Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль плазмолеммного, ядерного регуляторов пролиферации и магния в механизмах формирования и развития язвенного дефекта желудка

На правах рукописи

СТАРАВОЙТОВ ВЛАДИСЛАВ АЛЕКСЕЕВИЧ

003477602

РОЛЬ ПЛАЗМОЛЕММНОГО, ЯДЕРНОГО РЕГУЛЯТОРОВ

ПРОЛИФЕРАЦИИ И МАГНИЯ В МЕХАНИЗМАХ ФОРМИРОВАНИЯ И РАЗВИТИЯ ЯЗВЕННОГО ДЕФЕКТА

ЖЕЛУДКА

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени- ■ • кандидата медицинских наук

Ростов-на-Дону 2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: Научный консультант: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор медицинских наук, доцент Рогова Людмила Николаевна

доктор медицинских наук, профессор Стаценко Михаил Евгеньевич

доктор медицинских наук, профессор Тризно Николай Николаевич

доктор медицинских наук, профессор Кожин Александр Алексеевич

Саратовский государственный медицинский университет

< с*

Защита состоится " 7& 70 2009 года в часов на заседании диссертационного совета Д 2.08.082.03 при ГОУ ВПО Ростовский государственный медицинский университет (344022, Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета

Автореферат разослан " 2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Л.А. Хаишева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Распространенность язвенной болезни среди взрослого населения составляет в разных странах от 5 до 15%. Если в возникновении язвы двенадцатиперстной кишки особое значение придается активации факторов агрессии, то при возникновении язвы желудка - нарушению факторов защиты. Значимым фактором агрессии является Н. pylori. Однако в различных исследованиях показано, что у ряда пациентов (от 20 до 60%) с язвами желудка развитие заболевания происходит без участия Н. pylori. Более того, язвы рубцуются без применения эрадикационной терапии. Данные обзора рандомизированных исследований показывают, что рецидивы ЯБЖ наступают у 5—10% больных и после эрадикации. Только у 38% пациентов с fgG к Н. pylori в крови выявляется язвенная болезнь, гастродуоденит или рак желудка. Таким образом, с одной стороны очевидна роль H.pylori в патогенезе язвы желудка, с другой стороны - факторов защиты, заключающихся в высокой скорости регенерации слизистой (Hopkins R.J., 1996; Ивашкин В.Т. с соавт., 2002; Абдулгание-ва Д. И., 2003; Щербинина М. Б., 2005; Иванов JI.H., 2005; Амиров Н.Ш. с соавт., 2005; Бредихина H.A., 2009).

В последние годы в связи с успехами молекулярной биологии существенно изменились представления о механизмах регуляции регенераторных процессов. Восстановление структуры включает: клеточную пролиферацию и диф-ференцировку, миграцию клеток, а также реструктуризацию стромы и ангио-генез. Ведущими факторами в обеспечении пролиферации и дифференциров-ки являются ростовые факторы и их рецепторы, в частности EGFR - рецептор эпидермального фактора роста с тирозинкиназной активностью (Tar-na wski А., 2005).

EGFR, расположенные апикально, повышают резистентность эпителиальных клеток желудка к кислоте, регулируют парацеллюлярную проницаемость (Balestreire Е.М. et al., 2007; Chen М. et al., 2002). Повреждение слизистой значительно активирует экспрессию EGFR и его лигандов (EGF, TGF-a), которые реализуют свою активность через митоген-активируемые протеинки-назы (МАП-киназы), а ингибиторы МАП-киназы затрудняют регенерацию. Экзогенный EGF потенцирует действие Н2-блокаторов (Okabe S. et al., 2005). Механизм действия некоторых антацидов включает активацию генов EGF с EGFR, благодаря чему реализуется противоязвенный эффект (Tamawski A. et al., 2000).

При активации EGFR происходит открытие специфических магниевых каналов плазмолеммы (TRPM6, TRPM7), посредством которых Mg2+ поступает внутрь клетки (Quamme G.A., 2008; Muallem S. et al., 2007; Rondon L.J. et al., 2008). На культуре клеток показано, что пролиферирующие клетки потребляют магний (Rubin Н., 2005). Значимость магния в обеспечении резистентности слизистой показана в ряде работ российских и зарубежных авторов

(Mooren F.C., 1999; Zimowska W. et al., 2002; Федосеенко M.B. с соавт., 2003; Лебедева СЛ., 2005).

Однако не систематизированы данные о пролиферативном процессе в различных слоях стенки желудка и на различных сроках регенерации язвы. Недостаточно изученным остаётся вопрос о характере изменения системного магниевого баланса, обеспечивающего оптимальные условия регенерации язвы. Нет данных о взаимосвязи магниевого баланса с активностью пролифера-тивных процессов в зоне регенерации язвенного дефекта. Всё вышеперечисленное делает необходимым одновременное изучение механизмов регуляции пролиферации и магниевого баланса, каждый из которых вовлечён в механизмы резистентности слизистой ЖКТ.

Цель исследования

Целью исследования является определение роли плазмолеммного, ядерного регуляторов пролиферации и магниевого баланса в патогенезе язвенных повреждений желудка и возможность их коррекции.

Задачи исследования

1. Определить изменение удельного числа EGFR- и Ki67 - позитивных клеток в слоях стенки желудка при формировании и развитии экспериментальной ацетатной язвы.

2. Исследовать магниевый баланс при формировании и развитии экспериментальной ацетатной язвы и в процессе обострения язвенной болезни желудка в клинике.

3. Оценить взаимосвязь удельного числа EGFR-, Ki67 - позитивных клеток и концентрации магния эритроцитов в крови из подключичной вены.

4. Выявить влияние магнийсодержащей лекарственной композиции на основе минерала бишофит на магниевый баланс, удельное количество Ki67 -и EGFR- позитивных клеток в слоях стенки желудка, биохимические маркеры клеточного повреждения, активность сукцинатдегидрогеназы в тканях желудка и морфологические признаки регенерации при экспериментальном язвенном процессе.

5. Исследовать взаимосвязь вегетативного регулирования и концентрации магния эритроцитов при экспериментальной ацетатной язве и у больных с обострением язвенной болезни желудка.

Научная новизна работы

Впервые выявлено неодновременное повышение иролиферативной активности в разных слоях желудка при его экспериментальном эрозивно-язвенном повреждении. На 7-е сутки формирования ЭАЯ желудка в СПСО на фоне весьма умеренного увеличения числа клеток, вступивших в митоз, отмечается практически полное отсутствие активированных клеток, готовых к пролиферации. В ПО имеет место как увеличение числа делящихся клеток, так и

сохранение субпопуляции клеток, активированных к дальнейшему размножению. На 14-е сутки в СПСО активируется процесс пролиферации, проявлением чего служит увеличение субпопуляции клеток вступивших в митоз, так и происходит восстановление числа клеток, готовых к делению при одновременном ещё большем увеличении в ПО удельного числа клеток, готовых к размножению.

На 14-е сутки с момента моделирования ЭАЯ желудка отмечается тенденция к аккумуляции магния в клетке на фоне сниженного оттока с лимфой ОКЛП из интерстиция и возросшего транспорта с кровью воротной вены на фоне сниженного магнийуреза.

Определена положительная корреляционная зависимость между показателем прироста содержания магния в эритроцитах и удельным числом ЕСБК - позитивных клеток СПСО.

Показано, что применение магнийсодержащей лекарственной композиции в форме суппозиториев (МЛКс) при ЭАЯ уменьшает площадь язвенного дефекта благодаря ускорению образования грануляционной ткани в дне язвы, восстановления сосудистого компонента, снижению обсемененности спиралевидными микроорганизмами, нормализации концентрации биохимических маркеров клеточного повреждения (МСМ, ЛДГ). Под влиянием МЛКс в ПО пролиферативные процессы так же повышены, но менее выражены в сравнении с ЭАЯ без лечения, а в СПСО перифокальной зоне более выражены, чем при язве без лечения.

Научно-практическая значимость

Получены новые данные о регуляции процесса пролиферации, о его зависимости от состояния магниевого баланса и вегетативного тонуса. Установлено, что в процессе формирования ЭАЯ и обострения ЯБЖ у человека отмечается симпатотония. Применение МЛК при ЭАЯ приводит к уменьшению площади язвенного дефекта, усилению пролиферации и восстановлению магниевого и вегетативного баланса. Площадь язвенного дефекта имеет тенденцию к уменьшению как при применении МЖ в виде гранулята, так и суппозиториев.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В процессе формирования и развития экспериментальной ацетатной язвы происходит неодновременная активация пролиферации в различных слоях стенки желудка.

2. На 7-е сутки с момента моделирования экспериментальной ацетатной язвы в собственной пластинке слизистой оболочки отмечается умеренное нарастание количества клеток, вступивших в митоз при практически полном отсутствии активированных клеток, готовых продолжать деление; в то время как в подслизистой основе на фоне усиленного деления значительно увеличивается популяция клеток, готовых делиться.

3. На 14-е сутки с момента моделирования экспериментальной ацетатной язвы в собственной пластинке слизистой оболочки выявляется возрастание числа вступивших в митоз клеток при восстановлении субпопуляции клеток, готовых приступить к делению; при одновременном увеличении в подслизи-стой основе как делящихся клеток, так и готовых к делению.

4. На фоне сформировавшейся экспериментальной ацетатной язвы концентрация магния эритроцитов крови из подключичной вены и суточном объеме мочи снижается. В динамике развития экспериментальной ацетатной язвы выявлено восстановление концентрации магния эритроцитов крови из подключичной вены до контрольных значений при сохранении сниженного содержания в суточном объеме мочи.

5. Установлена прямая корреляционная зависимость между уровнем внутриклеточного магния и числом активированных к делению клеток. Восстановление уровня клеточного магния приводит к оптимизации пролифера-тивных процессов в зоне экспериментальной ацетатной язвы, что проявляется возрастанием числа клеток, готовых приступить к делению в собственной пластинке слизистой оболочки.

6. Применение магнийсодержащей лекарственной композиции в форме суппозиториев при экспериментальной ацетатной язве вызывает уменьшение площади язвенного дефекта за счет ускорения образования грануляционной ткани, восстановления сосудистого компонента, усиления пролиферации в перифокальной зоне собственной пластинки слизистой оболочки, нормализации магниевого и вегетативного баланса.

7. У пациентов с обострением язвенной болезни желудка наблюдается симпатикотония и происходит снижение уровня магния эритроцитов к 30-му дню лечения.

Апробация работы

Материалы работы были представлены и прошли обсуждение на конференции, посвященной 65-летию кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии ВолГМУ (Волгоград, 2004), 62-ой, 63-ей и 66-ой научных конференциях ВолГМУ (Волгоград, 2004, 2005, 2008), 3-ей международной конференции "Болезни цивилизации в аспекте учения В.И. Вернандското" (Москва, 2005), научной конференции с международным участием "Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии" (Курск, 2006), IX Международном конгрессе "Здоровье и образование в XXI веке" (Москва, 2008), IX Всероссийской научно-практической конференции "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении" (Санкт-Петербург, 2009).

Получен патент на изобретение №2348414: Способ первичной профилактики возникновения и развития язвенных повреждений 12-перстной кишки./Л.М. Ганичева, С.А. Галкин, В.А. Старавойтов, В.А. Рогов. Зарегестрирован в государственном реестре Российской Федерации 10 марта 2009г.

Публикации

По материалам диссертационного исследования опубликовано 9 работ, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объём и структура работы

Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 5-ти глав, обсуждения, выводов. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 20 рисунками и 5 схемами. Список литературы содержит 192 источника, из них 75 отечественных и 117 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа включает экспериментальную и клиническую часть. Эксперименты выполнены на 244 половозрелых белых крысах обоего пола линии Вистар массой от 200 до 350 гр. Животные содержались в обычных условиях вивария, на стандартной диете. Все эксперименты проводились в утренние часы натощак под нембуталовым наркозом (40 мг на 1 кг массы животного) с соблюдением стандартов (рекомендации Минздрава СССР, приказ №755 от 1977 года).

Перед включением животных в экспериментальные группы выполнялась рандомизация по исходным показателям с целью формирования репрезентативных выборок. Экспериментальное исследование выполнялось в 4 этапа, распределение животных по сериям представлено в табл 1.

Объём проведённого экспериментально!*) исследования.

____Таблица I

Название экспериментальной серии Условное обозначение экспериментальной серии 1-ый этап 2-ой этап 3-ий этап 4-ый этап

Исходное состояние Исход 10 14 13

Контрольная серия на сроке 7 суток без применения МЛК Контроль 7-е сутки 10 14

Контрольная серия на сроке 7 суток с лечебным применением МЛК (суппозитории) Контроль 7-е сутки + МЛ Кс 24

Контрольная серия на сроке 14 суток без применения МЛК Контроль 14-е сутки 10 14

ЭАЯ 12-ти перстной кишки на сроке 7 суток без применения МЛК ЭАЯ 12-ПК 7-е сутки 6

ЭАЯ 12-ти перстной кишки на сроке 7 суток с лечебным применением МЛК (гранулят) ЭАЯ 12-ПК 7-е сутки + МЛ Кг 6

ЭАЯ 12-ти перстной кишки на сроке 7 суток с лечебным применением МЛК (суппозитории) ЭАЯ 12-ПК7-е сутки + МЛКс 6

ЭАЯ 12-ти перстной кишки на сроке 7 суток с профилактическим применением МЛК (гранулят) МЛКг + ЭАЯ 12-ПК 7-е сутки б

ЭАЯ 12-ти перстной кишки на сроке 7 суток с профилактическим применением МЛК (суппозитории) МЛКс + ЭАЯ 12-ПК 7-е сутки 6

ЭАЯ желудка на сроке 7 суток без применения МЛК ЭАЯ желудка 7-е сутки 10 14 7

ЭАЯ желудка на сроке 7 суток с лечебным применением МЛК (гранулят) ЭАЯ желудка 7-е сутки + МЛКг 6 [

ЭАЯ желудка на сроке 7 суток с лечебным применением МЛК (суппозитории) ЭАЯ желудка 7-е сутки + МЛКс 7 24

ЭАЯ желудка на сроке 7 суток с профилактическим применением МЛК (гранулят) МЛ Кг + ЭАЯ желудка 7-е сутки 7

ЭАЯ желудка на сроке 7 суток с профилактическим применением МЛК (суппозитории) МЛКс + ЭАЯ желудка 7-е сутки 6

ЭАЯ желудка на сроке 14 суток без применения МЛК ЭАЯ желудка 14-е сутки 10 14

Итого: 50 70 76 48

На первом этапе проводилось морфологическое и иммуногистохимическое исследования при ЭАЯ желудка на сроке 7 и 14 суток. На втором - исследование показателей Mg2+, К+ и вегетативного баланса, биохимических маркёров повреждения при ЭАЯ желудка на сроке 7 и 14 суток. На третьем - скри-нинговое исследование эффективности применения MJIK в форме гранул и суппозиториев при ЭАЯ желудка и ЭАЯ 12-ПК. На четвёртом - морфологические, иммуногистохимические исследования, изучение показателей Mg2+, К+ и вегетативного баланса, биохимических маркёров повреждения при ЭАЯ желудка на сроке 7 суток.

Перед включением больных в исследование производилась их проверка на соответствие критериям включения и исключения. В клинических исследованиях принимало участие 14 больных с диагнозом : "ЯБЖ, обострение". Их средний возраст составил 58,2±8,6 лет. Длительность заболевания 15-20 лет. Помимо общеклинического обследования, выполнялось дополнительное обследование пациентов с учетом стандартов GCP («Good Clinical Practice», Надлежащая клиническая практика), Хельсинской декларации («Declaration of Helsinki») Международной конференции по гармонизации («International Conference on Harmonisation», ICH) и включало исследование концентрации магния в плазме крови и суточном объеме мочи по реакции с магоном, магния в эритроцитарной массе (Камышников B.C., 2000), определение концентрации МСМ в плазме крови и суточном объеме мочи. Также производилась оценка вегетативного гомеостаза по показателям вариабельности сердечного ритма (аппаратно-программный комплекс «Вариакард») (Вейн A.M., 2000), признаков вегетативных нарушений (по результатам анализа «Вопросника для выявления признаков вегетативных нарушений», индекс Кердо). Указанные исследования выполнялись как на момент обращения, так и на 30 день лечения.

Пациенты получали лечение в соответствии с принятыми в гастроэнтерологии стандартами (Григорьев П.Я. с соавт., 1998).

Экспериментальную ацетатную язву моделировали по Okabe S. (2005). Забор крови из подключичной, воротной, нижней полой вены осуществлялся с добавлением к образцу крови гепарина. Лимфу получали из ОКЛП пластиковым катетером. Сбор суточного объема мочи производили в специально оборудованных клетках.

Фиксацию гистологического материала, проводку и приготовление парафиновых срезов, окраску гематоксилин-эозином проводили по общепринятой методике (Заводиленко К. В., 2006; Меркулов Г.А., 1969). После гастротомии оценивали размеры язвенного дефекта и выражали их в мм2 (Бигельдина H.A. 2002). Морфологические изменения, количество клеток воспалительного инфильтрата, обсемененность спиралевидными микрооорганизмами оценивали в препаратах по визуально-аналоговой шкале (Аруин Л.И., 1998). Для идентификации спиралевидных микроорганизмов использовали окраску по Рома-новскому-Гимзе. Результат оценивали в баллах по визуально-аналоговой шкале (ВАШ) (Аруин Л.И. с соавт., 1998; Дубенская Л. И., с соавт., 2008). В качестве маркера пролиферации нами выбран регулятор клеточного цикла Ki67. Для идентификации EFGR- позитивных клеток использовали антитела фирмы Dako Cytomation, для идентификации Ki67 - позитивных клеток -MIB-1 моноклональные антитела фирмы Immunotech, Inc. В препаратах при 400 кратном увеличении оценивали удельное число (в%) положительно окрашенных ядер (при оценке Ki67) и цитолемм (при оценке EGFR) в пределах пролиферативного компартмента в 5-ти случайно выбранных полях зрения (> 500 клеток). Иммунореактивные клетки обозначались как Ki-67- и EGFR-позитивные, соответственно (Заводиленко К. В., 2006; MacCornic D. at all., 1993, Кокосадзе Н.В., 2005).

Для определения активности СДГ тканей использовали гистохимическую методику (Павлюк В.М. с соавт., 1972).

Концентрацию магния в эритроцитах определяли по реакции с титановым жёлтым. Для определения концентрации магния плазмы, лимфы и мочи использовали набор фирмы «Лахема» (Камышников B.C., 2000). Для определения концентрации калия плазмы и лимфы использовали набор фирмы "Ольвекс" (Hillmann J. et al., 1967).

О содержании МСМ в плазме и моче судили на основании прямой спектрометрии депротеинизированного супернатанта. Оптическую плотность опытных проб измеряли при длине волны 254 нм (Камышников B.C., 2000; Пику-за A.B., 2002).

Определения концентрации ДДГ сыворотки производили при помощи фар-макокинегического метода (Долгов В.В. с соавт., 2004). Вариабельность сердечного ритма у крыс (ВСР) производили с помощью портативного электрокардиографа с последующим ручным обсчетом и компьютерным анализом (программа KARD) (Ошевенский Л.В. с соавт., 2003). Для коррекции магниевого баланса использовались суппозитории, содержащие природный полиминерал бишофит, суппозитории вводили per rectum в течении 7-ми дней в количестве раном 6,25 мг бишофита. Для статистической обработки результатов исследования использовали критерий Стьюдента (средние величины выражали как М±ш) и корреляционный анализ Пирсона - при нормальном распределении величин. При распределении, отличном от нормального, использовали критерий Вилкоксона (средние

величины выражали как Ме [25 и 75 перцентиль]) и корреляцию по Спирмэ-ну. Проверка рядов на нормальность распределения проводилась методами Колмогорова - Смирнова, Лиллиефорса и Шапиро-Уилки. Нулевые гипотезы отвергались при достигнутом уровне значимости р<0,05 и 0<0,05, соответственно (Лапач С.Н. с соавт., 2002).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Данное исследование посвящено изучению оптимизированных условий для реализации механизмов репарации экспериментальной ацетатной язвы, которая по ряду признаков максимально приближена к хеликобактерной язве человека.

В эксперименте на 1-ом этапе исследования на 7-е сутки с момента моделирования ЭАЯ выявляется отек, воспалительная инфильтрация, образование фибриноида, а значит меняется гистоархитектоника в зоне изъязвления. Площадь язвенного дефекта составила на 7-е сутки 56,7[54;81] мм2, а на 14 сутки 25 [21,1;25]ммг, что на 55,9% меньше (<3<0,05). Так же к 14-м суткам происходило практически полное исчезновение зоны фибриноидного некроза в дне язвы (<3<0,05), что свидетельствует о снижении интенсивности альтерации.

Рисунок 1. Прирост толщины СПСО и ПО при ЭАЯ (Д%).

На 7-е сутки ЭАЯ отмечается возрастание толщины СПСО края язвы, а так же ПО как края язвы, так и перифокальной зоны. На 14-е сутки ЭАЯ сохранение толщины СПСО в перифокальной зоне на уровне контрольных значений и снижение её в крае язвы, вероятно, связано с уменьшением отека и усилением регенерации в крае язвы, заключающейся в наползании пласта

ю

эпителиальных клеток, который по толщине меньше, чем СПСО в контроле. При этом, повышенная толщина ПО как в крае язвы, так и в перифокальной зоне отражает, очевидно, процессы пролиферации и воспалительной инфильтрации в ней. СПК остаётся сниженным как в крае язвы, так и перифокальной зоне, что является признаком хронизации язвы (Щербинина М.Б. с соавт., 2007; Satoh Н. et al., 1997; Hull М.А., 1998).

Сравнительное исследование показывает, что на сроке 14 суток, а ещё более на сроке 7 суток выявляются признаки воспаления с последующим усилением регенерации, что соответствует литературным данным (Асеева Т. А. с соавт., 1989; Бигельдина H.A., 2002; Свинцицкий A.C. с соавт., 2001;). Неблагоприятным фактором в регенерации ЭАЯ является возрастание на 14-е сутки обсемененности СПСО перифокальной зоны спиралевидными микроорганизмами, морфологически сходными с H.pylori.

Таблица 2

Обсеменённость СПСО спиралевидными микроорганизмами (в баллах)._

Экспериментальная серия Язва 7 суток Язва 7 суток+МЛКс Язва 14 суток

Контроль 1 [0,25; 1,75] 1[0;1] 0,5[0;1]

Опыт 2,5[1;3] 1 [0,1,75] 3[2,13;3]'

Прирост 150% 0% 500%

Достоверность различий по отношению к контролю - * - Q<0,05.

Это может служить причиной хронизации ЭАЯ. При инфицировании H.pylori, согласно литературным данным, во-первых, снижается содержание EGF и PgE2 в слизистой оболочке желудка (Tarnawski A. et al., 2000), во-вторых, эта инфекция способна индуцировать повреждение плазмолеммы как непосредственно (секретируемые бактерией белки), так и опосредованно (пе-рекисное окисление) (Аруин Л.И. с соавт., 1998; Иванов Л.Н. с соавт., 2005). Уреаза, продуцируемая H.pylori в большом количестве, привлекает моноциты и лейкоциты, которые выделяют цитокины и продуцируют свободные радикалы, повреждающие эпителий. В таких условиях постоянного присутствия повреждающего агента в ткани воспаление не завершается регенерацией, нарушается тканевый гомеостаз и формируется целый каскад вторичных повреждений (Кулаков В.И., 2005). Очевидно, в рассоглосовании процессов пролиферации в различных слоях тканей ЖКТ играет роль инфекция и воспаление.

Пролиферация, дифференцировка и апоптоз - три основополагающих взаимосвязанных процесса, обеспечивающих полноценное восстановление слизистой в зоне язвенного дефекта.

В оценке эффективности регенерации ЭАЯ важно рассмотрение пролиферации как в СПСО, так и в ПО желудка (Frankfort Benjamin J. et al., 2004; Аруин Л.И. с соавт, 1998).

Анализ результатов наших исследований показывает, что на 7-е сутки после моделирования пролиферация происходит разнонаправленно в различных слоях стенки желудка, наибольшая активность отмечается в ПО (табл № 3, рис № 2).

Таблица 3

Удельное число Kt67- и "('"К- :'о'и..'inu.x клеток (%) лри ЭЛЯ 7 суток (Ме£25 н 75 перцситили]).

1>П Локализация Исход Контроль Края (IJBfal Лерифйк^ЬНДа JOHi

Ш7 СПСО S |5,63:9,75) !9[19;19,4]В 22[20,5;24.75!#

ЕС FR СПСО 2.5 [2;2,88) 4[3,18;4jS 0[0;01#* OfO;i]#'

KiS7 ПО >[0;1] iflSJi I9,5f!9;20.75]#' 10,5(5:11 ]**

tiCFR по 0[0;0] lfO,25;2,5]ä 4l[34,i;44,5]iP

ДостоьсрнйстАъ рташчнК tra qtwouicuwki * (icvo^ - - Q' C.V1':.. ¿остоа>:унаоти рздднчиц uo отношению к шн три,™ -' - QtO,U5.

45

40

Рисунок 2. Прирост удельного числа им му но реактивны* клеток (Л) в СПСО и ПО при *МЯ иа 7-е сутки (в %},

В СПСО сохраняются Ki67- позитивные клетки, однако практически полностью отсутствуют EGFR-позитявные клетки, что свидетельствует о резком уменьшении готовности клеточной популяции продолжать деление. Известно, что число рецепторов на мембране определяется двумя механизмами: во-первых, их экспрессией, во-вторых, их рециклированием на мембрану из пито-юл я после переноса ростового сигнала к ядру клетки (Корнилова Е.С., 2002),

В ПО усиление пролиферации происходит не только в момент исследования, о чём свидетельствует увеличение удельного числа Ki67 - позитивных клеток, но и сохраняется готовность к продолжению пролиферации, проявлением чего служит увеличение удельного числа FGFR позитивных клеток. Это соответствует литературным данным, в частности Jones М. К. et al. (1999), который показал что при раневом процессе в течении первых 7-ми суток отмечается оверзкепрессия EGFR.

Таким образом, на этапа завершения формирования ОЛЯ в CI1CÜ число делящихся клеток сохраняется на уровне контрольных значений при практически ионном отсутствии клеток, готовых к делению, в то время как в ПО сохраняется значительное число клеток, готовых продолжать размножение. Выявленная тенденция наиболее выражена в крае язвы, а не в перифокальной зоне.

К 14-м суткам при ЭЛЯ активизируются, во-первых, пролиферагианыс процессы в СПСО, проявлением чего является увеличение удельного числа KÍ67-позитивных клеток, во-вторых, готовность части клеточной популяции к пролиферации, проявлением чего является сохранение числа EGFR - позитивных клеток (табл № 4, рис № 3).

Таблица 4

Удельное числе) KÍ67- и EGFR- позитивных клеток (%) при ЭЛЯ ]4 У1е1[25 и-" ..'> ilq>n| j_

И1 Лакал и- защч Исход Контроль Края Я-íbu Псрнфок11Ы1,тя зек л

К«57 спш )7,5[1U5;24,75]# 27,í[21.25;50,5]«*

EGFR СПСО 2,5(2:2.88] 1 í,5[l 0:12,75] ff 15[IO:2fi)ii 10[IO;15.S]*

K.Í67 по i;o;M 1,25(1:2]» 20{|2;35ч75]#" 6[3;9]B"

HGfít то 0[0:0] 4{4;l2,tSJtt 3¡3;8.7Í¡*

Дйь-говерность ра тнчий по отношению к неходу - - достоверность рагчнчиЛ по отношению м кон-

тролю - * - Q<0,05.

| 45

СПСО ПО СПСО,в ПО -J

Край язаы Персональная зона

-15

Рисунок 3. Прирост удельного числа иммупорвактлвных слеток (Д) у СПСО н ПО при ЭАЯ на 14-е сутки (в%).

В это же время, сохраняется выраженная пролиферативная активность в ПО. особенно в крае язвенного дефекта. Известно, что избыточная пролиферация ПО при язве является одним из признаков хронизации процесса. Подобная динамика в ПО края язвы может быть связана с причастностью ЕОРГ? к раз-

13

витию соединительнотканных структур, участвующих в формировании рубца.

Таким образом, на этапе развития ЭАЯ в СПСО желудка увеличивается субпопуляция делящихся клеток при сохранении на уровне контрольных значений готовности к делению. Одновременно в ПО имеет место еще большее увеличение числа клеток готовых к размножению, что отражает наклонность язвы к хронизации. Выявленные тенденции наиболее выраженны в крае язвы, а не в перифокальной зоне.

Т.е., не только на 7-е, но и на 14-е сутки ЭАЯ выраженность пролифератив-ных процессов в различных слоях стенки тканей желудка различная. Замедление регенерации может быть следствием: 1) нарушения плазмолемм-ных механизмов регуляции, 2) нарушения переноса ростового сигнала к ядру, 3) нарушения метаболических процессов, обеспечивающих пролиферацию: энергетики, макроэлементозов и дефицита "строительных" субстратов (Okabe S. et al., 2005).

В наших исследованиях интенсивность аэробного дыхания в клетках оценивали по активности СДГ - ключевого фермента дыхательной цепи, прочно связанного с мембраной митохондрий.

Выявленное увеличение активности СДГ на 7-е сутки ЭАЯ в зоне язвенного дефекта на 23% (р<0,05) происходит, вероятно, в случае дефицита магния. Исследованиями Casolo V (1998) и Vicente (2004) показано, что при дефиците магния в клетках нарушается хелатирование пирофосфата, выступающего ингибитором СДГ.

На 14-е сутки ЭАЯ, по мере заживления, вероятно, наступает компенсация энергетического метаболизма, о чем свидетельствует нормализация концентрации СДГ в зоне изъязвления.

В работах Rubin et al (2005) на культуре клеток показано, что активация про-лиферативных механизмов, в частности, активация EGFR сопряжена с открытием специфических магниевых каналов TRPM6 и TRPM7, через которые магний поступает в клетку. Биологическая роль таких каналов очевидна, поскольку магний необходим как кофактор и активатор более чем 300 ферментов, контролирующих ведущие звенья метаболизма и, в первую очередь, энергообразование и энергопотребление, чрезвычайно значимых в реализации механизмов резистентности.

Магний - внутриклеточный катион. Определяющим в регуляции магниевого баланса является перераспределение магния между клеткой и внеклеточной средой, а так же соотношение процессов фильтрации, секреции, реабсорбции, всасывания в ЖКТ и почках. В случае недостаточности магния в организме почки и ЖКТ снижают его потери и происходит накопление магния клеткой (Osorio F.V. all., 1999).

Фазы развития любого патологического процесса принято характеризовать как: компенсация, субкомпенсация, декомпенсация. На основании концентрационных исследований различных биологических сред мы судили о сте-

пени нарушений магниевого баланса. К компенсации мы относили состояния накопления магния клеткой, которые могут сопровождаться активированием механизмов задержки магния почками и ЖКТ. К субкомпенсации - когда концентрация клеточного магния оставалась низкой, но активировались почечные и кишечные механизмы его аккумуляции в организме. К декомпенсации - когда при снижении накопления магния клеткой, сохранялись его потери через почки и ЖКТ.

В группе ЭАЯ на 7-е сутки концентрация магния в эритроцитах крови из подключичной и нижней полой вены снижалась на 28% (р<0,005) и 30% (р<0,01), соответственно. Концентрация магния в эритроцитах крови из воротной вены значимо не изменялась. Концентрация магния в плазме крови из подключичной, воротной и нижней полой вен, а так же лимфе из ОКЛП значимо не изменялась по отношению к контролю. Магнийурез снижался на 63% (р<0,005).

Согласно принятой классификации, при ЭАЯ на 7-е сутки происходит декомпенсация магниевого баланса. Анализ полученных данных позволяет предположить, что не смотря на активацию почечных механизмов, отмечается снижение концентрации магния в клетке, показателем чего является его снижение в эритроцитах. Такое напряжение почечных механизмов, направленных на задержку магния описано при ЯБДК (Schwüle P.O. et al. ] 983). В группе с ЭАЯ на 7-е сутки отмечается снижение концентрации калия в плазме крови из подключичной вены на 29% (р<0,005). Концентрация калия в плазме крови из воротной, нижней полой вен и лимфе из ОКЛП значимо не изменялась. При этом концентрация калия в плазме крови из подключичной вены оказалась значительно ниже, чем в плазме крови из воротной и нижней полой вены.

Состояние калиевого баланса на 7-е сутки ЭАЯ можно оценить как компенсированное, так как происходит усиление всасывания в ЖКТ и задержки калия почками.

При ЭАЯ на 14-е сутки концентрация магния в крови из подключичной вены и нижней полой вены оставалась на уровне контрольных значений. Концентрация магния в эритроцитах крови из воротной вены возрастала на 53% (р<0,01). Концентрация магния в плазме крови из подключичной и воротной вен оставалась на уровне контрольных значений. Концентрация магния в плазме крови из нижней полой вены снижалась на 8% (р<0,01), лимфе из ОКЛП на 41% (р<0,001). Магнийурез также снижался на 51% (р<0,001). Состояние магниевого баланса на 14-е сутки ЭАЯ можно оценить как суб-компенсированное. В клетках накапливается магний, о чем свидетельствует возрастание его концентрации в эритроцитах. Снижение концентрации магния в лимфе из ОКЛП, преобладание его содержания в плазме крови из воротной вены, по сравнению с плазмой крови из подключичной вены служат показателем усиления всасывания магния в организме, в том числе, очевидно, и в повреждённых тканях. Прирост концентрации клеточного магния,

очевидно, достигается усилением кишечных и почечных механизмов его задержки.

В группе ЭАЯ на 14-е сутки концентрация калия в плазме крови из подключичной вены значимо не изменялась, а из воротной вены снижалась на 39% (р<0,005), нижней полой вены - на 43% (р<0,005), лимфе из ОКЛП - на 41% (р<0,005).

В аккумуляции магния важны рецепторы семейства ERK1/2, в частности, EGFR. Известно, что активация EGFR ассоциирует с активацией специфических магниевых каналов TRPM, контролирующих вхождение магния в клетку (Romani А., 2007).

Таким образом, тенденция к восстановлению магниевого баланса отмечается на 14-е сутки ЭАЯ и сопровождается активацией описанных выше "факторов защиты", среди которых - восстановление до контрольных значений удельного числа EGFR - позитивных клеток в СПСО, чего не отмечается на 7-е сутки ЭАЯ. Это подчеркивает значимость EGFR как в механизмах регенерации язвенного дефекта, так и в механизмах восстановления внутриклеточного пула магния.

Моделирование ЭАЯ, как и операционная травма, активирует стрессовый выброс гормонов и активацию симпатического отдела АНС. Исходя из известных механизмов стрессовой регуляции магниевого баланса, это должно приводить сначала к снижению клеточного магния, а затем к возрастанию. (Полушина Н.Д. с соавт., 2004; Амиров Н.Ш. с соавт., 1999). Концентрация магния в эритроцитах крови из локтевой вены к 30-му дню лечения снижалась на 14,9% и составила 1,82±0,06 ммоль/л по сравнению с 2,14±0,08 ммоль/л на момент обращения (р<0,05). С одной стороны, это может быть связано с активностью симпатического отдела АНС, которая сохраняется в течении всего периода наблюдения. Мобилизация клеточного магния происходит при стимуляции как а- так и al-адренорецепторов, при действии агонистов p-адренорецепторов. Альфа-агонисты снижают активность №+,К+-АТФазы и усиливают выход К+ из клеток через калиевые каналы. (Айзман А.И., 2001 ; Мальцев В.И. с соавт., 2004).

С другой стороны, снижение концентрации магния в эритроцитах может быть связано с ингибированием комплекса АТФаз, которое отмечается при применении стандартной схемы терапии, включающей ингибиторы протоно-вой помпы (Рубцов A.M. с соавт., 2004).

Как показали результаты наших исследований, нарушение магниевого баланса при ЭАЯ опережает нарушение калиевого баланса. Возможно, что это связано с преобладающей ролью p-адренорецепторов в регуляции. Так известно, что их стимуляция, с одной стороны, способствует мобилизации клеточного магния (активация аденилатциклазы А и повышение концентрации ц-АМФ), с другой стороны, - вхождению калия в клетку (через активацию Na+K+-АТФазы) (Айзман А.И., 2001).

Сложность вегетативной регуляции верхних отделов желудочно-кишечного тракта не вызывает сомнений. В этом задействованы все уровни обеспечения гомеостатического баланса организма, начиная от центральной нервной системы и заканчивая субклеточными механизмами (Абдулганиева Д.И, 2003; Бутов М. А., 2003).

Как видно на рис № 4, при ЭАЯ на 7-е сутки отмечается активация симпатического отдела АНС, о чём свидетельствует снижение ВР и возрастание ИН. Видимо, это один из механизмов мобилизации клеточного магния и декомпенсации магниевого баланса. На 14-е сутки ЭАЯ отмечается выраженное преобладание парасимпатического отдела АНС, о чём свидетельствует возрастание ВР и снижение ИН. В этой связи, снижается стимуляция адреноре-цепторов, что способствует накоплению внутриклеточного магния, однако полной компенсации магниевого баланса не происходит.

Эа'й 7-е сутки

__ЭАЯ 14-е сутки___

Рисунок 4. Прирост показателей ВСР (Д%) при ЭАЯ.

В табл № 5 представлены показатели ВСР у больных с обострением ЯБЖ. Как видно из таблицы, на момент начала наблюдения у больных с ЯБЖ показатели ВСР свидетельствуют о преобладании симпатического отдела АНС, как и на этапе завершения формирования ЭАЯ.

Таблица 5

Показатели вегетативного баланса у больных с ЯБЖ (М±т)._

Показатели До лечения 30 дней лечения

Мо, мс 784±9 Н95±8***

АМо, % 133±17 \33±13

ВР, мс 112±!4 161±11

ИН, ед 893±127 475±47

Сравнение с показателями до лечения - р<0,05; ** -р<0,01; *** -р<0,005; **** - р<0,001.

На фоне лечения и регенерации язвы тонус симпатического отдела АНС начинает ослабевать, о чем свидетельствует возрастание значения Мо, тенденция к снижению ИН, что соответствует литературным данным (Дудников Э.В. с соавт., 2001).

Сравнительное исследование полученных данных позволяет сделать вывод, что на этапе формирования и развития ЭАЯ желудка отмечается неодновременная активация пролиферации в СПСО и ПО края язвы и перифокальной зоны, сопряжённая с нарушением магниевого и вегетативного баланса. Анализ результатов проведённых серий экспериментов и литературных данных показывает значимую роль магния в ряде важных звеньев патогенеза эрозивно-язвенных повреждений. Нами предложена схема, отражающая ведущую роль магниевого дисбаланса в патогенезе ЭАЯ (схема!).

Схема 1. Магниевый дисбаланс - ведущее звено патогенеза язвенных повреждений.

Поскольку магний является регулятором, активатором ферментов, вовлеченных в углеводный, липидный, белковый обмены и обмен нуклеиновых кислот, а также стабилизатором различных молекулярных структур (рибосомы, нуклеиновые кислоты), то его дефицит негативно влияет на все виды обменов. В совокупности это негативно отражается на энергетическом и пласти-

18

ческом обмене клетки. Слизистая оболочка желудка - это образование, в котором происходит постоянное обновление клеток, что обеспечивает ее резистентность к повреждению. Совершенно очевидно, что нарушение энергетического и пластического обмена очень негативно влияет на процессы обновления в слизистой желудка, а значит её резистентность. Язвенное повреждение само по себе способствует усилению процессов регенерации. Активно делящиеся клетки накапливают магний, что вызывает системный магниевый дефицит. Очевидно, крайним вариантом такого процесса является рак желудка (Pasternak К. et al., 1999).

Язвенное повреждение сопровождается воспалительной реакцией. О влиянии воспаления на магниевый баланс систематизированных данных в литературе нет. Но известно, что некоторые медиаторы воспаления могут повреждать клеточные мембраны, а значит приводить к мобилизации клеточного магния. Гипомагнеземия активирует воспалительные процессы, а местное применение магния оказывает противовоспалительный эффект (Mazur A. et al., 2007; Спасов А. А., 2003).

Язвенное повреждение вызывает активацию симпато-адренаповой системы, выброс катехоламинов, которые стимулируя свои рецепторы, приводят к мобилизации клеточного магния, а значит его клеточной недостаточности (Амиров Н.Ш. с соавт., 1999; Иванов JI.H. с соавт., 2005; Белостоцкий Н.И., 2006).

Желудок и 12-ти перстная кишка - начальный отдел всасывания магния. Таким образом, наличие язвенного дефекта в антральном отделе, сопровождающегося, как правило, гастродуоденитом, не может не снижать всасывание магния.

Наличие бактериальной обсемененности, которая отмечается в большинстве случаев (сюда относится и H.pylori) так же отрицательно влияет на магниевый баланс. Так на мембране H.pylori присутствует специфичаский магниевый транспортер СогА - антиген, благодаря которому бактерия потребляет магний (Abbasciano V. et al., 2003; Koga T. et al., 2003; Nasri H. et al., 2005). Таким образом, магниевый дефицит способствует возникновению эрозивно-язвенных повреждений, а само эрозивно-язвенное повреждение усугубляет магниевый дефицит.

Для проверки гипотезы о ведущей роли магниевого дисбаланса в патогенезе ЭАЯ мы использовали магнийсодержащие суппозитории на основе природного полиминерала бишофит (МЛКс), содержащего шестиводный хлорид магния, с целью коррекции магниевого баланса. Поскольку магниевый баланс особенно выраженно нарушается в острый период формирования ЭАЯ, то лечение крыс производили в течении первых семи суток после моделирования ЭАЯ.

Применение МЛКс вызвало уменьшение площади язвенного дефекта, который составил 35,25[32;63,95] мм2 по сравнению с 5б,7[54;81] мм2 при ЭАЯ без лечения (Q<0,05). При этом образование грануляционной ткани в области

дна язвы возрастало на 200% (Q<0,05). Это может свидетельствовать о репа-ративной регенерации. С одной стороны, она создает основу для наползания регенерирующего эпителия, с другой, - созревание грануляционной ткани возможно лишь при защите её от протеолитического повреждения желудочным соком. Наиболее полную защиту может обеспечить новообразованный эпителий. (Аруин Л.И., 1998). Известно, что в формировании грануляционной ткани принимают участие все слои стенки желудка (Shahin М., 1997). О выраженности воспалительного отека тканей при ЭАЯ с применением МЖс свидетельствует утолщение СПСО и ПО как края язвы, так и перифо-кальной зоны. Сходная картина отмечалась и при ЭАЯ без применения МЖс. Отличием является более выраженное утолщение СПСО перифокаль-ной зоны. Вероятно, это утолщение обусловлено в большей степени не воспалительным отеком, а пролиферацией в этой зоне, о чём свидетельствует возрастание здесь удельного числа Ki67 - и EGFR - позитивных клеток (Mazur А. et al., 2007; Tarn М., 2003).

Обсемененность СПСО спиралевидными микроорганизмами при ЭАЯ с применением МЛКс имела тенденцию к изменению. Что согласуется с литературными данными, показывающими потенцирующую роль коррекции магниевого баланса при антихеликобактерной терапии (Федосеенко М.В. с со-авт., 2003; Спасов A.A., 2003).

При ЭАЯ с применением МЖс концентрация магния эритроцитов крови из подключичной, воротной и нижней полой вен значимо не изменялась по отношению к контрольной группе также получавшей МЖс, но была при этом значительно выше контрольных значений. Одновременно, отмечалось возрастание концентрации магния плазмы крови из подключичной вены на 9% (р<0,01). При этом концентрация магния плазмы крови из воротной и нижней полой вен, лимфе из ОКЛП и магнийурез значимо не изменялись. Состояние магниевого баланса при ЭАЯ с применением МЖ можно охарактеризовать как компенсированное, потому что концентрация эритроцитарно-го магния, как и концентрация магния в плазме крови, лимфе из ОКЛП и моче сохраняется на уровне контрольных значений, чего не происходит при язве на этом сроке без лечения.

На фоне применения МЖс отмечалось снижение ВР на 51,2% (признак активации симпатического отдела) при одновременном снижении амплитуды моды на 15,3% (признак активации парасимпатического отдела), что позволяет расценивать вегетативный статус как эйтония. Это является положительным моментом, т.к. известно тормозящее влияние симпатического отдела на пролиферацию (Денисов А.Б., 1995).

МЖс вызывает задержку Mg2+ тканями и оптимизирует регенераторный процесс в зоне язвы, который проявляется в дифференцировке эпителиоци-тов в СПСО края язвенного дефекта, активации пролиферации в перифокаль-ной зоне СПСО, умеренной пролиферацией в ПО.

Применение МЛКс при ЭАЯ в течении 7-ми суток приводит к уменьшению площади язвы, ускорению образования грануляционной ткани, способствует восстановлению сосудистого компонента, восстановлению активности ЛДГ, содержания МСМ в плазме крови из разных регионов, активности ОДГ в тканях язвы, что сопровождается восстановлен и ем концентрация внутриклеточного магния, магнийуреза и вегетативного баланса.

Таолииа С»

Удельное число К[67 - м 1л- птитмвныЙ клеток (%) при ГЗАЯ ла 7-е сутки с применением МЛКс ___(Мс[2.*| перц,7; иерцр. __

Регуля-гор пролиферации Локализация Исход Контроль Края яиы Перифокгыьная зона

К! 67 СПСО 13(1.1;] 3,75^ 3[3;6,381 Г 20,75114:33} Я

ЕГ.РК спсо 25(2:2,88) 1ди]# 6[б;15] 5(3:9]#'

К167 МО 1№!) 5[4,25Д75}(Г 5(3.5:5)*

ПО 0(0:0] 0(0;0] 2(2:4.25) я'

К*67 мо 0[0;0] адо] 29.5[]5:4<1]Г 6(3:9[ В'

Сравнение с нсь'Олом - Н - сравнение с контролем - 4 -

15

Й 35 I 25

15

4,5

^ЭДЗ 20

В 7,75

-ХОТ 3,5

0 ш шщ ш

ло

О К167. д ЫЕРСВ. л

Край язвы

спсо

Пеоифокэльная зона

по

-10

-15 ■

Рисунок 5. Прирост удельного числа К ¡67- » - позитивных клеток в СПСО и ПО при 1АЯ на 14-у сутки.

Как видно изтабл № 6 и рис № 5, применение МЛКс вызывало в СПСО края язвенного дефекта увеличение удельного числа ЕС}7Я - позитивных ч снижение числа Кз67 - позитивных клеток.

Снижение числа делящихся клеток при уменьшении площади язвенного дефекта, вероятно, связано с вступлением большей части клеток в стадию диф-ференцнровки и специализированного выполнения своих функций. Диффе-ренцировка необходима для полноценного восстановления слизистой оболочки, т.к. недифференцированные клетки легко отторгаются и повреждают-

ся кислым желудочным содержимым. Процесс дифференцировки клеток начинается по завершению пролиферации и является одним из вариантов продолжения жизненного цикла (Frankfort Benjamin J. et al., 2004). Однако умеренное увеличение количества клеток содержащих EGFR на мембране свидетельствует о готовности части популяции к пролиферации. Очевидно, в слизистой оболочке края язвенного дефекта на 7-сутки складывается картина, включающая процессы, направленные на полноценное восстановление СПСО желудка - готовность клеток к пролиферации и дифференцировке. В это время в СПСО перифокальной зоны возрастает удельное число EGFR -позитивных и Ki67 - позитивных клеток, что свидетельствует как о выраженных на момент исследования процессах деления, так и о готовности части популяции начать размножаться (Аруин Л.И. с соавт., 1998). Сравнительное исследование показывает, что при ЭАЯ развивающейся на фоне применения МЛКс, пролиферативные процессы в ПО менее выражены, а в СПСО перифокальной зоны более выраженны, чем при язве без лечения.

Таблица 7

Прирост удельного числа Ю67 - и ЕОП1 - позитивных клеток и магния эритроцитов в эксперитментальных ____группах.____

Экспериментальная серия ЭАЯ 7-е сутки ЭАЯ 14-е сутки ЭАЯ 7-е сутки + МЛКс

Удельный прирост Мй2+эр в крови из подключичной вены, % -28,20 -0,70 15,50

Локализация Кра й язвы Перифо кальная зона Край язвы Перифо кальная зона Край язвы Перифо кальная зона Р а

Прирост удельного числа - К167 -позитивных клеток (А) в СПСО, % 3 -0,5 22,5 10 -10 7,75 0,01 >0,1

Прирост удельного числа - К167 -позитивных клеток (Д) в ПО, % 18,5 9,5 18,75 4,75 0 0 -0,73 >0,1

Прирост удельного числа - ЕРОЯ -позитивных клеток (Д) в СПСО, % -4 -4 3,5 -1,5 4,5 3,5 0,92 0,025

Прирост удельного числа - ЕРСИ. -позитивных клеток (Д) в ПО, % 40 9 31 -1 8 2 -0,60 >0,1

р - коэффициент Спирмена, а - концентрация значимости.

Проведённое исследование выявило (табл № 7) между значениями прироста концентрации магния эритроцитов и прироста удельного числа - EFGR - позитивных клеток СПСО и положительную сильную значимую связь. При ЭАЯ возрастание концентрации магния эритроцитов сопровождается увеличением в СПСО числа клеток, готовых вступить в митоз. Между приростом концентрации магния эритроцитов и приростом удельного числа - Кл67 - позитивных клеток ПО - отрицательная средняя по силе связь. При ЭАЯ возрастание концентрации магния в эритроцитах сопровождается снижением пролиферации в ПО.

Все вышеизложенное позволяет считать Мд2' дисбаланс, развивающийся при ЭАЯ, значимым звеном патогенеза, а его коррекцию патогенетически оправданной.

выводы

1. Формирование и развитие экспериментальной ацетатной язвы желудка сопровождается неодновременной активацией пролиферации в собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой основе края язвы и перифокалыюй зоны, что сопряжено с нарушением магниевого и вегетативного баланса.

2. На этапе завершения формирования экспериментальной ацетатной язвы в собственной пластинке слизистой оболочки число делящихся клеток сохраняется на уровне контрольных значений при практически полном отсутствии клеток, готовых к делению, в то время как в подслизистой основе отмечается возрастание числа клеток как в состоянии митоза, так и готовых приступить к делению. Выявленные изменения наиболее выражены в крае язвы, а не в перифокальной зоне.

3. На этапе развития экспериментальной ацетатной язвы в собственной пластинке слизистой оболочки желудка увеличивается субпопуляция делящихся клеток при сохранении на уровне контрольных значений числа клеток, готовых к делению. Одновременно, в подслизистой основе сохраняется увеличенное число клеток как в состоянии митоза, так и готовых к делению, что отражает наклонность язвы к хронизации. Выявленные изменения наиболее выражены в крае язвы, а не в перифокальной зоне.

4. Формирование экспериментальной ацетатной язвы сопровождается нарушением магниевого баланса, которое заключается в снижении концентрации магния в эритроцитах крови из подключичной и нижней полой вены и уменьшением магнийуреза. Развитие экспериментальной ацетатной язвы сопровождается восстановлением концентрации магния в эритроцитах в крови из подключичной и нижней полой вены до контрольных значений, возрастанием его концентрации в эритроцитах крови из воротной вены, уменьшением его оттока с лимфой общего кишечного лимфатического протока из интерстициального пространства тканей желудочно-кишечного тракта, при этом магнийурез остается сниженным.

5. При возрастании концентрации магния в эритроцитах отмечается увеличение удельного числа ЕОР11- позитивных клеток в собственной пластинке слизистой оболочки у крыс с экспериментальной ацетатной язвой желудка.

6. Применение магнийсодержащей лекарственной композиции при экспериментальной ацетатной язве в течении 7-ми суток приводит к уменьшению площади язвы, ускорению образования грануляционной ткани в дне язвы, восстановлению сосудистого компонента, нормализации содержания молекул средней массы в плазме крови из разных регионов, восстановлению активности лактатдегидрогеназы до уровня исходных значений. Пролифера-тивные процессы в подслизистой основе менее выражены, а в собственной пластинке слизистой оболочки перифокальной зоны более выражены, чем

при язве без лечения, что сопровождается восстановлением концентрации внутриклеточного магния, магнийуреза и вегетативного баланса.

7. При 30-ти дневном курсе традиционной терапии у больных с обострением язвенной болезни желудка сохраняется симпатикотония с тенденцией к гипомагнезегистии.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Рогова Л.Н. Магниевый баланс в моче и крови из портальной и нижней полой вен и влияние на него магнийсодержащей лекарственной композиции у крыс с эрозивно-язвенными повреждениями желудка. /Мат. конф., поев. 65-летию кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии Вол-ГМУ/ Л.Н. Рогова, В. А. Старавойтов, Т.П. Мещерякова - Волгоград, 2004. -Т.60., вып.З, - С.76-78.

2. Старавойтов В.А. Влияние композиции на основе бишофита на магниевый баланс в крови из портальной, нижней полой вен, в лимфе из общего кишечного протока у крыс с эрозивно-язвенными повреждениями желудка/В.А. Старавойтов, С.А. Галкин// Мат. 62-ой итог. науч. конф. студентов и мол. учёных ВолГМУ «Акт. пробл. эксперимент, и клинич. медицины» - 2004. - С. 12.

3. Рогова Л.Н. Влияние исходного уровня магния в крови на формирование и течение экспериментальных эрозивно-язвенных повреждений желудка у крыс/Л.Н.Рогова, В.А. Старавойтов//63-я открытая науч.-практ. конф. мол. ученых, поев. 70-летию ВолГМУ «Акт. пробл. эксперимент, и клинич. медицины». - Волгоград, 2005. - С. 12-13.

4. Старавойтов В.А. Магниевый баланс при экспериментальной ацетатной язве желудка на фоне хронического стресса./В.А. Старавойтов, Л.Н.Рогова//Третья междунар. конф. "Болезни цивилизации в аспекте учения В.И. Вернандского". - М„ 2005. - С. 384-385.

5. Роль местных механизмов в регенерации эрозивно-язвенных повреждений желудка/ Л.Н. Рогова, М.Е.Стаценко, В.А Старавойтов, К.О. Багель // Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии: Мат. науч. конф. с междунар. участием. - Курск, 2006. - С. 353-356.

6. Старавойтов В.А. К+ и ЛДГ сыворотки крови как маркеры клеточного повреждения при экспериментальной язве желудка/В.А. Старавойтов//Мат. 66-ой науч.-практ. конф.мол. ученых и студентов с междунар. участием «Акт. пробл. эксперимент, и клинич. медицины», 23-25 апреля 2008г. - Волгоград, 2008.-С. 15-16.

7. Старавойтов В.А. Регенерация экспериментальной язвы желудка: роль магниевого баланса/В .А. Старавойтов, Л.Н. Рогова // IX Междунар. конгр. "Здоровье и образование в XXI веке", 27-30 ноября 2008 г. Вестн. Рос. ун-та Дружбы народов. - М.: РУДН, 2008. - №7. - С.532-535.

8. Старавойтов В.А. Влияние магнийсодержащей композиции на внутриклеточное содержание магния и локальный энергетический метаболизм: Мате-

риалы IX науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении», 21 -22 апреля 2009 / В.А. Старавойтов // Вестн. рос. военно-мед. академии. Терапия. Приложение. 4.1. - СПб., 2009. - №1(25). - С. 507.

9. Старавойтов В.А. Патогенетическое обоснование применения магнийсо-держащей лекарственной композиции при лечении экспериментальной язвы желудка/ В.А. Старавойтов, Л.Н. Рогова, А.В. Смирнов//Вестн. нов. мед. технологий. - № 2. - Тула, 2009. - С. 202-204.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АМо - амплитуда моды

ЕОР{1 - рецептор эпидермального фактора роста Мо - мода

АНС - автономная нервная система

ВР - вариационный размах

ВСР - вариабельность сердечного ритма

ИН - индекс напряжения

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

МЛКс - магнийсодержащая лекарственная композиция в форме суппозиториев

МСМ - молекулы средней массы

ОКЛП - общий кишечный лимфатический проток

ПО - подслизистая основа

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СК - сосуд истый компонент

СПК - слизисто-подслизистый коэффициент

СПСО - собственная пластинка слизистой оболочки

ЭАЯ - экспериментальная ацетатная язва

ЯБЖ - язвенная болезнь желудка

СТАРАВОЙТОВ ВЛАДИСЛАВ АЛЕКСЕЕВИЧ

РОЛЬ ПЛАЗМОЛЕММНОГО, ЯДЕРНОГО РЕГУЛЯТОРОВ ПРОЛИФЕРАЦИИ И МАГНИЯ В МЕХАНИЗМАХ ФОРМИРОВАНИЯ И РАЗВИТИЯ ЯЗВЕННОГО ДЕФЕКТА ЖЕЛУДКА

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 8.09.2009 г. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,0. Печать офсетная. Бумага писчая. Заказ № 6-15

Типография ИУНЛ Волгоградского государственного технического университета. 400131, г. Волгоград, ул. Советская, 35