

1. Монография. - Беременность и токсиканты. С.И.Колесников, В.В.Иванов, А.В.Семенюк и др. - Новосибирск, 1986. - 158 с.

2. Монография. - Печень и ее регионарные лимфатические узлы при воздействии 3,4-бензпиреном. С.И.Колесников, С.В.Мичурина, А.В.Семенюк, Г.М.Вакулин - Новосибирск, 1995. - 218 с.

Получены авторские свидетельства на изобретения:

- Изобретение.- Способ моделирования устойчивости организма к токсическому действию бенз[а]пирена. A.c. 1587564 СССР, МКИ4 G 09 В 23/28.

- Изобретение. - Среда для окрашивания глутатион-редуктазы на срезах тканей. A.c. I72I468 СССР, МКИ4 G 01 N 1/28.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ I. Колесников С.И., Файбушевич A.A., Беляев Л.Л., Семенюк A.B. Перспективно ли исследование метаболизма чужеродных соединений в структурно-функциональной системе "мать-внезародашевые органы--плод" // Труды Крымского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института, т.101 / Актуальные проблемы развития человека и млекопитающих. - Симферополь, 1983.- С.49.

2. Петерсон В.Д., Колесникова Л.И., Иванова И.В., Семенюк А.В. и др. Процессы перекисного окисления липидов и факторы антипере-кисной защиты у женщин в динамике беременности с неосложнешшм и осложненным течением //Бюл.Сиб.отд.АМН СССР.- 1984.- J55.- С.25-27.

3. Faibushevich A.A., Beljaev L.L., Semenyuk A.V., Kolesnlkov S.I. Morphofunctlonal characteristics of transport and detoxica-tion of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in "extraembryonic organs - fetus" system // Abstracts of XIV Annual Meeting of the European Environmental Mutagen Society.- Moskow, 1984.- P.153.

4. Семенюк А.В., Колесникова Л.И. О фазовом развтитии процессов перекисного окисления липидов в организме // Актуальные вопросы патофизиологии / Тез. докл. области, конф.- Новосибирск, 1985.-С.7-9.

5. Колесников С.И., Колесникова Л.И., Семенюк А.В и др. Оптимизация дозирования лекарственных средств при беременности // Пути снижения материнской и перинатальной заболеваемости и смертности при поздних токсикозах беременных / Тез. докл. пленуму правл. Всесоюзн. научн. общества акушеров-гинекологов.- Москва, 1985.-

С.80-81.

6. Колесникова Л.И., Семенюк А.В., Куликов В.Ю. Повышение уровня ферментативной антиперекисной защиты печени крыс под действием фенобарбитала // Еиоантиоксидант / Тез. докл. II Всесоюзн. конф., т.1.- Черноголовка, 1986.- С.55-56.

7. Semenyuk A.V., Ivanov V.V., Kolesnikova 1.1/ et al. The liver microsomal monooxygenases and lipid peroxidation. Prenatal PAH injection // Abstracts of the 6th Symposium of Developmental pharmacology.- Jena, DDR, 1986.- P.58.

8. Kolesnikova I.I., Koroleva G.A., Semenyuk A.V., Skosireva G.A. Drug-metabolizing function of liver in prematurity // Abstracts of the 6th Symposium of Developmental pharmacology.- Jena, DDR, 1986.- P.39.

9. Колесников С.И., Иванов В.В., Семенюк А.В. и др. Беременность и токсиканты.- Новосибирск, 1986,- 159 с.

10. Семенюк А.В., Свиридов А.В., Колесникова Л.И. и др. Изучение отдаленных последствий действия низкомолокулярннх токсикантов на эмбриогенез // Адаптация человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика / Тез. докл. IV Всесоюзн. конф., T.I.- Новосибирск, 1986.- С.63.

11. Колесников С.И., Семенюк A.B., Беляев Л.Л. и др. Возможные механизмы "запечатлевания" действия иммунных факторов и ксенобиотиков в эмбриональном периоде // Тез. докл. X Всесоюзн. съезду анатомов, гистологов и эмбриологов.- Винница, 1986.- С.175.

12. Семенюк A.B., Свиридов A.B., Колесникова Л.И. и др. Изменение активности ферментов метаболизма ксенобиотиковв печени половозрелых крыс в результате воздействия бензСсйпирена в период эмбриогенеза // Цитохром Р-450 и охрана окружающей среды.- Новосибирск, 1987.- С.163.

13. Семенюк A.B., Свиридов A.B., Колесников С.И. и др. Возможное влияние гормональной обусловленности шла на микросомальное окисление в печени у крыс, внутриутробно подвергнутых действию низкомолекулярных токсикантов // Эндокринная система организма и вредные факторы внешней среды / Тез. докл. III Всесоюзн. конф.-Новосибирск, 1987.- С.202.

14. Иванов В.В., Колесников С.И., Семенюк A.B. и др. Состояние надпочечников и лимфоидных органов потомства крыс при влиянии химических веществ на мать во время беременности // Эндокринная сис-система организма и вредные факторы внешней среды / Тез. докл. III Всесоюзн. конф.- Новосибирск, 1987.- С.89.

15. Колесникова Л.И., Скосырева Г.А., Иванова И.В., Семенюк A.B., Петерсон В.Д. Показатели перекисного окисления липидов как критерии выделения групп риска осложненного течения беременности // Тез. докл. VI съезду акушеров-гинекологов РСФСР.- Москва, 1987. - С.233-234.

16. Semenyuk A.V., Svirldov A.V., Kolesnikov S.I. Long term alteration of hepatic microsomal monooxygenases activity in the rats prenatally treated with a different xenobiotics // Abstracts of the 18th PEBS meeting.- Ljublana, 1987.- P.85.

17. Свиридов A.B., Семенюк A.B. Динамика перекисного окисления липидов у крыс в антенатальном периоде // Механизмы повреждения и регуляции восстановительных процессов.- Новосибирск, 1988.- С.15.

18. Иванов В.В., Склянова H.A., Семенюк A.B. и др. Характеристика лимфоидной системы у крыс, пренатально подвергнутых действию бензЕойпирена // Проблемы реактивности и адаптации клеток тканей и органов / Тез. докл. IV конф. морфологов Средней Азии и Казахстана.- Караганда, 1988.- С.78.

19. Свиридов A.B., Семенюк A.B., Трунов А.Н. Возрастная динами-

ка изменения процессов перекисного окисления липидов // Актуальные проблемы педиатрии в Сибири и на Дальнем Востоке / Тез. докл. регион. научн. конф.- Хабаровск, 1988.- С.128-129.

20. Бородин Ю.И., Склянова H.A., Иванов В.В., Склянов Ю.И., Семенюк A.B. Влияние низкомолекулярных токсикантов на органы системы иммунитета матери и потомства // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии.- 1989.- М4.- С.41-52.

21. Бородач С.А., Семенюк A.B. Влияние антенатально перенесенной гипоксии на динамику процессов перекисного окисления липидов и содержание сульфгидрильных групп в головном мозге белых крыс // Структурное обеспечение и стимуляция компенсаторно-восстановительных реакций / Сб. научн. трудов Омского мед. института.- Омск, 1989.- С.37-38.

22. Свиридов A.B., Семенюк A.B. Становление системы перекисного окисления липидов и ферментов антиперекисной защиты в пренатальном онтогенезе у крыс // Актуальные проблемы мед. эмбриологии / Тез. докл. регион, конф.- Иркутск, 1988. С.37-38.

23. Семенюк A.B., Луценко М.Т., Лабецкая Н.В. и др. Особенности липидного состава микросом печени крыс, подвергнутых в эмбриональный период действию параквата // Актуальные проблемы мед. эмбриологии / Тез. докл. регион, конф.- Иркутск, 1988. С.67-68.

24. Семенюк A.B., Свиридов A.B., Салганик Р.И. Патофизиологические аспекты импринтинга токсических воздействий // Нарушение механизмов регуляции и их коррекция / Тез. докл. IV Всесоюзн. съезду патофизиологов, т.З.- Кишинев, 1989.- С.1378.

25. Изранов В.А., Семенюк A.B., Склянова H.A. Нейромедиаторное обеспечение органов иммунной системы взрослых животных, пренаталь-но затравленных бензпиренсм // Проблемы гистофизиологии соединительной ткани / Тез. докл. Всесоюзн. конф.- Новосибирск, 1989.-С.99.

26. Свиридов A.B., Семенюк A.B., Просенко А.Е. Особенности ан-тиоксидантного эффекта препаратов "фантокс" и а-токоферола у новорожденных животных // Биоантиоксидант /Тез. докл. III Всесоюзн. конф., т.2.- Москва, 1989.- С.86-87.

27. Изобретение.- Способ моделирования устойчивости организма к токсическому действию бенз[а!пирена. A.c. 1587564 СССР, МКИ4

G 09 В 23/28.

28. Глазырин А.Л., Семенюк A.B., Колесников С.И., Свиридов A.B.

Комплексное маркерно-гистохимическое и биохимическое исследование реакции глутатион-редуктазы в печени крыс // Известия СО АН СССР.-1990.- т.- С.12-15.

29. Семенюк A.B., Глазырин А.Л., Колесников С.И., Салганик Р.И. Особенности распределения и активность глутатионредуктазы в пэчони взрослых крыс, подвегнутых действию параквата в эмбриональный период // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1991.- Хв. С.262-264.

30. Семенюк A.B., Лыткин В.В. Отдаленные последствия действия бензпирена на эмбриогенез // Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды / Тез. докл. IV Всесоюзн. конф.- Ленинград, 1991.- С.209.

31. Семенюк A.B., Иванов В.В., Колесников С.И., Салганик P.M. Стабильные метаболические изменения во взрослом организме при действии химических соединений в период эмбрионального развития // Механизмы патологических реакций / Материалы объед. пленума Сибирского общества патофизиологов и проблемной комиссии "Охрана материнства и детства" СО АМН СССР.- Иркутск, 1991.- С.66-67.

32. Семенюк A.B., Иванов В.В., Колесников С.И., Салганик Р.И. Изменение в метаболических процессах взрослого организма при действии химических соединений в период эмбрионального развития // Бюл. СО АМН СССР.- 1991.- JH.- С.40-43.

33. Изобретение. - Среда для окрашивания глутатион-редуктазы на срезах тканей. A.c. I72I468 СССР, МКИ4 G 01 N 1/28.

34. Свиридов A.B., Колесникова Л.И., Семенюк A.B. Перекисное окисление липидов в раннем онтогенезе // Бюл. СО АМН СССР.- 1991.-Ш.- С.44-47.

35. Мичурина C.B., Бакулин Г.М., Семенюк A.B. Влияние импликации 3,4-бензпиреном на морфологические параметры печени крыс в онтогенезе //Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии / Матер, научн. конф.- Новосибирск, 1992.- C.II0-II2.

36. Гладышев Ю.В., Колесников С.И., Семенюк A.B., Свиридов A.B. Морфологические свидетельства возможной роли цитохрома Р-450 в развитии аутоиммунного процесса в печени // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1991.- Т.62, JHI.- С.546-549.

37. Семенюк A.B., Иванов В.В., Колесников с.И., Салганик Р.И. Эмбриональный импринтинг токсических воздействий // Особенности репродуктивной функции у женщин с генитальной инфекцией / Научн. труды Новосибирского оТКЗ мед. института, т.141.- Новосибирск,

1991С.5-8.

38. Бородин Ю.М., Изранов В.А., Склянова H.A., Семенюк A.B. Нейромедиаторное обеспечение органов иммунной системы в условиях интоксикации бензпиреном // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1992.-Ш.- С. 166-168.

39. Мичурина C.B., Вакулин Г.М., Семенюк A.B., Колесников С.И. Влияние химических загрязнителей среды (полициклических ароматических углеводородов - ПАУ) на внутриклеточный энергетический обмен в печени у потомства // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю среду организма / Матер, мекд. симп.- Чолпон-Ата, 1993.- С.148-150.

40. Бородин Ю.И., Мичурина C.B., Вакулин Г.М., Колесников С.И., Семенюк A.B. Изменение гепатоцитов у взрослых крыс-самцов, подвергнутых действию 3,4- бензпирена в различные периоды онтогенеза // Морфология.- 1993.- Т.105, J07-8.- С.97-104.

41. Гладышев Ю.В., Колесников С.И., Семенюк A.B., Иванов В.В. Влияние активации перекисного окисления липидов на структуру вне-зародышевых органов и печени крыс в различные периоды онтогенеза // Цитология.- 1994.- Т.36, Ж.- С.98-102.

42. Колесников С.И., Мичурина C.B., Семенюк A.B., Вакулин Г.М. Печень и ее регионарные лимфатические узлы при воздействии 3,4- бензпиреном.- Новосибирск, 1995.- 218 с.

Зак.3. Tk^JPÛФормат 60x84Vl6. Печ. г,2С 1;умр.г-а офшшя №0

Птпип) un . попять

Типофафия СО РАМН, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 9t 199Г.