Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Нейрофилы с Е- и СЗ-рецепторами, количественная и функциональная оценка у урологических больных

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи .

УДК 612-017:616.157:616.6-002/043.3/

ХАМАГАНОВА ЕКАТЕРИНА ГЕОРГИЕВНА

НЕЙТРОФИ/Ы С Е- И СЗ-РЕЦЕПТОРАМИ. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА У УРОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1993

Работе выполнена в Научно-исследовательском институте урологии Ишздрава РФ

Научный руководитель:

юкгор Стлсгичеоагх наук Дзержинская И.И.

Оедига/ьныа спгюнвнты:

члвк-клррвспснаант РАЕН, аастсс йилогичвсии нбук, гроввссор Згрзцкая 10 .М.

доктор медицинских исух Стенина М.А.

Бедуина учреждение: НИИ «изикс-хшическсй медицины МЗ РО)

Защита диссертации состоится 2-

на заседании специализированного Ученого Совета Д 004.14.06 Российского государственного медицинского утиверсктота /117437, Москва, ул. Островитяноза.1/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ Автореферат разослан ^ ЛСО&^О,

Ученый секретарь специалкзировенкого совета доцент Кузнецове Т.Е.

Актуальность проблемы

Атипичность воспаления в последние годы, связанная с применением антимикробных препаратов, обладающих иммунодепрессивным эффектом, снижением иымунореактивности, требует поисков новых, более информативных, патогенетических способов диагностики воспаления .

Развитие, течение и исход воспаления во многом зависят от костно-мозгового'разерва гранулоцитов и способности костного мозга генерировать новце популйции фагоцитов (Маянский Д.Н.,1986). Однако имеющиеся- па сегодняшний день методы оценки костно-мозго-вого резерва малонкформативны /по формуле крови/ или иквазивны /забор клеток костного мозга/.

Нейтрофшш периферической крови долго считались гомогенной клеточкой популяцией, короткокивутцей, высокоподвижной, которая разрушает патогены и исчезает. Однако исследования последних лет показывают-, что нейтрофилы неоднородны и на периферии (Gallin, 1985). По экспрессии рецепторов на клеточных мембранах нейтрофилы периферической крови подразделяются на несущие Рс-рецепторы /рецепторы к 1'с фрагментам Is G или Is А/, обладающие рецепторами к компонентам комплемента, есть также нейтрофшш, способные к спонтанному розеткообразованию с эритроцитами барана /ЭБ, Е/. (Петрова И.В. и соавт., 1976; Стенина U.A., Кочергин Н.Г., 1976; Каркр В.,1979; Дзержинская И.И., 1979, 1982; Петров Р.В. и соавт., 1982; Чередеев А.Н., Цховребова А.З., 1983; Wong й Wilaon , 1975; Noesn а.а.,1983)..

Единичные работы в доступной нам литературе исследовали спо-зобность нейтрофилоз периферической кроЕИ Естулать в одновременное розеткообразование с Е и комплексом АГ-АТ-компдемент /ЕАС/ (Дзержинская И.И., 1983). Эти нейтрофилы с Е- и С- рецепторами ^азванн Д-/двойиыми/ нейтрофилами от англ. "double ". Содержание Х-клетск в периферической кроаи в норме составляет 1-955. Работы ю изучению природы Д-кейтрофчлов отсутствуют, хотя и-предпола-?ается, что они являются костно-мозговой субисиуляцией нейтрофи-юв, предшественниками нейтрофилоа периферической крови, способ-1ых только к Е- или ЕАС-розеткообразованкп.

В доступной нам литературе также не содержатся сведения о возможной гетерогенности Д-нейтрофилов и способах оценки функциональных показателей этих клеток. Отсутствуют работы по изучению E-, EÁC- и Д-розеткообразупаей способности нейтрофзлов в филогенезе и онтогенезе нейтрофильных клеток.

В связи с вышеизложенным целью нашего исследования явилось выявление ранних и поздних Д-нейтрофалов, разработка адекватных, воспроизводимых и стандартных методов их определения, исследование закономерностей и особенностей изменения Д-нейтрофилов в филогенезе животных с коотно-мозговым кроветворением, а также у больных воспалительными урологическими заболеваниями.

К задачам исследования относились :

1. Разработка методов1 оценки функциональной активности Д-нейтрофилов (ранних и поздних).

2. Изучение ранних и поздних Д-нейтрофилов у бесхвостых амфибий и млекопитающих в коотном мозге и периферической крови.

3. Исследование количественных'и функциональных показателей Д-нейтрофилов при остром воспалении.

4. Изучение роли Д-нейтрофялов в патогенезе хронического воопаления. .....

5.0пределение роля Д-нейтрофалов в развитии и исходе острого оепсиса. 1

6. Выявление коррелятивных связей Д-нейтрофилов с Д-лимфо-цитами при различных форшх течения воспалительного процесса.

Нвуэнаа.нфшва

Впервые выявлено наличие"рецепторов к-ЭБ,'комплементу" й" двойных ( к ЭБ и комплементу одновременно) на клетках нейтрофиль-ного ряда костного мозга у представителей бесхвостых амфибий " (Rana temporaria ) и млекопитающих (нелинейные мыши),";что"позволяет расширить представление о нёопецифической резистйтности животныхs обладающих костно-мозговнм кроветворением*

Впервые показано существование двух оубпопуляций Д-не1трс-филов : ранних и поздних.

Разработанные способы оценки функциональной активности ранних и поздних Д-нейтрофилов позеолили выработать новыэ критерии диагностики острого' воспалительного процесса, перехода его"S" гнойную стадию, хронизации воопаления, а также осложнения воспа-

лительного процесса острым сепсисом.

1. Установлено, что увеличение содержания ранних и поздних Д-нейтрофилов в 10-14 раз, а также их фагоцитарной активности

в 30-35 и более раз по сравнению с контрольными величинами позволили диагностировать наличие острого воспалительного процесса п его стадию,

2. Выявлено, что увеличение содержания ранних и поздних Д-нейтрофилов в периферической крови больного в 1,5-3,5 раза и снижение относительного содержания фагоцитирующих клеток среда' Д-нейтрофилов по сравнению с контрольными показателями позволяют диагностировать наличие хронического воспаления и прогнозировать ого течение.

3. Обнаружено, что переход острого воспаления в гнойную отадаю сопровождается увеличением содержания в периферической крови поздних Д-нейтрофилов до 4800 в I мкл и вше.

4. Снижение содержания в периферической крови поздних Д-нейтрофилов до и менее при индексе завершенности фагоцитоза -ниже 1е а также снижении относительного количества фагоцитирующих ранних Д-нейтрофилов др 40% и ниже при, остром воспалительном процессе являются прогностическим признаком осложнения воспаления острым сепсисом.

5. Увеличение содержания в периферической крови поздних Д-нейтрофилов до цифр, соответствующих острому воспалительному процессу, при восстановлении их переваривающей способности (ин-дзкс завершенности фагоцитоза зыше I) и поглотительной способ-^ ности ранних Д-нейтрофилов (процент фагоцитирующих клеток более 70) при сепсисе свидетельствуют о положительной динамике в течение сепсиса.

Положение выдвигаемы? н? защиту

I. Имеющие теоретическое значение :

I. В костном мозге и периферической крови бесхвостых ам^и-йий и млекопитающих выявлены неизвестные ранее субпопуляции клеток - двойные (ранние и поздние), комплементарные и спонтанные Е-розаткообразующие нейтрофмы, что позволяет расширить тредставления о нзспецифической резистентности у представителей

данных-классов.

2. Метамзелоциты, палочкоядарнне и сеплоптондерныв нейтро-филн ( а также единичные цроииелоцитн я шелоциты) способна ■ вотупать в розеткообразование о ЭБ, комплексом ЕАС н двойное (смешанное).

3. Имеется биологическая закономерность в содержании, потреблении и перераспределении двойных (ранних и поздних) нейтрофилов в. норме цри остром, хроническом воспалении и ссл синении воопаления сепсшао*»-

4. Существуют две субпопуляции Д-нейтрофалов"; в костном мозге и периферической крови : ранняя и поздняя, отличашцяесн временем экспрессии рецепторов и функциональными особенноотяш.

II. Имеющие практическое значение :

I. Показатели розеткообразувдей способности и фагоцитарной активности ранних и поздних Д-нейтрофилов в периферической крови больных при динамическом-исследовании позволяют определить степень и стадию воспаления, переход острого Еоспаления в острое гнойное воспаление, осложнение ^оспалйшгя.сепсисом,"а Тнкхе переход острого воспаления в хроническое, создавая тем самым возможность более целенаправленной терапии.

Внедрение полученных результатов-в практику :

1. "Способ прогнозирования" обострения хронического вое--палительного процесса цри урологических заболеваниях и Авторско« свидетельство й 1172538 ЫКИ А 61 В 10/00 Опубл. 15.08.1985. Балл. К 3.

2. "Способ определения иммунодефицитного состояния у больных с воспалительными заболеваниями" Положительное решение на -изобретение по заявке й'424651/30-14 (090045) от II июшП987 г,

3.- "Способ диагностики течения пиелонефрита"-Положительное решение на изобретение по заявке й 4791640/30-14)143846) от 30 октября 1990 г.

4. "Метод выделения - Д-{ двойных) нейтрофилов в "периферической крови человека". Удостоверение на рационализаторское предложение отраслевого значения й 0-2047 от 17 шэня1983 г.

5. "Метод выделения двойных-ранних нейтрофилов в'перифе--рической крови человека в экспресс-диагностике активности воспалительного цроцеоса". Удостоверение на рационализаторское

предложение отраслевого значения й 0-2046 от 17 июня 1983 г.

6. "Метод определения фагоцитарной активнооти субпопуля-цзи. двойных розеткообразующих найтрофилов". Удоотоверзние на рационализаторское предложение отраслевого значения й 0-2545 от 14 июня 1985 г.

7. "Метод определения фагоцитарной активности ранних ро-39«сообразующих найтрофилов". Удостоверение на рационализаторское предложение отраслевого значения № 0-3475 от 19 апреля 1985 г;

8. "Метод определения фагоцитарной активнооти оубпопуля-цци поздних Е-розеткообразуотих найтрофилов" * Удостоверение на рационализаторское предложение отраслевого значения № 0-2476 от 19 апреля 1985 г.

9. "Метод определения фагоцитарной активнооти оубпопуля-цни кошлементарных нейтрофилов". Удостоверение на рационализаторское предложение отраслевого значопия № 0-2505 от 14 июня-1985 г.

10. "Диагностика прогнозирования течения острого и хронического воспалительного процесса" (способ И.И.Дзержинской) Методичеокие рекомендации 1987 г.

Алт>обаш;я диссертационного материала

Основные положения работы долоаени на :

1. Конференции молодых ученых.НИИ урологии ЫЗ РСФСР 2527 мая 1985 г»

2. На Координационном Совета В I НИИ урологии МЗ РСФСР от 19.04.1988 г.

3; На Ученом Совете НИИ урологии от 18.05.1989 г.

4. Совместной конференции сотрудников НИИ урологии №3 Российской Федерации и Городской клинической урологической больницы Л 47.от 28 января.1392 г.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы "Материала и метода", 4 глав собственных исследований, закла-" чения, выводов, практических рекомендаций. Диссертация включает 62 таблицы и 15 рисунков, список литературы содержит 149 источников отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ .ДОССЕРТАЩИ

I.

Исследовались иммунологические показатели костного мозга и периферической крови 15 представителей вида Лапа temporaria (лягушка травяная) из отряда бесхвостых амфибий ( Лпига ) и 28 нелинейных мышей (представителей млекопитающих)«

Под нашим наблюдением находилось- 92 больных с урологическими воспалительными заболеваниями. Из них 26 больных острым пиелонефритом, 55 больных хроническим пиелонефритом (37 в активной фазе воспаления, 18 в латентной фазе). Исследовались-также иммунологические показатели больных, у которых•основное заболевание осложнилось острым сепсисом (• II человек);

Контрольная группа состояла из ie здоровых людей.■

Иммунный статус изучалоя при помощи оледупцих методов : -

1. Реакция спонтанного Е-розеткообразованяя'для Т-димфо-цитов (Е=Р0Л) по методу Jondai - и соавт. (1972).

2. Реакция розеткообразования для В-лимфоцитов (ЕАС=Р01) по методу Mendea и соавт» (1973).

3. Реакция раннего и позднего двойного розеткообразования для Д-лимфоцитов по штоду Мюллер С, ~ (1978) ;

4." Реакция спонтанного Е-розеткообразования для ранний (активных) нейтрофилов (Е=Р0Н Р) по методу Дзержинской И.И. (1984)х

5. Реакция спонтанного Е-розеткообразовакия длят поздних-нейтрофилов (Е=Р0Н) по методу Дзержинской И;И; и соавт.(1979)х •

6. Реакция комплементарногр-розеткообразования для-нейтрофилов (ЕАС=РОН) по методу Fong и v/ilson (1975)х

7. Реакция раннего даойного-розеткообразования для'нейтрофилов (Д=Р0Н Р) по•разработанному наш способу (Дзержинокая И.И., Хамагагова Е.Г. (1985).

8. Реакция позднего двойного розеткообразований для нейтрофилов (Д=Р0Н) по способу Дзержинской И;И. (1983).

9. Реакция спонтанного E-розе ткоо бразования для клеток миелопдаого ряда костного мозга по методу Дзержинской И.И. и Щеплева П.А. (1982)х.

Y

- использовались только в экспериментальной части работы

10, Определение фагоцитарной активности'ранних Д=Р0Н по разработанному нами способу (Дзержинская И.И., Хаыаганова Е.Г. 1930 г,)

11, Определение фагоцитарной активности поздних Д=Р0Н по разработанному нами способу (Дзернинская И.И., Хамаганова Е.Г., Манякина Т.Г., 1987). -

Исследования у животных проводились в остром опыта.

Иммунный статус больных изучался в динамике. У больных-эстрым пиелонефритом - на высоте воспаления и при купировании зроцесса, у больных хроническим пиелонефритом - при поступлении в клинику и при выписке у больных с сепсисом - каядае 3-5 дней,

Материал собственных'исследований обработан'с помощью зтандартных.значенийкритерия Стъюдента.( ^'зд).

Е-, ЕАС Е Д-РОЗЕШЮБРАЗУЩ1Е КЛЕЖИ НЕЙТРОФШГЬНОГО РЯДА

ГРАКУЛОЩТАРНСГО РОСТКА КОСТНОГО МОЗГА И НЕЙЕРОФИЛЫ

ПЕРЙФЕБ1ЧЕСК0Н КРОВИ ТРАВЯНОЙ ЛЯГУШКИ ( НАНА ткыршшгХА )

И .НЕЛИНЕЙНЫХ МЫШЕЙ.

Исслздованц иммунологические показатели костного мозга

I периферической крови 28 нелинейных мышей и 15 травяных1 лягу-юк ( атот вид был выбран в овязп о тем, что именно у предста-гатэлзй бесхвостых амфибий в филогенезе появляется костно-моз-■ОЕое кроветворение),

Проваленнна исследования показали, что нейтрофилы периферической крови и глзткя нойтрофильного ряда костного мозга не-яивйпсс шшвй и' травяных лигушек обладают способностью всту-' ;а?ь ч •рсэегкообр-азование с ЭБ, комплексом ЕАС и двойное Семе-' энное), Кавболзе зцрааано-эта способность проявляется у клеток о' стадии" меташзлоцита, на" стадии перехода" мпвлоидных ~~ рвдаесч'зеняаков к зрелым элементам, после утраты способности" леток к питотпчсскому деления' и образований гранул. Известно, тс на стадия мзтамиелоцита 'у клеток грапулоцатарного рсстка~ оявляошч'также способность к самостоятельному движению. Это в овокулкоотк о"полученныыи' наыи данными о становлении розэтко-11разуадэЙ способности" у'клеток"неЁтрофкльно1,о ряда указывает а.то, что'вместо с морфологическими признаками зрелооти вяут-эшпх структур, гранулоциты на стадии метамиелоцитов приобре-

тают новые свойства поверхности, способствующие в конечной очете выполнению клеткаш фагоцитарных функций.

Становление способности к позднему Е-розеткообразовавию п С-рецепции идет, вероятно, через отадию поздних Д-розеткообра-зупцих клеток. При этом, чей налоге клетка ыиелоидного ряда, вступапдая в розеткообразование о ЭБ или БАС, тем вероятнее, что она является двойной. Так, в периферической крови мышей двойные нейтрофилы составляют 16,1$ от Е=Р0Ы и 19,5/! от ЕЛС=РОН у лягушек - 17,3$ от Е=£ЮН и 18,82 от ЕАС=Р0Н, На стадии оег-ментоядерных нейтрофилов костного мозга у ыышей - 21 и 28$ от Е= и ЕАС^РОС соответственно,-у травяных лягушек - 33,9л от Е=Р0С и28,8$ от ЕАС=Р0С. На отадии палочкоядерннх костномозговых нейтрофилов-у мышей - 35$ от Е=РОП и 93$ от ЕАС=Р0П, у травяных лягушек - А2,9% от Е^РОП и 71,95? от ЕАС=Р0П. На стадии ыетамиелоцитов у мышей - 66,7$ от Е=Р0М-ы и 98,4$ отЕАС= Р0М-ы8 у лягушек - 55,7$ от Е=РОМ-м, комплементарные нейтрофилы практически вое являлиоь в то яса время и Е-розеткообразушими,, т.е. 100$ ЕАС=Р0М-м были двойными;

Следовательно, общая схема формирования Е-(поздней) и С-

рецепции такова : ^-ЕАС"^ спонтанно Е-розеткооб-ЕГЕАС" -у- ЕчЗАС <Г разувдие нейтрофилы- •

Е~ЕАС+ЕАС-розегкообразушие . нейтрофилы

костный мозг периферическая кровь

Мы, полагаем^ что формирование Е-(оловтанной) и ЕАС-(коы-плеыенаа^ной) розаткообразующей способности у клеток нейтрофпль-ного ряда идэт от нулевых клеток к двийиыы0 а затем дс только Е- или ЕАС-розеткообразупцим нейтрофалам.

При этом у мышей вероятны следужзе фенотипы клеток нейтро-фильного ряда : .

прп^яло^то р МИРТОГРТР : Е~ЕАС~ - немного меньше 100$ меташелоциты : I. Е~ЕА.С~ - 90,9$

2; Б*ЕАС+ - &% 3; Е+ЕАСГ 3% 4о ЕПЗА&+ - 0,1%

пзлочкоядегагае не,йтрофилы : I. Е~ЕАС" 1 16,4%

2. Е+ЕАС" — 7,7$

3. Е+ЕАС~ - 15,3$

4. Е~ЕАС+ - 0,6$

сеплентоядерные нейтро&илы: I. БГЕАС" - 43,2$

костного мозга 2. Е+ЕАС+ - 8$

3. Е+ЕАС" - 28,3$

4. Е~ЕАС+ - 20,5$

нойтроаяш периферической I. Е~ЕАС~ - 33,4$

крови: 2. Е+ЕАС4" - 6$

3. Е+ЕАС" - 33,8$

4. Е~ЕАС+ - 26,8$

Вероятные фенотипы клеток нейтроф*: ГЛЬНОГО ряда у травяных

лягушек:

меташелоыита : I. БГЕАС" - 81,7$

2. Е+ЕАС+ - 10,2$

3. е+еас~ - 8,1$

4. е~еас+ - 0$

I; Е~ЕАС~ - 66,5$

2. Е+ЕАС*

з. е+елс~ - 16,4$

4. Е~ЕАС+ - 4,8$

дэгментрдлзрные н<?#трофяли

костного мозга * I; Е"ЕАС~ - 58,3$

2. Е+ЕАС+ - 7,7$

3. Е+МС~ - 15$

4. Е~ЕАС+ - 19$

крови: I. Е~ЕАС~ - 27,4$

2. е+еас+ - 7,2$

3. е+еасг - 34,7$

4. е~еас+ - 31,3$

Таким образом, поздние двойные розеткообразувдие клетки нейтрофильного ряда, вероятно, являьтоя предшественниками зрелых суспопуляций нейтрофилов периферической крови, обладавших

только 2- или С-рецепторами, у животных исследованных нами видов. То, что в небольшом количестве Д-розеткообразующие нэйтро-фалы встречаются в периферической 1$юви, отражает, вероятно, содержание в крови незрелых форм.

По отношению к раннему Д-розеткосбразованию мы полагаем, что ранняя Д-рецепция является присущей клеткам нейтрофильного ряда, находящихся в активированном состоянии, т.к. наиболее способны к образованию ранних Д-розеток среди нейтрофильных клеток костного мозга клетки о меньшей плотностью, чем обычно характерная для клеток соответствующих стадий созревания.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ Д-НЕЙТРОФИЛОВ

У больных остам шелонефштом

Для выяснения роли ранних и поздних Д-нейтрофилов в течение и исходе острого воспаления в сравнении с другими иммуноло-гачесхими показателями были обследованы 26 больных острым пиелонефритом.

Проведенный анализ показывает,, что количественные и функциональные показатели ранних и поздних Д-неЙтрофилов отражают наличие острого воспалительного процесса. Д-нейтрофшш коррелируют о другими объективными показателями активности воспалений: температурой тола, лейкоцитурией,содержанием палочкоядерных ной-трофилов в периферической 1фови.

Острый пиелонефрит сопровождался ■трехкратным увеличением общего пула нейтрофалов, содержание же ранних Д-нейтрофилов 'повышалось более-чем в 10 раз, поздних Д-нейтрофилов - более чем в 14 раз ( рис. I). Повышенное в 1,5-2 раза содержание оубпо--цуляций лимфоцитов (Т-, В-.-Д и О-лямфоцитов) определялось спецификой наших больных ( т.е. мочекаменной болезнью). Показатели фагоцитарной активности -ранних и поздних Д-нейтрофилов увеличивались от 1,5 раза ( для процента"фагоцитирующих Д-клеток)"до 40 раз, ( для показателей общего количества микроорганизмов, поглощенных субпопуляциями Д-клеток - А.Ф.Щ (рис. 2);

Выявлено, что переход острого воспаления в гнойную фазу по-разному воздействует на"ранние и поздние Д-нейтрофилы0 что указывает на гетерогенность этих субдопуляций клеток. Гнойная" -интоксикация приводила к снижению содержания ранних Д-нейтрофй-

больных острым пиелонефритом Окружность - показатели здоровых людей

Рис. 2. Показатели фагоцитарно? активности ранних и поздних Д-нейтрофилоЕ у больных острым пиелонефрите;/ Окружность - показатели здоровых людей

лов (превышали контрольные не более, чем в 7 раз), однако количество поздних Д-нейтрофилов еще более увеличилось ( в 25 и более раз). Фагоцитарная активность ранних и поздних Д-нейтро-фялов при развитии гнойного воспаления сохранялась, индекс завершенности фагоцитоза ( ИЗО ) превышал I.

Падение содержания в периферической крови показателей поздних ДНгейтрофилов до 400 в I ыкл (- 4,5± 1,5$) и ниже, а ранних - до 750 в I мкл (6,3± 0,4%) являлось прогностическим признаком осложнения острого пиелонефрита острым сепсисом в течение 2-10 дней после иммунологического исследования (выявлена обратная корреляция между содержанием Д-нейтрофилов при. остром воопалении и осложнением острым сепсисом: дая ранних Д-нейтро-■ фялов т = -0,75, дая поздних: Д-нейтрофилов * = - 0,98). Вероятно, такое уменьшение Д-нейзрофилов отражает блокаду этих оуб-популяций клеток микробным антигенным катериалон«.. "

Таким образом, показатели Д-нейтрофилов (количественные'и функциональные) отражают активность воспалительного процесса." Д-нейтрофилнявляютоз'гетерогенной популяцией клеток, состоящей из ранних и поздних Д-нейтрофилов, отличающихся временем-эко-" црессии рецепторов и ролью в ходе воспаления. Дикамичо скот "наблюдена еза показателями рашшх г поздних Д-нейтрофилов дает~-возможность прогнозировать течение и поход острого воспалительного процесса.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ Д-НЕЙГРОфИЛОВ ПЭД ХРОНИЧЕСКОМ ПИЕЛОНЕФРИТЕ

Роль количеотвенннх а функциональных показателей ранних и поздних Д-нейтро<1ялов при хроническом воспалении исследовали у 37 больных хроническим пиелонзфритогл в активной фазе воспаления и у 18 - в латентной.

Обобщая полученные данные, кожно сказать, что, как гпри~ остром воспалении содержание ранних-и поздних Д-нейтрофилов при хроническом воопалении коррелировало о показателями активности воспалительного процесса«.

Активная фаза воспаления сопровождалась повышенным содэр- " жанием в периферической крови ранних Д-нейтрофилов в 2,5-3 раза,

Рис. 3. Иммунологические показатели

больных хроническим пиелонефритом в активной фазе воспаления Окружность - показатели здоровых людей

Рис. 4, Фагоцитарная активность ранних и поздних Д-нейтрофилов у .больных хроническим пиелонефритом в активной фазе воспаления Окружность - показатели здоровых лвдей

поздних - в 3 и более раз ( рис. 3). Хроническое воспаление сопровождалось увеличением в периферической крови по сравнению о контрольными величинами количества лимфоцитов и их субпопуляций, как второй линии защиты, не менее чем в 1,5-2 раза.

3 латентную фазу воопалония показатели содержания Д-нейтро-филов и субпопуляций лимфоцитов, превышали контрольное в 1,5-2 раза ( рис. 5).

Однако хронический пиелонефрит сопровождался угнетением фагоцитарной активности ранних и поздних Д-нейтрофилов. В активную фазу снижался процент фагоцитирующих Д-клеток, т.о. доля фаго-» цитирующих клеток в общем пуле ранних или поздних Д-нейтрофилэа (рис. 4). При этом активная фаза воспаления не сопровождалась падением фагоцитарной активности воей субпопуляции ранних или" поздних двойных нейтрофилов, Так, интегральные показатели фагоцитоза - абсолютные фагоцитарные показатели ранних и поздних Д~ нейтрофилов превышали контрольные л 2,5-4 раза.

— Латентное воопаление сопровождалось-снижением и других характеристик фагоцитарной активнооти Д-нейтрофилов ( рио.6): фагоцитарные индексы (Ф,И;) падали на 30-50$, по-срашению о показателями здоровых'людей, а абсолютные фагоцитарные показатели -в 1,5-2 раза ( несмотря на повышенное абсолютное содержание ранних и поздних ^нейтрофилов при хроническом воспалении в латентной фазе).

Таким образом, хроническое-воспаление в первую очередь истощает функциональные характеристики Д-нейтрофилов. Вероятно, что наличие персистирузяцей инфекции прихроническом воопалйнии приводит к выбросу в периферическую-кровь-увеличенных содержаний субпопуляций Д-найтро^илов,' недостаточных, однако, для полной' элиминации инфекции.- Вместе с тем, пероиотеция антигенного материала приводит к дефициту фагоцитарных опоообноотей ранних и поздних Д-нейтрофилов.'

Функциональный дефицит Д-нейтрофилов у 11-22% йольных хро-ничеоким пиелонефритом сопровождался Дефицитом количества этих оубпопулявдй клеток. Следовательно, функциональная недостаточность Д-нейтрофилов при хроническом воспалении дополнялась количественной, т.е; дефицит функияи Д-нейтроЗялоэ был первичен, а оодержания - вторичен.

Рис. 5. Иммунологические показатели

больных хроническим пиелонефритом в латентной фазе воспаления Окружность - показатели здоровых людей

Рис. 6. Фагоцитарная активность ранних ^ и поздних Д-нейтрофилов у

больных хроническим пиелонефритом 'в латентной фазе воспаления Окружность - показатели здоровых людей

Д-НЕИТРОШЫ ПРИ ОСТРОМ СЕПСИСЕ

Дня определения роли ранних и поздних Д-нвйтро^ялов и их взаимоотношений о другими субпопуляпзями иммунокоьшетентных клеток в развитиии и течение .сепоиоа обследовано II больных, у которых основное заболевания осложнилось остры:,? сепсисом.

Диагноз сепсиса был подтвержден пооевоы крови или патолого анатомическим исследованием. >

Анализ полученных данных свидетельствует, что осложнение острого воспаления острым сепсисом.сопровождалось нарушением количественных и фуйкциональных характеристик Д-нейтрофилов. Генерализация процесоа приводила к паданию содераания в пери--феричеокой крови поздних-Д-нейтро^илов (менее 10%') (рис. 7 ) , на фоне острого воспалительного процесса, причем отрицательная -динамика в течение сепсиса усугубляла дефицит содержания поздак Д-нейтрофплов;, который дополнялся и дефицитом содераания"ранних Д-нейтрофилов. Это сопровождалось роотом содержания оубпопуля-ций лимфоцитов ( в основном двойных, содержание которых увеличивалось более чем в 2,5 раза), практически исчезали нулевые лимфоциты.

Такж<) развитие сепоиоа характеризовалось насауллением функциональной недостаточности оубпппуляций ранних и-, поздних Д-нейтрофилов ( рио. 8), протекающей по разным механизмам. Сепсис ' приводил к нарушениям поглотительной способности ранних Д-нейтрофилов : на 30-50$ онижалось число фагоцитирующих ранних Д-хслсток и количество микроорганизмов,, поглощаемых одним ■ранним Д-нейтрофилом .. Общее количество микроорганизмов, погло-.щешшх всей субпопуляцией ранних Д-клеток снижалось щиг сепсисе ? 3 и более раз по сравнению с острым воспалительным-процессом.

Нарушение; фагоцитоза поздних Д-нейтрофилов при оепсиоевн-рааалооь в нарушении не поглотительной; а переваривающей "способ-нооти этой -оубпопуляции нейтрофилов, т.е. в снижении индекса завершенности фагоцитоза нижа I. Поздние Д-нейтрофалы'были не в ооотоянии переварить поглощенные ими микроорганизмы. —"Таким образом, нарушение фагоцитарной активности ранних и поздних Д-нейтрофилов при оепсисэ идет различными путями : нарушение поглотительной способности - для ранних и переваривающей-

Рис, 7. Иммунологические показатели больных острым пиелонефритом с осложнением острым сепсисом Окружность'- показатели больных острым пиелонефритом

Рис", 8. Показатели фагоцитарной

активности больных с осложнением острым сепсисом Окружность - показатели больщос острым пиелонефритом

для поздних Д-нейтрофилов, что по видимому свидетельствует о разной природа рецепторов этих субпопуляций.

Отрицательная динамика в течение сепсиса сопровождалась практически полным исчезновением Д-нейтрбфилов из периферической крови при еще более нарушенной фагоцитарной функции оставшихся клеток.

Положительная динамика характеризовалась восстановлонием количественных и функциональных показателей ранних и поздних Д-нейтрофшюв до цифр, соответствующих острому воспалительному процесоу. Показатели Д-лимфоцитов- при этом снижались до контрольных величин.

Следовательно, развитие оепсиса приводит к нарушениям количественных и функциональных параметров ранних ц поздних Д-"" найтрофилов. Исследование количества и фагоцитарной активности этих субпопуляций нейтрофилов дает возможность диагностировать наличие острого сепоиоа, а динамическое наблюдение - прогнозировать течение и исход оепсиоа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ .

Обобщая полученный материал можно оказать : проведенное наш исследование показало, что в периферической крови и*костном мозге присутствуют нейтрофшш, споообные к одновременному розет-кообразованию с ЗБ и комплексом ЕАС - Д-(двойкае) нейтрофшш. Популяция двойных нейтрофилов неоднородна и состоит "из дзух субпопуляций: ранних и поздних Д-пейтро Зилсщ, отличающихоя-временем экспрессии рецепторов и функциональными особенностями.

Становление спонтанной Е- и комплементарной ЕАС- розетко-образующей способности у клеток нейтрофильного рада костного мозга идет через стадию двойных розеток. Мы полагаем, что тюзд--1 ние двойные розеткообразуташе клетки нейтрофильного ряда'яеля-ют оя предшественниками оубпопуляций периферической крови>-ош'-> ообных только к Е- или ЕАС-розеткообразовагаш* Раянгге Д-розет-кообразующиа клетки нейтрофильного ряда, вероятно: явдяютоя клетками, находящимися в.активированном состоянии.

Воопаление в зависимости от стадии и степени его развития ооцровождаетоя неодинаковым выбросом выбросом Д-ней^рофизгов на коотного мозга в периферическую кровь. При оотром воспалении-.

выброс Д-нейтрофилов является физиологической защитной реакцией организма. Субпопуляции Д-нейтрофилов в этом случае сноообны элиминировать значительные количества антигенного материала микробного происхождения. Однако, если количество антигенного натекала превышает возможности Д-нейтрофилов к фагоцитозу или микробные токсины оказывают повреждающее действие на способность костного мозга генерировать новые предшественники микрофагоцитов,

происходит блокада субпопуляцпй Д-нейтрофилов и нарушение их фагоцитарной активности,т.е. переваривающей способности поздних' Д-нейтрофилов и поглотительной способности ранних Д-нейтрофилов, что приводит к генерализации воспалительного процесса и воспаление осложняется сепсисом.-

В случаях , когда воспалительный процесс цриводит к выброоу_ значительных количеств.-. Д-нейтрофилов, но недостаточных для полной элиминации возбудителя, развивается функциональная недостаточность этих клеток, выражающаяся в снижении их поглотительной способности по-видимому, обусловленной закрытием рецепторов меток персистирукщим антигенным материалом. При этом, переваривающая способность двойных нейтрофилов сохраняется, однако полной элиминации возбудителя не происходит, и воопалителышй процесо приобретает-статус равновеоия между Д-нэйтрофилами" и микробными кдвтками«, Воспаление "приобретает хронический характер.

Итак, ис следование ранних - и поздних Д-нейтрофзлов выявило, что обе оубпопуляции формируются-в" костном мозга и является клетками резерва,' включаясь при срыв?'защитннх механизмов в периферической крови." Это позволяет диагностировать наличие и стадию воопалензя, прогнозировать течение -воспалительного процесса, оцределять эффективность проводимой терапии и проводить своевременную и правильную коррекцию.

В.Ы.ВО ДН.1.

I. Впервые выявлено," что популяция двойных нейтрофилов периферической ирови( и клеток нейтро^яльного ряда костного мозга) гетерогенна и состоит из ранних и поздних Д-клеток, отличаю^ иихоя временем эксцресоии рецепторов и функциональными особенностями при воспалении.

.2. Впервые установ лоно, что клетки нейтрофильного ряда костного шзга бесхвостых амфибий и млекопитающих, а также нейт-рофилы их периферической крови способны к Б- (раннему и позднему), ЕАС- и Д-(раннему и позднему) розеткоооразованию« Развитие Б- и ЕАС-розеткообразущэй способности клеток нейтрофильного ряда костного мозга проходит через стадию Д-кльток,

3. Оотрое воспаление сопровождается увеличением содержания в периферической крови ранних и поздних Д-нэйтрофилсз в 10 раз и более, а также усилением фагоцитарной'активности этих оубпо-пуляций нейтрофилов, более чем в -30 раз. Дашшчеокое наблюдение - за количественными и функциональными показателями ранних'' и поздних Д-нейтрофилон позволяет прогнозировать переход оотро-го воспаления в гнойную стадию, а также ослокнзние воспаления оотрым сепсисом.

4. Хроничеокий воопалительный процесс протекает ка -фоке -незначительного увеличения ранних и поздних Д-нейтрофилов <-в " 1,5-3 раза) при снижении относительного содержания фагоцитирующих ранних и поздних Д-нейтрофилов ( в 1,5-2 раза) в активной фазе воспаления, а также других показателей их фагопртарпой активности в латентной фазе воспаления, по сравнению о контрольными' величинами.

5. Осложнение воопаления острым сепоисом происходит при снижении содержания в периферической крови поздних Д-иейтрофи-лов ( до 10% и менее) и незавершенности фагоцитоза-данной субпопуляции найтрофилов. Острый сепсио характеризуется умэнысз- ' нием относительного содержания" фагодатируршх рапних Д-нойтро-фидов на фоне острого воспалительного процесоа'на 45% и более по оравнонию о показателями острого'воспаления. Долсжителышя' динамика в течение острого сепсиса сопровождается восса'аноЕло-ниам содержания поздних Д-кейтрофилоп до цифр, соответствующих острому воспалению, завершенностью фагоцитоза этой оубпгшуляцпи и восстановлением содержания фагоцитирующих ранних Д-нейтро^и-лов до показателей острого воопалопия.

7. Выявлены обратные корреляции между содержанием Д-нэйтро-филов а Д-тлимфоцитов при остром сепсисе": уменьшение содержания в периферической крови Д-нейтрофилов сопровождается повышением

количества Д-лимфоцитов и, наоборот, купирование сепоиса харак-тэрязуется восстановлением Д-нейтро£илов до показателей острого воспаления при снижении содержания Д-лимфоцитов до контрольных величин.

8. Выявлена биологическая закономерность в содеряании, перераспределении и потреблении двойных (ранних и поздних) нейт-рофилэв в норме, при остром, хроничеоком воспалении и осложнении воспаления сепсисом.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. " Д-роееткообразующие нейтрофилы при хроническом простатите"; В кн.: Материалы 3-го съезда урологов СССР, Минск; 1984, с;288. В соавт- с Дзеркинской И.И., Парушкиной В.А,, Максимовы»-! В.А. '

2. ''Д-(двойные) розеткообразующне лимфоциты при остром сепсисе". В кн.: Сорбционныз методы детоксикации и иммунокорракции в хирургии. Ташкент, 1984, 0.194; В ооавт. о Даренковым А.Ф., Данилковым А.И., . Дзержинской И.И.

3. "Способ прогнозирования обострения хронического воспалительного цроцесса при урологических'заболеваниях". Авт.овид-во № II72538 МКЙ-А 61 BIO/GO. Опубл. 15.08.1985. Еюл. « 3. В1"соавт. о ■ Дзержинской И;И.

4; "Функщтональкне ■ показатели Д-нейтрофилов у больных иронической почечной недостаточностью г реципиентов трупной алло-' почки" В кн.: 3-й Всесоюзный'съезд нефрологов (Киев 9-1Г декабря 1986 г.)' Киев, 1286, т.П , о; 198р. В соавт; о ДзепнинскОЙ И.И.

"Новый подход в диагностике рвактивностЕ организма'у больных с хронической почечной недостаточностью, находящихся-на ГД" Тан не, о.13Г."\В соавт. с Дзержинской ШИ;, Даренковым А.Ф.

6. "Д-(двойные) ро зе ткоо бразушие нейтрофилы при остром сепоисе" В кн.: Первый Всесоюзный иммунологический съезд (Сочи 15-17 ноября 1989г.)' Тезисы докладов. М;, 1989, с.252. "

■ 7;."Новый подход в диагностике иммунных нарушений у больных, о опухолевыми процессами мочеполовой оиотемы". В кн.: Тезиса Общесоюзной конференции' "Актуальные вопроси в биохимической" и' иммунологической диагностике"злокачественных новообразований". И., 1989 , 0.23-24. В Соавт. о Дзержинской ИЛ.

8. "Д-лицф°цитн и Д-нейтрофшш у большее ХИН и реципиенто] трупной аялоыочка" . В кн.: Траношшнтацвя органов« Твзиоы докладов II Всесоюзной конференции по трансплантации оердца, печени, точки, подаелудочпой железы и др. органов (Львов, октж 1990 г.) Львов, "Свит1*,, 1990, 0.189.

9. "Двойные кайтрофялы в процессе иымунорвабилитации больных о хроническими воспалительными заболеваниями" . В кк: II Воесоюзный симпозиум "Реабилитация иммунной сиотеш" Цхалгубо, октябрь 1990 г. о.

10„ "Субпопуляции ранних Е-( опонтанных) и ранних Д-( двойных) нейтрофелов при гнойно-воопалительных осложнениях у урологических больных". В кн.: Материалы ЕГВоосоюэногосъезда урологов (10-12 октября 1990 г.) М., 1990, 0.249.

II.'"Роль Д-нейтрофилов в течение и иоходе острого пиело-пвфрита". Там же. В соавт. о Дзержинокой И.И.