Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Окислительно-метаболическая функция нейрофилов крови при фибромиоме тела матки

На правах рукописи

Г=ГЗ ОД

< ¿м гт

локтин

Евгений Михайлович

ОКИСЛИТЕЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ ФУНКЦИЯ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ ПРИ ФИБРОМИОМЕ ТЕЛА МАТКИ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск 2002

Работа выполнена в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г.Новосибирск

Научный руководитель:

доктор медицинских наук

Д.Д. Цырендоржиев

Научный консультант: доктор медицинских наук

И.Д. Сафронов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

А.Н. Трунов А.А. Зубахин

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, г.Новосибирск

диссертационного совета Д 001.048.01 в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: 630117, г.Новосибирск, ул. Акад. Тимакова, 2. Тел./факс 8-(3832)-33-64-56

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН

Автореферат разослан «_»_2001 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук С.Н. Кутина

Защита состоится «_»

2002 г. в

ч. на заседании

-г/Чиж*, гЛ г>

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время в общей структуре патологии в сфере женской репродуктивной системы наблюдается рост заболеваемости фибромиомой тела матки (ФТМ) (Тимошенко J1.B., Квашенко Б.К., 1972; Хмельницкий O.K., 1994; Вихляева Е.М. и соавт., 1998; Адамян J1.B. и соавт., 1999; Кондриков Н.И., 1999; Сметник В.П., Тумилович Л.Г, 1999; Кап-пушева Л.М. и соавт., 2001; Hrycek А. е.а., 2000). Изучение распространенности и выявления ФТМ показывает, что данное заболевание как одно из частых патологических процессов в гинекологической практике, встречается у 15-17% женщин старше 30 лет (Серов В.Н. и соавт., 1993; Прилепская В.Н. и соавт., 1999). В связи с этим во многих промышленно развитых странах мира и, в том числе в России, проблема лёчения и реабилитации больных ФТМ приобретает важное социально-медицинское значение.

По современным представлениям развитие ФТМ связано с гормональными нарушениями в системе гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников-яичники (Бассалык Л.С., 1987; Лысенко О.Н. и соавт., 2000; Гадиева Ф.Г., 2001; Jélovsek F. е.а., 1980; Lindahl В. е.а., 1991; Bergeron С. е.а., 1998; Gar-zetti G.G. е.а., 1998). Одним из ведущих факторов развития ФТМ считается нарушение метаболизма эстрогенов и функции желтого тела (Серебренникова К.Г., 1992; Минкина Г.Н. и соавт., 1997; Sica G. е.а., 1993). Тем не менее, не исключается, что причинами формирования и развития ФТМ могут быть и повторные аборты или частые лечебно-диагностические выскабливания стенок полости матки, а также хронические воспалительные процессы органов малого таза женщин (Вихляева Е.М., 1987). Эти же причины могут привести к снижению числа гормональных рецепторов в миометрии и эндометрии, либо падению их чувствительности к гормонам (Садовина Ю.Б., Мартулева Т.Н., 1998; Лысенко О.Н. и соавт., 2000).

В научных исследованиях в области гинекологии наиболее полно изучаются клинические, клинико-морфологические и эндокринологические аспекты проблемы ФТМ (Серов В.Н. и соавт., 1993; Хмельницкий O.K., 1994; Вихляева Е.М. и соавт., 1998; Горделадзе A.C., Печеникова В.А., 1998; Лысенко О.Н. и соавт., 2000; Гадиева Ф.Г., 2001; Bergeron С. е.а., 1998). Однако гуморально-клеточная система иммунитета, роль воспалительного процесса и основных клеток воспаления - нейтрофилов, моноцитов и макрофагов в патогенезе ФТМ остаются слабо изученными (Ванько Л.В., 1995; Чернышов В.П., Теличкун С.В., 1995; Гадиева Ф.Г., 2001). Вместе с тем известно, что фагоцитирующие клетки относятся к числу наиболее реактивных клеток, отражающих любое отклонение в гомеостазе (Маянский А.Н., Маянский Д.К, 1989; Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993; Henderson I., 1988; Rozeboom K.J., е.а., 1998; Godaly G. е.а., 2001). Отвечая на различные воздействия перестройкой собственных функций, нейтрофилы генерируют и секретируют в окружающую среду провоспалительные факторы с мощным

деструктнвно-биоцндным потенциалом (лизосомальные ферменты, высокореактивные метаболиты кислорода и т.д.) и превращаются в действенный инструмент деструкции ткани, в частности, миометрия и эндометрия матки (Кидралиев A.C., 1995). Практически остается не исследованным состояние оксидантной и антиоксидантной системы крови, которые, несомненно, играют важную роль в патогенезе ФТМ, а также в восстановительных процессах после консервативного лечения и радикального оперативного вмешательства у больных с данной патологией.

Работа выполнена в рамках темы: «Роль мобилизационных резервов фагоцитирующих клеточных систем в развитии и исходе воспалительно-деструктивных процессов», выполняемой в лаборатории патофизиологии Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (№ гос. регистрации 01.9.90 001266).

Цель исследования: Изучить состояние окислительно-метаболической функции нейтрофилов периферической крови, прооксидантной и антиоксидантной активности сыворотки больных фибромиомой тела матки для прогнозирования течения заболевания и выбора тактики лечения.

Задачи исследования:

1. Исследовать окислительно-метаболическую функцию нейтрофилов крови и их реактивность у больных фибромиомой тела матки до и после лечения.

2. Определить содержание продуктов перекисного окисления липидов и прооксидантную активность сыворотки крови больных фибромиомой тела матки до и после лечения.

3. Оценить общую антиоксидантную активность, содержание жиро- и водорастворимых антиоксидантов в сыворотке крови больных фибромиомой тела матки до и после лечения.

4. Разработать рекомендации для прогнозирования течения и выбора тактики лечения фибромиомы тела матки.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование окислительно-метаболической функции нейтрофилов крови, прооксидантной и антиоксидантной активности сыворотки крови больных фибромиомой тела матки.

Впервые показано, что окислительно-метаболическая функция нейтрофилов периферической крови больных фибромиомой тела матки возрастает по мере прогрессирования патологического процесса, что связано с участием клеток в свободно-радикальных реакциях перекисного окисления липидов и последующей деструкции в патологическом очаге.

У больных фибромиомой тела матки установлено снижение реактивности нейтрофилов периферической крови и опсонической способности сыворотки.

Впервые показано, что у больных фибромиомой тела матки на фоне высокой прооксидантной активности происходит компенсаторный рост общей

антиоксидантной активности сыворотки крови за счет увеличения содержания водорастворимого антиоксиданта - церулоплазмина при одновременном снижении жирорастворимых антиоксидантов - а-токоферола и ретинола.

У больных фибромиомой тела матки после лечебно-диагностического выскабливания показатели окислительно-метаболической функции нейтро-филов, прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови нормализовались. После радикального оперативного вмешательства установлено повышение окислительно-метаболической функции нейтрофилов и прооксидантной активности сыворотки крови на фоне компенсаторного роста показателей системы антиоксидантной защиты.

Установлено, что соотношение прооксидантной и антиоксидантной активности сыворотки крови коррелирует с изменением функционального состояния нейтрофилов периферической крови больных фибромиомой тела матки: при изменении баланса «оксидант-антиоксидант» в сторону прооксидантной активности отмечается повышение окислительно-метаболической функции нейтрофилов и наоборот. . .

Практическая значимость работы. Настоящая работа вносит существенный вклад в понимание механизмов участия нейтрофилов и системы «оксидант-антиоксидант» в патогенезе и восстановительных процессах после оперативного вмешательства при фибромиоме тела матки. Разработаны критерии оценки реактивности нейтрофилов периферической крови у больных фибромиомой тела матки, которые позволяют прогнозировать развитие осложнений инфекционно-воспалительного характера и следить за эффективностью лечения.

Результаты исследования внедрены и используются в практической деятельности муниципальной гинекологической больницы №1 г.Новосибирска.

Положения выносимые на защиту.

1. По мере нарастания симптомов заболевания у больных фибромиомой тела матки отмечается повышение окислительно-метаболической функции нейтрофилов периферической крови и прооксидантных свойств сыворотки, что свидетельствует об активации воспаления в очаге патологического процесса.

2. При фибромиоме тела матки прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови находятся на более высоком уровне с сохранением баланса между ними.

3. Нормализация показателей окислительно-метаболической функции нейтрофилов, прооксидантной и антиоксидантной активности сыворотки крови при лечебно-диагностическом выскабливании стенки полости матки происходит в зависимости от характера течения фибромиомы тела матки.

Апробация работы. Основные материалы, изложенные в диссертации, были доложены на научной сессии посвященной 65-летию НГМА (Новосибирск, 2000); на 62-й итоговой научной конференции студентов и молодых

ученых'НГМА (Новосибирск, 2001); на 11-й научно-практической конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2001), на III-й конференции молодых ученых СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2001) и на межлабораторном семинаре ГУ НЦКЭМ СО РАМН (Новосибирск, 2001).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы (173 работы, из них 104 отечественных и 69 иностранных источника). Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, содержит 11 таблиц и 13 рисунков.

Автор приносит искреннюю признательность сотрудникам лаборатории патофизиологии НЦКЭМ СО РАМН за содействие и помощь при выполнении данной работы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В соответствии с целью и задачами данного исследования изучался клинический материал, полученный у больных фибромиомой тела матки и воспалительными заболеваниями придатков матки до и после лечения.

В зависимости от объема лечебного воздействия больные с фибромиомой тела матки были разделены на следующие группы:

1 - группа сравнения (ФТМ-1) - 31 человек. Этим больным проводилось лечебно-диагностическое выскабливание, гемостатическая, антибактериальная, противоспалительная, витамино- и гемостимулирующая, терапия.

2 - опытная группа (ФТМ-2) - 47 человек, которым было проведено радикальное хирургическое вмешательство - простая экстирпация матки, либо надвлагалищная ампутация матки.

Всего обследовано 78 больных фибромиомой матки от 30 до 68 лет, средний возраст которых составил 47,1 ±3,1 лет.

Контрольную группу составили 20 здоровых доноров-женщин от 30 до 52 лет (средний возраст составил 45,6±2,4 года), обследованные в отделении переливания крови и признанные практически здоровыми.

Забор крови осуществлялся в первый день после поступления больного (1-е исследование) и через 10 сут (2-е исследование) после лечебных мероприятий.

Анализ количественного и качественного состава лейкоцитов крови, получение сыворотки крови и лейкоконцентратов осуществляли традиционными методами лабораторного исследования. Все исследования проводились с учетом жизнеспособности клеток, оцененной с помощью трипанового синего, которая среднем составляла от 89 до 95%.

В крови больных определяли общий белок, мочевину, сахар крови, ПТИ, общий билирубин, фибриноген стандартными клинико-биохимичесикими методами.

Оценку окислительно-метаболической (ОМ) функции нейтрофилов проводили с помощью метода люминол-зависимой хемилюминесценции (XJI) (Цырендоржиев Д.Д. и соавт., 1994; Tono-oka Т. е.а., 1983). Измерения интенсивности XJ1 проводились на биохемилюминометре «Скиф-0301» (СКТБ «Наука», Красноярск, Россия). Для оценки реактивности фагоцитов в качестве стимулятора использовали дрожжевой полисахарид зимозан (zymosan

A, «Sigma», USA)

Опсоническую активность сыворотки (Маянский А.Н. и соавт., 1987; Tono-oka Т. е.а., 1983) оценивали по времени достижения максимума ХЛ свечения (Ттах) в мин при стимуляции клеток цельной крови зимозаном.

Прооксидантную активность сыворотки крови оценивали по действию тестируемых сывороток на интенсивность биохемилюминесценции нейтрофилов стандартных пулированных лейкоконцентратов здоровых доноров с люминолом (Маянский Д.Н. и соавт., 1996). Измерение проводили в дуплетах, и результат выражали в виде индекса стимуляции (ИС), т.е. отношения W в отсутствие сывороткиЯгаах при добавлении сыворотки. Imax- количество XJI импульсов на максимуме свечения.

Содержание промежуточных продуктов ПОЛ в сыворотке крови оценивалось по уровню малонового диальдегида (МДА), определяемого по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Staucliff R.S. е.а., 1969).

Общую антиоксидантную активность (АОА) сыворотки крови определяли биохемилюминесцентным методом с перекисью водорода по Журавлеву А.И. с соавт. (1975).

Водорастворимый антиоксидант - церулоплазмин в сыворотке крови определяли методом H.A.Ravin (1961), модифицированным С.В.Бестужевой и

B.Г.Колб (1982). Метод проводили с использованием раствора солянокислого пара-фенилен-диамина в ацетатном буфере (pH 5,2). Содержание жирорастворимых антиоксидантов - а-токоферола и ретинола определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (Сафронов И.Д., Микичур Н.И., 1992).

Результаты исследования были подвергнуты статистической обработке с применением корреляционного анализа и t-критерия Стьюдента. Достоверными считались результаты при Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исходное состояние окислительно-метаболической (ОМ) функции нейтрофилов больных ФТМ на момент поступления в стационар было достоверно выше (Р<0,05) соответствующего показателя у женщин-доноров. Отсюда видно, что нейтрофилы больных ФТМ, на момент поступления в стационар, генерировали АМК значительно больше, чем в норме (Рис. 1).

0,5 2 4 6 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

Ю1'

■Контроль

■ФТМ

Рисунок /. Кривые спонтанного хемшпоминесцентного ответа нейтрофилов периферической крови больных ФТМ.

* - Р<0,05 достоверные различия по сравнению с контролем.

Контроль А -ФТМ-1 ■ М ФТМ-2 |

Рисунок 2. Кривые спонтанного хемилюминесцентного ответа нейтрофилов периферической крови больных ФТМ разной группы.

ФТМ-1-группасравнения; ФТМ-2 - опытная группа; * - Р<0,001 достоверные различия по сравнению с контролем и ** - Р<0,05 - с группой ФТМ-1.

Более значимые результаты были получены при разделении больных ФТМ на 2 группы в зависимости от характера оперативного вмешательства {Рис.2). Так, у женщин группы сравнения (консервативная терапия + лечебно-диагностическое выскабливание) исходный ХЛ-ответ почти у 50% больных был выше контрольных значений, тогда как во 2-й опытной группе (радикальное оперативное вмешательство) - уже у 78% больных превышали максимальные значения в контроле.

Анализ результатов исследования показал, что у больных ФТМ функциональное состояние нейтрофилов периферической крови возрастает по мере нарастания симптомов болезни (быстрый рост размера матки, метрра-гий и появление болей), требующего более радикальных оперативных вмешательств.

При поступлении в стационар у всех обследованных больных ФТМ была снижена реактивность нейтрофилов крови. После лечебно-диагностического выскабливания у больных ФТМ-1 реактивность нейтрофилов крови практически нормализовалась, тогда, как у больных ФТМ-2 после радикального оперативного вмешательства она все еще оставалась низкой (Рис.3).

2,5 2

11.5

>>

1

0,5 О

Контроль

ФТМ-1

ФТМ-2

□ До лечения ■ После лечения

Рисунок 3. Индекс стимуляции хемилюминесцентного ответа нейтрофилов периферической крови разных групп больных с фибромиомой тела матки.

ФТМ-1 - группа сравнения; ФТМ-2 - опытная группа; * - Р<0,05 достоверные различия по сравнению с контролем и * * - Р<0,05 по сравнению с показателями до лечения.

На фоне роста ОМ функции нейтрофилов крови наиболее активное развитие ПОЛ по показателям содержания МДА в сыворотке крови идет у больных ФТМ (Рис.4). Вероятно, у больных ФТМ высокий уровень активности процессов свободно-радикальных реакций ПОЛ объясняется тем, что в очаге поражения у этих больных идет активная деструкция и распад ткани. Анализ результатов каждого отдельного больного показал, что у 70% больных ФТМ содержание МДА в сыворотке крови было выше максимального значения в контроле. Причем, 87% лиц из группы больных ФТМ с высоким содержанием МДА в крови вошли в опытную группу (ФТМ-2), которым затем было проведено радикальное оперативное вмешательство.

—I

Контра! ь ФТМ

[□До лечения О После лечения

Рисунок 4. Содержание МДА в сыворотке крови больных ФТМ до и после лечения.

* - Р<0,05 по сравнению с контрольной группой и ** - Р<0,05 по сравнению с показателями до лечения.

Содержание МДА в сыворотке крови больных ФТМ после лечения достигло уровня контрольных значений и в среднем составило 2,71+0,12 нмоль/мл (Рис.4).

В таблице 1 представлены результаты исследования опсонической активности сыворотки крови больных ФТМ до и после лечения. Как видно из таблицы, среднее значение индекса опсонической активности сыворотки крови здоровых женщин-доноров в среднем составил 7,8±0,46 мин. На момент поступления в стационар индекс опсонической активности сыворотки крови больных ФТМ в среднем составил 14,33±2,82 мин, что в 1,8 раза (Р<0,05) было выше контроля. После проведенного лечения как у больных ФТМ опсонические свойства сыворотки крови нормализовались.

Таблица I

Опсоническая способность сыворотки крови больных ФТМ до к после лечения (М±т)

Группы больных Индекс опсоннческой активности (мин)

До лечения После лечения

Контроль(16) 7,8+0,46

ФТМ (15) 14,33+2,82* 7,4+0,87**

Примечание: В скобке - количество обследованных лиц; * - Р<0,05 по сравнению с контролем и ** - Р<0,05 по сравнению с исходными значениями.

Функциональное напряжение нейтрофилов крови больных ФТМ, вероятно, связано с процессами деструкции в патологическом очаге, причем, при прогрессировании течения процесса с нарастанием симптомов болезни, эти клетки не могут обеспечивать должной элиминации продуктов распада ткани или инфекционных агентов вследствие их низкой реактивности и снижением опсонической способности сыворотки, о чем говорят результаты исследования. С другой стороны, у больных ФТМ после радикального оперативного вмешательства антиинфекционная резистентность организма остается ослабленной, в результате чего у этой категории лиц очень высока вероятность развития инфекционно-воспалительных процессов.

Изменение функциональной активности нейтрофилов во многом зависит от состояния микроокружения и уровня соотношения про- и антиоксидан-тов в сыворотке крови. В связи с этим, в работе оценивали совокупную про-оксидантную активность сывороточных факторов по их общей лейкоцит-модулирующей активности (JIMA). ЛМА определяли добавлением исследуемой сыворотки к интактным нейтрофилам здоровых лиц. В физиологических условиях в сыворотке крови содержится масса факторов, обладающих прооксидантными и опсоническими свойствами, которые при различных патологических состояниях способствуют росту деструктивного потенциала нейтрофилов. К ним относятся: а) активные фракции комплемента СЗа и С5а; б) эйкозаноиды (простагландины и лейкотриены); в) ки-нины; г) биогенные амины; д) фактор активации тромбоцитов (Bautista А.Р., Spitzer JJ. 1992); е) воспалительные цитокины - интерлейкины и фактор некроза опухолей и другие факторы (Маянский А.Н., Маянский Д.Н. 1989; Monegazzi R. et al., 1994; Stewart A.G., Harris Т., 1994; Theron A.J. et al., 1994). Вместе с тем, эти факторы встречают противодействие со стороны антивоспалительной, в частности антиоксидантной системы защиты. Конечный флогогенный эффект сыворотки будет зависеть от баланса ее про- и антивоспалительного потенциала.

Результаты исследования показали, что сыворотка больных ФТМ, взятых в момент поступления в стационар оказывала лейкоцит-

стимулирующее действие. Как видно из таблицы 2, средние значения ЛМА сыворотки контрольной группы составили 0,21±0,02 усл.ед. При этом, индивидуальные показатели ЛМА сыворотки крови доноров варьировали от 0,12 до 0,25 усл.ед.

ЛМА сыворотки больных ФТМ в целом по группе была выше контрольных значений и в среднем составила 0,37±0,037 усл.ед. (Р<0,05).

Анализ результатов ЛМА сыворотки крови больных ФТМ, разбитых на 2 группы в зависимости от характера лечебного воздействия, выявил значительные отличия. Так, как видно из таблицы 2, у больных ФТМ, до проведения лечебно-диагностического выскабливания, средние значения ЛМА составили 0,3±0,04 усл.ед., тогда как в группе больных ФТМ, до проведения оперативного вмешательства (ФТМ-2) данный показатель составил 0,44+0,04 усл.ед. (Р<0,05). Индивидуальный анализ результатов показал, что у 39% больных группы сравнения (ФТМ-1) и у 65% лиц опытной группы (ФТМ-2) ЛМА сыворотки превышали максимальные значения в контрольной группе.

Таблица 2

Прооксидантная активность сыворотки крови больных ФТМ по показателям лейкоцит-модулирующей активности до и после лечения (М±т)

Группы больных ЛМА (усл. ед.)

До лечения После лечения

Контроль (12) 0,21 ±0,02

ФТМ - все больные (45) 0,37+0,037 0,33±0,032*'**

ФТМ - группа сравнения (24) 0,3±0,04 0,26+0,03

ФТМ - опытная группа (21) 0,44+0,04 0,47+0,04*'**

Примечание: В скобке - количество обследованных больных; * - Р<0,05 по сравнению с контролем; ** - Р<0,05 по сравнению с исходными показателями до лечения.

Исследование прооксидантной активности сыворотки крови больных ФТМ после лечения показало, что у лиц группы сравнения (ФТМ-1) после лечебно-диагностического выскабливания ЛМА нормализовалась, тогда как у больных опытной группы (ФТМ-2), на 10 сут после радикального оперативного вмешательства, этот показатель, практически не менялся.

Процессу свободно-радикальных реакции в организме при различных патологических состояниях противостоят эндогенные механизмы антиоксидантной защиты, в которую входят ферментативные и неферментативные антиоксиданты такие как СОД, каталаза, глютатионпероксидаза, а-токоферол, ретинол, церулоплазмин и т.д. (Клебанов Г.И. и соавт., 1999; Зенков Н.К. и соавт., 2001).

В таблице 3 представлены результаты исследования общей антиокси-дантной активности (АОА) сыворотки крови больных ФТМ. У больных ФТМ-1 (группы сравнения) АОА сыворотки крови при поступлении в стационар в среднем составил 7,71±3,54 усл.ед., а скорость расщепления 3% Н202 (уАОА) - 0,47±0,04 мин. Эти показатели практически не отличались от контрольных значений. После консервативного лечения с лечебно-диагностическим выскабливанием у женщин данной группы АОА сыворотки крови в среднем составила 4,37±2,01 усл.ед., а уАОА - 0,16±0,06 мин, что было недостоверно ниже контрольных значений.

У женщин с ФТМ-2 (опытная группа) при первом измерении (в момент поступления в стационар) показатели АОА и уАОА сыворотки крови были недостоверно выше, чем в контроле. После радикального оперативного вмешательства показатели АОА сыворотки крови у женщин опытной группы возросли более чем в 2 раза (Р<0,05). При этом скорость расщепления 3% Н202 - уАОА практически не менялась (Табл.3).

Таблица 3

Общая антиоксидантная активность сыворотки крови больных ФТМ по показателям ХЛ исследования до и после лечения (М±т)

Группы больных До лечения После лечения

АОА (усл.ед) VAOA (мин) АОА (усл.ед) VAOA (мин)

Контроль 7,8+2,42 0,43+0,03 - -

ФТМ-1 (30) 7,71+3,54 0,47+0,04 4,37+2,01 0,16+0,06

ФТМ-2 (43) 13,32+2,8 0,46+0,08 28,77+8,22** 0,45±0,07

Примечание: ФТМ-1 - группа сравнения; ФТМ-2 - опытная группа больных; В скобке -количество обследованных лиц; х - Р<0,05 и * - Р<0,05 по сравнению с контролем; ** - Р<0,05 по сравнению с результатами до лечения.

В таблице 4 представлены результаты определения жирорастворимых антиоксидантов - а-токоферола и ретинола в сыворотке крови больных ФТМ до и после лечения. Как видно из таблицы содержание а-токоферола и ретинола в сыворотке крови в контрольной группе среднем составили соответственно 1,15±0,03 мг% и 61,3± 1,13 мкг%.

У больных группы ФТМ-1 в момент поступления в стационар содержание а-токоферола и ретинола в сыворотке крови достоверно не отличалось от соответствующих показателей контрольной группы. После консервативной терапии с лечебно-диагностическим выскабливанием у женщин данной группы содержание жирорастворимых антиоксидантов несколько возрастало, не выходя за границы нормы.

Таблица 4

Показатели жирорастворимых антиоксидантов сыворотки крови больных ФТМ до и после лечения (М±ш)

Группы больных а-токоферол (мг%) Ретинол (мкг%)

До лечения После лечения До лечения После лечения

Контроль (20) 1,15+0,03 61,3+1,13

ФТМ-1 (12) 1,07+0,09 1,11+0,04 57,2+2,3 58,3+3,2

ФТМ-2 (14) 1,03+0,04 1,23+0,02*" 49,7+2,92* 53,1 ±4,3

Примечание: ФТМ-1 - группа сравнения; ФТМ-2 - опытная группа больных; В скобке -количество обследованных лиц; * - Р<0,05 по сравнению с контролем и # - Р<0,05 по сравнению с результатами до лечения.

У больных ФТМ-2 в момент поступления в стационар содержание а-токоферола было недостоверно ниже контроля, тогда как уровень ретинола был заметно ниже и составил в среднем 49,7±2,92 мкг% (Р<0,05). После радикального оперативного вмешательства содержание а-токоферола возросло до 1,23±0,02 мг% (Р<0,05). В то же время, уровень ретинола в сыворотке крови этой группы больных незначительно возрос и был ниже контрольных показателей. Однако достоверных различий не было, поскольку у 35% больных уровень ретинола вырос от 1,6 до 2,2 раза, например, с 33,5 мкг% до 64,1 мкг%) (Табл. 4).

При оценке содержания водорастворимого антиоксиданта церулоплаз-мина в сыворотке крови были получены результаты, которые представлены на рисунке 5. Как видно из рисунка 5 содержание водорастворимого антиоксиданта церулоплазмина в сыворотке крови здоровых доноров в среднем составило 28,2£1,5 мг/мл. У больных ФТМ-1 в момент поступления в стационар содержание церулоплазмина в сыворотке крови достоверно не отличалось от контрольных значений. После консервативной терапии с лечебно-диагностическим выскабливанием у женщин данной группы содержание водорастворимого антиоксиданта практически не изменилось.

У больных ФТМ-2 (опытная группа) в момент поступления в стационар содержание церулоплазмина было достоверно (Р<0,05) выше контроля. После радикального оперативного вмешательства содержание церулоплазмина снизилось, и практически достигло уровня контроля (Рис. 5).

Таким образом, при прогрессировании течения патологического процесса и нарастании симптомов заболевания у больных ФТМ-2 растет АОА сыворотки крови. Рост АОА сыворотки крови больных ФТМ-2 на фоне повышенной ОМ функции нейтрофилов, высокой прооксидантной активности сыворотки, вероятно, свидетельствует о компенсаторном усилении антиок-сидантной защиты, способствующей восстановлению и поддержанию баланса «про- и антиоксидантных» систем.

40

35

30

25

E t 20

s

15

10

5

0

Контроль

ФТМ-1

ФТМ-2

j □ До лечения □ После лечения

Рисунок 5. Содержание водорастворимого антиоксиданта церулоплазмина в крови больных ФТМ до и после лечения.

ФТМ-1 - группа сравнения; ФТМ-2 - опытная группа больных; * - Р<0,05 по сравнению с контролем и # - Р<0,05 по сравнению с результатами до лечения.

На данном этапе развития медицинской науки нет четкой ясности в вопросе о роли нейтрофилов в механизмах развития и течения ФТМ. Учитывая доминирующую теорию гормонального нарушения в природе этого заболевания, объяснение полученных результатов, вероятно, надо искать в рамках взаимодействия эндокринной и иммунной систем.

Нарушение экспрессии рецепторов половых стероидных гормонов является одним из ведущих и наиболее известных механизмов формирования и развития пролиферативных процессов матки (Бассалык JI.C., 1987; Лысенко О.Н. и соавт., 2000; Сметник В.П. и соавт. 2001). Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о том, что содержание рецепторов прогестерона и рецепторов эстрадиола в ткани эндометрия, с одной стороны, определяет тяжесть гиперпластического процесса (Серебренникова К.Г., 1992; Bergeron С. е.а., 1998; Subandrio A.L. е.а., 2000), а с другой - возможность эффективного терапевтического воздействия на него (Козаченко В.П., 1999).

В настоящее время обнаружены специфические рецепторы к нейроме-диаторам, половым стероидным гормонам и глюкокортикоидным гормонам на Т- и В-лимфоцитах, моноцитах, нейтрофилах, которые обеспечивают тесное взаимодействие иммунной и эндокринной систем (Гадиева Ф.Г., 2001; Ширшев C.B., Куклина Е.М., 2001; Bekesi G. е.а., 2000; Stupka N.. Tiidus P.M., 2001).

В научной литературе накоплено достаточно много фактического материала о роли нейтрофилов в физиологических и патологических процессах в женских половых органах (Сотникова Н.Ю. и соавт., 1999). Так, показано, что нейтрофилы играют важное значение в неспецифической защите органов малого таза через продукцию различных цитокинов, в частности интер-лейкина-1, -6, -8 и -12, в ответ на индуктивное влияние клеток лимфоидной ткани опосредованного у-интерфероном (Arid А. е.а., 1998; Yeaman G.R. е.а., 1998). Нейтрофилы активно участвуют в ангиогенезе эндометрия через продукцию эндотелиальных ростовых факторов (vascular endothelial growth factor) (Gargett C.E. e.a., 2001; Lorosdo D.W., Isner J.M., 2001). В свою очередь нейтрофилы находятся под регуляторным действием стромальных клеток эндометрия матки, которые продуцируют нейтрофил-активирующий белок 78, вовлекая их в свое микроокружение при норме и различных патологических процессах (Nasu К. е.а., 2001). В работе Arici А. и соавт. (1998) было показано, что интерлейкин-8, обладающий хематактическими свойствами на нейтрофилы и Т-лимфоциты продуцируются фагоцитирующими клетками стромы эндометрия и лимфатических, узлов матки. При этом было показано, что продукция интерлейкинов находятся под регуляторным влиянием половых гормонов.

В эксперименте in vivo показана иммуносупрессивная роль прогестерона и глюкокортикоидных гормонов. Особое внимание привлекает прогестерон, который является не просто иммуносупрессором, но и обладает иммуноре-гулирующими свойствами. Показано, что одновременно с угнетающим влиянием на пролиферацию лимфоцитов этот гормон резко усиливает супрессивную активность Т-клеток, чем отличается от эстродиола и тестостерона, которые такими свойствами не обладают (Holdstock G. е.а., 1982; Kaushic С. е.а., 1998).

Если исходить из положения, что одним из факторов, влияющих на рост миомы, является повышенный уровень эстрогенных гормонов и дефицит прогестерона, то модуляция окислительно-метаболической функции нейтрофилов и прооксидантной активности сыворотки больных ФТМ может быть объяснены следующими фактами:

- В последнее время показана иммуномодулирующая роль эстродиола, проявляющаяся увеличением количества макрофагов, нейтрофильных гра-нулоцитов, Т-клеток в эндометрии (Wessendorf G. е.а., 1998; Thomson A.J. е.а., 1999; Tiidus P.M. е.а., 2001). Кроме того, определено, что эстродиол и у-интерферон увеличивают количество интраэпителиальных лимфоцитов и нейтрофилов в эндометрии (Гадиева Ф.Г., 2001). Bekesi G. и соавт. (2000) показали, что эстродиол оказывает антиоксидантное действие. В таком случае рост АОА сыворотки крови больных ФТМ в наших исследованиях, вероятно, обеспечивается не только водорастворимыми антиоксидантами (например, церулоплазмином), но и эстродиолом. Подтверждением данного положения могут быть результаты исследования Pertynska М.Р. и соавт.

(2000) свидетельствующие о том, что применение стероидных гормонов, в частности эстрогена приводит к подавлению генерации АМК нейтрофилами периферической крови женщин в менопаузе. Эстрадиол обладает стимулирующим эффектом на нейтрофилы, способствуя генерации ими оксида азота (Duran M.G. е.а., 2000).

- Прогестерон, наоборот, снижает количество макрофагов и нейтро-фильных гранулоцнтов (Faas М.М. е.а., 1999). Имеются данные, что прогестерон воздействует непосредственно на эндометриальные стромальные клетки, инициирует секреторный продукт, который опосредованно влияет на пролиферацию эндометриальных гранулоцнтов. В частности, снижение миграционной и цитотоксической активности нейтрофилов при эндомет-риозе Garzetti G.G. и соавт. (1998) в своей работе объясняли ингибирующим действием на них прогестерона и простагландинов группы Е2. Кроме этого Tibbetts Т.А. и соавт. (1999) в эксперименте доказали, что рецепторы прогестерона играют строго противовоспалительную роль в матке опытных животных, ингибируя миграцию нейтрофилов.

В целом, полученные результаты свидетельствуют о том, что при ФТМ происходит активация нейтрофилов крови, которая обусловлена воздействием на них примирующих или сенсибилизирующих продуктов некроза ткани и факторов сыворотки крови. Эти факторы могут быть представлены белками системы комплемента, цитокинами (ФНО-ос, интерлейкинами, ин-терферонами и др.), циркулирующими иммунными комплексами, продуктами расщепления арахидоновой кислоты (прежде всего лейкотриенами и

др-)-

У больных ФТМ выявлена активация процессов ПОЛ с компенсаторным ростом антиоксидантной защиты. Из всех обследованных больных ФТМ более выраженные их нарушения были отмечены у лиц, которым в последствие было проведено радикальное оперативное вмешательство. У больных ФТМ после оперативного вмешательства по сравнению с неопери-рованными ОМ функция нейтрофилов и АОА сыворотки крови была выше, что, вероятно, связано с операционным стрессом и кровопотерей, которые также активируют свободно-радикальные реакции (Матвеев С.Б. и соавт., 1992; Селицкая С.С. и соавт., 1998). Большая активация антиоксидантной защиты в послеопреационном периоде, по-видимому, свидетельствует о мобилизации эндогенного а-токоферола из депо в кровяное русло, а также усиленном синтезе церулоплазмина в ответ на активацию процессов ПОЛ, что способствует быстрому восстановлению баланса ПОЛ/АОА. Кроме того, на восстановление баланса у больных ФТМ, вероятно, влияет радикальное оперативное вмешательство, сопровождающееся ликвидацией очага патологического процесса в матке, который как указывалось, является одним из пусковых механизмов свободно-радикальных реакций.

выводы

1. По мере прогрессирования патологического процесса у больных фибромиомой тела матки отмечается достоверное повышение окислительно-метаболической функции нейтрофилов периферической крови с одномоментным снижением их реактивности. После лечебно-диагностического выскабливания матки у больных фибромиомой тела матки происходит нормализация реактивности нейтрофилов крови, а после радикального оперативного вмешательства - остается на низком уровне.

2. На фоне повышения окислительно-метаболической функции нейтрофилов крови при фибромиоме тела матки усиливается активность перекис-ного окисления липидов и снижается опсоническая способность сыворотки крови, которые нормализуются после лечения.

3. Степень выраженности прооксидантной активности сыворотки крови больных фибромиомой тела матки находится в прямой зависимости от степени тяжести патологического процесса. Высокая прооксидантная активность сыворотки крови наблюдается у 40% больных фибромиомой тела матки с показаниями для проведения лечебно-диагностического выскабливания и у 65% - для радикального оперативного вмешательства.

4. На фоне высокой прооксидантной активности у больных фибромиомой тела матки наблюдается компенсаторный рост общей антиоксидантной активность сыворотки крови, за счет увеличения уровня водорастворимого антиоксиданта и одновременного снижения жирорастворимых антиокси-дантов.

5. После консервативного лечения больных фибромиомой тела матки показатели окислительно-метаболической функции нейтрофилов, опсони-ческой, прооксидантной и антиоксидантной активности сыворотки крови нормализуются. У больных фибромиомой тела матки после радикального оперативного вмешательства показатели окислительно-метаболической функции нейтрофилов и прооксидантной активности сыворотки крови поддерживаются на высоком уровне.

6. Рост антиоксидантной активности сыворотки крови после радикального оперативного вмешательства у больных фибромиомой тела матки на фоне повышенной окислительно-метаболической функции нейтрофилов, высокой прооксидантной активности сыворотки свидетельствует о включении антиоксидантной защиты как компенсаторного механизма для восстановления и поддержания баланса «про- и антиоксидантных» систем.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. В комплекс обследования больных фибромимой тела матки рекомендуется включить методы по оценке реактивности ключевых эффекторных клеток - нейтрофилов, что позволит прогнозировать течение патологического процесса и оценить эффективность лечения.

2. Показатели соотношения про- и антиоксидантной активности сыворотки крови больных фибромимой тела матки могут найти применение при контроле активности процесса. При нарушении баланса «оксидант-антиоксидант» сыворотки крови в сторону прооксидантной активности рекомендуется применение антиоксидантов в предоперационной подготовке больных фибромиомой тела матки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная активность сыворотки крови • больных с фибромиомой тела матки // Тез. докл. научной сессии поев. 65-летию

НГМА,- Новосибирск, 2000.- С.29. (В соавт.: Теплицкая А.Л., Сафронов И.Д., Цырендоржиев Д. Д.)

2. Функциональное состояние нейтрофилов крови больных с фибромиомой тела матки // Тез. докл. научной сессии поев. 65-летию НГМА.- Новосибирск, 2000.-С.ЗО. (В соавт.: Теплицкая А.Л., Сафронов И.Д., Цырендоржиев Д.Д.).

3. Состояние прооксидантной и антиоксидантной активности сыворотки крови больных с фибромиомой тела матки // Тез. докл. 11 -й научно-практ. конф. врачей «Актуальные вопросы современной медицины».- Новосибирск, 2001,- С.57. (В соавт.: Теплицкая А.Л., Сафронов И.Д., Цырендоржиев Д.Д.)

4. Соотношение про- и антивоспалительной активности сыворотки крови больных с сальпингитами // Тез. докл. 62-й итоговой научной конференции студентов и молодых ученых.- НГМА, Новосибирск, 2001,- С. 10.

5. Окислительно-метаболический статус нейтрофилов, про- и антиоксидантная активность сыворотки крови больных с фибромиомой тема матки // Материалы III-й конф. молодых ученых СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины",- Новосибирск, 2001.-С. 145. (В соавт.: Локтина И.П.).

Соискатель Локтин Е.М.