Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Роль мутации гена CHEK2 в формировании наследственной предрасположенности к развитию рака яичника

На правах рукописи

КРЫЛОВА Надежда Юрьевна

РОЛЬ МУТАЦИИ ГЕНА СНЕК2 В ФОРМИРОВАНИИ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАЗВИТИЮ РАКА ЯИЧНИКА

14.00.14 - онкология 03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

.2 8 гмй 2009

Санкт-Петербург 2009г.

003471034

Работа выполнена в ФГУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова Росмедтехнологий»

Научные руководители: д.м.н., профессор д.м.н , профессор

Урманчеева Адилия Феттеховна Имянитов Евгений Наумович

Официальные оппоненты:

д.м.н., профессор д.б.н, профессор

Гершанович Михаил Айзерович Комов Вадим Петрович

Ведущее научное учреждение: ФГУ «Российский научный центр радиологии и хирургических технологий федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи »

диссертационного совета Д 208.052.01 в ФГУ «НИИ онкологии им Н.Н.Петрова Росмедтехнологий» (197758, Санкт-Петербург, Песочный, ул Ленинградская, д.68)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ онкологии им Н.Н.Петрова и на сайте института (www.niioncologii.ru).

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 208.052.01

доктор медицинских наук Е.В.Бахидзе

Защита состоится «_»

2009 г. в_часов на заседани

Актуальность проблемы

Рак яичника (РЯ) является одной из частых злокачественных опухолей. В структуре онкологической заболеваемости женщин рак яичника в последние годы устойчиво занимает шестое место и находится на четвертом месте среди причин онкологической смертности (Чиссов В.И. и соавт., 2007; Мерабишвили В.М. и соавт., 2007; IARC, 2003). Высокие показатели смертности обусловлены в первую очередь поздней диагностикой этого заболевания. Частота выявления ранних форм РЯ в репродуктивном возрасте не превышает 30%, а у больных старше 60 лет составляет менее 15%. Диагностика рака яичника на ранних стадиях остается одной из актуальных задач онкогинекологии. Предлагаемые программы скрининга РЯ малоэффективны, ввиду отсутствия тестов, обладающих достаточной чувствительностью и специфичностью (Einhorn N., et al., 1992; Bjurne Т.Н., et al., 1994; Carlson K.J., et al., 1994; Урманчеева А.Ф., 2008).

Несмотря на то, что большинство случаев РЯ являются спорадическими, доля наследственных форм в различных популяциях колеблется от 5% до 20% (Meijers-Heijboer H.et al., 2002; СНЕК2 Breast Cancer Case-Control Consortium, 2004). Идентификация группы риска с наследственной предрасположенностью к РЯ может являться одним из путей разработки методов ранней диагностики РЯ.

При изучении групп риска по развитию рака молочной железы (РМЖ) и РЯ, ассоциированного с мутациями в высокопенетрантных генах BRCA1 и BRCA2 было установлено, что вероятность развития рака яичника у женщин - носительниц мутаций в этих генах на протяжении жизни достигает 60% (Antoniou А., 2003). Вместе с тем, роль низкопенетрантных генов: СНЕК2, PTEN, Р53, FANC, NBS1 в развитии наследственного рака молочной железы и рака яичника изучена недостаточно (Claus E.B. et al., 1996).

Ген CHEK2, являющийся опухолевым супрессором, локализуется на 22-й хромосоме. Мутация HOOdelC гена СНЕК2, приводящая к синтезу

неполноценного укороченного белка со сниженной экспрессией, встречается в странах Европы с частотой от 0,2% до 1,4%, определяет 2-10 кратное увеличение риска развития РМЖ (Meijers-Heijboer Н. et al., 2002). Эта мутация также ассоциирована с повышенным риском опухолей других локализаций (яичника, простаты, толстой кишки, желудка) и может встречаться в «раковых семьях» с отсутствием генетических дефектов BRCA1 и BRCA2. Частота мутации СНЕК2 1 lOOdeIC существенно варьирует в этнических группах и различных популяциях (СНЕК2 Breast Cancer Case-Control Consortium, 2004). Генетический дефект СНЕК2 ivs2+lG>A считается специфичным для славянского населения, наиболее распространен (0,48%) и изучен в польской популяции (Cybulski С., 2004), приводит к образованию укороченного белка, ассоциирован с РМЖ, раком простаты, раком щитовидной железы (Cybulski С., 2004; Bogdanova N., 2005). Таким образом, исследование распространения и роли мутаций гена СНЕК2 в развитии наследственных форм рака яичника в российской популяции является актуальной задачей, направленной на разработку методов профилактики, раннего выявления и лечения рака яичника.

Цель исследования Определение роли мутации гена СНЕК2 в формировании наследственной предрасположенности к развитию рака яичника.

Задачи исследования

1. Сравнить частоту мутации гена СНЕК2 1 lOOdeIC у больных раком яичника и в здоровой популяции Санкт-Петербурга и Ленинградской области.

2. Изучить распространенность генетического дефекта СНЕК2 1 lOOdeIC и его вклад в мутационный спектр у больных с косвенными признаками наследственного рака яичника.

3. Определить взаимосвязь между генетическим дефектом СНЕК2 HOOdelC, другими founder мутациями, клиническими и морфологическими характеристиками РЯ, а также - связь полиморфизма СНЕК2 1157 с риском развития пограничных серозных опухолей яичников.

4. Оценить частоту минорных мутаций у больных РЯ, определить целесообразность их включения в минимальную диагностическую панель для этой неоплазии.

Научная новизна

Впервые определена распространенность мутации СНЕК2 11 OOdelC среди здоровых женщин и больных РЯ в Санкт-Петербурге и Ленинградской области. Выявлено место этого генетического дефекта в спектре других founder мутаций, предрасполагающих к развитию наследственного РЯ. Оценены клинические особенности РЯ, ассоциированного с дефектами генов СНЕК2 и BRCA. Определена связь наследования полиморфизма СНЕК2 I157T с риском развития пограничных серозных опухолей яичников.

Научно-практическая значимость Усовершенствован алгоритм ДНК-тестирования на «горячие мутации» BRCA и СНЕК2 с целью диагностики РЯ.

Реализация результатов работы Результаты работы внедрены и используются в практической и научно-исследовательской работе ФГУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова Росмедтехнологий».

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Научная работа изложена на 117 страницах машинописного текста, включает 17 таблиц и 19 рисунков. Список литературы состоит из 479 источников российских и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Материалом исследования послужила медицинская документация 294 больных РЯ, находившихся на лечении в онкогинекологическом отделении НИИ онкологии им. Н.Н.Петр'ова (рук. - проф., д.м.н. С.Я. Максимов) с 1990 по 2007 г. Возраст больных колебался от 21 до 89 лет, средний возраст равнялся 53,3±3,1 г.

В общей последовательной выборке из 294 больных РЯ была выделена группа из 59 пациенток с косвенными признаками наследственной формы заболевания. Возраст больных этой группы колебался от 21 до 66 лет, средний возраст составлял 40,8±2,4г. К клиническим признакам наследственных форм РЯ были отнесены:

а) случаи РМЖ и РЯ у ближайших родственников пациентки (первой и второй степени родства);

б) молодой возраст (40 лет и моложе на момент установления диагноза

РЯ);

в) наличие первично-множественных опухолей у пациенток.

Всем больным проведено ДНК-тестирование в лаборатории молекулярной генетики НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова (рук.- проф., д.м.н. E.H. Имянитов). Исследуемый материал большей частью был получен из архива патологоанатомической лаборатории НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова (рук. - проф., д.м.н. Д.Е. Мацко) и представлял собой срезы парафиновых блоков удаленных опухолей больных РЯ в период с 1990 по 2006 годы. Другая часть материала была получена путем отбора проб венозной крови больных РЯ, находившихся на лечении в гинекологическом отделении клиники НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова в 2005 - 2007 гг.

Контрольная группа представлена 448 здоровыми женщинами, которые прошли ДНК-тестирование на наличие врожденной мутации СНЕК2

HOOdelC, BRCA1 4153delA. Возрастной диапазон этой группы составлял 18-74 лет, средний возраст - 44,4±3,7 г.

Изучение распространения полиморфизма СНЕК2 I 157Т у больных с пограничными опухолями яичников проведено совместно в Польше (Интернациональным Центром по наследственному раку, Департаментом по генетике и патологии, Медицинским Университетом Померании) и в России (НИИ онкологии им. H.H. Петрова в Санкт-Петербурге). Учитывая этническую и географическую близость государств была изучена частота полиморфизма СНЕК2 I157T, предрасполагающего к возникновению пограничных опухолей яичников в этих популяционных группах. Возрастной интервал пациенток с доброкачественной цистаденомой колебался от 14 до 86 лет, средний возраст составил 45,8 лет. Возраст женщин, имеющих пограничные опухоли яичников, находился в интервале от 17 до 86 лет (средний возраст 44 года). Больные РЯ имели возрастной интервал от 18 до 80 лет, средний возраст составил 54,4 года.

С целью изучения распространения полиморфизма гена СНЕК2 1 157Т у больных с пограничными опухолями яичников в России изучена медицинская документация 77 женщин с серозными пограничными опухолями яичников, находившихся на лечении в онкогинекологических отделениях НИИ онкологии им. H.H. Петрова и Ленинградского областного онкологического диспансера с 1995 по 2005 год. Возрастной интервал исследованных пациенток колебался от 21 до 66 лет, средний возраст составил 45±3,9г. Контрольная группа была представлена 155 здоровыми женщинами - донорами крови в НИИ онкологии им. H.H. Петрова. Всем пациенткам было проведено ДНК-тестирование на наличие полиморфизма СНЕК2 I157T. Источником ДНК явились парафиновые срезы гистологического материала удаленной опухоли и лейкоциты периферической крови.

Для обнаружения генетических дефектов СНЕК2 и BRCA использовались методики выделения ДНК, аллель-специфическая ПЦР, электрофоретический анализ ДНК- фрагментов, аллель-специфическая ПЦР в режиме реального времени. Выделение ДНК из парафиновых срезов проводилось с использованием стандартного протокола (Imyanitov E.N. et al., 2006). Из лейкоцитов периферической крови ДНК выделялась с помощью модифицированного соль - хлороформного метода (Mullenbach R. Et al., 1989). Продукт реакции анализировали с помощью вертикального электрофореза фрагментов в 10% полиакриламидном геле с их последующей визуализацией в УФ свете после окрашивания бромидом этидия. Каждый исследуемый образец был представлен парой, состоящей из нормального (дикого) и мутантного аллеля. Для анализа результатов использовали термоциклер iCycler iQ Real Time Detection System (Bio-Rad), позволяющий проводить исследование аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени (Real-time PCR).

Информация об обследуемых пациентах собиралась в компьютерную базу данных Microsoft Access 2002. Для статистической обработки данных использовался пакет программ Statsoft Inc. Statistica 6.0.

Результаты работы

При обследовании 448 здоровых женщин выявлена только 1 мутация СНЕК2 HOOdelC, что позволяет приблизительно оценить частоту этого генетического дефекта как 2/1000 (0,2%). Известно, что в странах Северной и Западной Европы распространение мутации СНЕК2 1100delC колеблется от 0,2% до 1,4% (СНЕК2 Breast Cancer Case-Control Consortium., 2004). Полученные данные подтверждают низкую частоту встречаемости СНЕК2 llOOdelC (0,2%) среди здоровых женщин в популяции Санкт-Петербурга и Ленинградской области (Рис.1).

0,2%

и» СНЕК2 1НХМе1С нет мутации

Рис.1. Частота мутации СНЕК2 110(Ме1С в женской популяции Санкт-Петербурга и Ленинградской области (п=448)

Частота мутации СНЕК2 1100(1е1С у больных раком яичника

При обследовании 294 пациенток с морфологически подтвержденным раком яичника (без учета семейной истории заболевания) выявлено 2 (0,7%) случая носительства генетического дефекта СНЕК2 1100с1е1С (Рис.2).

| 0,7%

■ СНЕК2 1100Ье1С Ш мутации нет

Рис. 2. Частота мутации СНЕК2 1100с(е1С у больных РЯ (п=294)

Частота мутации СНЕК2 11<Ше1С у больных раком яичника с косвенными признаками наследственной формы

В третьей группе больных с косвенными признаками наследственной формы РЯ выявлена 1 (1,7%) мутация СНЕК2 1 КЮсЫС из 59 пациенток, прошедших ДНК-тестирование (Рис.3).

1,7% 1

* СНЕК2 llOOdelC

98.3'« мутации нет

„-raHv*"

Рис. 3. Частота мутации СНЕК2 llOOdelC у больных раком яичника с косвенными признаками наследственной формы (п=59)

Полученные данные характеризуют СНЕК2 1 lOOdelC (0,2%) как редко встречающийся генетический дефект среди здоровых женщин в популяции Санкт-Петербурга и Ленинградской области. Трехкратное преобладание его частоты у больных РЯ (0,7%) и восьмикратное - у пациенток с косвенными признаками наследственной формы (1,7%) по сравнению со здоровыми носителями отражают долю всего двух обнаруженных мутаций. Малое количество наблюдений не позволяют установить достоверное преобладание этой мутации у больных РЯ (р>0,1). Полученные данные согласуются с результатами исследований других популяционных групп в России, которые также указывают на отсутствие ассоциации РЯ с мутацией СНЕК2 1 lOOdelC (Федорова O.E., 2006; Смирнова Т.Ю., 2008). Вместе с тем, прослеживается тенденция к преобладанию частоты мутации СНЕК2 11 OOdelC среди больных с признаками наследственного рака (р=0,07).

Таблица 1

Частота носительства мутации СНЕК2 1100ёе1С среди здоровых женщин и больных раком яичника____

Группа обследованных Число женщин Число носителей мутации %

Здоровые женщины (контроль) 448 1 0,22±0,22

Больные РЯ 294 2 0,7±0,48

Больные РЯ с косвенными признаками наследственных форм 59 1 1,7±1,69

р,.2 >0.1 X2 = 1.26: PL.3 <0.1 х'= 3.00; р23 >0,1 t = 0-60

Учитывая схожесть мутаций генов в протоколах генетического скрининга для РЯ и РМЖ, проведен сравнительный анализ частоты генетического дефекта СНЕК2 1100<1е1С у больных РЯ и РМЖ* (*по данным лаборатории онкогенетики НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова). Мутация СНЕК2 1100с1е1С у больных РЯ (0,7%) встречается в 3 раза реже, чем у больных унилатеральным РМЖ (2,1%; р>0,1) и более чем в 7 - по сравнению с больными билатеральным РМЖ (5,2%; р<0,01). Результаты представлены на рис.4.

р|>2 р> 0,1 Х2 = 2,5; р,.3 < 0,01; Х2 = 9,4 Рис. 4. Частота мутации СНЕК2 1100с1е1С у больных раком молочной железы* и раком яичника (*данные лаборатории онкогенетики НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова)

Характеристика спектра мутаций у больных РЯ

Для определения спектра мутаций, характерных для РЯ, а также оценки вклада в него СНЕК2 1100с1е1С нами было проведено ДНК-тестирование 294 пациенток, имевших эту опухоль, выбранных без учета возраста возникновения заболевания и семейного анамнеза. Изучались следующие генетические дефекты: СНЕК2 1100с1е1С, ВКСА1 4153с1е1А, В11СА1 5382тзС, ВЯСА! 185с1е1АО, ВЯСА2 6174ёе1Т, СНЕК2 т2+Ш>А, ВЯСА1

C61G. Нами обнаружены в общей сложности 37 мутаций генов BRCA1/2 и СНЕК2 (см. табл. 2). Выявленные генетические дефекты преимущественно были локализованы в BRCA1, важный вклад внесли минорные мутации: BRCA1 4153delA (1%) и BRCA1 185delAG (1%); тогда как СНЕК2 1 lOOdelC (0,7%) и BRCA2 6174delT (0,3%) несущественно ассоциированы с риском развития РЯ. Мутации СНЕК2 ivs2 +1G>A и BRCA1 C61G у больных РЯ в проведенном исследовании не обнаружены. Вклад СНЕК2 HOOdelC в спектр генетических мутаций у больных РЯ в Санкт-Петербурге и Ленинградской области меньший, чем при РМЖ* (*по данным лаборатории онкогенетики НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова). При билатеральном РМЖ эта разница статистически высоко достоверна (р<0,01).

Таблица 2

Тип мутации Число больных %

BRCA1 5382insC 28 9,5±1,7

BRCA1 4153delA 3 1,0±0,6

BRCA1 185delAG 3 1,0±0,6

CHEK2 HOOdelC 2 0,7±0,5

BRCA2 6174delT 1 0,3±0,3

Мутаций не обнаружено 257 87,4±0,9

ВСЕГО 294 100

0,7%

fetirtiffi чи

11,9%

в СНЕК2 HOOdelC ЯBRCA1/2 Ш нет мутаций

Рис. 5. Доля СНЕК2 1100де1С в спектре генетических мутаций больных раком яичника (п=294)

Значение возрастных характеристик рака яичника, ассоциированного с наследованием мутаций СНЕК2 1100(1е1С и В КС А

С целью изучения связи возникновения РЯ, ассоциированного с носительством мутаций СНЕК2 110(Ме1С, ВГ1СА и возрастом манифестации заболевания было проведено ДНК-тестирование 294 больным РЯ, отобранным без учета возраста и наследственного анамнеза (общая группа). Установлено, что возрастной интервал возраста выявления РЯ колебался от 21 до 89 лет (средний возраст 53,3±0,7г.). Присутствие мутации высокопенетрантного гена ВЯСА1 4153с1е1А определило возникновение этой опухоли у молодых женщин от 39 до 51 года (средний возраст 44,0±3,6г.), что указывает на важность выявления этого генетического дефекта для оценки предрасположенности к наследственному РЯ. Средний возраст заболевания у больных носителей СНЕК2 1100с1е1С (66,5±0,5г.) превышал таковой как в общей группе, так и у носителей мутаций ВИСА. Средний возраст развития неоплазии у пациенток с генетическими дефектами: В11СА1 185ёе1АС (54,3±6,7г.), ВЯСА1 5382тзС (52,9±1,9г.) и В11СА2 6174с1е1Т (50л.) близок к возрастному показателю у больных в общей группе (53,3г.).

Таблица 3

Сравнение возраста больных раком яичника - носителей мутаций СНЕК2 1100с1е1С, ВЯСА1/2 (п=37) и больных раком яичника без мутаций (п=257)

Тип мутации Число больных Средний возраст, г. 95% доверительный интервал

СНЕК2 1100с1е1С 2 66,5±0,5 60,1-72,9

ВЯСА1 4153ёе1А 3 44,0±3,6 25,3-83,3

В11СА1 5382тзС 28 52,9±1,9 49,1-56,7

ВЯСА1 185с1е1АС 3 54,3±6,7 28,4-59,5

ВЯСА2 6174ёе1Т 1 50,0 -

Все мутации 37 52,9±1,6 49,6-56,3

Без мутаций 257 53,3±0,7 51,8-54,9

Несмотря на отсутствие различий средних значений, при сравнении групп больных с мутациями и без мутаций с использованием теста Уитни-Манна, выявлены различия возрастных распределений {Х=2,22 р=0,026).

Характеристика гистологической структуры рака яичника, ассоциированного с наследованием генетических мутаций

При изучении гистологических препаратов у 37 больных раком яичника, с наличием мутаций СНЕК2 1100с1е1С и ВИСА 1/2, оказалось, что все опухоли были представлены серозными аденокарциномами, вне зависимости от характера генетического дефекта. В общей выборке больных отмечалось большее разнообразие гистологических типов. Серозная аденокарцинома наблюдалась в 89,1% случаев, муцинозная и эндометроидная аденокарциномы составляли по 3,1%, смешанная аденокарцинома - 2,4%, недифференцированный рак - 2% (табл.4). В группе больных с косвенными признаками наследственной формы рака яичника также преобладала серозная аденкокарцинома (91,5%), муцинозная аденкоарцинома составляла 5,1% всех случаев, эндометроидная и смешанная аденокарциномы занимали по 1,7%, недифференцированных раков в этой выборке не было (табл. 5).

Таблица 4

Гистологические типы рака яичника в общей группе (п=294)_

Гистологический тип РЯ Число наблюдений %

Серозная аденокарцинома 263 89,4±1,8

Муцинозная аденокарцинома 9 3,1±1,0

Эндометриоидная аденокарцинома 9 3,1±1,0

Смешанная аденокарцинома 7 2,4±0,9

Недифференцированный рак 6 2,0±0,8

Всего 294 100

Таблица 5

Гистологические типы рака яичника с косвенными признаками наследственной формы (п=59)___

Гистологический тип РЯ Число наблюдений %

Серозная аденокарцинома 54 91,5±3,7

Муцинозная аденокарцинома 3 5,1 ±2,9

Эндометриоидная аденокарцинома 1 1,7±1,7

Смешанная аденокарцинома 1 1,7±1,7

Недифференцированный рак 0 -

Всего 59 100

Таблица 6 Гистологические типы рака яичника в выборке больных без признаков наследственной формы (п=235)

Гистологический тип РЯ Число наблюдений %

Серозная аденокарцинома 209 88,8±2,0

Муцинозная аденокарцинома 6 2,5±1,0

Эндометриоидная аденокарцинома 8 3,7±1,3

Смешанная аденокарцинома 6 2,5±1,0

Недифференцированный рак 6 2,5±1,0

Всего 235 100

Различия в частоте серозных аденокарцином среди носителей изученных мутаций СНЕК2 1100с1е1С и ВЯСА1/2 (37/37) и общей выборкой больных РЯ (263У294) статистически достоверны (%2 = 4,458; р<0,05). При сравнении с выборкой пациентов без признаков наследственной формы (209/235) эти различия еще более значимы {у2 = 4,526; р<0,05).

Серозная Другие гистотипы РЯ

аденокарцинома

• РЯ - без косвенных признаков наследственной формы (п=235)

* РЯ в общей группе (п=294)

в РЯ с косвенными признаками наследственной формы (п=59)

* РЯ, ассоциированный с мутациями ВЯСА и СНЕК2 (ч=37)

Рис.6. Частота серозной аденокарциномы у больных раком яичника

Характеристика гистологической злокачественности рака яичника, связанного с генетическими мутациями

Нами изучена степень гистологической злокачественности опухоли у больных РЯ с генетическими дефектами: ВЯСА1 4153с1е1А , СНЕК2 1100с1е1С, В11СА1 53821шС, ВЯСА1185ёе1АС, В11СА2 6174с1е1Т. У всех пациенток, являвшихся носительницами В КС АI 4153с1е1А, РЯ характеризовался высокой степенью гистологической злокачественности (100%). РЯ, ассоциированный с ВЛСАI 5382in.sC был представлен опухолью высокой степени злокачественности в 78,9%. У одной из двух исследованных пациенток, носительниц СНЕК2 110(Ме1С наблюдался РЯ высокой степени злокачественности (50%), у второй - низкой степени злокачественности (50%). Одна пациентка с мутацией ВЛСА2 6174с1е1Т имела аденокарциному яичника высокой степени гистологической злокачественности, у 2 носительниц ВЯСА1 185с1е1АС РЯ был представлен опухолью высокой степени злокачественности и у 1 - умеренной степенью гистологической злокачественности. Статистически значимых различий в распределении

степени гистологической злокачественности в зависимости от типа мутации получить не удалось (РТМф>0,1).

Таблица 7

Степень гистологической злокачественности рака яичника, связанного с генетическими мутациями (п=37)_

Тип мутации Степень гистологической злокачественности

Высокая (03) Умеренная (02) Низкая (01) Всего

ВЯСА1 5382шбС 21 6 1 28

ВЯСА1 4153с1е1А 3 - - 3

ВЯСА1 185<Зе1АО 2 1 - 3

ВЯСА2 6174с1е1Т 1 - - 1

СНЕК2 1100с1е1С 1 - 1 2

Всего 28 (75,7%) 7 (18,9%) 2 (5,4%) 37(100%)

Характеристика РЯ с косвенными признаками наследственной формы

В большинстве стран ДНК диагностика проводится пациенткам, имеющим косвенные клинические признаки наследственного рака. На их основании были отобраны 59 больных РЯ. Изученная группа составила 20% в общей выборке (59/294). 37 пациенток являлись молодыми женщинами репродуктивного возраста - 40 лет и моложе (12,6%). В этой группе 26 больных РЯ имели родственников 1 или 2 степени родства больных РЯ или РМЖ, что составило 8,8%. У 1 пациентки наблюдался первично-множественный характер опухолевого процесса, рак яичника у нее сочетался с умеренно дифференцированной аденокарциномой маточной трубы (0,3%). Отобранным 59 пациенткам с косвенными признаками наследственного РЯ было проведено ДНК-тестирование, у 12 (20,4%) из них были идентифицированы генетические дефекты. Мутационный спектр составили:

ВЯСА1 5382шбС, ВЯСА1 4153с1е1А, СНЕК2 1100ае1С. Обнаруженные мутации наблюдались у 20,3% (12/59) больных РЯ с косвенными признаками наследственной формы. Основной составляющей спектра стала мутация ВЯСА1 5382тзС, которая была выявлена у 9 больных (15,3%). Мутация В11СА1 4153с1е1А идентифицирована в 2-х случаях (3,4%). Генетический дефект СНЕК2 1100с1е1С обнаружен у одной пациентки (1,7%). Ни в одном случае не наблюдалось сочетания выявленных мутаций, что может указывать на важность каждой из них в предрасположенности к развитию РЯ. Генетические дефекты В11СА1 185с1е1АО, ВЯСА2 6174с1е1Т, обнаруженные у больных РЯ в выборке, смешанной по возрасту и семейному анамнезу, в данной группе пациенток не были найдены.

Для сравнения спектра мутаций, сопровождающих РЯ с косвенными признаками наследственной формы, из общей выборки была выделена группа больных РЯ без наследственной отягощенности (п=235).

Таблица 8

Спектр мутаций больных раком яичника, не имеющих косвенных признаков наследственной формы (п=235)__

Мутации Число больных %

ВЯСА1 4153ёе1А 1 0,4±0,4

ВЯСА1 5382тзС 19 8,1±1,8

СНЕК2 1100с1е1С 1 0,4±0,4

ВЯСА1 185ёе1АС 3 1,3±0,7

ВЯСА1 С6Ю - -

ВЯСА2 6174с1е1Т 1 0,4±0,4

СНЕК2 ¡уб2+Ю>А - -

Всего мутаций 25 10,6±2,0

Без мутаций 210 89,4±1,5

Всего больных 235 100

В исследованной группе наблюдалось большее разнообразие (5 мутаций против 3) и меньшая частота носительства мутаций (10,6%), по сравнению с

18

больными РЯ, доля генетического дефекта СНЕК2 1100ёе1С была меньше и составляла 0,4% (табл. 8).

Характеристика наследственного рака яичника

ДНК-тестирование 59 пациенток, имеющих косвенные признаки наследственного РЯ, позволило выделить 12 больных с наследственной формой этого заболевания. Наследственный РЯ составил 4% в общей выборке пациенток с РЯ (п=294) и 20,3% в группе больных с косвенными признаками наследственной формы этого заболевания (п=59). Таким образом, наследственный РЯ преимущественно связан с мутациями в гене В11СА1, с преобладанием делеции 5382тзС (75%), важный вклад в мутационный спектр внесла и ВЯСА1 4153с1е1А (16,7%), являющаяся специфичной для России. Меньшая доля наследственного РЯ в проведенном исследовании была обусловлена мутацией СНЕК2 1100с1е1С (8,3%).

Таблица 9

Характеристика мутационного спектра наследственного рака яичника (Ö)__

Мутации Количество мутаций

BRCA1 5382insC 9 (75%)

BRCA1 4153delA 2(16,7%)

СНЕК2 1 lOOdelC 1 (8,3%)

Всего 12(100%)

Проведенный анализ подтверждает данные о связи наследственного РЯ

с относительно небольшой группой генетических дефектов, определяющих

его развитие (Федорова O.E. и соавт., 2006; Смирнова Т.Ю., 2008), что

упрощает генетический скрининг этой патологии. Мутация СНЕК2 1 lOOdelC

вносит свою лепту в развитие наследственной предрасположенности к

развитию РЯ в проведенном исследовании, но не позволяет рассматривать ее

в качестве генетического маркера РЯ для популяции Санкт-Петербурга и

Ленинградской области из-за редкой встречаемости. Средний возраст

19

больных наследственным РЯ составил 51,3 года, тогда как в общей выборке, смешанной по наследственному анамнезу составлял 53,3 года.

Гистологическая характеристика наследственного рака яичника

У 12 пациенток, страдающих наследственным РЯ, были изучены гистологические особенности опухолей. В результате исследования было определено, что во всех 12 случаях (100%) наблюдалась серозная аденокарцинома. У 11 (91,7%) пациенток опухоль имела высокую степень гистологической злокачественности, 1 (8,3%) случай РЯ характеризовался низкой злокачественностью, связанной с мутацией СНЕК2 1100с1е1С.

Частота мутации ВЯСА1 4153с1е1А у больных раком яичника

Мутация ВЯСА1 4153с1е1А, имеющая статус русской, в нашем исследовании оказалась ассоциирована с риском развития РЯ высокой степени гистологической злокачественности у женщин молодого возраста. Существуют противоречивые данные о распространении этого генетического дефекта в различных поиуляционных группах России. В нашем исследовании обнаружены 3 мутации ВИСА1 4153ёе1А в смешанной выборке больных РЯ (1%), 2 мутации присутствовали у пациенток с косвенными признаками наследственного РЯ (3,3%). У здоровых женщин контрольной группы (448) этот генетический дефект не был идентифицирован. В результате исследования выявлена связь риска развития РЯ с наследованием мутации ВЯСА1 4153с1е1А в российской популяции (табл.10), статистически значимая в общей выборке больных РЯ (р<0,05) и высоко достоверная в группе больных с косвенными признаками наследственной формы (р<0,001).

Таблица 10

Частота мутации ВЯСА1 4153с1е1А у больных раком яичника и у здоровых женщин

Группа Число женщин (П) Число носителей мутации (п) %

Здоровые женщины (контроль) 448 - -

Рак яичника без учета семейной истории 294 3 1,02±0,69

Рак яичника с косвенными признаками наследственного рака 59 2 3,33±2,46

р| 2 <0.05 х2 = 4.5: ри <0.00! Х2 = 15.24; р2 3 >0.1 Х2 = 1.97

5,3% у

96,7% 1 ■ ВЯСА1 4153с1е1А есть ' " « нет ВШ\1 4153с1е1А ШШР'

Рис. 7. Частота мутации В11СА1 4153с1е1А у больных раком яичника с косвенными признаками наследственной формы (п=59)

1%

|

■ ВКА14153с)е1А есть нет В(*СА1 4153Ье1А

Рис. 8. Частота мутации ВЯСА1 4153с1е1А у больных раком яичника в общей группе (п=294)

Значение полиморфизма СНЕК2 I157T у больных с опухолями яичников

Таблица 11

Частота полиморфизма СНЕК2 1157Т, встречающаяся при различных типах опухолей яичников____

Тип опухоли Количество обследованных женщин (п) Присутствие мутации СНЕК2 I157T (п) % P-level

Цистаденома яичника 539 42 7,8±1,2 р<0,01 Х2=8,51

Пограничная серозная опухоль яичника 122 14 11,5±2,9 р<0,001 Х2=10,97

РЯ 447 26 5,8±1,1 Р>0,1 Х2=0,844

Контроль 4000 193 4,8±0,3

Результат исследования определил статистически достоверную ассоциацию полиморфизма СНЕК2 1157Т у польских женщин с высоким риском развития пограничных серозных опухолей яичников и доброкачественных яичниковых цистаденом, в меньшей степени - с РЯ (данные лаборатории онкогенетики НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова).

Таблица 12

Частота полиморфизма СНЕК2 1157Т у пациенток с пограничными серозными опухолями яичников в России___

Группа Количество обследованных Полиморфизм СНЕК2 1157Т % P-level

С пограничной опухолью 77 9 11,7 ±3,7 <0,05 Х-4,12

Здоровые 155 7 4,5±1,8

В российской популяции был обнаружен полиморфизм СНЕК2 I 157Т у 9 (11,7%) пациенток с пограничными серозными опухолями яичников из 77 исследованных и у 7 (4,7%) из 155 контрольных случаев, результат исследования подтвердил статистически значимую связь (р<0,05)

22

полиморфизма СНЕК2 I 157Т с высоким риском развития пограничных

серозных опухолей у российских женщин, что хорошо соотносится с

данными польской популяции.

Выводы

1. Мутация СНЕК2 110(ШС обнаружена у 2/294 (0,7%) пациенток с раком яичника и у 1/448 (0,2%) здоровых женщин. Таким образом, в отличие от мутаций в генах ВЯСЛ1 и ВЯСА2, данный аплельный вариант специфически ассоциирован с раком молочной железы (14/660; 2,1%; р < 0,01), но не раком яичника (2/294; 0,7%; р >0,1).

2. Полиморфизм СНЕК2 1157Т достоверно ассоциирован с риском развития пограничных опухолей яичника: частота вариантного аллеля у пациенток с данной патологией составляет 9/77 (11,6%), в то время как в группе здоровых женщин это показатель равен 7/155 (4,5%) (р <0,05).

3. Вклад других минорных мутаций в заболеваемость РЯ составляет: 1% (3/294) для ВЯСА1 4153с1е1А, 1% (3/294) для ВЯСА1 185с1е1АО, и 0,3% (1/294) для ВЯСА2 6174с1е1Т.

4. Мутации ВЯСА1 4153с1е1А и ВЛСА1 185с1е1АО целесообразно включить в минимальную диагностическую панель для рака яичника. Диагностика двух других минорных вариантов - СНЕК2 1100с)е]С и ВЯСА2 6174(1е1Т не является существенным компонентом медицинской помощи больным этим заболеванием.

Практическая значимость

1. Обоснована необходимость тщательного сбора наследственного анамнеза у больных раком яичника для выделения наследственных форм с последующим ДНК-тестированием на генетические мутации ВЯСА1 4153с1е1А и ВЯСА1 185с1е]АО .

2. Определена минорная роль мутации гена СНЕК2 1100с1е1С в развитии рака яичника в России, позволяющая исключить его из ДНК-

тестирования при медико-генетическом консультировании больных и их родственников.

3. Наследственный рак яичника преимущественно представлен серозными аденокарциномами с низкой дифференцировкой, что необходимо учитывать для проведения адекватного лечения.

4. Больным с пограничными серозными опухолями яичников и их родственникам целесообразно проводить ДНК-тестирование на наличие вариантного аллеля СНЕК21157Т.

Список работ по теме диссертации

1. Соколенко А.П. Ассоциация между полиморфизмом I157T гена СНЕК2и риском пограничных серозных опухолей яичника у жительниц России / А.П. Соколенко, О.С. Лобейко, Н.Ю. Крылова и соавт. // Сибирский онкологический журнал: Научно - практическое издание.-2006,- №4,- С.12-15.

2. Порханова Н.В. Высокая частота мутаций в гене BRCA1 в спорадических раках яичника / Н.В. Порханова, Н.Ю. Крылова. Д.Н. Пономарева и соавт. // Материалы Х1съезда онкологов.-2007.-С. 12-15.

3. Krylova N.Y. BRCA1 4153delA founder mutation in Russian ovarian cancer patients / N.Y. Krylova, O.S. Lobeiko, A.P. Sokolenko, A.G. lyevleva, E.N. Imyanitov, et al. // Hereditary Cancer in Clinical Practice.-2006.-Vol.4 (4).-P.193-196.

4. Szymanska-Pasternak J. CHEK2 variants predispose to benign, borderline and low-grade invasive ovarian tumors / J.Szymanska-Pasternak, A. Szymanska, K. Medrek, E.N. Imyanitov, N.Y. Krylova. et al. // Gynecologic Oncology.-2006.-Vol.102,- P.429-431.

5. Suspitsin E.N. High frequency of BRCA1, but not CHEK2 or NBSI (NBN), founder mutations in Russian ovarian cancer patients / E.N. Suspitsin, N.Y. Sherina, D.N. Ponomariova, N.Y. Krylova, et al. // Hereditary Cancer in Clinical Practice. - 2009.-Vol.7(5).-P.l-7.

6. Krylova N.Y. CHEK2 1 lOOdelC in Russian ovarian cancer patients / N.Y. Krylova, D.N. Ponomariova, N.Y. Sherina, E.N. Imyanitov, et al. // Hereditary Cancer in Clinical Practice. -2007. - Vol. 5(3).- P.153-156.

Подписано в печать 5 мая 2009 г. Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ №_

Типография «Восстания-1» 191036, Санкт-Петербург, Восстания , 1.