Автореферат и диссертация по медицине (14.00.26) на тему:Совершенствование ранней диагностики туберкулеза и особенности его течения у больных ВИЧ-инфекцией

На правах рукописи □□3453232

Хаертынова Ильсияр Мансуровна

Совершенствование ранней диагностики туберкулеза и особенности его течения у больных ВИЧ-инфекцией

14.00.26 - фтизиатрия 14.00.10 - инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва -2008

003453232

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Казанская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты - доктор медицинских наук, профессор

--------------------------------------------------------Валиев Равиль Шамилович

доктор медицинских наук, профессор Цибулькин Анатолий Павлович

Официальные оппоненты - доктор медицинских наук, профессор

Корнилова Зульфира Хусаиновна

- доктор медицинских наук, профессор Кравченко Алексей Викторович

- доктор медицинских наук, профессор Фролова Ольга Петровна

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится «2?» 200ф г. в часов на

заседании диссертационного совета Д 001.052.01 при ГУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза РАМН» (107564, Москва, Яузская аллея, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ ЦНИИТ РАМН.

Автореферат разослан « ^ » И.о^<? 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, Заслуженный деятель наук РФ, доктор медицинских наук,

профессор !. __Фирсова Вера Аркадьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время проблема туберкулеза в сочетании с ВИЧ-инфекцией является одной из самых актуальных (UNAEDS, 2003). Во всем мире рост числа ВИЧ-инфицированных пациентов способствовал повышению заболеваемости туберкулезом. В глобальном масштабе туберкулез - одна из главных причин смертности у ВИЧ-инфицированных лиц (Покровский В.В., Ермак Т.Н., Беляева В.В. и др., 2004; Ерохин В.В., Корнилова З.Х., Алексеева Л.П., 2005; Литвинова Н.Г., Кравченко A.B., Шахгильдян В.И. и др., 2007; Stiblo К., 1990; Corbett E.L., Watt C.J., Walker N., 2003). По оценкам ВОЗ, в начале XXI века в мире ежегодно развивается около 9 млн. новых случаев туберкулеза и почти 10% из них являются ВИЧ-позитивными.

ВИЧ-индуцированная иммуносупрессия значительно повышает риск заболевания туберкулезом вследствие как реактивации латентной туберкулезной инфекции, так и экзогенной суперинфекции (Фролова О.П., 2001; Кравченко A.B., 2005; Нанн П., 2005; Murtay C.L., Mills J., 1990; Badri M., 2001; Manas E., 2004). Показано, что риск развития туберкулеза значительно повышен уже в первый год после се-роконверсии к ВИЧ (Sonnenberg Р., 2005). В свою очередь, туберкулез неблагоприятно влияет на течение самой ВИЧ-инфекции (Щелка-нова A.B., 2003; Нанн П., 2005; Ленок Г.В., Бондарчук О.В., Былкова O.K., Рахманова А.Г., 2007; Пантелеева О.В., Нечаев В.В., Иванов А.К. и др., 2007; Whalen С., 2000). Доказано, что in vitro под действием антигенов микобактерий туберкулеза происходит увеличение репликации вируса ВИЧ (Goletti D., Weissman D., Jackson R.W. et al., 1996; Toossi Z., Mayanja-Kizza H., Baseke J. et al., 2005).

По данным Европейского респираторного бюро ВОЗ Россия в настоящее время относится к числу стран Европы, в которых проблема туберкулеза и ВИЧ-инфекции стоит наиболее остро (Онищенко Г.Г., 2003; Бабаева И.Ю., Демихова О.В., Шевченко Н.П. и др., 2007). Так, в 2006 году по сравнению с 2005 годом в РФ отмечено увеличение на 33,3% числа зарегистрированных случаев туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией. За 2005-2006 гг. темпы роста впервые выявленной сочетанной патологии составили более 30%. Среди лиц, имеющих поздние стадии ВИЧ-инфекции, туберкулез установлен более чем в 50-60% случаев (Алексеева А.П., 2008). Среди лиц, умерших от ВИЧ-инфекции, основной причиной смерти был туберкулез почти в

60% случаев. Рост абсолютного числа лиц, умерших от сочетанной инфекции в 2006 году, по сравнению с 2005 годом, составил 41% (Какорина Е.П., Фролова О.П., Михайлова JI.A., 2007).

Сочетание ВИЧ-инфекции с туберкулезом, особенно при наличии лекарственной устойчивости, характеризуется многообразием клинических проявлений заболевания и тенденцией к генерализации специфического процесса (Покровский В.В., Фролова О.П., Кравчен-

-----------ко A.B. и др., 2002; Андреева O.A., Марьяндышев O.A., Низовцева

Н.И., Игумнова Е.Г., 2007; Корнилова З.Х., Зебницкая И.С., Алексеева Л.П., 2007; Ленок Г.В., Бондарчук О.В., Былкова O.K., Рахманова А.Г., 2007; Пантелеев А.М., Супрун Т.Ю., Иванов А.К., Максимов Г.В., 2007; Пантелеева О.В., Нечаев В.В., Иванов А.К. и др., 2007; Styblo К., 1990). Большинство авторов отмечают сложность диагностики туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией, особенно в стадии вторичных заболеваний (Вовк А.Д., Антонян С.Н., Федоченко C.B. и др., 2003; Рахманова А.Г., Виноградова E.H., Воронин Е.Е., Яковлев A.A., 2004; Champ М.Е., Hickey М.М, Gazzara М.М., 1993). Доказано, что в формировании различных вариантов течения и исходов туберкулезной инфекции важная роль принадлежит состоянию иммунной системы пациента. В связи с этим актуальность изучения состояния специфического гуморального иммунного ответа на туберкулезную инфекцию не вызывает сомнения. Изучение иммунопатогенетических механизмов туберкулезной инфекции может явиться основой для создания специфических иммунохимических тестов серологической диагностики туберкулеза как при моноинфекции, так и при сочетан-ном течении с ВИЧ-инфекцией (Кравченко A.B., Юрин О.Г., Алексеева Л.П. и др., 1996; Адамбеков Д.А., Курманов P.A., Баенский A.B., Литвинов В.И., 1997; Стаханов В.А., Васильев H.A., Леви Д.Т., Рухамина М.Л., 2001; Аутеншлюс А.И., Шкунов А.Н., 2004).

Таким образом, рост сочетанной патологии вызывает необходимость изучения особенностей течения туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и определения четких критериев специфической серологической диагностики туберкулеза.

Выше изложенное послужило основанием для выполнения настоящей работы.

Цель исследования: изучить клинико-иммунологические особенности течения туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и разработать новые подходы повышения специфичности серологических методов диагностики активности туберкулеза.

Задачи исследования:

1. Выявить эпидемиологические особенности сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ в Республике Татарстан.

2. Изучить клинико-иммунологические особенности туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией.

3. Провести сравнительное исследование определения противотуберкулезных антител в сыворотке крови больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза методом иммуноферментного анализа.

4. Определить диагностическую значимость противотуберкулезных антител в составе циркулирующих иммунных комплексов у больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза методом иммуноферментного анализа.

5. Изучить формирование антител класса IgG к различным структурным компонентам микобактерий туберкулеза в сыворотке крови и в составе циркулирующих иммунных комплексов методом иммуноблот анализа и определить группы антигенных компонентов для диагностики туберкулеза у больных сочетанной инфекцией ВИЧЯБ.

6. Оценить диагностическую и прогностическую значимость определения антител класса IgG к структурным компонентам микобактерий туберкулеза методом иммуноблот анализа у больных ВИЧ-инфекцией.

Научная новизна исследования. Выявлены эпидемиологические особенности сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ в Республике Татарстан.

Впервые разработана и использована оригинальная модификация метода иммуноферментного анализа для количественной и качественной оценки противотуберкулезных антител в составе специфических циркулирующих иммунных комплексов.

Впервые сформирован диагностический иммуноблот стрип, содержащий полный спектр антигенов М. tuberculosis.

Впервые определена группа антигенных компонентов М. tuberculosis выделенных от больных туберкулезом, дающих максимальную специфичность при диагностике туберкулеза.

Выявлены серологические маркеры - предикторы активности туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией.

Практическая значимость работы. Оценена эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в сочетании с ВИЧ-инфекцией в Рес-

публике Татарстан, которая позволила рекомендовать практическому здравоохранению системное мониторирование больных ВИЧ-инфекцией на туберкулез.

Модифицирован и рекомендован к практическому применению метод иммуноферментного анализа для выявления противотуберкулезных антител, циркулирующих в свободном и связанном виде в составе циркулирующих иммунных комплексов крови при диагностике активности туберкулеза, в том числе у больных ВИЧ-инфекцией.

Рекомендован для практического здравоохранения новый подход к диагностике активности туберкулеза на основе реакции имму-ноблот анализа.

Положения, выносимые на защиту:

1. Сочетание ВИЧ инфекции и туберкулеза приводит к остро прогрессирующему течению заболевания с быстрым летальным исходом на поздних стадиях ВИЧ-инфекции.

2. Клинические формы и тяжесть течения туберкулеза зависят от первичности возникновения туберкулеза и ВИЧ-инфекции и наиболее выражены при ВИЧ-инфекции в стадии вторичных заболеваний.

3. Увеличение степени активации Т-лимфоцитов (HLA-DR+) и метаболической активности нейтрофилов (спонт-НСТ тест) являются признаками поликлональной активации, обнаруживаемые у больных ВИЧ-инфекцией и в большей степени проявляющиеся при сочетан-ном течении ВИЧ/ТБ.

4. Метод иммуноферментного анализа обладает низкой чувствительностью при малых формах туберкулеза и имеет диагностическое значение только при распространенных формах туберкулеза или при сочетании его с ВИЧ-инфекцией.

5. У больных туберкулезом противотуберкулезные антитела, определяемые методом иммуноферментного анализа, принимают участие в образовании циркулирующих иммунных комплексов только при наличии деструкции ткани, а у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и на более ранних стадиях заболевания.

6. Антитела класса IgG к структурным компонентам М. tuberculosis, определяемые на основе метода иммуноблот анализа, с использованием фракции антигена 11-20 кЕ>а, являются критерием активности туберкулезного процесса у больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и имеют прогностическое значение при ВИЧ-инфекции.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований внедрены в практическую деятельность Республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями МЗ РТ, Республиканского клинического противотуберкулезного диспансера МЗ РТ, а также используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней и кафедры фтизиатрии и пульмонологии ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия ФА 3 и CP».

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: VI Российско-Итальянской конференции: Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика (С-Петербург, 2000); III съезде биохимиков (С-Петербург, 2002);

VII съезде Итало-Российского общества по инфекционным болезням: Проблема инфекции в клинической медицине (С-Петербург, 2002); VI Российском съезде врачей-инфекционистов (С-Петербург, 2003); научно-практической конференции молодых ученых КГМА (Казань, 2004); VII Российском съезде инфекционистов (Н. Новгород, 2006);

VIII Российском съезде фтизиатров (Москва, 2007), XVII Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Казань, 2007), IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007), научно-практической конференции с международным участием «Проблемы туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией» (Москва, 2007), научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии» (Казань, 2007); совместном заседании кафедры фтизиатрии и пульмонологии, кафедры инфекционных болезней, кафедры клинической лабораторной диагностики ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия ФА 3 и CP» и кафедры инфекционных болезней, кафедры детских инфекций, кафедры патофизиологии, кафедры фтизиопуль-монологии ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет ФА 3 и CP» (Казань, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 44 научные работы, в том числе 1 учебное пособие.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 216 страницах машинописного текста, состоит из введения, литературного обзора, 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 175 отечественных и 109 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 21 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для выполнения поставленных задач в течение 2000-2006 гг. на базе Республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями (РЦПБ СПИД и ИЗ), Республиканского клинического противотуберкулезного диспансера (РКПД) Министерства здравоохранения Республики Татарстан было обследовано 407 человек. Из них больных сочетанной инфекцией (ВИЧ-инфекцией и туберкулезом) обследовано 122 пациента, ВИЧ-инфекцией без туберкулеза - 198 и туберкулезной моноинфекцией - 34 больных. В группу здоровых вошли 53 здоровых донора, серонегативных по ВИЧ, гепатитам В и С в возрасте от 27 до 54 лет.

В зависимости от сроков выявления туберкулеза и ВИЧ-инфекции 84 пациента с сочетанной патологией в соответствии с классификацией Ерохина В.В. были разделены на 2 группы: 1-я группа - 35 больных активным туберкулезом с присоединением ВИЧ-инфекции (ТБ/ВИЧ), П-я группа - 49 больных при выявлении туберкулеза на фоне ВИЧ инфекции (ВИЧ/ТБ).

Диагноз ВИЧ-инфекции устанавливали на основании общепринятых эпидемиологических, клинических и лабораторных данных. Для определения вирусспецифических антител в сыворотке периферической крови использовали методы иммуноферментного анализа на тест-системах «ВИЧ-1, ВИЧ-2, ИФА - Авиценна» фирмы «Авиценна», Россия и «Комби Бест анти ВИЧ 1+2» фирмы «Вектор-Бест», Россия и иммунного блотгинга в соответствии с прилагаемыми к тест-системам инструкциями (New Lav Blot 1, Bio Rad, Франция).

Вирусную нагрузку (количество копий РНК ВИЧ в 1 мл плазмы крови) определяли методом ПЦР (Ампли Сенс ВИЧ Монитор, г. Москва). Стадия ВИЧ-инфекции устанавливалась по клинической классификации ВИЧ-инфекции (2001 г.).

Диагноз туберкулез устанавливали на основании эпидемиологических, общеклинических, рентгенологических и бактериологических методов в соответствии с приказом МЗ РФ №109 от 21.03.2003 г.

Диагноз вирусный гепатит С подтверждали определением в сыворотке крови больных анти-HCV класса IgM, IgG методом ИФА, вирусный гепатит В подтверждали определением HBs антигена, анти-НВсог IgM, IgG в ИФА.

Исследование фенотипа лимфоцитов и опсонофагоцитарной

системы (ОФС) проводилось в иммунологической лаборатории РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ. Иммунофенотипирование лимфоцитов проводили двухцветным маркированием лимфоцитов в цельной крови в прямой реакции иммунофлуоресценции с мкАТ фирмы «Becton Dickinson» (США). Учет реакции иммунофлуоресценции проводили на проточном цитофлуориметре «FACSCalibur» (Becton Dickinson, США) в программе SimulSET.

Сывороточные иммуноглобулины А, М, G определяли методом турбидиметрии на биохимическом анализаторе ФП-901М по методике Т.И. Лукичевой и др. (1991), Н.М.Кудряшовой и др. (1993).

Фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) оценивали по способности клеток захватывать St. aureus. При этом определяли процент нейтрофилов, фагоцитировавших стафилококк, фагоцитарное число (ФЧ) - среднее число St.aureus, захваченных одной клеткой, абсолютный фагоцитарный показатель (АФП) - общее количество частиц St.aureus, фагоцитированных нейтрофилами. Метаболическую активность нейтрофилов определяли в НСТ-тесте спонтанном и индуцированном вариантах по методу В.Н. Рас и др. (1968) в модификации М.Е. Виксмана и А.Н. Маянского (1979).

Определение специфических противотуберкулезных антител (ПТАТ) к антигенам МБТ в сыворотке крови больных проводилось стандартным методом ИФА. Использовалась тест-система «АТ-Туб-Бест-стрип» (производитель - ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск).

Определение специфического спектра антител класса IgG к антигенам М.tuberculosis в сыворотке крови больных проводили в реакции иммуноблот анализа (ИБ). Использовали оригинальные наборы изготовленные в КГМА совместно с РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ и РПТД на стрипах, содержащих специфические антигены МБТ, перенесенные на нитроцеллюлозную мембрану из 12,5% полиакриламид-ного геля при помощи вестерн блота. Результаты реакций оценивали визуально и инструментально в отраженном свете на сканере Sharp Jx-330 с использованием программы Image Master 10 Prime, версия 3,00 (Pharmacia Biotech). Интенсивность окрашенных полос (количественный анализ сканированных фракций) выражалась в оптических единицах плотности (Pixel). Полученные результаты обрабатывали с использованием программы Microsoft Excel и представляли в виде табличных данных и линейных графических изображений.

При оптимизации метода получения циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) из сывороток крови использовали следующие

концентрации полиэтиленгликоля с молекулярным весом 6000 (ПЭГ-6000): 7%, 14% и 21%, которые служили для определения содержания ЦИК различной молекулярной массы по оптической плотности (Герасимов И.Г., ЗорковаЕ.В., 2001).

Статистическая обработка данных производилась на персональном компьютере ЮМ НС «Pentium», с использованием программ «MS Ехсе1-97» и программы «Статис-Мед». При этом использовались параметрические методы оценки результатов - вычисление средней арифметической (М), среднеквадратического отклонения, средней ошибки средней арифметической (т). Оценка различий между сопоставляемыми группами по избранным критериям осуществлялась по критерию Стьюдента для долей (для сравнения качественных показателей) и критерия Ньюмена-Кейлса (для сравнения количественных показателей). Достоверность изменений признавалась при вероятности ошибки р меньшей или равной 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Эпидемиологические особенности сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ в Республике Татарстан. Начиная с 2000 года, на территории Республики Татарстан отмечается рост регистрации активного туберкулеза среди ВИЧ-инфицированных пациентов. Анализ заболеваемости позволил выделить два периода с высокой регистрацией туберкулеза в сочетании с ВИЧ инфекцией. Первый период охватывает 2000-2003 годы, когда отмечалась регистрация активных форм туберкулеза среди вновь выявленных больных ВИЧ-инфекцией. То есть, этот период был связан с увеличением числа больных на ранней стадии ВИЧ-инфекции. Начиная с 2004 года, наметилась тенденция к снижению регистрации активных форм туберкулеза на ранней стадии ВИЧ-инфекции. Однако, начинает расти число больных ВИЧ-инфекцией в стадии вторичных заболеваний, среди которых лидирующее место занимает туберкулез. Это явилось началом второго периода -периода развития туберкулеза в стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции (рис. 1).

Учитывая особенности развития инфекционного процесса, следует отметить, что в Республике Татарстан из зарегистрированных 8613 случаев ВИЧ-инфекции на начало 01.01.2007 г. более 5000 пациентов инфицированы вирусом ВИЧ до 2003 года. А это значит, что в Республике Татарстан 5000 пациентов являются группой повышен-

ЕЗ случаи ТБ

® ТБ на ранней стадии ВИЧ

га ТБ на стадии вторичных заболеваний

ного риска по туберкулезу в ближайшие годы.

2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006

Рис. I. Динамика выявления активного туберкулеза на фоне ВИЧ-инфекции.

Остро прогрессирующее течение вторичного туберкулеза на поздних стадиях ВИЧ-инфекции способствовало росту несвоевременной диагностики его. Так, частота несвоевременной диагностики туберкулеза у больных на поздних стадиях ВИЧ-инфекции в Республике Татарстан в 2003 году составила - 27%, в 2004 г. - 22%, в 2005 г. - 37,5%, в 2006 г. - 47% и в 2007 году - 57%. Наряду с этим, с 2005 года в Республике Татарстан отмечается рост случаев летальных исходов от туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией. Так, если в 2005 году было зарегистрировано 56% случаев смерти у больных ВИЧ-инфекцией от туберкулеза, то в 2007 году эта цифра составила 63,2%.

Клинико-гематологические показатели у больных сочетан-ной патологией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза. У больных туберкулезом в сочетании с ВИЧ-инфекцией (84 человека) и больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза (106 человек) был проведен сравнительный анализ клинико-гематологических и иммунологических показателей. Полученные данные свидетельствовали о значительном утяжелении клинической картины при сочетанном варианте течения заболевания. Так, инфекционно-токсический синдром на ранних стадиях ВИЧ-инфекции, наблюдался в основном при сочетан-ной патологии (таблица 1). В субклинической стадии ВИЧ-инфекции (III стадия) при сочетанном варианте течения болезни инфекционно-токсический синдром наблюдался у 29,6% больных при незначительных его проявлениях у пациентов с той же стадией ВИЧ-инфекции

Таблица 1

Клинические проявления ВИЧ-инфекции, сочетанной с туберкулезом и ВИЧ инфекции без туберкулеза по стадиям ВИЧ-инфекции (в %)

Стадии ВИ1- 1-инфекции Итого

Клинические II] IV А IV Б IV В

проявления ВИЧ/ТБ (п=27) ВИЧ (п=72) ВИЧ/ТБ (п=17) ВИЧ (П=13) ВИЧ/ТБ (п=32) ВИЧ (п=14) ВИЧ/ТБ (п=8) ВИЧ (п=7) ВИЧ/ТБ (п=84) ВИЧ (п=106)

Инфекционно- 29,6 - 58,8 15,4 75,0 57,1 100,0 71,4 59,5 14,2

токсический синдром

Астеновегетативный 63,0 11,1 88,2 30,8 100,0 71,4 100,0 100,0 85,7 27,4

синдром

Бронхолегочной 77,8 1,4 82,3 23,1 75,0 42,9 62,5 57,1 75,0 13,2

синдром

Поражение бактери- 7,4 13,9 11,8 69,2 31,3 71,4 75,0 85,7 23,8 33,02

кожи альное

и слизистых вирусное 3,7 1,4 11,8 61,5 21,9 57,1 25,0 42,9 14,3 18,9

грибковое 11,1 1,4 41,2 53,8 62,5 57,1 100,0 100,0 45,2 21,7

Потеря массы тела 59,3 - 82,3 30,8 93,7 50,0 100,0 100,0 80,9 16,98

Лимфаденопатия 51,8 25,0 100,0 38,5 87,5 50,0 100,0 57,1 79,8 32,1

Гепатомегалия 81,5 38,9 64,7 77,0 90,6 57,1 87,5 85,7 82,1 49,06

без наличия туберкулеза. Постепенный переход ВИЧ-инфекции в стадию вторичных заболеваний без туберкулеза сопровождался развитием инфекционно-токсического синдрома у 57,1% больных в IVB стадию и доходил до 71,4% в IVB стадию заболевания. Течение заболевания утяжелялось и у больных с сочетанным инфицированием прежде всего за счет утяжеления течения и частой генерализации туберкулезного поражения легких; при этом в IVB стадию ВИЧ-инфекции процент больных с признаками инфекционно-токсического синдрома достигал 100%.

Одновременно с инфекционно-токсическим встречался и асте-новегетативный синдром, частота встречаемости которого превышала первый. Этот синдром находился в тесной связи с развитием туберкулезного процесса. Уже со стадии IVA признаки астеновегетативно-го синдрома встречались у 88,2% сочетанно-инфицированных больных (р<0,001). У больных ВИЧ-моноинфекцией проявления астенове-гетативного синдрома достигали 71,4% от числа пациентов только в IVB стадию ВИЧ-инфекции. На стадии IVB астеновегетативный синдром достигал 100% в обеих группах больных.

В тесной связи с первыми двумя синдромами формировался бронхолегочной синдром. Как показали исследования, его выраженность зависела от степени тяжести поражения легких. У больных со-четанной инфекцией частота бронхолегочного синдрома превышала 80% уже на IVA стадии ВИЧ-инфекции (р<0,001). В группе больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза, бронхолегочной синдром отмечался значительно реже (р<0,001).

Для сочетанного течения ВИЧ-инфекции и туберкулеза легких были характерны более выраженные проявления потери массы тела (с переходом в кахексию в стадии вторичных заболеваний), которые наблюдались более чем у 80% пациентов из наблюдаемой группы начиная с IVA стадии ВИЧ-инфекции. Как и у выше рассмотренных показателей разница по динамике потери веса постепенно сравнивалась в обеих группах к IV В стадии ВИЧ-инфекции (р>0,05).

Лимфаденопатия, гепатомегалия являлись типичными клиническими признаками, встречающимися в обеих группах больных, однако частота их развития была достоверно выше у больных при соче-танном течении заболевания (р<0,001, р<0,001). Прогрессирование ВИЧ-инфекции сопровождалось постепенным выравниванием частоты их встречаемости в наблюдаемых группах больных.

Значительно реже в обеих группах отмечалось поражение кожи

и слизистых. Однако, уже с IVA стадии ВИЧ-инфекции выявлялась достоверная разница в показателях (р<0,01), с преимущественным бактериальным и вирусным поражением кожи и слизистых в группе больных без туберкулеза.

Сравнительный анализ основных гематологических показателей у больных туберкулезом в сочетании с ВИЧ-инфекцией и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза показал, что наибольшие изменения были выявлены также у пациентов с сочетанной инфекцией (таблица 2). Так, в субклинической стадии ВИЧ-инфекции (III стадия) при сочетанной патологии количество лейкоцитов было достоверно выше, чем в группе сравнения (р<0,01). По-видимому, это связано с тем, что для туберкулеза более характерны проявления воспалительного характера (лейкоцитоз, увеличение СОЭ), а для ВИЧ-инфекции, особенно по мере увеличения продолжительности инфицирования, наоборот, тенденция к лейкопении. В стадии вторичных проявлений общее количество лейкоцитов в обеих группах не имело достоверной разницы (р>0.05). Скорость оседания эритроцитов в группе больных ВИЧ-инфекцией, сочетанной с туберкулезом во всех стадиях была выше нормы (р<0,01; р<0,05) и наблюдалась в 62,6% случаях, с тенденцией к увеличению показателей по мере прогрессирования ВИЧ-инфекции. В группе сравнения увеличение средних показателей СОЭ отмечено только в стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции у 27,1%.

Общее количество лимфоцитов в обеих группах снижалось по мере прогрессирования заболевания, лимфопения была наиболее выраженной в IVB стадию заболевания. У 10,2% больных сочетанной инфекцией в стадию вторичных заболеваний наблюдалось значительное снижение лимфоцитов (менее 0,8х109/л).

Достоверно типичным проявлением хронических бактериальных заболеваний является анемия. Лабораторные признаки анемии (Нв -72-110 г/л, Er - 2,8-4,0x1012/л) у больных ВИЧ-инфекцией, сочетанной с туберкулезом наблюдались у 46,8% больных, на всех стадиях патологии с более низкими показателями в IVB стадии, а в группе сравнения у 15% больных, также наиболее выражено на поздних стадиях ВИЧ-инфекции. В начальных стадиях ВИЧ-инфекции анемия в группе с одновременным туберкулезом легких носила гипохромный характер, в то время как в группе ВИЧ-моноинфицирования гипохро-мия была невыраженной. Однако, динамика прогрессирования тяжести анемии была связана с преимущественным снижением уровня гемоглобина, что свидетельствовала о развитии классической формы

Показатели периферической крови больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза по стадиям ВИЧ-инфекции

Показатели общего анализа крови Стадии ВИЧ-инфекции Р

III IV А IV Б IV В ВИЧ/ТБ (п=84) ВИЧ (п=106)

ВИЧ/ТБ (п=27) ВИЧ (п=72) ВИЧ/ТБ (11=17) ВИЧ (п=13) ВИЧ/ТБ (п=32) ВИЧ (п=14) ВИЧ/ТБ (п=8) ВИЧ (п=7)

1 2 3 4 5 6 7 8

Лейкоциты (х109/л) 7,54 ±0,78 5,50 ±0,25 7,64 ±0,59 5,46 ±0,83 6,26 ±0,47 6,41 ±1,52 6,12 ±0,85 6,1 ±0,59 1-3,5,7 >0,05 2-4,6,8 >0,05

р<0,01 р<0,05 р>0,05 р>0,05

Лимфоциты (х10 /л) 2,205 ±0,13 2,11 ±0,12 1,861 ±0,13 1,467 ±0,23 1,242 ±0,06 1,655 ±0,39 1,241 ±0,09 1,541 ±0,15 1-3 >0,05 1-5 <0,05 1-7 <0,01 2-4,6,8 >0,05

р>0,05 р>0,05 р<0,05 р>0,05

Эритроциты (х10 /л) 4,29 ±0,14 4,67 ±0,17 4,42 ±0,18 5,03 ±0,23 4,34 ±0,13 3,77 ±0,35 4,0 ±0,27 3,85 ±0,36 1-3,5,7 >0,05 2-4,6,8 >0,05

р>0,05 р<0,05 р>0,05 р>0,05

Гемоглобин (г/л) 125,9 ±4,05 144,08 ±4,37 132,21 ±4,65 145,2 ±6,33 125,78 ±3,4 116,57 ±11,99 119,5 ±7,39 113,2 ±7,9 1-3,5,7 >0,05 2-4,6,8 >0,05

р<0,01 р>0,05 р>0,05 р>0,05

Тромбоциты (х109/л) 333,47 ±39,84 205,4 ±11,68 210,79 ±23,05 236,6 ±23,94 229,79 ±16,44 236,14 ±37,21 218,25 ±22,21 169,75 ±19,0 1-3 <0,05; 1- 5,7>0,05 2-4,6,8 >0,05

р<0,01 р>0,05 р>0,05 р>0,05

СОЭ (мм/час) 20,9 ±3,6 7,0 ±1,44 24,86 ±3,19 7,4 ±1,59 29,16 ±3,2 29,0 ±10,6 39,54 ±5,58 13,0 ±3,8 1-3,5,7 >0,05 2-4,6,8 >0,05

р<0,01 р<0,01 р>0,05 р<0,01

анемии хронических заболеваний.

Состояние иммунной системы у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза. Классическим признаком прогрессирования ВИЧ-инфекции является снижение числа С04-лимфоцитов. Количественная характеристика последних является одним из важных показателей диагностики степени развития иммунодефицита, а также одним из ведущих критериев установления стадии ВИЧ-инфекции. При оценке количественных показателей уровня СБ4+Т-лимфоцитов было обнаружено прогрессивное снижение их числа с 0,568±0,033х109/л в III стадию до 0,129±0,028х109/л в IVB стадию при сочетанной инфекции (при ВИЧ-инфекции без туберкулеза с 0,634±0,030х109/л до 0,098±0,064х 109/л) при показателях в контрольной группе 0,760±0,040х109/л (таблицы 3 и 4). Уровень С08+Т-лимфоцитов в III стадию в обеих группах оказался даже увеличенным по сравнению с контрольными данными и, поэтому, дальнейшее снижение числа клеток данной субпопуляции к IVB стадии хотя и было отмечено, но не носило столь драматического характера, как в случае с С04+клетками. Противоположно направленные сдвиги количественных показателей CD4+ и С08+Т-лимфоцитов в обеих группах инфицированных больных способствовали выраженному снижению иммунорегуляторного коэффициента уже в III стадии ВИЧ-инфекции (0,57±0,05 при сочетанной инфекции и 0,75±0,06 при ВИЧ-инфекции без туберкулеза), без достоверных различий в динамике ВИЧ-инфекции в обеих группах пациентов (р>0,01; р>0,05). Как и предполагалось, минимальные уровни соотношения Тх/Тс формировались в IVB стадию ВИЧ-инфекции (0,20±0,06 при сочетанной инфекции и 0,17±0,03 при моноинфекции), являясь еще одним показателем тяжести иммунодефицита.

Известно, что важная роль в противоинфекционном иммунитете, особенно на ранних стадиях инфицирования вирусом, принадлежит NK-клеткам, выполняющим функцию естественных киллеров.

Динамика количественных изменений NK-клеток имела отрицательный характер как в группе больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза, так и в группе с туберкулезом легких в сочетании с ВИЧ-инфекцией. Достоверных различий уровней NK-клеток в сравниваемых группах не было отмечено (р>0,05).

Особый интерес представляли результаты изучения степени активации лимфоцитарного пула на основании уровня экспрессии маркера HLA-DR в динамике. Степень выраженности активации лимфо-

Иммунологические показатели больных ВИЧ-инфекцией по стадиям ВИЧ-инфекции

Иммунологические показатели крови (здоровые) Стадии ВИЧ-инфекции Р

III (п=72) IV А(п=13) IV Б (п=14) IV В (п=7)

1 2 3 4

Абс. количество лимфоцитов х109/л (1,81±0,09) 2,11±0,12 1,467±0,23 1,655±0,39 1,541±0,15 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

СЭ4х107л (0,76±0,04) 0,634±0,030 0,284±0,028 0,235±0,040 0,098±0,064 1-2,3,4<0,01; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

СБ8х107л (0,57±0,03) 0,847±0,053 0,70(Ш),168 0,973±0,264 0,580±0,197 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

ТЛз(1,49±0Д) 0,75±0,06 0,41±0,08 0,24±0,09 0,17±0,03 1-2; 2-3,4; 3-4>0,05; 1-3<0,05; 1-4<0,01

NK-клетки CD 16 х109/л (0,265±0,02) 0,282±0,034 0,310±0,05 0,190±0,03 0,123±0,013 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

В-лимф/акт. Т-лимф. (HLA-DR) х109/л (0,206±0,02) 0,618±0,11 0,658±0Д0 0,344±0,12 0,343±0,05 1-2,3,4>0,05; 2-4>0,05; 3-4>0,05

В-лимфоциты CD20 х107л (0,157±0,08) 0,188±0,05 0,141±0,03 0,155±0,02 0,22±0,03 1-2,3,4>0,05; 2-,4>0,05; 3-4>0,05

ФАН (St.aureus)% (78,03±1,94) 69,0±4,26 72,0±5,35 69,0±8,20 69,0±2,8 1-2,3,4>0,05; 2-4>0,05; 3-4>0,05

ФЧ (St aureus) (5,73±0,32) 4,62±0,40 5,06±0,51 3,93±0,56 4,02±0,35 1-2,3,4>0,05; 2-4>0,05; 3^>0,05

Спонтанный НСТ-тест % (9,1±1,17) 16,43±4,19 14,89±2,66 15,3±2Д8 17,5±2,32 1-2,3,4>0,05; 2-4>0,05; 3-4>0,05

Стимулированный НСТ-тест % (40,12±3,88) 60,47±5,29 53,67±4,5 40,17±5,13 52,31±2,51 1-2,3,4>0,05; 2-4>0,05; 3-4>0,05

Иммунологические показатели больных туберкулезом, сочетанной с ВИЧ-инфекцией

по стадиям ВИЧ-инфекции

Иммунологические показатели крови (здоровые) Стадии ВИЧ-инфекции Р

III (п=27) IV А (п=17) IV Б (п=32) IV В (п=8)

1 2 3 4

Абс. количество лимфоцитов х109/л (1,81±0,09) 2,56±0,48 1,4±0,53 1,28±0,38 1,21±0,19 1-2<0,05; 2-3; 2-4>0,05; 1-3,4<0,01; 3-4>0,05

СБ4х107л (0,76±0,04) 0,568±0,033 0,378±0,030 0,297±0,019 0,129±0,028 1-2<0,05; 2-3>0,05 1-3,4<0,01; 2-4;3-4<0,05

СБ8х107л (0,57±0,03) 1,001±0,073 0,980±0,119 0,957±0,084 0,635±0,118 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

Tx/Ts(l,49±0,l) 0,57±0,05 0,39±0,08 0,31±0,05 0,20±0,06 1-2,3>0,05; 2-3; 3-4>0,05; 1-4; 2-4>0,01

NK-клетки CD 16 х109/л (0,265±0,02) 0,311±0,08 0,269±0,05 0,252±0,06 0Д67±0,05 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

В-лимф/акт.Т-лимф. (HLA-DR) х109/л (0,206±0,02) 0,896±0,20 0,796±0,181 0,894±0,14 0,542±0,21 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

В-лимфоциты CD20 х107л (0,157±0,08) 0,189±0,015 0,095±0,02 0,094±0,03 0,152±0,07 1-2,3<0,01; 2-3,4>0,05 1-4>0,05; 3-4>0,05

ФАН (St.aureus) % (78,03±1,94) 71,83±6,92 52,0±5^2 73,7±8,07 83,5±6,59 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

ФЧ (St aureus) (5,73±0,32) 4,28±0,74 3,75±0,3 4,82±1,02 6,32±1,16 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

Спонтанный НСТ-тест % (9,1±1,17) 18,0±3,25 23,3±3,1 28,0±5,4 30,0±2,5 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

Стимулированный НСТ-тест % (40,12±3,88) 51,3±7,1 50,7±7,5 51,8±4,9 51,5±7,8 1-2,3,4>0,05; 2-3,4>0,05; 3-4>0,05

цитов максимальной была в группе больных сочетанной патологией. Наиболее интересным оказалось, что степень активации у больных данной группы достоверно превышала контрольные цифры более чем в 2 раза даже в IVB стадии ВИЧ-инфекции (р<0,005). Соответственно уровню активации лимфоцитов отмечено 3-х кратное увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов по уровню увеличения спонтанной НСТ-активности, которой у больных с одновременным течением ВИЧ-инфекции и туберкулеза был максимальным и не имел тенденции к снижению даже в IVB стадии ВИЧ (30,0±2,5% в стадию IVB при 9,1 ±1,17% в норме). Многократно выраженное изменение вышеуказанных показателей является достоверным признаком поликло-нальной активации лимфоцитов и выраженной стимуляции функциональной активности нейтрофилов.

Поликлональная активация лимфоцитов является известным фактом, характеризующим течение ВИЧ-инфекции (Vanham G., Edmonds К., Qing L. et al., 1996). Добавочное воздействие M.tuberculosis характеризовалось дальнейшим увеличением изучаемых показателей по сравнению с больными ВИЧ-моноинфекцией. Известно, что при прогрессировании ВИЧ-инфекции в результате поликлональной активации лимфоцитов наблюдается выраженная гипериммуноглобули-немия (Фролова О.П., 1998; Кравченко А.В., Серебровская Л.В., Ша-гильдян В.И., 1999; Сизова Н.В., 2003). Уровень циркулирующих иммуноглобулинов IgG и IgM у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ значительно превышал нормальные значения и сохранялся даже на конечных стадиях ВИЧ-инфекции. Так, уровни IgG и Ig М в IVB стадию ВИЧ-инфекции составили в группе сочетанного течения инфекций 24,46±6,85 г/л и 3,04±0,3 г/л при 13,6±0,46 г/л и 2,15±0,11 г/л в контроле соответственно. В группе больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза гипериммуноглобулинемия IgG была отмечена на всех стадиях ВИЧ-инфекции (р<0,05). По отдельным показателям гипер-мииуноглобулинемия в группе сочетанного течения ВИЧ-инфекции и туберкулеза превышала средние показатели пациентов с ВИЧ-моноинфекцией.

Таким образом, течение сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ отличается от ВИЧ-инфекции без туберкулеза целым комплексом добавочных воздействий, утяжеляющих общее состояние больных. Сюда относятся показатели более длительно тянущегося воспалительного процесса, сопровождающегося признаками инфекционно-токсиче-ского, астеновегетативного синдромов и резкой стимуляцией неспе-

цифического звена иммунитета. Все указанные клинико-иммунологи-ческие проявления, связанные с воздействием М. tuberculosis способны утяжелять течение ВИЧ-инфекции (Кравченко A.B., Серебровская Л.В., Шагильдян В.И., 1999; Ерохин В.В., Корнилова З.Х., Алексеева Л.П., 2005, 2007).

Неслучайно поэтому сравнительный анализ динамики сочетан-ной патологии и моноинфекции ВИЧ указал на более быстрое про-грессирование заболевания в первом случае. Была обнаружена достоверная разница в прогрессировании ВИЧ-инфекции. Переход в IVA стадию в группе сочетанного инфицирования (ВИЧ/ТБ) в среднем завершался через 2,82±0,18 года при 4,35±0,21 года при моноинфицировании ВИЧ. Практически двукратная разница по скорости прогрес-сирования в указанных группах обнаружена на IVB стадии ВИЧ-инфекции (р<0,05).

Клинико-иммунологическая характеристика сочетанной инфекции в зависимости от первичности возникновения туберкулеза и ВИЧ-инфекции. Одновременное течение туберкулеза легких и ВИЧ-инфекции способно оказывать неблагоприятное влияние на течение обоих инфекций. С одной стороны у больных туберкулезом при присоединении ВИЧ-инфекции страдает развитие защитных компонентов клеточного иммунитета, что приводит к развитию остро прогрессирующих форм туберкулеза. С другой стороны ВИЧ-инфекция на фоне туберкулезного процесса приобретает ускоренное течение.

Однако, как можно было предположить, влияние ВИЧ-инфекции на течение туберкулезного процесса будет далеко не однозначным в зависимости от стадии ВИЧ-инфекции, на которую присоединяется туберкулез. Более того, инфицирование ВИЧ на фоне имеющегося туберкулеза легких может оказать неидентичное воздействие на специфический противотуберкулезный иммунитет и, в том числе, на течение самого заболевания. Поэтому был проведен дополнительный анализ эпидемиологических и клинических особенностей течения туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и характера изменения ведущих показателей иммунного статуса при различных вариантах их сочетанного формирования.

В первую группу вошли больные туберкулезом легких, у которых ВИЧ-инфекция присоединилась как вторая патология (35 человек - ТБ/ВИЧ). Вторая группа включала больных ВИЧ-инфекцией, у которых туберкулез присоединяется на различных стадиях основного

заболевания (49 человек - ВИЧУТБ).

Полученные данные при сравнительном анализе клинико-имму-нологических показателей у больных сочетанной инфекцией свидетельствовали о более тяжелом течении заболевания во второй группе

- ВИЧ/ТБ. Тяжесть во многом определялась со стадией ВИЧ-инфекции, на которую происходило присоединение туберкулеза.

Тяжесть течения туберкулеза была напрямую связана с формами патологии. У пациентов, заразившихся ВИЧ-инфекцией на фоне активного туберкулеза, чаще встречался инфильтративный и фиброзно-кавернозный туберкулез легких. Эти формы туберкулеза сопровождали больных на всех стадиях ВИЧ-инфекции.

При выявлении туберкулеза на фоне имеющейся ВИЧ-инфекции наиболее легкие формы туберкулеза соответствовали ранним субклиническим стадиям ВИЧ-инфекции. Присоединение туберкулеза на поздних стадиях ВИЧ-инфекции приводило к значительному увеличению процента тяжелых форм туберкулезного процесса: внелегоч-ные формы, в том числе милиарный с поражением многих органов, туберкулез внутригрудных лимфатических узлов и диссеминация туберкулезного процесса в сочетании с внелегочными локализациями.

Полученные результаты имеют вполне логическое обоснование

- туберкулезный процесс, начавшийся до инфицирования ВИЧ, обладает уже сформировавшейся определенной степенью как неспецифического, так и адаптивного иммунных эффектов защиты. Скорее всего, они недостаточно полноценны, поскольку развилась активная форма заболевания, однако установившаяся форма очагового или ин-фильтративного туберкулеза имела достаточно устойчивый характер, свидетельствуя об отсутствии выраженного подавления специфического иммунитета.

Инфицирование же М. tuberculosis на фоне ВИЧ-инфекции, происходило на фоне выраженной недостаточности иммунного ответа, что сопровождалось генерализацией туберкулезного процесса.

Сравнение клинических проявлений у двух групп наблюдаемых больных свидетельствовало о том, что основные симптомы, связанные с общими проявлениями интоксикации и тяжести течения заболевания были более выраженными у больных ВИЧ-инфекцией с вторичным развитием туберкулеза - 67,3% и 97,9% (р<0,01; р<0,05). И только показатели выраженности бронхолегочного синдрома преобладающими оказались у больных первой группы - 85,7% (р<0,01). Логическим объяснением этому был преобладающий процент легочных

форм туберкулеза у больных первой группы, в то время как во второй группе значительным был процент генерализованных и внелегочных форм туберкулеза.

Проведенные исследования с оценкой состояния иммунной системы в сравниваемых группах показал различия у больных начиная с субклинической стадии ВИЧ-инфекции. Снижение содержания CD4+ лимфоцитов у больных с исходным туберкулезным поражением легких (0,492±0,03 х109/л) находит объяснение в неспецифическом влиянии туберкулеза на их уровень. Последующее течение патологии с переходом ВИЧ-инфекции в стадию выраженного иммунодефицита сопровождалось дальнейшим снижением уровня Сй4+клеток до примерно одинаковых показателей в обеих группах до 0,14±0,015 х109/л в 1-й группе и 0Д18 ±0,03 х109/л во 2-й группе (р<0,001; р<0,05). Выраженно стимулированной была активность фагоцитарного звена, и степень поликлональной активации лимфоцитов достоверно не отличающихся по выраженности в сравниваемых группах больных.

Таким образом, оба заболевания, туберкулез и ВИЧ-инфекция поражают иммунную систему, преимущественно клеточное звено. В условиях снижения иммунологической защиты макроорганизма, на поздних стадиях ВИЧ-инфекции, изменения в легких имеют остро прогрессирующий характер, туберкулез принимает черты осложненного течения и имеет, как правило, неблагоприятный исход заболевания.

Распознавание туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией должна быть максимально ранней. Основную роль в быстрой диагностике туберкулеза играет настороженность врача в отношении возможности подобных сочетаний и знание первых его проявлений: нарастающая интоксикация, появление сухого кашля и одышки при физической нагрузке, лихорадка и быстрое снижение массы тела.

На «поздних» стадиях ВИЧ-инфекции изменяется иммунопато-генез туберкулеза и клинико-лабораторная верификация диагноза затрудняется. Соотношение основных иммунологических факторов (ан-тителообразование, показатели клеточного и гуморального иммунитета) определяют формирование туберкулезного процесса, его распространенность, деструктивные изменения в легких и тип специфической воспалительной реакции (Салина Т.Ю., Морозова Т.И., Федотова Э.А. и др., 2000; Стаханов В.А., Васильев H.A., Леви Д.Т., Руха-мина М.Л., 2001; Гучетль Е.В., Пономарева Л.П., Сокол Л.А., 2004).

Хотя основное протективное значение при туберкулезе выполняют реакции клеточного иммунитета, в современных условиях сохраняется актуальность изучения и оценки состояния гуморального иммунного ответа на туберкулезную инфекцию. Наличие противотуберкулезных антител, титр и класс их иммуноглобулиновой принадлежности могут быть использованы в качестве диагностического критерия.

Формирование специфического противотуберкулезного гуморального иммунного ответа. С целью определения диагностической значимости противотуберкулезных антител (ПТАТ) был изучен суммарный пул специфических антител к антигенам микобактерий туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотке крови различных групп больных. Обследовано 34 больных туберкулезом (первая группа), 38 больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ (вторая группа) и 92 пациента ВИЧ-инфекцией без туберкулеза (третья группа). Контрольную группу составили 23 здоровых лица (доноры), в анамнезе у которых не было указаний на перенесенный туберкулез.

В зависимости от степени выраженности туберкулезного процесса, которая оценивалась по традиционным параметрам у пациентов первой группы (ТБ) были диагностированы следующие формы туберкулеза: очаговый туберкулез легких (ОТ) - у 7 (20,6%) человек, инфильтративный туберкулез легких (ИТЛ) - у 9 (26,5%), инфильтра-тивный туберкулез легких в фазе распада (ИТЛ ф/р) - у 11 (32,4%), фиброзно-кавернозный туберкулез легких (ФКТЛ) - у 7 (20,6%) человек (рис. 2). Микобактерии туберкулеза были обнаружены у 22 (64,7%) пациентов.

У больных второй группы (ВИЧ/ТБ) инфильтративный туберкулез легких был - у 10 (26,3%) больных, инфильтративный туберкулез легких в фазе распада - у 7 (18,4%), фиброзно-кавернозный туберкулез легких - у 6 (15,8 %), диссеминированный туберкулез легких (ДТ) - у 7 (18,4%), генерализованный туберкулез (ГТ) - у 4 (10,5%), туберкулезный плеврит (ТП) - у 4 (10,5%) больных (рис. 2). Микобактерии туберкулеза обнаружены у 26 (68,4%) пациентов.

Стадии ВИЧ-инфекции в группе больных сочетанной патологией были распределены следующим образом: III стадия - у 13 больных (34,2%), IVA стадия у 8 больных (21,05%), ГУБ стадия у 8 (21,05%) и IVB стадия у 9 больных (23,7%).

а от иитп

ВИТЛ ф/р «ФКТЛ

а итл

® ИТЛ ф/р

™®ктл

оДТЛ И ГТ ИТП

Больные ТБ Больные ВИЧ/ТБ

Рис. 2. Клинические формы туберкулеза

В группе больных, где была диагностирована только ВИЧ-инфекция без активного туберкулеза III стадия ВИЧ-инфекции была диагностирована у 56 больных (60,9%), IVA стадия - у 17 больных (18,5%), Г/Б стадия у 11 (11,9%) и IVB стадия - у 8 пациентов (8,7%). Поскольку у большинства больных с сочетанной патологией (ВИЧ/ТБ) диагноз туберкулеза определял стадию ВИЧ-инфекции, доля больных с «поздними» стадиями ВИЧ-инфекции (стадии IVB и IVB) была существенно большей, чем у больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза (44,75% и 20,6% соответственно).

Полученные нами результаты позволили подтвердить результаты предыдущих исследований по достаточно высоким уровням чувствительности и специфичности тест-системы «АТ-Туб-Бест-стрип» (таблица 5). Так, в группе больных с туберкулезной моноинфекцией, частота выявления ПТАТ составила 76,4%. Среди больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ частота выявления ПТАТ была выше и составила 89,5% (р<0,05). Контрольная группа здоровых добровольцев характеризовалась наличием ПТАТ в сыворотке крови на уровне 8,7%.

Таким образом, чувствительность методики ИФА в диагностике туберкулеза в группе пациентов с моноинфекцией совпадала с ранее проведенными исследованиями. По данным В.А. Стаханова, H.A. Ва-

сильева, Д.Т. Леви, М.Л. Рухаминой (2001), Е.В. Гучетль, Л.П. Пономаревой, Л.А. Сокол (2004), Л.В. Поддубной, В.В. Романова (2006), С.Е. Гладковой, С.С. Решетникова, В.Н. Пряхиной (2006) чувствительность теста составила 61-87% в зависимости от формы туберкулеза. Была обнаружена высокая частота положительного ИФА ответа (55,4%) у больных ВИЧ-инфекцией, у которых не было клинических признаков туберкулеза, а также указаний в анамнезе на туберкулез. В то время как в исследованиях специалистов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск, 2006) доля больных ВИЧ инфекцией без признаков туберкулеза, имеющих повышенный уровень ПТАТ составила только 27,8%.

Таблица 5

Частота выявления ПТАТ в сыворотке крови больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией методом ИФА (%)

Группы больных Частота ПТАТ Титры ПТАТ

1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400 и более

Туберкулез (п=34) 76,4 (п=26) 76,4* 47,06* 38,2* 17,6* 8,8* 0 0

ВИЧ/ТБ (п=38) 89,5 (п=34) 89,5** 76,3** 68,4** 52,6** 34,2** 23,7** 13,2**

ВИЧ (п=92) 55,4 (п=51) 55,4 21,7 5,4 0 0 0 0

Здоровые (п=23) 8,7 (п=2) 8,7 4,3 0 0 0 0 0

достоверность различия показателей между группами: * - ТБ и ВИЧ/ТБ; ** - ВИЧ/ТБ и ВИЧ

Во всех изучаемых группах больных было проведено определение титров ПТАТ. За титр принимали максимальное разведение сыворотки, при котором значение оптической плотности было выше величины «cut-off». Сравнение выраженности специфического гуморального иммунного ответа на антигены М. tuberculosis в группах больных туберкулезом указало не только на отсутствие его подавления на фоне ВИЧ инфекции, но даже на наличие выраженного преобладания титров в последнем случае (таблица 5). Хотя частота положительных результатов определения ПТАТ в группах больных туберкулезом и сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ мало отличалась, титры

противотуберкулезных антител в группе с сочетанной инфекцией оказались значительно большими. Так, наибольшие титры ПТАТ встречались в группе больных с сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ, где у 52,6% больных титры антител обнаруживались на уровне 1:800. У больных же с туберкулезом легких без ВИЧ-инфекции показатели выработки антител были существенно ниже и не превышали титров 1:400 у 38,2% больных. В образцах сывороток от здоровых лиц ПТАТ в титре 1:200 были выявлены только в 4,3% случаев (таблица 5). В группе больных ВИЧ-инфекцией без признаков активного туберкулеза титры противотуберкулезных антител были наиболее низкими и не превышали 1:400 (5,4%). Таким образом, титры ПТАТ с максимальной выраженностью определялись в группе сочетанного инфицирования М. tuberculosis и ВИЧ.

Уровень ПТАТ у больных туберкулезом и сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ имел связь с формой и тяжестью туберкулезного процесса. Так, у больных с туберкулезной моноинфекцией наибольшие титры выявлялись при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких (до 1:800) и инфильтративном туберкулезе легких в фазе распада (до 1:1600). При очаговом туберкулезе и инфильтративном туберкулезе легких без распада титры антител не превышали 1:200-1:400 (таблица 6). Следовательно, более тяжелые формы туберкулеза легких (формы, сопровождающиеся с распадом и бацилловыделением) вызывали наиболее выраженные серологические ответы как по частоте, так и по титру ПТАТ.

Течение туберкулеза легких в сочетанном с ВИЧ-инфекцией варианте приводит к значительному утяжелению клинических форм туберкулеза с увеличением доли диссеминированных и генерализованных форм. Последние наиболее часто сопровождали стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции. Поэтому, нами не было обнаружено в группе сочетанной инфекцией ни одного больного с очаговыми формами заболевания. В данной группе наиболее легкими формами туберкулеза были инфильтративные формы. При этой форме туберкулеза отмечался высокий уровень антителообразования (100%), в отличие от группы больных с моноинфекцией, где высокий уровень антителообразования выявлялся только при тяжелых формах, сопровождающихся признаками распада (таблица 7). Поэтому можно предположить, что в группе больных инфильтративным туберкулезом легких на фоне ВИЧ-инфекции без рентгенологических признаков распада уже имеются элементы такового, не обнаруживаемые рент-

Частота выявления ПТАТ методом ИФА у больных туберкулезом в зависимости от формы туберкулеза (в %)

Группы больных Частота ПТАТ Титры ПТАТ

1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400 и более

Очаговый туберкулез легких (п=7) сыворотка 28,6 28,6* 14,3* 0 0 0 0 0

ЦИК 0 0 0 0 0 0 0 0

Инфильтративный туберкулез легких (п=9) сыворотка 88,9 88,9** 22,2** 11,1** 0 0 0 0

ЦИК 0 0 0 0 0 0 0 0

Инфильтративный туберкулез легких в фазе распада (п=И) сыворотка 90,9 90 77,8*** 66,7*** 33,3*** 33,3*** 0 0

ЦИК 45,5 45,5*** 45,5*** 18,2*** 18,2*** С) ] *** 0 0

Фиброзно-кавер-нозный туберкулез легких (п=7) сыворотка 85,7 85,7 85,7 85,7 42,8 0 0 0

ЦИК 66,4 66,4 66,4 28,6 0 0 0 0

Туберкулез легких (всего) (п=34)_______ 1 сыворотка 76,4 76,4 47,1 38,2 17,6 8,8 0 0

ЦИК 34,6 34,6 26,5 11,8 2,9 2,9 0 0

достоверность различия показателей между группами: * - ОТЛ и ИТЛ;** - ИТЛ и ИТЛ с распадом; *** - ИТЛ с распадом и ФКТЛ

Таблица 7

Частота выявления ПТАТ методом ИФА у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ в зависимости

от формы туберкулеза (в %)

Группы больных Частота ПТАТ Титры ПТАТ

1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400 и более

Инфильтративный туберкулез легких(п=10) сыворотка 100 100* 80 50* 40* 0 0 0

ЦИК 50 50* 50* 30 0 0 0 0

Инфильтративный туберкулез легких в фазе распада (п=7) сыворотка 85,7 85,7 71,4 71,4 71,4 71,4 42,8 0

ЦИК 57,1 57,1** 28,6** 28,6** 14,2** 0 0 0

Фиброзно-кавернозный туберкулез легких (п=6) сыворотка 83,3 83,3 66,6** 66,6** 66,6** 50** ззз** 16,6**

ЦИК 50 50 0 0 0 0 0 0

Диссеминированный туберкулез легких (п=7) сыворотка 85,7 85,7 85,7*** 85,7*** 714*** 714*** 57,1 57,1

ЦИК 85,7 85,7*** ц 4*** 42,8*** 143*** 0 0 0

Генерализованный туберкулез(п=4) сыворотка 100 100**** 75**** 75**** 25**** 0 0 0

ЦИК 75 75**** 75 75**** 50**** 0 0 0

Туберкулезный плеврит (п=4) сыворотка 75 75 75 25 0 0 0

ЦИК 50 50***** 0 0 0 0 0 0

ВИЧ/ТБ (всего) (п=38) сыворотка 89,5 89,5 76,3 68,4 52,6 34,2 23,7 13,2

ЦИК 60,5 60,5 39,5 28,9 10,5 0 0 0

достоверность различия показателей между группами: * - ИТЛ и ИТЛ с распадом;** - ИТЛ с распадом и ФКТЛ; *** -ФКТЛ и ДТЛ; **** - ДТЛ и ГТ; ***** - ГТ и ТП

генологически, но отражающиеся на степени гуморального иммунного ответа на М. tuberculosis.

Анализ титров антител при сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ показал, что наибольшие титры выявлялись у больных инфильтративным туберкулезом легких в фазе выраженного распада (до 1:3200), фиб-розно-кавернозным туберкулезом легких (до 1:6400) и диссеминиро-ванным туберкулезом легких (до 1:6400).

Низкие титры антител (до 1:800) регистрировались у больных, имеющих инфильтративный туберкулез легких и туберкулезный плеврит, хотя значительно превышающие таковые в группе с моноинфекцией туберкулеза. Как выбивающиеся из общего хода рассуждений, были формы генерализованного туберкулеза и туберкулезного плеврита у больных с сочетанной инфекцией: несмотря на тяжесть форм туберкулеза титры ПТАТ у них не превышали 1:800.

Наибольший интерес и наибольшие трудности в анализе полученных данных представляли результаты по частоте и выраженности ИФА положительных проб у больных ВИЧ-инфекцией без клинико-рентгенологических признаков туберкулеза легких (таблица 5). Общая доля положительных результатов в этой группе на ПТАТ составила 55,4%, что ниже, чем у больных с сочетанной инфекцией (89,5%), но необычно высоко для пациентов без активного туберкулеза легких.

Распределение больных по стадиям ВИЧ-инфекции указало на то, что на ранних стадиях, не связанных с подавлением иммунологической реактивности, а именно в стадиях III и IVA частота обнаружения ПТАТ отличалась от таковой в группе сочетанного проявления ВИЧ-инфекции с легочными формами туберкулеза и составляли 84,6% и 53,6%) для III стадии и 100% и 88,2% для IVA стадии соответственно. На стадиях ВИЧ-инфекции, на уровне которых отмечается уже существенное снижение иммунитета проявлялись существенные различия в виде 54,5% и 87,5% для стадии IVB и наиболее выраженные для стадии IVB 0% и 88,8% для соответствующих групп с моноинфекцией ВИЧ и с сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ.

Таким образом, на фоне общеизвестного факта выраженного подавления иммунного ответа на многочисленные антигены и снижения показателей иммунного статуса у больных ВИЧ-инфекцией на поздних стадиях мы не обнаружили признаков подавления гуморального иммунного ответа на М. tuberculosis при сочетанном инфицировании ВИЧ и M.tuberculosis. Данный результат может быть следствием ус-

тойчивости вторичного иммунного ответа на М. tuberculosis у больных туберкулезом легких с преимущественно распространенными, а часто и генерализованными формами заболевания. Последнее является типичным для поздних стадий ВИЧ-инфекции. Другой возможный вариант объяснения может быть связан с выраженной поликлональ-ной активацией B-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных больных.

Причиной образования ПТАТ у 55,4% больных моноинфекцией ВИЧ можно объяснить с возможным ранее произошедшим инфицированием или латентной формой течения туберкулезной инфекции.

Важным оказался анализ образования специфических ЦИК у больных с разными формами туберкулеза легких. В группе больных с инфильтративным туберкулезом легких ПТАТ не обнаруживались в составе ЦИК. Образование ЦИК становилось возможным только при появлении в циркуляции антигенного материала и сопутствовало формам туберкулеза легких с распадом и генерализацией процесса преимущественно у бациллярных больных. При этом число положительных результатов составляло от 50 до 67% случаев заболевания. В группе больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ, ПТАТ принимали участие в образовании ЦИК уже на ранних стадиях заболевания (без рентгенологических признаков распада). Число положительных результатов составляло 50%, что еще раз подтверждало генерализацию инфекции M.tuberculosis уже на стадии инфильтративного туберкулеза легких. Таким образом, при туберкулезе (в зависимости от его формы) имеет место микобактериальная антигенемия и сенсибилизация к антигенам микобактерий как клеточного, так и гуморального типа, выраженная в разной степени.

Применявшиеся до настоящего времени методы определения антител позволяли оценивать их суммарное содержание в сыворотке крови без учета того, что в этой мозаике антител присутствуют антитела к антигенным детерминантам разной молекулярной массы, которые могут иметь неодинаковое как диагностическое, так и, возможно, прогностическое значение. Поэтому важным является разработка и использование методов, позволяющих провести определение анти-ТБ антител класса IgG к различным структурным белкам МБТ, которые могут определять характер и исход иммунологического разрешения туберкулезной инфекции (Ягафарова Р.К., Шендерова Р.И., Якунова O.A., Чужова Н.М., 2001; Гучетль Е.В., Пономарева Л.П., Сокол Л.А., 2004; Аутеншлюс А.И., Шкунов А.Н., 2004).

Исходя из вышеизложенного, нами была поставлена задача изу-

чить диагностическую значимость определения специфических антител (анти-ТБ) класса в сыворотке крови больных туберкулезом, с сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией, циркулирующих в свободном и связанном виде в ЦИК в реакции иммуноблот анализа (ИБ). В процессе изучения серологического ответа нам удалось получить антигенные компоненты МБТ с преобладанием низко- (11-30 кЕ>а), средне- (31-70 кОа) и высокомолекулярных (71-160 кБа) фракций для определения их диагностической значимости.

Изучение частоты выявления специфического спектра антител (методом ИБ), циркулирующих в свободном виде в сыворотке крови показало, что у всех больных туберкулезом легких определялись антитела к белкам с молекулярным весом в диапазоне 11-20 кЕ)а в 100% случаев (таблица 8). У 41,2% больных обнаруживались антитела к белкам в диапазоне 31-40 кОа и 41-50 кЕ)а. Следующими по частоте выявления были антитела к белкам МБТ с молекулярным весом 51-60 кОа (26,5%) и 61-70 кОа (26,5%). Антитела к антигенам в диапазоне 21-30 кОа обнаруживались у 23,5% больных туберкулезом. У 14,7% больных выявлялись антитела к белкам с 71-80 кОа и 91-100 кОа. Антитела класса к крупномолекулярным антигенам в диапазоне 101160 кОа обнаруживались лишь у 8,8% больных туберкулезом легких.

Таблица 8

Частота выявления спектра анти-ТБ класса у больных туберкулезом и здоровых лиц методом ИБ (%)

Группы Молекулярный вес в кБа

больных 6- 11- 21- 31- 41- 51- 61- 71- 81- 91- 101-

10 го 30 40 50 60 70 80 90 100 160

Туберкулез (п=34) - 100 23,5 41,2 41,2 26,5 26,5 14,7 5,9 14,7 8,8

Группа - - - 73,9 100 47,8 100 - - - -

здоровых (п=23)

В группе здоровых не были получены антитела на низкомолекулярные фракции антигена (как на 11-20 кОа, так и на 21-30 кОа). Антигенные фракции в 41-50 кОа и в 61-70 кЕ)а дали напротив 100% положительных результатов (таблица 8). Какова природа и функция антител к фракциям М. tuberculosis в 41-50 кБа и в 61-70 кОа пока не известно.

Дифференцированный анализ результатов в зависимости от

формы туберкулезного процесса, обнаружил 100% наличие свободно циркулирующих антител с низкомолекулярной фракцией (11-20 кОа) антигена при всех формах заболевания (таблица 9). Выявлялась закономерность отсутствия обнаружения антител методом ИБ с использованием крупномолекулярных (71-160 idDa) фракций М. tuberculosis у больных с малыми формами туберкулеза легких в стадиях без распада.

Среди больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ частота выявления антител класса IgG, циркулирующих в свободном виде в сыворотке крови, существенно не отличалась от таковой при туберкулезной моноинфекции (таблица 10). При использовании всего комплекса антигенных фракций среди спектра специфических антител у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ, доминировали по частоте антитела к белкам с молекулярным весом в диапазоне 11-20 кОа, хотя процент несколько снижался до 97,4% больных (отрицательные результаты встретились только в одном случае - у больного с туберкулезным плевритом). Следующими по частоте выявления были антитела к белкам МБТ с молекулярной массой 31-40 кОа (47,4%), 41-50 KDa (50%) и 61-70 кОа (50% больных). Антитела к антигенам в диапазоне 51-60 кБа обнаруживались у 44,7% больных, 21-30 кОа - у 42,1%. Также как у больных туберкулезом, при сочетанной инфекции ВИЧЯБ антитела к высокомолекулярным фракциям в диапазоне 7180 KDa (18,4%), 81-90 кОа (23,7%), 91-100 кОа (18,4%) и 101-160 кОа (18,4%) выявлялись в меньшем проценте случаев.

При всех ведущих формах туберкулеза легких, а именно ин-фильтративном туберкулезе легких с распадом, фиброзно-каверноз-ном туберкулезе легких и диссеминированном туберкулезе легких, у больных с сочетанной инфекцией фиксировали стопроцентную чувствительность метода ИБ. По другим фракциям уровень положительных результатов даже несколько увеличился и достигал 50%. По остальным показателям анализируемых групп не было существенных различий.

Распределение больных сочетанной инфекцией по стадиям ВИЧ показало отрицательные результаты у больных на стадии IVB, то есть в период наиболее выраженного иммунодефицита. Отрицательный результат достигал 12% для фракции 11-20 кОа. При этом только один отрицательный результат был зафиксирован у больного на стадии ГУБ.

Таблица 9

Частота встречаемости спектра анти-ТБ антител класса у больных туберкулезом в зависимости от формы туберкулеза методом ИБ (в %)

Формы туберкулеза Молекулярный вес в кОа

6-10 11-20 21-30 31-40 41-50 51-60 61-70 71-80 81-90 91100 101160

Очаговый туберкулез легких (п=7) сыворотка - 100 14,3 28,6 42,8 143 143 - - - -

ЦИК - 14,3 - 143 - 28,6 - - - - -

Инфильтративный туберкулез легких (п=9) сыворотка - 100 11,1 44,4 33,3 22,2 22,2 - - - -

ЦИК - 33,3 ззз 333 - - 11,1 - - -

Инфильтративный туберкулез легких в фазе распада (п=11) сыворотка - 100 36,4 45,5 45,5 36,4 36,4 273 9,09 273 18,2

ЦИК - 54,5 45,5 45,5 273 273 9,09 - - - -

Фиброзно-кавернозный туберкулез легких (п=7) сыворотка - 100 28,6 42,9 42,9 28,6 28,6 28,6 143 28,6 143

ЦИК - 57,1 42,8 57,1 57,1 28,6 28,6 - - - -

Туберкулез легких (всего) (п=34) сыворотка - 100 23,5 41,2 41,2 26,5 26,5 14,7 5,9 14,7 8,8

ЦИК - 38,2 32,3 38,2 20,6 20,6 11,8 - - - -

Таблица 10

Частота выявления анти-ТБ класса ^О у больных сочетанной инфекцией ВИЧЯБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза методом ИБ (в %)

Группы больных Молекулярньн л вес в кОа

610 1120 2130 3140 4150 5160 6170 7180 8190 91100 101160

ТБ/ВИЧ (п=38) - 97,4 42,1 47,4 50 44,7 50 18,4 23,7 18,4 18,4

ВИЧ (п=92) - 26,1 13,0 21,7 21,7 19,6 23,9 10,9 0 Ы 6,5

Таким образом, предложенный метод обнаружения ПТАТ имел высокую чувствительность в условиях совместного течения туберкулеза легких на фоне ВИЧ инфекции. Определенное снижение чувствительности наблюдалось только на IVB стадии ВИЧ инфекции, в период тяжелейшего иммунодефицита.

Совершенно необычно по сравнению с ранее рассмотренными данными выглядели результаты исследования 92 пациентов, находящихся на различных стадиях ВИЧ моноинфекции (таблица 10). Во-первых, несмотря на отсутствие у больных клинико-рентгенологи-ческих признаков туберкулеза легких в сыворотке крови определялись анти-ТБ антитела. Правда, процент положительных находок был значительно ниже по всем тестируемым фракциям антигенов М. tuberculosis. Максимальной выраженности ответ был отмечен на фракцию 11-20 кБа, однако он установлен только в 26,1%.

Частота положительных результатов в зависимости от стадии ВИЧ-инфекции свидетельствовала об отсутствии каких-либо закономерностей их распределения разным стадиям заболевания. Наибольшая доля положительных результатов (45,4%) обнаруживалась у больных в 1УБ стадии заболевания. Переход же в стадию IVB, то есть в стадию выраженного иммунодефицита, был сопряжен со снижением числа положительных результатов. Все низко- и среднемолеку-лярные фракции антигенов М. tuberculosis, включая фракцию в 11-20 кОа, антитела в реакции ИБ обнаружены были только у одного больного.

Важным оказался анализ обнаружения антител к низкомолекулярным фракциям M.tuberculosis у 26,1% больных, находящихся на различных стадиях ВИЧ-моноинфекции. На протяжении 24 месячного периода наблюдения за больными ВИЧ-инфекцией нами было за-

фиксировано развитие клинических форм туберкулеза у 24 (26,1%) из 92 обследованных больных. На сроках в 6 месяцев у 3 больных, 6-18 месяцев - у 8 человек и через 18-24 месяца у 13 больных из числа ВИЧ-инфицированных больных. Проведенные исследования, сопоставленные с частотой и выраженностью определения ПТАТ методом ИФА и ИБ у больных ВИЧ-инфекцией позволили нам сделать расчет прогностической значимости примененных методик с расчетом положительного (ППП) и отрицательного (ОПП) прогностического показателя.

ППП (ИФА) = —^—^1оо=43%

V / 22 + 29

ОПП (ИФА) = —^-;с100 =95%

' 39 + 2

Следовательно, на сроках 24 месячного наблюдения прогностическая значимость положительных ИФА тестов у ВИЧ-инфицированных больных составляет только 43% при высоком уровне отрицательного прогноза в 95%. Возможно на более длительном сроке наблюдения цифры могли бы измениться, но это уже чрезмерно большой срок для решения вопросов выбора терапии у больных.

ППП (ИБ) =—^-люо=100%

4 у 24 + 0

ОПП (ИБ) = -^юо=100% 4 У 68 + 0

Таким образом, и в случаях нестандартного ответа по выявлению ПТАТ у больных ВИЧ-инфекцией без туберкулеза предложенный метод ИБ с фракционированием микобактериальных антигенов, в зависимости от их молекулярного веса, имел по сравнению со стандартным методом ИФА выраженные преимущества. По-видимому, он выявлял латентные формы заболевания, которые в течение 24 месячного периода 100% реализовались в активную форму туберкулеза. При этом в отличие от ИФА метода мы получили 100% положительного прогноза.

ВЫВОДЫ

1. В Республике Татарстан за период 2000-2007 гг. отмечается рост активного туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией, обусловленный особенностями течения болезни и трудностями его диагностики на поздних стадиях и, как следствие, приведший к росту летальности от туберкулеза, как непосредственной причины смерти с 27% в 2003

году до 63,2% в 2007 году.

2. Сочетанная патология ВИЧ/ТБ, в отличие от ВИЧ-инфекции без туберкулеза, характеризуется значительным утяжелением течения заболевания с выраженным инфекционно-токсическим (59,5%), асте-новегетативным (85,7%) и бронхолегочным синдромами (75,0%) и сопровождается двукратным ускорением темпов её прогрессирования (Р<0,05).

3. Туберкулез, сформировавшийся до инфицирования ВИЧ (ТБ/ВИЧ), протекает с преобладанием легочных форм туберкулеза с выраженным бронхолегочным синдромом - 85,7% (р<0,05). Развитие активной формы туберкулеза на фоне исходной ВИЧ-инфекции (ВИЧ/ТБ), особенно на более поздних стадиях со сформировавшимся иммунодефицитом, приобретает тяжелые генерализованные и диссе-минированные формы с наибольшей выраженностью инфекционно-токсического синдрома - 67,3% (р<0,05).

4. Сочетанная инфекция ВИЧ/ТБ сопровождается достоверным увеличением содержания активированных лимфоцитов (НЬА-Б11+) по сравнению с моноинфекцией ВИЧ, что свидетельствует о дополнительном стимулирующем воздействии МлиЬегси1оз18.

5. Присоединение туберкулеза к ВИЧ-инфекции сопровождается достоверно более высоким повышением активации нейтрофильного звена по спонтанному НСТ-тесту (р<0,01) и более высоким содержанием сывороточных (р<0,01) и (р<0,05) по сравнению с моноинфекцией ВИЧ.

6. Диагностика туберкулеза легких у ВИЧ-негативных пациентов с применением иммуноферментного анализа характеризуется низкой чувствительностью метода при малых формах туберкулеза -28,6%, с увеличением её при инфильтративной форме и фиброзно-кавернозном туберкулезе легких до 90,9% и 85,7% соответственно (р<0,001).

7. У больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ выявляется нарастание диагностической чувствительности метода иммуноферментного анализа до 89,5%, со значительным увеличением титра сывороточных противотуберкулезных антител и сохранением выраженности ответа даже на поздних стадиях ВИЧ-инфекции (88%).

8. У больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ противотуберкулезные антитела, определяемые методом ИФА, принимают участие в образовании циркулирующих иммунных комплексов уже на ранних стадиях заболевания, а у больных туберкулезом без ВИЧ-инфекции

только при наличии деструкции легочной ткани.

9. Антитела класса IgG к структурным компонентам М. tuberculosis на основе метода иммуноблотгинга с использованием фракции антигена в диапазоне 11-20 KDa являются критерием активности туберкулезного процесса в группе больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ, больных туберкулезом и ВИЧ-инфекцией.

10. В группе больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ противотуберкулезные антитела в реакции иммуноблот анализа принимают участие в образовании циркулирующих иммунных комплексов уже на ранних стадиях заболевания (50,0%).

Практические рекомендации

1. С целью улучшения ранней диагностики туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и подключения своевременной ВААРТ, химио-профилактики туберкулеза рекомендуется консультация фтизиатра, проведение два раза в год рентгенологического (флюорография) обследования, и постановки туберкулиновой пробы два раза в год.

2. В условиях снижения информативности рентгенологического и бактериологического методов диагностики туберкулеза у больных в стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции необходимо проведение серологических методов исследования.

3. Целесообразно больным ВИЧ-инфекцией в стадии вторичных заболеваний проведение специфических методов диагностики туберкулеза (ИФА, ИБ) с количественным и качественным определением спектра антител, циркулирующих в свободном и в связанном виде в ЦИК.

4. Для определения долгосрочного прогноза течения болезни и тактики ведения больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ необходим дифференцированный подход, учитывающий время выявления активного туберкулеза, содержание в периферической крови активированных Т-лимфоцитов (и их популяционного состава), фагоцитарную активность нейтрофилов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Коксин В.П. Мониторинг некоторых иммунохимических показателей на различных стадиях ВИЧ-инфекции / В.П. Коксин, И.М. Хаертынова, И.Г. Мустафин, Л.И. Бадриева, Н.В. Ткачева, Г.А.

Рязанова, О.М. Романенко //Материалы III съезда иммунологов и аллергологов СНГ. - Сочи, 2000. - С. 88-89.

2. Коксин В.П. Спектр Анти-ВИЧ антител иммунных комплексов сывороток крови при различных клинических статусах ВИЧ-больных / В.П. Коксин, И.М. Хаертынова, Л.И. Бадриева, Д.К. Баширова, Т.Г. Мустафин //Материалы VI Российско-Итальянской конференции: Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика. - С-Петербург, 2000. - С. 115-116.

3. Хаертынова И.М. Мониторинг активности анти-ВИЧ антител к белкам генов gag, pol и env ВИЧ при антиретровирусной терапии ВИЧ-больных / И.М.Хаертынова, В.П. Коксин, Л.И. Бадриева, Т.Г. Мустафин, О.М. Романенко // Материалы VI Российско-Итальянской конференции: Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика. - С-Петербург, 2000. - С. 274-275.

4. Хаертынова И.М. Иммунохимические аспекты диагностики и контроля антиретровирусной терапии ВИЧ больных / И.М. Хаертынова, Д.К. Баширова, Г.А. Рязанова, М.В. Макарова, В.П. Коксин, И.Г.Мустафин // Материалы научно-практ. конференции с международным участием. - Харьков, 2001. - С. 253-254.

5. Баширова Д.К. Ретроспективная диагностика острой фазы ВИЧ-инфекции / Д.К. Баширова, И.М. Хаертынова, Э.А. Замятина, О.М. Романенко // Каз. мед. журнал. - 2001. - №6. - С. 417-420.

6. Зиганшин И.М. Влияние социально-психологических признаков на формирование личности наркологических больных / И.М. Зиганшин, И.М. Хаертынова //Каз. мед. журнал. - 2002. - №4. - С. 328329.

7. Рязанова Г.А. Выявление скрытых анти-Вич-антител в циркулирующих иммунных комплексах сыворотки крови при ВИЧ-инфекции / Г.А. Рязанова, В.П. Коксин, И.Г. Мустафин, И.М. Хаертынова, О.М. Романенко,Э.А. Замятина //Тез. докл. III съезда биохимиков. - С-Петербург, 2002. - С. 211.

8. Хаертынова И.М. Ретроспективный анализ клинических признаков ВИЧ-инфекции / И.М.Хаертынова, Д.К. Баширова, О.М. Романенко, Ф.К. Сиразиева, Э.А. Замятина // Материалы VII съезда Итало-Российского общества по инфекционным болезням: Проблема инфекции в клинической медицине. - С-Петербург, 2002. - С. 393-394.

9. Хабарова В.Р. Частота оппортунистических инфекций у больных ВИЧ-инфекцией / В.Р. Хабирова, И.М. Хаертынова, Р.В. Хамзина // Материалы VII съезда Итало-Российского общества по

инфекционным болезням: Проблема инфекции в клинической медицине. - С-Петербург, 2002. - С. 394-395.

10. Хаертынова И.М. Оппортунистические заболевания при ВИЧ-инфекции /И.М, Хаертынова, В.Р. Хабирова, Р.В. Хамзина // Материалы Юбилейной научно-практ. конференции, посвящ. 70 летаю кафедры инфекционных болезней КГМУ: Микроэкология матери и ребенка, принципы диагностики и лечения. - Казань, 2002. - С. 8485.

11. Мустафин И.Г. Изучение активности антител к нативной ДНК (НДНК) в сыворотках крови ВИЧ-инфицированных в процессе развития инфекции / И.Г. Мустафин, В.П. Коксин, Г.А. Рязанова, И.М. Хаертынова, Л.Н. Килина // Материалы VI Российского съезда врачей-инфекционистов. - С-Петербург, 2003. - С. 264.

12. Зиганшин И.М. Влияние социально-психологических факторов на формирование личности наркологических больных / И.М. Зиганшин, Л.И. Шамагина, Н.М. Кулькова, И.М. Хаертынова //Материалы научно-практ. конференции «Ислам против наркомании. Россия, Татарстан». - Казань, 2003. - С. 79-85.

13. Баширова Д.К. Влияние стажа наркомании на течение и прогноз ВИЧ-инфекции / Д.К. Баширова, В.Р. Хабирова, И.М. Хаертынова // Каз. мед. журнал. - 2004. -Т. 85, №3. - С. 177-180.

14. Хабирова В.Р. Септические поражения легких у ВИЧ-инфицированных больных / В.Р. Хабирова, И.М. Хаертынова //Сб. научн. трудов научно-практ конференции, посвящ. 199-летию Харьковского нац. университета и 80-летию кафедры инфекционных болезней ХМАПО: Сепсис. Патогенез, диагностика и терапия. - Харьков, 2004. - С. 224-225.

15. Хабирова В.Р. Информационные технологии в прогнозировании течения ВИЧ инфекции / В.Р. Хабирова, И.М. Хаертынова //Тез. докл. научно-практ. конференции молодых ученых КГМА. - Казань, 2004. - С. 107-108.

16. Хабирова В.Р. Клинико-иммунологические особенности ВИЧ инфекции при различных путях заражения / В.Р.Хабирова, И.М. Хаертынова// Каз. мед. журнал. - 2004. - №5. - С. 367-370.

17. Баширова Д.К. Клинико-иммунологические особенности течения хронического вирусного гепатита С при НСУ-моноинфекции и НСУ+Н1У-коинфекции / Д.К.Баширова, О.М.Романенко, И.М. Хаертынова, А.П. Цибулькин // Каз. мед.журнал. - 2005. - Т. 86, №2. - С. 142-149.

18. Хамзина P.B. Клинико-иммунологические особенности ВИЧ-инфекции, сочетанной с туберкулезом / Р.В.Хамзина, И.М. Ха-ертынова, Р.Ш. Валиев, О.М.Романенко, Н.Р.Валиев // Сб. материалов научно-практ. конференции: Проблемы туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией. - М., 2005. - С. 121-124.

19. Хабирова В.Р. Применение нейронных сетей в прогнозировании течения ВИЧ-инфекции / В.Р.Хабирова, И.М. Хаертынова // Тез. докл. научно-практ. конференции. - Харьков, 2005. - С. 38-39.

20. Валиев Р.Ш. Клинико-иммунологические особенности течения туберкулеза в сочетании с ВИЧ-инфекцией / Р.Ш.Валиев, И.М. Хаертынова, О.М. Романенко, Р.В.Хамзина, Н.Р.Валиев, Г.Н. Файзут-динова, Н.М. Насреева // Ж. Проблемы туберкулеза и болезней легких. -2005.-№10. -С.31-34.

21. Баширова Д.К. Сепсис при ВИЧ-инфекции / Д.К. Баширо-ва, И.М. Хаертынова, Р.В.Хамзина, И.И.Хамзин, Э.М. Люстигман, Г.Н. Файзутдинова, И.И. Закирова //Материалы научно-практ. конференции с международным участием «Сепсис проблемы диагностики, терапии и профилактики». - Харьков, 2006. - С. 38-39.

22. Хаертынова И.М. Особенности течения сепсиса у больных ВИЧ-инфекцией / И.М. Хаертынова, О.М. Романенко, Ф.К.Сиразиева, Э.А. Замятина, Е.В. Курмашева, Р.Ю. Микусев, Р.В.Хамзина // Материалы научно-практ. конференции с международным участием «Сепсис проблемы диагностики, терапии и профилактики». - Харьков, 2006.-С.232-233.

23. Хаертынова И.М. Антиретровирусная терапия больных ВИЧ-инфекцией, сочетанной с туберкулезом / И.М.Хаертынова, Д.К. Баширова, Р.В. Хамзина //Материалы Российской научно-практ. конференция, посвящ. 110-летию кафедры инфекционных болезней BMA им. C.B. Кирова. - С-Петербург, 2006. - С.307.

24. Хаертынова И.М. Клинико-эпидемиологические аспекты микстинфекции ВИЧ/СПИД+туберкулез в Республике Татарстан / И.М. Хаертынова, Ф.К. Сиразиева // Ж. Практическая медицина. -2006.-№4(18).-С.32-33.

25. Хаертынова И.М. Эпидемиологическая характеристика особенностей течения ВИЧ-инфекции в Республике Татарстан / И.М. Хаертынова, И.М. Фазульзянова, Ф.К. Сиразиева, Д.К. Баширова, О.М. Романенко, Л.В. Ставропольская // Практическая медицина. -200. - №4(18). - С.43-44.

26. Романенко О.М. Динамика гуморального иммунного ответа

у больных хроническим вирусным гепатитом С при HCV-моно и HCV +Н1У-коинфекции / О.М. Романенко, А.П. Цибулькин, Д.К. Ба-широва, И.М. Хаертынова // Сб. тез. VII Российского съезда инфекционистов. - М., 2006. - С. 177.

27. Фазульзянова И.М. Эпидемиологические особенности течения ВИЧ-инфекции в Республике Татарстан / И.М. Фазулзянова, И.М. Хаертынова, О.М.Романенко, Р.В. Хамзина // Сб. тез. VII Российского съезда инфекционистов. - М., 2006. - С.189.

28. Хаертынова И.М. Клинико-иммунологические особенности ВИЧ-инфекции, сочетанной с туберкулезом на фоне антиретровирус-ной терапии / И.М. Хаертынова, Р.В. Хамзина // Сб. тез. VII Российского съезда инфекционистов. - М., 2006. - С.268.

29. Хаертынова И.М. Туберкулиновая проба у больных ВИЧ-инфекцией, сочетанной с туберкулезом, на фоне антиретровирусной терапии / И.М.Хаертынова, Д.К.Баширова, О.М.Романенко, Р.В. Хамзина // Сб. тез. VII Российского съезда инфекционистов. - М., 2006. -С.268.

30. Сиразиева Ф.К. Особенности течения туберкулеза в бессимптомной стадии ВИЧ-инфекции / Ф.К. Сиразиева, И.М. Хаертынова, И.Г. Мустафин, В.Х. Фазылов, О.М. Романенко, H.A. Иванова // Материалы научно-практ. конференции с международным участием «Проблемы туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией». - М., 2007. -С.57-59.

31. Сиразиева Ф.К. Клинико-иммунологические особенности сочетанной инфекции туберкулез/ВИЧ у больных с бессимптомной стадией ВИЧ-инфекции / ФХСиразиева, И.М. Хаертынова, И.Г. Мустафин, В.Х. Фазылов, О.М. Романенко, Н.А.Иванова // Материалы юбилейной научно-практ. конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии». - Казань, 2007. - С.50-51.

32. Хаертынова И.М. Противотуберкулезные антитела к антигенам микобактерий туберкулеза у больных сочетанной ВИЧ/ТБ-инфекцией / И.М. Хаертынова, О.Г. Лазаренко, Р.К. Галеева, Н.И. Николаева, П.М. Черемин //Материалы юбилейной научно-практ. конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии». - Казань, 2007. - С.53-54.

33. Хаертынова И.М. Противотуберкулезные антитела у больных ВИЧ/ТБ-инфекцией / И.М. Хаертынова, Ф.К. Сиразиева, Э.М. Люстигман, З.Л. Хамидуллина, А.Н. Денисов // Материалы юбилейной научно-практ. конференции «Актуальные вопросы инфекцион-

ной патологии». - Казань, 2007. - С.54.

34. Хаертынова И.М. Клинико-эпидемиологические особенности туберкулеза при сочетанной ВИЧ/ТБ-инфекции в РТ / И.М. Хаертынова, Р.Ш. Валиев, А.П. Цибулькин, Н.Р. Валиев, Ф.К. Сиразиева, О.М. Романенко // Материалы научно-практ. конференции «Актуальные вопросы фтизиатрии». - Белгород, 2007. - С. 75-76.

35. Валиев Р.Ш. Значение противотуберкулезных антител у больных ВИЧ/ТБ-инфекцией / Р.Ш. Валиев, И.М. Хаертынова, Н.Р. Валиев, Ф.К. Сиразиева // Материалы VIII Российского съезда фтизиатров «Туберкулез в России год 2007». - М., 2007. - С. 360.

36. Хаертынова И.М. Антитела к структурным компонентам микобактерий туберкулеза у больных сочетанной ВИЧ/ТБ-инфекцией / И.М. Хаертынова, Р.Ш. Валиев, А.П. Цибулькин, К.С. Хаертынов, Н.Р. Валиев, О.М. Романенко, Ф.К. Сиразиева // Материалы VIII Российского съезда фтизиатров «Туберкулез в России год 2007». - М., 2007. - С. 390.

37. Хаертынова И.М. Особенности формирования гуморального иммунного ответа у больных туберкулезом / И.М. Хаертынова, Р.Ш. Валиев, А.П. Цибулькин, Ф.К. Сиразиева, К.С. Хаертынов, Н.Р. Валиев // Ж. Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2007. - №8. -С.47-58.

38. Хаертынова И.М. Определение антител к структурным компонентам микобактерий туберкулеза у больных сочетанной ВИЧ/ТБ-инфекцией / И.М. Хаертынова, Н.Р. Валиев, Р.Ш. Валиев, К.С. Хаертынов // Сб. научн. трудов XVII Национального конгресса по болезням органов дыхания. - Казань, 2007. - С. 171.

39. Хаертынова И.М. Диагностическое значение специфических противотуберкулезных антител у больных сочетанной ВИЧ/ТБ-инфекцией и другой патологией легких / И.М. Хаертынова, Ф.К. Сиразиева, К.С. Хаертынов, О.Г. Лазаренко, С.Э. Романенко // Тез. докл. 7-го симпозиума гепатологов Белоруссии «Международный ЕвроАзиатский конгресс» по инфекционным болезням. - Витебск, 2008. -С. 33-34.

40. Хаертынова И.М. Соотношение специфичности и чувствительности определения противотуберкулезных антител (ПТАТ) методом ИФА в группах ВИЧ-негативных и ВИЧ-позитивных больных туберкулезом легких (ТБЛ) / И.М. Хаертынова, Р.Ш. Валиев, К.С. Хаертынов, О.М. Романенко // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2 (11). - №2-3. - С. 271.

Vj

41. Хаертынова И.М. Диагностическая ценность определения противотуберкулезных антител (ПТАТ) в свободном виде и в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) у больных туберкулезом легких (ТБЛ) / И.М. Хаертынова, А.П. Цибулькин, К.С. Хаерты-нов, О.М. Романенко // Российский иммунологический журнал. -2008. - Т. 2 (11). - №2-3. - С. 262.

42. Цибулькин А.П. Особенности специфического гуморального иммунного ответа у ВИЧ-инфицированных больных туберкулезом легких (ТБЛ) / А.П.Цибулькин, И.М. Хаертынова, О.М. Романенко, К.С. Хаертынов // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2(11).-№2-3.-С. 271.

43. Хаертынова И.М. Особенности сочетанной ВИЧ/ТБ-инфекции в РТ / И.М. Хаертынова, Ф.Н.Сабаева // Ж. Общественное здоровье и здравоохранение. - 2008. - №1. - С. 21-23.

44. Хаертынова И.М. ВИЧ-инфекция и туберкулез: учебное пособие / И.М. Хаертынова. - Казань: КГМА, 2008.-45 с.

Список сокращений

АГ - антиген АТ - антитело

анти-ТБ - антитуберкулезные антитела ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ВН - вирусная нагрузка

ВААРТ - высокоактивная антиретровирусная терапия

ИТУ - исправительно-трудовые учреждения

ИТС - инфекционно-токсический синдром

МБТ - микобактерии туберкулеза

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПТАТ- противотуберкулезные антитела

ИФА- иммуноферментный анализ

ИБ - иммуноблот анализ

СД4 - лимфоциты - Т-хелперы/индукторы

CD4/CD8 - иммунорегуляторный индекс

С08-лимфоциты - Т-супрессоры/киллеры

ТБ - туберкулез

ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы kDa - молекулярная масса в килодальтонах

Подписано в печать 23.09.2008. Тираж 150 экз. Заказ М-103

Отдел оперативной полиграфии ГУЗ «РМБИЦ» 420059 Казань, ул. Хади Такташа, 125

Актуальность проблемы. В настоящее время проблема туберкулеза в сочетании с ВИЧ-инфекцией является одной из самых актуальных (UNAIDS, 2003). Во всем мире рост числа ВИЧ-инфицированных пациентов способствовал повышению заболеваемости туберкулезом. В глобальном масштабе туберкулез - одна из главных причин смертности у ВИЧ-инфицированных лиц (Покровский В.В., Ермак Т.Н., Беляева В.В. и др., 2004; Ерохин В.В., Корнилова З.Х., Алексеева Л.П., 2005; Литвинова Н.Г., Кравченко А.В., Шахгиль-дян В.И. и др., 2007; Stiblo К., 1990; Corbett E.L., Watt C.J., Walker N., 2003). По оценкам ВОЗ, в начале XXI века в мире ежегодно развивается около 9 млн. новых случаев туберкулеза и почти 10% из них являются ВИЧ-позитивными.

ВИЧ-индуцированная иммуносупрессия значительно повышает риск заболевания туберкулезом вследствие как реактивации латентной туберкулезной инфекции, так и экзогенной суперинфекции (Фролова О.П., 2001; Кравченко А.В., 2005; Нанн П., 2005; Murtay C.L., Mills J., 1990; Badri M., 2001; Manas E., 2004). Показано, что риск развития туберкулеза значительно повышен уже в первый год после сероконверсии к ВИЧ (Sonnenberg Р., 2005). В свою очередь, туберкулез неблагоприятно влияет на течение самой ВИЧ-инфекции (Щелканова А.В., 2003; Нанн П., 2005; Ленок Г.В., Бондарчук О.В., Былкова O.K., Рахманова А.Г., 2007; Пантелеева О.В., Нечаев В.В., Иванов А.К. и др., 2007; Whalen С., 2000). Доказано, что in vitro под действием антигенов микобактерий туберкулеза происходит увеличение репликации вируса ВИЧ (Goletti D., Weissman D., Jackson R.W. et al., 1996; Toossi Z., Mayanja-Kizza H., Baseke J. et al., 2005).

По данным Европейского респираторного бюро ВОЗ Россия в настоящее время относится к числу стран Европы, в которых проблема туберкулеза и ВИЧ-инфекции стоит наиболее остро (Онищенко Г.Г., 2003; Бабаева И.Ю., Демихова О.В., Шевченко Н.П. и др., 2007). Так, в 2006 году по сравнению с

2005 годом в РФ отмечено увеличение на 33,3% числа зарегистрированных случаев туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией. За 2005-2006 гг. темпы роста впервые выявленной сочетанной патологии составили более 30%. Среди лиц, имеющих поздние стадии ВИЧ-инфекции, туберкулез установлен более чем в 50-60% случаев (Алексеева А.П., 2008). Среди лиц, умерших от ВИЧ-инфекции, основной причиной смерти был туберкулез почти в 60% случаев. Рост абсолютного числа лиц, умерших от сочетанной инфекции в 2006 году, по сравнению с 2005 годом, составил 41% (Какорина Е.П., Фролова О.П., Михайлова Л.А., 2007).

Сочетание ВИЧ-инфекции с туберкулезом, особенно при наличии лекарственной устойчивости, характеризуется многообразием клинических проявлений заболевания и тенденцией к генерализации специфического процесса (Покровский В.В., Фролова О.П., Кравченко А.В. и др., 2002; Андреева О.А., Марьяндышев О.А., Низовцева Н.И., Игумнова Е.Г., 2007; Корнилова З.Х., Зебницкая И.С., Алексеева Л.П., 2007; Ленок Г.В., Бондарчук О.В., Был-кова O.K., Рахманова А.Г., 2007; Пантелеев A.M., Супрун Т.Ю., Иванов А.К., Максимов Г.В., 2007; Пантелеева О.В., Нечаев В.В., Иванов А.К. и др., 2007; Styblo К., 1990). Большинство авторов отмечают сложность диагностики туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией, особенно в стадии вторичных заболеваний (Вовк А.Д., Антонян С.Н., Федоченко С.В. и др., 2003; Рахманова А.Г., Виноградова Е.Н., Воронин Е.Е., Яковлев А.А., 2004; Champ М.Е., Hickey М.М., Gazzara М.М., 1993). Доказано, что в формировании различных вариантов течения и исходов туберкулезной инфекции важная роль принадлежит состоянию иммунной системы пациента. В связи с этим актуальность изучения состояния специфического гуморального иммунного ответа на туберкулезную инфекцию не вызывает сомнения. Изучение иммунопатогенетических механизмов туберкулезной инфекции может явиться основой для создания специфических иммунохимических тестов серологической диагностики туберкулеза как при моноинфекции, так и при сочетанном течении с ВИЧинфекцией (Кравченко А.В., Юрин О.Г., Алексеева Л.П. и др., 1996; Адамбе-ков Д.А., Курманов Р.А., Баенский А.В., Литвинов В.И., 1997; Стаханов В.А., Васильев Н.А., Леви Д.Т., Рухамина М.Л., 2001; Аутеншлюс А.И., Шкунов А.Н., 2004).

Таким образом, рост сочетанной патологии вызывает необходимость изучения особенностей течения туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и определения четких критериев специфической серологической диагностики туберкулеза.

Выше изложенное послужило основанием для выполнения настоящей работы.

Цель исследования: изучить клинико-иммунологические особенности течения туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и разработать новые подходы повышения специфичности серологических методов диагностики активности туберкулеза.

Задачи исследования:

1. Выявить эпидемиологические особенности сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ в Республике Татарстан.

2. Изучить клинико-иммунологические особенности туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией.

3. Провести сравнительное исследование определения противотуберкулезных антител в сыворотке крови больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза методом иммунофер-ментного анализа.

4. Определить диагностическую значимость противотуберкулезных антител в составе циркулирующих иммунных комплексов у больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и ВИЧ-инфекцией без туберкулеза методом иммуноферментного анализа.

5. Изучить формирование антител класса IgG к различным структурным компонентам микобактерий туберкулеза в сыворотке крови и в составе циркупирующих иммунных комплексов методом иммуноблот анализа и определить группы антигенных компонентов для диагностики туберкулеза у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ.

6. Оценить диагностическую и прогностическую значимость определения антител класса IgG к структурным компонентам микобактерий туберкулеза методом иммуноблот анализа у больных ВИЧ-инфекцией.

Научная новизна исследования. Выявлены эпидемиологические особенности сочетанной инфекции ВИЧ/ТБ в Республике Татарстан.

Впервые разработана и использована оригинальная модификация метода иммуноферментного анализа для количественной и качественной оценки противотуберкулезных антител в составе специфических циркулирующих иммунных комплексов.

Впервые сформирован диагностический иммуноблот стрип, содержащий полный спектр антигенов М. tuberculosis.

Впервые определена группа антигенных компонентов М. tuberculosis выделенных от больных туберкулезом, дающих максимальную специфичность при диагностике туберкулеза.

Выявлены серологические маркеры - предикторы активности "туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией.

Практическая значимость работы. Оценена эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в сочетании с ВИЧ-инфекцией в Республике Татарстан, которая позволила рекомендовать практическому здравоохранению системное мониторирование больных ВИЧ-инфекцией на туберкулез.

Модифицирован и рекомендован к практическому применению метод иммуноферментного анализа для выявления противотуберкулезных антител, циркулирующих в свободном и связанном виде в составе циркулирующих иммунных комплексов крови при диагностике активности туберкулеза, в том числе у больных ВИЧ-инфекцией.

Рекомендован для практического здравоохранения новый подход к диагностике активности туберкулеза на основе реакции иммуноблот анализа.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований внедрены в практическую деятельность Республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями МЗ РТ, Республиканского клинического противотуберкулезного диспансера МЗ РТ, а также используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней и кафедры фтизиатрии и пульмонологии ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия ФА 3 и СР».

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: VI Российско-Итальянской конференции: Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика (С-Петербург, 2000); III съезде биохимиков (С-Петербург, 2002); VII съезде Итало-Российского общества по инфекционным болезням: Проблема инфекции в клинической медицине (С-Петербург, 2002); VI Российском съезде врачей-инфекционистов (С-Петербург, 2003); научно-практической конференции молодых ученых КГМА (Казань, 2004); VII Российском съезде инфекционистов (Н. Новгород, 2006); VIII Российском съезде фтизиатров (Москва, 2007), XVII Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Казань, 2007), IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007), научно-практической конференции с международным участием «Проблемы туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией» (Москва, 2007), научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии» (Казань, 2007); совместном заседании кафедры фтизиатрии и пульмонологии, кафедры инфекционных болезней, кафедры клинической лабораторной диагностики ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия ФА 3 и СР» и кафедры инфекционных болезней, кафедры детских инфекций, кафедры патофизиологии, кафедры фтизиопуль-монологии ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет ФА 3 и СР» (Казань, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 44 научные работы, в том числе 1 учебное пособие.

Положения, выносимые на защиту:

1. Сочетание ВИЧ инфекции и туберкулеза приводит к остро прогрессирующему течению заболевания с быстрым летальным исходом на поздних стадиях ВИЧ-инфекции.

2. Клинические формы и тяжесть течения туберкулеза зависят от первичности возникновения туберкулеза и ВИЧ-инфекции и наиболее выражены при ВИЧ-инфекции в стадии вторичных заболеваний.

3. Увеличение степени активации Т-лимфоцитов (HLA-DR+) и метаболической активности нейтрофилов (спонт-НСТ тест) являются признаками поликлональной активации, обнаруживаемые у больных ВИЧ-инфекцией и в большей степени проявляющиеся при сочетанном течении ВИЧ/ТБ.

4. Метод иммуноферментного анализа обладает низкой чувствительностью при малых формах туберкулеза и имеет диагностическое значение только при распространенных формах туберкулеза или при сочетании его с ВИЧ-инфекцией.

5. У больных туберкулезом противотуберкулезные антитела, определяемые методом иммуноферментного анализа, принимают участие в образовании циркулирующих иммунных комплексов только при наличии деструкции ткани, а у больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и на более ранних стадиях заболевания.

6. Антитела класса IgG к структурным компонентам М. tuberculosis, определяемые на основе метода иммуноблот анализа, с использованием фракции антигена 11-20 к1)а, являются критерием активности туберкулезного процесса у больных туберкулезом, сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ и имеют прогностическое значение при ВИЧ-инфекции.

Выводы

1. В Республике Татарстан за период 2000-2007 гг. отмечается рост активного туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией, обусловленный особенностями течения болезни и трудностями его диагностики на поздних стадиях и, как следствие, приведший к росту летальности от туберкулеза, как непосредственной причины смерти с 27% в 2003 году до 63,2% в 2007 году.

2. Сочетанная патология ВИЧ/ТБ, в отличие от ВИЧ-инфекции без туберкулеза, характеризуется значительным утяжелением течения заболевания с выраженным инфекционно-токсическим (59,5%), астеновегетативным (85,7%) и бронхолегочным синдромами (75,0%) и сопровождается двукратным ускорением темпов её прогрессирования (р<0,05).

3. Туберкулез, сформировавшийся до инфицирования ВИЧ (ТБ/ВИЧ), протекает с преобладанием легочных форм туберкулеза с выраженным бронхолегочным синдромом - 85,7% (р<0,05). Развитие активной формы туберкулеза на фоне исходной ВИЧ-инфекции (ВИЧ/ТБ), особенно на более поздних стадиях со сформировавшимся иммунодефицитом, приобретает тяжелые генерализованные и диссеминированные формы с наибольшей выраженностью инфекционно-токсического синдрома - 67,3% (р<0,05).

4. Сочетанная инфекция ВИЧ/ТБ сопровождается достоверным увеличением содержания активированных лимфоцитов (HLA-DR+) по сравнению с моноинфекцией ВИЧ, что свидетельствует о дополнительном стимулирующем воздействии M.tuberculosis.

5. Присоединение туберкулеза к ВИЧ-инфекции сопровождается достоверно более высоким повышением активации нейтрофильного звена по спонтанному НСТ-тесту (р<0,01) и более высоким содержанием сывороточных IgM (р<0,01) и IgG (р<0,05) по сравнению с моноинфекцией ВИЧ.

6. Диагностика туберкулеза легких у ВИЧ-негативных пациентов с применением иммуноферментного анализа характеризуется низкой чувствительностью метода при малых формах туберкулеза - 28,6%, с увеличением её при инфильтративной форме и фиброзно-кавернозном туберкулезе легких до 90,9% и 85,7%) соответственно (р<0,001).

7. У больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ выявляется нарастание диагностической чувствительности метода иммуноферментного анализа до 89,5%, со значительным увеличением титра сывороточных противотуберкулезных антител и сохранением выраженности ответа даже на поздних стадиях ВИЧ-инфекции (88%).

8. У больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ противотуберкулезные антитела, определяемые методом ИФА, принимают участие в образовании циркулирующих иммунных комплексов уже на ранних стадиях заболевания, а у больных туберкулезом без ВИЧ-инфекции только при наличии деструкции легочной ткани.

9. Антитела класса IgG к структурным компонентам М. tuberculosis на основе метода иммуноблоттинга с использованием фракции антигена в диапазоне 11-20 KDa являются критерием активности туберкулезного процесса в группе больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ, больных туберкулезом и ВИЧ-инфекцией.

10. В группе больных сочетанной патологией ВИЧ/ТБ противотуберкулезные антитела в реакции иммуноблот анализа принимают участие в образовании циркулирующих иммунных комплексов уже на ранних стадиях заболевания (50,0%).

Практические рекомендации

1. С целью улучшения ранней диагностики туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией и подключения своевременной ВААРТ, химиопрофилакти-ки туберкулеза рекомендуется консультация фтизиатра, проведение два раза в год рентгенологического (флюорография) обследования, и постановки туберкулиновой пробы два раза в год.

2. В условиях снижения информативности рентгенологического и бактериологического методов диагностики туберкулеза у больных в стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции необходимо проведение серологических методов исследования.

3. Целесообразно больным ВИЧ-инфекцией в стадии вторичных заболеваний проведение специфических методов диагностики туберкулеза (ИФА, ИБ) с количественным и качественным определением спектра антител, циркулирующих в свободном и в связанном виде в ЦИК.

4. Для определения долгосрочного прогноза течения болезни и тактики ведения больных сочетанной инфекцией ВИЧ/ТБ необходим дифференцированный подход, учитывающий время выявления активного туберкулеза, содержание в периферической крови активированных Т-лимфоцитов (и их по-пуляционного состава), фагоцитарную активность нейтрофилов.