Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль нарушени липидного обмена в развитии постреанимационной болезни (экспериментальное исследование)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН АКМОЛИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

Р Г Б ОД

1 з МАЙ шз

Па правах рукописи УДК: 616—036.882—08—06:616—008.93:577.1258

ПОПОВА

Надежда Владимировна

РОЛЬ НАРУШЕНИЯ ЛИПИДН0Г0 ОБМЕНА В РАЗВИТИИ ПОСТРЕАНИМАЦИОННОЙ БОЛЕЗНИ

(экспериментальное исследование) 14.00.16—патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

АКМОЛА 1996

Работа выполнена в Центральной паучно-нсслодовательской лаборатории Акмолинского государственного медицинского института

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: кандидат медицинских наук А. С. Лебедев

НАУЧНЫЙ .КОНСУЛЬТАНТ: заслуженный деятель науки Казахской ССР, доктор медицинских наук, профессор В. Г. Корпачев

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор медицинских наук, профессор А. Н. Нурмухамбетов доктор медицинских наук, профессор Е. Д. Даленов

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: Омская медицинская академия

Защита состоится « » ¡995 г !1а заседа-

нии специализированного совета К 09.06.01 по присуждению ученой степени кандидата медицинских паук пои Акмолинском медицинском институте (473029, Акмола, ул. Делегатская, 95).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке инсти-

тута.

Автореферат разослан

1996 г.

Ученый секретарь специализнрова! кандидат медицинских наук, до1

Д. О ТАЖИБАЕВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы установлена особая значимость липидов в патогенезе экстремальных состояний-Особенно широко изучена роль липидов, как энергетического субстрата, в условиях повышенной потребности организма в энергии. Активация симпатико-адреналовой и птоталамо-гипофизарнои систем приводит к усиленному лнполпзу в жировой ткапн и быстрой мобилизации жирных кислот при шоке (íilvTev Ю., 1981, Mv-сил Я., 1983), при травмах (Дерябин И. И-, 1987, Рябов Г. А., 1988, Куфтерин С. М., 1989), при тяжелых и длительных стрессовых воздействиях (Меерсон Ф- 3., 1984). При истощении запасов гликогена липнды остаются единственным эффективным источником энергии (Хачачка П., Сомеро Дж., 1988). Это утверждение справедливо и для постреанимационного периода (Хачатрян С. А., 1980), хотя патоаутокннез болезни оживленного организма отличается отсутствием целостной, эволюционно выработанной системы защитных механизмов (Ыеговскнй В. А. и соавт-, 1987).

Среди прочих причин необратимых изменений во время смерти и после оживления заметное место занимают структурно-функциональные нарушения клеточных мембран (Лнходпн С. С., 1981). Однако, состав и свойства липидов, как основных компонентов клеточных мембран, и их роль в поддержании целостности и адекватном функционировании бномембран при экстремальных и терминальных состояниях изучена недостаточно полно. Модификации структуры мембран клеток способствует постреаннмационная активация свободнораднкальпых реакций (Гурвич А- М., 1983, Долгих В. Т. и соавт., 1989), что проявляется в снижении содеожания общих фссфолииидов, отдельных их фракций и изменении в составе анилов жирных кислот в кардиомиоцптах и клетках мозга (Чесно ков и соавт., 1985, Долгих В. Т-, 1991, Лнходнй С. С. и соавт-, 1995). Описано возрастание доли,холестерина в липидах,экстрагируемых из миокарда и эритроцитов в ранние сроки после оживления (Зуева О. М. н соавт., 1989, Лебедев А. С., 1989). Подчеркнуто, что для поддержания структурной целостности биомембран в условиях избыточной активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) организм стремится обогатить мембраны холестерином, так как холестерин способен пнгибнровать процессы ПОЛ и повышать стабильность бномембран (Лопухин 10' М., 1983). Многими авторами изменения липидного обмена после экстремальных воздействий

рассматриваются .как.компенсаторные процессы, направленные на стабилизацию" биомембран (Таранов^ Н. П., 1988, Паламар-чук В- И., 1990, Окшнна Н. А., 1992). Этом}', вероятно способствуют изменения лннидного состава сыворотки крови и лимфы пос: ле оживления, исследованные в эксперименте и при клиническом наблюдении (Левин Г. Я-, 1975, Хачатрян С. А., 1980, Маме--дов Я. Д., 1989, 1992, Пылова С. И. и соавт., 1992).

Однако, целостного представления о роли нарушении лпппд-ного обмена и, в частности, липидного состава органов и тканей в восстановлении функционирования биомембран клеток в оживленном организме, особенно в отдаленные сроки после перенесенной клинической смерти, в изученной литературе не сложилось.

Цель работы. Цель исследования состояла в изучении липидного состава органов и тканей крыс в ностреанимацпонном периоде, отдельных механизмов, приводящих к его изменениям и их за-. висИмости от вида и длительности перенесенного терминального состояния.

Конкретными задачами нашей работы, которые обусловили выделение ее основных разделов, явились следующие:

1. Изучение липидного и лнпонротрндпого состава сыворотки крови в ностреаннмацноином периоде.

. 2. Исследование липидного состава жизненно важных органов в позднем постреанимацпонном периоде.

3. Изучение степени окислительной модификации липоиротеи-дов сыворотки крови в поеттерминальпом периоде.

4. Морфологическое исследование препаратов аорты с целью выявления повреждения эндотелия и накопления липидов в интиме. .

. 5. Исследование уровня отдельных регулирующих жировой обмен гормонов и проведение коррелятивного анализа между уровнем. гормонов н содержанием холестерина в органах н тканях.

Научная новизна. Экспериментальные данные, полученные в ходе настоящего исследования позволяют более детально раскрыть отдельные звенья .патогенетических механизмов нарушения лииид-. ного обмена и их роль в развитии иостреаиимациоиной болезни.

В работе впервые изучено явление постреанимационного хо-лестериноза органов и тканей, степень которого зависит от вида и длительности перенесенного терминального состояния.

В ходе исследования выявлены отдельные патогенетические механизмы нарушения липидного состава органов и тканей, среди них: атерогенная днелнпидемия, окислительная модификация лн-попротеидов, нарушение гормональной регуляции и повреждение эндотелнальной выстилки интимы аорты.

Высказано предположение, что одним из синдромов гюетреа-

шшационнон болезни является ускоренное старение оживленного организма.

Практическая и теоретическая ценность. Установленные в процессе исследования механизмы нарушения линидного гомеостаза позволяют глубже понять роль изменения лнпидного состава в поддержании структурной целостности биомембран, как компенсаторной реакции оживленного организма в условиях патотогиче-ской активации исрекисных процессов, и вносят определеныи вклад в изучение патогенеза постреанимационной болезни. Выявленные механизмы развития ностреанимационного холестернноза необхо-. димо учитывать при разработке методов реанимации и последующей коррекции нарушений лнпидного обмена с целью лечения и профилактики развития атеросклероза и преждевременного стапе* пня у больных, перенесших терминальное состояние, что открывает перспективы их успешной медицинской и социальной реабилитации.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на расширенном заседании кафедры патологической физиологии, биохимии, нормальной анатомии и ЦНИЛ Акмолинского медицинско1 го института (1996). По теме диссертации опубликованы 6 научных статен.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на ¡64 страницах машинописного текста. Работа состоит из «Содержания», «Введения», «Обзора литературы», 6 глав, «Обсуждения результатов», «Заключения» и «Выводов», указателя литературы, включающего ¡66 отечественных и 87 иностранных источников. Диссертация документирована 24 таблицами и иллюстрирована 9 рисунками.

Положения, выносимые на защиту. 1. У животных, перенесших клиническую смерть, в позднем постреанимационном периоде развивается холестершюз жизненно важных органов и выраженность этого процесса зависит от вида и длительности предшествующего терминального состояния.

2. Факторами, поддерживающими нарушение лнпидного обмена в постреанимацпонном периоде, являются: атерогенняя дисли-пндемия, нарушение гормональной регуляции, окислительная модификация липопротеидов и повреждения эндотелиального слоя сосудов, на примере интимы аорты.

' 3. Одним из ведущих синдромов постреанимационной болезни является ускоренное старение оживленного организма.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы Исследования. По данным Sugano М., Ьтшгип-п К. (1989), обмен холестерина у крыс сходен с обменом у человека, а использование крыс имеет ряд преимуществ: доступ-

3

ность и дешевизна разведения животных, хорошая воспроизводимость результатов и получение их за сравнительно короткий срок. Причем, продолжительность жизни этих животных составляет 2—2,5 года, что свидетельствует о высокой скорости метаболизма (Корниенко И. А., 1979). К окончанию самого длительного эксперимента крыса была в возрасте приблизительно 6 месяцев, что составляет 20--25% обшей продолжительности жизни, что позволило'сравнить возрастные изменения липидного состава органов н тканей с динамикой этих же показателей у экспериментальных животных. Поэтому эксперименты выполнялись на 206 половозрелых (3-месячных и более), белых, беспородных крысах-самцах массой 160—300 г. Крысы содержались в условиях вивария па стандартном пищевом рационе. Исследования проводились после 14-часового голодания. Распределение групп животных ко сериям представлены в таблице 1.

Т а б т н ц а 1

_Общая характеристика основных серий экспериментов_

Дг

Раздел исследования

Количество групп

Количество животных I в группах

1. Влияние клинической смерти па липндиыи состав

сыворотки крови 3 06

2. Определение содержания липидов в органах ожив-

ленных крыс 13 103

3. Изучение уровня регулирующих гормонов в сыво-

ротке крови 3 24

4. Морфологическое исследование ннти.мы аоргы 6 12

5. Исследование степени окислительной модификации

лшгопротепдов у животных после Ю-мнпутноп кли-

нической смерти 3 24

Всего 206

В работе были использованы две модели клинической смерти. Под масочным эфирным наркозом моделировали терминальное состояние методом, предложенным В. Г. Корпачевым, С. П. Лы-сенковым, Л. 3. Телем (1982). Данная модель в отличие от других (острая кровопотеря, электротравма, внешняя тампонада сердца) дает возможность точно определить начало клинической смерти и воспроизвести различную продолжительность тотальной ишемии. Суть этого способа заключается в полном пережатии сосудистого пучка у основания сердца с помощью Г-образного крючка, вводимого в полость грудной клетки.

Другой моделью клинической смерти была выбрана 4-минутная механическая асфиксия (Шим Н. В., 1979). Эта модель пато-¡енетнческн адекватна нарушениям, возникающим при нередко встречающихся в клинической практике состояниях (повешении,

асфиксии новорожденных и других), имеющих универсальный характер и сходные механизмы у животных и человека (Негов-скип В. А., 1986). Момент наступления клинической смерти фиксировали по последнему атональному вдоху и отсутствию нормальных сердечных комплексов на кардиоскопе. Через 4 минуты животных реанимировали. Комплекс реанимационных мероприятий включал в себц наружный массаж сердца в сочетании с искусственной вентиляцией легких через нолихлорвиниловую трубку до появления самостоятельного дыхания. За восстановлением сердечной деятельности осуществлялся мониторпый контроль с помощью кардиоскопа ЭКСП-02 п нальнаториой фиксации верхушечного толчка. Визуально наблюдали время появления первого вдоха,самостоятельного дыхания и роговпчного рефлекса.

Эвтаназию всех исследуемых животных осуществляли в одно н то же время (10—11 часов утра) для предотвращения суточных колебании исследуемых показателей. Ткань органов фиксировали в жидком азоте. Лнпидные экстракты из органов получали методом Polch et al. (1969). Определение общих лппндов в сыворотке крови и липндных экстрактах органов и тканей производили по методу Блюра (1969), общий холестерин — по унифицированной методике по реакции с уксусным ангидридом (/Меньшиков В. В., 1987), холестерин ЛПВП определяли после осаждения ß-липопрэ-' тепдов гепарином в присутствии солей марганца (Титов В. Н. и соавт., 1979), фосфоляппды исследовали методом Svanborg А., Svennerholm L. (1969), трнглицеоиды — с помощью наборов фирмы «Лахема (Чехословакия), определение диеновых конъюгатов и окислительного индекса производили методом Верболовпч В. П. н соавт. (1988), малоповып дпальдегид (МДА) — по методу, предложенному Гаврпловым В. Б. и соавт. (1987).

Гормоны в сыворотке крови определяли радиоиммунологнче-ским методом с помощью наборов опытно-экспериментального производства НБОХ АМН БССР : «РИО-ТгПГ» — тироксин, «РИО-Тз-ПГ» — трнйодтирошш, «СТЕРОН-Т-1125» — тестостерон, «РИО-ИНС-ПГ I125» — инсулин. Определение гормонов производилось совместно с м. и. с. ЦММЛ АкмолГМИ Сочйеной Е. П.

С целыо морфологического исследования участки брюшной аорты крыс фиксировали в 10% нейтральном формалине с последующей общепринятой обработкой и заливкой в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином п эозином (Меркулов Г. А., 1969) н Суданом черным В и Беренбауму для выявления в ткани брюшной аорты лппоиротеидов (Пирс Э., 1969). Эта часть работы выполнена совместно с м. п. с. ЦНИЛ АкмолГМИ Ереминой В. К. и Кикпмбаевой А. А.

Значение холестерина лнпопротендов низкой Плотности (ЛПНП) и липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) оп-

рёДёлйли путем вычисления, используя измеренный величины общего холестерина (ОХ), холестерина липопротендов высокой плотности (ЛПВГ1) и триглицеридов ('Гид Н. У., 1986),

Полученные данные подвергнуты статической обработке с использованием t-критерия Стъюдента (Ойвнн И. А., 1960) на ЭВМ «Kenitec-286 Plus».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные нами исследования показали, что после перенесенной клинической смерти, судя по содержанию первичных продуктов перекисного окисления липндов и уровню малонового ди-альдегида в сыворотке крови крыс, происходит активация процессов перекисного окисления липндов, особенно выраженная в ранние сроки постреанимашюиного периода. У животных после 5-минутной остановки кровообращения содержание МДА было увеличено в течение первых 2-х недель в среднем на 18% (р<0,03) и после кратковременного выраженного (в 1,5 раза) подъема, регистрируемого с 42-х по 56-е сутки, происходила быстрая нормализация изучаемого показателя. Концентрация МДА у животных, перенесших 10-минутную клиническую смерть, в первые сутки после реанимации была в два раза выше (36%), чем у крыс предыдущей группы и сохранялась на повышенных цифрах до 49-х суток наблюдения (рис. 1).

Как отражение избыточной липопероксидации и ускоренной деградации жириокнслотных ацилсв фосфолипидов сыворотки крови оживленных животных можно расценивать выраженное падение уровня фосфолипидов. В зависимости от длительности клинической смерти это снижение в первые сутки восстановительного периода составляло от исходного уровня иосле 5-минутной аноксии — 33% (р<С0,001) и 50% (р<0,001) — после 10-минутной и сохранялось весь период наблюдения (рис. 1).

Наряду со снижением концентрации фосфолипидов в сыворотке крови, относительно постоянного содержания общих липндов, происходило изменение уровня общего холестерина в зависимости от тяжести перенесенного терминального состояния (таблица 2). В первые сутки после перенесенной 5-минутной клинической смерти уровень холестерина в сыворотке крови превышал показатели контроля на 38% (р<0,05), причем, основной его прирост, в это время, приходился на липопротепды низкой и очень низкой плотности. Содержание общего холестерина в крови животных после 10-минутной клинической смерти было достоверно ниже, чем у крыс после 5-минутнон остановки кровообращения, и не отличалось от контрольных значений, но наблюдалось его перераспределение между классами липопротендов за счет увеличения уровня в ЛПНП. 6

Рис. 1. Динамика содержания ¡МДА и фосфолипидов (% от возрастного контроля) в сыворотке крови оживленных крыс.

П р и м е ч а и и е:

"""О"- МДЛ после а-мииутноп клинической смерти

■ МДА после 10.минутной клинической смерти —фосфолипилы после 5-мниутной клинической смерти —. ф'осфолшшды после Ш-мпнутпоп клинической смерти

Через одну неделю после оживления в сыворотке крови животных, перенесших 5-минутную клиническую смерть, сохранялся повышенный уровень холестерина, однако в ЛПВП наблюдали значительное его снижение (на 52%, р<0,001) и увеличение в Л ПОМП. В отличие от животных предыдущей группы у животных, перенесших 10-мпнутпую клиническую смерть, зарегистрировано лишь заметное уменьшение на 64% (р<0,001) холестерина в ЛПВП. Начиная с 14-х суток постреанимационного периода, у крыс после 5-минутной клинической смерти происходило снижение общего холестерина и вновь возникало перераспределение его между фракциями лппонротепдов: снижение содержания стерииа в ЛПОНП и повышение в ЛПВП с максимальным увеличением, на 28-е сутки, превышающим возрастной контроль иа 29% (р<0,05), что сочеталось с активацией ПОЛ. В дальнейшем, начиная с 49-х суток, у крыс после 5-минутной клинической смерти содержание холестерина в лппопротепдах крови не отличалось от контрольных значений. Однако у животных, перенесших. 10-мннутную клиническую смерть, такая нормализация возникала раньше, после окончания второй недели восстановительного периода, когда все пока-

Таблица 2

Содержание холестерина в сыворотке крови и сывороточных липопротеидах у крыс после 5- 10~минутнои клинической смерти (ммоль/л) (п=10—20)

Длительность Стат. Исход.

клинической нока- значе-

смерти зат. ние

Время после оживления (сутки)

14

21

28

35

43

63

77

91

5 минут 10-мииут

О б 1н и й X С

М 2,84 4,09* 3,78 3,99 3,71 3,44* 3,54" 3,18-' 3 14 2.69 2,34

-1: П1 0,15 0,31 0.34 0,37 0.27 0.18 0,13 0,16 0,19 0,15 0,09

м 2.84 3,07 .3.14 2 С5 2.90 3.14 2,9! 2,84 2.91 3,08 3.13

±т 0,15 0,12 0.30 0,21 0,19 0.17 0,14 0.14 0.14 0,18 0.19

X С-Л П В 11

5.минут М 1,79 . 1,33 1,09*** 1,10*** 1,69 1,85 1,72* 1 69 1 44 1,29 1.29

±т 0,14 0,04 0,07 0,05 0,12 0,!2 0.12 0.15 0,10 0,11 0.03

Ю-мннут М 1,45 1,51 0,99*** 1,36 1,59 1.36 1,33 1,56 1 1,31 1,22

±т 0,18 0,09 0.06 0,09 0,12 0,12 0,11 0,09 0.03 0,09 0,14

X С-.Л п м п

5.минут М 0,69 1,50* 1,04 1,08 1.18 0,95 . 0,97 1,06 1,28 0,99 0,81

±п1 0,06 0,17 0.13 0,13 0,14 0,06 0,07 0,13 0,16 0,17 0.10

Ю-минут М 0,79 1,25** 0,5-0 1,23 0,87 1,05 0.97 0.93 0.85 0,89 0,71

±1т1 0,09 0,06 0 18 0,19 0,14 0.09 0,10 0,13 0.09 0,10 0.09

X С-Л П О 11 п

5.минут М 0,39 0,68*** 0,55** 0,59** 0,52** 0,56* 0,50 0.42 0,37** 0,35*' ** 0,25***

±ш 0,02 0,04 0,02 0,03 0.02 0,05 0,04 0.03 0.03 0,02 0,02

10-мииут М 0,39 0,41 0.39 0,33** 0.41 0,37 0,35*** 0,36*** 0,45 0,41 0,31**

±т 0,03 0,06 0.06 0,03 0,07 0 03 0,02 0.01 0.04 0,05 0,03

Примечание: * — р<0,05; ** — р<0,01; *■■* — р<0,001.

затели содержаний и распределения холестерина в ЛП иормалнзо-вывалпсь.

Таким образом, изменение лнипдного состава сыворотки крови и перераспределение холестерина между классами лнпопротеп-дов существенно различались в зависимости от длительности клинической смерти, что вероятно, отражает происходящие в оживленном организме компенсаторные процессы, направленные на стабилизацию мембранных структур клеток в условиях избыточной лнпоперокспдации, причем, амплитуда колебаний изученных процессов была тем больше, чем меньше длительность клинической смерти.

Проведенные исследования показали, что наряду с изменениями в составе лнпопротеидов, менялись их качественные свойства, обусловленные чрезмерной активацией иерекисных процессов. Так, в сыворотке крови животных, перенесших 10-мниутную клиническую смерть, через 1 час после оживления содержание диеновых конъюгатов и окислительный индекс были увеличены в 3 раза (р<0,001), а через 7 суток — в 7 раз (р<0,001). Исследование уровня одного из конечных продуктов переписного окисления — маленового днальдегида в ЛПВП и фракции атерогенных ЛП (ЛПНП и ЛПОНП) в это же время показывало увеличение содержания Д1ДА через 1 час после оживления в 1,3 раза (р<0,01). Однако через 7 суток после реанимации уровень МДА в ЛПВП не отличался от контроля, а в атерогенной фракции ЛП даже уменьшился в 1,3 раза (<0,05), что свидетельствовало об изменении свойств и количества субстратов ПОЛ в линопротеидах (Форматок В. Е„ 1982, 1983," Надиров II. К., 198(5, Гсгпегс-ч Л., 1992) (таблица 3).

Т а б л и ц а 3

Показатели ПОЛ в сыворотке крови и сывороточных линопротеидах крыс, перенесших ¡О.мнпутную клиническую смерть (п = 8)

Стат. нокпзл-телн Группы животных

Показатели контрольная 1 час после оживления 7 суток после оживления

Диеновые конъюгаты (Е233/мл) Л\ ±!Т1 0,07 0,01 0,20*** 0,02 0,49*** 0,09

Окислительный индекс (Е233/2 ] О/мл М 0,14 0.03 0,35*** 0,03 0,96** 0,20

Содержание МДА в ЛПВП (пмоль/мл) .V, ± 111 3.23 0,18 4,15** 0,16 3,35 0.39

Содержание МДА в ЛПНП + ЛПОНП (имоль/мл) м ±т 3,49 0.22 4,70** 0.22 2,64* 0.25

П р и \( с ч а н и е: * .— р<0,05; ** — р<0,01; — р<0,001.

Следовательно, результаты этой серии экспериментов свидетельствовали о том, что в крови оживленных животных появляются модифицированные переписным окислением липопротеиды, у которых, по данным Шпикитер В. О. (1987), Азпзовоп О. А. (1989), Дреминой Е. С. (1995), Иа^пап ¡1. (1995) меняются, в отношении холестерина, доиорно-акцепторные свойства, что делает их более атерогеннымн по сравнению с нативнымп.

Качественные н количественные модификации лппопротепдов, вероятно, способствовали изменению липндного гомеостаза оживленного организма,, поскольку наши исследования показали, что в восстановительном периоде происходила аккумуляция холестерина в органах и тканях и степень этого накопления зависела от тяжести предшествующего терминального состояния.

Наиболее отчетливо этот феномен проявляется в аорте (таблица 4). Помесячно уровень холестерина увеличивался у крыс, перенесших 5-мпнутпую клиническую смерть методом пережатия сосудистого пучка у основания сердца, в 7 раз (р<0,05), в 3 раза и в 1,5 раза (р<0,05) по сравнению с возрастным контролем, а у животных после 10-минутной клинической смерти — в 43 раза (р<0,001), в 20 раз (р<0,001) и в 2 раза и, наконец, у крыс после 4-минутной механической асфиксии — в 101 раза (р<0,001), в 33 раза (р<0,001) и в 9 раз (р<0,001). Таким образом, степень насыщения аорты холестерином зависела от длительности и вида перенесенной клинической смерти, причем, темпы накопления сте-рипа замедлялись с течением времени, что свидетельствовало о включении компенсаторных процессов, направленных па предотвращение избыточного холестерииоза. Однако, проведенные памп морфологические исследования аорты в позднем постишемпческом периоде выявили помимо значительного накопления липндов в интиме повреждения эндотелнальной выстилки и адгезию форменных элементов крови, что свидетельствовало об ускорении процесса старения сосудистого эндотелия.

Исследование линидиого состава других органов (таблица 4) показало, что накопление холестерина происходило во всех тканях организма, однако, степень и динамика этого процесса во многом определялась тон метаболической ролью, которую играет холестерин в каждом органе.

В условиях клинической смерти и после оживления надпочечники как часть гипаталамо-гииофпзарно-надпочечииковой и сим-патоадреналовон систем в первую очередь реагируют на влияние терминального воздействия, потенцируя комплекс приспособительных реакций организма. Имея фазовый характер, эти-перестройки сопровождаются изменением состояния резистентности организма п могут стать основой для развития в органах и тканях патологи-

Т а б л и ц а 4

Содержание холестерина а органах крыс после клинической смерти а сравнении с возрастным контролем (мг/г сырой ткани) (п = 5—12)

30 сут. после оживления 60 е\-т. после ожинлспия 90 сут. после оживления

Орган Стат. В оз р. Возр. Возо.

пока- конт- ^ гг „ конт- ~ ~ ^ . , конт- . ^ .д г: ~ -э

заг. роль 5 5 н 5 = роль - § Н ~ ~ £ = роль — 5 п. 5 5 а.

~ г: и о ^ и гё» О = о ~ -9- к йрЙ V „ о я ж

ю ^ ^ — -л о -т я о ю а о -г га ь. Ю 'X. и 2 г 5 -г га о

Аорта М 0,03 0,18* 1,21" 2,83*** 0,23 0,64 4,53*** 7,55*** 0,81 1,21* 1,36 6,88***

±т 0,01 0.07 0,09 0,61 0,09 0,16 0,61 0,95 0,14 0,10 0,23 1,18

Печень М 1,96 1,90 2,25* 2,-18** 2,27 2,67 4,92*** 3,94*** 2.18 3,27** " 3,05* 3,85**

±т 0,05 0,11 0,13 0,12 0,09 2,02 0,12 0,22 0.17 0,17 0,30 0.25

Надпочечники М 8,58 2.79 21.3** 24.?** 13 7 18,2 25,1*** 23,2** 8,33 13,8* 2,79** 21,6*

±т 2,65 1,37 2,0 3,2 1,6 2,2 1,3 1,8 1,39 1,8 0,66 5.4

Сердце М 1,03 1,08 1,36 1,31 1,23 1,46 2,11*** 2,12*** 0,99 1,21 1,35 2,28***

±т 0,14 0,09 0,10 0,09 0,05 1.34 0,06 0,21 0,1 0,11 0,17 0,15

Почки М 2,90 3,86* 3 39 4.65*** 4,01 4,38 5,59*** 5,89*** 4,04 4.56 5,25 5.03

±т 0,21 0,21 0,15 0,18 0,17 0,27 0,11 0,24 0,50 0.28 0,55 0,35

Примечание: » — р<0,05; ¥* — ¡><0,0); *** — р<0,001.

ческнх процессов (Волков А. В., Кожура В. Л., 1968, Робу А. П., 1982, Куликов В. Ю., 1988, Корпачев В. Г. и соавт., 1989," Дале-нов Е. Д., 1993).

В наших опытах отмечены фазовые изменения содержания холестерина в надпочечниках в пострсанпмацпонном периоде. У животных, перенесших 5-минутную клиническую смерть на~30-е сутки восстановительного периода зарегистрировано уменьшение уровня холестерина в 3 раза, а в последующие сроки наблюдения содержание стернна увеличивалось на 60-с сутки на 33% и на 90-е сутки на 00% (р<0,05). У крыс после 10-мнпутнон клинической смерти прирост холестерина через 1 месяц составил 148% (р<0,01), через 2 месяца -- 84% (р<0,0()1), через 3 месяца отмечено снижение уровня стерина в 2,9 раза (р<0,01). У животных после перенесенной 4-мпиутноп механической асфиксии во все наблюдаемые сроки отмечено достоверное увеличение содепжанпя холестерина в надпочечниках в среднем в 2,4 раза (р<0,01). Соответственно изменялось и соотношение ХС/ФЛ с максимальными значениями 1,24+0,03 (р<0,001) на 60 с сутки постишемпческого периода у группы животных с моделированием 10-мпиутпой клинической смерти и 1,19±0,18 (р<0,001) на 30-е сутки у крыс после асфиксии. Соотношение ХС/ФЛ изменялось за счет колебания уровня холестерина, так как содержание общих фосфолиппдов достоверно не отличалось от показателей контрольной группы.

Определяющая роль биомембран в функционировании клеток означает, что адаптивный или повреждающий эффект любого фактора реализуется в условиях целого организма опосредованно — через мембранные системы клеток (Меерсон Ф. 3., 1986). Однако, структурная целостность и свойства мембран значительно нарушаются во время умирания и после оживления (Лнходий С. С., 1985). В распоряжении организма есть способ регулировать свойства мембраны включения холестерина в мембраны (Крепе Е. М., 1981) По-видимому, это и происходит в постреаннмацнонном периоде, когда доля холестерина в лшшдном экстракте печени была увеличена у крыс после 10-минутной анокепп и 4-минутной механической асфиксии в первый месяц в среднем в 1.2 раза (р<0,01), во второй в 1,9 раза (р<0,001) и в третий — в 1,6 раза (р<0.01) по сравнению с возрастным его приростом. После 5-минутпой, клинической смерти уровень холестерина увеличился в 1,5 раза (р<0,001) только через 3 месяца после оживления.

В большинстве случаев включение холестерина оказывает конденсирующий эффект, уменьшая жидкостность лнпндной фазы, увеличивая микровязкость липидного бнелоя (Крепе Е. М., 1981, Лопухин Ю. М., 1983). В наших опытах отмечено достоверное увеличение соотношения ХС/ФЛ в печени. Максимальное значение ХС/ФЛ — 0,19+0,01 зарегистрировано у животных, перенесших

10-мннутную клиническую смерть, через 2 месяца после реанимации, что и 2,4 раза (р<0,001) превышало возрастной контроль.

Накопление холестерина в печени свидетельствует о нарушениях процессов синтеза и выделения стерина и липопротеидов из клеток печени.

Включение холестерина в мембраны почек привело к увеличению соотношения ХС/ФЛ в 1,5 раза (р<0,05) у животных исследуемых групп через 2 и 3 месяца после оживления, лишь у крыс после 10-мпнутноп клинической смерти этот прирост составил 90% (р<0,001) от контроля на 60-е сутки наблюдаемого периода. В сердце соотношение ХС/ФЛ у животных после 5-минутного терминального состояния увеличилось в 2 раза (р<0,01) через 2 месяца после реанимации. У крыс, перенесших 10-мннутную клиническую смерть, через 2 и 3 месяца увеличение составило 250% (р<0,001) и 75% (р<0,05), а после асфиксии — 130% (р<0,001) и 175% (р<0,01) соответственно наблюдаемым срокам. Соотношение ХС/ФЛ изменялось не только за счет прироста доли холестерина, но и уменьшения содержания ФЛ в плазматических мембранах клеток. Если в почках этот процесс прослеживался лишь в виде тенденции к уменьшению ФЛ, то в сердце отмечалось достоверное снижение содержание фосфолипидов в 1,2 раза (р<0,0-5) у животных после 5-мннутноп клинической смерти н после асфиксии на 00-е сутки постреаннмацпонного периода 1! в 1,8 раза (р<0,001) после 10-мниутпой тотальной ишемии.

Таким образом, прирост холестерина в сердце и почках сопровождался уменьшением содержания фосфолипидов, что приводило к росту молярного соотношения Х.С/ФЛ и могло свидетельствовать об изменении жидкостных свойств мембран. .

Итак, установлено, что клиническая смерть различной продолжительности и генеза приводила к однотипным изменениям лн-нпдного состава жизненно важных органов, а именно, к увеличению содержания холестерина и соотношения ХС/ФЛ, что, с большой долей вероятности, свпдптельствует о модификации липндиого бислоя плазматических мембран. Учитывая, что аналогичные изменения характерны для процесса старения организма (Лопухин 10. М. и соавт., 1981, Буплакова Е. Б., 1986, Фролькнс В. В., 1988, Богацкая Л. Н., 1990, Гацко Г. Г., 1992), можно предположить, что на определенном этапе постреанимационного периода адаптационная реакция холестерниоза органов перерастает в процесс ускоренного старения оживленного организма, а скорость этих изменений зависит от длительности и вида перенесенной к типической смерти.

Вероятно этому способствует обнаруженное в наших исследованиях нарушение гормональной регуляции (таблица 5). Так, че-

рез 3 месяца после оживления уровень тестостерона достоверно снижался у крыс после 5- и 10-мннутнон клинической смерти соответственно на 27% (р<0,05) н 34% (р<0,01), кроме, того, была обнаружена достоверная отрицательная корреляция между содержанием тестостерона в сыворотке крови и уровнем холестерина в аорте (г = —-0,761; р<0,05). В это же время у экспериментальных животных было выявлено, судя по уровню тироксина и трийодтнро-нина, снижение функции щитовидной железы. Для обоих гормонов была заметна тенденция к снижению содержания в крови, причем, у животных, перенесших 10-мпнутную тотальную ишемию, уровень тироксина достоверно снижался по сравнению с контрольными цифрами па 27,5% (р<0,05). Интересно, что уровень тироксина в контрольной группе достоверно коррелировал с содержанием холестерина в печени (И=+0,708, р<0,05). И это понятно, потому что активность гормонов щитовидной железы направлена на увеличение выделения холестерина печенью и усиления перехода последнего в желчные кислоты, что обусловлено воздействием тироксина на энзимные реакции печени (Боряк П. М., 1978, Ганджа И. М., 1978). В группах животных, перенесших клиническую смерть различной продолжительности, подобной корреляции не обнаружено. Таким образом, вероятно, основной путь выведения холестерина из организма, окисление гидрофобной молекулы в желчные кислоты в печени (Лопухин 10.. М., 1983), выходит из-под регулирующего гормонального влияния, что, по-видимому, является еще одной причиной развития холестериноза органов в постреанимационпом периоде.

Увеличение продукции инсулина является одной из причин увеличения содержания холестерина в организме, поскольку известно, что пострсанпмационная гиперинсулнпемия является одним из признаков диабетоподобного синдрома (Сочнева Е. Н., 1994). Выявлена высокая степень корреляции инсулина с содержанием холестерина в почках 130% (И = 0,773; р<0,05) и аорте 168% (I?-—0,881; р<0,05) от возрастного контроля у животных после 10-мпиутной аноксии.

Таким образом, в итоге выполненного исследования выяснено, что в ответ на чрезвычайное воздействие, клиническую смерть и последующую реанимацию, в условиях чрезмерной активации ПОЛ и генерализованной мембранодеструкции организм стремится обогатить мембраны клеток холестерином. Постреанимационный холестерииоз выявлен во всех жизненно важных органах, в боль-шеи степени в аорте. Его выраженность зависела от тяжести перенесенного терминального состояния. Развитию холестериноза способствовала атерогениая дислипндемия, нарушение гормональной регуляции, перекиспая модификация липопротеидов и повреждение эндотелия сосудов. Все эти процессы являются проявлением одного

Таблица 5

Гормоны сыворотки крови через 3 месяца после клинической смерти (п = 8)

Стат. Группы животных

Пок.ил гели показатели контроль-пая после 5-мин\'тиои кл. смерти после Ю-мшитнон кл. смерти

Тестостерон нмоль/л М ш 2,01 0,15 1,47* 0,11 1,33** 0,12

Трийодтн. рэиин нмоль/л М П1 .0,79 0,03 0,74 0,02 ~ 0,71 0,03

Тироксин и.моль/л М ш 113,8 11,7 101,1 11,0 82,5* 4.6

1 Ьгсулии м кед/л М 1п 20.7 0,8 34,8 7,7 24,8 2,7

П р к м е ч з п и е: * — р<0,05: ** — р<0,01.

из синдромов постреанимационной болезни — ускоренного старения оживленного организма.

Выводы

1. В позднем нОстрс^апнмационном периоде у животных развивается холестерпноз жизненно важных органов: аорты, печени, почек, сердца и надпочечников. Степень холестериноза зависит от длительности и вида предшествующего терминального состояния.

2. Развитию холестериноза способствует атерогенная днсли-ппдемия, проявляющаяся в увеличении атерогенных фракций ли-ненротеидов и уменьшении антиатерогеиных, а также гнпофосфо-липидемии.

3. Постреаинмациониая активация процессов перекисного окисления лииидов является причиной окислительной модификации липонротендов, что изменяет их свойства и приводит к накоплению холестерина в плазматических мембранах клеток.

4. В аорте, как брадитрофнои структуре, явления холестериноза наиболее выражены, чему способствует повреждение эндоте-лпальиого слоя интимы.

5. Нарушение гормональной регуляции лнпндиого обмена в позднем постреаннмацнонном периоде поддерживает патологические реакции оживленного организма, приводящие к генерализованному накоплению холестерина в плазматических мембранах клеток,

6. Одним из синдромов постреашшацнонной болезни является процесс ускоренного старения оживленного организма.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РА С ОТ

1. Липнды кроен крыс после перенесенной клшшческо-i смерти// Филюлогич

и патология экстремальных и терминальных соетояинй. — Ллма Ата 1902 _

С. 13—17.

■2 Влнпшс клинической смерти па содержание холсостсрнаэ в органач оживленных крыс/'/ Терминальные и экстрсмальпыг состояния. — Длматн. 1993. — С 21—24.

3. Содепжапчс некоторых лпнндов п органах крыс, псрспесшчх 4-.MiinvTHvio механическую асфнксшо//Экстрсмальпые и клнпичсскне аспекты терминальных и экстремачьпых состояний. — Акмола, 1995. С. 50—63.

4. Могфофункшгчтльиая характеристика аочт» т.рьтс в позднем постреачч-машптгм периоде «'/Патогенез, клиника и леченл» нпи тер\чшал"»ных и эхетр". м^-мсм\ <wt«iw" — Ачмола, 1905. — С. 57—59 (созмсстио с Ереминой В К. и Кнкпмбаемои А. А.).

5. Некоторые аспекты обмена липидов и iормриа чмюн рсгуляпин » иост-рсашшашюнном псриодс/Шатогенез. клиника и лечение при терминальных ч ькстосмальиых состояниях. — Акмола, 1995. — С. 63—66..

6. Обмен лпппдоп при терминальных состояниях//Патогенез, клиника и лечение при терминальных и экстремальных состояниях. — Дкмода, 1905. — С 122—126.

М А 3 М Y 11 Ы

Бул II. В. Иопопанып патофизиология мамаидыгы (П.00.16) бойынша жа-салтач жумысы: «Tipvire :нен Keftinri ауру дамуьшдагы лнппд ал.масуы бузылу-ынып. ptvii» Tipi.'ireii органнзмдеп органдар мен ткандердеп' липидтер курамьш зерттеуге жопе о"ыц бузы.чу жолдарыча арналган. Зерттсуге 206 ак егеукунрык-тар 4, 5 ж->пе 10 мннуттык клиникалык е.-п'миен кеш ; колданылгаи. Tipi.ireii ор-ганнзмде коп уакнт еткенпеп кешн — колкада, бауырда, журекте, буйректе, бейрек уст' бездерппп тшдершде холестерпшин жиналганднгы аныкталды. Хо-лестерп н'н .жиналу дорежен терминальдык куйдщ узактыгына жоме оныи ту-piue бшлапыстылыгы байкаллы. Холестсриноздыц дамуына атерогендш дислипн-1СМНН (лпнопротсидтердщ атерогендш фракнияларынын кйбешп, антиатероге-'дгк фпакипялзрдьш азаюы), лчгопротсидтерд'ц тотыккан Tvpi, тамырлар эндотелия-сыныч закымдануы жонс гормонднк, реттелулердщ бузылуы осер erri. Ттпт-кеп онга"измлеп" тез картаю синдромы, xipLiro"! организм ауруыпыи 6ip 6e.:irici рет;пде емнауга болады.

S i; М М Л It Y

N.V. I'opova's reseach "The role of the breach of lipid metabolism in developing of the poMresuscitating disease "on speciality 14.00.16 - pathologic physiology is devoted to the examination of iipid composition of organs and tissues in the postresuscitationai period, and the study of separate mechanisms leading to it's breach.

The research was carried out on 206 white male rats which survived 4,5 and 10 mm clinical death In the late postre-suscitational period there appeared cholesterin accumulation ш the important living organs: aorta, liver, heart, kidney,adrenal glands. The cholesterosis degree depended on the duration and kind of previous terminal state The cholesterosis development was favoured by the atherogenosis dislipidemia appearing in mcrcase aihcrogenosis fraction of lipoproteins and in decrease antiatherogenosis; oxidation modification of lipoproteins, damage of cndoteliuni of vessels; breach of gormonal control. We may consider the syndrome of the accclereted aging of the resuscitated organism as one of the appearance of postresuscitated disease.