Автореферат и диссертация по медицине (14.01.07) на тему:Применение новых глазных капель деринат® в комплексной терапии герпетических кератитов

На правах рукописи

СТИРМАНОВА Елена Рафиковна

ПРИМЕНЕНИЕ НОВЫХ ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ ДЕРИНАТ® В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ

ГЕРПЕТИЧЕСКИХ КЕРАТИТОВ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.01.07 - глазные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 2 НОЯ 2012

Москва-2012

005055381

005055381

Работа выполнена в ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Минздравсоцразвития России (директор института - Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Нероев В.В.)

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Катаргина Людмила Анатольевна

Официальные оппоненты:

Корниловский Игорь Михайлович - доктор медицинских наук, профессор, кафедра глазных болезней Института усовершенствования врачей ФГБУ "Национальный медико-хирургический центр им. Н.И.Пирогова" Министерства здравоохранения и социального развития РФ, профессор кафедры глазных болезней

Круглова Татьяна Борисовна - доктор медицинских наук, ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Минздравсоцразвития России, отдел патологии глаз у детей, главный научный сотрудник

Ведущая организация: ГУ «Московский областной научно - исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского»

Защита состоится «13» ноября 2012 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 208.042.01 при ФГБУ «Московский научно- исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Минздравсоцразвития России (адрес института 105062, Москва, ул. Садовая - Черногрязская, 14/19)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБУ «Московский научно - исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Минздравсоцразвития России (105062, Москва, ул. Садовая - Черногрязская, 14/19)

Автореферат разослан « 12 » октября 2012 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Киселева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Герпетическая инфекция является одной из наиболее распространенных и плохо контролируемых вирусных инфекций человека. Как показано во всем мире, вирус герпеса - наиболее частая причина поражения роговицы [Майчук Ю.Ф., 2000; Каспаров A.A., 1994; Martines MJ. et al., 1997; Sharma A., Shimeld С., 1997 и др.]. Общее число больных герпетическим кератитом в нашей стране ежегодно превосходит 300000 [Майчук Ю.Ф., 1997].

Рецидивы заболевания наблюдаются у 33 % больных после перенесенного впервые герпетического кератита, вероятность повторных обострений после первого рецидива достигает 50 % [Каспаров A.A., 1994, 2004]. В структуре слепоты вследствие поражения роговицы (так называемой роговичной или корнеальной слепоты) герпетические кератиты прочно занимают первое место [Каспаров A.A., 2002, 2004; Майчук Ю.Ф. с соавт., 1990].

Широкое распространение, рецидивирующее течение, неблагоприятные исходы герпетического кератита заставляют офтальмологов искать пути лечения этого заболевания. Несмотря на значительный прогресс в терапии герпесвирусной инфекции глаз в последние годы, проблема разработки лечения офтальмогерпеса актуальна, имеет важное социальное значение и далека от своего окончательного решения [Майчук Ю.Ф.,2001, 2005, 2006; Каспаров A.A., 2003,2005,2006; Kaufman Н.Е., 2002, 2005; Dawson C.R., 1990; Wilhelmus K.R., 2001,2003].

В настоящее время для лечения офтальмогерпеса применяется комплексная терапия, основным действующим началом которой, является специфическая противовирусная терапия («золотой стандарт» Ацикловир) Помимо противовирусных препаратов обычно применяются иммуномодуляторы (Ликопид, Т-активин), репаранты (Корнерегель, Солкосерил), антиоксиданты (Гистохром, Мексидол). Однако, несмотря на прогресс в терапии герпетических кератитов у значительного числа больных отмечается тенденция к хроническому течению, с частыми рецидивами и тяжелыми исходами по зрению [Майчук Ю.Ф., 2001, 2005; Каспаров A.A., 2005; Kaufman Н.Е., 2002].

Поиск и создание новых лекарственных средств, стабилизирующих иммунитет, сочетающих в себе способность к стимуляции регенерации тканей роговицы с противовирусной, антиокислительной активностью, является актуальной задачей современной офтальмологии.

В этом отношении большой интерес представляет отечественный препарат Деринат®. Деринат® - это натриевая соль ДНК, деполимеризованная ультразвуком до частиц с молекулярной массой 270-500 кД, растворенная в 0,1% растворе хлорида натрия. Препарат получают из молок осетровых и лососевых рыб.

Главным фармакологическим действием препарата является стимуляция процессов регенерации и репарации, функциональной активности практически всех клеток иммунной системы. Происходит активация клеточного иммунитета -повышается способность естественных киллеров и антигеннеспецифических Т-киллеров убивать клетки, зараженные внутриклеточными возбудителями: вирусами, хламиями, микоплазмами и др. [Каплина Э.Н., Вайнберг Ю.П., 2007]

В медицинской практике препарат Деринат® нашел широкое применение в таких областях медицины, как педиатрия, гинекология, кардиология, в лечении больных с ЛОР-патологией и онкогематологических больных [Дондурей Е.А. и др, 2010, Серов В.Н. и др, 2010, Рафаилов В.В., 2009]. В офтальмологии описаны единичные случаи применения Дерината® системно и в виде инсталляций раствора, предназначенного для наружного и местного применения. Препарат Деринат® применялся при диабетической ретинопатии, пигментной дегенерации сетчатки, ишемической оптической нейропатии, прогрессирующей миопии и спазме аккомодации [Каплина Э.Н., Бажанова Н.О., 2008]. Применение препарата позволяет уменьшить аллергическую и воспалительную реакцию глаза, риск возникновения и увеличения макулярного отека на глазном дне у пациентов, перенесших лазеркоагуляцию сетчатки по поводу препролиферативной диабетической ретинопатии [Кузин В.Б., Соколова Т.П., 2009]. При лечении травматических кератитов и эрозий роговицы Деринат® ускоряет выздоровление пациентов в среднем на 2-3 дня [Егоров Е.А., Сугоняева О.Ю., 2004]

Терапевтический эффект при различных глазных заболеваниях послужил основанием для создания новой специальной глазной лекарственной формы препарата Деринат - Деринат®, глазные капли (натриевая соль ДНК, растворенная в 0,9% растворе хлорида натрия), фирма ЗАО «ФП«ТЕХНОМЕДСЕРВИС», Россия.

Цель работы - медико-биологическое изучение новой лекарственной формы препарата Деринат® - глазные капли, и оценка его клинической эффективности в комплексной терапии герпетических кератитов.

Для достижения поставленной цели определены следующие задачи:

1) Экспериментально оценить безвредность, переносимость и репарационные свойства новой глазной лекарственной формы препарата Деринат® - глазные капли.

2) Оценить терапевтическую эффективность глазных капель Деринат® на модели экспериментального герпетического кератита у кроликов.

3) Изучить влияние глазных капель Деринат® на антиокислительную активность слезной жидкости при экспериментальном офтальмогерпесе.

4) Определить терапевтическую роль препарата Деринат® в комплексном лечении герпетических кератитов в клинике и разработать показания для его применения.

Научная новизна

• Доказаны переносимость, безвредность новой отечественной лекарственной формы препарата Деринат® - глазные капли, в эксперименте.

• Впервые в эксперименте, на модели дозированной эрозии у кроликов, установлено, что инстилляции глазных капель Деринат® сокращают (р<0,05) сроки реэпителизации роговицы по сравнению с традиционно применяемым в офтальмологии репарантом Корнерегель.

• Установлено, что инстилляции глазных капель Деринат® при эксперементальном офтальмогерпесе повышают антиокислительную активность слезной жидкости на 15,7%.

• Впервые в эксперименте и клинике доказана высокая терапевтическая эффективность новой лекарственной формы Деринат® - глазные капли, в лечении

герпетических кератитов, что проявляется сокращением сроков эпителизации очагов изъязвлений и резорбции инфильтрации роговицы (р<0,05), сокращением сроков пребывания в стационаре (р<0,05), сокращением сроков болевого синдрома (р<0,05). Это является обоснованием целесообразности применения Дерината® в комплексной терапии герпетических кератитов.

Практическая значимость

• Разработана нормативно-техническая документация для представления в Министерство здравоохранения и социального развития РФ на разрешение применения препарата Деринат® в новой лекарственной форме Деринат® - глазные капли, в офтальмологической практике.

• Внедрение глазных капель Деринат® в комплексную терапию герпетических кератитов позволит достоверно повысить терапевтическую эффективность лечения и сократит:

-продолжительность болевого синдрома - в среднем на 2,7 суток, -сроки эпителизации роговицы - в среднем на 2,8 суток, -сроки резорбции инфильтрации в среднем на 2,8 суток,

и, следовательно, приведет к более быстрому выздоровлению и уменьшению сроков пребывания в стационаре в среднем на 3,8 суток, что повысит качество жизни пациента.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальное изучение доказало хорошую переносимость и безвредность длительного применения (30 дней) глазных капель Деринат®, а также сокращение сроков реэпителизации скарифицированной роговицы на модели дозированной эрозии у кроликов.

2. На модели экспериментального офтальмогерпеса у кроликов установлена высокая противогерпетическая активность глазных капель Деринат®, сопоставимая с эффективностью глазной мази Зовиракс и доказана целесообразность их включения в комплексную терапию герпетических кератитов.

3. Установлено повышение антиокислительной активности слезной жидкости в острой стадии экспериментального офтальмогерпеса при инсталляции препарата Деринат® - глазные капли.

4. Установлено, что при сочетанном применении глазных капель Деринат® с глазной мазью Зовиракс необходимо соблюдать интервал между их применением не менее 2-х часов.

5. Доказано повышение лечебной эффективности комплексной терапии пациентов с герпетическим кератитом, при включении препарата Деринат® - капли глазные, что проявляется сокращением продолжительности основных клинических критериев заболевания: способствует сокращению продолжительности болевого синдрома, снижению тяжести основных клинических симптомов заболевания, сокращению сроков пребывания в стационаре (р<0,05).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на II и III Российском общенациональном офтальмологическом форуме (Москва 2009, 2010), на межотделенческой конференции в ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Минздравсоцразвития РФ (Москва, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них 3 - в печатных изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы и 34 рисунка (из них 26 диаграмм и 8 иллюстраций). Библиография включает 237 источников, в том числе 155 отечественных и 82 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Диссертационная работа содержит экспериментальный и клинический разделы. Исследования проводились на базе ФГБУ «МНИИ глазных болезней им. Гельмгольца» Минздравсоцразвития России - в отделе инфекционных и аллергических заболеваний глаз (руков. д.м.н., проф. Ю.Ф. Майчук);

гистологические исследования - в отделе патологической анатомии и гистологии глаза (руков. д.м.н., проф. И.П. Хорошилова-Маслова), вирусологические, бактериологические исследования - в лаборатории иммунологии, вирусологии и микробиологии (руков. д.б.н., проф. О.С. Слепова, консультант к.м.н. Г.И. Кричевская); биохимические исследования - в отделении патофизиологии и биохимии глаза (руков. д.б.н., проф. Н.Б. Чеснокова).

Материал и методы экспериментальных исследований

Экспериментальные исследования проведены на 95 кроликах (190 глаз) породы шиншилла массой 2,0-3,0 кг. На интактных животных исследованы:

• общая и местная переносимость глазных капель Деринат® (10 кроликов);

• влияние препарата Деринат® - глазные капли на нормальные физиологические функции глаза (10 кроликов).

На экспериментальных моделях изучены:

• влияние Деринат® - глазные капли на реэпителизацию скарифицированного эпителия роговицы на модели дозированной эрозии (15 кроликов);

• антиокислительная активность глазных капель Деринат® на модели экспериментального офтальмогерпеса (15 кроликов);

• терапевтическая эффективность глазных капель Деринат® на модели экспериментального офтальмогерпеса (45 кроликов).

Исследование переносимости и влияния на нормальные физиологические функции глаза кроликов глазных капель Деринат® проведено на 10 кроликах, которые методом рандомизации были разделены на 2 группы по 5 кроликов. 1-я группа (опытная) получала инсталляции глазных капель Деринат® 6 раз в день, 2-я группа (контрольная) - по той же схеме инсталляции 0,9% раствора натрия хлорида (физиологический раствор) в течение 30 дней.

Общая переносимость глазных капель Деринат® определялась по изменениям в характере поведения (агрессивность, вялость) и в общем состоянии (вес, внешний вид, состояние шерсти, аппетит) животных. О местной

переносимости препарата судили по степени тяжести выраженности признаков, указывающих на их токсическое или аллергизирующее действие. По истечении исследуемого срока глаза энуклеировали и проводили гистологические исследования.

Гистологические исследования. Для гистологических исследований глаза кроликов фиксировали в 10% растворе формалина, затем, по общепринятой методике, заливали парафином и делали тонкие срезы (5-7 микрон), которые окрашивали гематоксилином-эозином.

Для исследования влияния глазных капель Деринат® на физиологические функции глаза определяли ВГД по стандартной методике тонометром Маклакова, размер зрачка регистрировали в условиях стандартного дневного освещения обычной линейкой с миллиметровыми делениями в вертикальном и горизонтальном меридианах, определяли чувствительность роговицы в 5 основных точках. В работе нами использовался волосок с давлением в 10 г. на 1 мм2, который ощутим любой точкой роговицы. Состояние чувствительности роговицы выражали числом ощущаемых прикосновений. Измерения производили до и через 30 суток после применения препарата.

Для оценки репаративных свойств препарата создавали модель дозированной эрозии роговицы. Животным после эпибульбарной анестезии, 0,4% раствором инокаина, в центральной области роговицы трепаном диаметром 5 мм делали насечку поверхностных слоев роговицы обоих глаз, затем удаляли эпителий. Формировали 3 группы по 5 кроликов (10 глаз) в каждой. 1-ая группа кроликов (опытная) ежедневно получала 6-кратные инсталляции Дерината®; 2-ая группа -(контрольная) - аппликации Корнерегеля 5 раз в день, 3-я группа (контрольная) -инсталляции 0,9% раствора хлорида натрия 6 раз в день. Для наблюдения за ходом регенерации производили окрашивание роговицы 0,5% раствором флюоресцеина. Наблюдение за ходом регенерации проводили на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 сутки после скарификации роговицы.

Оценка терапевтической эффективности препарата Деринат® - глазные капли на модели экспериментального офтальмогерпеса кроликов проведена в 3

сериях исследований на 15 кроликах (30 глаз) в каждой серии, которые были заражены вирусом простого герпеса. Модель экспериментального герпетического кератита воспроизводили по общепринятой методике [Хабриев Р.У., 2005], путем инсталляции 0,2 мл вируссодержащего материала на скарифицированную роговицу кроликов после предварительной анестезии ее 0,4% раствором инокаина. В опыте использовали штамм ВПГ I типа «Коптев», инфекционный титр LD50/0,03Mn.l0"6.

Оценку морфологических изменений роговицы в динамике проводилась по 3-х бальной системе [Казаченко М.А., 1983]. В качестве основных критериев эффективности лечения рассматривали динамику индекса роговичных изменений и сроки полной эпителизации.

1 серия исследований. Сравнительная оценка терапевтической эффективности глазных капель Деринат® и мази Зовиракс на модели экспериментального офтапьмогерпеса кроликов - 15 кроликов (30 глаз).

1-я группа (опытная) получала инстилляции глазных капель Деринат® 5 раз в день; 2-я группа (контрольная) - мазь Зовиракс 3%, 5 раз в день; 3-я группа (контрольная) - инстилляции 0,9% раствора натрия хлорида 5 раз в день.

2 серия исследований. Терапевтическая оценка сочетанного одновременного применения инсталляций глазных капель Деринат® и аппликаций мази Зовиракс.

1-я группа (опытная) получала Деринат® - глазные капли и мазь Зовиракс 5 раз в день с интервалом 10 минут; 2-я группа (контрольная) - мазь Зовиракс 3%, 5 раз в день; 3-я группа (контрольная) - 0,9% раствор натрия хлорида 5 раз в день.

3 серия исследований. Терапевтическая оценка сочетанного применения инсталляций глазных капель Деринат® и 3% мази Зовиракс с интервалом 2 часа.

1-я группа (опытная) животных в качестве лечения получала глазные капли Деринат® в сочетании с глазной мазью Зовиракс по 4 раза в день. 2-я группа (контрольная) - только глазную мазь Зовиракс 5 раз в день. 3-я группа (контрольная) - 0,9% раствор натрия хлорида 5 раз в день.

Антиокислительную активность (АОА) слезной жидкости в отношении гидроксильного радикала, определяли хемилюминесцентным методом в модельной системе люминол - Н2О2 - гемоглобин [Гулидова О.В. и др., 1999]. Оценивали

величину латентного периода хемилюминесценции, активность выражали в эквивалентах тролокса. Формировали 3 группы по 5 кроликов (10 глаз) в каждой. Из них 10 кроликов были инфицированы вирусом простого герпеса, которые по клиническим признакам вирусного воспаления были разделены на две равноценные группы. 1-я группа инфицированных кроликов (опытная) получала инстилляции глазных капель Деринат® 5 раз в день, 2-я группа (опытная) - 0,9% раствора натрия хлорида. 3-я группа - интактные животные, служили для контроля биохимических измерений. Исследование АОА проводили в острый период офтальмогерпеса и на стадии стихания воспалительного процесса.

Материал и методы клинических исследований

Под наблюдением находилось 60 больных с герпетическим кератитом в возрасте от 18 до 65 лет (35 мужчин и 25 женщин). Средний возраст мужчин составил 42,5 ± 2,6; женщин - 40,7 ± 2,8 лет. Пациенты методом рандомизации были разделены на две группы: основную и контрольную, сопоставимые по возрасту и клиническим признакам. Основная группа (30 больных) в качестве лечения получала инстилляции глазных капель Деринат® 4 раза в день в сочетании со стандартной терапией. Контрольная группа (30 больных) получала только стандартную терапию.

Диагностика герпетической природы кератита базировалась на данных клинического обследования больного и выявления характерных клинических признаков заболевания (клиническая картина, склонность к рецидивам, болевой синдром, понижение чувствительности роговицы, односторонний характер поражения, связь с сезонными заболеваниями, безуспешность антибактериальной терапии). Для определения степени тяжести кератита использовали метод оценки степени интенсивности клинических признаков заболевания по 3-х бальной системе [Казаченко М.А., 1983]. Распределение пациентов по клиническим формам офтальмогерпеса представлено в таблице 1.

Таблица 1

Клиническая характеристика больных

Клиническая форма Опытная группа, число больных Контрольная группа, число больных

абс % абс %

Древовидный кератит с поражением стромы 12 40 14 47

Картообразный кератит 9 30 7 23

Стромальный кератит с изъязвлением 9 30 9 30

Критериями оценки эффективности препарата при лечении герпетического кератита являлись:

-динамика эпителизации и сроки полной эпителизации роговицы -сроки резорбции инфильтрации роговицы; -сроки исчезновения болевого синдрома; -продолжительность стационарного лечения.

Исследуемый препарат: Деринат® - капли глазные 0,25%, ЗАО «ФП «ТЕХНОМЕДСЕРВИС», Россия. Активное вещество - натриевая соль высокоочищенной деполимеризованной нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты с молекулярной массой 270 -500 kD, растворенная в 0,9% растворе натрия хлорида.

Методы офтальмологического обследования

Помимо традиционных офтальмологических методов исследования, включающих визометрию, биомикроскопию, офтальмоскопию, тонометрию проводили оптическую когерентную томографию переднего отдела глаза (ОКТ-ПОГ), с помощью прибора Visante ОСТ модель 1000 (Carl Zeiss, Германия).

Обследование осуществлялось по протоколу «All scans» по вертикальным, горизонтальным и косым меридианам. Выполняли необходимые измерения. Пациенты были обследованы при обращении, на 3, 7, 14 и 21 день лечения.

Статистическая обработка материала выполнена с использованием приложения Microsoft Excel и пакета статистического анализа Biostatistics 6.0 for Windows.

Результаты экспериментальных исследований

Результаты изучения местной и обшей переносимости гистологических исследований и влияния на нормальные Физиологические функции глаз кроликов глазных капель Деринат®

Установлено, что инстилляции глазных капель Деринат® не влияют на динамику веса, поведение, общее состояние подопытных животных, не оказывают токсико-аллергического воздействия на ткани глаза подопытных животных; гистологически не выявлено каких-либо патологических изменений в тканях глаза экспериментальных животных.

Глазные капли Деринат® не оказывают влияния на ВГД, размер зрачка и чувствительность роговой оболочки (табл.2).

Таблица 2

Оценка влияния инсталляций глазных капель Деринат® на физиологические

функции глаз кроликов

Степень выраженности токсико-аллергических реакций, балл Чувстви- Размер зрачка, мм

Группы Срок наблюдения тельность роговицы, число глаз, сохранивших чувствительность Горизонтальный меридиан Вертикальный меридиан ВГД, мм.рт.ст

До 0 10 7,4±0,2 8,4±0,2 21,3±0,3

п=10 После 0 10 7,2±0,1 8,2±0,1 21,2±0,4

Контрольная, До 0 10 7,6±0,2 8,6±0,2 20,9±0,6

п=10 После 0 10 7,0±0 8,2±0,2 21,7±0,2

Примечание: * п - число глаз.

Результаты изучения влияния глазных капель Деринат® на скорость реэпителизаиии скарифицированной роговицы на модели дозированной эрозии роговицы

Установлено, что реэпителизация роговой оболочки под влиянием глазных капель Деринат® (рис. 1, табл. 3) происходит в более ранние сроки по сравнению с контрольной группой животных (р<0,05) и группой, получавшей Корнерегель (р<0,05). Кроме того, следует отметить, что площадь скарифицированной эрозии

роговицы после иистилляций Деринат® - глазные капли, начиная со 2 суток, значительно быстрее эпителизировалась по сравнению с 2-й и 3-й группой (р<0,05).

Таблица 3

Средние сроки эпителизации скарифицированной роговицы после применения _ Дерината® и Корнерегеля (М±ш)_

Показатель Группы животных

1-я группа (опытная) 2-я группа (контрольная) 3-я группа (контрольная)

Средние сроки эпителизации роговицы, сутки 5,12±0,40* 6,25±0,31 7,12±0,38

Примечание: * р <0,05 -достоверно относительно показателей в группе животных, получавших Корнерегель и 0,9% раствор натрия хлорида.

30 25 20 15 10 5 О

Л

И 1 -я группа (Деринат) О 2-я группа

(Корнерегель) □ 3-я группа (0,9% р-р ЫаС1)

Я,

12 3 4 5 6 7

Время после начала лечения, сутки

Рис. 1. Динамика реэпителизации эрозии роговицы на модели дозированной

эрозии кроликов.

Результаты изучения влияния препарата Деринат® - глазные капли на АОА слезной жидкости при экспериментальном офтальмогерпесе

В острый период заболевания (7 сутки после заражения), который характеризовался резко выраженной воспалительной реакцией (гиперемия и отек конъюнктивы век и глазного яблока, эрозия, отек, инфильтрация роговицы) отмечена достоверная разница (р<0,05) в показателях АОА между группой, получавшей Деринат® - глазные капли и группой, получавшей 0,9% раствор натрия хлорида. АОА слезной жидкости инфицированных кроликов в группе, получавшей инсталляции глазных капель Деринат® составила 91,4%, в группе кроликов, получавшей 0,9% раствор натрия хлорида - 75,7%, где за 100% принята АОА слезной жидкости интактных кроликов. По мере стихания воспалительных явлений

в глазах инфицированных кроликов (14 сутки после заражения) разница эндогенной АОА в слезе нивелировалась (77,2% и 75,8% соответственно) (рис. 2).

^ 60

Г ¡11 ¡'[11

Острый период

Стадия стихания воспалительного процесса

I 1-я группа (Деринат)

□ 2-я группа

(0,9%'р-р ИаСЬ)

□ 3-я !рушш (копгроль)

Рис. 2. Антиокислительная активность слезной жидкости кроликов в разные

периоды наблюдения.

Таким образом, установлено, что применение глазных капель Деринат поддерживает более высокий пул эндогенной АОА в острый период заболевания, являясь одним из главных механизмов его лечебного эффекта.

1 серия исследований. Результаты сравнительной оценки терапевтической эффективности глазных капель Деринат® и мази Зовиракс на модели экспериментального офтальмогерпеса кроликов.

В 3-й группе животных (контрольной) максимальный средний индекс выраженности воспалительных явлений в роговице отмечен на 3 сутки после начала лечения. Тогда как в 1 -й и 2-й группе кроликов, получавших глазную мазь Зовиракс или глазные капли Деринат®, начиная со 2 дня после лечения (на 5 сутки после заражения) отмечали стихание воспалительных явлений, которое выражалось: началом эпителизации, снижением инфильтрации, уменьшением выраженности перикорнеальной инъекции.

Со 2 суток после начала лечения и во все последующие сроки наблюдения выраженность воспалительных явлений роговицы 3-й группы была выше по сравнению с 1-й и 2-й группой животных (р<0,05). Между 1-й и 2-й группами кроликов, получавших глазные капли Деринат® или 3% мазь Зовиракс существенных различий не отмечалось (рис 3).

11-ая группа (Деринат)

] 2-я группа (Зовиракс)

■_у_ 3-я группа

-И- (0,9% р-р ЫаС1)

0 1 2345678911 12 Время после начала лечения, сутки

Рис. 3. Динамика индекса роговичных изменений на модели экспериментального офтальмогерпеса кроликов.

Полная эпителизация (рис. 4) в контрольной группе отмечена на 12,2±0,2 сутки, в 1-й и 2-й группах эпителизация наступала в более ранние сроки по сравнению с контрольной группой (на 10,0±0,7 и 9,5±0,6 сутки соответственно). Достоверной разницы между показателями 1 -й и 2-й групп не отмечено.

14 12 10

к

€

■ 1-ая группа (Деринат)

□ 2-я группа (Зовиракс)

□ 3-я группа (0,9% р-р ИаС1)

Рис. 4. Сравнительная оценка сроков эпителизации роговицы кроликов, получавших глазные капли Деринат® и 3% мазь Зовиракс.

Таким образом, инстилляции глазных капель Деринат® при лечении герпетического кератита кроликов сопоставимы со средством специфической терапии офтальмогерпеса - глазной мазью Зовиракс. Полученные положительные результаты терапевтической эффективности новых глазных капель Деринат® послужили обоснованием к оценке сочетанного их применения с глазной мазью Зовиракс.

Во 2 серии исследований проведена терапевтическая оценка сочетанного

одновременного применения глазных капель Деринат® и глазной мази Зовиракс.

Начиная со 2 суток после начала лечения (5-е сутки после заражения), во 2-й

группе кроликов, получавших 3% мазь Зовиракс, отмечено стихание

16

воспалительных процессов в отличие от 3-й (контрольной) группы. В 1-й группе кроликов, получавшей глазные капли Деринат® в сочетании с 3% глазной мазью Зовиракс, выраженность воспалительного процесса достоверно не отличалась от контрольной группы.

На 4 сутки после начала лечения, в разгар герпетической инфекции, максимальный средний балл выраженности клинических признаков роговичного воспаления отмечен в контрольной группе животных (1,6±0,1 балл) и в группе, получавшей сочетанную терапию (1,56±0,2). Во 2-й группе кроликов, получавших в качестве лечения 3% мазь Зовиракс, наблюдали снижение (р<0,05) воспалительной реакции по сравнению с 3-й и 1-й группами, средний балл выраженности воспаления составил 1,0±0 (рис. 5).

Рис.5. Терапевтическая эффективность сочетанного одновременного применения глазных капель Деринат5 и мази Зовиракс на модели экспериментального офтальмогерпеса кроликов.

Полную эпителизацию роговицы в контрольной группе регистрировали на 8,5±0,6 сутки; во 2-й группе, получавшей 3% мазь Зовиракс - на 6,4±0,5 сутки (в среднем на 2,1 дня раньше по сравнению с контрольной), в то время как в 1-й группе, получавшей комбинированную терапию, полную эпителизацию роговицы отметили на 7,5±0,5 сутки (рис. 6).

I 1-ая группа (Деринат+3 овиракс )

2-я группа (Зовиракс)

И 3-я группа (0,9% р-р ЫаС1)

I

Рис. 6. Средние сроки эпителизации роговицы инфицированных кроликов при одновременном сочетанном применении препаратов Деринат® и Зовиракс.

Таким образом, лечение экспериментального офтальмогерпеса препаратом Деринат® - глазные капли в сочетании с глазной 3% мазью Зовиракс с интервалом 10 минут не показало выраженного терапевтического эффекта, что может быть связано с несовместимостью препарата Деринат® - глазные капли с мазями на жировой основе (т.е. нарушением всасывания препарата). Поэтому целесообразно увеличить интервал между препаратами до 2-х часов.

3 серия исследований. Терапевтическая оценка сочетанного применения глазных капель Деринат® и глазной мази Зовиракс с интервалом 2 часа.

Начиная со 2 суток после начала лечения и во все последующие сроки наблюдения, в 1-й и 2-й группах кроликов, получавших глазную мазь Зовиракс или глазные капли Деринат® в сочетании с мазью Зовиракс с интервалом 2 часа, отмечено более быстрое стихание воспалительных процессов в роговице по сравнению с 3-й (контрольной) группой (рис. 7).

1-ая группа

Срок после начала лечения, сутки

Рис. 7. Терапевтическая эффективность сочетанного применения глазных капель Деринат" и мази Зовиракс с интервалом 2 часа на модели экспериментального офтальмогерпеса кроликов.

Полная эпителизация роговицы в контрольной группе отмечена на 9,6±0,3 сутки. В группе, получавшей 3% мазь Зовиракс - на 6,7±0,6 сутки (в среднем на 2,9 суток раньше); в группе, получавшей комбинированную терапию - на 4,7±0,8 сутки (в среднем на 4,9 суток раньше). Разница в сроках эпителизации роговицы между контрольной группой и группами, получавшими лечение достоверна (р<0,05). В группе животных, подвергавшихся сочетанной терапии, эпителизация роговицы наблюдалась на 2 суток раньше по сравнению с группой, получавшей только Зовиракс (рис. 8).

12 ю

I 1-ая группа (Деринат+Зовнракс)

I

_ □ 2-я группа (Зовиракс)

О 3-я группа (0,9% р-р ЫаС1)

Рис. 8. Средние сроки эпителизации роговицы инфицированных кроликов при сочетанном применении препаратов Дерпнат® - глазные капли и 3% мазь Зовиракс с интервалом 2 часа.

Таким образом, в результате экспериментальных исследований была установлена хорошая переносимость, отсутствие токсико-аллергических реакций и патогистологических изменений в тканях глаза. Глазные капли Деринат® не влияют на нормальные физиологические функции глаза, способствуют реэпителизации скарифицированной роговицы кроликов, повышают АОА слезной жидкости в острый период экспериментального офтальмогерпеса, обладают высокой терапевтической эффективностью в лечении экспериментального офтальмогерпеса.

По результатам проведенных экспериментальных исследований подготовлена нормативно-техническая документация для разрешения проведения клинических исследований, на основании которой Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации разрешены клинические исследования (разрешение № 311 от 29 июля 2009).

Результаты клинических исследований

Под наблюдением находилось 60 больных с герпетическим кератитом. При обращении у 100% пациентов основной и контрольной групп отмечена эрозия роговицы. Средний балл выраженности эрозии роговицы больных при первом осмотре составлял: в основной группе - 1,83±0,08 балла, в контрольной - 1,77±0,08 (р>0,05). В динамике лечения со 2-4 суток в обеих группах наблюдали процесс эпителизации роговицы. Однако статистически достоверное улучшение состояния роговицы (эрозии) в основной группе отмечено раньше - начиная с 3 суток после начала лечения (р<0,05), а в контрольной группе - лишь с 7 суток.

Через 1 неделю после начала лечения, эрозия роговицы в основной группе регистрировалась у 21 пациента (70%), а в контрольной группе - у 29 пациентов (97%). На 14 сутки у пациентов, получавших Деринат® - глазные капли эрозия роговицы отмечалась у 7 пациентов (23%) против 18 пациентов в контрольной группе (60%). К 21 суткам эпителизация роговицы завершилась у всех больных, кроме одного пациента в контрольной группе (рис. 9).

И I.

Время после начала лечения, день

□ Основная группа

I Контрольная

группа

Рис. 9. Средний балл эрозии роговицы в динамике лечения больных с герпетическим кератитом.

Сроки полной эпителизации и резорбции инфильтрации роговицы у больных основной группы, которые помимо стандартного лечения применяли Деринат81 -глазные капли, сокращались и составляли соответственно в среднем 9,9 ± 0,7 и 16,8 ± 0,9 суток по сравнению со сроками составляющими в среднем 12,7 ± 0,6 и 19,6 ± 0,8 суток у больных, которые получали только стандартную терапию (р<0,05) (рис.10, 11).

В основной группе до лечения болевой синдром разной степени выраженности отмечен у 25 больных (83%), в контрольной у 24 больных (80%). Средний срок исчезновения болевого синдрома в основной группе составил 7,29 ±0,50 суток, а в контрольной - 10,0 ±0,5 суток (р<0,05) (рис. 12).

14 □ Основная

12

К Р 4

5- | 2

О

группа

10__Т ШШ1 ® Контрольная

группа

6

Рис. 10. Средние сроки эпителизации Рис. 11. Средние сроки резорбции

роговицы. инфильтрации роговицы.

В основной группе, где пациенты кроме стандартного лечения получали инстилляции препарата Деринат® - капли глазные, отметили, что средние сроки пребывания в стационаре составили 13,9± 0,9 суток, в то время как в контрольной группе - 17,8 ± 0,9 суток (р<0,05) (рис. 13).

□ Основная

группа Ш Контрольная группа

20 18 16 14

12 10

□ Основная группа

В Контрольная группа

Рис. 12. Средние сроки исчезновения Рис. 13. Средняя продолжительность

болевого синдрома. стационарного лечения.

При проведении клинических исследований, установлено, что глазные капли Деринат® хорошо переносились пациентами с герпетическим кератитом, инстилляции препарата не вызывали неприятных ощущений и субъективного дискомфорта. Ни в одном случае не было выявлено токсико-аллергических реакций со стороны глаза, которые можно было бы связать с инсталляциями глазных капель Деринат4'. Не выявлено патологических изменений общего анализа крови.

Возможности ОКТ-ПОГ в диагностике и мониторинге больных офтальмогерпесом

С целью объективизации данных о состоянии роговицы больных офтальмогерпесом, передний отдел глаза обследован с помощью ОКТ-ПОГ.

В группу исследования вошли пациенты с диагнозом:

-герпетический кератит эпителиальный (древовидный, картообразный) - 22 глаза, герпетический кератоувеит - 24 глаза, герпетический стромальный кератит с изъязвлением - 12 глаз. Толщина роговицы на втором (здоровом) глазу пациента в среднем составляла 0,51 ± 0,07 мм.

В группе пациентов с диагнозом герпетический кератит эпителиальный по данным ОКТ-ПОГ не удалось выявить каких-либо отклонений со стороны роговицы по сравнению со здоровым глазом, только в 5 случаях отмечался заметный отек эпителия, который разрешился в среднем в течение 5-7 дней.

У пациентов с герпетическим кератоувеитом средняя толщина роговицы при обращении составила 0,85 ± 0,04 мм, в процессе лечения были отмечены следующие изменения: на 3 день уменьшение толщины роговицы до 0,74 ± 0,03 мм, на 7 день - 0,66±0,03 мм, на 14 день - 0,56±0,02 мм и на 21 день - 0,53±0,03 мм. Зона перифокального инфильтрата при поступлении в стационар составила 0,30±0,02 мм, к 3 дню от начала лечения - 0,25±0,02 мм, на 7 день - 0,22±0,03 мм, на 14 день -0,18±0,02 мм и на 21 день 0,16±0,02 мм.

У пациентов с диагнозом герпетический стромальный кератит с изъязвлением, отмечалось уменьшение толщины роговицы в области изъязвления в день обращения до 0,34±0,03 мм, к 3 дню от начала лечения - 0,36±0,03 мм, на 7 день - 0,40±0,03 мм, на 14 день - 0,46±0,04 мм и на 21 день составила 0,48±0,03 мм.

Таким образом, у пациентов с герпетическим кератоувеитом метод ОКТ-ПОГ дает возможность количественно определить степень выраженности инфильтрации, отека, при их значительной выраженности и/или помутнении роговицы, когда оценка состояния передней камеры биомикроскопически затруднена. Данный метод позволил провести диагностику и корригировать терапию в зависимости от наличия признаков воспаления в передней камере (гипопион, преципитаты).

У пациентов с диагнозом герпетический стромальный кератит с изъязвлением с помощью ОКТ-ПОГ верифицированы глубина и протяженность дефекта роговицы, что позволило определить тактику лечения и прогнозирование возможных исходов.

ВЫВОДЫ

1. Впервые проведенные экспериментально-клинические исследования новой лекарственной формы препарата Деринат® - глазные капли показали, что глазные капли Деринат® обладают хорошей переносимостью, не вызывают токсико-аллергических реакций.

2. В эксперименте, на модели дозированной эрозии роговицы кроликов, установлено, что инсталляции глазных капель Деринат® сокращают сроки реэпителизации роговицы по сравнению с традиционно применяемым репарантом Корнерегель и составляют в среднем 5,12 ± 0,40 и 6,25 ± 0,31 суток соответственно (р<0,05).

3. Впервые доказано, что глазные капли Деринат® обладают антиокислительными свойствами и повышают АОА слезной жидкости на 15,7% (р<0,05) в острый период экспериментального офтальмогерпеса, что является одним из основных механизмов его действия.

4. Установлено, что Деринат® - глазные капли в сочетании с глазной мазью Зовиракс, проявляют выраженный терапевтический эффект, сокращая сроки эпителизации очагов изъязвления в среднем на 2 суток, сроки резорбции инфильтрации роговицы в среднем на 2,4 суток экспериментального офтальмогерпеса по сравнению с монотерапией Зовираксом.

5. Доказано повышение лечебной эффективности при включении глазных капель Деринат® в комплексную терапию пациентов с герпетическим кератитом: полная эпителизация роговицы и резорбция инфильтрации роговицы при сочетанном применении глазных капель Деринат® с глазной мазью Зовиракс завершилась раньше, по сравнению с контрольной группой, получавших только глазную мазь Зовиракс (9,9 ± 0,7 и 12,7 ± 0,6; 16,8 ± 0,9 и 19,6 ± 0,8 суток соответственно; р<0,05), продолжительность болевого синдрома уменьшилась в

среднем на 2,7 суток (р<0,05), сроки пребывания в стационаре сократились в среднем на 3,8 суток (р<0,05).

6. Комплексное экспериментально-клиническое исследование нового лекарственного средства Деринат® - глазные капли позволило обосновать целесообразность его включения в сочетанную терапию герпесвирусных заболеваний глаз в качестве препарата обладающего репаративными свойствами, противовирусной, антиокислительной активностью.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании проведенных экспериментально-клинических исследований установлена целесообразность включения в комплексную терапию герпетических заболеваний глаз препарата Деринат® в виде новых глазных капель, что ведет к сокращению продолжительности болевого синдрома, а также к снижению тяжести основных клинических симптомов заболевания, и, следовательно, способствует сокращению сроков пребывания в стационаре.

2. Для получения выраженного терапевтического эффекта в комплексной терапии офтальмогерпеса глазные капли Деринат® в сочетании с препаратом специфической терапии - глазной мазью Зовиракс необходимо соблюдать интервал между введениями не менее 2-х часов, поскольку при уменьшении этого интервала эффективность лечения снижается.

3. Рекомендуется использовать метод оптической когерентной томографии преднего отдела глаза (ОКТ-ПОГ) у больных с диагнозом: герпетический кератоувеит, герпетический стромальный кератит с изъязвлением для оценки результатов проведенного лечения, своевременного выявления возникающих осложнений и прогнозирования возможных исходов. ОКТ-ПОГ нецелесообразно использовать у больных с диагнозом герпетический эпителиальный кератит.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Щипанова А.И., Майчук Ю.Ф., Стирманова Е.Р. Экспериментальное исследование новой глазной лекарственной формы дерината - иммуномодулятора с антиоксидантной активностью // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: сб. науч. тр.- М., 2010.- С. 310.

2. Майчук Ю.Ф., Миронкова Е.А., Стирманова Е.Р. Оптическая когерентная томография в диагностике и мониторинге лечения язвы роговицы // IX съезд офтальмологов России: Тез. докл.-М., 2010.- С.361.

3. Щипанова А.И., Майчук Ю.Ф., Стирманова Е.Р., Безнос О.В., Чеснокова Н.Б. Влияние глазной лекарственной формы Деринат на антиокислительную активность слезной жидкости при экспериментальном офтальмогерпесе // XVIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: сб. науч. тр.- М., 2011.- С. 248.

4. Стирманова Е.Р., Майчук Ю.Ф., Катаева О.В., Щипанова А.И. Экспериментальное исследование новой глазной лекарственной формы Деринат®-капли глазные //Восток-Запад - 2011: сб. науч. тр. - Уфа, 2011.- С.348-350.

5. Майчук Ю.Ф., Селиверстова К.Е., Яни Е.В., Стирманова Е.Р. Оптическая когерентная томография переднего отдела глаза при герпетических поражениях роговицы // Восток-Запад -2011: сб. науч. тр.-Уфа, 2011.- С.322-323.

6. Стирманова Е.Р. Обоснование к применению иммуномодулятора Деринат® - капли глазные 0,25%, в офтальмологической практике // Труды XI Международного конгресса «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии,- М., 2011.-С. 363-364,

7. Стирманова Е.Р., Майчук Ю.Ф., Катаева О.В., Щипанова А.И. Клиническая оценка новой глазной лекарственной формы деринат при лечении герпетического кератита // XIX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: сб. науч. тр.- М., 2012.- С. 210-211.

8. Майчук Ю.Ф., Селиверстова К.Е., Стирманова Е.Р. Оптическая когерентная томография при герпетических поражениях роговицы // Катарактальная и рефракционная хирургия. М., 2011.Т 11-№4.- С. 54-56.

9. Щипанова А.И., Майчук Ю.Ф., Стирманова Е.Р., Андреева Л.Д., Безнос О.В., Чеснокова Н.Б. Медико-биологическая оценка новой глазной лекарственной формы отечественного препарата Деринат // Российский офтальмологический журнал. - 2012. - Том 5, №2.- С. 88-91.

10. Стирманова Е.Р., Майчук Ю.Ф., Катаева О.В., Щипанова А.И., Катаргина JI.A. Применение препарата Деринат®, глазные капли, в комплексном лечении герпетического кератоконъюнктивита // Российский офтальмологический журнал. - 2012. - Том 5, №3,- С.56-59.

11. Катаргина Л.А., Стирманова Е.Р., Щипанова А.И. Деринат® глазные капли, в комплексной терапии экспериментального герпетического кератита // V Российский общенациональный офтальмологический форум: сб. науч.тр. - М., 2012.-Том2.-С. 748-752.

Список сокращений:

АОА - антиокислительная активность

ВГД - внутриглазное давление

ВПГ - вирус простого герпеса

ДНК - дезоксирибунуклеиновая кислота

ОКТ-ПОГ - оптическая когерентная томография переднего отдела глаза.

Заказ № 42-П/10/2012 Подписано в печать 11.10.2012 Тираж 100 экз. Усл. п.л.1,2

"Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 www.cfr.ru; е-таИ:info@cfr.ru